分光光度计原理

求教：陈列式分光光度计的工作原理（即后分光式分光光度计）好像这种分光计在国内不多见！

分光光度计的原理是什么???

荧光分光光度计的原理

UV分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。UV分光光度计是一种是利用物质对光的选择吸收现象，进行物质的定性和定量分析的光电式分析仪器，也是一种光谱仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。那么UV分光光度计的应用原理又是怎样呢，其实UV分光光度计的应用原理非常简单。UV分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。 分光光度计的简单原理 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

紫外分光光度计根本作业原理和红外光谱仪类似，使用必定频率的紫外可见光照耀被剖析的有机物质，导致分子中价电子的跃迁，它将有挑选地被吸收。一组吸收随波长而改变的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，关于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因而测量光谱可以进行定性剖析，而且根据吸收与已知浓度的标样的对比，还能进行定量剖析。　　紫外-可见分光光度计　　紫外-可见分光光度计的类型很多，但可概括为三种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。　　1、单光束分光光度计　　经单色器分光后的一束平行光，轮番经过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简便型分光光度计结构简略，操作方便，维修容易，适用于惯例剖析。　　2、双光束分光光度计　　经单色器分光后经反射镜分解为强度持平的两束光，一束经过参比池，一束经过样品池。光度计能主动对比两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它变换成吸光度并作为波长的函数记载下来。　　双光束分光光度计通常都能主动记载吸收光谱曲线。由于两束光一起别离经过参比池和样品池，还能主动消除光源强度改变所导致的差错。　　3、双波长分光光度计　　由同一光源宣布的光被分红两束，别离经过两个单色器，得到两束不同波长1和2 的单色光;使用切光器使两束光以必定的频率替换照耀同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波利益的吸光度差值。关于多组分混合物、混浊试样(如生物组织液)剖析，以及存在布景搅扰或共存组分吸收搅扰的情况下，使用双波长分光光度法，通常能进步办法的灵敏度和挑选性。使用双波长分光光度计，能取得导数光谱。　　经过光学系统变换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长作业方式。假如能在1和2处别离记载吸光度随时刻改变的曲线，还能进行化学反应动力学研讨.

我想知道紫外分光光度计和荧光分光光度计在原理以及使用上面的区别，最好简单明了一些。谢谢各位！

最近有客户问我，分光光度计能否测DNA/RNA。请指点我，用分光光度计测上述物质的什么呢？原理又是什么？

【小魏学长】分子荧光分光光度计的原理、应用大三在读，感谢支持

紫外及可见光分光光度计的可测波长范围为200一1000 nm，也有波长范围为200- 400 nm的[url=http://www.chinanoted.com/]紫外分光光度计[/url]，但前者较为普遍。紫外及可见光分光光度计的构造原理与可见光分光光度计(如721型分光光度计)相似。由于玻璃吸收紫外光，因此单色器要用石英棱镜或光栅。(一)光a(light source)有钨丝灯及氢灯(或氛灯)两种。可见光区(360一1000 nm)使用钨丝灯 紫外光区 (200一360 nm)则用氢灯或氛灯。(二)吸收池(absorption cell)由于玻璃吸收紫外光.吸收池要用石英材质。(三)检浏器(detector)检侧器使用两只光电管，一为氧化艳光电管，用于625一1000 nm波长范围 另一只是锑艳光电管，用于200一625 nm波长范围。光电倍增管亦为常用的检测器，其灵敏度比一般的光电管高2个数量级。图8一22是紫外及可见光分光光度计原理图。[img=,452,200]http://www.yi7.com/file/upload/201201/10/15-02-26-80-3596.jpg[/img]紫外及[url=http://www.chinanoted.com/]可见光分光光度计[/url]分单光束和双光束型。单光束型仪器使用前一般需要预热以使仪器稳定，缺点是难以消除与补偿由于光源与电子测量系统不稳定等所引致的误差。双光束型仪器能够消除与补偿由于光源、电子测量系统不稳定等所引致的误差，所以其测盘的精确度就提高了。双光束型仪器的工作原理如图8一23所示。[img]http://www.yi7.com/file/upload/201201/10/15-02-26-97-3596.jpg[/img]其工作原理可描述为:由光源(钨丝灯氘灯，根据波长而变换使用)发出的光经人口狭缝及反射镜反射至石英棱镜或光栅，色散后经过出口狭缝而得到所需波长的单色光束。然后由反射镜反射至由马达转动的调制板及扇形镜上。当调制板以一定转速旋转时，时而使光束通过，时而挡住光束，因而调制成一定频率的交变光束。之后扇形镜在旋转时，将此交变光束交替地投射到参比溶液(空白溶液)及试样溶液上，后面的光电倍增管接受通过参比溶液及为试样溶液所减弱的交变光通量，并使之转变为测量信号。此信号经放大并用解调器分离及整流，然后以电位器自动平衡此两直流信号的比率，并依照记录器记录得到吸收曲线。

