一、实验目的了解稀释平板计数的原理,掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法,认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。二、实验原理 稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落,即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。计数时,首先将待测样品制成均匀的系列稀释液,尽量使样品中的微生物细胞分散开,使成单个细胞存在(否则一个菌落就不只是代表一个细胞),再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中,使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数,故又称活菌计数。一般用于某些成品检定(如杀虫菌剂等)、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。三、实验器材 1.活材料:苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)菌剂。2.培养基:牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(附录三、1)3.器材:90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。四、实验方法 1.样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g,放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中,用手或置摇床上振荡20 min,使微生物细胞分散,静置20-30s,即成10-1稀释液;再用1ml无菌吸管,吸取10-1稀释液lml,移入装有9ml无菌水的试管中,吹吸3次,让菌液混合均匀,即成10-2稀释液;再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml,移入装有9ml无菌水的试管中,也吹吸三次,即成l0-3稀释液;以此类推,连续稀释,制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液(图22-1)。图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养用稀释平板计数时,待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时,稀释度应高,反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时,采用10-7、10-8、10-9稀释度,测定土壤细菌数量时,采用10-4、10-5、10-6稀释度,测定放线菌数量时,采用l0-3、10-4、10-5稀释度,测定真菌数量时,采用10-2、10-3、10-4稀释度。2.平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。 (1)混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9[fo
请问平板计数琼脂高压后为什么变色了,还能用吗,急救,谢谢大家了
我做微生物时间不是很长,这一次实验发现了这么一个问题。我做了两个稀释级1:10和1:100的供试液,各自进行营养琼脂平板的培养。观察结果的时候,我发现,1:10稀释级的两个平板都没有菌落生长,但是1:100稀释级的两个平板各有1个和2个菌落生长,而且菌落的形态也不像平常黄白实心的圆点,而是呈絮状的,有点像霉点一样的。像这种情况的话,是样品本身含有的菌还是样品被污染了呢?结果是要按1:100的稀释级来计数吗?
我现在碰到了一个难题,CNAS上要求:所有实验室用的培养基及试剂使用之前都要进行验证,但是如何验证呢?平板计数琼脂如何验证呢?北京陆桥的琼脂不稳定,有哪位高手可以告诉我,平板计数琼脂如何验证?那实验室用的其他培养基及试剂如何验证?先谢谢了
出口食品平板菌落计数 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0168-92代替 ZB X09 001-86 Plate count for bacterial colonies in food for export 1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。 本标准适用于各种出口食品及其原料,有专门规定检验方法的除外。2 设备和材料2.1 工作台:超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台。琼脂平板在工作台上暴露15 min,每平板不得超过15个菌落。2.2 恒温培养箱:36±1℃。2.3 恒温水浴箱:45±1℃。2.4 均质器。 2.5 振荡器。2.6 吸管:1、10和25mL,具0.1mL刻度。2.7 平皿:直径为90 mm。2.8 稀释瓶:广口瓶或三角烧瓶,容量为200 mL和500 mL。2.9 玻璃珠:直径为5mm左右。 2.10 天平:感量0.1g。3 培养基和试剂 3.1 平板计数琼脂。3.2 75%乙醇。3.3 稀释剂:磷酸盐缓冲稀释液。4 操作程序 4.1 样品制备 4.1.1 以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内,如有包装,则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。4.1.2 制备样品匀液4.1.2.1 固体或半固体食品:以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1~2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。4.1.2.2 干燥或干粉食品:以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂和适量玻璃珠的500 mL稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1 : 10的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次,也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。4.1.2.3 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品, 放入装有225mL稀释剂的500mL稀释瓶中,按4.1.2.2条中所述方法迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2~4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。4.2 稀释样品匀液 4.2.1 用10 mL灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10 mL,放入装有90 mL稀释剂的200mL, 稀释瓶中。按4.1.2.2条中所述的方法,迅速振摇。制成1:100的样品液。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中,吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。4.2.2 分别用10mL灭菌吸管按4.2.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液,如10**-3、10**-4、10**-5……。4.3 平板接种4.3.1 对于每一个样品,选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。 4.3.2 分别用灭菌吸管吸取1mL样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3 min,应按4.1.2.2条所述方法再振摇该样品液。4.3.3 分别加12~15mL平板计数琼脂(已放45+1℃的水浴中恒温)到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜和旋转。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1 mL稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基,每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。4.4 培养 待琼脂凝固后将平皿翻转,立即放进36±1℃的恒温培养箱内培养48±2h。培养箱应 保持一定的湿度,经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15%。4.5 菌落计数和记录4.5.1 培养后,立即计数每个平板上的菌落数。25~250个菌落为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0~4℃,但不得超过24 h。 4.5.2 如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内, 先计算两个平板的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品1)。4.5.3 如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值,再计算两个稀释度的平均值,然后计算每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品2)。4.5.4 当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数,计算两个平板上的平均菌落数,将平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*), 表明该数系从菌落数在25~250这一范围之外的平板估计所得(下表,样品3)。4.5.5 当所有平板上的菌落都超过250时,则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4)(下表,样 品4)。4.5.6 如果所有稀释度的平板都没有菌落,则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4条) (下表,样品5)。