分枝杆菌检测

p style=" text-indent: 2em " 3月21日，国家食品药品监督管理总局（CFDA）发布了《结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂注册技术审查指导原则》（2018年第57号），旨在加强医疗器械产品注册工作的监督和指导，进一步提高注册审查质量。 /p p style=" text-indent: 2em " 附件： a href=" http://img1.17img.cn/17img/files/201803/ueattachment/a12b34e3-7d21-4a6a-8a02-03a277136204.doc" 结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂注册技术审查指导原则.doc /a /p

结核病问题的解决仍是一个长期的世界性的难题。从20世纪90年代初世界卫生组织宣布全球进入结核病公共卫生紧急状态起,在相当长的一个时期内公众普遍乐观地认为,通过推行直接面视下短程化疗(DOTS)措施就可以有效解决结核病的问题。但是随着全球范围结核病防治工作的普遍开展和实践,到2011年前后,全球逐渐形成解决结核病问题需要将公共卫生管理和技术工具开发相结合的共识。结核病的有效防治需要在诊断、预防、治疗等3个方面(新诊断技术、新疫苗和新药物)下力气。在传染病相关的行政管理中,中国的模式和行政效率在世界上都是领先有效的。在行政手段有效保障的基础上,进一步提高控制能力的任务就需要客观具体的技术产品来实现了。随着我们对结核病、耐药结核病、耐多药结核病、广泛耐药结核病研究的日益深入,对其认识也是逐步提高的。在应用已有手段解决普遍性问题的同时,针对新发现的尚缺乏有效诊治手段的结核病类型,我们就需要研究更多新技术并开发更多的新产品,从技术能力上切实解决这些问题。免疫学诊断方法免疫分子用于结核病诊断新进展：在活动性结核病患者体内结核分枝杆菌特异性单阳性TNF-α+和双阳性IFN-γ+/TNF-a+CD4+T细胞的比例显著高于潜伏性感染者和未感染者。此外，表达IL-17的CD4+T细胞（主要为单阳性IL-17+和双阳性IL-2+/IL-17+表型）的频率在活动性结核病患者中高于其他两种组。分枝杆菌特异性CD4+T细胞的数量和功能特征在结核病感染和未感染结核的儿童之间以及潜伏和活动性结核病之间存在显着差异【1】。细胞因子和可溶性粘附分子谱和生物标志物用于治疗监测再治疗涂阳肺结核患者。复治期间，IFN-γ、IL-2、IL-7和可溶性CD54水平以及IL-2/IL-10和IFN-γ/IL-10比率呈上升趋势，可作为复治是否有效的血清指标【1】。IP-10和RANTES的组合可能被用作诊断和治疗监测肺结核中的生物标志物。肺结核患者血浆IP-10和RANTES水平显着高于健康对照组，IP-10和RANTES的组合在训练组中的AUC为1.0时表现**。响应治疗时，IP-10和RANTES均显着水平在6个月内减少【2】。γ-干扰素释放试验（IGRAs）用于结核病诊断新进展：IGRAs的原理是当机体内被结核菌抗原致敏的效应T细胞，在体外受到相同抗原的刺激（在APC细胞辅助下）后，会分泌大量的γ干扰素。通过IFN-γ的检测来判断结核感染的情况。IGRAs试验灵敏度高，特异性高，快速简便，是一种值得推广的检测方法，为潜伏性感染和活动性结核的辅助诊断，阴性结果对排除结核感染有一定的帮助。IGRAs试验用于筛查潜伏性感染时不受卡介苗接种的影响，但不适用于流行病学筛查。但是IGRAs预测哪些患者将来进展为活动性结核病的方面的应用较少。最近的一个大样本研究评估IGRAs和TSTs显示在低发病率国家，IGRAs和TST的阴性预测值＞99%，但阳性预测值仅为3%-4%【3】。下一代IGRAs发展前瞻需考虑以下几个方面：增加预测潜伏性感染到活动性结核的能力；能够检测结核分枝杆菌感染的临床阶段；监测潜伏感染或结核病的治疗效果；增加新抗原（如Rv3873、Rv3879和Rv3615）及增加更多细胞因子（IP-10，MCP-2，MIG等）来提高IGRA的敏感性。此外，随着结核分枝杆菌的菌量增加，结核特异性的CD8+ T细胞更容易检测到。CD8反应可以初步区别活动性与潜伏感染，与治疗效果相关【4】。双因子检测DeFine.TB 结核分枝杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒结核分枝杆菌特异性细胞因子（IFN-γ和IL-2）检测试剂是 “十三五” 国家科技重大专项传染病防治专项成果转化产品。在检测时，将人外周血单个核细胞从全血样本中分离出来 ，消除血液本底干扰因素，通过计数单个核细胞数量，排除人群中免疫细胞数量的个体差异影响。将定量的单个核细胞与融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在细胞培养板上共培养，结核特异性 T 细胞由于记忆反应而分泌γ-干扰素及白细胞介素-2因子，再利用双抗体夹心酶联免疫法，检测培养上清中的γ-干扰素、白细胞介素-2的浓度，来判断其是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应。用于结核病的辅助诊断，能够及时发现活动性结核患者，同时对于潜伏感染患者能够进行及时、准确的排筛。01 新的检测靶标IL-2特异性高达94.3%研究结果发现IFN-γ的ROC 曲线下面积为0.859，而IL-2 的ROC 曲线面积0.865（详见Fig. 2 ） ，IFN-γ的总体敏感性和特异性分别为83.8% 和81.5%，IL-2的特异性为94.3%，灵敏度为72.6%（详见Table2）。02 新的检测靶标IL-2提高结核病的检出率双因子检测的敏感性为87.9%，单因子检测敏感性为83.8%，敏感性的增加主要是由于引入新的检测靶标IL-2，表明约16%的活动性结核患者中IFN-γ结果为阴性，而这些患者中有1/4的IL-2 结果为阳性。当IFN-γ和IL-2 串联组合时，特异性进一步提高到96.0%，可与分子诊断的培养阳性检测结果相媲美，甚至可以对培养阴性的患者产生可靠的结果。03 并联检测敏感性高达87.9%，串联检测特异性高达96.0%进一步分析IFN-γ和IL-2联合应用对活动性结核病的诊断价值。对IFN-γ和IL-2 进行并联检测时，敏感性升至最高的87.9%，特异性达到79.8%，阳性预测值达93.9%；当IFN-γ和IL-2 进行串联检测时，718 例非结核患者中有689 例检测结果为阴性，特异性为96.0%，敏感性为68.5%，阳性预测值为98.4%。值得注意的是，串联检测在结核病确诊患者的敏感性（72.1%），高于临床诊断敏感性（65.8%），提示IFN-γ和IL-2串联检测的准确度与结核病的严重程度相关。04 双因子联合检测灵活性高，满足不同的检测场景研究团队根据活动性结核病不同流行模型，分别阐述了IFN-γ和IL-2联合检测在不同模型中诊断价值，并提出了适用于综合性医院和专科医院各自的诊断算法。在综合性医院中，约有10%的结核疑似患者最终确诊为活动性结核，与常规涂片镜检相比，使用具有更高敏感性的双因子并联检测可帮助临床医生发现更多活动性结核病患者（如图B）；在结核病专科医院，结核病疑似患者中活动性结核病的比例达到50%，使用具有高特异性的双因子串联检测可为活动性结核病患者特别是菌阴结核患者提供诊断依据（如图A）。在检测时，将人外周血单个核细胞从全血样本中分离出来 ，消除血液本底干扰因素，通过计数单个核细胞数量，排除人群中免疫细胞数量的个体差异影响。将定量的单个核细胞与融合蛋白ESAT-6-CFP-10-Rv1985c在细胞培养板上共培养，结核特异性 T 细胞由于记忆反应而分泌γ-干扰素及白细胞介素-2因子，再利用双抗体夹心酶联免疫法，检测培养上清中的γ-干扰素、白细胞介素-2的浓度，来判断其是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应。用于结核病的辅助诊断，能够及时发现活动性结核患者，同时对于潜伏感染患者能够进行及时、准确的排筛。

