单分子免疫检测

酶联免疫检测，哪些物质会造成假阳性？

[color=#333333]酶联免疫检测技术在食品卫生和安全检测中都有哪些应用[/color]

一些基础知识。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=18246]免疫检测的基础知识[/url]食品伙伴网

免疫测定（immunoassay，IA）是应用免疫学技术测定标本的方法，其基本原理是抗原抗体的特异性识别。酶联免疫吸附试验 （enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是实验室比较常用的免疫检测方法。因为可用于农残的初筛,所以特转载本专题为您详细讲解免疫检测中的基础知识、实验操作步骤、影响因素及质量控制。希望大家能对它有所了解.

[font=宋体][b]免疫检测技术以广泛应用于生物科学的各个领域。[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]免疫疾病诊断[/font][/font][font=宋体][font=宋体]用免疫血清学方法对人和动物传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病和变态反应疾病进行诊断，是免疫技术最突出的应用。尤其是酶标抗体技术，已成为多种传染病的常规诊断方法，如已有的人各型肝炎、猪瘟等[/font] [font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]试剂盒，它们简便、快速，又具有高度的敏感性和可重复性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]动物植物生理活动研究[/font][/font][font=宋体][font=宋体]动植物中存在一些如激素、维生素等活性物质，它们在体内含量极微少，但在调节机体的生理活动中起重要作用，因此通过分析测定这些生物活性物质的含量及变化来研究机体的各种生理功能（如生长生殖等）。由于这些物质含量极低，用常规化验方法难以准确测出。目前放射免疫测定和酶免技术已能精确测出[/font] [font=Calibri]ng(10 -9 g) [/font][font=宋体]及 [/font][font=Calibri]pg(10 -12 g) [/font][font=宋体]水平的物质，它们已成为测定动物、植物、昆虫中微量激素及其它活性物质，研究动物、植物生理和生物防治的重要手段。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]物种及微生物鉴定[/font][/font][font=宋体]各种生物之间的差异都可表现在抗原性不同，物种种源越远，抗原性差异越大，因此可用区分抗原性的血清学反应进行物种鉴定、物种的分类等工作。血清学反应在细菌、病原菌等微生物鉴定和血清型及亚型的分析方面已得到广泛应用。但对动物种源，植物和昆虫分类方面还是一个新的领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]动物、植物性状的免疫标记[/font][/font][font=宋体]通过分析动物、植物的一些优良性状（如高产、优质、抗逆性等）的特异性抗原，然后用血清学方法进行标记选择育种，这是一个很有前途的方向，它比分子遗传学标记选择育种简便。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]免疫增强药物和疫苗的研究[/font][/font][font=宋体]疫苗研究中需用血清学反应和细胞免疫技术测定免疫的效果。在研究一些免疫增强药物，尤其研究肿瘤药物时，需用细胞免疫技术分析测定它们对机体细胞免疫功能的增强作用。因为细胞免疫是机体抗肿瘤、抗病毒的一个重要机制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]发病机理研究[/font][/font][font=宋体]传染病的病原从机体特定部位感染，并在特定组织细胞内增殖，引起发病。一荧光抗体感染或免疫酶组化染色，可在细胞水平上确定发病等病原微生物的感染细胞，还可用于研究自身免疫病和变态反应性疾病的发病机理，如免疫复合物的沉积部位的分析。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]7.[/font][font=宋体]分子生物学研究[/font][/font][font=宋体][font=宋体]在基因工程的分离、克隆的筛选，表达产物的定性与定量分析，表达产物的纯化等均涉及到免疫技术。如通常用免疫沉淀方法分离[/font] [font=Calibri]mRNA [/font][font=宋体]基因，酶标抗体核酸探针（地高辛核酸探针）检测筛选克隆，免疫转印技术分析表达产物的分子量、 [/font][font=Calibri]ELISA [/font][font=宋体]或 [/font][font=Calibri]RIA [/font][font=宋体]分析表达量、免疫亲和层析纯化表达产物，免疫方法分析表达产物的性质如免疫原性。免疫技术已是分子生物学研究中必不可少的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，包括[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Flow Cytometry[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]IP/Co-IP[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Biacore[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Octet[/font][font=宋体]等检测技术。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]具体[url=https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service][b]免疫学检测服务[/b][/url]类型：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/spr-bli-assay-services][b][font=Calibri]SPR/BLI[/font][font=宋体]亲和力检测服务[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]Western Blot[/font][font=宋体]检测服务[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化[/font] [font=Calibri](IHC) [/font][font=宋体]单染服务[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫荧光[/font] [font=Calibri](IF) [/font][font=宋体]单染检测服务[/font][/font][font=宋体]多重染色服务[/font][font=宋体][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色及特殊染色服务[/font][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b][font=宋体]流式细胞[/font] [font=Calibri](FACS) [/font][font=宋体]检测服务[/font][/b][/url][/font][font=宋体][font=Calibri]ELISA/ELISpot[/font][font=宋体]检测服务[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]IP/Co-IP[/font][font=宋体]技术服务[/font][/font][font=宋体]石蜡组织芯片定制服务[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注义翘神州免疫学检测服务[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service[/font][/font]

食品安全检测试剂盒。现已有氯霉素、克伦特罗（瘦肉精）、磺胺嘧啶、沙丁胺醇、链霉素等快速检测试剂盒。沙丁胺醇酶联免疫检测试剂盒检测灵敏度达0.1ng/ml。ruojun 楼主，这里是技术交流，不能做广告，你可以选择技术特点，检测过程，问题等进行。

请问双流相酶联免疫检测读数仪和酶标仪有什么区别？就是GB5413.37-2010上第4法的仪器，和普通的酶标仪有什么区别？急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。急需。。。。谢谢。。