4.5.7 同一稀释度的两个平板中,一个有25~250个菌落,另一个的菌落多于250个,两个平板都要计数。计算方法同4.5.2条(下表,样品6)。4.5.8 两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25~250个范围内,而另一个的菌落数高于250或低于25,四个平板都要计数。计算方法参照4.5.2条和4.5.3条(下表,样品7)。 4.5.9 某稀释度的两个平板都有25~250个菌落,而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在 25~250范围内。四个平板都要计数,计算方法参照4.5.2条和4.5.3条 (下表,样品8、9)。4.5.10 蔓延生长菌落 通常有三种不同类型的蔓延生长菌落。第一种类型是链状菌落,菌落之间没有明显界线,这些菌落是当琼脂和试验物混合时,一个细菌块被分散所致;第二种类型是在琼脂和 平皿底之间形成的水膜样菌落;第三种是在平皿边缘或琼脂表面形成的水膜样菌落。如果所选择的平板出现过量的蔓延菌落生长,以致a.被蔓延菌落盖住的地方,包括由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的50%,或b.由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的25%,这样的平板报告为“蔓延菌落”,不予计数。计数其他平板上的菌落数,将这些数值的算术平均值报告为平板菌落数(下表,样品10)。 当有必要计数除以上a.和b.外的蔓延生长菌落时,将三种不同类型的蔓延菌落分别计数。对于第一种类型,如果仅有一条链,将它作为一个菌落计。如果有来源不同的几条链, 将每条链作为一个菌落计,不要把链上生长的各个菌落分开来数。第二种和第三种类型的蔓延生长形成易于鉴别的菌落,即按一般菌落计数,把计数的蔓延生长菌落数同一般菌落数加在一起,计算平板菌落数。4.5.11 操作者对同一平板复核自己的计数结果,其差异应在5%之内,而其他人对这一平板重复计数,其差异应在10%之内。否则,应找出原因,加以校正。 4.6 计算和记录数字 适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释倍数计算出每克(毫升)样品中平板菌落数。 记录时,只有在换算到每克(毫升)样品中平板菌落数时,才能定下两位有效数字,第三位数字采用四舍五入的方法记录。也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式(见下表中的例子)。5 结果报告 报告每克(毫升)样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。 平板菌落数计算 样品号 菌 落 数 平板菌落数/g(mL) 1:100 1:1000 1:10000 1 多不可计 175 16 多不可计 208 17 190000(1.9×10**5) 2 多不可计 224 25 多不可计 245 30 250000(2.5×10**5)* 3 18 2 014 0 0 1600(1.6×10**3)* 4 多不可计 多不可计 523多不可计 多不可计 487 5100000(5.1×10**6)* 5 0 0 00 0 0 <100 (<1.0×10**2)* 6 多不可计 245 23 多不可计 278 20 260000(2.6×10**5) 7 多不可计 225 21多不可计 255 40 270000(2.7×10**5) 8 多不可计 210 18多不可计 240 28 230000(2.3×10**5) 9 多不可计 260 30 多不可计 230 28 270000(2.7×10**5) 10 多不可计 245 35多不可计 230 蔓延菌落 290000(2.9×10**5) 注:带星号*者为估计数。附 录 A 培养基制备 (补充件) A1 平板计数琼脂 胰蛋白胨 5.0g 酵母浸膏 2.5g 葡萄糖 1.0g 琼 脂 15.0g 蒸馏水 1000mL 将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装试管或烧瓶,121℃高压灭菌15min。最终pH7.0±0.1。A2 磷酸盐缓冲稀释液 贮存液: 磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g 蒸馏水 500mL 用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。 稀释液:用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。附加说明: 本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。 本标准由中华人民共和国河南进出口商品检验局、湖南进出口商品检验局负责起草 本标准主要起草人李志培、邓明义。 本标准主要参考美国食品和药物管理局(FDA)《细菌学分析手册》第6版第4章(1984年)。 中华人民共和国国家进出口商品检验局1992-12-28批准 1993-05-01实施
出口食品平板菌落计数 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0168-92代替 ZB X09 001-86 Plate count for bacterial colonies in food for export 1 主题内容与适用范围 本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。 本标准适用于各种出口食品及其原料,有专门规定检验方法的除外。2 设备和材料2.1 工作台:超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台。琼脂平板在工作台上暴露15 min,每平板不得超过15个菌落。2.2 恒温培养箱:36±1℃。2.3 恒温水浴箱:45±1℃。2.4 均质器。 2.5 振荡器。2.6 吸管:1、10和25mL,具0.1mL刻度。2.7 平皿:直径为90 mm。2.8 稀释瓶:广口瓶或三角烧瓶,容量为200 mL和500 mL。2.9 玻璃珠:直径为5mm左右。 2.10 天平:感量0.1g。3 培养基和试剂 3.1 平板计数琼脂。3.2 75%乙醇。3.3 稀释剂:磷酸盐缓冲稀释液。4 操作程序 4.1 样品制备 4.1.1 以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内,如有包装,则用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。4.1.2 制备样品匀液4.1.2.1 固体或半固体食品:以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1~2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。4.1.2.2 干燥或干粉食品:以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂和适量玻璃珠的500 mL稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1 : 10的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次,也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。4.1.2.3 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品, 放入装有225mL稀释剂的500mL稀释瓶中,按4.1.2.2条中所述方法迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2~4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。4.2 稀释样品匀液 4.2.1 用10 mL灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10 mL,放入装有90 mL稀释剂的200mL, 稀释瓶中。按4.1.2.2条中所述的方法,迅速振摇。制成1:100的样品液。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中,吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。4.2.2 分别用10mL灭菌吸管按4.2.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液,如10**-3、10**-4、10**-5……。4.3 平板接种4.3.1 对于每一个样品,选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。 4.3.2 分别用灭菌吸管吸取1mL样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3 min,应按4.1.2.2条所述方法再振摇该样品液。4.3.3 分别加12~15mL平板计数琼脂(已放45+1℃的水浴中恒温)到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜和旋转。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1 mL稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基,每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。4.4 培养 待琼脂凝固后将平皿翻转,立即放进36±1℃的恒温培养箱内培养48±2h。培养箱应 保持一定的湿度,经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15%。4.5 菌落计数和记录4.5.1 培养后,立即计数每个平板上的菌落数。25~250个菌落为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0~4℃,但不得超过24 h。 4.5.2 如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内, 先计算两个平板的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品1)。