富铬酵母铬检测

富硒酵母硒的检测方法资料，求购富硒酵母菌种2000mg/kg，请联系smhuang@hfuu.edu.cn；13083063039

生产过程中，酵母浓度的控制是产品质量的一个关键因素，为了控制酵母浓度，最好的方式就是在线快速测定。目前国内外有哪些公司生产或代理酵母在线活性检测仪，就是那种生产发酵过程中能在线快速准确测定酵母活细胞数的仪器。在网上查了一下美国Aber公司有酵母监测仪，法国FOGALE公司有活细胞浓度在线检测议，请问各位有用过吗？哪家好用一些呢？

吐司生产中配料添加了酵母 那我出厂检验微生物的判定标准还是按GB7099执行吗 这样的话老是检测不合格，是不是要去除酵母的数量再计数？求各位大神指导一下，谢谢！

各位，在我测试酵母酸度时，按照20886标准检测，可得出的结果达到80-90ml/100G,标准看上去简单，可操作起来，终点观测起来根本就不明显，请大家帮帮我？为什么呢？酵母暴露在空气中变化很快么？

在看到Q B/T4572-2013中的酵母葡聚糖的含量检测中，用到的杜氏瓶是什么样子的，有图片的能发一张图吗？

空气污染特别是PM2.5是当前人类面临的重要的环境问题之一。北京大学课题组研究人员近期在此问题上取得跨学科进展，首次以荧光标记酵母菌的微流控装置取代现有方法中的半导体传感器，实现了对PM2.5多方面毒性的实时在线监测。据了解，目前对于大气颗粒物的毒性研究，大多采用离线的方式，不能及时知晓其毒性；而细胞染毒或动物暴露实验灵敏度偏低，一些健康效应不易检测到。在颗粒物致病机理方面，目前也存在类似“盲人摸象”的现象，不能够全方面地了解PM2.5的毒性机理。受酵母菌相关研究的启发，由北大环境科学与工程学院研究员要茂盛、物理学院副教授罗春雄领导的研究团队，集成利用空气采样、微流控、荧光蛋白标记的酵母菌以及单酵母菌蛋白荧光自动检测平台，用活体酵母菌替代传统半导体传感器，创建了大气PM2.5毒性实时在线监测系统。要茂盛介绍，课题组先将PM2.5颗粒物采集到液体中，再将样品实时输送至放有酵母菌的微流控芯片里。由于酵母菌会对来自颗粒物的刺激发生反应，通过用不同荧光蛋白标记酵母菌的所有基因，就可实时看到酵母菌的哪些基因对颗粒物的刺激发生了响应，就好像可“实时监测不同地区车辆行驶状况”。据悉，这种酵母菌俗称酿酒酵母，繁殖快，其基因序列于1996年测序完成，是第一个完成基因测序的真核生物，被广泛地应用在人类疾病研究中。研究人员认为，这种方法对于颗粒物对人体健康效应机制的研究提供了开创性的研究思路和方法，可从分子水平理解PM2.5对人体的可能损伤情况。目前，此项研究成果已申请国家发明专利。课题组正在利用该体系对不同国家、地区颗粒物的毒性进行研究，同时也在筛查更多有响应的酵母菌蛋白，并研究其灵敏度、响应的毒性标定，以进一步揭示PM2.5对人体的具体致病毒性机制。

[color=#444444]食品微生物检测中霉菌和酵母菌的检测方法有什么区别，如果我两种菌都检验，可以放在一个培养箱里吗？[/color]

我们饲料厂有时候还让做液体饲料如酵母糖蜜里金属元素铜的检测，你们各位觉得酵母糖蜜的前处理方法跟常规饲料有啥区别没啊，难道也是先电炉炭化，马弗炉灰化，然后加水润湿，加酸溶解，浓缩赶酸，然后转移定容过滤，上AAS测定吗？液体饲料会不会有别的处理方法呀？

水中酵母菌和乳酸菌的如何检测？有没有什么标准方法？

啤酒酵母细胞总数检测过程需要加热吗？加热的温度是多少，加热的时间是多少？搅拌时间是多少？

细菌总数和霉菌，酵母菌有什么关系？最近我们检测了一个巧克力样品，检测结果细菌总数15cfu/g,霉菌和酵母据150个/g，这样的检测结果有问题吗？有人提出疑问，细菌总数那么小，为什么霉菌和酵母菌那么大？

食品中霉菌酵母菌的检测依据国标4789.15有两种培养基，用孟加拉红好还是马铃薯-葡萄糖培养基好？有什么区别？[img]http://img.foodmate.net/bbs/static/image/smiley/default/sweat.gif[/img]