[font=宋体]流式细胞分析是一种在生物学和医学领域广泛应用的实验技术，它可以实现对细胞群体的快速、准确分析和分类。本文将详细介绍流式细胞分析的步骤和流式免疫检测的应用，帮助读者全面了解这一技术的原理、方法和应用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]流式细胞分析方案主要分为[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]个步骤： [/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①样品制备：应通过机械分离方法或化学解离技术制备单细胞悬液，如采用酶溶液或钙螯合试剂。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②封闭：通常采用抗[/font][font=Calibri]Fc[/font][font=宋体]抗体稀释液悬浮细胞，防止一抗非特异性结合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③抗体孵育：流式细胞分析的孵育步骤涉及多种组分，包括一抗、二抗、链霉亲和素和荧光染料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④流式细胞仪检测：将处理后的细胞通过流式细胞仪进行检测和分析，获取细胞的各项指标数据。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]适当的对照[/b][/font][font=宋体]除了目标细胞之外，每次进行流式细胞实验还应包含以下对照：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]至少一份未染色样品，与试样同时进行每一步的缓冲液孵育，以优化实验的流速和电压。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一份适当的阴性对照样品，与试样基本相同，但用在一抗的宿主种属中生产的同型对照替代试样中的一抗。该对照用于非特异性结合二抗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如有需要也可准备一份已知表达所有目标抗原的细胞组成的阳性对照，并与试样共同孵育，但仅用单色检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]流式免疫检测方法与应用[/b][/font][font=宋体]同其他免疫检测应用一样，流式细胞分析也可通过多种方法利用抗体探测特定的细胞基元。两大常用方法为：直接检测法和间接检测法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]直接检测法[/font][font=宋体][font=宋体]直接检测法采用一步染色工艺，仅需一抗即能特异性结合目标抗原，无需额外步骤，可直接与支持成像或其他结合状态检测的分子结合。在探测细胞表面抗原时，应避免固定细胞，因为固定可能导致抗体探针无法与目标抗原充分接触。因此，保持细胞活力对于数据采集至关重要。若需查找适用于直接检测法的抗体，推荐使用[/font][font=Calibri]Antibody Explorer[/font][font=宋体]抗体搜索工具，将搜索范围限定为“仅限一抗”，并将应用选择为“流式细胞分析”。这样，您将能够快速找到适合您实验需求的抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]间接检测法[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]间接检测法首先使用纯化抗体与目标抗原进行结合，然后使用荧光染料标记的二抗（能够特异性靶向一抗的宿主同型）与一抗进行特异性结合，形成一抗[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]荧光二抗复合物。通过将纯化的一抗与各种波长（或颜色）的荧光染料标记的二抗（特异性针对产生一抗的宿主同型）进行搭配，可以增强抗体库的模块化程度。这种方法能够提高实验的灵敏度和特异性，同时减少背景干扰和误差。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service]流式细胞检测技术服务[/url]，其优势：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]①具有 [/font][font=Calibri]20,000 [/font][font=宋体]次以上流式抗体筛选鉴定经验及多年流式诊断抗体研发经验，在实验方案设计、样品制备、数据分析等方面确保科学性、准确性和可靠性[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=宋体]②拥有 [/font][font=Calibri]1,000 [/font][font=宋体]余株自产精品流式抗体，覆盖细胞膜、胞内、核内及分泌抗原；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③自产 [/font][font=Calibri]Annexin V/7-AAD [/font][font=宋体]凋亡检测试剂盒，并储备多种流式检测常用试剂，大大节约购买试剂的等待时间和实际费用；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④可以提供近 [/font][font=Calibri]200 [/font][font=宋体]种细胞系选择，省去细胞样本寄送过程中的风险，并可以免费提供健康人外周血细胞对照品。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font]

[font='calibri'][size=13px]免疫学检测形成的原因有哪些？免疫学[/size][/font][font='calibri'][size=13px]检测包括哪些？[/size][/font]免疫学检测形成的原因：免疫学检测是基于免疫系统对外来物质或抗原的反应而产生的，可分为体液免疫学检测和细胞免疫学检测两大类。体液免疫学检测是通过血液、唾液、乳汁等体液样本中的免疫球蛋白、补体、免疫复合物等成分的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时，免疫系统会产生相应的抗体和细胞因子等免疫反应，这些免疫反应产物可通过体液免疫学检测方法进行检测。细胞免疫学检测是通过检测机体内的免疫细胞和免疫分子的含量及其分布来反映机体的免疫状态。当机体受到病原体或某些生物物质的刺激时，免疫系统会产生相应的抗原提呈细胞，并引导记忆细胞和效应细胞的产生，这些记忆细胞和效应细胞可以在特定情况下识别和消灭病原体或肿瘤细胞，这些细胞和效应细胞本身也可以被检测出来。总之，免疫学检测的目的是通过检测机体的免疫反应，了解机体的免疫状态，为疾病的诊断、治疗和预防提供重要的依据。免疫学检测包括哪些？免疫学检测是指通过各种方法检测机体对病原体或某些生物物质的免疫反应程度，以及机体内的免疫细胞、免疫分子和免疫活性物质的含量及其分布等情况的一种医学技术。免疫学检测广泛应用于各种疾病的诊断、治疗和预防，包括感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤免疫学诊断等。以下是一些常见的免疫学检测项目：体液免疫学检测：主要包括免疫球蛋白的测定，如IgA、IgM、IgE等；补体检测，如总补体溶血活性、补体C1、C2等；免疫复合物检测，如抗体-抗原复合物、补体-抗体复合物等；细胞免疫学检测：主要包括T细胞亚群分析、B淋巴细胞分化抗原检测、自然杀伤细胞抗体检测、T细胞活化抗体检测等；抗体检测：如抗药抗体、中和抗体等；细胞因子检测：如白细胞介素-2、-4、-6等；自身抗体检测：如抗核抗体、抗胰岛素抗体等；感染免疫检测：如病毒特异性抗体、细菌特异性抗体等。总之，免疫学检测是一种非常重要的医学技术，可以帮助医生判断机体的免疫状态，为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。免疫学检测是根据抗原、抗体反应的原理，利用已知的抗原检测未知的抗体或利用已知的抗体检测未知的抗原，可定性、定位和定量的检测。依托自主研发生产的优质抗体、蛋白试剂、先进的实验仪器以及经验丰富的技术人员，义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。义翘神州免疫学检测服务包含：①WB/Sally Sue高通量检测服务②[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service]流式细胞检测服务[/url]③免疫组化检测服务④多重免疫荧光和免疫组化服务⑤免疫荧光检测服务⑥HE染色及特殊染色服务⑦ELISA/ELISpot检测服务⑧IP/Co-IP检测服务⑨TMA芯片定制服务更多详情可以查看：https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