实验室常用的分光光度计可以分为可见分光光度计和紫外－可见光分光光度计。各种类型分光光度计的结构和原理基本相同，一般包括光源、单色器、比色皿、检测器和显示器。台式分光光度计通常在实验室内部使用，不随意挪动位置，利于多种参数的测定。[url=http://www.hach.com.cn/product/dr1900]便携式分光光度计[/url]的原理、结构基本和台式分光光度计一样，只是各组成部分更加精密，大大减小了仪器的体积，便于携带，通常在野外和户外使用。

1、分光光度计具有低杂色光,高分辩率的单光束光路结构的单色器;　　2、分光光度计具有良好的稳定性,重现性和精确的测量读数;　　3、明亮清晰的数字显示器可显示透射比,吸光度,浓度和所设置的波长,提高了仪器的读数准确性;　　4、分光光度计采用最新微机处理技术,仪器具有自动设置0%T和100%等控制功能;　　5、仪器配有标准的RS-232双向通讯接口,不仅可向计算机发送测试参数,还可接收计算机发出的指令.　　6、分光光度计在已知标准溶液浓度前提下,测定未知样品浓度，在已知标准溶液浓度斜率前提下,测定未知样品浓度.　 分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。　　1．分光光度计应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定。　　2．分光光度计使用前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固，通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。　　3．分光光度计在仪器尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上，若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。

我想求教紫外-可见分光光度计的原理,还有普析的TU-1800的使用(测样的整个过程,越详细越好),非常感谢!!!

752型分光光度计为紫外光栅分光光度计，测定波长200nm～800nm。 1.结构原理 752型分光光度计由光源室、单色器、样品室、光电管暗盒、电子系统及数字显示器等 部件组成，仪器的工作原理如图1所示。 仪器内部光路系统如图2所示。 从钨灯或氢灯发出的连续辐射经滤色片选择聚光镜聚光后投向单色器进狭缝，此狭缝正好位 于聚光镜及单色器内准直镜的焦平面上，因此进入单色器的复合光通过平面反射镜反射及准 直镜变成平行光射向色散光栅。光栅将入射的复合光通过衍射作用形成按照一定顺序均匀排 列的连续单色光谱，此时单色光谱重新返回到准直镜，然后通过聚光原理成像在出射狭缝上 。出射狭缝选出指定带宽的单色光通过聚光镜落在试样室被测样品中心，样品吸收后透射的 光经光门射向光电管阴极面。根据光电效应原理，会产生一股微弱的光电流。此光电流经电 流放大器放大，送到数字显示器，测出透光率或吸光度，或通过对数放大器实现对数转换， 显示出被测样品的浓度C值。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=91635]752型分光光度计结构原理及使用方法.doc[/url]

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度计的原理及测量技术[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=31302][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度计的原理及测量技术[/url]

