没人发帖我来活跃气氛:发光细菌的微毒检测生物发光是某些生物的一种生理现象,海洋生物中更为多见。自1672年R.Boyle观察到发光的菌体所发出的光易被化学物质抑制后,许多科学家相继对细菌的发光效应进行了大量的研究。本世纪70年代至80年代初,国外科学家首次从海鱼体表分离和筛选出对人体无害,对环境敏感的发光细菌,用于检测水体生物毒性,现已成为一种简单、快速的生物毒性检测手段。80年代初我国引进了这项技术,并先后分离出海水型和淡水型的发光细菌,用以检测环境污染物的急性生物毒性;近年来还分离出明亮发光杆菌暗变种检测环境污染物致突变性,扩大了检测范围。一、发光细菌检测的原理与操作(一)基本原理发光菌检测法是以一种非致病的明亮发光杆菌作指示生物,以其发光强度的变化为指标,测定环境中有害有毒物质的生物毒性的一种方法。细菌的发光过程是菌体内一种新陈代谢的生理过程,是光呼吸进程,是呼吸链上的一个侧支,即菌体是借助活体细胞内具有ATP、萤光素(FMN)和萤光素酶发光的。综合化学反应过程为: 该光波长在490nm左右。这种发光过程极易受到外界条件的影响。凡是干扰或损害细菌呼吸或生理过程的任何因素都能使细菌发光强度发生变化。当有毒有害物质与发光菌接触时,发光强度立即改变,并随着毒物浓度的增加而发光减弱。这种发光强度的变化,可用一种精密测光仪定量地测定。美国Microbics公司设计制造了一套微毒测定仪器。国内中国科学院南京土壤研究所,华东师范大学生物系也分别成功地研制了DXY-2型和SDJ-1型的生物发光光度计(生物毒性测试仪)。(二)典型操作1.典型操作方法 目前国内外细菌发光的测定常用的有二种方法。(1)新鲜发光细菌培养测定法 即将发光菌接种于液体培养基中,在适当条件下(20℃±0.5℃)振荡培养到对数生长期,配制为含3%NaCl盐度的适当浓度的菌悬液加入测试管中,再加入待测液,使之和菌种接触,作用5min~15min后,读出井记录对照管和样品管发光强度。此法操作较为简便。(2)冷冻干燥发光细菌制剂测定法,把培养到对数生长期的发光细菌,以冷冻干燥法制成冻干粉剂,使用时加入冷的2%NaCl溶液复苏,使其恢复到原来的生理状态和发光水平,然后用于测定。这是国家标准方法,其优点是可实行测定的质量控制。冻干粉可长期保藏方便使用,操作简便,节约时间。2.试剂与材料(1)测试菌种 明亮发光杆菌(Ptotobacterium phosphoreum)T3小种。①新鲜明亮发光杆菌悬浮液。②或明亮发光杆菌冻干粉(800万Cell/g)。(2)培养基①液体培养基 酵母膏5.0g,胰蛋白胨5.0g,NaCl30.0g,Na2HPO45.0g,KH2PO41.0g,甘油3.0g加蒸馏水至1000ml。pH7.0±0.5。②固体培养基 培养液(按上述配方)1000ml,琼脂169g,pH7.0±0.5。(3)稀释液 3%NaCl,2%NaCl。(4)参比毒物 0.02mg/L~0.24mg/L的HgC12系列标准溶液。(5)仪器与器材①DXY-2型生物发光光度计(中国科学院南京土壤研究所研制)及2ml或5ml比色管。②恒温振荡器,培养箱,手提式高压消毒锅。③10ul或20ul微量加液器,1ml注射器,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url],容量瓶,三角瓶。(6)检测样品 视实验目的而定。二、发光细菌法的应用根据发光细菌法的原理和方法,凡能干扰或破坏发光细菌呼吸、生长、新陈代谢等生理过程的环境因子,例如有毒有害的物质等都可以运用发光细菌法检测生物毒性。其主要应用包括:1.发光细菌对水、土、气中化合物的急性毒性评价及快速评价水源水和地面水的质量,渔业水体,农田灌溉水体等的检测。2.