检测主要检测

1. 饲料中主要病原微生物快速检测方法-微生物快速检测系统（MBS） 1.1 中文名称 饲料中主要病原微生物快速检测方法-微生物快速检测系统 1.2 英文名称 Rapid detection method of main pathogenic microorganisms in feed-Micro Biology Survey （MBS） 2.范围 本标准规定了饲料中细菌总数、沙门氏菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、 单核增生李斯特菌微生物快速检测系统（MBS）检测方法。 本标准适用于配合饲料（蛋鸡配合饲料、肉鸡配合饲料、猪配合饲料、肉鸭配合饲料）、 动物源性饲料（血粉、肉骨粉、鱼粉、羽毛粉、乳清粉）、植物源性饲料（玉米、麸皮、豆 粕、花生粕、棉籽粕）中细菌总数、沙门氏菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、 单核增生李斯特菌含量的快速检测。 3.规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期 的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括 所有的修改单）适用于本文件。 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 4 原理 MBS 方法通过氧化还原指示剂测量微生物主要代谢途径中氧化还原酶的催化活动。氧 化还原指示剂会根据介质的氧化状态改变指示剂颜色。颜色变化耗时与微生物污染程度的 Log 值呈负相关关系，从而可获得观察到的酶活性与检测样本中活细胞的数量之间存在的确 定相关性。 微生物快速检测试剂瓶内的营养物，维持目标细菌的生长；选择性药剂，抑制非目标细菌的 生长；而其中的还原剂，作为递氢体，能在细胞色素 C 后把电子转移到细菌呼吸链，而又不被氧分子氧化。如果目标细菌存在，那么检测瓶中的氧化还原反应色素会根据媒质的 氧化还原状态改变颜色。MBS 主机通过三光波探测颜色变化，最后根据整合颜色变化 的时间确定细菌的含量。5 试剂和材料 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。 5.1 20%无菌甘油：水：甘油=5:1。 5.2 微生物快速检测试剂瓶。 6 仪器和设备 6.1 微生物快速检测系统（MBS）：MBS-MR 主机、笔记本电脑、MBS 中文操作软件和微 生物快速检测试剂瓶。 6.2 冰箱：2-5℃或-20℃。 6.3 涡旋振荡器。 6.4 电子分析天平：感量 0.01g。 7 检验 7.1 饲料中细菌总数的检验 7.1.1 将 MBS-MR 主机、笔记本电脑接通电源，并用数据线将两者连接，在电脑上启动 MBS 中文操作软件，点击“参数”录入相关信息（包括：操作员姓名、操作员职务、检测样 本所属客户等信息）；在软件操作界面的样品设置选项中对样品进行基本信息设置，在分析 设置选项中设置细菌总数，并选择定量分析。 7.1.2 将配套 20%无菌甘油加入到细菌总数试剂瓶中，溶解试剂。 7.1.3 带好无菌手套，用消毒后的药匙或无菌镊子取待测饲料样品，并准确称取 1g（精确 到 0.01g），加入到细菌总数试剂瓶中。 7.1.4 摇动试剂瓶（手摇 1-2 分钟或涡旋振荡器振荡 20-30 秒），直到饲料样品溶解完全或 与试剂充分混合。 7.1.5 设置相应的参数后，将处理好的试剂瓶放入 MBS-MR 主机中，进行孵育，MBS-MR 主机会自动控温，然后开始进行分析。 7.1.6 分析完成后，按下试剂瓶顶部，瓶盖内部的消毒灭菌物质会释放至试剂瓶内，5-10 分钟即可充分灭菌，将灭菌后的试剂瓶丢弃到生物垃圾箱中集中处理。 7.1.7 检测结束后，系统可以输出检验报告，报告的内容包括用户设定的全部信息、检测结 果，如变色时间、样本中微生物的浓度和检测中的所有参数。 7.2 饲料中沙门氏菌的检验7.2.