黄曲霉液相检测

液相色谱仪检测黄曲霉，出峰异常，好像是没有进样一样，可能是什么问题呢

高效液相色谱方法检测食品中黄曲霉毒素研究进展由于黄曲霉具有极强的毒性和致癌性，大多数国家和地区都规定了食品中的限量要求，这就要求对黄曲霉毒素进行有效的监督，一方面可以保护公众的食品安全和健康，另一方面可以减少食品对外贸易带来的经济损失。高效液相色谱法是一种检测痕量物质常用的方法，检测黄曲霉毒素的一般步骤是用适合的溶剂提取目标物，净化浓缩，C18柱分离后检测器检测，根据检测器的不同，可分为荧光检测法和质谱检测法两类。1提取和净化样品提取溶剂的选择取决于黄曲霉毒素自身的物化性质，一般用到的提取溶剂有甲醇、乙腈的水溶液，尽管早期的方法中经常用到氯仿，但考虑到氯仿对环境的影响，现已基本上被替代；一些新的提取技术，如超临界流体萃取、加压流体萃取（加速流体萃取）被用于黄曲霉毒素的提取，但是超临界流体的提取物常有大量的杂质，而加压流体萃取设备价格昂贵，限制了其广泛使用。样品的提取溶液中常含有共提取物，给黄曲霉毒素的检测带来干扰和基质效应。为了排除基质对分离和检测的干扰，常用的净化手段有液液萃取、固相萃取柱、免疫亲和柱和多功能净化柱。对于含油量大的样品，常需要在提取溶液中加入正己烷用液液萃取法去油；传统固相萃取柱在黄曲霉毒素净化方面的应用较早，填料主要有C18、硅胶、弗洛里硅土、氧化铝等，但由于选择性差，且往往既耗时又浪费溶剂，因此不及免疫亲和柱和多功能净化柱应用广，而微型固相萃取柱的应用便于建立简单快速、成本低廉的前处理方法。Mahoney等采用硅胶柱（30 mg/3 mL）建立了简单可靠的方法来分析检测来自不同植物源的油中黄曲霉毒素，结果表明硅胶柱可以选择性保留植物油中的黄曲霉毒素；Sobolev使用自制氧化铝柱（200 mg/1.5 mL）用于来净化检测主要农产品（玉米粉、棉籽、花生、杏仁、英国胡桃、巴西坚果、阿月浑果）中的黄曲霉毒素，该方法简单快速，成本低廉。由于弗罗里硅土对黄曲霉的吸附能力强，因此用弗罗里硅土柱净化洗脱需要用到大量的丙酮-水溶液；Sobolev对于弗罗里硅土柱（130 mg/1.5 mL）净化的的洗脱条件进行了研究，结果显示丙酮/水/甲酸(96:3.7:0.3, v/v)为洗脱溶剂时的洗脱能力最强，2 mL的洗脱体积即可得到大于98%的回收率；该净化方法用于花生、巴西坚果、玉米、棉籽等样品基质，其中花生基质中B1定量限达到0.05 μg/kg；使用商品化的弗罗里硅土柱可以保证样品检测的重复性，同时可进行实验室间结果比对。免疫亲和柱具有高效和特异性吸附的优点，可同时实现样品的净化和富集，达到比普通固相萃取柱更好的净化效果和更高的信燥比，而且有机试剂使用量少，因此免疫亲和柱越来越多用于黄曲霉毒素等真菌毒素的样品净化。AOAC对免疫亲和柱净化的黄曲霉毒素检测方法进行了协同研究；我国将免疫亲和柱用于黄曲霉毒素检测的国标方法（GB/T 18979-2003）。多种真菌毒素免疫亲和柱的商品化使同时净化分析多种真菌毒素成为可能，如人参和姜中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A的同时净化，谷物中黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮三种真菌毒素的同时净化富集；最新推出的商品化免疫亲和柱可实现黄曲霉毒素、赭曲霉毒素[font=T

用液相色谱做油中黄曲霉B1检测，标准是GB5009.22-2016，如果是柱前衍生的话，曲线点也需要衍生吗？我试了两种牌子的标物，旧的标物点不用衍生也出峰，但是新的标物就不行了，有没有大神可以解答一下呀，十分感谢。

针对近期奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题提出以下液相色谱法精准检测方案。1. 仪器1.1 高效液相色谱仪配荧光检测器1.2震荡器（或高速搅拌器）1.3 高速离心机1.4 泵流操作架（带气泵）2. 试剂与试液2.1 色谱甲醇2.2 蒸馏水2.3 乙腈+水（25+75）2.4 石油醚2.5 10%乙腈2.6 氢氧化钠溶液（0.5mol/L）玻璃纤维滤纸（PriboFast免疫亲和柱免费赠送）3. 测定法本法系用高效液相色谱法（GB/T 18980-2003）测定牛奶，奶粉等产品中的黄曲霉毒素M1，除另有规定外，按下列方法测定。3.1 色谱条件色谱柱：C18柱，150×4.6mm，5um检测器：荧光检测器；激发波长365nm，发射波长435nm；流动相：乙腈-水（25：75）流速：1.0ml/min进样量：20ul柱温：室温3.2 标准品溶液的配制取黄曲霉毒素M1标准品，用乙腈稀释成0.5ug/ml的标准储备液。根据使用需要，准确吸取10μl、20μl、50μl、1