细菌全基因组测序的最新进展让研究人员成功绘制出了结核分枝杆菌抗生素耐药基因组特征的完整目录。近日，一篇发表在国际杂志Nature Communications上题为“Genomic signatures of pre-resistance in Mycobacterium tuberculosis”的研究报告中，来自帝国理工学院等机构的科学家们通过研究首次发现了细菌中“预抗性”（pre-resistance）存在的迹象，相关研究结果或能帮助临床医生未来选择针对细菌性感染的最佳疗法。图片来源：Unsplash/CC0 Public Domain文章中，研究人员对3000多份结核病样本进行全基因组测序，并在近20年里来追踪患者的结核病感染情况；结核分枝杆菌（MTB）是一种影响肺部功能的细菌性感染性疾病，2020年在传染病引发的死亡病例中其所引发的死亡仅次于COVID-19；如果使用正确的抗生素进行治疗的话，结核病患者就能被治愈，但治疗的时间很长，而且很多患者会面临无法获得足够医疗保健的风险，如果患者无法完成整个治疗过程，或者没有药物以及药物质量较差的话，就会出现耐药性结核病的发生。多重耐药性的结核病是一种巨大且不可持续的人类疾病负担，如今研究人员在少数国家已经发现了完全耐药的菌株，由于卫生系统正在努力应对当前新冠疫情，全球结核病治疗的进展已经大大放缓了。为了能够更好地理解并最终开发治疗结核病的新型疗法，这篇研究报告中，研究人员首次揭示了如何在耐药性突变发生之前预防结核病患者所出现的耐药性，研究人员将这一概念称之为“预抗性”，即当诸如病毒或细菌等致病微生物在未来产生耐药性的内在风险更大时。通过分析数以千计的细菌基因组，研究人员表示，这或许有望应用于其它传染性疾病的研究，并能为个体化的病原体基因组疗法铺平道路，研究人员会根据诱发疾病的特定病原体中的DNA来选择药物以免病原体产生一定的耐药性。文章中，研究人员比较了来自3135个不同样本中的结核病样本，以此来重建TB细菌家族族谱，其被称之为系统发育数，随后研究者利用计算机分析来识别出细菌的祖先遗传代码（随后会导致细菌产生耐药性），研究人员通过分析家族树的分支确定了与MTB耐药性发生相关的关键改变，从而就能理解哪些因素最有可能让MTB产生耐药性。图片来源：https://www.nature.com/articles/s41467-021-27616-7研究人员描述了TB基因组中的突变如何帮助预测一种可能会产生药物耐受性的特定分支，然后他们在一个独立的全球TB数据库中验证了他们的发现。Grandjean博士说道，目前应对超级耐药细菌时我们在抗生素上的选择越来越少，而我们进行的选择往往具有一定的毒副作用，因此我们就应该另辟蹊径寻找能有效预防TB耐药性的策略。这行研究就是首个阐明我们能够领先药物耐受性产生的案例，这或许就能让研究人员未来利用病原体的基因组选择最佳的治疗性手段。研究人员希望本文研究能提供一种策略，通过靶向作用最有可能在未来产生药物耐受性的特定病原体基因组来治疗人类难以应对的疾病。综上，本文中研究人员描述了与耐药性获得风险较高的未点化额基因组多态性；同时研究人员还识别出了未来抗生素耐药性产生的标志物，其或能帮助开发新型靶向性疗法来预防结核分枝杆菌和其它病原体抗生素耐药性的产生。原始出处：Torres Ortiz, A., Coronel, J., Vidal, J.R. et al. Genomic signatures of pre-resistance in Mycobacterium tuberculosis. Nat Commun 12, 7312 (2021). doi：10.1038/s41467-021-27616-7

一、项目基本情况项目编号：JSTCC2401111222项目名称：结核分枝杆菌rpoB基因和突变检测试剂盒采购预算金额：人民币1260.00万元最高限价：人民币210元/人份采购需求：结核分枝杆菌rpoB基因和突变检测试剂盒，具体技术参数要求详见采购文件。结核分枝杆菌rpoB基因和突变检测试剂盒，具体技术参数要求详见招标文件；合同履行期限：接招标人通知后3日内交货本项目是否接受联合体投标：不接受本项目是否接受进口产品投标：接受二、获取招标文件1、招标文件获取时间：2024年3月25日起至2024年4月1日止，每天9:00―11:30，14:00―17:00（北京时间，节假日除外）。2、招标文件获取方式：线上下载。1)在江苏省招标中心有限公司官网免费注册（具体步骤请参考登录网页相关指南或使用手册，注册咨询电话：400-058-0203，技术电话：025-83303461，13951767623）；2)注册成功后登录江苏省招标中心有限公司官网平台，点击屏幕左侧“项目搜索”，在搜索框中输入该项目招标编号，点击关注并支付平台使用费500.00元，售后不退；3)点击屏幕左侧“正在执行项目”，下载该项目招标文件；4)制作《招标文件领取确认表》(格式自拟)，要求word可编辑版，写明单位名称、联系人姓名、联系手机、邮箱、参与项目名称及编号、增值税开票资料和发票邮寄地址,并发送至邮箱wanghui@jitc.cn。提醒：投标人必须在上述招标文件发售截止时间前完成注册及领取招标文件事宜,否则系统到时即关闭,投标人将不再允许获取招标文件。《招标文件领取确认表》由投标单位填写，必须准确无误，否则后果自负！三、对本次招标提出询问，请按以下方式联系1.采购人信息名称：江苏省疾病预防控制中心（江苏省公共卫生研究院）地址：南京市江苏路172号联系方式：徐老师电话：025-837595432.采购代理机构信息名称：江苏省招标中心有限公司地 址：江苏省南京市郑和中路118号D座联系方式：姜瑶、陈诚、鲁民颉电 话：025-83249926、83248600、832499273.项目联系方式：项目联系人：姜瑶、陈诚、鲁民颉电 话：025-83249926、83248600、83249927网 址：江苏政府采购网 中国政府采购网

结核病（TB）是由结核分枝杆菌（Mtb）引起的一类重大传染性疾病。据世卫组织发布的最新报告，在2020年，全球有近990万结核病患者，并有约151万人因结核感染导致死亡。中国科学院微生物研究所刘翠华课题组长期致力于研究Mtb等重要病原菌与宿主相互作用的分子机制，近年来发表系列研究工作，在病原菌与宿主相互作用机制方面取得重要成果，为抗结核治疗及药物研发提供了多种新思路和潜在新靶点。　　以往认为，健康个体受到Mtb感染时，往往会发展成为潜伏感染者或活动性TB患者。有趣的是，近年来临床上发现有一部分与TB患者持续密切接触的个体，既不发展为活动性TB患者并显示出相关症状，也未表现出潜伏感染者的免疫学诊断特征。这类长期密切接触病原菌的健康个体被称作TB抵抗者。　　目前对于这类TB抵抗者的抗感染免疫机制所知甚少，深入揭示相关机制有望为TB的预防和治疗提供新线索和新策略。近日，刘翠华课题组与首都医科大学附属北京胸科医院教授逄宇团队合作，揭示了TB抵抗者人群在应对Mtb感染时的固有免疫应答特征。该合作研究发现：与对照组、潜伏感染者及活动性TB患者相比，TB抵抗者的外周血单核巨噬细胞在受到Mtb侵染时，可产生更高水平的TNF-α、IL-1β及IL-6等细胞因子，并且其清除胞内病原菌的能力更强。　　随后的一系列筛选及功能验证实验结果表明：在Mtb感染过程中，组蛋白去乙酰化酶6（HDAC6）仅在TB抵抗者来源的巨噬细胞中维持稳定的表达水平及酶活性，而在其他实验组人群中出现显著下降。同时，进一步抑制或沉默HDAC6可阻抑TB抵抗者来源巨噬细胞中细胞因子的分泌以及其中含Mtb的囊泡的酸化能力。这些结果提示，TB抵抗者来源的巨噬细胞高效清除Mtb感染的能力依赖于HDAC6，后者可能是一个促进细胞因子产生以及自噬流畅通进而加速Mtb清除的关键宿主因子。综上，该研究揭示了TB抵抗者人群依赖HDAC6清除Mtb感染的固有免疫新机制，为临床上TB患者密切接触者的TB感染和发病风险预测提供了重要新标识，并为靶向宿主的TB治疗提供了新思路。　　目前，相关结果已在线发表于The FASEB Journal。该工作得到国家重点研发计划、国家自然科学基金及北京市医院管理中心“扬帆”项目的支持。　　论文链接

01研究背景膜蛋白生命活动中具有重要作用，也是重要的药物靶点，而膜蛋白在进行互作研究过程中会有许多难点：1. 膜蛋白一般需要去垢剂来模拟脂质生物环境。对于基于固定的互作技术，去垢剂会增加背景信号，或者存在参比通道和样品通道背景不同的可能。2. 膜蛋白结构复杂，且与配体结合后可能发生变构。因此研究互作时，膜蛋白的正确构象至关重要。基于固定的技术可能阻碍变构过程，或者在固定和再生过程中破坏膜蛋白的构象。3. 膜蛋白的表达量低、纯化难，因此需要消耗量少的方法进行检测。本期文献解读，讲述如何利用MST及nanoDSF的手段来进行膜蛋白互作研究的故事。02研究内容2024年3月15日，上海科技大学张璐研究员/饶子和院士团队在Nature Microbiology发表题为“Structural analysis of phosphoribosyltransferase-mediated cell wall precursor synthesis in Mycobacterium tuberculosis”的研究，解析结核分枝杆菌全新药物靶标——膜蛋白磷酸核糖转移酶Rv3806c与其受体底物DP和供体底物PRPP结合复合物的精细三维结构，为研究Rv3806c作为新靶点的靶向性药物研发提供了重要的理论基础。https://doi.org/10.1038/s41564-024-01643-8IF: 28.3 Q1通过对Rv3806c与供体底物PRPP复合物结构分析，推测可能影响Rv3806c结合和酶活的位点，并通过MST进行大量突变Rv3806c亲和力检测进行验证。Rv3806c为膜蛋白，并且在脂质环境中以三聚体形式组装。实验种共有10种突变体需进行Kd检测，每次实验均进行了5次重复。MST进行一次亲和力检测时，仅需32pmol、1μg的膜蛋白Rv3806c，大大节约蛋白消耗量。此外，MST技术是在溶液条件下进行，无需固定，且兼容去垢剂，使膜蛋白能保持正确的构象，甚至可以完成nanodisc或者膜提取物形式的膜蛋白亲和力检测，从而可以轻松表征膜蛋白Rv3806c多种突变体与底物PRPP的亲和力。图示：MST测定PRPP与WT-Rv3806c及突变体的结合亲和力此外，研究发现，供体底物PRPP通过一个Mg2+结合在TM螺旋束-1的空腔。为了研究Mg2+对Rv3806c结合供体底物PRPP的作用，作者使用MST和nanoDSF技术检测存在或不存在Mg2+时，Rv3806c与底物PRPP的结合。NanoDSF技术通过监测蛋白内源荧光的变化来表征蛋白结构，无需加入外源荧光染料，兼容去垢剂。使用GDN纯化的Rv3806c完成MST亲和力实验和nanoDSF的热迁移实验，结果显示Mg2+对于PRPP的结合至关重要。图示：MST分析在Mg2+存在或不存在的情况下，PRPP与Rv3806c的结合亲和力。在没有Mg2+的情况下，结合亲和力急剧下降，而在金属螯合剂EDTA的存在下，没有检测到结合。图示：在Mg2+、PRPP和EDTA存在或不存在的情况下，纯化后的Rv3806c的nanoDSF热稳定性分析。PRPP-Mg2+存在时Rv3806c表现出最高的热稳定性。03技术优势在这篇工作中，通过MST技术及nanoDSF技术，确定了膜蛋白Rv3806c与PRPP结合的关键残基，以及Mg2+在互作过程中的关键作用。对于分子互作亲和力的检测，Monolith系列仪器无需固定样品，且不限制缓冲条件，蛋白用量少，可以在溶液中表征膜蛋白与小分子的亲和力。Promethus系列仪器，以nanoDSF技术为核心，通过检测蛋白内源荧光监测蛋白的稳定性，无需外源荧光染料，兼容去垢剂，低浓度也可轻松表征，在膜蛋白稳定性分析和TSA互作定性研究上具有显著优势。-Monolith分子互作检测仪--PR Panta蛋白稳定性分析仪-