酶联免疫检测试剂中的预包被板稳定性不好的原因可能有哪些？1，包被浓度未达到最佳浓度或者说包被时间太短。也是灵敏度低的原因之一。2，封闭前的一步洗板洗涤过强，造成包被浓度减弱。也是灵敏度低的原因之一。3，封闭不完全。4，干板不彻底，这也是为什么有些试剂盒中的预包被板连同干燥剂一起封包，并且抽真空的最主要原因。

四种类型超敏反应发生的机制不同，同一抗原也可在不同条件下引起不同类型的超敏反应。四种类型超敏反应的免疫检测方法有所不同。I型超敏反应主要检测过敏原和测定血清特异性IgE.Ⅱ型超敏反应的检测重点是抗血细胞抗体。Ⅲ型超敏反应主要检测循环免疫复合物。Ⅳ型超敏反应可用皮肤试验来检测。 　　一、过敏原皮肤试验 　　皮肤试验简称皮试，是在皮肤上进行的体内免疫学试验。当试验抗原进入致敏者皮肤时，皮肤中结合有IgE的肥大细胞或致敏T细胞就会与试验抗原结合，引发即刻型或迟发型的皮肤超敏反应。试验抗原也可从注射部位进入微血管，与循环中的相应抗体结合，形成的免疫复合物可在局部沉积，激活补体引起炎症。所以皮肤试验主要用于检测I型和Ⅳ型变态反应，有时也用于检测Ⅲ型变态反应。 　　（一）试验准备 　　首先应当制备试验用抗原，如有合格商品可直接购买。可以作为变应原的物质种类繁多，例如动物皮毛、家禽羽毛、鸽粪、昆虫、螨类、真菌、花粉、杂草、物理粉尘和各种食品等都可能成为变应原。 　　不同抗原的制备方法不同，但一般包括以下几个步骤：①收集原料；②粉碎与匀浆；③脱脂与提取；④过滤与分离；⑤分装保存。分装保存之前应对提取产物进行鉴定。首先必须经过无菌试验、急性毒性试验和热原检查，保证提取产物无明显的毒副作用；还要测定产物的蛋白含量，用凯氏定氮法或磷钨酸沉淀法标定出总氮单位或蛋白氮单位。 　　试验部位应清洗干净，严格消毒，以免皮肤的不洁物引起非特异性反应或感染。当皮肤患湿疹、感染、皮炎或外伤时不宜进行皮肤试验。正在或近日服用免疫抑制剂或抗组胺药物者也不宜进行皮肤试验。

[font='calibri'][size=13px]免疫学检测优缺点有哪些？免疫学检测方法分享[/size][/font]免疫学检测优缺点介绍：免疫学检测具有快速、简便、高灵敏度和特异性等优点，因此在医学诊断和治疗中广泛应用。但是，免疫学检测也存在一些缺点，例如价格较高，对于某些特定的毒素可能无法检测，并且检测过程中可能会受到多种因素的干扰，例如操作不规范、实验条件不严格等。总之，免疫学检测具有很多优点，但也存在一些缺点，需要在实验设计、操作规范和质量控制等方面加强管理，以提高检测的准确性和可靠性。免疫学检测方法包括以下几种：①抗原抗体反应的相关检测，主要是免疫组化、免疫荧光、血凝抑制、放射免疫等。其中，免疫组化是应用标记的特异性抗体，在组织细胞原位，通过抗原抗体反应和酶底物的显色反应，对细胞中的抗原进行定位、定性的检测方法，是比较常用的一种方法。②免疫细胞的检测，主要包括细胞毒试验、FCM流式细胞术等。其中，细胞毒试验常用于肿瘤的免疫移植、排斥反应和病毒感染等方面的研究。③酶联免疫吸附试验（ELISA），是目前应用最广泛的免疫检测方法。该方法是将二抗标记上酶，抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来，根据酶作用底物后的显色颜色变化来判断试验结果，其敏感度可达ng水平。④免疫金胶体技术、胶体金技术等，是将二抗标记上胶体金颗粒，利用抗原抗体间的特异性反应，最终将胶体金标记的二抗吸附于渗滤膜上，此方法简单、快速、广泛应用于临床筛查。义翘神州建立了全面的免疫学检测平台，义翘神州免疫学检测服务优势：? 拥有成熟的免疫检测体系；? 大量优质的蛋白和抗体产品支撑；? 先进的实验仪器，经验丰富的技术员；? 优良的实验环境，完善的实验平台，为您提供最优质的服务。同时包括ELISA、Western Blot、IHC、IF、Flow Cytometry、IP/Co-IP、Biacore、Octet等检测技术。更多免疫学检测服务尽在https://cn.sinobiological.com/services/immunoassay-service

电化学发光免疫测定（Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI）是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般的化学发光（CL）不同，是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应，而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定，而且还可用于DNA／RNA探针检测。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290841_24973_1636364_3.gif[/img]