用液相检测黄曲霉毒素B1要注意什么问题？？手动上样的针接触标液后怎样处理？？用次氯酸钠浸泡清洗吗？？

[align=center][b]高效液相色谱法检测花生中的黄曲霉毒素[/b][/align][align=center][b] [/b][/align]一、[b]黄曲霉毒素[/b]1、[b]黄曲霉毒素及来源[/b]黄曲霉毒素:是一组真菌(霉菌)毒素。黄曲霉毒素是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。主要有黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢物。来源：存在于土壤、动物、植物、各种坚果里。特别是花生、大豆、荞麦、酱豆很容易被污染。2、[b]理化性质及毒性 [/b]它是目前自然界中已经发现的理化性质最稳定的一类真菌毒素,具有很强的毒性、致癌性、致突变性和致畸毒性。其中以黄曲霉毒素B1的毒性最大，相当氰化钾的10倍, 砒霜的68倍，且其致癌性是二甲基亚硝胺的70倍。在水中很难溶解，可以溶解在油、甲醇、丙酮和氯仿等有机溶剂，但不溶于石油醚、己烷和乙醚中。一般在中性溶液中比较稳定，在强酸性溶液中稍有分解，可以在PH9-10的强碱溶液中分解迅速，其纯品为无色结晶，耐高温。二、[b]检测方法选择 [/b]我国很早之前就已经对黄曲霉毒素展开研究，制定了一系列相应检测标准。目前国标方法已有12种之多，其中包括薄层分析法，液相色谱法，酶联免疫法，毛细管电泳法，荧光光度法，金标试纸法和生物传感器法。液相色谱法中高效液相色谱法是目前国内外比较权威的定量检测黄曲霉的分析方法，也是我国黄曲霉毒素检测的国家标准方法。所以在检测时选用了高效液相色谱-柱后光化学衍生法。三、[b]高效液相色谱仪[/b]1、[b]原理 [/b][color=#333333]样品溶液经进样器进入流动相，[/color][color=#333333]随着流动相进入色谱柱[/color][color=#333333]，由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动时，经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样本浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式输出检测结果。[/color]2、[b]组成[/b][color=#333333]高压输液系统、[/color][color=#333333]进样系统[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]分离[/color][color=#333333]系统（色谱柱）[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]检测系统[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]数据处理和记录系统[/color][color=#333333]。[/color]3、[b]特点[/b][color=#333333]高效液相色谱[/color][color=#333333]与经典液相色谱相比有以下优点：[/color][color=#333333]分析[/color][color=#333333]速度快[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]分辨率高[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]检测[/color][color=#333333]灵敏度高[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]色谱柱可反复使用[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]样品量少，容易回收[/color][color=#333333]。[/color]四、[b]实验过程[/b]1、[b]样品前处理 [/b]样液准备：将均质杯放在天平上，在其内分别称取25g花生四份。再称取5gNaCl加入均质杯中。最后用200mL量筒量取125mL甲醇-水溶液（700+300）加入均质杯内。在其中两份两份花生中分别加入50μL（1μg/mL）标准品溶液作为回收。将盛有样品的均质杯依次放在均质器上进行打磨混匀。将定性滤纸两张叠放在玻璃漏斗上，下端接入锥形瓶内，先在滤纸上倒入少量样品过滤润洗锥形瓶，润洗后正式开始过滤。过滤完成后取滤液15mL分别倒入100mL量筒中再加入30mL超纯水震荡混匀。 样液的净化：在过滤的同时激活免疫亲和柱，将免疫亲和柱安装好加入10mL超纯水进行激活，速度控制在大约1s滴1滴。激活完成后将混合好的样液经过两张玻璃滤纸过滤15mL到已经激活的免疫亲和柱中，混合样液完全从亲和柱中过滤后，再在免疫亲和柱中加入10mL超纯水。 样液洗脱：在亲和柱中加入1mL甲醇，用洗耳球吹洗，速度控制在1滴/秒，甲醇全部通过亲和柱后再加入1mL超纯水，吹洗速度与甲醇的保持一致。 样液装瓶：把洗脱下来的液体放在涡旋混合器上，震荡混匀后取1000μL装入进样瓶，在进样瓶上注明名称以及日期。配制1ng/mL的标准品1000μL放入进样瓶混匀，再配制一个空白（1000μL甲醇-水溶液）。 备注：实验所用药品氯化钠([u]NaCl[/u]）为优级纯、甲醇（CH[sub]3[/sub]OH）为色谱纯，水为超纯水。混合标准品为国标GB5009. 22 — 2016中规定标样。2、[b]实验参数[/b] 以C18柱为分离色谱柱，甲醇-水（45：55，体积：体积）溶液为流动相梯度洗脱，流速1mL／min，在室温下，激发波长360nm，发射波长435nm条件下，进样量20μL，经过光化学衍生后用荧光检测器检测。3、[b]进样检测[/b]①先换流动相（A：甲醇-45% B：水-55%）②再打开电脑和仪器③打开联机软件④进样针变绿后再打开泵和温控箱，将流动相容量修改为相应的体积，再将流速改为3mL/min，打开空气阀排净气泡，再把空气阀关闭流速改为1mL/min，冲柱一段时间。⑤将进样瓶放入指定位置（依次为空白、标准品、样品、回收）⑥建立序列，修改子目录（将日期设为子目录），修改完毕点击样品位置修改名称、坐标，查看进样次数，确定进样量（20μL）。⑦打开FLD，同时打开荧光检测器，和光化学衍生器，待准备就绪后点击开始。⑧检测完毕后，打开结果查看峰，有杂峰影响时点击删除杂峰，然后点击校正，删除校正。4、[b]实验数据 [/b]黄曲霉毒素G[sub]2[/sub]在8.1分钟左右出现峰，黄曲霉毒素G[sub]1[/sub]在9.6分钟左右出现峰，黄曲霉毒素B[sub]2[/sub]在11.7分钟左右出现峰，黄曲霉毒素B[sub]1[/sub]在14.3分钟左右出现峰,若在其他时间段出现峰则不属于黄曲霉毒素的峰。四种黄曲霉毒素峰宽在0.3～0.4min，而峰高和峰面积中则是B[sub]2[/sub]较大，G[sub]1[/sub]较小，B[sub]1[/sub]和G[sub]2[/sub]属于居中。回收率=样品峰高/标准品的峰高70％≤回收率≤120％视为未检出黄曲霉毒素。①标准品[table][tr][td][align=center]峰[/align][/td][td][align=center]保留时间/min[/align][/td][td][align=center]峰宽/min[/align][/td][td][align=center]峰面积/LU[/align][/td][td][align=center]峰高/LU[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]8.142[/align][/td][td][align=center]0.3682[/align][/td][td][align=center]2.20190[/align][/td][td][align=center]9.18729e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]9.686[/align][/td][td][align=center]0.3735[/align][/td][td][align=center]1.18640[/align][/td][td][align=center]4.57970e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]11.710[/align][/td][td][align=center]0.4021[/align][/td][td][align=center]5.54293[/align][/td][td][align=center]2.15125e[sup]-1[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]14.376[/align][/td][td][align=center]0.4373[/align][/td][td][align=center]2.67834[/align][/td][td][align=center]9.30720e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][/table]②花生回收1[table][tr][td][align=center]峰[/align][/td][td][align=center]保留时间/min[/align][/td][td][align=center]峰宽/min[/align][/td][td][align=center]峰面积/LU[/align][/td][td][align=center]峰高/LU[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]8.169[/align][/td][td][align=center]0.3323[/align][/td][td][align=center]2.01464[/align][/td][td][align=center]9.31226e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]9.720[/align][/td][td][align=center]0.3330[/align][/td][td][align=center]1.02491[/align][/td][td][align=center]4.53172e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]11.756[/align][/td][td][align=center]0.3750[/align][/td][td][align=center]4.88574[/align][/td][td][align=center]2.03627e[sup]-1[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]14.442[/align][/td][td][align=center]0.4124[/align][/td][td][align=center]2.18995[/align][/td][td][align=center]7.94352e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][/table]③花生回收2[table][tr][td][align=center]峰[/align][/td][td][align=center]保留时间/min[/align][/td][td][align=center]峰宽/min[/align][/td][td][align=center]峰面积/LU[/align][/td][td][align=center]峰高/LU[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]8.178[/align][/td][td][align=center]0.3238[/align][/td][td][align=center]1.76791[/align][/td][td][align=center]8.68845e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]9.727[/align][/td][td][align=center]0.3353[/align][/td][td][align=center]1.05383[/align][/td][td][align=center]4.89711e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]11.764[/align][/td][td][align=center]0.3602[/align][/td][td][align=center]5.12116[/align][/td][td][align=center]2.18196e[sup]-1[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]14.452[/align][/td][td][align=center]0.4125[/align][/td][td][align=center]2.44144[/align][/td][td][align=center]8.91182e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][/table]④结果计算[table][tr][td]样品 [sub] [/sub][sub] [/sub] 峰名称[/td][td][align=center]B1[/align][/td][td][align=center]B2[/align][/td][td][align=center]G1[/align][/td][td][align=center]G2[/align][/td][td][align=center]是否检出[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]花生回收1[/align][/td][td][align=center]85.34%[/align][/td][td][align=center]94.65%[/align][/td][td][align=center]98.95%[/align][/td][td][align=center]101.3%[/align][/td][td][align=center]否[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]花生回收2[/align][/td][td][align=center]95.75%[/align][/td][td][align=center]101.43%[/align][/td][td][align=center]106.93%[/align][/td][td][align=center]94.57%[/align][/td][td][align=center]否[/align][/td][/tr][/table][b]5、结果与讨论[/b] 在此实验中使用高效液相色谱检测黄曲霉毒素一般分为：提取、净化、衍生和测定，但因文中采用了无衍生器法，所以此实验无衍生那一步骤。提取采用了甲醇水溶液和氯化钠固体，净化采用了免疫亲和柱（IAC），测定时流动相为甲醇水45:55，用荧光检测器检测在激发波长为365nm，发射波长为450nm下检测20μL样品。结果表明：在此方法中黄曲霉毒素回收率在70％～120％之间，选用样品中均无黄曲霉毒素。 黄曲霉毒素存在范围极广难以防范，国家对黄曲霉检测制定了相应的标准。但我们在日常生活中不可能将所有所需所用都进行检测，但我们可以通过一些方法在日常生活中进行辨别：如不建议摄入发霉食物，也可以通过在低温、干燥、避免阳光直射的地方存放食物；关注食品的保质期等方式减少食物被黄曲霉毒素污染的风险。