我们测定固体样品中霉菌和酵母菌，刚开始使用“马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）”进行测定，由于样品是灰色粉末状，培养了三天后看不出长菌迹象。 同时采用“霉菌酵母菌显色培养基”进行了检测，不到两天就长出蓝绿色圆点，根据说明书说是酵母菌，我又将PDA培养基覆盖到蓝绿色菌的平皿中培养了24小时，长出很多菌，请帮忙分析一下是什么菌？为什么同一样品采用PDA和“显色培养基”进行检测，一个可以检测出霉菌，而另一个检测不出来，很头痛，也不知道怎么判定，求助！

[color=initial]一、菌种选育[/color] [list=1][*] 传统选育方法 [list][*]从自然界中筛选优良菌株：可以从不同的啤酒生产环境、土壤、水果等来源中采集酵母样本，通过分离、纯化和筛选，找到具有优良发酵性能和风味特征的酵母菌株。例如，从传统的啤酒酿造地区采集土壤样本，从中分离出可能适合啤酒发酵的酵母菌株。[*]诱变育种：利用物理（如紫外线、X 射线等）或化学（如亚硝基胍、硫酸二乙酯等）诱变剂对现有酵母菌株进行处理，使其发生基因突变，然后筛选出具有优良性状的突变株。例如，用紫外线照射酵母菌株，使其发生基因突变，然后通过发酵实验筛选出发酵速度快、产酒精能力强的突变株。[/list][*] 现代生物技术选育方法 [list][*]基因工程技术：通过基因克隆、表达和调控等手段，对酵母菌株进行改良。例如，可以将具有优良发酵性能的基因导入到酵母菌株中，使其获得更好的发酵能力和风味特征。或者通过基因编辑技术，对酵母菌株的特定基因进行修饰，以改善其性能。[*]高通量筛选技术：利用自动化设备和先进的检测技术，对大量的酵母菌株进行快速筛选。例如，使用微流控芯片技术，可以同时对数千个酵母菌株进行发酵实验和分析，大大提高了筛选效率。[/list][/list] [color=initial]二、优化发酵工艺[/color] [list=1][*] 控制发酵条件 [list][*]温度控制：根据不同的酵母菌株和啤酒类型，确定最佳的发酵温度。一般来说，低温发酵可以产生更多的风味物质，而高温发酵则可以加快发酵速度。例如，对于淡色啤酒，可以采用较低的发酵温度（8-12℃），以获得清爽的口感和丰富的风味；而对于深色啤酒，可以采用较高的发酵温度（15-20℃），以促进麦芽的焦香和酵母的代谢。[*]压力控制：适当的压力可以促进酵母的发酵活动，提高啤酒的质量。例如，在发酵过程中，可以通过控制发酵罐的压力，使酵母在一定的压力下进行发酵，从而提高发酵效率和啤酒的风味。[*]pH 值控制：保持适宜的 pH 值对于酵母的生长和发酵至关重要。一般来说，啤酒发酵的 pH 值在 4.0-5.5 之间。可以通过调整麦汁的 pH 值、添加缓冲剂等方法，控制发酵过程中的 pH 值。[/list][*] 优化麦汁成分 [list][*]调整麦汁浓度：根据不同的啤酒类型和酵母菌株，确定最佳的麦汁浓度。一般来说，高浓度的麦汁可以产生更多的酒精和风味物质，但也会增加酵母的代谢负担。