[font=微软雅黑]可见分光光度计（又名可见光度计、分光光度计）是可见光分光光度法是采用新型单片机技术，开发出能够进行定量测量（标准曲线测量，可对物质进行浓度直读）；OD值直接测量（吸光度、透过率和能量等直读）；动力学测试（测出物质浓度随时间变化OD值的变化）；光谱扫描（可以对某一种物质进行全波段扫描，分析物质的特征波长，判断实验过程的误差）；多波长测试（可以对物质同时进行多个波长的测试，分析物质的相关特性）；还有可以进行DNA蛋白质测试、总磷总氮测试、重金属测试、农药残留测试、食品安全检测、热力发电金属离子测试等。[/font][font=微软雅黑][/font][b][b][font=微软雅黑][color=#008000]波长范围[/color][/font][/b][/b][font=微软雅黑]可见分光光度计的波长适用范围一般从350nm左右开始到1100nm左右，紫外可见分光光度计的波长适用范围一般从190nm到1100nm。从这点区别上看就是波长的适用范围不一样，紫外可见分光光度计多了从190到350nm左右这段波长。[/font][font=微软雅黑][/font][b][b][font=微软雅黑][color=#008000]光源不同[/color][/font][/b][/b][font=微软雅黑]可见分光光度计的光源一般只用钨灯，而紫外可见分光光度计是用钨灯 氘灯两个光源，同时还多了这两个光源灯的切换部件。这是因为钨灯的光谱范围主要在可见到近红外这段，氘灯主要在紫外端。也正是因为光源的不一样，紫外可见分光光度计也多了一个专门提供氘灯工作的氘灯电源了。[/font][b][b][font=微软雅黑][color=#008000]光学器件不同[/color][/font][/b][/b][font=微软雅黑]由于玻璃能吸收紫外波，而对可见到近红外端有比较好的透过性，所以可见分光光度计的一些光学部件可以使用玻璃，而紫外可见分光光度计就不能使用玻璃部件，一般使用石英光学部件。同时由于这个原因，在比色皿的选择上也就有不同了，可见分光光度计可以使用玻璃制的比色皿，而紫外可见分光光度计一般使用石英制的比色皿了。[/font][font=微软雅黑][/font][b][b][font=微软雅黑][color=#008000]接收器不同[/color][/font][/b][/b][font=微软雅黑]由于紫外可见分光光度计多了紫外波，所以在接收器的选择上也就不一样了。多了对紫外波的灵敏响应功能，这类接收器的价格就比可见分光光度计的接收器贵了很多了。[/font]

分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

如题目：紫外可见分光光度计的工作原理是什么，一般都具有哪些功能

分光光度计的工作原理主要是基于琅伯-比尔定律，18世纪初，琅伯在前人的基础上，进一步研究了物质对光的吸收与物质厚度的关系，并于1760年指出：如果溶液的浓度一定，则光对物质的吸收程度与它通过的溶液厚度成正比，这就是琅伯定律，其数学表达式为：A=lgI。/I=K。b式中，A为吸光度；I。为入射光强度；I为透射光强度；b为液层厚度（即光程）；K。为比例常数。1852年，比尔研究了各种无机盐的水溶液对红光的吸收后指出：光的吸收和光所遇到的吸光度的数量有关；如果吸光物质于不吸光的溶剂中，则吸光度和吸光物质的浓度成正比，这就是比尔定律，其数学表达式为：A=lgI。/I=K1C式中，A为吸光度；I。为入射光强度；I为透射光强度；C为溶液的浓度；K1为比例常数。将琅伯定律和比尔定律结合起来，则为琅伯-比尔定律，公式如下：A=lgI。/I=K2bC式中，A为吸光度；I。为入射光强度；I为透射光强度；C为溶液的浓度；b为液层厚度（即光程）；K1为比例常数。比尔定律认为：当一束光平行的单色光通过某一均匀的有色溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和光程的乘积成正比，这就是琅伯-比尔定律的真正物理意义，它是光度分析中定量分析的最基础、最根本的依据，也是紫外可见分光光度计的基本原理。