各位大侠，我在用柱前衍生，高效液相做黄曲霉检测时，回收率只有百分之七十多，这样子能接受么？请问有用液相，柱前衍生做黄曲霉的前辈，你们的回收率是多少呀？我是用免疫亲和柱净化后再衍生的，能指点一下检测黄曲霉有那些地方是比较关键的控制点么？帮忙提高一下回收率，谢谢

新买了一台液相色谱仪，发现销售人员提供的相关配件里，用到的是免疫亲和柱，而国家标准里需要的是含有反相离子吸附剂的净化柱，为啥不一样呢？测黄曲霉毒素用的不是最新的国家标准GBT5009.23-2006吗？同行业的是怎么检测的啊？

高效液相色谱方法检测食品中黄曲霉毒素研究进展由于黄曲霉具有极强的毒性和致癌性，大多数国家和地区都规定了食品中的限量要求，这就要求对黄曲霉毒素进行有效的监督，一方面可以保护公众的食品安全和健康，另一方面可以减少食品对外贸易带来的经济损失。高效液相色谱法是一种检测痕量物质常用的方法，检测黄曲霉毒素的一般步骤是用适合的溶剂提取目标物，净化浓缩，C18柱分离后检测器检测，根据检测器的不同，可分为荧光检测法和质谱检测法两类。1提取和净化样品提取溶剂的选择取决于黄曲霉毒素自身的物化性质，一般用到的提取溶剂有甲醇、乙腈的水溶液，尽管早期的方法中经常用到氯仿，但考虑到氯仿对环境的影响，现已基本上被替代；一些新的提取技术，如超临界流体萃取、加压流体萃取（加速流体萃取）被用于黄曲霉毒素的提取，但是超临界流体的提取物常有大量的杂质，而加压流体萃取设备价格昂贵，限制了其广泛使用。样品的提取溶液中常含有共提取物，给黄曲霉毒素的检测带来干扰和基质效应。为了排除基质对分离和检测的干扰，常用的净化手段有液液萃取、固相萃取柱、免疫亲和柱和多功能净化柱。对于含油量大的样品，常需要在提取溶液中加入正己烷用液液萃取法去油；传统固相萃取柱在黄曲霉毒素净化方面的应用较早，填料主要有C18、硅胶、弗洛里硅土、氧化铝等，但由于选择性差，且往往既耗时又浪费溶剂，因此不及免疫亲和柱和多功能净化柱应用广，而微型固相萃取柱的应用便于建立简单快速、成本低廉的前处理方法。Mahoney等采用硅胶柱（30 mg/3 mL）建立了简单可靠的方法来分析检测来自不同植物源的油中黄曲霉毒素，结果表明硅胶柱可以选择性保留植物油中的黄曲霉毒素；Sobolev使用自制氧化铝柱（200 mg/1.5 mL）用于来净化检测主要农产品（玉米粉、棉籽、花生、杏仁、英国胡桃、巴西坚果、阿月浑果）中的黄曲霉毒素，该方法简单快速，成本低廉。由于弗罗里硅土对黄曲霉的吸附能力强，因此用弗罗里硅土柱净化洗脱需要用到大量的丙酮-水溶液；Sobolev对于弗罗里硅土柱（130 mg/1.5 mL）净化的的洗脱条件进行了研究，结果显示丙酮/水/甲酸(96:3.7:0.3, v/v)为洗脱溶剂时的洗脱能力最强，2 mL的洗脱体积即可得到大于98%的回收率；该净化方法用于花生、巴西坚果、玉米、棉籽等样品基质，其中花生基质中B1定量限达到0.05 µg/kg；使用商品化的弗罗里硅土柱可以保证样品检测的重复性，同时可进行实验室间结果比对。免疫亲和柱具有高效和特异性吸附的优点，可同时实现样品的净化和富集，达到比普通固相萃取柱更好的净化效果和更高的信燥比，而且有机试剂使用量少，因此免疫亲和柱越来越多用于黄曲霉毒素等真菌毒素的样品净化。AOAC对免疫亲和柱净化的黄曲霉毒素检测方法进行了协同研究；我国将免疫亲和柱用于黄曲霉毒素检测的国标方法（GB/T 18979-2003）。多种真菌毒素免疫亲和柱的商品化使同时净化分析多种真菌毒素成为可能，如人参和姜中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A的同时净化，谷物中黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮三种真菌毒素的同时净化富集；最新推出的商品化免疫亲和柱可实现黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、伏

作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商之一， 近年来泰乐祺检测应用实验室重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题，以期望快速提出解决方案。针对近期奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题，泰乐祺科技提出以下快速解决方案。1. 仪器1.1 高效液相色谱仪配荧光检测器1.2 震荡器（或高速搅拌器）1.3 高速离心机2. 试剂与试液2.1 色谱甲醇2.2 蒸馏水2.3 乙腈+水（25+75）2.4 石油醚2.5 10%乙腈2.6 氢氧化钠溶液（0.5mol/L）玻璃纤维滤纸（PriboFast免疫亲和柱免费赠送）3. 测定法本法系用高效液相色谱法（GB/T 18980-2003）测定牛奶，奶粉等产品中的黄曲霉毒素M1，除另有规定外，按下列方法测定。3.1色谱条件色谱柱：C18柱，150×4.6mm，5um检测器：荧光检测器；激发波长365nm，发射波长435nm；流动相：乙腈-水（25：75）流 速：1.0ml/min 进样量：20ul柱 温：室温3.2 标准品溶液的配制取黄曲霉毒素M1标准品，用乙腈稀释成0.5ug/ml的标准储备液。根据使用需要，准确吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黄曲霉毒素标准储备液，置5ml的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，配成相当于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液，即得。3.3 样品前处理3.3.1牛奶将100mL牛奶水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.2乳粉和粉状婴幼儿配方食品称取10g奶粉样品，将100mL50℃水多次少量加入，搅拌，使奶粉充分溶解；6000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.3发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)称取60 g混匀的试样，用0.5 mol/L 的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH至7.4；用高速均质器在 9500 转/分钟，高速匀浆5 min水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用3.3.4干酪称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g置于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇；用高速均质器在 9500r/分钟，高速匀浆5 min；超声提取30 min；在6000r/分钟下离心15 min，收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30 mL石油醚，振摇2 min；待分层后，将下层移于50 mL烧杯中，弃去石油醚层。重复用石油醚提取2次；。将下层溶液移到100 mL圆底烧瓶中，减压浓缩至约2 mL；浓缩液倒入离心管中，烧瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗涤，洗涤液一并倒入50 mL离心管中；加水稀释至约50 mL，在6000 转/分钟下离心 5 min，上清液供净化处理。3.3.5奶油称取5g试样，置于50 mL烧杯中；用20 mL石油醚将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中；待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪中减压浓缩至约5 mL，加水稀释至约50mL，供净化处理。3.4 供试品溶液的制备3.4.1 PriboFast® 黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的操作将免疫亲和柱连接于50.0mL玻璃注射器下。准确移取50.0mL净化溶液注入玻璃注射器；将空气压力泵与注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2～3mL空气通过柱体；更换10ml注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min～2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。（建议将乙腈的量分2-4次加入。每次加入后，要让甲醇充分浸泡柱子里的凝胶2分钟。洗脱后的乙腈溶液，最好是水浴30℃加热吹近干。用10%乙腈定容后上液相）3.5 测定精密量取1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液各20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密量取供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素M1的量，计算，即得。1.本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。2.残留有黄曲霉毒素M1的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。