例如，对于高浓度啤酒，可以采用较高的麦汁浓度（12-16°P），以获得浓郁的口感和香气；而对于低浓度啤酒，可以采用较低的麦汁浓度（8-10°P），以获得清爽的口感。[*]优化麦汁营养成分：确保麦汁中含有足够的碳源、氮源、维生素和矿物质等营养物质，以满足酵母的生长和发酵需求。例如，可以添加适量的麦芽提取物、酵母营养盐等，提高麦汁的营养价值。同时，要避免麦汁中含有过多的不良成分，如脂肪酸、醛类、酮类等，这些成分会影响酵母的代谢，导致酵母产生异味。[/list][*] 合理的酵母接种量和接种时间 [list][*]确定最佳的酵母接种量：酵母接种量过大或过小都会影响发酵效果和啤酒质量。一般来说，酵母接种量在 0.5-1.5×10?个细胞 / 毫升麦汁之间。可以根据酵母菌株的特性、麦汁浓度、发酵温度等因素，确定最佳的酵母接种量。例如，对于发酵速度快的酵母菌株，可以适当减少接种量；而对于发酵速度慢的酵母菌株，则可以适当增加接种量。[*]选择合适的接种时间：在麦汁冷却至适宜的接种温度后，及时接种酵母。过早或过晚接种酵母都会影响发酵效果。一般来说，在麦汁冷却至 8-12℃后，尽快接种酵母，以保证酵母的生长和发酵活动顺利进行。[/list][/list] [color=initial]三、酵母管理[/color] [list=1][*] 酵母的扩培和储存 [list][*]酵母扩培：采用科学的酵母扩培方法，确保酵母的数量和质量。一般来说，酵母扩培需要经过多个阶段，从原始菌种开始，逐步扩大培养，直到达到所需的酵母数量。在扩培过程中，要严格控制温度、pH 值、营养物质等条件，保证酵母的生长和繁殖。[*]酵母储存：正确储存酵母可以延长其使用寿命和保持其质量。酵母储存的条件包括低温、干燥、无氧等。一般来说，酵母可以储存在冰箱或冷库中，温度控制在 0-4℃之间。同时，要避免酵母与空气接触，以免酵母氧化和变质。在储存过程中，要定期检查酵母的质量，如有必要，可以进行活化和再培养。[/list][*] 酵母的回收和再利用 [list][*]酵母回收：在啤酒发酵结束后，及时回收酵母。可以采用离心、过滤等方法，将酵母从啤酒中分离出来。回收的酵母要经过清洗、消毒等处理，去除杂质和残留的啤酒成分。[*]酵母再利用：经过处理后的酵母可以再次用于啤酒发酵。但要注意控制酵母的使用次数，一般来说，酵母的使用次数不宜超过 5-7 次。随着使用次数的增加，酵母的活性和发酵性能会逐渐下降，需要及时更换新的酵母菌株。[/list][*] 酵母的检测和监控 [list][*]定期检测酵母的质量：包括酵母的活性、数量、纯度、发酵性能等指标。可以采用显微镜观察、平板计数、发酵实验等方法，对酵母进行检测。例如，通过显微镜观察酵母细胞的形态和大小，判断酵母的活性和健康状况；通过平板计数法，确定酵母的数量和纯度；通过发酵实验，检测酵母的发酵性能和产酒精能力。[*]监控发酵过程中的酵母状态：在啤酒发酵过程中，要密切关注酵母的生长和代谢情况。可以通过检测发酵液的温度、pH 值、糖度、酒精含量等指标，了解酵母的发酵活动。同时，要注意观察发酵液的外观、气味等变化，如有异常情况，要及时采取措施进行处理。[/list][/list] 通过以上方法，可以有效地提高啤酒酵母的质量，从而生产出品质优良的啤酒