宇测生物完成数千万元Pre-B轮融资，本轮融资由正轩投资领投，老股东博远资本、创首投资和知名国际产业投资机构持续加注跟投。[color=#000000][b]本轮融资后宇测生物将重点推进医疗诊断、健康体检、医药检测等系统的市场化布局，打造国产高端诊断品牌；以神经标志物为核心，进一步完善神经血液标志物筛查和诊断方案，提高宇测单分子免疫检测技术核心品牌价值和能力。同时，公司将正式开启海外市场布局，实现国产高端品牌出海目标。[/b][/color][size=18px][color=#548dd4][b]一、神经科学血检市场蓄势待发[/b][/color][/size]全球人口老龄化带来的神经退行性疾病已经不容忽视。以阿尔茨海默病为首的神经退行性疾病已经给许多家庭带来巨大的身心、经济负担。有效的早筛、早诊和早治疗变得至关重要。近年来，随着超敏检测技术的快速发展，基于单分子免疫检测技术的血液生物标志物检测已被证明可以有效预测和诊断阿尔茨海默病，并已纳入国内外阿尔茨海默病诊疗专家共识。与此同时，针对AD病因的突破性靶向药物乐意保（仑卡奈单抗）通过国家药品监督管理局批准，正式进入中国，用于治疗由阿尔茨海默病引起的轻度认知障碍和阿尔茨海默病轻度痴呆，AD领域真正意义上完成了“有方法可测，有药物可医”的完整闭环。以阿尔茨海默病为首的神经科学诊疗市场展现出蓄势待发的蓬勃生机。[size=18px][color=#548dd4][b]二、单分子免疫检测技术的蓝海市场机会[/b][/color][/size]神经生物标志物在血液中的浓度极低，通常在pg/mL甚至fg/mL级别，传统免疫方法学受限于灵敏度水平，难以实现准确定量，无法推广临床应用。单分子免疫检测技术基于超高检测灵敏度，真正实现了神经标志物在血液中的精准检测和临床应用。随着单分子免疫检测技术日益成熟和市场化推广，新技术的发展将为IVD市场开拓百亿规模全新的蓝海机会。[size=18px][color=#548dd4][b]三、宇测生物的先发市场布局[/b][/color][/size]宇测生物凭借独立自主的单分子免疫检测平台，率先布局国内神经血液标志物市场，通过构建“产学研”高效转化平台，打造高端技术品牌，树立学术影响旗帜，推进以神经科学为核心的新型生物标志物的临床转化与市场推广，并已与国内多家头部医院形成深度合作，发表多篇高影响力学术论文。公司多年的技术沉淀和产品线整合，已完成在AD筛查、体检和诊断深度布局，全面覆盖上市AD核心指标的商业化试剂盒，推动单分子技术在神经血液标志物中的规范和标准，树立单分子免疫AD血检行业壁垒。宇测生物单分子免疫检测产品应用于高端科研和头部临床单位，预示着公司在神经系统疾病应用领域的领先地位。作为先行者，公司始终保持对单分子免疫领域的持续创新，不断推出新产品和新技术，保持先发优势，提高领先单分子免疫检测技术核心品牌价值和能力。[size=18px][color=#548dd4][b]四、国产化国际品牌建设规划[/b][/color][/size]宇测生物申请核心专利40+项，已授权20+项，拥有中国首张单分子技术发明专利，PCT专利获得中国、日本、加拿大、澳大利亚授权，美国、欧盟等国家区域正同步申请中。已就基于单分子免疫技术的神经血液标志物检测产品同多家国际企业达成合作。除了积极推进全球商业化战略外，扩大产品全球注册的力度,建立全球化运营体系,优化全球供应链管理,加强与国际科研机构的合作，共同开展针对神经血液标志物的前沿技术研究和应用开发，推动宇测生物成为具有国际影响力的全球化品牌。[来源：仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

[font='calibri'][size=13px]10种免疫荧光检测方法详解！从入门到专业！[/size][/font]免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括，细胞固定和通透，封闭，孵育一抗，二抗等。除了这些基本步骤，接下来的实验方法希望可以帮到您。1. 细胞固定和通透为达到蕞佳的检测效果，细胞需要经过固定和通透。步骤很重要，细胞和抗原需要保证蕞佳的结构，并利于抗体与抗原结合。通常情况下，2. 抗体特异性免疫荧光需要用到特异性非常强的抗体，可以避免高背景和不理想的蛋白定位结果。在大多数情况下，纯化抗体的效果很好，但是正确的对照可以帮助精-准定位抗原。使用只有二抗染色的片子作为阴性对照，有利于减少降低背景干扰。3. 合适的抗体稀释比例通过优化抗体稀释比例来优化染色，通常情况下 1ug/ml 的纯化抗体或者 1:100-1:1000 的抗血清足够达到特异性染色的结果。但在能保证低背景染色的前提下，可以通过增加浓度来提高信号强度。如果是第1次使用该抗体或测定某抗原，强烈建议浓度梯度实验。4. 优化缓冲液和封闭剂尽管很多抗原在常见的 Buffer 如 PBS 中可以很好的被染色，但是对于某些目的抗原，更换一下含有不同离子的缓冲液，比如钙、镁、钾等，可以带来很大程度上的改善。Rockland 可提供优化过的 IHC 用封闭缓冲液，同样适用于荧光染色实验。5. 选择正确的二抗如果您需要做免疫实验，我们强烈建议您选择进行过预吸附的二抗进行单染实验；如果是双重甚至是多重染色，那么必须使用预吸附的二抗。同时，请优先选择来自同一物种的二抗。6. 使用合适的细胞密度选择合适的细胞数量进行染色，当细胞数量过多时，细胞结构不好，导致染色背景深，低细胞密度，会使细胞贴壁不佳，状态不好。7. 多重染色对同一样本进行两个不同抗原的检测时，可以用各自的抗体进行同时染色，但要求两个一抗的种属来源不同，标记物不同，而二抗的种属来源需保持一致。8. 降低背景高背景是免疫荧光常见的问题，解决此问题可以用二抗来源的正常血清代替 BSA 做封闭液，降低抗体浓度，增加洗涤次数，洗涤至少三次，每次五分钟，推荐洗涤液为 PBS+0.05%Tween。9. 封片作为免疫荧光的蕞后一步，可以提高折射率，保护样品。10. 数据分析观察整体样片时，选择具有代表性的细胞进行数据获取与分析。以上是10种检测方法，但是针对免疫荧光检测服务，推荐义翘神州，服务优势：①技术员长期从事抗体质量控制工作，经验丰富。②拥有包括Nikon A1激光共聚焦显微镜等重要仪器，可满足您对样片、活细胞等样本的静态和动态观察拍摄。③检测结果准确、重复性高，实验结果可直接用于论文发表。更多免疫荧光检测服务详情可以参看https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service

希望大家对此进行评论．谈谈苏丹红检测方法－酶联免疫检测方法的发展潜力

哪位朋友知道奶制品中的IgG (免疫球蛋白 G) 检测方法啊？谢谢！

版上有做单分子检测的吗?进来交流交流吧!

