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纳氏试剂法检测

仪器信息网纳氏试剂法检测专题为您提供2024年最新纳氏试剂法检测价格报价、厂家品牌的相关信息, 包括纳氏试剂法检测参数、型号等,不管是国产,还是进口品牌的纳氏试剂法检测您都可以在这里找到。 除此之外,仪器信息网还免费为您整合纳氏试剂法检测相关的耗材配件、试剂标物,还有纳氏试剂法检测相关的最新资讯、资料,以及纳氏试剂法检测相关的解决方案。

纳氏试剂法检测相关的论坛

  • 采用氨的纳氏试剂分光度法检测氨的浓度时,重复实验吸光度值总会增加

    在做工作场所空气有害物质检测,采用氨的纳氏试剂分光度法检测氨的浓度时,同一个比色管的东西,测完一次倒回去摇匀再重复测定,吸光度值每次重复一次都会有一点点的增加,假如空气中有一定量的本底值,那也只会吸收一点点而已,但每次倒回去再倒出来都会增加?是不是在倒的过程中,样品接触空气的表面积变大,快速吸收啊?

  • 大家在检测水质氨氮时用的纳氏试剂是自配还是买商品的试剂?

    水质氨氮,使用较为广泛的是纳氏试剂分光光度法,即HJ 535-2009,所用的显色剂为纳氏试剂。按照标准方法一般采用剧毒化学品氯化汞或者碘化汞配制,不过由于这两个汞盐都是Po lice管制的剧毒品,对实验室日常管理要求很高,需要安装实时监控系统,存放在专用保险箱内,双人双锁管理,等等。我们目前已经改用商品的纳氏试剂了,省去了一些麻烦。不过带来的问题就是:商品的纳氏试剂显色性能不稳定。已经使用过的厂家有:国药集团上海化学试剂公司(空白较低,但只有100毫升装,不实用);天津化学试剂研究所(相对较好,据说因为上海Tl事件牵涉到该单位,已经不生产了);天津基准化学试剂公司(不稳定,空白较高,低含量显色性能差)。欢迎大家讨论自己实验室内氨氮所用纳氏试剂的配制或者来源,并就检测中存在的问题加以讨论。

  • 【“仪”起享奥运】纳氏试剂分光光度法检测水中氨氮蒸馏条件的优化研究

    [font=&][color=#666666]在实际检测中发现,按照《水质氨氮的测定纳氏试剂分光光度法》(HJ 535—2009)用蒸馏法对水样进行前处理时,氨氮的回收率较低。使用20 mL硼酸溶液作为吸收液吸收蒸馏出的氨气,通过调节馏出液的pH值,测定不同pH值对氨氮回收率的影响。结果显示,馏出液pH值小于9.0时,吸收效率较低,氨氮回收率小于80%;馏出液p H值范围为9.5~10.0时,回收率为84.9%~99.4%;馏出液pH值=10.5时,回收率为96.7%~103.6%,回收率更高,精密度更高。使用优化后的方法对标准样品和实际水样进行检测,标准样品测定结果均在标准值范围以内,实际水样的加标回收率均在95%~105%之间,具有良好的准确度。[/color][/font]

  • 【我们不一YOUNG】纳氏试剂分光光度法检测水中氨氮蒸馏条件的优化研究

    [font=&][color=#666666]在实际检测中发现,按照《水质氨氮的测定纳氏试剂分光光度法》(HJ 535—2009)用蒸馏法对水样进行前处理时,氨氮的回收率较低。使用20 mL硼酸溶液作为吸收液吸收蒸馏出的氨气,通过调节馏出液的pH值,测定不同pH值对氨氮回收率的影响。结果显示,馏出液pH值小于9.0时,吸收效率较低,氨氮回收率小于80%;馏出液p H值范围为9.5~10.0时,回收率为84.9%~99.4%;馏出液pH值=10.5时,回收率为96.7%~103.6%,回收率更高,精密度更高。使用优化后的方法对标准样品和实际水样进行检测,标准样品测定结果均在标准值范围以内,实际水样的加标回收率均在95%~105%之间,具有良好的准确度。[/color][/font]

