大肠菌群的检测

大肠菌群(Coliform bacteria)是指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中是否有污染肠道致病菌的可能。大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界中广泛存在。大肠菌群作为作为食品微生物的主要检测指标之一，食品企业最常检测的微生物项目，我们都知道目前大肠菌群检测的方法包括：GB 4789.3-2003 和GB4789.3-2016，那在日常检测中细心的小伙伴们可能会发现，报告单位有时是MPN/g(mL)，有时又是MPN/100g(mL)，这两个单位是什么意思呢？能够简简单单的认为两者相差100倍吗？答案当然是NO。针对这个问题，今天我们就仔细地分析探讨一下，一次性解决大肠菌群MPN法报告的问题。一、检测方法大肠菌群检测的关键在于方法的选用，食品中大肠菌群检测有两种表示方法，其一是以100mL(g)检样内大肠菌群最大可能数(MPN)表示，检测方法需使用GB/T 4789.3-2003《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》；其二以每g(mL)样品中大肠菌群的MPN值表示，检测方法需使用GB 4789.3-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》。二、报告单位溯源首先看看这两个单位的来源。2003年8月，国家卫生部和标准化管理委员会联合发布了《GB/T 4789.3-2003 食品微生物学检验 大肠菌群测定》，来替代1994版国标。这版国标的检测只有一种MPN法，但是却是大肠菌群检测的经典国标。在2016年12月，国家卫生部发布了《GB 4789.3-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》，这次标准标准代替了GB 4789.3-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》、GB/T 4789.32-2002《食品卫生微生物学检验 大肠菌群的快速检测》和SN/T 0169-2010《进出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检测方法》大肠菌群计数部分。2016版国标相对2010版来讲内容更充实，不仅增加了检验原理，还对标准的适用范围、典型菌落的形态的描述以及第二法平板菌落数的选择、证实试验计数、平板计数的报告等进行了修改。但是2016版国标正式实施的同时，国家有关部门也并没有废除2003版国标，因此在接下来的时间里，2003版和2016版国标还将继续并存。三、两个国标报告单位区别下面我们先看看这两个版本的MPN法有什么区别：由以上表格可以看出，2016版国标与2003版国标在MPN法检测上还是有很大的区别的：首先是培养基，2016版国标使用的是LST肉汤培养基，由于LST培养基中含有月桂基硫酸盐，有一定的抑菌作用，同时对大肠菌群会有一定的修复作用，同时相对于乳糖胆盐培养基，没有了胆盐沉淀的影响，更利于现象的观察，所以2016版国标里没有对阳性发酵管进行分离培养和革兰氏染色等验证试验。其次，阳性发酵管进行的验证试验也不相同，2003版国标明显比2016版国标要复杂的多，操作更为繁琐，验证步骤更多。最后，当然也是最令检测人员头疼的问题就是报告单位，也是我们最容易忽视的问题。四、小结弄清楚两个版本的国标的区别，关于报告格式的问题也就不太纠结了。假如你使用的检测方法用是2003版国标，那么结果报告的单位就应该是MPN/100g(mL)，假如你使用的是2016版国标，那你的结果报告单位就应该是MPN/g(mL)。举个例子说，如果MPN法的阳性管数为320，假如用的是2003版国标，则报告结果为930MPN/100g(mL)；假如用的是2016版国标，则报告结果为93MPN/g(mL)。但是同一个样品若是同时使用两种检测方法进行检测，检测结果并不会特别一致，通常情况下，2016版国标检测样品的检测结果偏高。相反的，产品标准也会提示或者要求我们合理选择检测方法：假如某一产品大肠菌群的标准为30 MPN/100g(mL)，那你肯定应该选择2003版国标的检测方法；若是产品标准为3 MPN/g(mL)，那就只能选择2016版的国标了。总之，在确定了产品标准的情况下，不存在一个产品既可以选用2003，又可以选用2016版的情况。单位MPN/100g与单位MPN/g，之间是没有转换关系的！

日前，卫生部发布2009年第16号公告，进一步规范食品中大肠菌群指标的检测工作。公告要求：现行食品标准中规定的大肠菌群指标以“MPN/100克或MPN/100毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》(GB/T4789.3-2003)进行检测 以“MPN/克或MPN/毫升”、“CFU/克或CFU/毫升”为单位的，适用《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》(GB/T4789.3-2008)进行检测。 　　中华人民共和国卫生部2009年第16号公告，引出了大家对现行检测标准制定的一些疑问，现就大家在实际检测过程中可能遇到的、关心的一些问题做几点解释说明： 　　1、大家所关心的现行标准的修订，那是肯定的，08前所有版本，都将要再次修改。一是因为现行标准菌落总数结果计数公式注解中明显出错，二是因为食品安全法的颁布，势必要对现行颁发标准做标题性更改，因原来的为食品卫生法，所以冠头的都以食品卫生标准，即将更改的，将是以食品安全标准为标题。 　　2、从科学的角度出发，在新的限量标准下发前，必须在有新检测标准方法执行过后，对产品做出全面的风险分析，才能得出科学的结论，制定新的产品限量标准。而这个风险分析，需要有完整的程序，过程比较漫长，不是一朝一夕就能完成的。 　　3、大肠菌群新标准的科学性，是不容大家置疑的。在新版限量标准未颁发前，新旧标准查索表互相换算，已得到权威人士鉴定相关部门允可，是可行的。 　　4、现行大肠菌群方法，LST培养基包涵了对大肠菌群两部份的培养：一部分是(即和旧版方法一样的)是未受损的大肠菌群(24小时培养)，另一部分是受损大肠菌群的培养(48小时培养)，所以，现在的培养结果，较之旧版标准检测方法培养涵盖范围更广，所以部分产品检测值普遍偏高。 　　5、卫生部16号公告，正是基于以上原因，由卫生部牵头，召集各标准起草人共同商订的，是在新旧标准过渡期的一个权宜之计。