大家好： 我想利用免疫电镜检测热应激前后小鼠囊胚中热休克蛋白70的定位情况，有两种方案：1.包埋前免疫电镜：胚胎经多聚甲醛-戊二醛混合液固定后，然后清洗，渗透，封闭，分别与一抗和二抗反应，然后再用锇酸固定，脱水，812包埋。2.包埋后的免疫电镜：胚胎经多聚甲醛-戊二醛混合液固定后，脱水，体温包埋剂渗透，包埋，聚合，超薄切片，最后进行免疫染色。 第一种方案：不知道热休克蛋白70的抗原性保存如何？另外，不知道免疫标记效果如何就进行包埋，是不是有点盲目？ 第二种方案 超微结构和抗原性都保存较好，试验重复性好。但是包埋剂比较贵，而且本试验室没有聚合用的低温冰箱和紫外灯。 请各位大虾帮帮我！

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service][b]免疫荧光技术[/b][/url]（[/font][font=Calibri]Immunofluorescence technique [/font][font=宋体]）是在免疫学、生物化学和荧光成像系统基础上建立起来的检测技术。技术原理是根据抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原特异结合，以荧光标记抗体示踪组织或细胞内相应抗原。免疫荧光技术因特异性强、灵敏度高和操作简便的优势广泛应用于免疫学、微生物学、病理学、肿瘤学以及临床检验等生物学和医学。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫组化，是应用免疫学基本原理[/font][font=宋体]——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的研究，称为免疫组织化学技术[/font][font=Calibri](immunohistochemistry)[/font][font=宋体]或免疫细胞化学技术[/font][font=Calibri](immunocytochemistry)[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]区别：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化和免疫荧光都经过免疫原，原理相似，只是显色剂不同，免疫荧光是免疫组化技术之一。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、免疫组化是应用免疫学的基本原理，即抗原和抗体特异性结合的原理，通过化学反应确定组织细胞中的抗原，使标记有抗体的显色试剂显色，并对其进行定位、定性和相对定量研究。在免疫组化过程中，常用的显示剂包括荧光素、酶、金属离子或同位素。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、免疫荧光是一种不会影响抗原和抗体活性的荧光色素，被标记在抗体或抗原上，然后与其对应的抗原或抗体结合，在荧光显微镜下呈现特异性的荧光反应。免疫荧光是免疫组化技术之一，具有特异性强、灵敏度高、速度快的特点。但相对结果判断的客观性不足，技术程序复杂。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫组化与免疫荧光的真正目的均为明确病理诊断，以便患者获得精准治疗。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有专业的技术人员和共聚焦显微镜等仪器平台，为客户提供高质量的免疫荧光检测服务，包括对细胞爬片、石蜡切片、冷冻切片和组织芯片等进行免疫荧光单染、双染、及多重染色等。可以为客户提供免疫荧光（[/font][font=Calibri]IF[/font][font=宋体]）检测服务和石蜡切片免疫组化（[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]）检测服务，有需求的朋友可以来义翘官网进行查询，详情参看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/immunofluorescence-service[/font][/font]

初乳中免疫球蛋白IgG检测一般都用什么方法？

[font=宋体][font=宋体]人体免疫系统是一个复杂而精细的网络，它时刻保护着我们免受外界病原体的侵害。其中，免疫自稳、免疫监视和免疫防御是免疫系统的三大核心功能，它们各自承担着不同的任务，共同维护着我们的健康。免疫自稳负责调节和维持免疫系统的内部稳定，防止免疫反应过度或不足；免疫监视则时刻监控体内细胞的异常变化，及时识别和清除可能的癌变或感染细胞；而免疫防御则是免疫系统对外界病原体的直接抵抗，通过产生特异性抗体和细胞免疫反应来清除入侵者。本文将深入探讨这三大功能的区别与联系，帮助读者更好地理解人体免疫系统的运作机制。[/font] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]一、免疫监视[/font][font=宋体]——区别敌我[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫监视是身体长期进化过程中形成的自然防御功能。这个功能似乎打开了第三个视角来监控身体的每一个动作。没有侵略者，没有异己[/font][font=Calibri]......[/font][font=宋体]免疫监测最重要的是区分敌人和我。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]监视功能有两个方面[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①自我识别[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]自我识别是指免疫系统如何识别身体内的正常细胞和组织，以避免对它们产生攻击。这是非常重要的，因为免疫系统必须能够区分自身组织和外来物质之间的差异。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②异常细胞监测[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]异常细胞监测是免疫系统如何检测和识别异常细胞的过程。这些异常细胞包括被感染的细胞、突变细胞、癌细胞等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]二、免疫防御[/font][font=宋体]——重要保障[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫防御是指通过识别和消除外来病原体来保护身体免受疾病入侵的过程。免疫防御由免疫系统中的各种细胞免疫和分子共同发挥作用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]如何发挥免疫防御的作用？[/font][font=宋体]当免疫系统检测到外来病原体时，他将启动免疫防御机制，将免疫细胞引导到感染位置，并以各种方式消除病原体。免疫细胞包括不同类型的白细胞和淋巴细胞，其功能和特征不同。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫防御除了直接消除病原体外，还有另一个重要的作用，即刺激免疫细胞产生抗体，从而促进身体产生免疫记忆。当身体再次遇到同一病原体时，免疫系统可以快速、更有效地抵抗它，然后再次预防疾病。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]但免疫防御可不是绝对的！有时病菌会以各种方式避免免疫系统的攻击，使感染难以有效控制。例如，一些病菌可以通过改变其表面抗原的结构来防止被免疫细胞识别，然后避免攻击。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]此外，一些病原体还能通过影响免疫系统的功能来抑制免疫反应，从而获得更长的生存时间。因此，有必要不断研究和实践免疫系统的机制，以及病原体的避免策略，然后开发更有效的辅助治疗策略。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]三、免疫自稳[/font][font=宋体]——维持平衡[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是指机体免疫系统在正常状态下维持一种平衡状态，以保持免疫系统的正常功能和机体的健康。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是一个复杂而精确的调节过程，涉及多种细胞类型、分子信号和调节机制。它的目的是确保免疫系统对病原体和异常细胞的敏感性和应答能力，同时避免对自身组织的过度反应和自身免疫疾病的发生。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫自稳是怎么发挥作用的？[/font][font=宋体]免疫自稳的关键是保持免疫系统的平衡。免疫系统需要在处理外部侵入的病原体时快速启动免疫反应，但也需要在免疫反应结束后及时关闭反应，以免损害自己的组织。通过调节免疫细胞之间的相互影响，保持免疫系统的平衡，避免过度激活或自身免疫疾病的发生。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总之，免疫细胞的三大作用机制即：免疫监视[/font][font=宋体]——区别敌我、免疫防御——重要保障、免疫自稳——维持平衡[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫细胞在人体内起着至关重要的作用，它们是维护人体健康不可或缺的卫士。然而，随着年龄的增长，人体的免疫细胞数量会逐渐减少，这也是人体衰老的一个重要标志。为了保持免疫力的强盛，我们需要及时补充免疫细胞，让它们继续发挥守护身体的作用。只有这样，我们才能保持健康的体魄，远离疾病的侵扰。因此，重视免疫细胞的补充与养护，对于维持人体免疫力的稳定和健康至关重要。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供多重染色服务，包含[url=https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services][b]免疫荧光和免疫组化服务[/b][/url]，更多详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/fluorescent-multiplex-ihc-services[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b][font=Calibri] [/font]