众所周知，肺结核多数是由结核分枝杆菌感染肺部引起的肺部感染性疾病，已成为一个严重威胁人类健康的疾病。世界卫生组织（WHO）统计表明，全世界每年发生结核病800～1000万，每年约有300万人死于结核病，是造成死亡人数最多的单一传染病。1993年WHO宣布&ldquo 全球结核病紧急状态&rdquo ，认为结核病已成为全世界重要的公共卫生问题。我国是世界上结核疫情最严重的国家之一。 然而细菌也一直处于不断突变及进化的过程中，要对症下药就需要知道细菌的准确分型。传统的细菌分型技术仅针对细菌的某几个基因进行检测，在传染病疫情爆发时往往缺乏更具体的信息，于是在全基因组测序费用不断下降的现在，研究者们也在尝试用新一代的检测技术对细菌进行分型，以发现传染病爆发的传播模式和几率。 近期，据《PLoS Medicine》杂志报道，有研究者们利用454技术对86例人结核分枝杆菌进行了全基因组测序，并与传统分型技术结果进行了比较。这86例细菌是从1997年和2010年两次爆发的2301个结核病患者身上分离出来的。通过新一代测序技术的检测结果，研究者们表示，全基因组测序法揭示了第一次结合爆发所分离的人结核分枝杆菌不属于最近爆发的结合杆菌传播链，另外通过计算估计出人结核分枝杆菌每2.5年会发生1个发生突变，这表明细菌在感染的人群中倍增的时间为22小时或每年400代，因此，只有通过全基因组测序进行细菌分型才能够提供准确的关于结核分枝杆菌爆发的相关流行病信息。 参考文献：Roetzer A, Diel R, Kohl TA, Ru¨ ckert C, Nu¨ bel U, et al. (2013) Whole Genome Sequencing versus Traditional Genotyping for Investigation of aMycobacterium tuberculosisOutbreak: A Longitudinal Molecular Epidemiological Study. PLoS Med 10(2): e1001387. doi:10.1371/journal.pmed.1001387

为了配合国家质检总局对婴幼儿配方奶粉及液态奶的阪崎氏肠杆菌的专项检查，对降低婴幼儿配方奶粉的风险，保证代乳品的安全性。我公司综合最近客户需求以及FAO/WHO（联合国粮农组织/ 世界卫生组织）公布的阪崎氏肠杆菌标准检测方法特推出阪崎氏肠杆菌专业检测配套用离心机（台式高速离心机 TG16-WS）配合专业实验室机构检测工作。 阪崎氏肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是人和动物肠道内寄生的一种革兰氏阴性无芽孢杆菌，阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种，1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和茵血症，死亡率高达50％ 以上。目前，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。阪崎肠杆茵的生物学性状及其对人群的健康危害受到人们的关注并被报告。因此我国在2005年5月通过《奶粉 中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准的审定。 中国检科院与天津出入境检验检疫局联合十几家单位，从2003年初即开展了阪崎肠杆菌检测方法研究。课题组目前已建立了阪崎肠杆菌的改进型传统检测方法（经典方法）、普通PCR方法和荧光PCR方法（快速筛选方法），并分别进行了初步验证实验，其中改进型传统方法与美国FDA方法相比检测结果一致，但检测时间缩短三分之一至二分之一. TG16-WS台式高速离心机技术参数: ◆最高转速: 16000r/min ◆最大相对离心力:17800xg ◆定时范围:0～99min ◆电机:直流无刷、微机控制 ◆电源:Ac220V 50Hz 5A ◆整机噪声:≤65dB(A) ◆外形尺寸:390×330×300mm(L×W×H) ◆重量:25kg 推荐标配转子： 转子名称 最高转速 最大相对离心力 容量 备注 角转子 16000r/min 17800×g 12×1.5ml 特价 角转子 12000r/min 14800×g 12×10ml 特价 标准检测方法下载（SN 中国出入境检测检疫行业标准）： SN 1632.2-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第2部分PCR方法.pdf SN 1632.3-2005 奶粉中阪崎肠杆菌检验方法 第3部分荧光PCR方法.pdf

大肠杆菌O157:H7是食源性致病菌的主要类型，可引起急性肠炎、肠出血性结肠炎、溶血性尿毒症综合征。近日，中国工程院院士、广东省科学院微生物研究所研究员吴清平与该所客座研究员丁郁团队合作开发出高灵敏检测大肠杆菌O157:H7的新方法。相关研究发表于《生物传感器和生物电子学》（Biosensors and Bioelectronics）。 据悉，传统的基于胶体金纳米颗粒的比色免疫层析试纸条存在灵敏度不足的固有缺陷，阻碍了低丰度目标物的检测应用。具有信号放大潜力的金属生长策略能够极大地提高试纸条的检测灵敏度，其原理和方法是通过将显色试纸条浸泡于增强液中，金属离子在还原剂作用下以胶体金为核心，聚集于胶体金表面还原成金属单质，从而沉积于胶体金探针表面形成纳米壳层，显著增强胶体金探针信号强度。 金、银和铜生长是扩大金纳米颗粒尺寸最常用的策略。其中铜作为一种廉价的金属，因其在催化领域的优势受到广泛关注。但是金和铜的晶格常数相差很大，引起晶格失配。具有大晶格失配的金属纳米壳层的生长过程和形状控制合成不可控。此外，基于试纸条浸泡的金属生长策略中，铜可以沉积到现有的金纳米颗粒或基底表面，特别是硝酸纤维素膜特有的处理工艺使额外添加的铜离子在孵育时易吸附，导致假阳性结果或者出现明显背景。这种模式容易受到环境和操作者的影响，需要精确把握操作流程，大大限制了该方法在实践中的推广应用。 该研究引入聚丙烯胺盐酸盐介导的铜生长可控模型，消除了铜离子在硝酸纤维素膜上的非特异性吸附，从而提供了最大化且有效的信噪比，实现了对强致病性大肠杆菌O157：H7的高灵敏检测。此外，新开发的检测方法具有良好的重现性（变异系数小于13%）、显着的稳定性和实用性。 据了解，聚丙烯胺盐酸盐介导的信号增强系统为实现稳定金属生长方法铺平了道路，并广泛适用于金纳米颗粒免疫层析检测平台。

&ldquo 恒天然毒奶粉&rdquo 事件8月28日上演&ldquo 神转折&rdquo ：新西兰官方称，恒天然乳清蛋白粉里所含的细菌并不是可能致毒的肉毒杆菌，而是与之相似的梭状芽孢杆菌(又称生孢梭菌)。 　　普通消费者不禁会问：这也能弄错?生孢梭菌又是一种什么菌? 　　新西兰初级产业部当天宣布，多达195次的追加检测结果表明，恒天然产品中检出的微生物是生孢梭菌。它不会像肉毒杆菌那样产生出致命的肉毒素，迄今也未曾报告过与生孢梭菌有关的食品安全问题。 　　换言之，生孢梭菌的性质不像肉毒杆菌那么严重，只是如果含量过高，生孢梭菌也有可能导致食物腐坏。 　　那么，检测机构怎会摆出这么离谱的&ldquo 乌龙&rdquo ?新西兰奥克兰大学微生物学专家苏西· 怀尔斯对媒体介绍说，生孢梭菌实际上是不产生毒素的肉毒杆菌分离菌，&ldquo 也就是说，这两种菌(肉毒杆菌和生孢梭菌)几乎是一样的，唯一区别在于是否含有负责编码生成肉毒素的基因。&rdquo 　　这位专家介绍说，检测微生物污染有多种方法，最简单的方法就是分离出菌株进行培养，然后进行相应的生物化学试验确定菌种 或者也可以通过寻找微生物中特定的DNA(脱氧核糖核酸)序列来确定菌种。但对于肉毒杆菌和生孢梭菌来说，这两种检测法根本无法分辨。 　　此前，肉毒杆菌一词曾引起消费者对恒天然产品的极大恐慌。实际上，真正有毒的不是肉毒杆菌本身，而是它在厌氧环境中产生的肉毒素(又称肉毒毒素)。肉毒素是一种毒性非常强的物质，不到1微克就可以致人死亡。也正因如此，恒天然这起食品安全事件迅速引起全球关注。 　　相关新闻：达能旗下奶粉向恒天然索赔 因错误检测损失严重