空气污染特别是PM2.5是当前人类面临的重要的环境问题之一。北京大学课题组研究人员近期在此问题上取得跨学科进展,首次以荧光标记的酵母菌取代现有方法中的半导体传感器,实现了对PM2.5多方面毒性的实时在线监测。受酵母菌相关研究的启发,北大环境科学与工程学院研究员要茂盛课题组先将PM2.5颗粒物采集到液体中,再将样品实时输送至放有酵母菌的芯片里。由于酵母菌会对来自颗粒物的刺激发生反应,通过用不同荧光蛋白标记酵母菌的所有基因,就可实时看到酵母菌的哪些基因对颗粒物的刺激发生了响应,就好像可“实时监测不同地区车辆行驶状况”。比较于传统方法半导体传感器监测PM2.5，现在用酵母菌实现PM2.5毒性实时在线监测，哪个合适，这事你怎么看？详情请看：http://www.instrument.com.cn/news/20170322/215289.shtml

[color=#444444]请教一下，请问有谁知道食品中酵母[/color][color=#444444]β[/color][color=#444444]葡聚糖的检测方法？[/color]

如果大家做到一个样品（保健食品），菌落总数，霉菌酵母菌，大肠菌群都未检出，是否还需要检测致病菌（沙门氏菌，乙型溶血性链球菌，志贺氏菌，金黄色葡萄球菌），有没有什么相关的国标或者标准说明是否需要检测，非常感谢！

最近遇到奶粉酵母菌检测结果1000cfu/g，严重超标，一般情况不会出现这种情况啊？谁有经验指教下啊？

求大神解释一下，食品国标4789.15中，霉菌和酵母测定，计数怎么计，标准是小于或等于50cfu/g，测得，霉菌1cfu，酵母7cfu（稀释10倍），是总得计数40cfu/g合格，还是霉菌5cfu/g，酵母35cfu/g不合格。标准50是总和50，还是各25的意思。急急急！