针对近期奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题快速解决方案。1. 仪器1.1 高效液相色谱仪配荧光检测器1.2 震荡器（或高速搅拌器）1.3 高速离心机2. 试剂与试液2.1 色谱甲醇2.2 蒸馏水2.3 乙腈+水（25+75）2.4 石油醚2.5 10%乙腈2.6 氢氧化钠溶液（0.5mol/L）玻璃纤维滤纸（PriboFast免疫亲和柱免费赠送）3. 测定法本法系用高效液相色谱法（GB/T18980-2003）测定牛奶，奶粉等产品中的黄曲霉毒素M1，除另有规定外，按下列方法测定。3.1色谱条件色谱柱：C18柱，150×4.6mm，5um检测器：荧光检测器；激发波长365nm，发射波长435nm；流动相：乙腈-水（25：75）流 速：1.0ml/min 进样量：20ul柱 温：室温3.2 标准品溶液的配制取黄曲霉毒素M1标准品，用乙腈稀释成0.5ug/ml的标准储备液。根据使用需要，准确吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黄曲霉毒素标准储备液，置5ml的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，配成相当于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液，即得。3.3 样品前处理3.3.1牛奶将100mL牛奶水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.2乳粉和粉状婴幼儿配方食品称取10g奶粉样品，将100mL50℃水多次少量加入，搅拌，使奶粉充分溶解；6000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.3发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)称取60 g混匀的试样，用0.5mol/L 的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH至7.4；用高速均质器在 9500 转/分钟，高速匀浆5 min水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用3.3.4干酪称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g置于50 mL离心管中，加2 mL水和30mL甲醇；用高速均质器在 9500r/分钟，高速匀浆5 min；超声提取30 min；在6000r/分钟下离心15 min，收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30 mL石油醚，振摇2 min；待分层后，将下层移于50 mL烧杯中，弃去石油醚层。重复用石油醚提取2次；。将下层溶液移到100 mL圆底烧瓶中，减压浓缩至约2 mL；浓缩液倒入离心管中，烧瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗涤，洗涤液一并倒入50 mL离心管中；加水稀释至约50 mL，在6000 转/分钟下离心 5 min，上清液供净化处理。3.3.5奶油称取5g试样，置于50 mL烧杯中；用20 mL石油醚将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中；待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪中减压浓缩至约5 mL，加水稀释至约50mL，供净化处理。3.4 供试品溶液的制备3.4.1 PriboFast® 黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的操作将免疫亲和柱连接于50.0mL玻璃注射器下。准确移取50.0mL净化溶液注入玻璃注射器；将空气压力泵与注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2～3mL空气通过柱体；更换10ml注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min～2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。（建议将乙腈的量分2-4次加入。每次加入后，要让甲醇充分浸泡柱子里的凝胶2分钟。洗脱后的乙腈溶液，最好是水浴30℃加热吹近干。用10%乙腈定容后上液相）3.5 测定精密量取1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液各20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密量取供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素M1的量，计算，即得。1.本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。2.残留有黄曲霉毒素M1的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。

黄曲霉B1柱后衍生检测，液相出峰时间漂移允许误差是多少？领导要求2.5%以下，我们做的4%左右，可以吗

我用安捷伦1260液相荧光检测器，检测黄曲霉毒素，为什么标准品溶液B1/B2/G1/G2的响应值很低？

检测花生油中的黄曲霉毒素主要有以下方法： [color=initial]一、薄层层析法（TLC）[/color] [list=1][*] 原理 [list][*]利用样品中的黄曲霉毒素在特定的展开剂作用下，在薄层板上展开分离。然后通过显色剂显色，根据黄曲霉毒素在薄层板上显示出的特定斑点的颜色和强度与标准品进行比较，从而确定样品中黄曲霉毒素的含量。[/list][*] 步骤 [list][*]提取：将花生油样品用适当的溶剂（如甲醇、氯仿等）进行提取，以分离出黄曲霉毒素。[*]净化：通过柱层析等方法对提取液进行净化，去除杂质干扰。[*]展开：将净化后的样品溶液点在薄层板上，放入展开槽中，用特定的展开剂进行展开。[*]显色：取出薄层板，喷上显色剂，在一定条件下使黄曲霉毒素显色。[*]定量：通过与标准品斑点的比较，估算样品中黄曲霉毒素的含量。[/list][/list] [color=initial]二、高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法（HPLC）[/color] [list=1][*] 原理 [list][*]利用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]将样品中的黄曲霉毒素分离出来，然后通过检测器检测其含量。HPLC 具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高等优点。[/list][*] 步骤 [list][*]提取和净化：与薄层层析法类似，对花生油样品进行提取和净化处理。[*]色谱分离：将净化后的样品溶液注入高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]，在特定的色谱柱和流动相条件下进行分离。[*]检测：采用荧光检测器或紫外检测器等对分离后的黄曲霉毒素进行检测。[*]定量：根据检测器的响应信号，通过与标准品的比较，确定样品中黄曲霉毒素的含量。[/list][/list] [color=initial]三、酶联免疫吸附法（ELISA）[/color] [list=1][*] 原理 [list][*]基于抗原抗体特异性结合的原理。将黄曲霉毒素的抗体固定在酶标板上，加入花生油样品提取液和酶标记的黄曲霉毒素抗原，样品中的黄曲霉毒素与酶标记抗原竞争结合抗体。通过酶催化底物显色，根据显色强度与标准曲线比较，确定样品中黄曲霉毒素的含量。[/list][*] 步骤 [list][*]样品处理：将花生油样品进行适当的提取和稀释。[*]加样和反应：将处理后的样品、酶标记抗原和抗体加入酶标板中，进行孵育反应。[*]显色：加入底物溶液，酶催化底物显色。[*]测定：用酶标仪测定显色后的吸光度值，根据标准曲线计算样品中黄曲霉毒素的含量。[/list][/list] [color=initial]四、免疫亲和柱 - 荧光光度法[/color] [list=1][*] 原理 [list][*]利用免疫亲和柱特异性吸附黄曲霉毒素，然后用洗脱液将黄曲霉毒素洗脱下来，通过荧光光度计测定其含量。该方法具有特异性强、灵敏度高、准确性好等优点。[/list][*] 步骤 [list][*]样品提取：将花生油样品用适当的溶剂提取黄曲霉毒素。[*]免疫亲和柱净化：将提取液通过免疫亲和柱，黄曲霉毒素被特异性吸附在亲和柱上，其他杂质被洗脱。[*]洗脱：用特定的洗脱液将黄曲霉毒素从亲和柱上洗脱下来。[*]荧光测定：将洗脱液注入荧光光度计，测定黄曲霉毒素的荧光强度，根据标准曲线确定样品中黄曲霉毒素的含量[/list][/list]