食物过敏原可以定义为包含在食物中引发或激起过敏反应的物质，在Ⅰ型IgE应激的过敏反应中，过敏原通常是在特定食品中含有的含量丰富、天然存在的蛋白质。 随着全球经济一体化和食品贸易国际化，食品过敏问题具有更大的潜在危险性，因此建立可靠、定量的过敏原检测方法对于确保食品标签的一致性和消费者的安全十分必要。然而因为食物过敏原在食品中的含量少以及可能被食品基质包裹等原因，食物过敏原的生物活性的检测十分困难，另一个检测问题是检测方法的灵敏度，一般来说，不同食物中检测极限要求在1—100ppm（每kg食物中含mg量级过敏性蛋白）。 几乎所有的过敏原（抗原）都是蛋白质或多肽类物质，多肽分子量一般在5-70KDa之间，也有一些过敏原分子量超过200KDa以上。某种食物或食物制品是否存在致敏性，通常是依据确诊敏感个体血清中键合的IgE来判断，一旦过敏原可以确认和纯化，就可以在兔子、老鼠、山羊、绵羊或鸡这些动物中获取抗体，为常规食品分析提供免疫检测方法。 现在，检测食物成品中潜在过敏原有几种技术上的可能性，采用的方法包括直接检测过敏原（蛋白质）自身或检测引起食物过敏可能的标志物，如果理想的标志物就是过敏原蛋白，其化学特性不能很好表达或检测极限达不到要求，则检测过敏原不可行。另外，许多致敏食物中包括多种过敏原蛋白，含量也有所不同。作为潜在过敏食物制品或成分的标记物，特定的蛋白质或DNA片段可以作为靶记进行检测。以检测蛋白为基础的方法通常包括免疫化学检测方法，例如RAST(radio-allergosorbent test)、EAST（enzyme allergosorbenttest）、RIE（rocketimmuno-electrophoresis）、免疫印迹（immunoblotting）和ELISA（enzyme-linkedimmunosorbentassay）。其中RIE和免疫印迹方法是定性和半定量方法，RAST、EAST和ELISA是定量分析方法。现在只有ELISA法因其准确性高、易操作和标准化的可能性等，在常规食品分析中常用。DNA水平上的测试方法是依照多聚酶联反应（PCR）来识别特定的DNA片段，实时（real-time）PCR方法可以得到高精确度的检测结果。 检测方法的选择主要考虑所测试的食品特性（有无可检测的特定抗体或DNA以及可达到的检测极限）以及食品制造过程的加工历史等。以蛋白或DNA为基础的检测方法，不同的食物成品的检出和定量检测上有各自的优、缺点。对于以DNA为检测对象的过敏原检测有不同争议，因为蛋白质是过敏原成分而加工过程会对蛋白、核酸等产生不同影响。

[font='calibri'][size=13px]MC2-1数显折光仪[/size][/font]1、 [size=18px]应用场景[/size][size=18px]犊牛对初乳中免疫球蛋白的吸收率在出生后达到高峰，并且在出生后的72h内吸收量会迅速下降。因此，尽早饲喂初乳是保证犊牛充分吸收免疫球蛋白，获得被动免疫并转为主动免疫的关键点，所以说把控初乳的质量非常重要。[/size]2、 [size=18px]质量判定对照表[/size][size=18px]初乳质量判定表：[/size][table][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]折射仪[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]IgG mg/mL[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]质量判定[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]＞22%[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]＞50[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]好[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]20.0-21.9%[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]24.99-49.9[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]一般[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]＜19.9%[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]＜25[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]差[/size][/font][/align][/td][/tr][/table]3、 [size=18px]操作步骤[/size][size=18px]首先点击read开机，打开测样区盖，加入纯净水校准，长按CAL，仪器显示屏闪CAL，在快速点击一下，屏幕显示0.00说明仪器校准成功，将纯净水倒出，冲洗一下后，拿吸水纸擦干，不要划到玻璃，我们要测的样本是初乳，选择S01模式下检测初乳，在检样区加入样本初乳，盖上盖子避免阳光直射，点击read开始测量，2s后屏幕显示测量数值。测量完毕后将样本倒掉，用纯净水戏精，吸水纸擦干。仪器静置自动关机。[/size]4、 [size=18px]测量结果[/size][table][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]样品名称[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]折光率%[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]1[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]22.3[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]2[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]22.6[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]3[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]22.4[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]4[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]21.9[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]5[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]22.4[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]6[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]22.0[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]平均值[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]22.27[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]STD[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]0.24[/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='calibri'][size=18px]CV[/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='calibri'][size=18px]1.09%[/size][/font][/align][/td][/tr][/table]5、 [size=18px]注意事项[/size][size=18px]1.仪表每次测量完一种样品后，请清洗并擦干滴液口。[/size][size=18px]2.不要残留腐蚀性物质在滴液口上。[/size][size=18px]3.在对腐蚀性液体进行完测量后，请尽快清洗滴液口以避免对棱镜和金属表面造成不可修复的损伤.。[/size][size=18px]4.擦洗时请使用柔软的布或纸进行擦拭，避免划伤滴液口玻璃。 [/size][size=18px]5.滴管和无尘布不使用时，请用清水洗干净，晾干后再放入包装盒内.。[/size][size=18px]6.如果长时间不使用仪表，请卸下电池，并在干燥阴凉环境下保存。[/size]