4.5.3 如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值,再计算两个稀释度的平均值,然后计算每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品2)。4.5.4 当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数,计算两个平板上的平均菌落数,将平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*), 表明该数系从菌落数在25~250这一范围之外的平板估计所得(下表,样品3)。4.5.5 当所有平板上的菌落都超过250时,则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4)(下表,样 品4)。4.5.6 如果所有稀释度的平板都没有菌落,则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4条) (下表,样品5)。4.5.7 同一稀释度的两个平板中,一个有25~250个菌落,另一个的菌落多于250个,两个平板都要计数。计算方法同4.5.2条(下表,样品6)。4.5.8 两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25~250个范围内,而另一个的菌落数高于250或低于25,四个平板都要计数。计算方法参照4.5.2条和4.5.3条(下表,样品7)。 4.5.9 某稀释度的两个平板都有25~250个菌落,而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在 25~250范围内。四个平板都要计数,计算方法参照4.5.2条和4.5.3条 (下表,样品8、9)。4.5.10 蔓延生长菌落 通常有三种不同类型的蔓延生长菌落。第一种类型是链状菌落,菌落之间没有明显界线,这些菌落是当琼脂和试验物混合时,一个细菌块被分散所致;第二种类型是在琼脂和 平皿底之间形成的水膜样菌落;第三种是在平皿边缘或琼脂表面形成的水膜样菌落。如果所选择的平板出现过量的蔓延菌落生长,以致a.被蔓延菌落盖住的地方,包括由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的50%,或b.由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的25%,这样的平板报告为“蔓延菌落”,不予计数。计数其他平板上的菌落数,将这些数值的算术平均值报告为平板菌落数(下表,样品10)。 当有必要计数除以上a.和b.外的蔓延生长菌落时,将三种不同类型的蔓延菌落分别计数。对于第一种类型,如果仅有一条链,将它作为一个菌落计。如果有来源不同的几条链, 将每条链作为一个菌落计,不要把链上生长的各个菌落分开来数。第二种和第三种类型的蔓延生长形成易于鉴别的菌落,即按一般菌落计数,把计数的蔓延生长菌落数同一般菌落数加在一起,计算平板菌落数。4.5.11 操作者对同一平板复核自己的计数结果,其差异应在5%之内,而其他人对这一平板重复计数,其差异应在10%之内。否则,应找出原因,加以校正。 4.6 计算和记录数字 适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释倍数计算出每克(毫升)样品中平板菌落数。 记录时,只有在换算到每克(毫升)样品中平板菌落数时,才能定下两位有效数字,第三位数字采用四舍五入的方法记录。也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式(见下表中的例子)。5 结果报告 报告每克(毫升)样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。 平板菌落数计算 样品号 菌 落 数 平板菌落数/g(mL) 1:100 1:1000 1:10000 1 多不可计 175 16 多不可计 208 17 190000(1.9×10**5) 2 多不可计 224 25 多不可计 245 30 250000(2.5×10**5)* 3 18 2 014 0 0 1600(1.6×10**3)* 4 多不可计 多不可计 523多不可计 多不可计 487 5100000(5.1×10**6)* 5 0 0 00 0 0 <100 (<1.0×10**2)* 6 多不可计 245 23 多不可计 278 20 260000(2.6×10**5) 7 多不可计 225 21多不可计 255 40 270000(2.7×10**5) 8 多不可计 210 18多不可计 240 28 230000(2.3×10**5) 9 多不可计 260 30 多不可计 230 28 270000(2.7×10**5) 10 多不可计 245 35多不可计 230 蔓延菌落 290000(2.9×10**5) 注:带星号*者为估计数。附 录 A 培养基制备 (补充件) A1 平板计数琼脂 胰蛋白胨 5.0g 酵母浸膏 2.5g 葡萄糖 1.0g 琼 脂 15.0g 蒸馏水 1000mL 将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装试管或烧瓶,121℃高压灭菌15min。最终pH7.0±0.1。A2 磷酸盐缓冲稀释液 贮存液: 磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g 蒸馏水 500mL 用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。 稀释液:用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。附加说明: 本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。 本标准由中华人民共和国河南进出口商品检验局、湖南进出口商品检验局负责起草 本标准主要起草人李志培、邓明义。 本标准主要参考美国食品和药物管理局(FDA)《细菌学分析手册》第6版第4章(1984年)。 中华人民共和国国家进出口商品检验局1992-12-28批准 1993-05-01实施
有没有朋友用平板计数方法测大肠杆菌的啊?如计数结果小于30是不是就是合格呢
一、实验原理稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法,即一个菌落代表一个单细胞。计数时,首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液,尽量使样品中的微生物细胞分散开,使其成单个细胞存在,否则一个菌落就不只是代表一个细胞,再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中,使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后,由单个细胞生长繁殖形成菌落,统计菌落数目,即可计算出样品中的含菌数。此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数,故又称活菌计数。一般用于某些产品检定,如根瘤菌剂等产品检定,生物制品检验,土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。自然条件下,微生物常以群落状态存在,这种群落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物,必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养,这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。在自然界中,土壤是微生物生活的良好环境,其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的,因此土壤是人类开发利用微生物资源的重要基地。土壤中的微生物数量、种类与土壤肥力有关,肥沃的土壤中多,贫瘠土壤中少。其生理类群则与土壤的其它理化性质,如通气、pH有关,例如在通气良好的菜园土中,好气性微生物占有绝对优势。本实验以菜园土为材料分离土壤中的好气性细菌,并进行数量测定。分离微生物时,一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同,供给它们适宜的生活条件,或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长,不利于其它菌种生长的环境,从而淘汰不需要的菌种。分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法,根据不同的材料,可以采用不同方法,其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落,必要时再对单个菌落进一步分离纯化。在用稀释平板分离微生物时,还可以同时测定待分离的微生物的数量。放线菌与细菌同属原核微生物,是重要的抗生素产生菌,在土壤中的数量仅次于细菌,尤其是在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。本实验采用高氏一号琼脂培养基分离和计数菜园土中的放线菌。真菌在土壤中的数量次于细菌和放线菌,主要在有机质丰富、透气性好的偏酸性土壤中较多。分离土壤中的真菌并不难,但由于其菌落大,容易扩展,计数准确性较低。本实验采用加有氯霉素或庆大霉素和孟加拉红的马丁氏培养基分离及计数菜园土中的真菌。按一般资料介绍为链霉素,但此种抗生素要先配成一定浓度的溶液,且应于倒平板前才加入培养基中。在此培养基上,放线菌和细菌被氯霉素或庆大霉素和孟加拉红所抑制,但大多数真菌能够生存,且其菌落受孟加拉红的抑制而较小,从而避免了某些真菌的扩散蔓延而带来的数量上的误差。