我国快速建立肠出血性大肠杆菌检测法 已开始向全国推广 　　近日，我国细菌学科学家、生物技术科学家联手，快速建立肠出血性大肠杆菌O104H4检测方法和鉴定方法，并已开始向全国推广。中国CDC(疾病预防控制中心)传染病预防控制所所长徐建国研究员日前在接受记者专访时称，该方法的建立，为我国各地及时捕捉可能入侵的这一新发病原提供了有力武器。 　　徐建国介绍，已知常见肠出血性大肠杆菌(EHEC)血清型有3个：O157、O26、 O111 不常见的血清型有40多种。最近在德国引起暴发疫情的O104H4是EHEC家族中的一种罕见的血清型，含有志贺毒素2(vtx2a)的基因和肠积聚性黏附大肠杆菌毒力质粒上的3个基因：aatA，aggR，aap。 　　中国CDC传染病预防控制所此前已建有一套针对EHEC-O157H7的检测和鉴定方法，也建立了肠积聚性黏附大肠杆菌的毒力质粒的检测方法。由此，近日该所快速研究建立了针对EHEC的4个基因(志贺毒素1、2，溶血素，EAE毒力岛)、针对肠积聚性黏附大肠杆菌毒力质粒上的aatA、aggR、aap 3个基因，以及O104和H4基因的检测方法。南开大学泰达生物技术学院王磊教授团队与中国CDC传染病预防控制所合作，建立了覆盖近50种EHEC的诊断血清，和覆盖10余种大肠杆菌H(鞭毛)抗原的诊断血清，其中包括O104和H4。同时，建立了能够检测O104H4的PCR检测方法和诊断血清。 　　据悉，目前两个科学家团队所建立的检测方法，不仅可以及时发现EHEC-O104H4，也可以及时发现其他血清型的EHEC。

恒天然事件调查报告出炉，承认塑料部件使奶粉受污含菌，认为“毒奶粉”风波纯属虚惊一场。新西兰初级产业部确认恒天然乳清蛋白粉中不含肉毒杆菌后，最初为恒天然检测的国有机构AgResearch被推到了尴尬的位置。 　　据新西兰当地媒体报道，周四晚上，AgResearch发表声明，对误报风波中的角色进行澄清。声明认为，此前公众获得的信息有误导之处。“在对恒天然提供的菌株检测过程中，AgResearch并未确认其中含有肉毒杆菌。”声明称，AgResearch只是表明有可能检测出肉毒杆菌，建议进一步深入检测。 AgResearch声明截图。 　　MPI公布检测报告表示，经过195次国内外严格检测，确认恒天然乳清蛋白粉中含有的是梭状芽孢杆菌，不会引发食品安全问题。不过，这次误报已经引发一系列召回行动，并影响到新西兰乳制品在海外的声誉，损失以百万计。 　　在政府澄清污染问题后，恒天然首席执行官Theo Spierings表示，是根据AgResearch的检测结果，决定发出警报并进行回收的。 　　澄清自己“误报”之余，AgResearch也强调在检测梭状芽孢杆菌家族上的专业水平，以及设备足以满足厌氧菌的检测和处理。此前，AgResearch已经对检测工作进行自查，并对专家的工作保持信心。 　　据悉，新西兰政府的部长级调查目前仍在进行，预计下月会公布调查结果。与此同时，初级产业部的调查也没有结束。

点击此处可了解更多详情→【水中大肠杆菌检测仪】 水中大肠杆菌检测仪是一种用于封装容器的设备，它可以实现自动化的封口过程，并具有程控功能。在水中大肠杆菌检测中，程控定量 封口机具有以下几方面的作用： 1.提高封口效率：水中大肠杆菌检测仪可以实现自动化的封口过程，大大提高了封口效率。相比于手动封口，它能够更快速地完成封口任务，并且能够保持封口的一致性和稳定性，减少人为因素对结果的影响。 2.保障封口质量：水中大肠杆菌检测仪通过程控功能，可以准确控制封口的时间、温度和压力等参数，确保封口质量的稳定性和一致性。这对于水中大肠杆菌检测来说非常重要，因为一个良好的封口可以有效地防止样品的污染和外部细菌的进入，保证检测结果的准确性和可靠性。 3.减少操作风险：水中大肠杆菌检测仪的自动化操作减少了人为操作的风险。在水中大肠杆菌检测中，人为操作可能会引入外部细菌污染，影响检测结果的准确性。而程控定量封口机的使用可以避免这种风险，确保样品的纯净性和可靠性。 4.提高工作效率：程控定量封口机的自动化操作和高效率封口能够提高工作效率。这对于大批量的水中大肠杆菌检测来说非常重要，可以节省人力和时间成本，提高检测的效率和生产力。 综上所述，水中大肠杆菌检测仪在水中大肠杆菌检测中具有重要的作用。它能够提高封口效率、保障封口质量、减少操作风险和提高工作效率，为水中大肠杆菌检测提供了可靠的封口保障。

手机中的新应用正逐渐改变着用户的消费世界，” v-Fluence Interactive 网络市场研究与支撑中心总裁Jay Byrne在最近的评论文章中列数了几款时新的手机应用：“比如，一款名为CellScope的手机技术使得手机的摄像头可被用作发光的显微镜——这意味着拥有这种摄像技术的手机，比如iPhone，可被用来收集和传输照片，用于疾病的诊断。” 　　“通过升级软件或者摄像头来实现诸如此类的应用已经为期不远了，在不远的将来，在任何iPhone或者其它的手持设备上都能实现这些功能，包括大肠杆菌或者食物中其它细菌的检测。假设你发现你的细纹牛排味道有些不对，只需用你的手机咔一下，就可以看看这个来自麦当劳的巨无霸有没有受到污染。还有H1N1、打喷嚏等，也只需咔一声，诊断结论和一些相关的信息就可以实时的被呈现出来了。” 　　这种类型的手机新应用是数不胜数的，它们可以改变消费者的抉择过程和行为倾向。Byrne这样说道：“我们在食品质量和疾病诊上做好了大量进入和控制的准备了吗?问题不在于我们是否做好准备，该来的都要来。并且，这也只是手机众多应用中最细微最新鲜的’一颗螺丝钉’而也，手机的应用到底有多惊人，超乎任何人的想象!”

饮用水质离不开大肠杆菌在线监测仪【霍尔德HED-DC9000】来自人们粪的病原体微生物如大肠杆菌，是导致水源污染的关键病菌，饮用水检测出大肠杆菌意味着水受到了粪的污染，粪中或许带有除大肠杆菌外的其他更多的病菌，目前全球各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪污染较好的指示菌。国家标准中，运用总大肠菌群作为粪污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃发育时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪水污染的程度，而且间接地表明有肠道病菌存在的可能。山东霍尔德电子生产的大肠杆菌在线监测仪采用国际标准的方法，酶与细菌培养反应后光信号变化成正比这一原理，反映出样品中细菌总量或大肠菌群的多少。系统广泛用于饮用水水源安全、应急评估及多细菌的测定，能对水污染事件进行预警，同时可预警一般性水体污染事件以及食物中毒事件。 大肠杆菌在线监测仪的技术参数：测量方法酶底物法检测参数总大肠菌群或耐热大肠杆菌、菌落总数。测量范围测量范围： 1MPN/1L—1×1011MPN/L重复性10%分辨率1%测量时间小于12小时清洗维护测量前后自动进行清洗消毒测量间隔连续或者任意选择，可设置校准周期三个月人机操作超大屏幕彩色液晶触摸屏，分辨率：800x600数据存储1年以上报警信号温度报警，机械故障报警，检测结果误差报警。输出RS232，RS485，4-20mA，正常工作条件环境温度：0～40℃。电源要求：220V AC±10%，50Hz±5%。功率：200W电源要求：220V AC±10%,50Hz±5%功率：不大于200W外界环境：无显著震动及电磁干扰，避免阳光直射尺寸500mm×1650mm×321mm（W×H×D）

中国乳业协会常务理事南庆贤周一对大智慧通讯社表示，肉毒杆菌检测技术并不难，只是较复杂，国内技术已较成熟，建议海关加大检测批次。 　　据国家质检总局4日通告，约227.8吨可能受到肉毒杆菌污染的新西兰恒天然集团产品被进口至中国。这些乳清蛋白用于和其他原料搭配起来生产婴幼儿奶粉和功能性饮料。 　　其中，杭州娃哈哈保健食品有限公司和杭州娃哈哈进出口有限公司，进口浓缩乳清蛋白14.475吨 上海市糖业烟酒(集团)有限公司，进口浓缩乳清蛋白4.800吨 多美滋婴幼儿食品有限公司，进口原料乳粉208.550吨。 　　截至10点58分，食品检测企业，华测检测涨幅为5.66%、大恒科技涨幅为6.04%，安全追溯企业，华工科技涨幅为2.33%。