最近遇到一个问题，我们面包产品（冷加工）做霉菌检测时平板上会培养出很多酵母菌，正常吗，看到贴的朋友，可以交流一下

[b]1. 目的[/b] 对《食品安全国家标准 食品生生物学检验 霉菌和酵母计数》GB4789.15-2016进行细化，指导微生物实验室霉菌和酵母计数检测具体操作。[b]2. 适用范围[/b]本操作规程适用于食品、化妆品及一次性筷子中霉菌和酵母菌的计数。[b]3. 设备及材料[/b]冰箱、霉菌培养箱、拍击式均质、显微镜、电子天平、高压灭菌器及其他灭菌和常规检测用器皿、材料。[b]4. 培养基及试剂[/b] 生理盐水（0.85%氯化钠溶液） 孟加拉红培养基或马铃薯葡萄粮琼脂[b]5. 检验程序 [/b] [table][tr][td=1,1,35] [/td][/tr][tr][td] [/td][td][img=,527,469]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181712248843_5332_3247208_3.png[/img][/td][/tr][/table][b] 6. 操作步骤6.1 1:10样品匀液制 [/b]以生理盐水做样品稀释液。6.1.1食品样品 样品适宜时，取25g/ml样品加入装有225ml稀释液的均质袋中，用拍击式均质器充分混匀；如果样品硬度较大，不宜使用拍击式均质器时，取25g样品加入装有225ml稀释液的椎形瓶中充分振摇，制成1:10样品匀液。6.1.2 化妆品样品 油性液体，取10g/ml样品，先加入5ml灭菌石腊混匀，再加10 ml灭菌吐温80，42℃水浴，加75ml灭菌生理盐水，拍击均质1min，制成1：10样品匀液； 水溶性液体、膏、霜、粉剂等，称10 g样品加90ml灭菌生理盐水，拍击均质1min，制成1：10样品匀液 疏水性膏、霜及眉笔、口红等，称10 g/ml样品加10 ml灭菌液体腊和10 ml灭菌吐温80，再加入70 ml灭菌生理盐水，拍击均质3 min，制成1：10样品匀液。6.1.3 一次性筷子样品 取一次性筷子25g（通常取6双，表面积约为50平方厘米）加入装有225ml稀释液的无菌袋中充分振摇，作为1:10的样品匀液。[b]6.2 样品匀液稀释[/b]用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]取1ml 1:10的样品匀液注入装有9ml稀释液的试管中，另换一个枪头，反复吹吸，制成1:100样品匀液。按此法依次制备10倍递增稀释的系列样品匀液。根据对样品污染状况的估计，选择2-3个适宜稀释度（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1ml样品匀液加入2个无菌平皿内。同进分别取1ml样品稀释液加入2个平皿作空白对照。[b]6.3 倾注平皿[/b] 将冷却至46℃的孟加拉红培养基倾注平皿，及时转动平皿使培养基和样品匀液混合均匀。[b]注意：[/b]孟加拉红培养基可置46±1℃的水浴箱中保温，但不应超过4小时。凝固后的培养基只可复溶一次，否则将影响培养基质量。[b]6.4 培养[/b] 待琼脂凝固后，将平皿倒置，于28±1℃霉菌培养，3天后观观察，5天记录结果。[b]6.5 计数[/b] 肉眼观察，选取菌落数在10-150CFU的平板计数。根据检测要求，计数霉菌和酵母的总和或分别计数霉菌数和酵母数。霉菌、酵母和细菌的菌落鉴别可参照以下方法。[align=left]6.5.1肉眼观察菌落特征[/align][align=left]通常情况下肉眼观察，霉菌、酵母、细菌三种菌落在孟加拉红培基上的特征如下：[/align] [table][tr][td=1,1,83] 霉菌菌落[/td][td=1,1,482] 绒毛状、棉絮状、蛛网状。具有菌丝体，菌落较大，扁平，较干燥。颜色多样，白色、黑色、黄色多见，菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致，菌落周围有晕圈。[/td][/tr][tr][td=1,1,83] 酵母菌菌落[/td][td=1,1,482] 菌落较细菌大且厚，质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色均一。光滑、湿润、常带黏性，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。培养时间较长时可呈皱缩状，表面较干燥。位于琼脂内的菌落，可呈铁饼形、三角形及多角形。[/td][/tr][tr][td=1,1,83] 细菌菌落[/td][td=1,1,482] 由于受到抑制，通常会很小，红色，常呈橄榄形。[/td][/tr][/table]6.5.2 低倍镜观察菌落边缘形态肉眼观察菌落形态无法区别孟加拉红培养基上酵母和细菌时，可用低倍普通光学显微镜观察平板表面菌落边缘较薄较透光的部分，在边缘能看到细胞的是酵母，看不见的则是细菌。 [table=565][tr][td=1,1,83] 霉菌菌落[/td][td=1,1,482] 边缘可见明显的菌丝体。[/td][/tr][tr][td=1,1,83] 酵母菌菌落[/td][td=1,1,482] 边缘较规整，调节聚焦螺旋可见到细腻如细沙的结构。若无法确认可用接种针从边缘稍稍刮开菌落，即可在镜下见到卵圆形的细胞。[/td][/tr][tr][td=1,1,83] 细菌菌落[/td][td=1,1,482] 菌落紧密，边缘整齐，不易透光，看不到细沙粒样的结构。[/td][/tr][/table]6.5.3 染色法观察挑取菌落用亚甲基蓝或革兰氏染色，酵母菌霉菌在低倍镜下即可见到细胞或菌丝，而细菌不可见，无菌丝的酵母体积较大，在40倍显微镜下清晰可见，细菌则需在油镜下才能清楚观察。[b]7. 结果记录与报告[/b]7.1 结果记录计算两个平板菌落的平均值，再将平均值乘以相应的稀释倍数计算。7.1.1 若所有平板上菌落数均大于150CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他夹板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7.1.2 若所有平板上菌落数均小于10CFU，则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.1.3 若所有稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。7.2 报告7.2.1 菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。7.2.2 菌落数大于或等于100时，可将前3位数字采用“四舍五入”原则修约，取前两位数字，后面用0补齐位数表示结果（例如：结果为1210可表示为1200）；也可采用两位有效数字乘以10的指数形式来表示（例如：结果为1210可表示为1.2*10[sup]3[/sup]）。7.2.3 称重取样以CFU/g为单位，体积取样以CFU/ml为单位。7.2.4 根据检测要求分别报告霉菌和酵母数，或报告霉菌和酵母总数。[b]8. 参考文件[/b]《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》 GB 4789.15-2016《一次性筷子 第1部分 木筷》 GB19790-2005《化妆品微生物标准检验方法》 GB 7918-1987