[font=宋体, SimSun]涂布平板法是一种常用的微生物学实验技术,主要用于分离、纯化和计数微生物。以下是该方法的详细介绍:[/font] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]实验原理[/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]涂布平板法的基本原理是通过[b][color=#ab1942]将微生物悬液进行稀释,然后将稀释后的悬液均匀涂布在固体培养基表面。[/color][/b]这样,微生物在培养基上生长时能够形成单个菌落,从而实现微生物的分离和纯化。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]操作步骤[/b][/color][/font] [list][*] [font=宋体, SimSun]准备培养基:选择适当的固体培养基,如营养琼脂、胰蛋白胨大豆琼脂等,按照说明书或实验要求配制并灭菌。待培养基冷却至适宜温度后,倒入无菌平板中,使培养基在平板底部均匀铺展。[/font] [/list][align=center] [/align][list][*][font=宋体, SimSun]稀释微生物悬液:取一定量的微生物悬液,用无菌生理盐水或其他适当的稀释液进行逐步稀释。通常需要进行10倍系列稀释,以获得不同浓度的微生物悬液。[/font][*][font=宋体, SimSun]涂布平板:取适量稀释后的微生物悬液,用无菌玻璃刮刀或涂布器均匀涂布在固体培养基表面。涂布时要保持手法的稳定性和一致性,以确保微生物在培养基上分布均匀。[/font][*] [font=宋体,SimSun]培养微生物:将涂布好的平板倒置放入恒温培养箱中,设置适当的温度和湿度条件进行培养。[b]培养时间根据微生物的种类和生长特性而定,一般需要24~48小时。[/b][/font] [/list] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]注意事项[/b][/color][/font] [list][*][font=宋体, SimSun]无菌操作:实验过程中要使用无菌器具和培养基,并在无菌工作台或超净工作台上进行操作,以避免微生物污染。[/font][*][font=宋体, SimSun]稀释倍数的选择:选择合适的稀释倍数是实现微生物分离和纯化的关键。稀释倍数过高可能导致微生物在培养基上无法形成菌落;稀释倍数过低则可能导致微生物在培养基上过度生长,形成菌落重叠。[/font][*] [font=宋体, SimSun]涂布技巧:[color=#ab1942][b]涂布时要保持手法的稳定性和一致性,涂布速度要适中,避免过快导致微生物分布不均或过慢导致培养基干燥。[/b][/color][/font] [/list] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]结果分析[/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]通过对涂布平板法得到的平板进行观察和计数,可以估算出原始微生物悬液中的微生物数量。观察平板上菌落的形态、大小和颜色等特征,可以初步判断微生物的种类和生长状态。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]稀释涂布平板法计数微生物的计算公式[/b][/color][/font] [font=宋体,SimSun]稀释涂布平板法是一种常用的微生物计数方法,通过对样品进行稀释并将稀释液均匀涂布于平板上,再根据平板上生长的菌落数量进行统计计算。在该方法中,每克样品中的菌株数可以通过以下公式计算得出:[color=#ab1942][b]菌株数 = (C ÷ V) × M。[/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]其中,C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用稀释液的体积,M代表稀释倍数。通过这个公式,我们可以准确地根据实验结果计算出样品中微生物的数量,为微生物学研究和实验提供了重要的定量依据。[/font] [align=center] [/align][font=宋体, SimSun][color=#3daad6][b][size=17px]误区一——对平均菌落数的理解[/size][/b][/color][/font] [font=宋体,SimSun]在微生物实验中,对平均菌落数的理解至关重要,它反映了样品中微生物的数量,并直接影响到实验结果的准确性和可靠性。[b]在实验过程中,如果空白对照显示有菌生长,说明可能存在污染现象,即质控不在控,此时就不能简单地将所有实验得到的菌落数取平均值。[/b]相反,需要分析可能的污染原因并重新进行实验,以确保实验结果的可信度。[/font] [font=宋体, SimSun]另外,重复实验也是确保实验结果准确性的重要手段。通过在同一稀释度下涂布多个平板并统计菌落数的平均值,能够减小实验误差并提高数据可靠性。在重复实验中,如果某个平板的菌落数与其他平板相差较大,说明可能存在操作失误,这时应该舍弃该数据,并找出原因进行修正。[/font] [font=宋体, SimSun]在计算每克样品中某种菌株数量时,应只考虑符合该菌落特征的菌落数的平均值,避免将其他菌种形成的菌落数计入其中,以确保数据的准确性和可比性。深入理解平均菌落数的概念和正确运用相关原则,能够为微生物实验结果的可靠性提供保障。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#3daad6][b][size=17px]误区二——对稀释倍数的判定[/size][/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]在微生物计数实验中,稀释倍数的合理设定对于确保有效活菌数的准确测定至关重要。稀释倍数过大会导致菌落数过少,可能引起计数误差过大;而稀释倍数过小会导致菌落数过多,使计数变得困难。因此,在选择稀释倍数时,需要根据待测样品中微生物数量的预估值来合理设定,以求得准确可靠的实验结果。[/font] [font=宋体, SimSun]举例来说,若测定土壤中细菌数量,[color=#ab1942][b]一般选择10[sup]4[/sup]、10[sup]5[/sup]和10[sup]6[/sup]倍稀释,因为土壤样品中细菌数量可能较为丰富;而测定放线菌数量时,一般选用10[sup]3[/sup]、10[sup]4[/sup]和10[sup]5[/sup]倍稀释,因为放线菌的数量相对较少[/b][/color]。对于真菌数量的测定,则一般选用10[sup]2[/sup]、10[sup]3[/sup]和10[sup]4[/sup]倍稀释。对于自来水中大肠杆菌数量的测定,一般不需要进行稀释,可以直接进行涂布培养。[/font] [font=宋体, SimSun]通过合理选择稀释倍数,可以使待测样品中微生物的数量落在适宜计数范围内,既能保证准确性又能提高实验的操作性。因此,对稀释倍数的判定不宜盲目一致,而应根据具体实验需要和待测微生物数量进行科学合理的设定,以确保微生物计数实验结果的可靠性和准确性。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#3daad6][b][size=17px]误区三——对体积与质量的单位换算[/size][/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]在微生物计算中,涂布平板时所用的稀释液体积通常表示为V,一般为0.1mL(毫升)。[b]然而,当待测样品中微生物数量较少时,接种0.1mL稀释液到平板上培养后菌落数未达到30,这时可以考虑增大接种量,例如接种1mL稀释液,以增加菌落数的检测灵敏度。[/b][/font] [font=宋体, SimSun]在实验中,可以通过体积和质量的单位换算公式来进行计算,即体积 = 质量 / 密度(V = m / ρ)。水的密度为1g/cm3,因此质量为1g的水的体积为1cm3,也等于1mL。这意味着1cm3等于1000μL,1mL等于0.001L。通过这样的换算公式,可以方便地在体积和质量之间进行转换,确保实验中的计量单位正确无误。[/font] [font=宋体, SimSun]因此,在微生物实验中,正确理解和使用体积与质量的单位换算是确保实验数据准确性和可靠性的重要步骤。合理选择适宜的接种体积,可以提高微生物计数的准确度,从而获得更可靠的实验结果。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#3daad6][b][size=17px]误区四——对统计误差的分析[/size][/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]从稀释涂布平板计数的原理来看,该方法统计的菌落数往往会低于活菌的实际数量,这主要是因为样品难以完全分散为单个细胞,当存在两个或多个活细胞连在一起时,在平板上观察到的只会形成一个菌落。[/font] [font=宋体, SimSun][b]在整个稀释涂布平板计数的过程中,稀释倍数的选择是否合适、涂布是否均匀、培养环境是否能够促进微生物正常生长,以及计数过程是否存在漏计或重复计数等情况,都会对实际统计结果产生影响。[/b][/font] [font=宋体, SimSun]除了以上因素外,还需要考虑到培养时间对菌落数的影响。菌落数目应该在一定时间间隔内进行统计,选择菌落数目相对稳定时的记录作为最终结果。这样能够避免因培养时间不足而导致漏计菌落的情况发生。[/font]
[color=#5f9cef][b]二者范围不同:[/b][/color]GB4789.3-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》范围中规定:“本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数;第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。”[color=#f96e57]这里所说的含量高低通常以100CFU为准,即含量低于100CFU采用MPN法,含量高于100CFU采用CFU法。[/color][b][color=#5f9cef]概念不同:[/color][/b][color=#f96e57]• MPN(most probable number)法:[/color]即最近似数法,也称为最可能数法,是食品检验中常用的方法。1915年,McCrady首次发表了用MPN法 (最大可能数法) 来估算细菌浓度的方法, 这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法。[color=#f96e57]• 平板计数法 (colony forming units):[/color]CFU 即菌落形成单位,样品经过处理培养后我们数出平板上所生长出的菌落个数,从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落,以CFU/ml或CFU/g报告之。[color=#f96e57]• 滤膜法(membrane filter method):[/color]将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中,经过抽滤,细菌被截留在滤膜上,将滤膜贴于培养基上,经培养后计数和鉴定滤膜上生长的菌落,依据过滤水样计算每升或每100毫升水样中的菌落总数。