苹果中的黄曲霉毒素B1的检测最近因为蒙牛、长富牛奶有检出了黄曲霉毒素M1的事件，造成此事件的主要原由是由于奶牛吃的黄曲霉毒素B1超标的饲料，黄曲霉毒素B1经动物体代谢后便转化为了黄曲霉毒素M1（植源性的食物是B1、动源性的食物是M1哦）。所以我们也再加班做黄曲霉毒素B1，悲催啊。我也顺便将品相较差的苹果拿来检测下其所含有的黄曲霉毒素B1。试剂与仪器Agilient LC-1200、Agilient G1321A荧光检测器、Mycosep 226 净化柱，柱后衍生仪：PICKERING PCX5200、色谱柱：SB-C18（250*4.6mm， 5μm），涡旋混合器、高速离心机、AF B1、B2、G1、G2标准品、乙腈、碘（均为色谱纯）、样品提取液：84% 乙腈水溶液；衍生液：0.1g碘溶于100mL20%乙腈水溶液。品相较差的苹果样品的处理：取20g粉碎后的样品至250mL的三角瓶中，加入80mL84% 乙腈水溶液，涡旋10min，离心分离。取8mL提取液至Mycosep 226 净化柱的试管中净化（控制流速0.5mL/min），取2mL净化液待测。色谱条件：流动相流速：1mL/min；荧光检测器：激发波长：360nm；发射波长：440nm；进样量：10微升，柱温：30度。（梯度洗脱）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112300907_342653_1601435_3.gif衍生温度：将20ng/mL的B1、G1及5ng/mL的B2、G2为测定液，衍生液流速为0。2ml/min，各温度下的衍生结果见图2。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112300909_342654_1601435_3.gifhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112300909_342655_1601435_3.gif

GB5009.24-2010 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素M1和B1的测定GB5413.37-2010 食品安全国家标准 乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定GB/T5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定GB/T5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定GB/T8381-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 半定量薄层色谱法GB/T17480-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法GB/T18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法GB/T23212-2008 牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2的测定 液相色谱-荧光检测法LS/T6108-2014 粮油检验 谷物中黄曲霉毒素B1的快速测定 免疫层析法NYT1286-2007 花生黄曲霉毒B1的测定 高效液相色谱法NY/T1664-2008 牛乳中黄曲霉毒素M1的快速检测　双流向酶联免疫法NY/T2071-2011 饲料中黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的测定液相色谱-串联质谱法NY/T2548-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 时间分辨荧光免疫层析法NY/T2549-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 免疫亲和荧光光度法NY/T2550-2014 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 胶体金法SN/T1664-2005 牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、B1、B2、G1、G2含量的测定SN/T1736-2006 进出口蜂蜜中黄曲霉毒素的检验方法 高效液相色谱法SN/T3136-2012 出口花生、谷类及其制品中黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、伏马毒素B1、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、HT-2毒素的测定SN/T3263-2012 出口食品中黄曲霉毒素残留量的测定

[em0808] 有哪位大虾指点一下？？？求助除了用试剂盒法外，用液相色谱法检测食品中黄曲霉毒素B1的方法！！不胜感激~~~~！

[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#05073b][size=16px]黄曲霉毒素检测仪检测成本高吗，黄曲霉毒素检测仪的检测成本可以从多个角度进行分析。首先，从单次检测成本的角度来看，黄曲霉毒素检测仪的单次检测成本是相对较低的。这是因为黄曲霉毒素检测仪已经在食品检测领域得到了广泛应用，特别是在花生等农作物的检测中，其重要性不言而喻。此外，一些先进的黄曲霉毒素检测仪，如霍尔德电子生产的型号，具有快速、方便、灵敏度较高等特点，并且内置强大的数据库，可以在同一软件下实现所有检测项目的检测，这进一步降低了单次检测的成本。然而，如果从购买和维护设备的角度考虑，黄曲霉毒素检测仪的成本可能会相对较高。购买一台高质量的黄曲霉毒素检测仪需要一定的资金投入，而且为了保持设备的正常运行和准确性，还需要定期维护和校准。此外，如果需要进行更高级别的检测，如使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]方法进行确认，那么还需要投入更多的资金购买和维护相关设备。此外，黄曲霉毒素检测的费用还可能受到地区、机构、检测项目等因素的影响。目前市场上的黄曲霉检测价格大约在200元到1500元之间，具体价格取决于所选择的机构和检测项目。综上所述，黄曲霉毒素检测仪的单次检测成本相对较低，但购买和维护设备的成本可能较高。在选择黄曲霉毒素检测仪时，需要根据自己的实际需求和预算进行综合考虑。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/06/202406040948069346_3131_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size][/color][/font]

液相色谱 荧光检测器做黄曲霉毒素B1为什么衍生时候要用正己烷标准上说：加200μL正已烷和50μL三氟乙酸于上述离心管中，盖紧磨口塞，超声振荡1min，静置10min，打开磨口塞，缓缓通入氮气至干。用乙腈-水溶液（1+1）定容至1.0mL，超声1min，用0.5μm滤膜过滤，滤液供液相色谱。不知道为什么这个步骤要加入正己烷 作用是什么 能不能用其他代替？

高效液相色谱法检测牛奶，奶粉等产品中黄曲霉毒素M11. 仪器高效液相色谱仪配荧光检测器，震荡器（或高速搅拌器），高速离心机2. 试剂与试液色谱甲醇，蒸馏水，乙腈+水（25+75），石油醚，2.5 10%乙腈， 氢氧化钠溶液（0.5mol/L），玻璃纤维滤纸（PriboFast免疫亲和柱免费赠送）3. 测定法本法系用高效液相色谱法（GB/T 18980-2003）测定牛奶，奶粉等产品中的黄曲霉毒素M1，除另有规定外，按下列方法测定。3.1 色谱条件色谱柱：C18柱，150×4.6mm，5um检测器：荧光检测器；激发波长365nm，发射波长435nm；流动相：乙腈-水（25：75）流 速：1.0ml/min 进样量：20ul柱 温：室温3.2 标准品溶液的配制取黄曲霉毒素M1标准品，用乙腈稀释成0.5ug/ml的标准储备液。根据使用需要，准确吸取10μl、20μl、50μl、100μl、200μl的黄曲霉毒素标准储备液，置5ml的容量瓶中，用流动相稀释至刻度，配成相当于1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液，即得。3.3 样品前处理3.3.1牛奶将100mL牛奶水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.2乳粉和粉状婴幼儿配方食品称取10g奶粉样品，将100mL50℃水多次少量加入，搅拌，使奶粉充分溶解；6000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用；3.3.3发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)称取60 g混匀的试样，用0.5 mol/L 的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH至7.4；用高速均质器在 9500 转/分钟，高速匀浆5 min水浴加热至40℃；4000r/min离心15min，收集50mL清澈液待用3.3.4干酪称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g置于50 mL离心管中，加2 mL水和30 mL甲醇；用高速均质器在 9500r/分钟，高速匀浆5 min；超声提取30 min；在6000r/分钟下离心15 min，收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30 mL石油醚，振摇2 min；待分层后，将下层移于50 mL烧杯中，弃去石油醚层。重复用石油醚提取2次；。将下层溶液移到100 mL圆底烧瓶中，减压浓缩至约2 mL；浓缩液倒入离心管中，烧瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗涤，洗涤液一并倒入50 mL离心管中；加水稀释至约50 mL，在6000 转/分钟下离心 5 min，上清液供净化处理。3.3.5奶油称取5g试样，置于50 mL烧杯中；用20 mL石油醚将其溶解并移于250mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇，振荡30 min后，将全部液体移于分液漏斗中；待分层后，将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中，在旋转蒸发仪中减压浓缩至约5 mL，加水稀释至约50mL，供净化处理。3.4 供试品溶液的制备3.4.1 PriboFast® 黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的操作将免疫亲和柱连接于50.0mL玻璃注射器下。准确移取50.0mL净化溶液注入玻璃注射器；将空气压力泵与注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至2～3mL空气通过柱体；更换10ml注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min～2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测用。（建议将乙腈的量分2-4次加入。每次加入后，要让甲醇充分浸泡柱子里的凝胶2分钟。洗脱后的乙腈溶液，最好是水浴30℃加热吹近干。用10%乙腈定容后上液相）3.5 测定精密量取1ng/ml、2g/ml、5ng/ml、10g/ml、20ng/ml的标准工作液各20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。另精密量取供试品溶液20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素M1的量，计算，即得。1.本实验应有相应的安全、防护措施，并不得污染环境。2.残留有黄曲霉毒素M1的废液或废渣的玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有10%氯酸钠溶液）内，浸泡24小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗干净。