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置沙门氏菌，并选择定量分析，其他步骤同 7.1.1—7.1.7。7.3 饲料中大肠菌群的检验7.3.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置大肠菌群，并选择定量分析，其他步骤同 7.1.1—7.1.7。7.4 饲料中金黄色葡萄球菌的检验7.4.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置金黄色葡萄球菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.1—7.1.7。7.5 饲料中大肠埃希菌的检验7.5.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置大肠埃希菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.1—7.1.7。7.6 饲料中单核增生李斯特菌的检验7.6.1 在 7.1.1 中的分析设置选项中设置单核增生李斯特菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.1—7.1.7。8 结果记录微生物快速检测系统（MBS）自动给出定量分析检测报告，读取数据，记录结果。9 质量控制本方法在 1-108cfu/ml（g）添加浓度水平上的回收率为 87.19%-97.66%(n≥10)，变异系数为 7.18%-10.28%（n≥10）。附录 A 微生物快速检测（MBS）孵育温度/检测时间快查表

2021年7月，在上海市生态环境局、上海市市场监管局联合开展的生态环境监测机构“双随机、一公开”监督抽查工作中，上海市生态环境局执法总队和上海市环境监测中心抽查了24家生态环境领域检验检测机构。检查共发现3家机构在上海市开展的生态环境监测采样、数据分析、出具报告等环节存在弄虚作假违法行为，另有2家机构存在违法排污和违反建设项目环境影响评价制度等其他违法行为，上海市环境执法总队均依法予以了查处。相关机构弄虚作假典型案例如下。案例一：某环境检测机构在采样环节弄虚作假，故意改动关键项目监测方法案例2021年7月9日，执法人员查阅某检测机构提供的噪声检测原始记录时发现，该检测机构在对某排污单位开展厂界噪声自行监测时，噪声检测仪器原始数据记录中，厂界外东南西北四个点位的检测时间不符合环境噪声监测技术规范规定的“在稳态情况下每个点位检测时长一分钟”的要求。同时，该公司提供的另外5份噪声检测报告中存在类似情况。经过实地调取排污单位监控录像，以及对相关人员开展询问调查，认定该检测机构现场检测人员存在故意改动关键项目监测方法的行为，该行为违反了《环境监测数据弄虚作假行为判定及处理办法》（环发〔2015〕175号）第四条第七款的规定。根据《上海市环境保护条例》第三十五条第四款和第八十八条规定，上海市环境执法总队责令该检测机构停业整顿，并处28万元罚款的行政处罚，并对其主要负责人实施“双罚”，处罚款2.8万元。案例二：某检测技术有限公司在分析环节伪造监测数据案例2021年7月9日、27日，执法人员对某检测技术有限公司检查中发现，检测人员徐某、许某某经手出具的五日生化需氧量的数据在未经仪器测定情况下擅自编造，构成伪造监测数据。8月2日，执法人员在对已出具的检测报告中涉及五日生化需氧量的原始记录进行核查时发现，该机构针对从不同企业采集来的不同来源的水样，经其编造的数值几乎没有差异。经向该机构的质量技术负责人仇某某调查后确认， 2020年10月至2021年6月间，该检测机构出具的76份检测报告中涉及的五日生化需氧量指标均系伪造，该行为违反了《环境监测数据弄虚作假行为判定及处理办法》（环发〔2015〕175号）第五条第（六）项的规定，根据《上海市环境保护条例》第三十五条第四款和第八十八条规定，上海市环境执法总队责令该检测机构停业整顿，并处28万元罚款的行政处罚，对主要负责人仇某某实施“双罚”，处罚款2.8万元。