[color=#f96e57]• 菌落:[/color]是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物,它是由数以万计相同的细菌集合而成。[b][color=#5f9cef]原理不同:[/color][/b][color=#f96e57]• MPN法:[/color]利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰,并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。因为细菌在样本内的分布是随机的,所以检测细菌时,可应用概率理论计算菌数,实验结果以MPN值表示,但MPN值并不能表示实际菌落数, 实际菌落数有可能落在置信区间内的任何一点,MPN值是落在这个置信区间内概率最大的一点。举例说:稀释度为 0.01,0.001,0.0001所对应的阳性管数分别为 2-0-0 ;查MPN检索表可知:MPN值为92 CFU/ml(g), 当置信度为95%,则其下限和上限分别为14,380,即对应的菌落浓度区间为14~380 CFU/ml(g),意思是:这个检验结果显示细菌浓度落在14-380 CFU/ml(g)区间均有可能,只不过92 CFU/ml(g)出现的概率最大,概率为31.9%. [color=#f96e57]平板计数法[/color]:平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的,也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时,先将待测样品作一系列稀释,样品经适当稀释后,其中的微生物充分分散为单个细胞,取一定量的稀释液接种到平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。[color=#f96e57]滤膜法:[/color]在压力差的作用下,悬浮液中的液体(或气体)透过可渗性介质(过滤介质),直径大于网孔直径的菌体为介质所截留,从而实现样品和菌体的分离。然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养,菌体可直接在膜上生长,从而可直接计数。[b][color=#5f9cef]MPN优缺点[/color][/b][color=#f96e57]优点:[/color]操作简便、灵敏度较高,时间短,可直接观察试管得出结论,每个接种稀释度均有重复,重复次数越多,误差就会越小。[color=#f96e57]缺点:[/color]要求样品具有均一性,适合检验液体样品,且只能用于检验在发酵培养基中产气的菌种。[color=#f96e57]注意事项:[/color]需选择合适的稀释度和接种量。[b][color=#5f9cef]平板计数法优缺点[/color][/b][color=#f96e57]优点:[/color]1、能测出样品中的活菌数,直观,能够直接读数2、平板菌落计数法通常做梯度稀释,所以计数的线性范围大。3、由于是菌悬液倾注或涂布,所以比较均匀,能较好的反应菌落的疏密程度。4、灵敏,平行性较好。[color=#f96e57]缺点:[/color]1、手续较繁,而且测定值常受各种因素的影响。2、厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌,比较难检测出。3、菌落总数并不能区分其中细菌的种类,所以有时被称为杂菌数,需氧菌数等。4、长成的一个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。5、检验时间长。[color=#f96e57]注意事项:[/color]样品需要充分均匀以及选择合适稀释度和接种量,检验过程必须严格无菌,以防污染杂菌。[b][color=#5f9cef]滤膜法优缺点 [/color][/b][color=#f96e57]优点:[/color]1、可以检测大量的样品。2、浓缩效应使微生物检测的准确度提高。3、带有菌落的滤膜,可作为检测的永久记录存档。4、可见的菌落和样品量直接对应,得出定量结果。[color=#f96e57]缺点:[/color]1、成本高。2、操作要求高。[color=#f96e57]注意事项:[/color]对样品的流动性要求比较高,并且含菌量不能太高。[b][color=#5f9cef]分类以及操作方法[/color][/b][color=#f96e57]MPN法:[/color]根据需要以及检验的精度不一样可使用9管法以及15管法;其中9管法通常用作食品检验,而15管法用在饮用水的检验(15管法的精度要高些);基本操作:样品梯度稀释——接种——培养——观察结果——查表报告。[color=#f96e57]平板计数法:[/color]有平板倾注法,一般检验使用的方法;平板涂布法,用于细菌含量比较高,并且要求知道细菌菌落形态(只计数特定细菌);以及滤膜法,检测特定种类菌常用方法,应用越来越广泛;基本操作一般包括:样品的稀释--倾注平皿--培养48小时--计数报告。(滤膜法是:样品——过滤——贴滤膜——培养 ——计数报告。)[b][color=#5f9cef]适用性[/color][/b][color=#f96e57]MPN法:[/color]适用于具有特殊生理功能的微生物类群或者检测带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的含少量金黄色葡萄球菌的食品(土壤、污水、牛奶等)。[color=#f96e57]平板计数法:[/color]应用广泛,是检验、菌种分离、纯化等用得最多的方法(固体、液体样品均可)。[color=#f96e57]滤膜法:[/color]主要应用于洁净度较高的样品,并且样品的流动性决定了可操作性。[b][color=#5f9cef]卫生学意义[/color][/b]两者都是检测的活菌数,MPN是通过极大近似值然后估计,求出分布函数中的参数、置信区间,再估计;但是CFU通过数据直接求数学期望,平均值和方差。测定结果判定食品被细菌污染的程度及卫生质量,一定程度反映食品在生产过程中是否符合卫生要求,以便对被检样品做出适当的卫生学评价。多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
餐饮的大肠杆菌检测涂抹取样,可以用平板计数吗
如题,采用平板计数琼脂 菌落总数中到底包不包括酵母菌与霉菌?谢谢
SN 0168-92 出口食品平板菌落计数[URL=http://blog.xunlei.com/web/category.html?uin=arlen888&category_id=1475]http://blog.xunlei.com/web/category.html?uin=arlen888&category_id=1475[/URL]
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=42384]【标准名称】平板型太阳集热器技术条件[/url]
关于大肠菌群平板计数法还有哪些困惑?1.导读经常用来衡量食品卫生情况的重要指标,绝大部分食品都会要求检测的项目。在食品微生物实验室里,大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的,但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家,以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。2.方法选择相比于MPN计数法,平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。但大肠菌群多少算是含量较高呢?国标里没有明确规定,但通常认为,产品大肠菌群以100CFU/g(mL)为界,超过这个含量一般认为是含量较高。但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测,大部分情况还是要看你的产品执行的标准。假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g(mL),那必须选用平板计数法。若是/g(mL)或者MPN/100g(mL),就应选择MPN计数法,MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。因此,根据自己产品的情况选择适当的检测方法。件、酸3.培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基,简称VRBA。无论是国标,还是培养基的使用说明中都明确表示,VRBA是不需要进行灭菌的,煮沸2min即可使用。特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件,对不灭菌的培养基不信任,害怕出现检测异常,那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,因此大肠菌群是不能形成芽孢的,在VRBA培养基煮沸的过程中,即使有大肠菌群存在也会被杀灭,所以从培养基带入污染的可能性是没有的。当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的,以免容器引入污染。另外,VRBA是一种选择性的培养基,含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用,而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证,因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。但值得注意的是,VRBA需要现配现用,配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。4.稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。什么样的稀释度是合适的呢?这要根据计数来决定。计数环节要求选择菌落数在15CFU-150CFU的平板进行计数,因此培养后菌落数在这个范围内的稀释度就是适宜的稀释度。实验室经常检测的产品的大肠菌群的水平检测人员可以预计的,但是对盲样,我们能做的只有根据实际情况多检测几个稀释度了。这里需要提一句,液体样品的检测稀释度可以包括原液。5.证实试验需要从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落,少于10个菌落的挑取全部的典型和可疑菌落进行BGLB肉汤管验证。这里挑取的菌落也是应当有选择的,典型菌落和可疑菌落的比例应当与平板上培养的两种菌落的比例相同或相近,这样能够降低检测过程中的误差。6.计数的报告报告过程是很多朋友存在疑问的地方,因为平板计数法的结果报告需要结合培养基菌落数和复发酵验证两方面进行计算。