梯度仪工作原理

紧急求助静电力显微镜中电场梯度成像的工作原理， 组里最近买了一台omicron的真空AFM，除了向扫描表面之外，还想进行电场梯度成像。我的助教在导电的针尖上加了一个偏压（AC bias），想测量电场梯度。我是个新手，接触AFM 才2个月，所以想请教各位，在经过这个改变后，我们的AFM 是不是就可以测电场梯度了，另外，静电力显微镜中电场梯度成像的3个方法中，相检测 (phase detection)、频率调制 (frequency modulation)和振幅检测 (amplitude detection) 的工作原理是怎样的。哪个个方式更合适我们的AFM呢请多多指教咯^__^

有哪位高手可以解释一下，HPLC低压梯度系统的比例阀是如何实现不同比例的流动相组分混合的？

[font=微软雅黑]①梯度洗脱是指在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，达到有效分离的洗脱方式。梯度洗脱一般采用二元流动相，通常为水相和有机相。[/font][font=微软雅黑][color=#666666] [/color][/font][font=微软雅黑]②梯度洗脱时流动相通常由多种不同极性的溶剂组成。梯度洗脱主要原理是通过调整不同时间段流动相的极性来调节各个组分的容量因子K，使得在合适的时间范围内将各个组分的保留合理分配，最终实现最佳分离。[/font]

对四元比例阀的工作原理仍不是很理解，目前我知的原理是比例阀通过调节阀门的开关时间不同实现进入混合池的不同组分体积来达到不同配比，这里有一个周期和开关工作模式的问题，以AB双通道为例A:B=3:1，假设每一次混合周期为1秒，那是不是先A通道电磁阀打开0.75秒再B通道电磁阀打开0.25秒或者顺序反之？

请问梯度场是怎样产生；梯度场在核磁检测中的作用？

各位老师，请问固相ph梯度怎么形成的，丙烯酰胺衍生物怎么和丙烯酰胺结合形成的一个近线性ph梯度

工作中需要建立工作曲线，样品元素含量的梯度如何选择？假如我要建立Ge元素的工作曲线，产品样品Ge含量为1.0%，那该曲线所需要制备Ge含量的样品，需要哪几个梯度的含量才能建立一条比较稳定工作曲线？

低压梯度比高压成本低很多，即使加上在线脱气装置，成本还是低，既然这样为什么又有人去买高压梯度洗脱呢？高压梯度应该有其特点，不知道在应用上与低压有什么不同，原理大家都懂。

梯度洗脱是HPLC非常重要的一种分离手段，是解决单组份和多组分难分离的较为有效的方法。然而，如果对梯度洗脱不了解，不清楚其原理、不了解溶剂混合效应等，设计出来的梯度洗脱都很难得到满意的结果。 本贴透过仪器网高效而强大的搜索引擎http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09502.gif，通过自我卓越的大脑逻辑算法，分别列出了我们威武的液相版面中，关于梯度洗脱话题的讨论和分享，以期对关注液相版面的童靴们有所帮助。一，梯度洗脱的了解和其与等度洗脱的暧昧关系1.关于梯度洗脱 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20061018/593197/2. 等度梯度你会选择谁http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20121222/4452632/（此贴是本版版主houjjun老师的大作，参加了第5届原创大赛）3.什么时候选择梯度洗脱 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20070208/741100/二，高压梯度和低压梯度的认识1. 两元高压梯度和四元低压梯度（带在线脱气）系统优劣的比较http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20090329/1809101/2. 高压梯度和低压梯度http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20060218/343172/（此贴为远古神器，历史久远也）3. 关于高效液相梯度泵的两个疑问http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20121105/4343385/（追根溯源，探寻真想）三，梯度洗脱设计范例1. 梯度洗脱问题http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120131/3838800/（先来一个大问题，小解答）2.梯度洗脱设置问题 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101021/2876147/（问题很详细，解答较充分。液相版面的各位老师很给力！）3.梯度洗脱之前有什么准备工作吗？ http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20091210/2261403/（很简单，但也很实在）4.液相做梯度洗脱，基线偏移问题 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20080922/1498240/四，梯度洗脱注意事项1. http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20121119/4373554/（版面征集梯度洗脱需要注意的地方）2.对于梯度洗脱的一点总结 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20080504/1247956/3. 梯度洗脱时应该注意的一些问题 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20060412/391357/http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif以上是我从坛子里搜寻的帖子，如果有不当的地方，请各位版友拍砖，如果有更好的但遗漏的，请贴上来，版主大人是不吝加分的哦。

公司高效液相升级，要做梯度洗脱，我想请问一下浙大的N3000工作站可不可以做梯度洗脱。就是说这个工作站能不能控制泵，也就是控制流速。各位高手帮帮忙，小弟不胜感激！！！！！