分光光度计的工作原理是1、物质对光的选择吸收，2、琅伯-比尔定律。我们这里讨论琅伯-比尔定律的限制性条件。其一：通过溶液的光必须是平行的；其二：通过溶液的光必须是单色光；其三：待测溶液必须是纯净的、均匀的且浓度不宜过高，这是琅伯-比尔定律首要的三个前提条件。但是在实际的分光光度计的制造和使用过程中这三个条件是不可能达到的。其一：因为光是直线传播的，在分光光度计制造过程中，灯源发出的光是发散的，经过聚焦镜进行聚焦等直到经过溶液的整体过程中，光是不可能平行的。其二：灯源发出的光是复合光，经过狭缝，再经过光栅分光等步骤，因为受到狭缝和光栅本身的限制，光栅分光不可能达到纯单色光。还有光度计的整体设计问题，光度计不可能没有其它的杂光存在。其三：用户的溶液也不可能是纯净的，也会含有一些杂质，这些对光度的吸收都会存在影响。除以上三个方面的影响外，在实际的光度计应用过程中还会存在其他因素的影响，例如：1、经过比色皿的光是否垂直；2、比色皿宽度是否为10mm的标准值；3、测试波长是否准确；4、程序设计是否存在漏洞等等，都会直接影响到利用琅伯-比尔定律计算出的结果。所以在日常的测试过程中，得出的结果和琅伯-比尔定律有些偏差是很正常的，只是我们关注偏差多少的问题。

紫外可见分光光度计测定的是蛋白浓度，X射线晶体衍射测的才是蛋白质结构。紫外分光光度计测蛋白浓度原理：组成蛋白质的氨基酸里，有三种氨基酸：苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸具有苯环的共轭结构，它们对特定波长的紫外线具有吸收光谱，也就是说：它们对紫外线是有颜色的。每种蛋白质根据苯环的数量和分布都有一定的吸收强度，总的吸收值和分子的浓度呈正比。根据蛋白质溶液对280nm紫外线的吸收强度，可以测定出蛋白质的浓度。X射线晶体衍射测蛋白结构原理：蛋白质的肽链不是杂乱无章的，按照一定的规则盘曲成了特定的形状（蛋白质高级结构），每个碳-碳键都有它特定的构象，这种特定的结构是蛋白质作为分子机器的基础。结晶的蛋白质中，分子排成了空间重复的有序的结构，而原子之间的间隙与X射线的波长类似，构成了X射线的衍射光栅。当用X射线照射这种重复性的天然光栅时，通过波的衍射形成了有规则的干涉条纹，分析这些条纹就可以解析出蛋白质分子中每个原子的位置。

紫外分光光度计是什么原理啊？请大师指点？

分光光度计和酶标仪区别分光光度计：利用单色仪或特殊光源提供的特定波长的单色光通过标样和被分析样品，比较两者的光强度来分析物质成分的光谱仪器。分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。常用的波长范围为：(1)200～400nm的紫外光区,(2)400～760nm的可见光区,(3)2.5～25μm（按波数计为4000cm～400cm）的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或（或原子吸收分光光度计）。酶标仪：实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。酶标仪按照功能的不同划分,可以分为（1）光吸收酶标仪（可见酶标仪，紫外/可见酶标仪）（2）荧光酶标仪（3）化学发光酶标仪。分光光度计和酶标板存在一些不同之处，具体差别体现在以下几个方面：（1）盛装待测溶液的容器：分光光度计用的是比色皿，酶标仪使用的是塑料微孔板(酶标板)。比色皿只能起到盛装溶液的作用，每个比色皿一次只能盛装一种溶液。酶标板常用透明的聚乙烯材料制成，对抗原抗体有较强的吸附作用，因此用它作为固相载体，酶标板通常为48孔或96孔，每个微孔可以盛装不同的溶液。（2）光路的方向：分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路。由于酶标板盛样本的塑料微孔板是多排多孔的,光线只能垂直穿过,因此酶标仪的光束都是垂直通过待测溶液和微孔板的,光束既可是从上到下,也可以是从下到上穿过比色液。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。（3）光路的长度：由于光密度（OD值）与吸光系数, 待测组分的浓度以及光路长度成正比关系。分光光度计采用的比色杯的宽度通常是1cm，所以光路长度固定为1cm。因此不同仪器，不同批次测量的数据具有同样的可比性。而酶标仪采用的是垂直光路, 所以光路的长度应该是液体液面的高度。所以测得的值受到样品的体积的影响。[font=宋体