存在疑问的情况主要有以下几种:6.1、所有稀释度都不在计数范围内怎么办?这种情况一般都是最低稀释度的平板都小于15CFU,这种情况就是以最低稀释度的平板菌落数乘以验证试验的比例来计算。例如10倍稀释的两个平板上菌落数分别为10、8,菌落数为10的平皿挑取10个菌落复发酵中有8个菌落产气,菌落数为8的平皿挑取8个菌落复发酵中有7个菌落产气,则计算过程是这样的:(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g(mL)。6.2、连续两个稀释度的四个平皿的菌落数都在计数范围内怎么办?这个需要参考菌落总数检测国标里7.1.2里的公式计算。我们需要先计算每个平皿的验证后的菌落数,再代入公式计算即可。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为120和125,100倍稀释度两个平皿的菌落数为17和16,经过复发酵验证产气的管数分别为7、8、8、8,则我们先计算每个平皿上的菌落数分别为120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6(我们14),16*8/10=12.8(我们计13),然后将84、100、14、13四个数代入公式:(84+100+14+13)/(2+0.2)*10=959,结果应报告960 CFU/g(mL)。6.3、只有一个稀释度的一个平皿的菌落数在计数范围,其他均不在计数范围怎么办?这样我们只需要复发酵验证这一个平皿即可,根据这一个平皿的菌落数进行报告。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为160和142,100倍稀释度两个平皿的菌落数为12和13,则我们只需要从菌落数为142CFU的平皿里挑取10个菌落进行复发酵验证即可,假如共有7支发酵管阳性,则应计算142*7/10=99.4,结果报告99CFU/g(mL)。其实只要是平板菌落计数的相关问题,我们都应按照GB 4789.1-2016里要求的结果与报告要求进行计算和报告即可,无论那种情况,都是万变不离其宗的。
[font=宋体][size=3]和大家分享几个微生物检验操作[/size][/font][size=3][font=Arial]Flash[/font][font=宋体]短片,请用暴风影音打开。[/font][/size][font=Arial][/font][font=宋体][size=3]之八涂布法平板计数[/size][/font]
平板载荷测试仪适用于粗、细粒土和土压实后的路基、路层等的地基系数的测试,也可用于计算均匀地基的变形模量,平板载荷测试仪主要测试地基土的应力与变形特性,确定铁路、公路路基、基层等的地基系数。 平板载荷测试仪在使用时应注意两点,第一:压力表应保持清洁,百分表不要随意扯拉或冲击,测杆部分不能粘上灰尘和油污,百分表、压力表不用时,要盖上塑料护盖,置于室内干燥处,以利防裂、防潮。第二:油泵的液压油应定期补充,用10号机油,加油孔的位置在缸体的尾部,储油量为1升。 平板载荷测试仪的技术参数:荷载板直径:300mm 千斤顶加载范围:0-30T千斤项行程: 120mm 测桥跨度:3000mm 手动泵额定压力:70Mpa 压力测试范围:0-25mPa 位移测试范围:0-10mm
请问海洋监测规范中细菌总数检测中平板计数法和萤光显微镜直接计数法其检测下限为何
每次铺平板计数时所用的时营养琼脂时现配的还是已经配好用时融化的啊,我用的是已经配好的,所以每次用的时候都要水浴融化,经常由于瓶壁有水二污染,不知各位怎么解决这个问题啊?(虽然时求助,但是也是因为“常犯错误”而起,在这应该不算违规啊?)。
UV平板打印机,虽然方便快捷,一次成型,环保,但UV平板打印机来说也比一般的机器来得贵重,这么贵重的机器改如何维护和保养呢,下面富发uv打印机厂家给大家讲解一下:1、确保UV平板打印机周围环境的清洁。工作环境灰尘太多,容易导致小车导轴润滑不良,使打印喷头在打印过程中的移动受阻,引起喷绘位置不准确或撞击机械框架造成损伤及死机。当打印喷头未回到初始位置而重新开机时,UV平板打印机首先会让打印喷头回到初始位置,接着将进行清洗喷头的操作,所以会造成墨水不必要的浪费。解决这个问题的方法是经常将导轴上的灰尘擦掉,并对导轴进行润滑。2、必须确保UV平板打印机有一个稳固的工作平台,不要在UV平板打印机顶端放置任何物品。喷绘机在工作时必须关闭其前盖, 以防止灰尘进入机内或其它坚硬物品阻碍喷绘机小车的运动。禁止带电插拔打印机电缆,这样会损坏喷绘机的喷绘口以及PC的并行口, 严重的甚至会损坏PC的主板。如果打印输出不太清晰,可用喷绘机的自动清洗功能清洗喷头,但要消耗少量墨水。若连续清洗几次之后打印仍不满意,这时可能墨水已用完,需要更换墨盒。3、关机前,让打印喷头回到初始位置(UV平板打印机在暂停状态下,打印喷头自动回到初始位置)。这样做一是避免下次开机时UV平板打印机重新进行清洗喷头操作浪费墨水,二是因为喷头在初始位置可受到保护罩的密封,使喷头不易堵塞。4、墨盒在长期不使用时应置于室温下避免日光直射。因为在这种环境中墨水蒸发得很快,很容易造成喷头堵塞。另外在低温潮湿的环境下,打印喷头电路与墨水都易出问题。5、换墨盒时一定要按照操作手册中的步骤进行,特别注意要在电源打开的状态下进行上述操作。因为更换墨盒后,UV平板打印机将对墨水输送系统进行充墨,而这一过程在关机状态下将无法进行,UV平板打印机也无法检测到重新安装上的墨盒。另外,有些UV平板打印机对墨水容量的计量是使用喷绘机内部的电子计数器来进行的(特别是在彩色墨水使用量的统计上),当该计数器达到一定数值时,UV平板打印机判断墨水用尽。而在墨盒更换过程中,喷绘机将对其内部的电子计数器进行复位,从而确认安装了新的墨盒。6、此外UV平板打印机的光栅条,也要做好保护,不要用手去摸,不要让它沾染灰尘,以防定位不准。做好了以上几点,可以保证机器在工作和使用中长时间的不出问题,从而开足马力生产,为赚取更我的利润和以后多上机器提供可靠坚实的保障!需要购买或了解UV平板打印机可以直接到我们公司进行实地考察, 现场看机器,现场打印效果
感受态是指细菌处于容易吸收外源DNA的状态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导人细菌的过程。其原理是细菌处于0℃,CaCl2低渗溶液中,菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基—钙磷酸复合物粘附于细胞表面,经42℃短时间热击处理,促进细胞吸收DNA复合物。将细菌放置在非选择性]培养基[/url]中保温一段时间,促使在转化过程中获得的新的表型(如Amp[sup]r[/sup]等)得到表达,然后将此细菌培养物涂在含有氨苄青霉素的选择性[://]培养基[/url]上。重组质粒转化宿主细胞后,还需对转化菌落进行筛选鉴定。利用α互补现象进行筛选是最常用的一种鉴定方法。现在使用的许多载体都具有一段大肠杆菌β半乳糖苷酶的启动子及其编码α肽链的DNA序列,此结构称为[i]lac[/i]Z'基因。[i]lac[/i]Z'基因编码的α肽链是β半乳糖苷酶的氨基端的短片段(146个氨基酸)。任何携带着[i]lac[/i]Z'基因的质粒载体转化了染色体基因组存在着此种β半乳糖苷酶突变的大肠杆菌细胞后,便会产生出有功能活性的半乳糖苷酶,在IPTG(异丙基β—D—硫代半乳糖苷)诱导后,在含有Xgal(5-溴-4-氯-3-吲哚-6-D-半乳糖苷)的培养基平板上形成蓝色菌落(半乳糖苷酶能将无色的化合物Xgal切割成半乳糖和深蓝色的底物5-溴-4-靛蓝)。而当有外源DNA片段插入到位于[i]lac[/i]Z'中的多克隆位点后,就会破坏α肽链的阅读框,从而不能合成与受体菌内突变的β半乳糖苷酶相互补的活性α肽,而导致不能形成有功能活性的β半乳糖苷酶,也就不能分解Xgal而显蓝色,因此含有重组质粒载体的克隆往往是白色菌落。[仪器、材料与试剂](一) 仪器和材料 超净工作台、低温离心机、恒温摇床、恒温箱、恒温水浴、离心管、试管、培养皿、锥形瓶、接种针、玻璃涂棒、酒精灯、镊子、牙签、大肠杆菌DH5a 、质粒(二) 试剂0.1mol/L CaCl2溶液 LB液体培养基 LB固体培养基 氨苄青霉素(Amp):用无菌水配制成100mg/mL溶液,置—20℃冰箱保存。Xgal:将Xgal溶于二甲基甲酰胺,配成20mg/mL,不需过滤灭菌,分装小包装,避光贮存于-20℃。IPTG:取2g IPTG溶于8mL双蒸水中,再用双蒸水补至10mL,用0.22um滤膜过滤除菌,每份1mL,贮存于-20℃。[实验步骤](一) 制备感受态细胞1、吸取15µl E.coil菌液,接种于20ml LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜,待OD600=0.5左右将该菌悬液以1:50接种量转于50ml LB液体培养基中,37℃振荡扩大培养,当培养液开始出现混浊后,每隔20-30min测一次OD600,至OD600=0.6左右,停止培养。2、培养液转入离心管中,在冰浴10min,4℃下5000rpm离心10min。3、弃上清液,用4ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀,冰上放置30min。4、4℃下5000rpm离心6min。5、弃上清液,用2ml冰预冷的0.1M CaCl2溶液轻轻悬浮菌体至均匀,冰上放置片刻后即制成感受态细胞悬液。6、以上制好的感受态细胞悬液可在冰上放置,24小时内直接用于转化实验,也可加入15%高压灭菌过的甘油,混匀后,分装于1.5ml离心管中,每管100µ l感受态细胞悬液,置-70℃条件下保存。.(二) 质粒DNA转化大肠杆菌1、取100µl摇匀后的感受态细胞悬浮液(如是冷冻保存液,则需化冻后马上进行下面的操作),加入5µl连接产物,轻轻摇匀,冰上放置30min后,于42 IPTG水浴中保温90s,然后迅速在冰上冷却2min。2、加入900µl LB液体培养基,则总体积约1ml,混匀于37℃振荡培养90分钟使受体菌恢复正常生长状态并使转化体产生抗药性Amp[sup]r[/sup]。3、在预制的LB琼脂平板上,加40uL 20mg/mL的Xgal和4uL 200mg/mL的IPTG溶液,并用灭菌玻璃推子(酒精灯上烧后冷却),均匀涂布于琼脂凝胶表面,37℃倒置吸收。4、将恢复培养的菌体4000rpm离心5min,移去上层900µl LB培养基,用余下的100µl重悬菌体至均匀。(四) α互补现象的检查将重悬菌体均匀涂布于含X-gal+IPTG+氨苄青霉素的LB平板上,37℃倒置培养12—24h,出现菌落。其中白色菌落从理论上讲为重组克隆。如果进一步验证,可挑取多个白色菌落分别接种到1ml含有氨苄青霉素的LB液体培养基中,37℃振荡培养6-8h,然后提取质粒酶切验证,或进行菌落PCR扩增鉴定。
MPN法检测的MPN值(MPN/g或MPN/mL)与平板计数结果CFU/g或CFU/mL如何进行转化?根据MPN值95%的置信区间的数值转化合理?