最近想用液相做黄曲霉毒素B1，但没配荧光检测器，请问各位大虾们，可以用紫外检测器测定吗？

各位老师好，我最近做奶中的黄曲霉M1的项目，液相荧光的方法 检测，用走标液时仪器一直达不到GB 541337-2010的检出限，用的是光反应衍生系统

中药材黄曲霉毒素检测技术方案一、 中药材质量安全现状 中药材是中医防病治病的重要基础。中药材在田间生长、采收加工、储藏运输等各个环节都会因污染霉菌而发生霉变。这些霉菌分泌的有毒代谢产物使中药材发霉变质，直接威胁到群众的用药安全。中药中的霉菌毒素主要有黄曲霉毒素，赭曲霉毒素，玉米赤霉烯酮，展青毒素，伏马毒素等。中药材的种类是影响真菌毒素污染的主要因素,易污染的中药材,在不同的温、湿度条件下均可产生真菌毒素。温度和湿度条件也可以影响真菌毒素的增长,如：黄曲霉毒素在不同的温、湿度条件下均可以产生；赭曲霉毒素需要在湿度较高的条件下才能产生。 近年来,随着中药材在国际市场上的持续升温,其安全性越来越引起人们的关注。真菌毒素残留作为中药材微量外源性有毒有害物质,一般不表现出急性毒性,但通常有较强的蓄积性,致癌、致畸、致突变作用明显,严重影响中药材的安全性。二、 中药材真菌毒素控制相关国家法规 近年来，各级食品药品监管部门不断加大中药监管力度，努力保持中药质量总体稳定。国家食品药品监督管理局关于规范中药生产经营秩序严厉查处违法违规行为的通知（国食药监安187号文件）中 ，要求加强对黄曲霉毒素、重金属及有害元素、农药残留量等安全性指标的检测和控制，切实保证中药材质量和安全，另要求企业具备与生产品种相适应的检验设备和能力，严把质量检验关。 《国家药品安全“十二五”规划》，规划中明确指出“开展药品快速检验技术研究，搭建检验技术共享平台”、“加快推进药品快速检验技术在基层的应用，配置快速检验设备”，“加强县级机构快速检验能力建设”的要求。三、 中药材真菌毒素检测项目及限量标准 国家食品药品监督管理局对柏子仁、莲子、使君子、槟榔、麦芽、肉豆蔻、决明子、远志、薏苡仁、大枣、地龙、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味药材及其饮片品种项下增加“黄曲霉毒素”检查项目，限度为“黄曲霉毒素B1不得过5 μg/kg；黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B2总量不得过10 μg/kg”。2010 版《药典》附录IX V 黄曲霉毒素测定采用高效液相色谱法，另外增补药典描述该法检测建立增加光化学柱后衍生法。四、 检测方案介绍（一） HPLC仪器分析法 免疫亲和柱-高效液相色谱法：符合2010版《药典》附录IX V中黄曲霉毒素测定高效液相色谱法，另外增补药典描述该法检测建立增加柱后光化学衍生法。1. 设备和耗材配置序号品名规格及参数数量用途1高效液相色谱仪配备荧光检测器一台分析检测2真菌毒素色谱柱150/250mm一支 3黄曲霉毒素总量免疫亲和柱1ml，25支/盒：若干高特异性，纯化样本4KRC光化学柱后衍生反应装置货号：PHRED-KRC-KRC一台适用于黄曲霉毒素检测5高速均质器达到22000rpm以上，一台耐腐蚀，高速6玻璃纤维滤纸100P,110mm，1.5μm一盒霉菌毒素专用过滤7八位泵流操作架货号：EQ-PUMP-8一台用于控制免疫亲和柱过柱流速8黄曲霉毒素混标黄曲霉毒素B1, G1; B2;G2(4/1/4/1),1ml用于定量分析标准品的配制2. 样品前处理:普瑞邦为中药材提供不同的处理方案(详细方案请联系普瑞邦，普瑞邦开发了针对多种中药材基质提供优化的处理方案)3. 免疫亲和柱净化:富集--洗涤--洗脱--收集全部洗脱液供化学衍生检测用。4. 化学衍生为什么使用光化学衍生器？ 由于黄曲霉具有较强的紫外吸收和产生荧光的特性，因此可以进行HPLC-紫外或荧光检测，但是同时黄曲霉毒素中的B1、G1 由于其在含水的流动相中容易产生荧光淬灭，因此在很多的实验中都会采用衍生法测定黄曲霉毒素。衍生的方法也很多：有柱前的，柱后的，在线的，由于在线的柱后光化学衍生有明显的优势，所以现在被增补为药典的检测方法，优势主要在于无需任何化学试剂、对人员无伤害；无需人员直接操作、避免误差; 无需担心衍生液腐蚀检测器。5. 高效液相色谱分析（HPLC）（二）酶联免疫法优点缺点灵敏度高、耗时较短、样本处理比较简单、对技术人员要求不高、检测成本低、可同时检测大批量样本。适用于大量样本快速定量筛查。可能存在一定假阳性率（交叉反应率）。 黄曲霉毒素总量试剂盒具有较高的灵敏度和准确度，适用于大量样本的定量分析。1. 方法原理采用直接竞争酶联免疫法，在微孔板上预包被黄曲霉毒素抗原，加入样本（或黄曲霉毒素标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素特异抗体。样本或标准品溶液中的抗原与预包被在板孔上的抗原竞争结合酶标抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样品吸光值与其所含黄曲霉毒素总量成负相关，与标准曲线比较即可得出样品中黄曲霉毒素总量的含量。2. 设备和试剂配置：序号品名规格及参数数量用途1黄曲霉毒素总量试剂盒96T，灵敏度：0.1ppb货号：EKT-011一盒定量分析检测2离心小柱25T一盒净化样本3酶标仪（酶联免疫检测仪）滤光片：450nm一台测定结果3. 样本前处理：中药材：粉碎、溶解、离心，取上清液加入PriboSpin离心小柱进行净化。 为什么要用PriboSpin离心小柱？中药材的基质复杂，提取时样本液颜色较深，而且不容易去除。有机试剂提取净化方法繁琐，试剂挥发对环境及人体造成危害，且净化效果不稳定。用PriboSpin离心小柱，则只需提取液离心过柱，即可去除提取液中的杂质，方便快捷，净化效果好，且回收率可以达到85%以上。4. 检测步骤免疫反应30min；洗板5次；显色反应30min；终止反应，酶标仪读OD值。5. 分析结果的表述 用酶标仪判读结果。五、 温馨TIPS1. 中药中真菌生长繁殖的有利条件主要是适宜的温度与水分。如能将中药贮存于10℃以下，水分保持在10％以下，就能有效地防霉。2. 从事真菌毒素科研及检测的人员，必须注意防护，如穿戴隔离衣帽，在进行真菌分离培养工作时，应戴口罩，并尽量防止孢子飞扬。3