雌二醇（17β－Estradiol）是天然雌激素的重要成分，为防止儿童性早熟等问题，食品中尤其是畜禽产品的雌二醇检测不容忽视。胶体金免疫层析技术（GICA）在检测小分子有机物方面越来越受到重视。其基本原理是胶体金颗粒能够稳定吸附蛋白质，而蛋白质的生物活性无明显变化，所以它可以取代酶标记抗体〔1，2〕。本实验采用标记有雌二醇单克隆抗体的胶体金颗粒与相对应的固定在硝酸纤维膜上的雌二醇结合物相结合，固定有雌二醇结合物的检测线处就显现明显的颜色〔3，4〕。本法具有灵敏度高、特异性强、简便快速、成本较低、结果轻易判读等优点，适用于样品的初步筛选。[b]1材料与方法[/b]11试剂与仪器氯金酸（上海化学试剂厂）；牛血清白蛋白、卵清白蛋白、兔抗鼠多抗（天津联星生物公司）；雌二醇标准品、雌二醇单抗、17β－Estradiol－6－one6－（o－carboxymethvyoxime）美国Sigma公司）；其他试剂均为国产分析纯。硝酸纤维膜、玻璃纤维膜（美国Millipore公司）；BeckmanDu530分光光度计（德国Beckman公司）；低温高速离心机（军事医学科学院）；点膜机（美国Bio－Dot公司）。12方法121胶体金的制备用三蒸水溶解氯金酸，使其终浓度为01g／L。先进行沸水浴，待氯金酸溶液煮沸后，每100ml加入1％柠檬酸三钠25ml，再沸水浴下快速搅拌，直到氯金酸溶液的颜色稳定，继续沸水浴10min〔5〕，冷却至室温后，用透射电镜镜检并用分光光度计检测颗粒均匀度及粒度。最后置于4℃冰箱保存备用。122最适标记蛋白量的确定用02mol／LK2CO3将胶体金溶液调至pH为82，然后取试管9支，分别加入10ml胶体金溶液。将雌二醇抗体逐级稀释后，各取等体积稀释液顺序加入上述试管中，混匀，另设一不加抗体的对照管。放置10min，在各管中加入01ml的10％NaCl，混匀后静置2h。观察各管中胶体金溶液变化，未加蛋白及加入量不足的溶液颜色由红变蓝，而加入蛋白量达到或超过时的溶液则保持不变。标记蛋白量即为最低稳定胶体金溶液不变色的蛋白量基础上再加20％。123胶体金探针的标记将抗体用0005molNaCl溶液透析过夜，离心除去蛋白沉淀，调至05mg／ml。取胶体金100ml，用0，2mol／LK2CO3将胶体金溶液调至pH为90，磁力快速搅拌下缓慢加入24ml稀释的雌二醇抗体，继续搅拌10min，加入牛血清白蛋白（BSA），使其最终浓度为1％，再搅拌10min。将初步制得的胶体金探针以4000r／mm离心20min；弃沉淀，上清以10000r／min离心60min；弃上清，沉淀用001mol／L的磷酸盐缓冲液（PBS）（含1％牛血清白蛋白）重新悬浮；同前离心洗涤2次，将沉淀用001mol／L的PBS（pH82，含1％BSA，002％NaN3）悬浮，4℃保存备用。124抗原的合成小分子物质难以固定在硝酸纤维膜上，只有使它连上大分子物质才能较好地固定。本实验采用混合酸酐法制备完全抗原。雌二醇－6－肟43mg，加入三正丁胺50μl，二氧六环4ml，冰浴冷却到10℃以下，加入氯甲酸乙酯15μl〔6〕。4～10℃下反应30min。配制卵清白蛋白（OVA）溶液（OVA10mg，3ml水，3ml二氧六环，1mol／L氢氧化钠03ml）。将配制好的OVA溶液加入反应液，4℃冰浴搅拌6h，反应过程中，用氢氧化钠维持pH值为8。反应完毕后，将反应液加入透析袋，透析2d。将透析液调至pH45，冰箱4℃，放置4天，有黄色沉淀出现。离心收集沉淀，冷冻干燥，4℃冰箱保存。将OVA溶于透析液内作为参比，用紫外光谱法对雌二醇－6肟－OVA进行定性检验。经紫外测定证实蛋白质已与雌二醇衍生物结合。125胶体金免疫层析试纸条制备测试条由玻璃纤维膜、硝酸纤维膜、加样纸、吸水纸4部分组成。将玻璃纤维膜裁成6mm的细条，然后放入含1％BSA、1％Tween－20的PB液中浸泡30min，37℃烘干，最后将胶体金探针灌注已处理好的玻璃纤维膜上，真空干燥备用。在硝酸纤维膜上用点膜机将上述抗原和兔抗鼠IgG喷成2条线，分别为检测线和对照线，经真空干燥后，用1％BSA、001mol／LPBS（pH90）封闭2h，以001mol／LPBS洗涤，再真空干燥。将30mm吸水纸、25mm硝酸纤维膜、6mm玻璃纤维膜、15mm加样纸，由顶部依次粘于PVC板上，裁成细条备用。126检测与判读样品：含已知浓度雌二醇样品的乙醇溶液分为3组，第1组不加雌二醇，第2组为02μg／ml雌二醇，第3组为04μg／ml雌二醇。将加样纸一端插入待测液，湿润后取出，水平放置，约3～5min，观察结果。如试纸条硝酸纤维膜上仅对照线呈一条紫红色带为阳性；如出现2条紫红色带为阴性；如质控线不出现紫红色带，无论检测线是否出现，测试结果均无效。[b]2结果与分析[/b]21胶体金颗粒大小选择胶体金颗粒吸附蛋白并显示检测结果，其大小是重要影响因素之一。胶体金颗粒的大小，由制备胶体金时加入的柠檬酸三钠量决定，当柠檬酸三钠加入越多，胶体金颗粒也越多，但颗粒直径越小，反之胶体金颗粒越大。胶体金颗粒小，结合蛋白量少，反应结合率低，另外难以显示明亮清楚的颜色，影响显色效果；胶体金颗粒大，其结合蛋白后不稳定，不易保存，另外其结合蛋白后难以通过膜〔7〕。本实验选用的胶体金颗粒直径约为15min，既可以通过膜，反应彻底，又易保存，反应结果显色清楚。22胶体金颗粒鉴定胶体金颗粒大小及均一程度是检测结果可靠的基础，制备完毕后须经质量鉴定才能应用。用BeckmanDu530分光光度计对胶体金进行扫描，发现其主峰宽度较小，表明制备的胶体金颗粒较均匀，λmax为520nm（图1），表明其粒度约为15nm〔8〕。用电镜观测结果（图2）与分光光度计测定结果一致。电镜观测是鉴定胶体金颗粒粒径及分布的标准，但这种方法不便用于日常工作使用，而用分光光度计测定操作简便，更适合实验室日常使用。图1胶体金的可见光谱图（略）23最适蛋白量阴性对照为未加抗体管，1～7管抗体浓度分别为10，12，14，16，18，20，22μg／ml，阳性对照为胶体金溶液。可见，本实验最适标记蛋白量为20μg／ml（图3）。24E2－OVA浓度用PBS（pH74）溶解E2－OVA浓度为005～10mg／ml，喷在硝酸纤维膜上作检测线，发现E2－OVA浓度越高，检测液中也需要越高浓度的E2与之竞争，检测灵敏度也就越低。但是，E2－OVA浓度低于05mg／ml，检测线颜色太弱，难用肉眼分辨。图2胶体金电镜图（略）阴性对照为未加抗体管；阳性对照为胶体金溶液图3胶体金与雌二醇抗体结合浓度确定实验（略）25检测限本实验的检测限是以完全看不见检测线为最低检测限〔9〕。将雌二醇标准品用甲醇配制成04，02，01，005μg／ml4个标准溶液，用上述检测方法进行检测（图4）。由图可见，最低检测线为100ng/ml。图4试纸条检测样品（略）26对比实验取30份样品，检测分为3组，第1组不加雌二醇，第2组加02μg／ml雌二醇，第3组加04μg／ml雌二醇，分别用GICA法与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]法（GC／MS）检测。实验结果显示，第1组2种方法均未检出；第2组GICA法阳性9粒，阴性1粒，GC／MS法阳性10粒；第3组2种方法均检测阳性。由此可见，与标准检测方法相比，GICA法准确度为9667％。27交叉反应试验实验结果显示，与己烯雌酚、炔雌酚、壬基酚、阿特拉津及双酚A等环境内分泌干扰物中的环境雌激素无交叉反应，表明该方法具有良好的特异性。[b]3小结[/b]目前，关于雌二醇的检测有气、液相色谱和光谱、质谱等方法，但其仪器昂贵、操作复杂、检测时间较长。本文建立的免疫胶体金层析法具有灵敏度高、特异性强、简便快速、成本较低、结果轻易判读等优点，且无需任何仪器，操作简单，适用于样品的初步筛选。[list][/list]