  • 悬赏 废水氨氮 蒸馏法纳氏试剂法 比 絮凝纳氏试剂法偏低

    说明:1、废水氨氮 蒸馏法纳氏试剂法检测结果0.05-0.2之间,絮凝纳氏试剂法检测结果2-3之间。 2、两种方法做2ppm的标样,结果准确(2.038/2.078)。 3、废水采用2ppm标准加入法,蒸馏法纳氏试剂法检测结果偏低较多。絮凝纳氏试剂法检测结果准确。 (蒸馏法0.1+2ppm,结果1.2ppm;絮凝法2.5+2ppm=4.4ppm)

  • 纳氏试剂分光光度法测氨

    室内空气用纳氏试剂分光光度法测氨,它的最低检测限值是0.4毫克每立方,但是国家标准是0.2毫克每立方。这个方法能做室内空气嘛?(GB/T18204.2-2014)

  • 比较环境空气中氨气和水质中氨氮都用纳氏试剂方法检测。

    最近在做纳氏试剂测氨的实验,环境空气中氨和水质中氨氮两个方法的比较。想请教,这两个实验做标曲的方法都差不多,只是所用比色明不一样,那能不能都都用同一个比色皿呢?这样标曲不是也可以做公用吗?这个所用比色皿对检测结果影响很大吗?

  • 【原创大赛】纳氏试剂法检测氨氮随机性混浊和低浓度显色困难问题的解决

    【原创大赛】纳氏试剂法检测氨氮随机性混浊和低浓度显色困难问题的解决

    氨氮是水质检测中的一个常规项目,检测过程也相对简单,但实际工作中常常会遇到低浓度显色困难,随机性管内混浊,无法正常比色,这些问题给日常的检测工作带来了困扰。 在翻阅了仪器信息网论坛的相关话题和搜索知网相关文献的基础上,经过摸索和比较,确认了以下的试剂配制和检测流程可以很好地克服上述问题。[b]1 试剂的配制[/b] 目前纳氏试剂比色法检测氨氮主要涉及到二个试剂:纳氏试剂和酒石酸钾钠,改良后的方法同样是二个试剂:纳氏试剂和酒石酸缓冲液,改变后试剂具体配制方法如下:[b]1.1 纳氏试剂[/b]:新的纳氏试剂由显色剂和稳定剂混合而成[b]A 稳定剂[/b]:称取聚乙烯醇(PVA1788) 12g,溶于1000ml纯水。该溶解过程比较慢,可采用磁力搅拌的方式,根据室温不同,大概要1-2个小时,开始时可用玻棒将沉于底部溶胀粒子辅助搅动下,最终能完全溶解至均匀澄清配制时采用大号的烧杯,降低液层厚度,利于充分搅拌[img=1788,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908061025266455_9815_1639352_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908061026411355_6124_1639352_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,128]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908061027236265_7207_1639352_3.jpg!w690x128.jpg[/img]聚乙烯醇采购自国药集团,型号选用1788[b]B 显色剂:[/b]称取碘化钾30g溶于60ml纯水中,称取12.4g二氯化汞粉末逐步溶解于碘化钾溶液中,不断搅拌使其完全溶解二氯化汞溶于碘化钾溶液时可用牛角小匙少量多次加入,用玻棒不断搅拌至完全溶解,在这里采用固定量配制不求显色能力的最大化,这个配制比例满足显色要求,简化配制流程[b]纳氏试剂[/b]:将上述显示剂B倒入稳定剂A中,混匀后放入棕色瓶置冰箱冷藏室,避光低温保存,使用半年没问题。[b]1.2 缓冲液[/b]:称取160g氢氧化钠溶于400ml纯水中,132g酒石酸溶于400ml纯水中(实际是酒石酸无法完全溶解),待氢氧化钠溶液冷却后,将酒石酸混悬溶液(包括未溶解部分)缓缓加入氢氧化钠溶液中,不断搅拌,并用150ml左右纯水分次将未溶解的酒石酸一并洗入,搅拌至完全溶解,冷却贮存备用(稳定2天后,取50ml水,加1ml缓冲液,测PH=12.19左右,有效)[b]2 样品的检测[/b] 取样50ml,加1ml缓冲液,摇匀后静置2分钟,再加1ml纳氏试剂,摇匀后静置15分钟,2cm比色皿,420nm比色 实测一条标曲如下: 标准系列(ug) 0 2.5 5 10 20 40 80 吸光度 0.025 0.045 0.071 0.119 0.210 0.370 0.684 回归方程: ŷ =0.0082x+0.0097 r=0.9993 实测样品和标准系列都无混浊现象出现,低浓度显色稳定,加标回收96%-98%这个方法的改良,主要是体现在二个方面:1.纳氏试剂中移去碱液,通过加入聚乙烯醇形成稳定的胶体2.日常饮用水检测中,酒石酸钾钠作用并不明显,采用酒石酸-氢氧化钠缓冲液体系,使样品形成一个明确稳定的碱性环境,测定的可行性和可靠度明显提高大家有兴趣可以尝试一下,欢迎讨论和反馈