[b][font='Microsoft YaHei', 宋体, sans-serif]【序号】:1[/font]【作者】:[b][b][font=Arial][size=15px][back=#e5e6e7][/back][/size][/font][b][url=https://kns.cnki.net/kcms2/author/detail?v=kDRBCI5pZ3PBYZYReBGijuw4sewFabBcdQHPQjLGW1kIVn-QcSuhjEK2PGYv8nTdWYGn0reROTN5SMdxNXxdMMRSHEfEOKMNwXeJux369es=&uniplatform=NZKPT]赵佳栋[/url][/b][/b][/b][/b]【题名】:[b]基于超表面的平板高光谱成像技术研究[/b]【期刊】:[font=Arial][size=12px]cnki [/size][/font][b]【链接】:[url=https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C475KOm_zrgu4lQARvep2SAkaWjBDt8_rTOnKA7PWSN5MBk1YcsfhSqUR64bPJ_2jfNxqDNxSuLTdInaCXuLh4OK&uniplatform=NZKPT]基于超表面的平板高光谱成像技术研究 - 中国知网 (cnki.net)[/url][/b]
给位高手,谁能告诉我分流平板在哪里?最好发段视频,呵呵!!我们现在用的是6890N,分流不分流(毛细柱)进样口,现在感觉进样口好像有点污染,想拆下来清洗一下,拆了好几次,就是没找到分流平板,哪位高手知道!!
[img=水量热计法高温平板导热仪升级改造解决方案,690,446]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210021605330949_5078_3221506_3.png!w690x446.jpg[/img][color=#990000]摘要:水流量平板法是目前常用的耐火材料导热系数测试方法,相应的导热仪具有测试温度高、大温差测量、结构合理简单、造价便宜和操作方便等突出优点,国内外用户众多,但存在的致命问题是测量低导热系数的隔热材料时误差巨大。针对水流量平板法导热仪,本文提出了一种改造升级方案,即采用一种高精度量热计技术代替现有的水量热计,彻底解决测量误差大的难题,在保留原有水流量平板法导热仪众多优势的前提下,实现导热系数测量精度大幅提高和测试时间大幅缩短,以满足各种高温隔热材料的低导热系数快速准确测量需求。[/color][color=#990000][/color][b]一、问题的提出[/b]对于导热系数小于0.03W/mK的隔热材料,其高温范围(1000℃以上)的导热系数准确测量一致都是没有很好解决的技术难题。但为了获得隔热材料的高温导热系数,并且出于测试设备的经济性考虑,很多国内外机构都选择了商业化的水流量平板法导热仪进行测试。水流量平板法导热仪是一种依据标准测试方法的导热系数测试设备,相关标准如下:(1)美国ASTM C201“耐火材料导热性的标准测试方法”。(2)英国BS 1902-505“耐火材料导热系数标准测试方法(平板/水量热计法)”。(3)冶金行业标准YB/T 4130-2005“耐火材料导热系数试验方法(水流量平板法)”。上述三个标准测试方法的基本原理完全一样,所采用的技术都是通过水量热计来测量流经样品厚度方向上的热流量。由于水量热计比较适用于较大的热流量测量,对于较小的热流量测量则存在巨大误差,因此这种测试方法比较适用于导热系数较高(大于0.1W/mK)的耐火材料。由于水流量平板法导热仪可以进行温度达1500℃以上的高温导热系数测试,因此很多客户采用这种导热仪进行高温隔热材料的测试评价,由于测量误差巨大使得导热系数测试结果往往非常小,严重误导了材料的研发、生产和性能评价。目前国内主流的商品化水量热计法导热系数测定仪有如图1所示的几种规格,测试温度可以从1200℃到1600℃。[align=center][img=01.国内常见的水流量平板法高温导热仪,690,274]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210021606396191_613_3221506_3.png!w690x274.jpg[/img][/align][align=center]图1 国内常见的几种水流量平板法高温导热仪[/align]尽管水流量平板法在高温导热系数测试中存在巨大误差,但随着量热分析技术的进步,可以对水流量平板法进行升级改造,可以通过提高量热计测量精度实现高精度的高温导热系数测量。选择水流量平板法导热仪进行技术改造,主要是因为水流量平板法导热仪具有以下便利特征:(1)水流量平板法导热仪的整体测试结构非常合理,高温加热加载在样品的顶面,水量热计位于被测样品的底面,从而在样品厚度方向上形成大温差,这非常符合隔热材料的实际使用工况,可以获得被测样品材料的等效导热系数。(2)样品顶面加热装置是一个独立的机构,可通过改变发热体材料实现不同的加热温度,由此可实现从1000℃至1500℃,甚至最高可达2000℃以上的高温,非常便于隔热材料高温导热系数的测量。(3)被测样品的装卸非常方便,并且可对不同尺寸的样品导热系数进行测试。(4)最重要的是水量热计位于测量装置的底部,更换水量热计比较方便,可以很容易的更换高精度量热计而不影响测量装置的整体结构。(5)水流量平板法导热仪的价格普遍很低,且国内用户众多。基于上述特点,针对水流量平板法导热仪,本文将提出一种改造升级方案,即采用一种高精度量热计技术代替现有的水量热计,彻底解决测量误差大的难题,在保留原有水流量平板法导热仪众多优势的前提下,实现导热系数测量精度大幅提高和测试时间大幅缩短,以满足各种高温隔热材料的低导热系数快速准确测量需求。[b]二、现有量热计热流测试技术分析[/b]在稳态法导热系数测试方法中,关键技术之一就是对流经样品的热流进行准确测量。热流测量的典型技术是量热计法,即基于量热计的比热容特性,通过测量量热计吸收或放出热量后的温度变化来确定所吸收或放出的热量多少。量热计在导热系数测试中有如下典型应用:(1)防护热板法:如图2(a)所示,防护热板法实际上是一种典型的绝热量热计法,热板作为样品热面温度的实施热源,其最终稳定温度就是完全吸收电加热功率后热板所升高的温度。因此,通过测量热板完全吸收的加热功率(即加载的电功率)就可以获得流经样品的热流。[align=center][img=02.量热计用于导热系数测试的两种测试方法示意图,690,243]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210021607339875_6761_3221506_3.png!w690x243.jpg[/img][/align][align=center]图2 量热计用于导热系数测试的两种测试方法示意图:(a)防护热板法;(b)水流量平板法[/align](2)水流量平板法:如图2(b)所示,与防护热板法类似,也用的是量热计法,只是量热计位于被测平板样品的冷面来测量流经样品的热流。量热介质则是流动的液体,通过测量量热介质的温升,可根据量热介质的比热容计算得到量热介质吸收的热量大小。从上述量热计在导热系数测量中的两个典型应用,可以做出以下分析:(1)防护热板法中采用的量热计技术,可以获得很高的导热系数测量精度。但由于需要使用护热技术使得量热计输出的热量只流经样品,即量热计周边处于一个高温动态等温绝热环境,而量热计自身还需处于高温状态,这使得量热计在高温下很难实现绝热防护和保证量热计尺寸的稳定性,因此防护热板法只能实现1000℃以下的导热系数准确测量。