随着对多种重要生物的大规模基因组测序工作的完成，基因工程领域又迎来了一个新的时代---功能基因组时代。它的任务就是对基因组中包含的全部基因的功能加以认识。生物体系的运作与蛋白质之间的互相作用密不可分，例如：DNA合成、基因转录激活、蛋白质翻译、修饰和定位以及信息传导等重要的生物过程均涉及到蛋白质复合体的作用。能够发现和验证在生物体中相互作用的蛋白质与核酸、蛋白质与蛋白质是认识它们生物学功能的第一步。 　　酵母双杂交技术作为发现和研究在活细胞体内的蛋白质与蛋白质之间的相互作用的技术平台，在近几年来得到了广泛运用。酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。大量的研究文献表明，酵母双杂交技术既可以用来研究哺乳动物基因组编码的蛋白质之间的互作，也可以用来研究高等植物基因组编码的蛋白质之间的互作。因此，它在许多的研究领域中有着广泛的应用。本文就酵母双杂交的技术平台和应用加以介绍。　　酵母双杂交系统的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。反式转录激活因子，例如酵母转录因子GAL4在结构上是组件式的（modular），往往由两个或两个以上结构上可以分开，功能上相互独立的结构域（domain）构成，其中有DNA结合功能域(DNA binding domain,DNA-BD)和转录激活结构域（activation domain，DNA-AD）。这两个结合域将它们分开时仍分别具有功能，但不能激活转录，只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时，才能重新呈现完整的GAL4转录因子活性，并可激活上游激活序列（upstream activating sequence, UAS）的下游启动子，使启动子下游基因得到转录。　　根据这个特性，将编码DNA-BD的基因与已知蛋白质Bait protein的基因构建在同一个表达载体上，在酵母中表达两者的融合蛋白BD-Bait protein。将编码AD的基因和cDNA文库的基因构建在AD-LIBRARY表达载体上。同时将上述两种载体转化改造后的酵母，这种改造后的酵母细胞的基因组中既不能产生GAL4，又不能合成LEU、TRP、HIS、ADE，因此，酵母在缺乏这些营养的培养基上无法正常生长。当上述两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时，功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因HIS、ADE、LACZ、MEL1，从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。将阳性反应的酵母菌株中的AD-LIBRARY载体提取分离出来，从而对载体中插入的文库基因进行测序和分析工作。在酵母双杂交的基础上，又发展出了　　酵母单杂交、酵母三杂交和酵母的反向杂交技术。它们被分别用于核酸和文库蛋白之间的研究、三种不同蛋白之间的互作研究和两种蛋白相互作用的结构和位点。　　基于酵母双杂交技术平台的特点，它已经被应用在许多研究工作当中。 1、利用酵母双杂交发现新的蛋白质和蛋白质的新功能　　酵母双杂交技术已经成为发现新基因的主要途径。当我们将已知基因作为诱饵，在选定的cDNA文库中筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白，从筛选到的阳性酵母菌株中可以分离得到AD-LIBRARY载体，并从载体中进一步克隆得到随机插入的cDNA片段，并对该片段的编码序列在GENEBANK中进行比较，研究与已知基因在生物学功能上的联系。另外，也可作为研究已知基因的新功能或多个筛选到的已知基因之间功能相关的主要方法。例如：Engelender等人以神经末端蛋白alpha-synuclein 蛋白为诱饵蛋白，利用酵母双杂交CLONTECH MATCHMARKER SYSTEM 3为操作平台，从成人脑cDNA文库中发现了与alpha-synuclein相互作用的新蛋白Synphilin-1，并证明了Synphilin-1与alpha-synuclein 之间的相互作用与帕金森病的发病有密切相关。为了研究两个蛋白之间的相互作用的结合位点，找到影响或抑制两个蛋白相互作用的因素，Michael等人又利用酵母双杂交技术和基因修饰证明了alpha-synuclein的1-65个氨基酸残基和Synphilin-1的349-555个氨基酸残基之间是相互作用的位点。研究它们之间的相互作用位点有利于基因治疗药物的开发。　　2、利用酵母双杂交在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用　　利用酶联免疫（ELISA）、免疫共沉淀（CO-IP）技术都是利用抗原和抗体间的免疫反应，可以研究抗原和抗体之间的相互作用，但是，它们都是基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用。而在细胞体内的抗原和抗体的聚积反应则可以通过酵母双杂交进行检测。例如：来源于矮牵牛的黄烷酮醇还原酶DFR与其抗体scFv的反应中，抗体的单链的三个可变区A4、G4、H3与抗原之间作用有强弱的差异。Geert等利用酵母双杂交技术，将DFR作为诱饵蛋白，编码抗体的三个可变区的基因分别被克隆在AD-LIBRARY载体上，将BD-BAIT载体和每种AD-LIBRARY载体分别转化改造后的酵母菌株中，并检测报告基因在克隆的菌落中的表达活性，从而在活细胞的水平上检测抗原和抗体的免疫反应。　　3、利用酵母双杂交筛选药物的作用位点以及药 物对蛋白质之间相互作用的影响　　酵母双杂交的报告基因能否表达在于诱饵蛋白与靶蛋白之间的相互作用。对于能够引发疾病反应的蛋白互作可以采取药物干扰的方法，阻止它们的相互作用以达到治疗疾病的目的。例如：Dengue病毒能引起黄热病、肝炎等疾病，研究发现它的病毒RNA复制与依赖于RNA的RNA聚合酶（NS5）与拓扑异构酶NS3，以及细胞核转运受体BETA-importin的相互作用有关。研究人员通过酵母双杂交技术找到了这些蛋白之间相互作用的氨基酸序列。如果能找到相应的基因药物阻断这些蛋白之间的相互作用，就可以阻止RNA病毒的复制，从而达到治疗这种疾病的目的。　　4、利用酵母双杂交建立基因组蛋白连锁图（Genome Protein Linkage Map）众多的蛋白质之间在许多重要的生命活动中都是彼此协调和控制的。基因组中的编码蛋白质的基因之间存在着功能上的联系。通过基因组的测序和序列分析发现了很多新的基因和EST序列，HUA等人利用酵母双杂交技术，将所有已知基因和EST序列为诱饵，在表达文库中筛选与诱饵相互作用的蛋白，从而找到基因之间的联系，建立基因组蛋白连锁图。对于认识一些重要的生命活动：如信号传导、代谢途径等有重要意义。