  • 公共场所氨的测定 纳氏试剂法

    请教大家:公共场所空气中氨的测定方法(GB/T 18204.25-2000),法二为纳氏试剂法,大家帮忙看一下检出限是否是0.4mg/m3,如果是的话,室内空气质量标准,氨的标准是0.2mg/m3,那检出限比限值还高,麻烦大家帮忙看下检测限我是否理解错了

  • 请教纳氏试剂法测氨氮

    在测氨氮时一般用纳氏试剂比色法,很多方法上都说,在水很清亮时,可以不用蒸馏处理,这样我在做样时总发现在加完酒石酸钾钠和纳氏试剂后,显色体系与标样的那的黄色不相近,做标样时好象有点黄红色,但水样则好象带一点黄白色一样的,有时放久了,比色管下面会有细小的颗粒沉积. 请各高手多多发表高见!

  • 纳氏试剂法测氨氮(氯化汞)

    在线仪表检测,标定曲线正常,但是做质控样偏高(仪器量程0-1-20,10的质控样做出来11点几)下面是配的纳氏试剂[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/06/202006091617326001_8004_4043542_3.png[/img]

  • 纳氏试剂检测氨氮

    各位老师,这是GB /T 5750 9.1纳氏试剂法中这个30ug是浓度×体积得到的,是不是可以这样理解,取50ml水样,浓度在0.6mg/L以下都需要用3cm比色皿,标准说浓度低于10ug,目视比色,大家平时都是怎么做的,我们水样平时浓度都是低于0.1mg/L[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/07/202007141424245443_2871_3892805_3.png[/img]

  • 试剂盒快速定性法检测罂粟壳

    罂粟壳为罂粟干燥成熟果壳,内含吗啡、可待因、那可丁、蒂巴因等生物碱。罂粟壳检测方法有试剂盒快速定性法、气相色谱法、高效液相色谱法。 试剂盒快速定性法检测罂粟壳 1.原理 试剂盒(MOP)采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫技术,通过单克隆抗体竞争结合吗啡偶联物及含有的吗啡、可待因、海洛因等物质。 2.试剂 ①O.05mol·I.1 Pb(N03)2液。 ②吗啡标准品(中国药品生物制品检定所)。 ③吗啡胶体金法检测MOP(ACON公司)。 3.检测步骤 取5 mL样液于试管中,加O.05 tool·L叫Pb(NO。)2液6滴,混匀,2 min后过滤于试管中,加入该滤液5滴于MOP试剂盒的加样(S)孑L中,5 rain后观察,若为阳性则为罂粟壳。 4.说明 样品中的吗啡浓度为4。0 ng·mL~、可待因、海洛因、福尔可定等浓度≥300 ng/mI。时,均显示阳性反应。 更多相关知识请参考国家标准物质网资料中心

  • 废水中氨氮的测定 纳氏试剂分光光度法

    我们用纳氏试剂分光光度法测定企业生活污水的氨氮时,样品经过淀粉-碘化钾试纸测试无变色反应后,采取预蒸馏的方式对样品进行处理,之后按照标准要求进行检测,但是检测过程中发现,样品按标曲处理完成后出现了橙红色沉淀,过了一段时间标准曲线也出现了沉淀,纳氏试剂用的是碘化钾-碘化汞-氢氧化钠溶液,请教各位大侠是什么原因啊?