在用酶联免疫法测定抗原或抗体时，不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式，并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择，对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解，并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此，本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会，供同道参考。一 材料和方法1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒；eppendorf 20-20ul的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。3.方法 底物液配制：底物液A、B各5ml混合，加入微量酶标记物，再加入5ml终止液，呈微黄色，混匀待用；利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板，用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液，另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm（无630nm）的双波长检测，在ST-360上分别进行450nm单波长和450nm及630nm的双波长检测吸光度各两次。二　结果　　1.分别对所得结果进行统计，发现单、双波长测定结果有较大的差异，双波长测定结果的CV值远小于单波长测定，结果见表1。2.对ST-360两次重复测定结果进行分析，结果基本一致，见表2。表1酶标板吸光度在两台酶标仪上的测定统计结果酶标仪 BIO-RAD550 ST-360 波长 450nm 450nm+655nm 450nm 450nm+630nm 最小值 0.125 0.126 0.130 0.131 最大值 0.154 0.139 0.153 0.141 均值 0.1356 0.1329 0.1399 0.1361 标准差 0.00671 0.00267 0.00467 0.00247 CV（%） 4.94 2.01 3.34 1.82 最大值/最小值 1.232 1.103 1.177 1.076 表2 ST-360酶标仪两次吸光度测定统计结果波长 450mnm 450nm+630nm 1 2 1 2 最小值 0.130 0.129 0.131 0.131 最大值 0.153 0.152 0.141 0.141 均值 0.1399 0.1391 0.1361 0.13711 标准差 0.00467 0.00495 0.00247 0.00229 CV（%） 3.34 3.56 1.82 1.67 三　讨论　　1.酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同，一般分光光度计是水平光路，而酶标仪则是垂直光路，但测定原理相同，都是使用朗伯-比耳定律，测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小，不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。2.酶标仪在用单波长测定吸光度时，除受到测定干扰（样本的浊度、干扰色等）和电路干扰（包括噪音、漂移、电压等）等因素外，受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中，由于液体表面张力的作用，液体的表面不是一个平面，而是形成一个凹面，从侧面看似凹透镜，这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响，光线在通过液体时，除正常被液体吸收一部分外，尚有部分被折射和反射（如光线通过凹透镜那样），影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源，如果每次能在同一部位检测，吸光度的重复性将得到保证，但由于机械运动等造成的误差，不可能保证每孔都在相同部位被检测，因此造成了孔与孔之间有一定的差异。结果见表1，整块板单波长检测的CV在3%以上，吸光度最高值和最低值的相对误差达17%以上。3.在双波长测定中，减少了测定干扰和电路干扰，因此测定结果明显好转，结果见表1，整块板样本的CV在2%以下。ST-360在进行稳定性观察中，如表2所示，两次检测结果基本一致，这表明ST-360的稳定性较好。同时，从表1也可以看到，科华公司生产的ST-360与BIO-RAD 550的检测结果一致，两者的检测性能基本相同。4.由于液体表面张力的不同，导致单波长测定时的误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到最后加入底物和终止液后的液面情况，用加入表面活性剂的洗涤液清洗后，形成的液面更凹，对单波长检测的影响更大，并且与表面活性剂的浓度成正比。而且中性蒸馏水洗涤后，单、双波长检测的结果基本一致。5.在酶联免疫法测定抗原抗体中，由于所使用的底物不论是邻苯二胺（OPD）-H2O2，还是四甲基联苯胺（TMB）-H2O2，显色终止后，在630nm和655nm处的吸光度值都只有吸收峰处（492nm/450nm）吸光度值的1%以下，因此，利用双波长检测，不会影响检测灵敏度。建立在进行酶联免疫检测时，酶标仪比色应该首选双波长。这样可以提高临界值处标本的分析正确度，减少实验误差。