的超高效液相检测

相同的原理，不同的性能。想必很多用过普通液相和超高效液相的人都知道，超高效液相紫外检测器的灵敏度要比普通液相高，可是你知道为什么吗？有的人说，是检测器比色池的差异，有的人说，是检测器整体性能的差异。我找了下仪器的参数，以Waters 2996 PDA 检测器和PDA eλ二极管阵列检测器为例，让大家看看。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502051103_534343_1608710_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/02/201502051103_534344_1608710_3.jpg从参数上看，指标都差不多，唯独流通池设计不一致。〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓分割线〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓请您来解析：1、你觉得这两种检测器参数差异有哪些？2、哪些参数是影响检测器灵敏度的？3、两种检测器可以互换互用吗？4、两种检测器的使用效果和维护都有哪些不同？欢迎大家参与讨论，补充自己想交流的参数，说说自己的认识或者提出自己的疑问！！！往期回顾：【参数解读】基因扩增仪(PCR)的技术参数解读与使用

超高效液相色谱检测奶及奶制品中的M族黄曲霉毒素液相色谱条件液相色谱仪：美国Waters Acquity超高效液相色谱仪配荧光检测器（带大体积流通池）色谱柱：Welch Ultimate XB-C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；流速：0.3 mL/min ；柱温：40 ℃；进样量：10 μL；激发波长：360 nm；发射波长：420 nm；流动相： A：纯水；B：甲醇/乙腈（50+50）；梯度条件：0~4.0 min，30%B；4.2~4.7 min，100%B；5 min，30%B。样品提取与净化 液态奶样品, 称取10.0 g于50 mL离心管中, 加入25mL乙腈, 充分涡旋3 min后, 超声提取10 min, 8000r/min条件下离心5min, 取全部上清液旋蒸至10 mL以下, 全部转移至50 mL容量瓶中, 以PBS溶液定容至刻度。取25mL溶液过黄曲霉毒素M1免疫亲和柱, 以[

大豆异黄酮是从植物中提取，与雌激素有相似结构，因此又称植物雌激素，大豆异黄酮的雌激素作用影响到激素分泌、代谢生物学活性、蛋白质合成、生长因子活性，是天然的癌症化学预防剂。主要成分：大豆甙(Daidzin)，大豆甙元(Daidzein)，染料木甙(Genistin)，染料木素(Genistein)，黄豆甙(Glycitin)，黄豆甙元(Glycitein)。迪马科技用户采用Endeavorsil C18超高效液相色谱柱成功实现8分钟内6种大豆异黄酮的良好分离，对于大豆异黄酮的分离和检测具有实际意义。UPLC色谱分析条件*：色谱柱：Endeavorsil C18 50 × 2.1 mm, 1.8 μm（Cat.#.：87002）流动相：A：0.2%的磷酸水溶液，B：乙腈时间（min）02467A（%）9085706090B（%）[align=cente

[b]超高效液相色谱[/b][i]高效液相色谱方法及应用（第二版）作者:于世林[/i]由以上讨论中，可知在HPLC分析中，使用粒度dp为5～10μm固定相，色谱柱长10～25cm, Δp为3～10MPa，就可获得n≥3000的柱效，使用大多数有机溶剂或水作流动相，可在2～30min内，实现大多数不同组成样品的分析要求。上述结论是在20世纪80年代末期获得的，90年代后，液相色谱使用了粒度dp＝3.5μm的固定相，2000年很道了使用dp＝2.5μm的固定相，由于高压愉液泵提供压力的限制，实现了仅用色谱柱长为3～5cm的快速分析。直至2004年美国Waters公司在匹茨堡会议上展出了最新研制的ACQUITY超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatographay，UPLC)，它使用dp仅为1.7μm的新型固定相，色谱仪提供的Δp达140MPa（2000psi），可使在常规高效液相色谱需要30min时间的样品分析在超高效液相色谱短短为仅需5min，.并呈现出色谱柱柱效达20万块/m理论塔板数的超高柱效。 UPLC保持了HPLC的基本原理，全面提升了液相色谱的分离效能，不仅提高了分辨率，也使检侧灵敏度和分析速度大大提高、使液相色谱更高水平上实现了突破。因此，必将大大拓宽液相色谱的应用范围，井大大加强了UPLC在分离科学中的重要地位。一、超高效液相色谱的理论基础在高效液相色谱的速率理论中，范第姆特方程的简化表达式（7-23）：[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/11/200611251040_33593_1613333_3.jpg[/img]如果仅考虑固定相的粒度dp对H的影响，其简化方程式可表达为[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/11/200611251042_33595_1613333_3.jpg[/img]

