核酸提取检测

目前，临床上针对新型冠状病毒的实验室检测主要是SARS-CoV-2病毒核酸和血清特异性抗体检测。核酸检测，是指通过特殊的技术手段检测临床样本中是否存在特定的病原体核酸，从而诊断患者的感染原因。此次新冠病毒是单链RNA病毒，根据《新冠病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第七版）》（下文简称诊疗方案）建议，针对疑似病例的确诊，需要具备以下病原学证据之一者，即为确诊病例：1. 实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性；2. 病毒基因测序，与已知的新型冠状病毒高度同源；3. 血清新型冠状病毒特异性IgM抗体和IgG抗体阳性；血 清新型冠状毒特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期较急性期4倍及以上升高。诊疗方案中提到了三种检测方式，其中实时荧光RT-PCR和基因测序都属于核酸检测，需要进行核酸提取。新冠病毒核酸检测是临床诊断的“金标准”， 患者鼻咽拭子、痰、纤维支气管镜灌洗液、血液、肛门拭子、粪便等标本核酸检测阳性，说明其感染了新冠病毒，而且具有传染性。目前新冠病毒检测中核酸提取一般通常使用两种方式：手工提取和仪器提取。病毒核酸提取试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，专为快速、高度敏感,有效的从血清、鼻咽拭子样本中提取病毒DNA、RNA而研制，磁珠在一定条件下对核酸具有很强的亲和力，并且在条件改变时，磁珠与其吸附的核酸分离，能够达到快速分离纯化核酸的目的，产品提取出的核酸能够满足下游各种分子生物学实验检测，例如PCR扩增等。荧光定量PCR是临床分子检测中常用的检测方法，病毒核酸提取方法的选择对于最终的检测结果的影响非常重要。在以往采用RT-PCR对病毒核酸进行的检测中，磁珠法是较为常用的核酸提取方法，普遍认为其对病原体的核酸提取具有简便、高效、提取浓度及纯度较高等优势。此外因各实验室条件不同及针对的病毒的试剂盒不同，离心柱法、煮沸裂解法等也在临床大量应用。不同的病毒核酸提取方法因其提取产物浓度、纯度的差别以及对RNA的保护程度不同，将在一定程度上影响病毒核酸尤其是临界阳性样本的核酸检出。磁珠法手工提取病毒核酸主要设备有：冰箱、超低温冰箱、高速冷冻离心机、混匀器、微量加样器(0.2-1000ul)、磁力架、无菌无酶吸头、移动紫外灯、水浴锅或金属浴、生物安全柜等。无菌无酶吸头系列磁力架（货号DTCLJ-20）核酸提取仪病毒核酸医院检验科在进行新冠病毒检测时通常面临着大量的待检测样本需要短时间出来完成报告结果，因此自动化、高通量的核酸提取仪已经变得极为迫切。LunAmple全自动核酸提取纯化仪高通量提取 ---- 每次提取可根据需要选择1-72个样本人性化界面 ---- 触屏加按键式直接操作，无需连接电脑简单易用自由编辑 ---- 可自行编辑所需程序或预设保存，快速便捷结果稳定 ---- 提取灵敏度高，重复性好，核酸质量高安全可靠 ---- 配备紫外灭菌功能，减少与有害试剂的接触防止污染 ----内置独家去除核酸气溶胶装置，保护样本不被污染核酸提取制备的整体步骤