现在很多二维谱图使用梯度场，如gCOSY,gHSQC等，梯度场对最后谱图的效果有什么作用，改善的原理是什么，不是很了解：（

那位朋友能说说梯度洗脱的原理？

刚入门不久，正从基本知识开始看，在梯度洗脱这里看不懂了，知道梯度洗脱的大概含义，和气象中的程序升温原理一样。但是我想知道是每次检测都需要梯度洗脱呢？还是隔多长时间一次呢？我看资料说，梯度洗脱后一定要对色谱柱进行再生处理，这是为什么呢？ps：我看了论坛里好多梯度洗脱的内容，但还是一头雾水，希望能人给我一点指示。万分感谢！！！！

0即样品顺离心力方向沉降σ〈 S时 V〈 0即样品逆离心力方向上浮σ=S时 V=0即样品停止沉降或上浮，"稳定"在这一位置用这个公式可以很好地解释在速率一区带离心法或等密度离心法中单一样品的沉降（或上浮）行为。二、 转头的选择：1、离心转头分类：转头类别 使用的离心机 发明时间、发明者或推广商固定角式转头 低、高、超速 1943年，（英）Pickels甩平转头 低、高、超速 1951年，（德）Kahler垂直管转头 高、超速 1974-1975年，（美）Dupont公司区带转头 低、高、超速 1964-1965年，（英）Anderson、（英）MSE公司近垂直管转头 超速 1989年，（日）Hitachi Koki、（美）Beckman公司连续离心转头 低、高、超速 1965年，（英）MSE公司其他特种转头：分析转头，土壤脱水转头，细胞浮选转头，管式转头，血球比测定转头，细胞清洗转头等等。2、 各种转头用于密度梯度离心的比较：（I） 各种转头用于速率一区带（R-z）离心的优缺点分析：固定角式转头：壁部放应影响很大，用于R-z离心回、收率低，纯度也受影响一般知用于差分离心和等密度离心，离心时间向较短。是各其离心机的最高速转头。甩平转头：细长离心管用于R-z离心可以获得较高纯度和高分辨率，且容易控制离心时间，壁部入在很少。25000rpm~30000rpm的甩平转头最适用于亚细胞器的离心分离，而40000~42000rpm的甩平转头适合用于核酸、蛋白、病毒草类物质内流的分离。离心时间较长。垂直管转头：沉降距离最短，因而离心分离时间也是短。最大半径前几乎没有壁部放位，最大本径后右一定壁部效位，垂直剖面积较大，因而离心后纯样品区带的容量也较大。但在有沉殿的密度梯度离心中，沉淀和浮动区带方向转换之间存在干扰，可能影响纯样品区带的纯度。大部份R-z离心没有沉殿，垂直管转头很适合做R-z离心。近垂直管转头：管轴线与旋转主轴之间倾角7度~9度（角式转头20度~45度）沉降距离比垂直转头稍大，离心时间比角式，甩平转头都要短。由于右了倾角，沉殿可沿管壁滑向低部，因此基本上清除了沉殿与浮动区带转换之间的干扰，适合做R-z离心，特别适合做生物大分子（如质粒DNA）的自形成梯度等密度离心。区带转头：没有壁部入应特别适合做大容量的病毒，亚细胞器，生物大分子的R-z离心，可用于研究，中试和少批量生产。分离纯度高，量大，但操作要求高，转头及整体价格昂贵。连续流离心转头：工作原理的区带转头相似，可连续工作，分离量大，分离统纯度高，可用于各种生物体的差分，R-z等密度离心。近年来高速连续流转头常用于大量发酵液（大肠样菌、酝母菌）菌体的沉殿。（II） 各种转头用于等密度离心内优缺点分析：固定角式转头：主要用于差分离心的角式转头，在速离心机上可以很好地用于等密度离心，尤其是DNA平衡等密度离心，自形成梯度，用快速密封管或厚壁管，常用的单管的容量为10~15ml,常用转速40000~60000rpm，离心时间较短，分离纯度也较高。甩平转头：用作等密度离心时，壁部效应对分离效果影响较少，梯度变换在甩平时自然过渡因而很适合做等密度离心实验，优点是回收率高，分辨能力强。缺点是沉降距离长，最高转速较低（由于结构层固此类转头最主转速一般在60000rpm以下）因而，离心时间很长，对某些长离心管，10~15ml容量的转头最高转速在40000~41000rpm，用作自形成CSCL梯度的质粒DNA离心往往需要50~70小时。垂直管转头：适合作等密度离心，沉降距离最短，在没有沉殿或沉殿非常坚实的情况下，对于现代可自由选择加速、减速时间的离心机，梯度转换得很好。这类转头转进很高（目前最高转速可达100000rpm，70000xg）离心时间最短，分离纯度高，样品容量较大（垂直剖面积最大）。近垂直转头：九十年代以后开始使用的新型转头，用作生物大分子（DNA，RNA，蛋白质等）的平衡等密度离心最佳，目前这类转头的最高转速已达90000rpm近650000xg），离心时间相比垂直转头稍长。区带转头：非常适合做大容量样品的等密度离心。连续流离心转头：高、低速连续流转头一般不用作密度梯度离心超速连续流转头适合做大容量样品的等密度