  • 【求助】纳氏试剂法测氨氮好像出问题了~

    【求助】纳氏试剂法测氨氮好像出问题了~

    纳氏试剂采用水与废水监测分析方法的第二种方法配制,配制出来的试剂呈淡黄色,略有沉淀(漂浮物)。在制作标准曲线和水样样本时加入纳氏试剂,并没有出现 氨氮与纳氏试剂反应生成淡红棕色络合物最多就只有几个标准(水样)在加入时,刹那间出现红色,但一会即消失不见,最终形成颜色就像稀释了的纳氏试剂那样!是不是我配的纳氏试剂不行?以下是我做的标准:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011250702_261841_2202366_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011250703_261842_2202366_3.jpg而我在本论坛找到别人做的是这样的http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011250705_261843_2202366_3.jpg出处:http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100731/2693796/

  • 检测实验室常规试剂耗材采购二三事

    面对商家遍布天下,你该如何选择?当准备检测某一项目时,发现试剂或者耗材已所剩无几,你该如何面对?为了采购双方的共同利益,也为了实验室工作的正常开展,检测实验室应如何采购实用、性价比高等的试剂与耗材。 目前实验室的常规采购是实验室检测工作质量的前期保障,采购的有效性、及时性、质量等影响着检测数据的准确性。特别是当今社会,实验室也特别强调自己的检测资质,是否获得CMA计量认证?是否通过国家CNAS认可等? 而对于通过国家CNAS认可的实验室,更是需要建立并运行符合ISO/IEC 17025、CNAS-CL01、CNAS-CL09、CNAS-CL10等要求的技术体系。这就要求通过国家CNAS的检测实验室,建立一个关于常规试剂耗材的程序,规定试剂耗材的采购、验收、储存、使用及记录等,其中找到合格的试剂耗材采购代理商变得十分重要。 咱也是通过国家CNAS认可的检测实验室,针对采购代理商的管理,谈谈自己的一己之见。 首先,需要对试剂耗材采购代理商进行实地考察,考察其经营业务范围、单位资质、之前的合作单位、信用度、货物的质量、发货及时性、能提供的服务支持、各品牌厂商的授权书等。 其次,采购代理双方签署一份采购代理协议,以约束采购代理双方的权利、责任、义务,订单方式、发货方式、付款方式及相关法律条款,以便双方共同遵守,共促工作开展,采购代理协议模板见下:●协议编号: ●本协议须加盖甲乙双方骑缝章 代理采购协议 甲方: 乙方: 地址: 地址: 联系人: 联系人: 电话: 电话: 邮编: 邮编: 甲乙双方因工作的需要,本着诚信经营、互惠合作的原则,经双方充分协商自愿达成以下代理采购协议。甲方委托乙方采购实验室工作开展所需相关物品。特签订以下合同,以便双方共同遵守。 第一条. 甲方的职责和权利 双方达成的代理采购协议中,甲方的职责和权利包括但不仅限于以下内容: 1.甲方应指定代表,按工作开展所需向乙方提供需求计划单,且需求计划单应包括但不仅限于:物品名称、规格、数量等相关信息; 2.甲方指定代表提交需求计划单后,工作上班期间应及时解答乙方的疑惑,辅助乙方采购到实验室所需、满意的物品; 3.甲方应向乙方提供详细的接收物品地址及相关信息,需求物品送达甲方指定地址后,甲方应组织相关人员在5个工作日内对到货物品进行验收,其中包括:外观验收与技术验收; 4.甲方对到货物品验收完毕后,指定代表与乙方业务员联系,共同确认到货信息,包括但不仅限于:到货物品名称、到货数量、规格、是否满足甲方工作所需等; 5.如果按照甲方指定产品订货、发货的,原则上不予以退货,若乙方所发送物品不能满足甲方需求(不按双方协定订购或者质量有问题)时,甲方有权要求乙方在10个工作日内重新补货,期货产品(比如进口物品及其他特殊物品等,以下均简称“期货产品”)必须在20个工作日内重新补货,且若因乙方发货而给甲方造成经济损失时,甲方将有权利追究乙方相关的法律和经济责任。 第二条. 乙方的职责和义务 双方达成的代理采购协议中,乙方的职责和义务包括但不仅限于以下内容: 1.乙方接到甲方详细的需求计划(包括但不仅限于:物品名称、规格、数量等相关信息)询价单后,须在3个工作日内提供需求物品报价单给甲方(若遇特殊情况和不可抗拒力因素除外); 2.甲乙双方确定需求计划及报价单后,由乙方尽责执行督导甲方实验室工作开展所需相关物品的采购业务,并随时向甲方汇报进展情况; 3.乙方依据采购计划单将甲方实验室工作开展所需物品送达甲方指定地点,期间应指定业务员代表与甲方人员共同确认发货信息,信息包括但不仅限于:到货物品名称、到货数量、规格、是否满足甲方工作所需等; 4.乙方所发送物品不能满足甲方需求(不按双方协定订购或者质量有问题)时,乙方有责任在10个工作日内重新补货,期货产品在必须在20个工作日内重新补货,且若因乙方发货而给甲方造成经济损失时,乙方有义务必须承担相关的法律和经济责任; 5.乙方有责任和义务提供性价比高、生产日期为最新的(6个月之内的,期货产品除外)、满足甲方工作需要等的物品,并能随时提供优质的售后及相关的技术咨询服务。 第三条. 关于交货期 1.交货截止期限为双方共同确认采购需求计划单后算起[