最近一直在讨论这个问题：我个人觉得，对于普通的中低端分光光度计，技术相对已经很成熟了，竞争也比较激烈；但对于专用的分光光度计，能出售一整套的应用方案，再配上相应的试剂，这种行业专用的，小的便携式的分光光度计，其实还是很有市场的。我觉得这也是将来的一块兵家必争之地，对于这块，大家有何感想？是继续在通用的分光光度计市场拼杀呢，还是另辟蹊径，在行业专用这方面做点文章呢？不妨PK一下？

各位同仁，本人从没接触过分光光度计，对它的原理稍有了解，我现在想确切知道影响分光光度计响应值的因素有哪些？多谢了！

中空纤维超滤膜测试中涉及到紫外分光光度计与光电分光光度计,这两种分光光度计差异在哪? 是不是紫外是用的紫外光源,那么光电又是什么光源呢?哪种更实用些?谢了!

分光光度计 一、概述 分光光度计是利用物质对光的选择吸收现象，进行物质的定性和定量分析的光电式分析仪器，也是一种光谱仪器。根据电磁辐射原理，不同的物质具有不同的选择吸收，也即具有不同的吸收光谱。通过对吸收光谱的分析可方便的判断物质的内部结构和化学组成。随着工业生产和科学技术的不断发展，以及人们对物质认识的不断深化，，迫切要求发展新的先进的分析技术和仪器，分光光度计就是在这种历史条件下问世和发展的。 分光光度计是分光仪器和光度计的一种组合。按工作光谱原理的不同，分光光度计可分为研究物质分子吸收光谱的分光光度计、研究物质中[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度计、研究物质分子荧光发射的荧光分光光度计和研究物质原子荧光发射的原子荧光分光光度汁、研究分子喇曼散射光谱的喇曼光谱仪等。由于分光光度法具有分析精度高、测量范围广、分析速度快、样品用量少等优点，分光光度计已成为探索自然、改造自然、发展科学技术和生产的强有力的工具，是现代化分析实验室必备的常规仪器之一。二、分光光度计的基本组成 分光光度计主要构成部分有光源部分、光度计部分、单色器和接受记录部分。分光光度计的主要组成部分可以用图1表示：光源 单色仪 样品池 接受放大系统 显示记录系统 图1 分光光度计框图下面分别叙述这几个部分的光学系统的特性。1光源系统分光光度计的光源系统由光源和照明系统组成。1.1光源 分光光度计中对光源有一定要求，理想的辐射光源应具备以下一些特性： (1)在所使用的被长范围内提供连续辐射，即光源应发射连 (2)辐射能量随波长的变化尽可能小，且有足够的强度。 (3)使用寿命较长。 (4)要有良好的稳定性，特别是对单光束仪器。 在190一360nm波长范围紫外波段，常用的光源是氢弧灯和氘弧灯，氘灯的紫外光发射强度比氢灯强。在360一2500nm波长范围可见和进红外波段，常用白炽钨灯作为光源。图2为氢灯、钨灯的光谱能量分布图。在2—50µ m波长的中远红外波段内，常用的光源是能斯脱和硅碳棒，其光谱能量分布如图3所示。另外，对于要求较低的仪器，灼热的金属丝(如镍铬丝)可以作为红外光源；而在远红外区高压汞灯也是一种常用的光源。 图2 光源能量分布 图3 红外辐射光源A－氢灯，B一钨灯，C一不同温度T的黑体辐射 A－能斯脱，B－硅碳棒1.2照明系统 光源系统的照明系统一般有两中：单光束照明系统和双光束照明系统。光源系统中的反射镜的作用是把光源发出的光线集中在单色器的入缝上，使整个狭缝照明均匀并充满单色器的孔径。在照明系统为单光束的仪器，只要求光源反射镜引入一个高通量的光束即可，对光源的成像质量要求不高。图4为一种单光束照明系统光路图。在双光束照明系统的分光光度计中，光源系统并不直接照明单色仪的狭缝，如图5所示。光度系统处于单色器和光源之间，而在光度系统中，有一个梳形减光楔，光源必须首先成像在减光楔上。减光楔通过光度系统要求清晰地成像在单色器的入缝上。 图4单光束照明系统 图5双光束照明系统2单色器系统单色器是分光光度计的核心部分，仪器的主要光学特性和工作特性基本上由单色器决定。它的作用是将光源发出的白光色散成各种波长的单色光，从出射狭缝中导出，照于样品上。分光光度计中的单色器是一个完整的色散系统，除了色散元件——棱镜或光栅外，还有入射和出射狭缝以及一组反射镜。根据工作光谱范围、色散率、分辨串等性能指标的要求，可分别选用棱镜或光栅分光的单色器，双联单色器，也可采用滤色片分光的单色器等。2.1虑光片滤光片是最简单、最廉价的单色装置。