目前在做一个化合物，等度方法，用的离子对试剂，有机相是乙腈，水相：乙腈=55:45时主峰的保留时间为22分钟，比例为50:50时主峰保留时间为15分钟，比例为45:55时主峰保留时间为10分钟，请问我的梯度该怎么设置，使主峰的保留时间大概在15分钟啊，请高手指点，万分感谢！！

很少用到梯度洗脱，请教个问题，可能没有实际意义只是有点想不明白自动进样，如果样品运行时间和梯度设置的周期不一样的话，比如运行时间10min，而一个周期设了20Min,那么仪器是如何工作的呢，是梯度走一半继续下一针呢，还是进下一针时还在运行上一个余下的梯度呢，相反恩如何运行时间长而周期设短了呢，还有最后一个指令结束后是一直按照最后的条件走吗

我们实验室的液相是四元梯压梯度系统，一般A通道是甲醇通道，B是水通道，C是乙腈通道，D是盐溶液通道。我要用CD两个通道测氨基酸含量，需要进行梯度洗脱，但是在工作站中梯度设置有个高压梯度和低压梯度设置，高压梯度设置里只有AB两个通道的设置（包括流速设置），低压梯度设置里有四个通道的设置，但没有流速的设置，我该如何进行设置，还有就是高压和低压梯度的区别是什么？请问哪位前辈有经验，能不能指导一下，感激不尽！

戴安的自动淋洗液发生器只能对部分淋洗液实现梯度洗脱，想知道它的工作原理是怎样的？

大家在做液质方法开发时，对LC梯度设置有什么见解？比如： A（H2O） B（ACN）0.01min 90 100.6min 90 10 1.6min 10 902.0min 10 902.1min 90 102.5min 90 10对这个梯度，你一般会选择哪一段时间作为化合物的出峰时间？讨论：1.认为出峰时间适合优化在，0.6-1.6min，梯度洗脱增强，峰型好；2.认为出峰时间适合在1.6-2.0min，高有机相，雾化好，响应高，精密度好。大家都是怎么考虑的？或者有经验的给点原理性解释？

威玛龙色谱工作站里的梯度表“洗脱曲线”栏的内容意义是什么？

请教 高压梯度和低压梯度应用场合有什么不同？ 具体地说，某一项分析如果采用高压梯度，是不是一定也可以采用低压梯度呢？ 或者仅仅是经济条件方面不同呢？双泵的高压梯度和低压梯度仪器配置，资金相差大约有多少？

[b][font=宋体]问题描述：等度条件下目标物质与杂质组分不能分开，如何设置梯度洗脱程序进行分离？[/font][font=宋体]解答：[/font][/b][font=宋体]在摸索梯度分离条件时，可以先尝试用等度的方式实现目标物与杂质的分离，然后再优化梯度洗脱程序，在保证分离度的情况下，缩短分析时间。[/font][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）[/font][font=宋体]梯度洗脱是指在同一个分析周期内，按照一定程度不断改变流动相浓度比例，使性质差异较大的组分依据各自的容量因子不同，实现目标物质的分离与测定，在液相色谱中对组分复杂的样品多采用梯度洗脱的方法。[/font][align=left][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）是否能够通过梯度洗脱实现分离，不仅与待测物质的性质有关，还与仪器的性能有关，需要仪器支持多元流动相通道。[/font][/align][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）在设置梯度洗脱程序时，不仅可以改变流动相浓度比例，还可以通过改变流速、梯度曲线等方式实现目标物的分离。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进：[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

最近想用二元梯度做一个产品的分析，手头有岛津LC-10A（A泵）,及LC-10AVP,和原装的岛津工作站，后配上了一台岛津LC-10AS的泵（B泵），和一个三通（以后再买梯度混合器），我在A泵设置了梯度控制，B泵上的流量由A泵控制，但感觉与设定的有较大的出入，请指教！

本人新手，想做梯度洗脱，之前应该按常规方法脱气，平衡柱子，调整到需要的流速，然后是否直接进样开始梯度，还是做次空白梯度？怎样准备才能使梯度所带来的不利影响最小

二元高压梯度（双泵+在线混合器）与四元低压梯度（单泵+低压梯度阀+脱气机+混合器），对于上面两个配置，现在哪个实用性更好？哪个洗脱效果更好？一般首选哪个配置？ 顺便弱弱的问一下，如果我选二元高压梯度，对于像甲醇：水：冰醋酸（48：52：1）这种三种溶剂甚至四种的流动相该怎么去弄呢？它总共才二个溶剂通道吧。。。。

问题: 亲们，打开工作站，泵那只有等度洗脱，没有梯度选项怎么办？ 以前所有的方法不管是梯度还是等度，现在调出来都是等度， 现在不知道为什么只显示一个泵回复: 直接输入你的梯度洗脱程序就可以了[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709080804_01_3114888_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709080806_01_3114888_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709080807_01_3114888_3.jpg[/img]