p 　　2月1日，国家生态环境部办公厅印发了《关于做好新型冠状病毒感染的肺炎疫情医疗污水和城镇污水监管工作的通知》，指出要进一步加强医疗污水和城镇污水监管工作， strong 防止新型冠状病毒通过污水传播扩散。 /strong /p p 　　《通知》明确要求，地方生态环境部门要督促医院和城镇污水处理厂切实加强消毒工作，确保 strong 出水粪大肠菌群数指标 /strong 达到《医疗机构水污染物排放标准》(GB 18466-2005)和《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB 18918-2002)的要求。 /p p 　　目前粪大肠菌群的检测方法包括多管发酵法、滤膜法、快速检测法(纸片法)、酶底物法、分子生物学，其中环保标准的方法包括HJ 347.1-2018水质 粪大肠菌群的测定 滤膜法、HJ 347.2-2018 水质 粪大肠菌群的测定 多管发酵法、HJ 1001-2018 水质 总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定 酶底物法。而所有这些方法均为实验室方法。 /p p 　　山东省生态环境厅近日发布了《 a href=" https://www.instrument.com.cn/download/shtml/948243.shtml" target=" _blank" DB37/T3787-2019水质 粪大肠菌群测定 光度法 /a 》，规定了测定 strong 水中粪大肠菌群的分光光度法和荧光法 /strong ， strong 适用于地表水、生活污水和工业废水中粪大肠菌群的应急现场快速测定 /strong 。 /p p 　　标准全文如下： /p p style=" text-align: center" img style=" width: 600px height: 819px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/01a0fee4-29b5-4242-bc88-376975fe85f4.jpg" title=" 11.jpg" alt=" 11.jpg" width=" 600" vspace=" 0" height=" 819" border=" 0" / /p p style=" text-align: center" img style=" width: 600px height: 292px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/8dff5740-e56f-45d0-89ff-41e56d06a0e5.jpg" title=" 22.jpg" alt=" 22.jpg" width=" 600" vspace=" 0" height=" 292" border=" 0" / /p p style=" text-align: center" img style=" width: 600px height: 269px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/b155f093-9136-4e93-b7e4-26ccb1ea1f6b.jpg" title=" 33.jpg" alt=" 33.jpg" width=" 600" vspace=" 0" height=" 269" border=" 0" / /p p style=" text-align: center" img style=" width: 600px height: 779px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/9e6c8f16-617e-43f6-89c2-056702f2840f.jpg" title=" 44.jpg" alt=" 44.jpg" width=" 600" vspace=" 0" height=" 779" border=" 0" / /p p style=" text-align: center" img style=" width: 600px height: 754px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/98ae507b-c43b-4ae3-8d6f-24478b9fde2a.jpg" title=" 55.jpg" alt=" 55.jpg" width=" 600" vspace=" 0" height=" 754" border=" 0" / /p p style=" text-align: center" img style=" width: 600px height: 758px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/08e71d55-ec40-4576-85b5-1c9592b08164.jpg" title=" 66.jpg" alt=" 66.jpg" width=" 600" vspace=" 0" height=" 758" border=" 0" / /p p style=" text-align: center" img style=" width: 600px height: 747px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/64abab04-f333-4dc6-a272-a8e5a300f461.jpg" title=" 77.jpg" alt=" 77.jpg" width=" 600" vspace=" 0" height=" 747" border=" 0" / /p p style=" text-align: center" img style=" width: 600px height: 754px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/180667ac-77aa-4a69-af32-204eb067aa5d.jpg" title=" 88.jpg" alt=" 88.jpg" width=" 600" vspace=" 0" height=" 754" border=" 0" / /p p img style=" width: 600px height: 800px " src=" https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/9fb79fd0-fa42-4d32-bd70-877d1c0ac64e.jpg" title=" 99.jpg" alt=" 99.jpg" width=" 600" vspace=" 0" height=" 800" border=" 0" / br/ /p p 附件： a href=" https://www.instrument.com.cn/download/shtml/948243.shtml" target=" _blank" DB37/T3787-2019水质 粪大肠菌群测定 光度法 /a /p