超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC）是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC（高效液相色法）的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域，作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统在1996年问世，之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前，超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。如图：HPLC与UPLC分离比较http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/08/201308032042_455796_1608710_3.jpg◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆列举部分仪器的个别参数，供参考：技术参数：泵系统：最大操作压力 15000psi（1mL/min）流速范围：0.001-2.000mL/min, 增量0.001mL；流速精度：0.075% RSD；流速准确度：±0.5%；梯度准确度：± 0.3%；梯度精度：0.15%RSD；压力范围：0-15,000 psi；真空脱气机：在线真空脱气，六通道均可在线脱气，有自动柱塞清洗和进样针清洗功能。温控自动进样器:进样精度： 0.999；进样体积：0.1 to 50 μL，增量0.1μL；样品污染度：0.004%；样品温度范围：4°C -40°C，增量：1°C，带制冷功能；温控稳定性：±0.5℃；样品盘数：96，384 两种规格；样品瓶：2mL样品瓶，0.65mL,1.5mL两种规格的离心管。柱温箱：温度范围：室温以上5°C -90°C；控温精度：±0.1°C；温度准确性±0.5℃。二极管阵列检测器：二极管数：≥1024；波长范围：190-800 nm；分辨率：≤1.2 nm；波长准确度：≤±1nm；波长精度：≤±0.1nm；基线噪音：＜±1.0×10-6AU；基线漂移：＜1×10-4AU/h；最大采集频率：≥100 Hz；检测器配置 紫外可见检测器、光电二极管矩阵检测器、蒸发光散射检测器〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓分割线〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓请您来解析：1、一套真正的UPLC哪些技术参数是支撑？有哪些是其标志性参数？2、耐高压系统评价：要求能耐多少压力以上才算UPLC，真的是超过15,000psi才算吗？2、泵系统控制精确的流速，相对标准偏差要求在多少之内才算稳定？梯度延迟时间等？3、小内径小填料色谱柱，用什么规格的最合适？4、高灵敏小检测池的检测器，检测器的耐压，都与普通LC检测器有哪些区别？5、你的仪器快速进样系统都是如何来实现高通量进样的？6、超高效液相的仪器性能，你最看重哪些参数，你实际使用的仪器感觉都有哪些性能不足？欢迎大家参与讨论，补充自己想交流的参数，说说自己的认识或者提出自己的疑问！！！往期回顾：【参数解读】ICP光谱仪的技术参数解读及仪器性能评价