  • 中检院官方发布CHO细胞宿主DNA残留检测标准试剂盒(附中检院说明书)

    2015年3月底,第一个中国科学院和中国食品药品检定研究院联合开发的试剂盒出现在中国食品药品检定研究院网站的国家药品标准物质目录中:CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒(PCR-荧光探针法)。在2016年7月举办的生物制品研讨会上,中检院吕萍主任对这个试剂盒做了精彩的说明。这个由中检院与中科院联合研发,由生物制药企业参与标定的试剂盒与现行美国药典(USP)建议的检测方法同步,但与2010版药典附录中外源性 DNA 残留量测定法有所不同,将是国内生物制品的研发和生产的上下游企业检测宿主细胞DNA残留的第一选择,其后又联合开发了宿主细胞DNA残留样本前处理试剂盒,E.coli宿主细胞DNA残留检测试剂盒,Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒,毕赤酵母DNA残留检测试剂盒,大大的方便的广大厂商的选择。产品优势:1:中检所参与开发并认可其质量2:灵敏度高,稳定性好3:高效回收微量dna,回收率70-130%4:操作快捷,整个过程只要4小时5:满足自动化操作要求,可以高通量检测 ,6:参考品溯源至中检所DNA国家标准品7:价格便宜,基本价格都在ABI公司价格的一半以下,大大节约了企业成本订货信息货号 品名 包装SK030203D100 宿主细胞DNA残留样本前处理试剂盒 100TSK030201c100 CHO宿主细胞DNA残留检测试剂盒 100TSK030202e100 E.coli宿主细胞DNA残留检测试剂盒 100TSK030204v100 Vero宿主细胞DNA残留检测试剂盒 100TSK030205p100 毕赤酵母DNA残留检测试剂盒 100T生物制品中宿主细胞残留DNA具有潜在致瘤和传染风险,所以各国药品监管部门对DNA杂质的限量要求非常严格。美国药典在General Chapter 介绍了三种常用技术,但将在2015年颁布的新版(USP38-NF33)中增加全新章节(General Chapter )来进一步规范残留DNA检测的方法和标准物质。与1000号以上的章节不同的是,USP编号1000以内的章节详细规定了检测技术、系统适应性标准和标准物质。新版USP中将唯一推荐qPCR法作为生物制品中宿主残留DNA的标准方法。qPCR法的技术优势在于序列特异性高、灵敏度高、重现性好,可以为生物制药工业在工艺研究和成品质量控制方面提供可靠的检测手段。我国参照WHO、FDA和欧盟的标准,很早以前开始就对生物制品中残余DNA含量进行限制。从卫生部颁布的《人用重组DNA制品质量控制要点》到近年的《中国生物制品规程》都对DNA含量做了严格要求,部分标准高于国际标准。2010年版中国药典附录收录了DAN探针杂交法和荧光染料法,这两种方法都存在技术缺陷,很难达到杂质限量检测的灵敏度,已经被欧美药典摒弃。目前,仍有很多国内企业沿用这两种方法检测残留DNA,致使生产工艺和产品质量很难达到国际一流水平。