(2)水流量平板法是将量热计布置在被测样品的冷面,这样做的好处是样品冷面温度较低(特别是测试低导热系数隔热材料样品时),这样可以很容易实现较高样品热面温度。但带来的问题是如果样品冷面温度超过100℃,会使得水量热计中的流体产生沸腾蒸发而影响测量精度,如果通过增加水流速度避免流体沸腾蒸发,则会使得进出口之间的温差减小,也同样会带来另外的测量误差。同时水量热计四周较差的绝热防护措施而产生较大热损,会带来严重的测量误差。这些就是致使水流量平板法测量误差较大的主要原因,这些因素在高导热系数测量时还不明显,但在测量低导热系数时,测量误差所占比重则会很大,导热系数测量结果会明显偏低,甚至会有数量级水平的误差。(3)从上述两种量热计在导热系数测试的典型应用可以看出,两种量热计法测试都是在稳态状态下进行,每次导热系数测试都需要在样品冷热面温度和热流达到稳定状态。特别是对于高温范围的隔热材料测试,需要漫长时间进行多个温度点下的测量才能获得一条导热系数随温度变化曲线。从上述分析可以看出,尽管水流量平板法存在测量误差巨大的严重缺陷,但在高温导热系数测量中则有巨大的潜力。只要克服水量热计存在的问题,就可解决低导热系数高温测量难题,因此问题的关键就是如何采用新型的量热计技术来代替目前的水量热计。[b][color=#990000]三、高精度金属块量热计解决方案[/color][/b]我们从最基本的物体吸收热量与温升的关系出发,即材料的比热容定义:单位质量物体升高一度所吸收的热量,可以设计出以下导热系数动态测试方法:(1)如图3所示,将图2(b)所示的水流量平板法导热仪中的水流量计更换为一平板金属块作为量热计,量热计上方的其他结构保持不变。[align=center][img=03.金属块量热法高温导热系数动态测试设备结构示意图,500,313]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/10/202210021609596535_7755_3221506_3.png!w690x433.jpg[/img][/align][align=center]图3 金属块量热法高温导热仪结构示意图[/align](2)此金属块量热计采用高导热金属材料制成,用于吸收透过被测样品的热流量。采用高导热金属材料作为量热计是为了保证量热计温度能快速均匀,以满足测试模型中要求量热计始终处于等温的边界条件,同时具有耐高温能力,以能够进行高温下的导热系数测试。(3)由于金属块量热计的快速均温能力,那么通过量热计的温度变化就可以计算得到样品冷面的热流变化。(4)为了使金属块量热计所吸收的完全是透过被测样品的热量,最大限度减小量热计的热损失,借鉴了保护热板法的技术方案,即在金属块量热计四周增加了主动护热装置来实现绝热。(5)还继续采用原有水流量平板法导热仪的加热装置和温度测量装置,但加热装置的温度以线性方式进行变化,由此使得被测样品的冷热面以相同的升降温速率进行变化。通过上述测量得到的冷面热流变化,以及结合测量得到的冷热面温度和温度变化速率,可以得到整个温度变化过程中的导热系数变化曲线。综上所述,只需对水流量平板法导热仪中的水量热计进行更换,即可实现绝热材料高温导热系数的准确测量,同时采用了线性升温加热方式,大幅缩短了测试时间。[align=center]~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~[/align]
[font=SimSun, STSong, &]菌落总数测定时,培养基是卵磷脂、吐温80-营养琼脂,200ml培养基加了0.5%TTC 2ml, 平板上细菌围着平板长了一圈,是什么原因?麻烦各位大神帮忙解答下。[/font]
同一批倒的平板,个别菌落总数平板浑浊不清亮是什么原因?涂抹和空气沉降从来不会有这种现象,同一个样品有时两个同时浑浊的比较多,有时偶尔一个
如何清洁分流平板
铸铁平板平台压砂前的预备工作:研磨方法 铸铁平板平台的研磨方法一般有两种:一种是三板互研法,这种方法压砂的结果是,三块平板平面度都很好,三块平板的压砂效果基本一样,并且三块平板都可以使用,不用常常压砂,但对修理技术要求较高。所谓三板互研法是指三块平板相互之间依次互研,并且每块平板只能当下板两遍,实际共研磨6遍。 另一种方法是两块板互研法,也叫子母板压法。这种方法是只用两块平板一上一下互研,用这种方法压砂结果是,两块平板的平面度基本吻合,上面平板的平面度凹,下板的平面度凸,并且下板的压砂效果要比上板的好。因为上板中间凹,不轻易修理量块,一般不用上板,只用下板。缺点是下板的突出程度不易把握,只能用一块平板。每次压砂时需要研磨3~4遍才可以完成,每遍6分钟左右。两种方法比拟较,本人经验觉得仍是前者较好。平板的选用 压砂前的预备工作很重要。首先选用什麽样的铸铁平板平台?采用那种压砂方法?选用什麽规格的砂子?心里应该清晰。修理量块的平板一般有灰铸铁、高磷球墨铸铁、高磷低金属球墨铸铁等三种。平板的硬度在HB (130~250)之间。采用硬度较低的平板压砂,嵌粗砂轻易,适合于粗研,修出的量块表面粗拙度比较低,表面发白。采用硬度较高的平板,嵌粗砂难题,轻易嵌入细砂,耐磨性不理想,修出量块的表面粗拙度高,光彩青亮。从我二十来年的工作经验看,采用硬度在HB(180~210)的平板,既压砂轻易,耐用,又合用于高精度的精密研磨,特别合用于量块修理。 金刚砂规格的选用 平板的压砂有两种方法:(1)从开始到结束只用一种规格的砂子,修理量块一般用M2.5规格的砂子.(2)压砂从开始到结束,砂子从粗到细循序渐进地压砂,一般选取M4,M3,M2.5规格的砂子。 研磨平板需要的辅料 (1)混合油:煤油和变压器油的比例3:1。 (2)硬脂。 (3)用汽油泡好的砂子即金刚砂。 平板恒温 修理室的温度很重要,太高或太低都不轻易嵌砂,一般温度在(20±5)°C。有的单位压砂房间恒温前提比较差,当平板从一温度拿到另一温度的房间研磨时,平板受热涨冷缩现象的影响,表面产生变形,故等温一段时间,一般平板在压砂前等温数小时或更长时间,待平板变形不乱后,再开始研磨。 平板的修整 对于新铸铁平板平台和表面划痕、碰伤较重的平板,先用油石打磨一下,打磨后,我们先用M4的砂子修一下板面,三块平板互相研磨,待推拉费力的时候,卸下平板,直到平板的平面度较好时,休止修理平板,做到冷暖自知。 对于使用中划痕、碰伤较轻的平板,只用油石把突起的部门打磨下去就行,不用修理平板,直接压砂就可以了铸铁平板平台的压砂 从我们多年来的工作经验看,选用(300×300)mm的平板,采用三板互研法压出来的平板修理量块最为相宜,由于它简朴易操纵,只用一种规格的砂子,不用多次换砂,并且压一次砂三块平板都可以使用。 首先我们把第一块平板放在工作台上,用汽油把平板擦干净。在铸铁平板平台上涂上少许硬脂,然后倒上用汽油泡好的M2.5的金刚砂(一吸管的量),等汽油挥发后,滴入 10滴混合油,把下板涂匀,再在上板的四角及中央处涂些,这样可以防止在压砂开始时,因为油膜厚度不均两板之间形成一个楔角,会泛起“啃”板现象。 前两次压砂所达到的推拉力和所用油量一样,后四次压砂滴入7~8滴混合油,推拉力达到750N左右,这时的推拉速度达每行程10秒左右。 每遍压砂大约需要20分钟左右。把握了以上压砂要领,就可以达到预期的效果。我们用这种方法得到的研磨平板用试块试,手感:⑴很柔和;⑵切削力很快。目测试块:切削痕迹平均即粗拙度好。这样的平板经久耐用,可以修理量块250~300块,我们一年只需要压砂3~4次,就可以保证全市各大企事业单位、计量站的量块修理量。
接种好的平板为什么要倒放,