工业废水,废气和固体废弃物的急性毒性与评价,及污染源的毒性追踪与判断,河流流经地域的排污分担率的估算,污水合格排放的稀释率的推算与评定。3.土壤重金属急性毒性效应测定和评价,土壤金属毒性的协同或拮抗效应监测。4.化学品的毒性评价与安全性评定,化学危险品的风险评定,以及环境污染物的致突变性的评价。5.环境保护处理设施效果的监控。随着环境学科的发展,发光细菌法的应用范围和前景将愈来愈宽广。三、发光细菌法测定急性毒性的操作程序(一)发光细菌新鲜菌悬液的制备(第1法)1.斜面菌种培养 于测定前48h取保存菌种,于新鲜斜面上接出第一代斜面,20℃±0.5℃培养24h后立即转接第二代斜面,20℃±0.5℃培养24h,再接出第三代斜面20℃±0.5℃培养12h后备用。每次接种量不超过一接种耳。2.摇瓶菌液培养 取第三代斜面菌种近一环,接种于装有50ml培养液的250ml三角瓶内,20℃±0.5℃,184rpm/min下培养12h-14h备用。3.将培养液稀释至每毫升108个细胞~109个细胞,初始发光度不低于800mV,置水浴中备用。(二)菌液复苏(第2法)取冷藏的发光菌冻干粉,置冰浴中,加入0.5ml冷的2%NaCl溶液,充分摇匀,复苏2min,使其具有微微绿光,初始发光度不低于800mV。(三)样品采集与处理1.水样(1)从不同工业废水的各排放口,每4h采样一次,连续采集24h后,均匀混合后备用。(2)纳污水体 取其入口,中心,出口三个断面混合水样备用。(3)以同上方法采集清洁水,作空白对照。浊度大的污水,需静置后取上清液。一般样品不需加任何处理。水样按3%比例投加NaCl置冰箱备用。2.气体样品 以大气采样法取大气样品于气体吸收液中吸收5ml,按3%比例投加NaCl,置冰箱备用,同法收集清洁空气作为对照组。3.固体样品 取固体废弃物,按《工业固体废物有害特性试验与监测分析方法》制备浸出液,以取上清液,按3%比例投加NaCl,置冰箱备用。(四)试验浓度的选择在预备试验的浓度范围内,按等对数间距或百分浓度取3个~5个试验浓度,同时设空白对照和参比毒物系列浓度组。(五)发光细菌法生物毒性测定1.工业废水或有毒物质的生物毒性测定(1)发光菌悬液初始发光度测定取4.9ml3%NaCl溶液于比色管内,加新鲜发光菌悬液或冻干粉复苏菌悬液10ul,若测量发光度在800mv以上,允许置冰浴中备用。(2)取已处理待测废水样品,按等对数间距或百分浓度编号,并注明采集点。(3)按表依次加入稀释液,待测水样及参比毒物系列浓度溶液。(4)打开生物毒性测试仪电源,预热15min调零点,备用。(5)每管加入菌悬液0.01ml,准确作用5min或15min,依次测定其发光强度,记录毫伏数。每个浓度设三管重复。 2.工业废气(或有害气体)的生物毒性测定(1)气体直接通入法 用注射器直接注入气体于菌悬液中,经10min~20min测定发光菌光强度的变化。(2)气体吸收法 方法同工业废水测定法。(3)固体菌落法 挑选固态培养到对数生长期的发光菌单茵落,连同培养基切下,置比色管内,测定初始发光强度,然后用注射器将待测气体注入菌苔表面,经10min~20min后,测定发光度的变化。(六)实验结果处理与评价1.记录工业废水,废气的生物毒性实验数据及其计算。(1)相对发光率或相对抑光率计算公式: (2)EC50值 在半对数座标纸上,以横座标为对数浓度,以纵座标为相对抑或发光率,作图,求得EC50值。2.数据处理与评价(1)建立相对抑光率与参比毒物系列浓度的回归方程,求出样品的生物毒性相当于参比毒性的水平,以评价待测样品的生物毒性。(2)以EC50值评定样品的生物毒性水平 总之发光细菌法是检测环境生物毒性的一种好方法,它具有快速、简便、灵敏