如果在固体饮料中，增加了酵母粉，这个还需要检测霉菌吗？

很多朋友问这样一个问题：为什么毕赤酵母表达困难?他们自己也很纳闷，重组酵母pcr检测也证明目的基因重组了，但是诱导之后就是在表达上清中检测不到目的蛋白，仔细研究操作手册后仍然不知道原因。本人，根据自己的经验，采用倒推的方法，按实验过程从后向前分析，供大家参考：1、诱导之后表达上清中检测不到目的蛋白：分析1：检测的方法是否有问题，要考虑是不是蛋白表达量低而没有检测到? 如果是蛋白表达低，可以选择浓缩蛋白，具体的方法很多，有TCA、丙酮、浓缩柱等等方法，之前在本版已经发过帖，在此不赘述。 2、如果蛋白浓缩N倍之后仍然检测不到，那基本可以确证蛋白并不在上清中。那么蛋白到哪里去了，考虑是否没有分泌出来，而是在胞内，那就需要通过裂解酵母来检 测胞内蛋白，具体的方法很多，在此也不赘述，曾整理过相关破碎的帖子。 3、如果胞内也没有目的蛋白表达，那么基本可以确定蛋白并没有表达。 4、为什么没有表达呢?倒推回来就是诱导的过程了，诱导体系是什么?甲醇浓度是多少?培养问题是多少，转速是多少?这些都要注意。甲醇一般是0.5%-1.0%，本人用的 是0.5%，也有很多人也用1.0%，曾见过一个帖子，说超过1.5%反而会抑制表达，没有验证过，供大家参考。培养问题28-30度比较合适，转速250rpm比较合适，诱导 体系没有固定的体系，说明书上推荐的是BMGY到OD600 2~6，换到BMMY中OD600 为1左右。 5、如果诱导的过程也没有问题，那问题就复杂了，特别是重组酵母PCR检测证明目的基因确实已经发生了重组。这个时候是最郁闷的了，但是郁闷怎么办，还是要找原 因，在此我给的建议是先做RT-PCR证明mRNA水平的情况，也就是说有没有转录。如果转录了，后续的操作也没有问题(本帖的1、2、3、4项)，那么只有重新设计实 验，比如换酵母株，有文章上说：用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。 6、有个帖子说的很好，在此和大家分享一下。 1、 菌株：用GS115表达不出蛋白，换KM71H后，大部分克隆能表达。 2、温度：　在28度和室温下诱导表达，表达水平可能都不低。 3、pH：手册上用6.0，pH提高到6.8，不表达的蛋白可能就表达出来。BMMY的pH7.0-7.5比较合适。国内外做的最好的rHSA，最适pH大概5-6左右。pH3的时 候yeast和peptone好像会沉淀的，可以用磷酸和磷酸二氢钾调，具体比例自己去试试。 4、偏爱密码子： codon bias一般不是主要的问题，你要表达的蛋白特性才是主要问题，酵母对分子量大(30KD以上)，结构复杂(如一些蛋白酶)，二硫键含量多的 蛋白往往不能有效表达，尤其是分泌表达。密码子改造对一些较小的而且结构简单的蛋白表达量的提高可能有一些作用。比如一位战友用Pichia酵母表达一个单链 抗体，29KD，含有2对二硫键，表达量约几毫克每升，选用酵母偏好密码子全基因合成后，表达量没有什么提高。 5、表达时间与空质粒转化对照：诱导时间长了以后，是会有很多蛋白分泌出来的，时间越长杂蛋白就越多，且分子量都比较大。最好做一个空质粒转化的对照， 这样就会比较肯定到底是不是自身的蛋白分泌的结果。 6、污染：每个样品从G418板上挑10个左右单克隆于2ml BMGY摇菌(30ml玻璃管，比LB管大一点)，纱布一般用8层，一天左右看着比较浑离心，留样1ml，余 1ml换2ml BMMY诱导表达，3,4层纱布足够了。 污染一般都是跟瓶口覆盖有关的原因造成的，只盖纱布肯定会污染。加盖报纸后，就再没遇到过污染。如果只用6层纱布，污染的可能当然很大，100ml三角瓶， 装量10ml培养液，用橡筋把8层纱布和2层报纸拴紧封口，空气浴摇床。 7、不表达：蛋白有没有表达就要看你的运气了，一般重复2-3次实验都没有表达菌株，这个蛋白就放弃表达了。 8、表达量： 30KD,10mg/L表达量已经很高，最直接的方法是发酵，一般提高5-10倍。大肠杆菌一样出现大团的超表达蛋白。 9、糖基化：酵母分泌表达的N糖基化是可以预测的，有如下序列：N X S/T就是潜在的糖基化位点，X为任意氨基酸，1个糖基化位点会加上1-3KD左右的糖基。另外可 能还有O糖基化话，但是无法预测其位点，不过很少听说表达蛋白有O糖基化的。如果胞内表达，不存在糖基化的问题。 10、表型与表达：重组SalI和BglII酶切产生单交换和双交换，结果就是产生Mut+和Muts表型的菌株;前者在甲醇诱导表达时生长快，消耗的甲醇多，后者生长慢，消耗 的甲醇少，所以诱导表达时Muts表型要求更高的菌体浓度。一般用Mut+表型的较多，但是对某些蛋白Muts菌株可能表达的更好，只有试试才知道你的蛋白用那种菌 株表达较好。 11、培养基 YPD：最基本的培养用;BMGY：诱导表达前培养用;BMMY：诱导表达用;MD：电转化后筛选his+用。 YEPD是不能代替BMGY的，因为有葡萄糖，这样残留的葡萄糖会影响下一步的诱导表达。不过有一种方法是可行的，就是用YPG培养基代替，只是把YEPD中的葡萄糖 用3%的甘油代替，也可以降低成本。摇瓶毕竟不能和发酵罐比，甘油残余会抑制甲醇利用。 BMGY、BMMY灭菌后才能加甲醇、磷酸钾、生物素。配制BMMY时也没必要用5%过滤除菌的甲醇，在灭菌后使用前加100%甲醇至你要的浓度。 YNB可以高压灭菌，没问题的，也可以0.22um过滤处理，天冬氨酸和苏氨酸要待培养基高压灭菌后加入;配YPD时可以加入YPD一起灭菌，但时间不能太长，温度不能 太高，一般121-125度12-15分钟足够了。若时间过长，温度过高，可能导致YPD焦化。glucose和含氮化合物在一起容易产生美拉德反应，这是配制培养基中的禁忌。 颜色很深的话，基本不能使用了。或者含有葡萄糖和/或YNB的培养基108度35min高压灭菌。 小量发酵其实可以把培养基成分中的YNB和生物素去除，培养基价格便宜，操作又方便，可以直接灭菌，效果也很好(效果不比含YNB的差)。 如果是用自己配置的培养基，如玉米浸提液、麦芽浸提液、麦麸浸提液等等，可以不用换液，采取添料来维持酵母对培养基的营养需要。 用无机盐进行大规模发酵，更省钱。更多有关蛋白表达纯化的相关资料，请点击：资料专区