近日，万孚生物幽门螺杆菌(HP)抗原检测试剂(免疫层析法)取得国家药品监督管理局颁发的产品注册证书。该检测试剂产品用于体外定性检测人类便样本中的幽门螺杆菌(HP)抗原，不依赖实验室仪器设备，15分钟即可快速获得检测结果，操作简便，无创便捷。　　幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤和胃癌的主要致病因素。1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构(WHO/IARC)将其定为Ⅰ类致癌原，因其传染力强，可通过手、不洁食物、不洁餐具、粪便等途径传染，在人群中感染率高，流行广泛。2022年，美国卫生及公共服务部在更新的第15版致癌物报告中，第一次将幽门螺杆菌慢性感染列为明确人类致癌物。　　中国幽门螺杆菌感染率高，《第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识》报告中显示，我国幽门螺杆菌感染人数为7.68亿，感染率超过50%。幽门螺杆菌早筛和早诊能够显著降低胃癌发生概率，具有巨大的应用前景。根据弗若斯特沙利文统计，2020年中国幽门螺杆菌筛查在建议接受胃癌筛查人群中的渗透率达11.3%，市场规模约为120亿元。未来随着公众健康管理意识的不断提高，胃癌筛查渗透率持续提升，幽门螺杆菌检测市场规模将持续增长。　　在胃肠道健康检测领域，万孚生物不断优化和丰富快速检测产品线，助力胃癌的早诊早治工作。此次万孚生物幽门螺杆菌抗原检测试剂(免疫层析法)成功获证，为守护消费者肠胃健康再添利器。未来，万孚生物将基于不断的研发创新和精益生产，致力于为顾客提供专业的快速诊断与慢病管理的产品和服务，为广大用户提供更加优质家庭健康检测方案。

据美国食品安全新闻网消息，普杜大学的一位食品科学研究院已提出了一种使用红外光谱的方法，可用来检测和区分大肠杆菌的不同菌株，并且这种方法比现有的方法更加快速。 　　普杜大学的食品科学副教授Lisa Mauer说，这种新方法可以区分不同的大肠杆菌菌株，包括 O157:H7 型菌株和非 O157:H7 型菌株，而这些菌株属于致病菌。 　　而这种检测方法使美国农业部食品安全及检验服务针对除了被称为“杂菌”的O157:H7型大肠杆菌之外的六种其他类型的大肠杆菌菌株的这一做法更为容易。这些非 O157:H7型菌株包括：026, 045, 0111, 0121, 0145以及0103型。 　　只有O157:H7型大肠杆菌菌株一般被视作食物中的“杂菌”，虽然其他六种菌株更为稀有，但它们会有37000起感染病例，以及30起致死病例。 　　这种使用傅里叶变换红外光谱方法与需要在实验室中培养48小时细胞的传统方法相比，培养时间为6小时，检测时间大约是1小时。甚至即使牛肉中存在其他细菌，我们仍然可以检测并区分不同的大肠杆菌菌株。 　　研究者称，从牛肉表面获得细菌有2种方法：一种是抗体捕获法，该方法细菌附着在磁珠抗体上，大约4小时可出结果 第二种方法是过滤法，大约1小时可出结果。 　　该方法甚至可以区分死菌和活菌，因为能量不被吸收而被反射回来时，可得出这种结论。而这一性能是目前的此类检测方法无法做到的。 　　据悉，该方法之前被用于检测食品中的三聚氰胺。

各有关单位及专家：根据广东省动物学会团体标准制修订计划安排，由华南农业大学负责起草的《产酸克雷伯杆菌 PCR 检测方法》和《奇异变形杆菌 PCR 检测方法》、由中山大学等担负负责起草的《鸡内金渣水产饲料添加剂原料》3项团体标准已完成了征求意见稿的编写。按照《广东省动物学会团体标准管理办法（试行）》相关规定，现印发给你们，请研究提出修改意见，并填写《广东省动物学会团体标准征求意见反馈表》，于2023年4月17日前通过邮件反馈至gdsdongwuxuehui@163.com。附件下载鸡内金渣水产饲料添加剂原料（征求意见稿）.pdf产酸克雷伯杆菌PCR检测方法（征求意见稿）.pdf奇异变形杆菌PCR检测方法（征求意见稿）.pdf广东省动物学会团体标准征求意见反馈表.doc

新西兰恒天然事件引发公众对进口奶粉的担忧。昨天，记者从接近国家质检总局人士处获悉，国家质检总局已要求各地检验检疫机构加强新西兰输华乳制品的检验监管，或要求进口奶粉企业出具“肉毒杆菌”的检测报告。 　　现状: 　　“肉毒杆菌”非必检项目 　　据了解，按照5月1日起实施的《进出口乳品检验检疫监督管理办法》，洋奶粉进口需过单证审核、现场查验、标签审查、抽样送检、实验检测等“五关”。其中，首次进口的必须提供产品的全项目检测报告。 　　按照要求，新规实施后，全项目检测报告必须批批核审，以一段婴儿奶粉为例，检测报告所列项目达到50项。核对过50项内容后，还要抽检这批奶粉，抽检项目依据质检总局确定的风险评估项目进行。 　　“但这50项内容中不含‘肉毒杆菌’这一项。”相关人士指出，由于“肉毒杆菌”并非常见污染物，所以未列入常规检测项目。而且对于肉毒杆菌在乳粉中的限量标准，在中国乃至全世界也没有统一标准。 　　措施: 　　或要求出示检测报告 　　尽管“肉毒杆菌”在业内人士看来并非是常见污染物，但它却真实地出现在我们身边了。为此，国家质检总局快速反应，在接到新西兰方面通报的当天，即要求各地检验检疫机构加强对新西兰输华乳制品的检验监管。 　　据了解，目前加强检验监管的方式包括暂停进口新西兰浓缩乳清蛋白粉和配方奶粉基粉。“另外，国家质检总局正在研究，要求进口奶粉出具‘肉毒杆菌’的检测报告，风险评估抽检中也将进行相关检测。”相关人士说。“总之，进口奶粉的把关将会越来越严。 　　背景: 　　“肉毒杆菌”本不该发生 　　多位业内人士在接受媒体采访时认为，“‘肉毒杆菌’是不该发生的问题。” 　　知名乳业专家王丁棉在接受媒体采访时表示，“以前都没听说过含有‘肉毒杆菌’，目前除了恒天然外，也没有听说其他知名乳制品品牌发生过类似事件。”据他分析，“此次并非恒天然的设备不过关，而是在管理当中出现漏洞和疏忽。按照奶粉及其原料的生产程序，必定要清洗管道，如果没有彻底清洗干净，就容易留下牛奶的污渍。在这种状况下，极易产生肉毒杆菌。” 　　担忧: 　　国内奶企是否干净? 　　“‘肉毒杆菌’并非常见污染物，也不列入常规检测项目，那是不是只有恒天然一家存在这样的问题，国内的奶企会不会也有类似问题?”昨天，宝宝妈刘女士担忧地说，“恒天然是企业在自查中发现问题并主动公告。国内的奶企是否会自查，会不会出现类似问题，发现问题是否能够主动告知消费者?”刘女士希望，政府相关部门加强把关。乳业专家宋亮此前也呼吁，国内应尽快出台乳粉中的肉毒杆菌限量标准。 　　“三聚氰胺”曾经也非必检项目 　　2008年“三聚氰胺”事件爆发时，奶粉中的“三聚氰胺”含量也不是必检项目。 2008年之后，国家加大了对乳品企业“三聚氰胺”含量的检查，“三聚氰胺”被列入乳品企业的必检项目。 　　2008年，“三聚氰胺”事件爆发后不久，国家质检总局即发出紧急通知，要求各级质检部门在所有的乳制品生产企业派驻监管员，要求所有的乳制品必须批批检验三聚氰胺等有毒有害物质，每批经检验合格的乳制品，必须经监管员签字后，方可出厂销售。 　　2010年，“三聚氰胺”的必检要求进一步加强。“三聚氰胺”被列入乳粉企业自检必检项目，并且不得依靠委托检验。同时纳入自行检验的项目还包括菌落总数、食品添加剂等64项。要求企业必须具备三聚氰胺检验项目相关的检验设备及能力，不能进行委托检验，检验人员中须有两人以上有三聚氰胺独立检验能力。 　　事实上，食品安全与检测二者关系紧密。一方面，通过检测来监控食品安全 另一方面频繁发生的食品安全事件也推动着检测标准、检测范围、检测能力的改进和提升。除了三聚氰胺外，人们熟悉的苏丹红、金属镉等，也是发生在重大食品安全事件后，从最初不在必检项目内成为必检项目的。 　　-最新进展 　　新西兰食品监管人员审查恒天然 　　新华社专电新西兰乳制品企业恒天然集团8日称，新西兰食品安全监管机构人员已经着手检查这家企业的加工厂，包括一处先前确认产品遭污染的工厂。 　　恒天然首席执行官西奥斯皮林斯在企业设于奥克兰的总部召开新闻发布会。他说:“(新西兰)初级产业部已对豪塔普(工厂)展开检查，(检查)从浓缩乳清蛋白(产品)开始。”斯皮林斯说，初级产业部还在检查其他生产设施，而恒天然也对工厂展开内部监察。 　　另外，新西兰农场主联盟主席布鲁斯威尔斯8日代表那些向恒天然集团提供原奶的农场主向消费者致歉。