【参数解读】超高效液相色谱仪器性能和技术参数解读http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130803/4888003/超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography\ UPLC）是分离科学中的一个全新类别，UPLC借助于HPLC（高效液相色法）的理论及原理，涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术，增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。超高效液相色谱是一个新兴的领域，作为世界第一个商品化UPLC产品的Waters ACQUITY UPLCTM 超高效液相色谱系统在1996年问世，之后像安捷伦、岛津等公司也陆续开始生产超高效色谱仪。目前，超高效液相色谱仪已经开始逐渐地投入液相实验中。如图：HPLC与UPLC分离比较http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_648018_1608710_3.jpg◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆请您来解析：1、一套真正的UPLC哪些技术参数是支撑？有哪些是其标志性参数？UHPLC的标志性特点就是压强高，进样量少，死体积小，流速慢，出峰快。耐压是首要的，然后就是色谱柱了，其次就是仪器系统的整体设计。对UHPLC来说，重点还是流量的精准和耐压吧，还有就是延迟体积小，响应时间要够快。2、耐高压系统评价：要求能耐多少压力以上才算UPLC，真的是超过15,000psi才算吗？有版友觉得能满足要求就好。一般12000psi可以耐受大部分的试验条件，如果色谱条件更改导致压力再提升，色谱柱的寿命可能会受影响，可能得不偿失。对于绝大多数要进行成本核算的使用者来说。3、泵系统控制精确的流速，相对标准偏差要求在多少之内才算稳定？梯度延迟时间等？有多少个方法的流速是需要设置到小数点后第三位的？绝大多数方法的流速是1.0ml/min或者0.8ml/min之类的设置，小数点后两位的精度足够我们用了。目前大多数色谱软件识别色谱峰的保留时间窗都是5%。记得我曾看过一家外企药厂的内控标准，好像样品保留时间与标准品的偏差小于1%即可。延迟体积，对于新开发的方法或者方法传递的要求而言，是越小越好。目前各厂家好像都能控制在500ul以下，甚至于100ul以下。4、小内径小填料色谱柱，用什么规格的最合适？根据检测的样品来定5、高灵敏小检测池的检测器，检测器的耐压，都与普通LC检测器有哪些区别？耐压更高，灵敏度要高几倍。DAD检测器也很有门道，要达到更高的灵敏度和信噪比，目前的潮流是全反射光纤流通池。貌似Agilent的是 TeflonAF管的材质（比金子都贵的材料呀），也有用石英光纤的。Waters的流通池貌似改过几版，老一些UPLC上的是挂在外面的粗棒子，新的放在机箱内了。6、超高效液相的仪器性能，你最看重哪些参数，你实际使用的仪器感觉都有哪些性能不足？稳定性在流动相必须用缓冲盐的情况下，我更愿意用HPLC。我觉得用UPLC的时候对流动相和样品的前处理要求明显要高很多，不然极易堵柱和系统。对于大多数使用者来说，应该都是希望购买的不是最贵的，而是最合适的仪器。作为一个纯粹的LC的操作者，版友比较偏重的的是系统的重现性、耐用性与灵活性等等。欢迎大家参与讨论，补充自己想交流的参数，说说自己的认识或者提出自己的疑问！！！

《超高效液相色谱仪开发与应用》----项目验收会上海伍丰科学仪器有限公司承担的上海市科研计划项目项目“超高效液相色谱仪开发与应用”（编号：14142200300），于2017年3月8日通过上海市科委组织的专家验收。项目采用多种新技术和新工艺，完成国内首台超高效液相色谱系统研制。验收专家组听取了项目负责人所作的汇报总结，审阅了有关技术资料，参观了仪器的现场演示，对项目组取得的成果给予了高度评价。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/03/201703120950_01_1636655_3.jpgEX1700S-HPLC（项目研究成果）耐压范围在0~80MPa，对应使用1.8~2.0μm色谱柱，对比常规压力的HPLC，具有更加理想的分离效果，更高分辨率、更快速分析的特点。实际分析时间可以缩短至常规HPLC的1/8~1/10。为了推广超效、超快速分析检测理念，EX1700S-HPLC提供了更为合理的实验室解决方案，同时大大的降低了客户的使用成本。所有无论从分析效率、分析精度，还是综合成本，EX1700都有绝对的优势来取代进口品牌常规压力的高效液相类产品。EX1700S-HPLC可适用医药、科研院校、第三方检测机构，生物制药、食品安全、环境监测等。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/03/201703120950_02_1636655_3.jpg

维生素A、维生素D(D2和D3)和维生素E是机体维持正常代谢和机能必需的脂溶性维生素。维生素A具有促进机体生长、维持表皮完整、生殖、骨骼及视觉等功能；维生素D（主要包括D2和D3)，它们对哺乳动物有促进钙磷代谢及成骨作用；维生素E又称为生育酚，具有促进生育、抗衰老的作用。由于这3种维生素在外界环境中不稳定，很容易受光、氧等影响而被氧化破坏，因此科研工作者一直在努力寻找合适的测定方法来得到准确、重现性好的结果。 迪马科技用户采用超高效液相色谱法，DAD检测器成功实现维生素A、D、E的分离、测定，具有分析时间短，分析结果准确，重现性好的特点。UPLC色谱分析条件*：色谱柱：Endeavorsil C18 50 × 2.1 mm, 1.8 μm（Cat.#.：87002）流动相：A：20 mmol/L三乙胺水溶液，B：甲醇 A：B=4：96流速：0.3 mL/min柱温：35 ℃检测器：DADhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/04/201304181555_435961_708_3.jpg维生素A、E色谱图*以上实验数据来源于北京市疾病预防控制中心http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/04/201304181557_435963_708_3.jpg维生素D色谱图*以上实验数据来源于北京市疾病预防控制中心UPLC法检测维生素A、D、E相关产品信息：货号名称规格样品前处理37177针头式过滤器 Nylon[size=16p