检测黄曲霉M1的方法一般就是免疫亲和层析净化高效液相色谱法和酶联免疫吸附法（试剂盒）这两种方法。前一种方法主要使用到高效液相，后一种使用的是酶标仪。由于高效液相色谱法费用高试用繁琐，所以现在市场上检测黄曲霉M1主要还是用的后一种方法。除此之外，还有免疫亲和层析净化荧光光度法，与HPLC法不同的是，样品经过免疫亲和柱净化后，直接使用荧光分光光度计测定荧光强度，荧光强度值与黄曲霉毒素M1浓度成正比，这也是国标中的方法。同HPLC法相比操作方便，更加安全，不过仍然有成本较高的问题，还有就是试纸条方法，不过这种方法的准确性还是有待提高。

在当今社会，食品安全越来越受到人们的关注和重视，尤其是在发生三聚氰胺和地沟油等一系列事件之后，人们更加重视食品安全问题。黄曲霉毒素这类真菌在世界不同地区都发现大量存在于食品中，它主要是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一类有毒次生代谢物。目前，已知的黄曲霉毒素及其衍生物有20余种 , 即B1，B2，B2a，G1，G2，G2a，M1，M2等，黄曲霉毒素B1是其中毒性最大的一种，实验结果显示，其毒性是人们熟知的剧毒药氰化钾的10倍，是砒霜的68倍。黄曲霉毒素B1可诱发癌症和皮下肉瘤，并且可使动物的肝、肾、大脑和神经系统等产生病变。自20世纪60年代以来，有关黄曲霉毒素的危害被大量报道，以致黄曲霉毒素已成为最受人们关注的一种真菌毒素。因此，寻求准确、快速、简便、价廉的检测方法，对黄曲霉毒素进行高效的定性定量分析，是黄曲霉毒素研究的一个重要方面。以下对黄曲霉毒素的检测方法研究进展进行评述。【薄层色谱法】1.薄层层析（TLC）法TLC 法是测定黄曲霉毒素的经典方法，在薄层板展开后，在365 nm紫外灯下，黄曲霉毒素B1，B2，G1和G2分别显示紫色、蓝紫色、绿色和绿色荧光。TLC 法的特异性较差，灵敏度相对较差，且测定黄曲霉毒素专一性不够，经常引起测量误差。但由于此法设备简单，易于普及，所以国内外仍在使用。2.高效薄层（HPTLC）法HPTLC 法测定黄曲霉毒素采用目前国际上流行的样品处理方法——固相萃取法（SPE）中针对真菌和病毒的多功能净化（MFC）柱。采用MFC柱净化后，仅用单相展开即可达到分离测定的目的，不仅节省了工作时间，提高了工作效率，而且进一步减少了有毒有害溶剂的用量。Stroka等将免疫亲合柱净化应用于 TLC法测定，进行单相展开并用荧光密度计定量，此方法能检测含量明显低于当前欧盟标准的黄曲霉毒素。Kamimura 等用HPTLC方法测定玉米、花生、荞麦等样品，并与通过公职分析化学家协会（AOAC）认证的分析花生及花生制品中黄曲霉素的官方方法CB（Contamination Branch）法和 BF（Best Foods）法进行比较，4种主要黄曲霉毒素的检测限均不高于0.2μg／kg，回收率与CB法一样均高于BF法。3.高压薄层色谱（OPTLC）法高压薄层色谱于1979年由Tyihak提出，它结合了经典薄层色谱法、高效薄层色谱法与高效液相色谱法的优点，是一种能够提高薄层分离效率的平面液相色谱技术。随着实验技术的不断成熟，OPTLC 法在饲料和食物中黄曲霉毒素的检测方面的应用越来越多。Eszter Papp等发展了一系列适合检测玉米和小麦中黄曲霉毒素的OPTLC方法。【高效液相色谱（HPLC）法】由于具有稳定、准确、灵敏等优点，HPLC法已成为当前进行黄曲霉毒素定量研究的首选方法。分析黄曲霉毒素的液相色谱方法包括正相液相色谱方法（NPLC）和反相液相色谱方法（RPLC）。反相高效液相色谱(RP-HPLC)系统易操作，流动相具有低毒性，可同时分离、分析样品中黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2且不受样品沸点、热稳定性、和分子量限制，所以目前使用荧光检测器的反相HPLC法已经成为检测黄曲霉毒素的主要测定方法。Chiavaro等根据不同环式糊精增强黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1荧光释放的不同效果，发展了将环式糊精加入到流动相中的高效液相色谱法，黄曲霉毒素 B1，B2，G1，G2 的检测限均在0.3μg／kg以下，M1的检测限在0.0005μg／kg以下，几种黄曲霉毒素都呈线性反应关系。这种方法也被用于测定自然污染及人工添加样品。【免疫学方法】黄曲霉毒素的免疫学检测方法是将生物大分子的免疫学特性与化学特性结合起来的检测方法。该方法具有快速、灵敏、对样品纯度要求不高的特点，特别适合于大批量样本的检测。用于检测黄曲霉毒素的免疫学方法有酶联免疫吸附测定法、放射免疫测定法、亲和层析法、荧光偏振免疫测定法及免疫层析法。1.酶联免疫吸附测定(ELISA)法ELISA法是在免疫学和细胞工程学基础上发展出来的一种微量检测技术，分为直接法、间接法、双抗体夹心法和竞争法，其优点是对黄曲霉毒素B1的检测定性定量准确而且检测速度快（比薄层法提高了近 200倍），特异性强，荧光物质、色素、结构类似物对结果无干扰，回收率高，提取方法简单，成本较低，特别适合于对黄曲霉毒素Bl污染监测控制中大量样品的筛查。缺点是ELISA法中酶的活性易受反应条件影响，测定结果重复性较差，测定结果易出现假阳性问题；此外ELISA试剂寿命短，需要低温保存，葡萄酒类、含盐量高的酱油、含脂量高的花生油在提取时要进行调节pH 值、脱盐、脱脂等特殊处理。2.亲和层析法亲和层析法利用免疫化学反应原理，采用大剂量的单克隆抗体，选择性吸附提取液中的抗原物质黄曲霉毒素。由于抗原-抗体反应具有高灵敏、高选择、高特异性等特点，从而大大提高了试样的净化效果及检测灵敏度，同时可显著减少有毒有害试剂的使用，有利于操作人员的身体健康和环境保护。3.放射免疫(RIA)法RIA法与ELISA法基本相似，不同的是它们所使用的标记物不同，ELISA 法的标记物为酶，RIA法所用的标记物一般为放射性元素氚(3H)。该方法是将毒素 -3H标记物与样品加抗体进行竞争性结合，除去未结合的部分，测定其放射性，放射性强则说明样品中毒素含量低，反之毒素含量高。实验证明 ELISA比RIA灵敏度更高且更简便，并且RIA需要特殊设备，有放射性元素污染问题，人员需要安全防护，现在已经很少使用。4.荧光偏振免疫测定法荧光偏振免疫测定法的主要原理是荧光标记的毒素在样品缓冲液中与未荧光标记的毒素对特异性抗体的竞争性结合。分子质量越大，分子旋转速度越慢，荧光偏振值越大。Nasir等报道了用基于荧光偏振的装置检测不同谷物中的黄曲霉毒素。5.免疫层析（IC）法IC法是20世纪80年代初发展起来的一种快速免疫分析技术，其操作简单，快速，人员不用培训，且不需特殊的仪器设备，非常适用于现场测试和进行大量样品的初筛。免疫学与仪器结合方法近年来，随着黄曲霉毒素在食品中的检出标准越来越严格，很多人采取了免疫学与仪器结合的方法来检测黄曲霉毒素，发展了黄曲霉毒素的检测方法。1.免疫亲和柱净化荧光光度法张艺兵等提出了一种以免疫亲和柱净化结合荧光光度法检测黄曲霉毒素的新方法，此法利用抗原抗体——对应的特异吸附特性，以黄曲霉毒素单克隆抗体为填充柱，特异性、选择性地吸附黄曲霉毒素，再以甲醇为流动相将结合的黄曲霉毒素洗脱下来然后通过溴溶液衍生，所得衍生物可发射荧光，再通过荧光光度计分析即可以测定毒素含量。此方法克服了TLC法和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒、有异味的有机溶剂对操作人员造成身体伤害和污染环境的缺点，所需仪器设备轻便易携带，自动化程度高，操作简单，灵敏度可达1μg／kg，回收率在85％以上。一个样品只需10～15 min便能直接读出测试结果，比传统方法快几个小时甚至几天时间。缺点是此法只能测定黄曲霉毒素的总量且对试剂要求比较高，检测中药材黄曲霉毒素的含量时结果会出现一些假阳性。2.免疫亲和柱高效液相色谱法免疫亲和柱（IAC）是将特异性的黄曲霉毒素单克隆抗体与载体蛋白偶联并填柱而成。由于抗原抗体有一一对应的特异性吸附关系，所以IAC能特效性地、高选择性地吸附黄曲霉毒素，而让其它杂质通过柱子，使样品得以纯化，吸附的黄曲霉毒素可以被极性有机溶剂洗脱，再用HPLC法进行定量检测，其优点是具有高度特异性，可除去绝大多数干扰物质，检测限达1ng／g，还具有快速、溶剂使用少、可以自动化和再生利用的特点。缺点是柱成本高，商品化 IAC 仅适合几种毒素，有时需要加预柱净化。3.多功能净化柱高效液相色谱法Wilson和Romer开发了独特的真菌毒素多功能净化(MFC)柱，MFC柱提供一种快速的一步萃取纯化方法，工作原理和操作过程与其它净化柱相反，它含有亲脂性(非极性)和电荷活性成分(极性)，当样品提取液通过柱时，MFC柱保留样品液中的干扰物质如脂肪、蛋白质类化合物和碳水化合物等，而待测组分黄曲霉毒素不被吸附而直接通过，从而一步完成净化过程，除去90％的杂质，减少了传统净化方式淋洗杂质和洗脱待测样品的步骤，从而达到净化目的，这一点是IAC 和普通SPE净化柱所不具备的，并且与IAC相比净化效果同样理想，回收率高，灵敏度高，检测限低。【超光谱（HS）法】一直以来，黄曲霉毒素的检测都用化学方法，并且有些化学方法的检测结果非常准确，但是化学方法都要耗费大量的检测时间，检测费用较高且损坏检测样品，所以研究一种快速、准确、无损样品的检测方法对粮食产业是至关重要的，超光谱法检测黄曲霉毒就是这样一种方法。它的原理是首先通过光源激发待测样品，再通过设备捕捉成像，然后对成像进行特征抽取和特征排列，最后实现区别受黄曲霉毒素污染和未受黄曲霉毒素污染的样品。Haibo Yao等利用超光谱法分析了长波紫外线激发下的玉米粒的光谱BGYF 响应，首先用中心激发波长为365nm的紫外线光照射检测样品，被检测到黄绿色荧光的玉米粒，手动挑选出来，结果显示，在500～515 nm波长范围具有较强的黄绿色荧光发射光谱峰，选取500～515 nm有较强黄绿色荧光的玉米粒作为阳性组，用高效液相色谱法测定，与正常组对比，呈黄绿色荧光成像的黄曲霉毒素浓度的平均水平浓度是5.114μg／g。这个实验证明了玉米只有在感染黄曲霉毒素多的时候才会发出黄绿色荧光