型号推荐：程控定量封口机-一块定量检测水中大肠杆菌数量的仪器2024实时更新，在水质监测的迫切需求下，程控定量封口机以其独特的优势，为水样中细菌微生物的快速、准确检测开辟了新的途径。它不仅能够针对绿脓假单胞菌群、肠球菌、总大肠菌群等多种致病菌进行高效检测，还具备野外携带、应急响应及定量检测的能力，成为水质安全的重要保障。 一、高效精准，细菌微生物无所遁形 程控定量封口机集成了先进的检测技术，能够迅速且准确地识别水样中的各类细菌微生物，包括绿脓假单胞菌群、肠球菌、总大肠菌群、粪大肠杆菌及大肠埃希菌等。其高效的检测速度，使得水质监测工作更加及时有效。 二、便携应急，适应多种监测场景 该封口机设计紧凑，轻便易携，非常适合野外作业和应急响应。无论是在偏远的山区水源地，还是突发的水污染事件现场，都能迅速投入使用，为水质安全提供第一时间的检测保障。 三、定量检测，科学评估水质状况 除了快速检测外，程控定量封口机还具备定量检测的功能。它能够精确测量水样中细菌微生物的数量，为水质评估提供科学的数据支持。这一特性使得水质监测结果更加准确可靠，为水质管理决策提供了有力依据。 四、方法优势无需在无菌室内操作。2.手工操作时间小于 1 分钟。3.无需培养基制备和大量玻璃器皿灭菌。4.24小时即可完成定性定量分析，无需验证试验。 程控定量封口机以其高效精准、便携应急及定量检测的特点，在水质监测领域发挥了重要作用。它不仅提升了水质监测的效率和准确性，还满足了野外和应急响应的需求，为水质安全保障提供了坚实的技术支持。随着技术的不断进步和应用领域的拓展，相信该设备将在未来发挥更加广泛和重要的作用。

2011年11月22日，由北京检验检疫局承担的国家质检总局科技计划项目"高效检测炭疽杆菌纳米技术研究"顺利通过国家质检总局专家组的鉴定。 　　会上，来自深圳检验检疫局、军事医学科学院、中国检科院等单位的7名专家组成的鉴定委员会审查了项目组提交的相关资料，听取了项目组的工作报告及技术报告，并对研究过程进行了质询。经审议鉴定后，专家组认为：该项目研究技术新颖，具有创新性，研究成果达到国际先进水平，一致同意项目通过鉴定，并建议在国境口岸推广应用。 　　在国家质检总局卫生司、科技司及系统外有关单位领导和专家的关心和指导下，项目组通过3年认真细致的研究，成功建立了基于纳米金颗粒结合不对称PCR检测炭疽杆菌核酸序列的技术，利用纳米材料独特性检测白色粉末(炭疽杆菌)的特异、高效检测技术方法，填补了病原菌纳米检测领域的空白。项目组还制备了特异性高、反应时间短、方便实用的炭疽纳米技术检测试剂盒，获得国内及PCT国际专利各一项，有效解决了炭疽杆菌检测环境要求高、检测时限长的问题，为在国门第一道屏障线的国境口岸快速、准确地开展反生物恐怖工作提供了有力的技术保障，对加强口岸生物恐怖因子反恐工作、提高快速应对生物恐怖事件能力、保护人民生命健康、生产生活安全具有重要意义。 　　车志军副局长代表项目组向鉴定委员会介绍了项目背景及基本情况。在美国"9.11"事件后，口岸生物恐怖事件时有发生。因此，国家质检总局、卫生部多次联合发文要求各口岸检验检疫部门建立健全应急机制、建立完善技术手段，大力加强核生化反恐力度。北京检验检疫局利用多年精心打造的纳米检测技术平台，联合国家纳米科学中心共同开展针对炭疽杆菌的特异高效纳米检测技术研究，通过高科技手段强化国境口岸安全管理。 　　杨金良巡视员祝贺项目顺利通过鉴定，并对长期以来关心和支持该局科技工作的专家表示感谢。他希望，项目组在会后根据专家组提出的建议继续完善研究成果，做好成果验证工作，将研究成果应用到日常的检测工作当中，接受实践的检验。 　　该局副局长车志军，巡视员杨金良出席了本次鉴定会。

导读尽管各国卫生系统发展迅速，但由病原菌引起的传染病仍然是人类健康的主要威胁之一。据报道，全世界每年有220多万人死于水传播大肠杆菌病原体。尽管大多数大肠菌群是无害的，但某些大肠杆菌的存在可能会导致甚至威胁到人类健康，例如，大肠杆菌O157:H7和其他产志贺毒素的大肠杆菌菌株（非O157 STEC）是食源性疾病的常见因素，可能对健康造成严重后果，尤其是对幼儿。因此，检测大肠杆菌对于生物医学应用以及食品、水和空气质量监测非常重要。大连理工大学环境科学与技术学院，工业生态学与环境工程教育部重点实验室的科学家，开发出基于naica® 全自动微滴芯片数字PCR系统的单细菌检测方法，该方法可以在1.5小时内以单细胞灵敏度选择性检测临床尿液样本中的大肠杆菌 。该方法发表在《Analytical Methods》，题为“Single bacteria detection by droplet DNAzyme-coupled rolling circle amplification”。应用亮点：▶ dDRCA系统，能够快速、选择性地检测具有单细胞敏感性的大肠杆菌 ，dDRCA系统的检测灵敏度比之前报道的PAD高1000倍。▶ 证明了dDRCA系统在尿路感染诊断中的潜在临床适用性，dDRCA能够在不到1.5小时内，从20份临床尿液样本中成功识别出5名UTI患者，而传统的基于培养的方法需要数小时。文中采用naica️® 全自动微滴芯片数字PCR系统液滴微流控技术，快速精准的检测到复杂样本和高背景样本中的致病大肠杆菌。通常扩增需要约4小时进行定量大肠杆菌检测。在这项研究中，我们描述了DNA酶偶联滚圈扩增（RCA），这是一种高效的等温酶DNA复制过程，可在naica️® 全自动微滴芯片数字PCR系统上进行，以建立液滴DNA酶偶联RCA（表示为dDRCA）系统。我们进一步证明，该系统能够在1.5小时内以单细胞敏感性选择性检测临床尿液样本中的大肠杆菌。▲图2（a）通过琼脂糖凝胶电泳分析RCA产物（RP）。（b） 反应混合物在指示反应条件下的荧光响应：+RFD-EC1/+ RDS/+ E. coli (blue line) RFD-EC1/+ RDS/+ E. coli (green line) RFD-EC1/+ RDS/-E. coli (red line) + RFD-EC1/+ RDS/-E. coli (pink line)。（c） Naica Prism3阅读器图像（左）、CLSM图像（中）和荧光显微镜图像（右）为微晶芯片液滴的大小。比例尺：1.4 mm（左）和100 mm（中、右）。指示反应条件下dDRCA系统的荧光图像和荧光滴数：（d）+RFD-EC1/+ RDS/+ E. coli （e）-RFD-EC1/+ RDS/+ E. coli (f) -RFD-EC1/+ RDS/ E. coli (g) + RFD-EC1/+ RDS/ E. coli.使用Naica Prism3阅读器对生成的荧光液滴进行成像和分析。dDRCA系统能够在75分钟内选择性计数具有单细胞敏感性的大肠杆菌，包括20分钟的细胞裂解时间、12分钟的液滴生成时间和43分钟的液滴反应时间。通过比较其他三种常见细菌，包括枯草芽孢杆菌（B.subtilis）、酸性乳片球菌（P.acidilactici）和唐菖蒲伯克霍尔德菌（B.gladioli）存在时的信号反应，也检查了dDRCA检测大肠杆菌的选择性。当用缓冲液或尿液中的这些意外靶点测试每个dDRCA系统时，未观察到明显的荧光液滴（图4c和S4†）。▲图4（a）不同大肠杆菌浓度（每毫升细胞数）下dDRCA反应的荧光图像。比例尺：1.4 mm。（b） 不同浓度下计数的液滴数与大肠杆菌之间的关系。提供了计数的液滴数量，插图显示了1–104大肠杆菌范围内的线性反应。误差条代表三个独立实验的标准偏差。（c） dDRCA的特异性。最终证明了dDRCA系统在尿路感染（UTI）诊断中的潜在临床适用性。分析了20份患者和健康献血者的临床尿样。整个操作程序包括：（1）细胞收集和裂解（25分钟）；（2） 液滴生成（12分钟）；（3） 液滴反应（43分钟）。如图5c所示，五个尿样，即ID 6、8、9、12和14，比其他尿样产生大量荧光液滴（3000）。使用传统的大肠杆菌培养方法进一步确认了这些有无大肠杆菌感染的样本（图5d）。因此，对UTI的诊断有很大的希望。▲图5（a）检测尿液样本中的大肠杆菌。（b） 显示尿液样本中计数数与大肠杆菌细胞在1-104范围内的线性相关性的曲线图。（c） 20份临床尿液样本中阳性液滴的数量。（d） CLED（胱氨酸、乳糖电解质缺乏）琼脂细菌尿液培养板。黄色菌落代表大肠杆菌在37℃的CLED琼脂中培养22小时后的生长。该系统能够在不到1.5小时的分析时间内，从20份临床尿液样本中成功识别出5名UTI患者，而传统的基于培养的方法需要数小时。原文：https://doi.org/10.1039/D2AY00656Anaica® 六通道数字PCR系统法国Stilla Technologies公司naica® 六通道数字PCR系统，源于Crystal微滴芯片式数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的绝对拷贝数浓度。