[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/01/202401041020543911_9315_5604214_3.png!w690x690.jpg[/img] 食品细菌毒素检测仪是一种用于检测食品中细菌毒素的仪器。随着人们对食品安全问题的日益关注,食品细菌毒素检测仪的应用也越来越广泛。 首先,食品细菌毒素检测仪可以用于检测食品中的细菌毒素,如沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌等产生的毒素。这些毒素可能对人类健康造成严重影响,如食物中毒、腹泻、呕吐等。通过使用食品细菌毒素检测仪,可以快速、准确地检测出食品中是否存在这些毒素,及时发现食品安全问题,保障消费者的健康。 其次,食品细菌毒素检测仪还可以用于检测食品中农药残留、兽药残留等有害物质。这些有害物质可能对人类健康造成潜在威胁,如致癌、致畸、致突变等。通过使用食品细菌毒素检测仪,可以快速检测出食品中是否存在这些有害物质,避免因食品问题导致的健康风险。 此外,食品细菌毒素检测仪还可以用于检测食品中重金属含量。重金属可能对人类健康造成严重危害,如铅、汞、镉等。通过使用食品细菌毒素检测仪,可以快速、准确地检测出食品中重金属含量,避免因食品问题导致的健康风险。 综上所述,食品细菌毒素检测仪的应用十分广泛,可以用于检测食品中的细菌毒素、农药残留、兽药残留和重金属含量等。随着人们对食品安全问题的日益关注,食品细菌毒素检测仪的应用将会更加广泛,为保障食品安全和人类健康发挥重要作用。
食品细菌毒素检测仪(也称为病害肉检测仪)是一种用于检测肉类和其他食品中细菌毒素的专用设备。它的主要功能是快速、准确地检测食品中的有害物质,确保食品的安全和质量。 工作原理: 食品细菌毒素检测仪主要利用光谱技术、化学分析方法和人工智能算法,对肉类样本进行快速、准确的分析。它能够检测出肉类中是否存在有害微生物、毒素以及其他潜在的病理变化。通过特定的化学反应或光谱信号,仪器能够识别并量化食品中的细菌毒素含量。 检测范围: 食品细菌毒素检测仪广泛应用于肉类、乳制品、水产品等食品的检测。它可以检测多种细菌毒素,如肉毒杆菌毒素、葡萄球菌肠毒素等,这些毒素可能导致食物中毒或其他健康问题。 技术特点: 高灵敏度和高特异性:能够检测出极低浓度的细菌毒素,确保食品的安全性。 操作简便、快速:可以在短时间内完成大量样品的检测,提高了检测效率。 广泛的应用范围:不仅适用于肉类,还可用于检测乳制品、水产品等多种食品。 自动化程度高:一些先进的食品细菌毒素检测仪具备自动化操作和数据处理功能,减少了人为操作的误差。 使用步骤: 准备工作:检查设备是否正常工作,确认肉类是否符合检测的标准,如新鲜度、加工工艺、保存时间等。 样品处理:按照仪器说明书的要求,对肉类样品进行前处理,如剪碎、捣匀、称取等。 检测操作:将处理好的样品放入仪器中,设定相关参数,如样品名称、编号、检测方法等。然后启动仪器进行检测。 结果分析:等待仪器完成检测后,查看和分析检测结果。根据结果进行相应的后续操作,如进行再次检测、病原体分离、处理等。 总之,食品细菌毒素检测仪是一种重要的食品安全检测设备,它能够帮助监管部门和食品生产企业及时发现和处理食品中的细菌毒素污染问题,保障消费者的健康和安全。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405151128149732_9693_4214615_3.jpg!w690x690.jpg[/img]
用化学方法对环境样品提取液分析费时费钱,现在用于环境样品毒性分析的快速方法--发光细菌法,已经用于水质检测领域,美国的microtox方法就是非常成熟的发光细菌检测法,但是它有很多确定和局限性。那么如何将现有的方法结合起来呢?