葡萄酒在瓶装时，必须认真考虑葡萄酒是否已经达到了除菌、灭菌的目的。为了准确达到这个目的，就要对瓶装的葡萄酒进行快速而可靠的检验。这里列举了3个检查方法，仅供同行朋友们在实际生产中，根据企业的实际条件进行参考。　　一、格森海姆(Geisenheimer)检定法　　将被检验的葡萄酒在无菌的条件下，接入与其等量的葡萄汁，便为酵母提供了良好的繁殖条件，酵母开始快速繁殖和发酵。酵母繁殖的速度和发酵的强度，是衡量被检样品染菌的程度。　　具体操作如下：　　取标准试管3支，分别注入10mL葡萄汁，并加棉塞封口，置于高压灭菌锅中灭菌；将吸管用纸包好，并在160℃下灭菌。然后小心的拔除葡萄酒瓶的软木塞，立即用火焰将瓶口附着的微生物灭除，再用无菌吸管从瓶底吸出10mL被检葡萄酒，移入已灭菌葡萄汁的试管内，每份样品做平行样3支。　　若被检的样品活酵母较多，在3—5天内即可检定其发酵度；若酵母较少，发酵需要两倍于此的时间，由此可断定生产线是否处于受控状态，断定瓶装酒出厂后是否会发生浑浊等质量事故。　　这个方法十分简便，不需要特别的仪器，对小型葡萄酒厂十分适用，这是其优点。缺点是只能检定出葡萄酒中是否存在酵母菌，无法进行定量分析。　　二、薄膜过滤法　　借助于不同孔径的过滤片(孔径一般为2微米以下)，在无菌条件下过滤被检葡萄酒，分离出酵母及其它微生物，然后对滤片上的微生物进行生长培养，计算出现的菌落数，并进行其它各项必要的检查。　　操作方法如下：　　将所有参与过滤的仪器、器皿进行彻底消毒，在无菌的条件下进行过滤等操作。在每次分析之前，将过滤器及过滤片置于高压锅内灭菌，用经火焰烧过的镊子取已灭菌的过滤片放入过滤器中。　　被检瓶酒在开启前，必须仔细用75%酒精擦拭瓶口，小心地拔除软木塞，勿使开瓶刀穿通软木塞。　　开始时先将软木塞拔出四分之三，然后用手轻轻取下软木塞，瓶口在倒酒前先用火焰烧一下，再将葡萄酒一点一点地倒入过滤漏斗中。　　过滤结束后，用火焰烧过的镊子在漏斗内取出滤片，置于培养皿中，并摆放平整，倒入适量的酵母培养基(约3mL)，然后标明日期和试样编号，置于生物培养箱内，在25℃下培养3—5天。为避免凝结水影响菌落生长，将培养皿反扣于培养箱内。若过滤片上的酵母菌是活的，酵母即进行繁殖，在培养基上会出现菌落。　　如果未发现菌落生长，说明被检的葡萄酒是稳定的，不会出现酵母菌引起的浑浊；如果每瓶样有5个以上的菌落出现，说明葡萄酒的除菌或杀菌操作不彻底，葡萄酒有不稳定的因素，应该严格检查生产过程中的每个环节，直到查出原因为止。　　这一方法能对瓶装酒内各种微生物进行定量检定，但需要选择适当孔径的滤片和培养基，并由掌握基本微生物学的熟练人员操作。　　三、快速检定法　　薄膜过滤法可以用显微镜对滤片做仔细检查，迅速检出活酵母；快速检定法则可将死的和活的微生物区别开来，但要求瓶装酒内必须不含其他悬浮物。　　在适宜的温度下，于8—14小时内，具有繁殖能力的菌体生长成为微小的菌落，用显微镜观察，可将死的、没有繁殖能力的菌落区别开来。活菌体在培养时会形成小的菌落，死菌体只有单个的存在。

[font=SimSun, STSong, &]我们分别检测自家产品和其他公司的产品发现都存在酵母菌，有数量的区别，沙拉酱为什么会存在酵母菌呢[/font]