由于它的单色性不好，使测定精度大大受到限制。它的特性可以用最大透光波长(或称中心波长)和谱带半宽度(有效带宽)来表征。最大透光波长是指在此波长光源的辐射最强。有效带宽是指最大透光度值的一半处的谱带宽度。在分光光度计中，滤光片一般用来消除单色器的杂散光。滤光片可分为五种：中性滤光片，截止滤光片，通带滤光片，干涉滤光片以及校正滤光片(标准滤光片)。2.2单色器从波长范围宽广的光源辐射中分出波长单一的单色光的光学装置称为单色器。单色器是由入射狭绕、准直元件、色散元件(常用核能或光栅)、和出射狭绕组成。棱镜可以作为从紫外到中红外区的合适的色散元件。在紫外范围，常用的材料是硅、矾土和人造蓝宝石。矾土和人造蓝宝石能用于200到4000nm，但昂贵，所以常用熔融石英作棱镜材料。在可见范围，硅的色散次于光学玻璃，所以可见分光光度计常用廉价的光学玻璃作棱镜材科。玻璃和石英棱镜担色器的色散特性模式图见图6。为了便于比较，将显示线性色散的光栅单色器的色散特性也列在一起．图6 三种材料单色器的色散特性棱镜单色器的光谱纯度主要决定于棱镜的色散特性和光学设计。通常使用两种形式的棱镜单色器——本生(Bunsen)单色器和利特罗(Littrow)单色器。光栅是一种十分重要、应用范围很广的色散元件，可以用于紫外、可见、近红外范围的色散。光栅分透射光栅和反射光栅。透射光栅是在一块玻璃上或其它透明材料上刻一系列平行的和紧紧相靠的凹槽。生产这样的母光栅需要精密的装置，比较昂贵。复制光栅比较便宜，虽在性能上次于母光栅，但能满足应用。反射光栅是在复制光栅的表面上喷涂铝的薄膜制成的。也可在抛光的玻璃表面或金属表面镀铝，然后在铝表面上刻大量的平行线制成的。光栅的刻线越多，分辨率越高，每单位长度的刻线越多，它的色散就越大。闪耀波长是闪耀光栅的另一个重要的参数，在闪耀波长，光栅有最大能量输出。光栅的主要缺点是有次级光谱干扰分析，且杂散光的影响比棱镜更大，故常配虑光片以去除杂散光。棱镜的主要缺点是色散波长的非线性分布。光栅单色器有几种排列方式，通常用的一种是埃伯特（Ebert)式（图7），是埃伯特1889年发明的。它用一个球面镜准直和聚焦，并对称地放置两个狭缝，波长选择是通过旋转光栅实现的。后来采尼(Czerny)和特纳(Turner)对其进行了改进，用两个小的球面镜来代替大而昂贵的埃伯特球面镜（如图8），使得结构紧凑，后为现代仪器所常采用。图7 埃伯特衍射光栅单色器 图8采尼和特纳衍射光栅单色器入射和出射狭缝狭缝是单色器的重要组成部分之一，关系到分辨率的优劣。它是由具有很锐刀口的两片金属片精密加工制成的。刀口相互之间是严格平行的，并且是在相同的平面上。狭缝宽度有两种表示方法，一是用狭缝的两刀口之间的实际宽度表示，单位是毫米（mm）；另一是用从单色器出来的有效带宽表示，单位是纳米（nm），通常用后者表示。3光度系统 紫外可见和近红外分光光度计的光度系统分为单光束和双光束两种。3.1单光束的光度系统单光束的光度系统简单，如图9所示。此系统在采用比较法测量样品的光谱透过率或反射率时，通常有两种方式：图9 单光束的光度系统方式1：在整个工作波段测定完标准后，再测样品，得出的结果进行比较。此方式的缺点：波长的重复性不高，这是由于两次测量标被及样品的时间间隔长，光源的不稳定，波长的重复性、接收系统的不稳定等因素造成的。方式2：在待测的每一波长处标准和样品依次快速地替换，分别进行测量，进行比较。此方式的优点是严格保持标准和样品完全相同的照明及测试条件，但却使样品和标准不断地处于运动状态，因此采用较小。现代的自动分光光度计多采用双光束法来实现比较测量。3.2双光束的光度系统双光束光度系统的显著的特点和最基本要求是保持光路对称。即两光路中的反射次数和相应的反射角、透射次数和相应透射面的曲率以及射入接收器的角度和照射面积等，尽量要求做到对称，并且光路应尽量缩短，光学零件也应尽量减少。图10所示是在紫外——可见和近红外分光光度计中常用的双光束光度系统。图10 紫外—可见和近红外分光光度计中常用的双光束光度系统红外分光光度计中光学系统的基本要求与紫外一可见分光光度计相同。但在光学平衡法测定中，应用减光器Wl改变参考光束的强度来实现零点平衡。为了校正仪器的100％透过率，在样品光路中设有减光器W2。图11为红外分光光度计的光度系统图。图11 对称式红外分光光度计光度系统

