在线脱盐高通量液质联用分析寡核苷酸
寡核苷酸是一类短链核苷酸的总称(包括脱氧核糖核酸及核糖核酸),如用于基因扩增和基因诊断的 PCR 引物和反义核酸,介导基因沉默的小干扰 RNA(small interfering RNA,siRNA)等,努力研究开发基因靶向治疗药物用于治疗病毒、肿瘤和遗传疾病。天然的寡核苷酸在体内容易降解,稳定性差。通过修饰的寡核苷酸具有较好的药学特性和体内稳定性 [1-2],但合成的寡核苷酸产物含有各种杂质,需纯化精制,产物的鉴定和产品的质量控制至关重要。液相和液质联用于寡核苷酸目标产物的高分辨分离和鉴定, 可以判断待测寡核苷酸结构的变化,比如脱嘌呤、氧化、磷酸化等。寡核苷酸样品中存在的盐分会影响其离子化过程和造成峰强度降低,因此有必要进行质谱鉴定前的除盐处理。常规离线除盐方法耗时;可以利用在线除盐方式进行寡核苷酸的分离鉴定,但样品通量需要提高,以满足高通量的要求,如平均每天 2000 个样品的需求等。