根据残余DNA检测技术的发展趋势,小编预计我国2015版药典或增补版本中将出现qPCR方法。企业在生产与研发中采用中检院标准物质目录中提供的成套试剂盒,可以大幅度减少费时、耗力、成本高昂的方法学考察,只需开展少量方法适应性实验,就可以在生产工艺和质控体系的优化方面发挥实际作用,同时满足美国FDA相关标准的要求。同时,联合研发单位中科院湖州营养中心提供免费技术咨询和培训,帮助企业解决试剂盒应用中的各种技术问题。生物制品可用于治疗和预防疾病,关系到患者和健康人的用药安全,产品质量必须得到保障。我国药品监管部门对生物制品中残留DNA的限量标准制订的非常严格,但药典修订存在一定滞后性,附录中的检测技术与先进国家尚存在差距,企业在研发和生产中应具有一定前瞻性,否则会使改进工艺、提高质量、保障安全的努力大打折扣。为什么要检测残余DNA?生物制剂是制药行业中发展最快的领域,2014年全球十大畅销药中7个是生物制剂。这些销售在临床上疗效确切,但研发成本高,生产和质量控制要求非常严格。绝大部分生物制剂是不经过胃肠道直接进入体内,所以除了生物活性外,监管部门对药品中杂质的限量要求非常严格。其中,宿主细胞残留DNA因为具有特别的潜在安全风险,一直是国内外药品监管机构关注的重点。美国药典会从2011年开始就组织专门小组讨论修订生物制品中残留DNA检测方法,并在2014年Prescription/Non-Prescription Stakeholder Forum Meeting#5上宣布将在2015年药典修订版中增加新的章节(General Chapter )来规范检测方法和标准物质。为什么美国药典会的专家组花几年时间讨论一个微量成分(100pg/剂量)的检测方法?还要专门增加章节来规范化?回答这些问题,先要了解它的来源和潜在危害性。生物制品中的重组蛋白药、抗体药、疫苗等产品是用连续传代的动物细胞株表达生产,虽然经过严格的纯化工艺,但产品中仍有可能残余宿主细胞的DNA片段。这些残余DNA可能带来传染性或致瘤性风险,比如残留DNA可能携带HIV病毒或Ras癌基因。分布在哺乳动物细胞基因组的LINE-1序列可能发挥逆转录转座子作用插入到染色体中,这种插入可能影响关键基因功能的发挥,比如激活癌基因或抑制抑癌基因。此外,由于微生物来源的基因组DNA富含CpG和非甲基化序列,增加了重组蛋白药物在体内的免疫源性风险。目前的研究结果显示,残留DNA的致瘤性相比传染性风险要低,但考虑到致瘤性实验是动物实验,传染性实验是在细胞水平做的,或许对两方面的风险都不能掉以轻心。众所周知,外源蛋白可能引起严重免疫反应,但关于残留DNA诱导的免疫反应的研究还不多。在一些临床前和临床研究中报道了高剂量的核酸样品,比如DNA疫苗或佐剂中的CpG寡聚核苷酸,可以诱导免疫反应,还诱导产生DNA抗体。生物制品中宿主残余DNA既是是生产中带来的杂质,还存在一定安全隐患。因此,WHO和各国药物注册监管机构一般只允许生物制剂中存在100pg/剂量以下的残留DNA。根据杂质来源和工艺,特殊情况下最高允许10ng/剂量。