为提升幽门螺杆菌呼气检测的可比性、准确性和有效性，中国计量科学研究院(以下简称“中国计量院”)与深圳市中核海得威生物科技有限公司(以下简称“海得威”)协商成立“幽门螺杆菌14C呼气精准检测联合实验室”。 参与备忘录签署暨实验室筹建启动会的代表合影1月12日，实验室筹建启动会在京召开。中国计量院首席计量师张健、相关部门负责人，海得威董事长韩全胜、副总经理沈桂富等人参加会议。 签约会上，双方代表介绍了各自单位的基本情况与合作需求，回顾了前期工作及初步成果，讨论了联合实验室的目标与内容。双方还讨论了加强科研项目申报、人才培养以及科技成果转化等其他具体合作内容。据了解，该实验室将用于开展14C呼气检测关键技术攻关、检测标准装置和标准物质研制、技术规范编制等工作，有利于资源整合、提升研发效率，实现打造幽门螺杆菌呼气检测“金标准”、实现检测结果国际认可等。

微生物污染已成为国内外突出的食品安全问题，而由此引发的食源性疾病严重危害了人类的健康。我国每年的官方通报中，细菌性食物中毒的报告数和波及人数最多。因此，开展食源性致病菌的快速、准确监测具有十分重要的意义。近期，广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所(简称：质标所)与浙江大学合作研发了一种基于超表面-石墨烯异质结构的太赫兹微流控器件，实现了对大肠杆菌DNA的快速、准确、免标检测。该研究针对大肠杆菌快速灵敏检测的实际需求和现阶段太赫兹传感技术实现极性溶液中生化分子灵敏检测过程中的共性关键问题，首次提出将金属孔阵列结构与单层石墨烯结合并集成至太赫兹微流控器件中，基于对所构建器件的传感机理的全面探究，建立了生物-电-光信号增益转化的传感方法，实现了对大肠杆菌(O157:H7)DNA序列的快速、准确、免标检测。该研究成果为进行食源性致病菌的快速筛查提供了新的方法，也为推动解决太赫兹传感应用过程中灵敏度低、极性基质干扰严重的共性问题提供了新的思路，具有较好的学术和应用价值。图片来自网络

欧洲肠出血性大肠杆菌疫情受到越来越多人的关注，围绕应对肠出血性大肠杆菌O104：H4被带入我国传播，充分发挥天津市在基因组学和基因芯片研发优势，及时开展了针对性研发和检测技术开发，目前，由南开大学专家领衔完成的一项最新科研成果，只需一天就可以有效检测出果蔬内是否含有该毒菌。作为国内唯一 “对症”的检测试剂，它正在运用于全国疑似果蔬检测，为国民食品安全护驾。 　　这项成果由南开大学泰达生物技术学院院长王磊教授领衔完成，由南开大学、中国疾病预防控制中心传染病预防控制研究所与天津生物芯片技术有限责任公司联合开发，主要针对肠出血性大肠杆菌O104：H4研发出系列检测技术，适用于各层次的检测单位，仅需要1天时间便可获得检测结果。 　　目前系列产品已经运往中国疾病预防控制中心及国内多个省市的疾病预防控制中心或出入境检验检疫局，保证我国能够及时发现和处理可能出现的苗头。

新西兰乳制品巨头恒天然集团3日宣布，旗下部分婴儿奶粉和运动饮料等产品可能 &ldquo 受到污染&rdquo ，含有肉毒杆菌。暂不清楚&ldquo 受污&rdquo 产品的具体名称和销往国家或地区。 　　早已发现? 　　恒天然2日发布这次污染消息，3日举行新闻发布会，公布更多详情。 　　这家企业新西兰奶制品公司执行董事加里· 罗马诺介绍说，检测显示，新西兰本地一家工厂2012年5月生产的3批浓缩乳清蛋白含有肉毒杆菌。这些&ldquo 受污&rdquo 产品总量38吨。 　　浓缩乳清蛋白作为基本原料，通常被用于生产婴儿奶粉、儿童成长奶粉和运动饮料等一系列产品。至于一般乳制品，例如鲜奶、酸奶、奶酪和经过高温消毒的牛奶产品，不会受影响。肉毒杆菌是一种生长在常温、低酸和缺氧环境中的革兰氏阳性细菌。肉毒杆菌食物中毒的主要临床表现是恶心、呕吐及中枢神经系统症状如眼肌、咽肌瘫痪，中毒者如抢救不及时，致死率较高。 　　按恒天然的说法，早在今年3月，企业便发现潜在质量问题，当时对某一产品的检测发现梭菌属细菌。只是，这一菌属许多菌种属于无害，因而企业在接下来几个月里对产品样品实施进一步检测。 　　直至7月31日，检测中发现了可能引起食物中毒的肉毒杆菌。问及为何耗时这么久才发现问题，罗马诺回应，这一时间符合现代标准。 　　罗马诺说，这次污染源是恒天然在新西兰北岛怀卡托地区豪塔普工厂的一根受污染的管道。&ldquo (发现受污染后)我们立即寻找源头，确定一小段管道没有像本应该的那么卫生。&rdquo 　　可瑞康中招 　　恒天然说，已于2日告知8家客户这次质量问题。这些客户现正紧急调查，以确定产品是否受到影响。如有必要，将召回产品。恒天然拒绝提供8家企业和相关产品名称，拒绝说明&ldquo 受污&rdquo 产品销往哪些国家和地区。 　　《新西兰先驱报》3日报道，新西兰初级产业部认定，在新西兰销售的5批婴儿奶粉产品可能受到污染。这一部门说，涉及的品牌是可瑞康(Nutricia Karicare)、产品是针对6个月以上婴儿的第二阶段配方奶粉。 　　恒天然被视作全球第四大乳制品企业，占新西兰国内大约9成市场份额，年收益大约160亿美元。 　　这是这家企业今年以来第二起产品&ldquo 受污&rdquo 事件。今年1月，新西兰初级产业部宣布，恒天然生产的奶粉中被检测出含有微量双氰氨。 　　初级产业部3日说，已把恒天然这起最新&ldquo 污染&rdquo 事件通报主要海外市场的政府监管机构。同时，这一部门将与恒天然及相关客户合作，加紧调查核实。 　　恒天然集团全球首席执行官(CEO)西奥· 史毕根斯说，企业将竭尽所能帮助8家受影响客户，确保&ldquo 受污&rdquo 产品从市场下架以及让公众知情。 　　我国高度重视 　　中国是新西兰奶粉的主要进口国之一。暂不清楚这次是否有&ldquo 受污&rdquo 奶粉进入中国市场。 　　中国国家质检总局高度重视这件事，2日立即与新西兰驻华使馆取得联系，要求新方立即采取措施，防止问题产品影响中国消费者健康。 　　同时，中国国家质检总局要求进口商立即召回可能受污染产品，要求各地检验检疫机构进一步加强新西兰输华乳制品的检验监管。 　　恒天然一名发言人说，恒天然集团全球首席执行官史毕根斯定于3日从欧洲前往中国，向相关机构和客户通报最新情况。 　　《新西兰先驱报》报道，就在这次肉毒杆菌污染事件前，恒天然正准备在中国市场推出自己品牌的婴儿奶粉&ldquo 安曼&rdquo (Anmum)。这家企业6月说，新品牌奶粉将首先在北京、上海和广州销售，如果开局顺利，将扩至中国其他地方市场。