2015版药典中药中黄曲霉毒素的检测有两种方法，不知大家是采用的哪种方法呢？液质？还是液相色谱-光化学衍生+荧光呢？

中国科技网北京11月2日电 据中国农业科学院最新消息，该院油料作物所研究员李培武带领农业部生物毒素检测重点实验室科研团队，成功破解了黄曲霉毒素高灵敏快速准确定量检测的技术难题，研制出黄曲霉毒素系列检测仪器和配套产品，如牛奶等单个样品从取样到结果打印最快9分钟即可完成，用时相当于国外同类产品的一半，检测技术达国际领先水平，同时打破了发达国家的垄断。 黄曲霉毒素是迄今发现的毒性和致癌性最强的真菌毒素。其中，黄曲霉毒素B1的毒性是氰化钾的10倍，是砒霜的68倍，致癌力是标准致癌物二甲基硝胺的75倍。此前，国际通行的黄曲霉毒素检测方法为高效液相色谱法或高效液相色谱质谱联用法，不仅需大型仪器，而且相关设备价格昂贵（每台几十万元甚至几百万元）。由于缺少现场高灵敏准确定量检测技术产品，误食黄曲霉毒素污染超标的农产品或食品时有发生，致使一些地区肝癌发生率偏高。这不仅对百姓健康和生命安全构成威胁，而且严重影响农产品和食品出口贸易。 李培武研究团队成功选育出具有完全自主知识产权的黄曲霉毒素系列杂交瘤细胞株，研制出多个高亲和力抗体，是目前国内外报道的灵敏度最高、特异性最强的黄曲霉毒素通用抗体和分量抗体。在此基础上，该团队还研制出黄曲霉毒素系列配套试纸条、试剂盒、黄曲霉毒素标准品替代物、免疫亲和微柱，开发出黄曲毒素免疫亲和荧光速测仪、黄曲霉毒素单光谱成像速测仪和黄曲霉毒素流动滞后免疫时间分辨荧光速测仪等。不仅实现了小型化，低价位（最贵的在5万元以内），而且检测用时仅相当于国外同类产品的一半，灵敏度达0.003纳克，高于国外同类产品的0.01纳克。目前，这些技术成果和产品已应用于花生、玉米、稻米及食用油、调味品、乳制品和饲料等五大类65种农产品和食品检测。（记者 瞿剑） 《科技日报》（2012-11-03 一版）

为评价中国出口花生企业的黄曲霉毒素检测能力，组织了出口花生企业实验室黄曲霉毒素检测能力验证研究。依据ISO 13528:2005、国际能力验证活动的统一规则(IUPAC)以及CNAS(中国合格评定国家认可委员会)规定的程序，对本次能力验证活动进行了实施和评价。参加实验室采用的方法有高效液相色谱法和荧光光度计法。测试样品采用天然黄曲霉毒素污染的花生酱，采用Ss ≤ 0.3σP 检验法对待测样品进行了均匀性测试，采用两独立样本均数的t 检验法，对样品进行了稳定性测试。采用Z 比分数评定各参加实验室的测试结果。各参加实验室提交结果的Robust 均数作为测试样品黄曲霉毒素含量的指定值xa。依据Horwitz 方程的修正公式σP=0.22c 计算能力验证的标准偏差σ P。在102 个参加实验室中，93 家实验室结果“满意”，6 家实验室结果“可疑”，3 家实验室结果“不满意”。