作为冻干类的注射剂产品原辅料得增加细菌内毒素项目检测,国家要求的接着问题来了,一些不能溶于水的原辅料,用什么溶液溶解?可以用氢氧化钠溶液或者其他溶液溶解,但是怎么保证溶液中无细菌内毒素,或者用计量先确定有多少细菌内毒素,然后再标定?希望大神们给个解决方法,可行的。
单位最近想买一台国产便携式发光细菌毒性检测仪,从网上查了查相关产品,不知道哪家生产的仪器测试结果比较准确。请了解这发面信息的大虾们给点意见,让小妹参考下。谢谢!
实验室要购置一台发光细菌毒性检测仪,品牌要求进口,不知道有没有同行用过此类设备,推荐下品牌,谢谢了!
[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/01/202401160905048503_9085_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img] 食品细菌毒素检测仪是一种用于检测食品中细菌毒素的仪器。随着人们对食品安全意识的不断提高,食品细菌毒素检测仪在保障食品安全方面发挥着越来越重要的作用。 首先,食品细菌毒素检测仪能够快速准确地检测出食品中是否存在细菌毒素。在食品生产、加工、储存和运输过程中,由于各种原因可能会导致食品受到细菌污染,而细菌在生长繁殖过程中会产生毒素,这些毒素对人体健康构成威胁。食品细菌毒素检测仪通过特定的检测方法,能够快速地检测出食品中是否存在这些毒素,从而及时发现食品安全问题。 其次,食品细菌毒素检测仪的使用能够提高食品生产的规范性和安全性。食品生产过程中需要遵循一系列的卫生标准和操作规范,以降低食品受到细菌污染的风险。食品细菌毒素检测仪的使用可以作为一种有效的监控手段,对生产过程中的卫生状况进行实时监测,及时发现并纠正不规范的操作,提高食品生产的规范性和安全性。 此外,食品细菌毒素检测仪的使用还可以帮助企业提高产品质量和信誉度。随着消费者对食品安全问题的关注度不断提高,消费者在选择食品时更加注重企业的产品质量和信誉度。食品细菌毒素检测仪的使用可以作为一种质量保证手段,向消费者展示企业对于产品质量的控制和对于食品安全的高度重视,从而赢得消费者的信任和忠诚度。 总之,食品细菌毒素检测仪作为一种先进的检测设备,在保障食品安全方面发挥着重要的作用。它可以快速准确地检测出食品中是否存在细菌毒素,提高食品生产的规范性和安全性,帮助企业提高产品质量和信誉度。随着人们对食品安全问题的关注度不断提高,食品细菌毒素检测仪的应用将会更加广泛。
[font=&][size=16px][color=#333333]点击链接查看更多:[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-39860.html[/url]检测内容[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font][font=微软雅黑] [/font][font=宋体]最近“猫粮细菌内毒素”的话题热度很高,中广测带您了解细菌内毒素,并针对宠物食品中疑似隐患项目推出检测方案。[/font][font=宋体][size=16px]一、什么是细菌内毒素[/size][/font][font=宋体][size=16px]?[/size][/font][font=宋体][size=16px]细菌内毒素(Endotoxin)是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分,其化学成分为脂多糖(LPS)。细菌在正常状态时不释放出来,只有当细菌死亡裂解或自溶时,才表现其毒性。[/size][/font][font=宋体][size=16px]二、细菌内毒素有什么危害[/size][/font][font=宋体][size=16px]?[/size][/font][font=宋体][size=16px]相关研究表明,细菌内毒素广泛存在环境中,环境中低浓度细菌内毒素经口进入人体消化道并不产生明显危害,肝脏可以将细菌内毒素分解去除,并使细菌内毒素保持在相对较低的含量。当突然遇到或摄入大剂量细菌内毒素时,超出机体的免疫承受力时可引起发热,严重的会导致内毒素血症、休克甚至死亡。