奶粉中肉毒杆菌不是常规检测项目 　　肉毒杆菌中毒十分罕见 　　肉毒毒素不耐热，高温加热可破坏 　　几年前，演艺界有&ldquo 美容大王&rdquo 之称的台湾女明星大S，让一种叫做&ldquo 肉毒毒素&rdquo 的物质平民化了。大S在《揭发女明星》一书中大爆：女明星，其实都使用肉毒毒素瘦脸。虽然这是种毒素，它依旧使无数少男少女趋之若鹜。 　　而两天前开始，肉毒毒素的风光命运，开始被翻盘了&mdash &mdash 新西兰恒天然乳制品厂出产的恒天然奶粉， 被检测出可能引起食物中毒的肉毒杆菌。 　　肉毒毒素和肉毒杆菌是什么关系?肉毒杆菌和肉毒毒素的危险性有多大?我们国家的乳品标准或者婴幼儿配方食品标准，对肉毒毒素的要求是怎样的? 　　本报昨连线中国肉毒毒素培养、提纯发明人，兰州生物制品研究所王荫椿教授、国家食品安全风险评估中心风险交流部钟凯博士来为您解读。 　　肠道是理想的厌氧环境 　　1岁以下孩子，要特别小心 　　全世界，目前只有美国、英国、中国、德国，有用于治疗的肉毒毒素产品的生产资格。 　　中国肉毒毒素培养、提纯的发明人，是兰州生物制品研究所的王荫椿教授。 　　昨天，记者致电王教授，他说,&ldquo 肉毒杆菌本身是没有毒性的。有毒的是它的芽孢，经过滋养生成的肉毒毒素，也就是我们培养用作药用的物质。&rdquo 　　&ldquo 肉毒杆菌在土壤、动物粪便中，比较常见。&rdquo 王教授说，&ldquo 我国西北部，如新疆、青海甚至西藏等地区的土壤，含有肉毒杆菌比率比较高。&rdquo 　　肉毒杆菌本无毒，当它进入厌氧(缺氧)的环境，便很快滋生成肉毒杆菌毒素。 　　而厌氧环境，往往是人类&ldquo 提供&rdquo 的&mdash &mdash 　　比如，人们爱做一些发酵的食物。像臭豆腐、豆瓣酱，可能豆类在生长的时候就已经从土里无意中携带了肉毒杆菌，而这些食物的制作，需要密封发酵，这给肉毒毒素制造了很&ldquo 落位&rdquo 的环境。 　　而孩子的肠内，可能也是这样的理想环境。 　　上世纪80年代，王荫椿曾经到美国威斯康星大学食品研究所做访问学者。在一项研究中，美国科学家们发现，1岁以下的孩子，喝了蜂蜜、或者有蜂蜜配方的奶粉，产生了肉毒毒素中毒的症状。 　　科学界推测，孩子中毒，可能因为蜜蜂采集蜂蜜的过程，携带了带有芽孢的肉毒杆菌 也有可能是孩子到处跑，无意中直接吃到了带有芽孢肉毒杆菌的土壤。 　　周岁不到的孩子，体内的肠菌丛还没有像成年人那么完备，所以孩子吃了有肉毒杆菌芽孢污染的食品，非常容易发生婴儿肉毒中毒。 　　肉毒杆菌怎么跑到奶粉里的 　　买了污染奶粉不建议食用 　　肉毒杆菌，为什么奶粉里会有? 　　国家食品安全风险评估中心风险交流部的钟凯博士，昨天在果壳网上发文说，&ldquo 任何食品的生产环境都不可能无菌，奶粉中的肉毒杆菌很可能是随空气中的小颗粒物飞入生产管线，恰巧逃过消毒程序。 　　至于国家标准是怎么规定的，钟凯说：&ldquo 其实是没有任何规定!(我国婴幼儿配方对金葡、沙门和板岐菌是有规定的)。也许不少人会觉得这是因为我国的标准落后，这么厉害的细菌怎么可能没标准呢?其实，全世界都没有奶粉中肉毒杆菌的限量标准，它也并不是常规检测项目。&rdquo 钟凯解释，肉毒杆菌在乳品中并不是常见的污染物，而标准的管理是要考虑成本的，正因如此，各国都不把它列入标准。但这并不意味着根本不管，比如这次恒天然是在企业的质量控制中发现的问题。 　　对本次奶粉污染，钟凯认为这仅仅是一次偶发事件，公众无需恐慌，但是监管部门应该严格把关，确保污染批次的产品下架或召回。&rdquo 　　如果买到的奶粉被肉毒杆菌污染，专家建议家长停止给孩子食用。 　　临床感染病例罕见 　　避免中毒只须做到三点 　　浙医二院感染科主任王选锭认为，&ldquo 理论上，发生肉毒杆菌感染，以及肉毒毒素经过食物引起中毒，都是有可能的，但事实上，这两种情况都十分罕见。&rdquo 　　&ldquo 可能大部分医生都没有遇到过病例。&rdquo 王选锭从1986年开始在感染科当医生，从事感染研究和临床工作近三十年，但他从未遇到过这两种病例。 　　资料显示，只有广东省在上世纪90年代初发现过一例肉毒杆菌人体感染的病例。 　　中毒症状以对称性颅神经损害症状为特征。如视力模糊、眼睑下垂、瞳孔散大、语言障碍、吞咽困难、呼吸困难，继续发展可由于呼吸肌麻痹引起呼吸功能衰竭而死亡。肉毒杆菌致病性是其产生的肉毒毒素。肉毒毒素对酸的抵抗力特别强，胃酸溶液24小时内不能将其破坏，故可被胃肠道吸收。但肉毒毒素不耐热，对于易感染的罐头及密封腌渍食物只要加热5~10分钟，肉毒毒素都会被破坏掉，因此规范生产的罐头等，不应含有有效的肉毒毒素。 　　避免肉毒杆菌中毒的建议： 　　(1)吃熟食。肉制品最好吃熟食，彻底加热，肉毒毒素不耐热，75-85℃，加热10分钟，或100℃加热1分钟可被破坏。(2)平时自己做食物时，注意加工卫生。(3)加工后的食品迅速冷却并低温储存。 　　肉毒毒素，毒性最强 　　肉毒杆菌的发现，跟19世纪，法国拿破仑政府鼓励发明的肉罐头有关系。 　　经营蜜饯食品的法国人阿贝尔，找到了一个长期贮存食物的好办法：把肉装入宽口玻璃瓶，用木塞塞住瓶口，放入蒸锅加热，再将木塞塞紧，并用蜡封口。这就是最早的肉罐头。 　　阿贝尔没有想到，这种受到欢迎的方便食物，如果没有经过严格的消毒环节，很有可能成为肉毒杆菌的&ldquo 逍遥国&rdquo &mdash &mdash 肉毒杆菌进入了诸如罐头这种厌氧(缺氧)的环境，很快滋生成肉毒杆菌毒素。 　　肉毒毒素，是细菌类毒素中，毒性最强的&ldquo 毒王&rdquo 。上个世纪，战争狂人使用肉毒毒素作生物武器，它能阻断神经信号的传导，使人出现头晕、呼吸困难、肌肉乏力等症状。&ldquo 0.1～1微克(100万分之一克)肉毒毒素，可致人于死地。1克肉毒毒素，足够毒死一百万人。&rdquo 王教授说。

近日，由温州检验检疫局主持完成的一项课题《进境生牛皮主要有害生物快速检测技术研究》顺利通过了专家鉴定。参与鉴定委员会成员一致认为，本项目的研究成果达到了国内领先水平，项目的研究对进境皮张的疫情监测和制定风险管理措施具有重要意义。 　　课题主要开展了进境生牛皮布氏杆菌和副结核分枝杆菌病的双重PCR和荧光定量PCR检测方法研究，并应用建立的检测方法对来自美国、加拿大、南非、澳大利亚和乌拉圭等国家的进境皮张进行了布氏杆菌和副结核分枝杆菌感染情况的调查，在进境南非和澳大利亚牛皮上检出携带副结核分枝杆菌病原体。 　　进口皮张是未经过加工的动物产品，所含蛋白质、脂肪、水分和有机物是病原微生物的生存条件和基础，国家质检总局将炭疽杆菌定为进境皮张必须进行实验室检测的项目。温州局工作人员在皮张炭疽杆菌检测的基础上，积极探索进境皮张是否还可能携带其他病原微生物，开展了相关课题的研究，并在国内核心期刊共发表专业论文4篇。

近日，生态环境部发布《水质 灭菌生物指示物（枯草芽孢杆菌黑色变种）的鉴定 生物学检测法》（HJ 1190-2021）。该标准为首次发布，适用于微生物实验室废水灭菌效果的评价，其发布实施可支撑微生物实验室废水灭菌效果的生物学检测，该标准将于2022年4月1日实施。随着国家对生态环境保护要求的不断提升，水体微生物检测逐渐成为关注的重点。无论是环境领域，还是卫生健康领域，水环境质量标准中均有与微生物相关的控制要求。事实上，完善和提高相关水质标准中的微生物指标，控制水环境中微生物的污染源，提高微生物的检出能力十分关键。近几年，中国各大流域、海洋受到微生物污染日益严重，除此之外，藻毒素的危害也不可忽视。致病微生物和藻类是水体生物污染的两大来源，对人类及其他生物危害明显。致病微生物可存在于饮用水、地表水、城市污水、医院废水等各类水体中，经媒介传播引发多种疾病；以蓝藻为代表的的部分藻类会产生藻毒素，长期饮用受到藻毒素污染的水，会引起消化道、肠道等疾病，某些藻毒素甚至有“三致”作用。纵观我国各类水环境标准，微生物和藻毒素检测、监测方面相对欠缺，现有检测手段不能满足需求，相应控制标准体系也有待完善。基于此，仪器信息网将于12月21日举办“水环境生物污染检测与监测新技术”主题网络研讨会，届时邀请环境与卫生健康等方面的专家，结合我国水体生物污染现状，进行标准解读，分享生物污染检测研究进展、快速检测新技术和新方法，旨在共同推动我国水环境质量健康发展。欢迎参会！拟报告时间报告主题报告专家9:30-10:00基于微流控与纳米材料的液态样本中微生物快速检测技术研究与应用周蕾（中国科学院过程工程研究所 研究员）10:00-10:30水的消毒处理及其对微生物（大肠菌群）消毒效果的监测翟家骥（北京北排水环境发展有限公司水质检测中心 技术主任）10:30-11:00藻毒素的检测技术于仁成（中国科学院海洋研究所 研究员）报名点击此处，或点击下方图片（点击图片，免费报名）