案例三：某环境检测机构在报告环节选择性评价监测数据出具报告案例2021年7月20日，在对某排污单位委托某环境检测机构实施的自行监测情况进行联合检查时发现，受委托的检测机构出具的检测报告数据与对应的原始记录不一致，检测报告结果达标但原始记录数据超标。随后执法人员通过查阅采样记录、实验室原始记录（图谱、分析数据），并对接样和分析人员问询调查，发现该检测机构在对企业开展采样监测并发现结果超标后，通过重新采样方式替换原超标检验结果。同时执法人员还发现该机构其他一些检测报告也存在类似问题。该检测机构在环境服务过程中有选择性评价监测数据并出具检测报告，以至评价结论错误失真，该行为违法了《环境监测数据弄虚作假行为判定及处理办法》（环发〔2015〕175号）第四条第十二项的规定，根据《上海市环境保护条例》第三十五条第四款和第八十八条规定，上海市环境执法总队责令该检测机构停业整顿，并处22.5万元罚款的行政处罚，并对其主要负责人实施“双罚”，处罚款2.8万元。法条链接《上海市环境保护条例》第三十五条第四款：在本市从事环境监测的机构应当按照规定向市环保部门备案；向社会出具具有证明作用数据、结果的，还应当依法取得检验检测机构的资质认定。环境监测机构应当按照国家和本市环境监测规范开展环境监测，保证监测数据的真实性和准确性，并对监测数据和监测结论负责。《上海市环境保护条例》第八十八条：环境影响评价机构、环境监测机构、环境安全评价机构以及从事环境监测设备和防治污染设施维护、运营等第三方机构，未按照法律、法规和相关技术规范的要求提供有关环境服务活动，或者在有关环境服务活动中弄虚作假的，由环保部门和其他负有环境保护监督管理职责的部门责令停业整顿，处十万元以上五十万元以下的罚款，并对其主要负责人处一万元以上十万元以下的罚款。对造成的环境污染和生态破坏负有责任的，除依照有关法律、法规规定予以处罚外，还应当与造成环境污染和生态破坏的其他责任者承担连带责任。

市场监管总局2022全年实施了国家级检验检测机构能力验证项目20项，考核了检验检测参数31个，涉及食品安全、电气安全、消费品安全、生态环境监测、材料测试等领域，累计考核国家级资质认定检验检测机构2573家次。日前，市场监管总局在《2022年国家级检验检测机构能力验证结果》中指出，考核结果合格的有2375家次，需整改机构有198家次，存在的主要问题如下：1、检验检测人员技术能力不足。部分检测人员对样品定容、稀释操作不当，导致样品测定值不在标准曲线范围内；个别检测人员对目标物的原药和衍生物的形式概念不清，使用错误的标准物质对样品进行定性定量检测；个别检测人员未了解新旧标准差异，错误使用旧版标准的计算公式。2、仪器设备使用和维护不当。部分检验检测机构使用不合适的色谱柱导致色谱图中目标物与干扰物质分离不完全，峰形有拖尾现象导致结果不准确；部分检验检测机构仅对设备的部分试验参数或量程范围进行计量校准；部分检验检测机构没有做好仪器测试前的状态核查工作，导致其灵敏度不够、不能满足准确定量的要求；个别检验检测机构使用的器皿不配套、不完整或者受到污染，从而导致检测结果出现偏差。3、检测过程和操作不规范。部分检验检测机构未能有效实施质量监控，如未使用质控样品或加标回收；个别检验检测机构未严格按照标准要求进行试样处理，如所用校准曲线的含量范围未覆盖待测元素的含量，或校准曲线的相关系数低于定量方法要求；个别检验检测机构未对试验时间和温度等进行有效控制，导致检测结果出现偏差。4、对作业指导书理解不准确。部分检验检测机构未能正确理解作业指导书，如报送结果的有效数字或单位与作业指导书的要求不一致；个别检验检测机构未按照作业指导书规定的称样量要求进行称样，导致检测结果出现偏差。据悉，对能力验证结果显示需要整改的检验检测机构，市场监管总局已委托能力验证承担单位通知相关检验检测机构开展自查整改和验证工作，相关机构已于2023年2月底前完成整改。市场监管总局将根据机构整改落实情况，抽取部分机构进行能力核查，进一步督促其提升管理水平和技术能力。