近些年来，随着科技的飞速发展，液相色谱技术应用也逐渐步入快车道，沃特世、岛津、安捷伦、戴安等分析仪器知名公司都相继研发成功并将最新的的超高效液相色谱仪推向市场，业界内外纷纷一味追求高精尖，追逐快速高效，殊不知液相色谱类仪器并非一味追求快速，而是好比谈恋爱，要看是不是适合自己的工作要求，这其中难免就会涉及到分析项目、分析精度以及工作成本等等一系列因素，本文就自己心得以及所学在此做与大家一起来探讨交流： 首先，众所周知，高效液相色谱是以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有异极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入不同类型的检测器进行检测，从而实现对样品的定性定量分析。而超高效液相色谱与高效液相色谱原理基本相同，不同之处就是：1、色谱柱发生了变化 小颗粒高性能微粒固定相出现，2、流动相超高压输液泵出现 3、采集速度更快的检测器出现 ，主要因素就是基于这三点。但是，超高效液相色谱仪并非针对每一种分析样品，每一种分析化合物都如此高效快速，必须因样而选，否则的话，就会适得其反，事倍功半，前功尽弃。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201023_561650_2328678_3.jpg 笔者单位去年采购一台 Waters ACQUITY UPLC H-CLASS，在国内环境监测业界还算是高大尚的液相色谱仪器，根据介绍可以实现：无需更改现有工作流程即可获得UPLC性能灵活和简便的四元溶剂混合和直接注射取样 完美兼容HPLC方法，无缝转换至UPLC方法 方法转换包可保证分离方法的一致性，流速范围0.010 ~ 2.000 mL/min，以0.001 mL增速步进，最高操作压力：15,000 psi最高到1 uL/min，9,000 psi最高到2 mL/min，据于此类性能，加之单位以前有一台服役多年面临脱保的安捷伦LC-1100，可以接班服役，同时提高工作效率，不必再劳神费心，一个样品等待大把时间，因此，趁着还在维保范围内，迅速入手，希望短时间之内形成"作战“能力，投入实战。 恰逢迪马科技在论坛搞一个色谱柱试用活动，遂参加尝试用液相色谱法分析水中苯系物，以做直观比较：色谱柱型号：迪马 DiamonsilPlus （固定相)，250mm（柱长）4.6 mmx5 μm色谱柱型号：Agilent Eclipse PAH固定相)，250mm（柱长） 4.6 mm x 5 μm WATERS XBridge C18 250mm（柱长）4.6 mmx 5 μm 以及 UHPLC WATERS 50mm(柱长)2.1mm x 1.7 μm，其中HPLC分析条件如下： 流动相： 甲醇 ：水= 65： 35 (如有梯度请注明梯度表)流速： 1.0 mL/min柱温： 40 ℃检测器：UV 260 nm 或其他检测器 进样量： 10 μL分析结果如下：Diamonsil Plus谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201112_561654_2328678_3.jpgAgilent Eclipse PAHhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201113_561655_2328678_3.jpgWATERSXBridge C18http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201114_561656_2328678_3.jpg上述结果分析：分析比较:Diamonsil Plus与Agilent EclipsePAH WATERS XBridge C18所分析谱图比较：前者为甲醇中的六中苯系物谱图，后者为二硫化碳中的苯系物，其他条件相同，前者流速为1mL/min进样量为20ul，后者流速为0.5mL/min进样量为5ul，通过比较可以基本得出如下结论：Diamonsil Plus 可以承受大进样量的化合物分析，柱效表现良好，在20/5的情况下，峰形保持较好；Agile