在经销商与厂家的大力攻势下，“公说公有理，婆说婆有理”，用户在选购分光光度计时感觉很迷茫，不知道如何选择。给大家选购时提些建议： 　　1.品牌（质量）：一个好的品牌深得人心，它的历史悠久，质量稳定，这是使用者最关心的问题。近几年在分光光度计市场上许多新的品牌不断涌现，有些鱼目混杂的样子，所以大家在选购时一定要先认识和了解这个品牌，最好选择老品牌，放心。　　2.厂家资质和实力：分光光度计是计量器具，生产厂商必须具有“制造计量器具许可证”，否则其产品为非法产品，质量也就没有保障。当然还有其他一些资质文件也可以关注一下，比如ISO等。　　3.售后服务能力：看厂家的售后服务网络分布及售后响应时间，服务网络的多寡决定了其响应时间的长短。并且可以在行业中多方了解厂家的售后服务口碑。　　4.仪器的技术指标和功能：分光光度计最重要的两个指标是带宽和杂散光，原则上是越小越好，当然带宽可根据实际工作需要而定；杂散光对分析误差影响较大，尽量选择杂散光低的仪器；做定性分析时仪器需具备扫描功能，做DNA/蛋白时选择有DNA/蛋白测试功能的仪器；对于光学系统，双光束优于单光束，但现在市场上出现了一些准双光束（或双光束比例检测）这种说法，就分析原理而讲，这种系统并不被推崇。　　5.价格：这就要根据自己的购买能力，选择性价比最优的产品。（选自网络，侵删）

分光光度计的应用常识分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230标示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。