各种残余核酸检测技术的优劣正如前面讲过,2015年版的美国药典将新增章节对残余DNA检测进行规范化,那究竟和现有方法有什么不同?为什么最后只确定了一种方法?我们来看看现行美国药典对于残余DNA检测的总体要求。"因为残留DNA涉及到潜在来源(传染性病毒DNA)、管理规程等关键问题,药品监管部门建议必须建立产品的DNA残留检测方法。不论是否成品的常规检测包含DNA残留含量检测,还是工艺开发中已经证实了DNA清除率,残留DNA技术指标和定量分析监测规程都必须确立。分析方法包括杂交法、基于DNA结合蛋白的免疫色谱法(阀值法)、定量PCR(Q-PCR)或其他DNA扩增方法。理想的定量检测方法的灵敏度应该能够检测到约10pg/剂量的残留DNA。杂交法、阀值法和定量PCR方法因为灵敏度可以达到检测要求,所以属于经典方法。"下面我们引用美国药典(USP)的内容分别介绍一下这三种方法。杂交法(Hybridization-based):在这种方法中,根据宿主DNA序列设计DNA探针用于测定产品中配对DNA的数量。双链DNA被变性成单链后固定在尼龙膜或硝化纤维膜上,DNA探针被放射或荧光随机掺入标记以后,与膜上固定的样品宿主DNA杂交结合,并在胶片或成像仪对应位置中显现斑点。对于荧光标记的探针,斑点的光密度结果可以在仪器中定量分析。斑点光密度对应结合在目标DNA上的探针数,进而推测出残留DNA的数量。通过目测方法可以半定量地检测样品中残留DNA,仪器读片可以对应斑点光密度绘制标准曲线,对应检测结果更加准确。DNA结合蛋白免疫阈值法(DNA-BINDING PROTEIN-BASED):这种方法使用DNA结合蛋白和DNA抗体,分四步检测。第一步,通过加热把DNA变性成单链DNA,变性后DNA与偶联了亲和素的DNA结合蛋白以及偶联了尿素酶的DNA单克隆抗体混合反应,液相中的单链DNA、DNA结合蛋白、DNA抗体共同形成序列非特异的复合物。第二步,样品混合液通过生物素标记的膜,亲和素-生物素结合把DNA复合物固定在膜上,洗去非特异吸附。第三步,膜放入检测仪器中与尿素溶液反应,反应产物氨改变溶液pH值并被仪器记录变化。这种pH值的变化直接与样品中的DNA数目相关。第四步,仪器软件自动分析原始数据确定样品中残留DNA数量。定量PCR法(QUANTITATION PCR-BASED):qPCR方法以其快速、高通量的特点已经被应用于生物制药的一些领域(拷贝数检测与病毒检测)。这项技术能够确定各种样品中目标DNA序列的准确数量。DNA探针的设计非常关键,这种DNA探针包含一端染料分子和另一端淬灭分子。当特殊设计的DNA引物引导DNA聚合酶沿着模板序列复制合成另一条对应序列时,DNA聚合酶切断结合在目标DNA上的探针染料端,释放到反应液里的染料信号被仪器测量。经过数十个循环的DNA扩增,荧光信号与起始DNA模板成对应关系,对应标准曲线可以准确计算出样品中残留DNA的数量。美国药典附录进一步对三种方法进行了应用评价。杂交法可以序列特异性地检测目标DNA,但32P标记的探针因为存在半衰期短、放射等问题,实际应用并不广泛。