核酸在这几年似乎变成了热点词汇，随着疫情相关信息的传播，许多先前不为大众所知的诊断行业专业名词逐渐变得家喻户晓，如核酸检测、试剂盒、咽拭子、假阴性等等。但实际上，核酸并不是疫情下产生的新名词。 图1：大众认知的核酸检测 核酸提取通常是开启生物学研究的首步，而且提取的核酸质量高低也是决定下游实验成败的关键因素之一。无论后续的检测、克隆、PCR、QPCR、建库测序等等都需要核酸才能顺利进行。今天我们就来简单了解核酸提取的基本原理和方法。 1、核酸提取法种类有哪些？现在常用的核酸提取法为离心柱纯法和磁珠法等，但离心柱纯化法效率低，步骤繁琐。而由于检测机构每天需要处理大量样本，大都是采用自动化核酸提取仪配套磁珠法核酸提取试剂盒的方式进行核酸提取步骤。 2、更效率的核酸检测法——磁珠法磁珠法——通过裂解液裂解细胞组织样本，从样本中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。利用磁棒吸附携带核酸的磁珠移动至不同的试剂槽内，通过反复快速搅拌、混匀液体，经过细胞裂解、核酸吸附、洗涤与洗脱等步骤，*得到纯净的核酸。 图2：磁珠法步骤 核酸纯化的方法是影响所提取核酸质量的重要因素，只有高质量的核酸才能满足下游的各种应用。 3、磁珠法的有利工具——磁珠分离架Bel-Art 磁珠分离架具备更卓越的质量对于所有磁分离实验，强大的分离架可以固定磁珠，以便亲和配体(抗体，链霉亲和素或核酸偶联专用试剂)或在分析中添加或倾倒冲洗溶液。 图3：磁珠分离架 Bel-Art 磁珠分离架具备可拆卸套筒，可提高液体传输效率！与竞争品牌相比，它们提供了更加卓越的质量和价值。 4、磁珠分离架 型号与特点 1、 50ml和15/5ml型号的独立套筒使液体添加和移除更容易，液体意外损失更少； 2、 强大的磁铁可快速固定磁珠； 3、 50ml和15/5ml这两种型号的套筒上有弹簧柱塞允许磁珠在管壁的不同高度被收集； 4、 只需转动管即可实现高效的珠粒混合； 5、 96孔PCR板型号有24个磁铁，在管壁上吸住磁珠的同时紧紧地固定PCR板； 6、 标准尺寸平板型号全部覆盖上了磁铁，以接受所有标准尺寸的微板，不管它有多少孔；比如6孔，12孔，24孔，48孔，96孔的平板等； 7、 磁力架适合符合ANSI标准*的微孔板； 8、 透明的亚克力材质便于观察试管的内容物。 *ANSI标准：ANSI SLAS 4-2004(R2012)5、磁珠分离架使用注意事项1、该产品具有强大的磁性，使用时不要接近电子器材或者信用卡等磁记录物品； 2、 清洁时避免使用酒精等溶剂，以防止亚克力塑料开裂。

8月9日，湖南省工信厅官网发布《关于定期开展全省主要防疫医疗物资调度工作的通知》显示，自8月9日起定期开展主要防疫医疗物资储备及消耗情况调度工作，调度内容为疫情防控期间所用的核酸检测试剂盒、医用口罩、药品等主要医疗物资。　　湖南企业抗疫物资生产情况怎么样?记者对部分防疫物资生产企业进行了采访。　　“灭活、开盖、提取。”长沙卫实医学检验所的医务人员正在专业的密闭房间内对样本进行核酸检测。长沙卫实医学检验所有限公司总经理黄石龙介绍，公司现有核酸检测人员近100人，日检测能力为1万管，最大检测量为10万人次。除了为黄花国际机场、长沙县各单位提供服务外，目前还为岳阳、张家界等地区提供了核酸检测服务。　　为提升核酸检测的效率。在长沙迈迪克智能科技公司生产车间里，员工正在井然有序地生产全自动核酸检测仪器。　　据了解，该公司生产的“分杯处理系统Magic-8000”新冠检测设备，可自动进行信息录入、开盖、试剂配置、样本体系构建与加盖工作。同时，还兼容干混分杯、湿混分杯模式，支持不少于8种不同规格采样管同时上机操作。此外，还兼容多种核酸提取深孔板，内置HEPA负压过滤系统及紫外消毒系统，有效防止气溶胶污染物外泄。　　长沙迈迪克智能科技公司总经理姚灏介绍，该仪器成功解决过去需要人工完成的“单手拧盖”、“移液”等问题。从采集样本经过病毒灭活后，放置在分杯处理系统Magic-8000内，20分钟可完成每批次960人份10混一标本的信息录入、开盖、试剂配置、样本体系构建与加盖全流程操作，日处理量大于6万人份，有效提升了检测速度和防范了人工污染等问题。　　“今天上午刚刚向长沙一客户发送10台检测仪器。”姚灏介绍，最近为应对核酸检测，公司在做好防疫的同时，积极组织生产，保障供应。目前公司月产量在150台左右。　　在湖南福尔康医用卫生材料股份有限公司生产车间里，机器轰鸣，工人们正在忙碌生产着医用口罩和日用防护口罩。该公司董事长柳庆新介绍，目前公司都是满负荷生产，保证正常供应，日产医用口罩和日用防护口罩在20万个左右。　　生产、运输。圣湘生物物料团队通宵达旦装车发货，源源不断向抗疫一线发送核酸检测试剂、仪器等抗疫急需物资。　　圣湘生物相关负责人介绍，从7月28日起，为加强疫情防控，圣湘生物采取了严格的全面防控措施，开展全员核酸检测工作，每7天进行一次全员核酸检测，员工持工牌，健康码、行程码、核酸检测阴性结果进出园区。　　同时，为保障生产，连日来，该公司所有生产线满负荷工作，开足马力加大生产，生产团队“两班倒”上班，24小时不间断保障产品质量和生产供应，新冠核酸检测试剂产能可达500万人份/天，采样拭子、提取试剂、样本保存液、核酸检测仪器设备、移动方舱实验室等抗疫物资供应保障充足。