  • 纳氏试剂分光光度法测氨氮

    实验小白想请教一下纳氏试剂分光光度法测氨氮,标准点测得吸光度后需要减去纯水作参比调零前的吸光度吗还有酒石酸钾钠的保质期大概如此有多久呢,需要现用现配吗

  • 【讨论】关于钙镁含量高的废水,用纳氏试剂法测氨氮问题?

    纳氏试剂法测氨氮的时候,会加入酒石酸钾钠来掩蔽金属离子的干扰,目前在线监测仪器中,由于不能加入前处理,蒸馏或是絮凝。在钙、镁离子含量很高的时候,酒石酸钾钠的掩蔽能力明显不够,是否有其他好的方法,可以简单有效的去除钙镁离子的干扰?

  • 三甲胺与用于测氨氮的纳氏试剂反应

    甲醇中三甲胺大部分是用色谱npd检测器测定,本人突发奇想。三甲胺能否跟纳氏试剂反应。三甲胺跟NH3 结构相似,不同的是H被甲基取代。甲基具有推电子效应,造成氮原子上的孤电子对更活跃,在某种条件下与金属离子形成络合物可能性更强。后实验发现,果然显色。目前只是初级观察是否反应,未做曲线。不清楚其他结构形式,例如吡腚,哌啶跟纳氏试剂反应效果如何,吡腚氮孤电子与环上碳有共轭效应,可能化学性质不活泼,但不妨碍,与金属等离子配合。

  • 纳氏试剂法测氨氮

    我用纳氏试剂测氨氮,加纳氏试剂的时候用泵加通过管路打到水样中,用一段时间后泵管里面有结晶的东西,我想着会不会是氢氧化钠结晶呢?这个结晶我可以用酸洗不?

  • 【实战宝典】安杰科技气相分子吸收光谱法测量氨氮结果与纳氏试剂法有差异的原因

    [font=宋体][color=black]两者检测结果有一定的差异主要是方法的差异性导致的,检测结果有差异的浓度范围主要集中在[/color][/font][color=black]0.5mg/L[/color][font=宋体][color=black]以下的低浓度范围。深究其原因主要体现在以下两个方面:[/color][/font][color=black]1[/color][font=宋体][color=black])水体中的干扰源不同[/color][/font][font=宋体][color=black]纳氏试剂分光光度法的基本原理是分光比色法,该法具有灵敏度高,显色稳定的特点。但是水体中的色度、悬浮物、余氯、钙镁等金属离子、硫化物及有机物等都会对检测结果造成影响。虽然针对相应干扰物都有对应的处理办法,但是处理后依然难以完全消除干扰物的影响,而且在处理过程中添加相应的试剂也存在引入新干扰的风险。在实际工作中,也很难对每一种可能存在的干扰物都进行前处理,所以最终的检测结果从理论上分析都会有所偏高。这一点在低浓度的实际水样中,现象最明显。[/color][/font][font=宋体][color=black][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]分子吸收光谱法的核心是待测物质反应后进行气液分离,然后采用分子吸收光谱法进行测量。因为待测物质在水体中转变成气态分子,在这一过程中,水体中的色度、悬浮物、钙镁离子、氯离子等都残留在反应液中,不会随着气态分子进入检测系统,所以不会对检测结果造成影响。影响[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]分子吸收光谱法检测结果的干扰物主要有哪些呢?主要分为以下两类:一是会伴随化学反应的过程生成会对检测结果造成的气体的物质,因为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]分子吸收光谱法检测氨氮采用的是次溴酸盐氧化法,次溴酸盐会把氨氮氧化为亚硝酸盐氮,所以水体中的亚硝酸盐氮以及会被次溴酸盐氧化的有机胺都会对检测结果造成正干扰。二是不参与化学反应,但是会随着气态分子进入检测系统的挥发性有机物也会对检测结果造成影响。[/color][/font][color=black]2[/color][font=宋体][color=black])试剂的干扰问题[/color][/font][font=宋体][color=black]纳氏试剂是含汞类试剂且不易配制,所以一般都是市售纳试剂包,所以有时也会遇到因为纳氏试剂的质量问题而导致的检测结果偏差的现象。[/color][/font]

  • 【讨论】纳氏试剂法测氨氮显色与正常颜色不同,出现柠檬黄绿色

    本人现在在做[color=#ff0000]新鲜渗滤液[/color]的一些指标检测。利用[color=#ff0000]纳氏试剂法[/color]在测某一个装置产出的渗滤液氨氮后,发现其显色与正常做标曲或者其他样品的颜色有差别。正常来说应该是如图[color=#ff0000]右边[/color]所示的那种[color=#ff0000]红褐色[/color],但是实际测出来的是左边柠檬黄偏绿的那种,且在420nm处两者的吸光度是差不多的,那就肯定有问题了。想请教大家是否有知道这是什么情况?尝试用硫酸锌絮凝后显色依然没有改变。且里面含有的金属离子浓度比较高,因为絮凝后加酒石酸钾钠过了10min,仍然会有较多悬浮细微颗粒存在。

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