[/size][/font][font=宋体][size=16px]目前,我国已对注射剂和疫苗类产品中细菌内毒素有限量要求,但对人类食品和宠物食品中细菌内毒素含量未做规定。[/size][/font][font=宋体][size=16px] 中广测是华南地区唯一的国家级分析测试中心,是广东省饲料和饲料添加剂行政审批检测机构,2021年宠物饲料加工产品企业标准“领跑者”评估机构。拥有专业的宠物食品检测技术团队,针对当前宠物食品热点问题,参考《中国药典》“细菌内毒素检查法”,研究建立了适用于宠物食品中细菌内毒素含量的检测方法,可为从事宠物食品生产经营的广大企事业单位、爱宠人士提供全面专业的科研和检测技术服务。[/size][/font][font=&][size=16px][color=#333333]检测标准[/color][/size][/font][font=&][color=#333333][/color][/font][table][tr][td]产品名称[/td][td]检测项目[/td][td]检测标准[/td][/tr][tr][td]细菌内毒素[/td][td]细菌内毒素检查法[/td][td]中国药典[/td][/tr][/table]
[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][color=#05073b][size=16px]食品细菌毒素检测仪快速定量检测功能好用吗,食品细菌毒素检测仪的快速定量检测功能在多个方面表现出其优势,使得其在食品安全检测领域具有广泛的应用和实用性。首先,与传统的细菌毒素检测方法相比,食品细菌毒素检测仪极大地缩短了检测时间。传统的检测方法通常需要耗费大量时间,而食品细菌毒素检测仪能够在短时间内快速对肉类等食品样品进行检测,从而提高了检测效率。其次,食品细菌毒素检测仪的准确性也是其快速定量检测功能的重要优势。它能够准确判断肉类中是否存在细菌毒素,从而及时发现潜在的安全隐患,避免细菌毒素对人体健康造成危害。这种准确性对于保障食品安全至关重要。此外,食品细菌毒素检测仪的应用范围广泛,不仅适用于生肉、熟肉,还可以用于肉制品的检测。这种广泛的适用性使得食品细菌毒素检测仪在肉类检测中成为得力的助手。然而,需要注意的是,虽然食品细菌毒素检测仪具有诸多优点,但其检测结果仍可能受到一些因素的影响,如样品的准备、仪器的校准等。因此,在使用食品细菌毒素检测仪时,需要严格按照操作规程进行操作,以确保检测结果的准确性和可靠性。综上所述,食品细菌毒素检测仪的快速定量检测功能在食品安全检测中具有重要作用,其快速、准确、高效的特点使得其在肉类检测等领域具有广泛的应用前景。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/04/202404221131366229_9134_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size][/color][/font]
[摘要] 详细叙述发光细菌的生理特性及其应用原理,与其它生物监测方法相比具有快速、简便、灵敏等特点,重点评述了发光细菌法在工业废水、水域水质毒性及在其他相关领域监测中的应用情况,其测试结果与传统的鱼类毒性试验结果具有良好的相关性,实际应用方便可行[img]http://bbs.instrument.com.cn/images/affix.gif[/img][url=http://bbs.instrument.com.cn/download.asp?ID=198651]发光细菌法在环境监测中的应用.rar[/url]
本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 细菌内毒素检查包括两种方法,即凝胶法和光度测定法,后者包括浊度法和显色基质法。供试品检测时,可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时,除另有规定外,以凝胶法结果为准。 本试验操作过程应防止微生物和内毒素的污染。 细菌内毒素的量用内毒素单位(EU )表示,1EU 与1 个内毒素国际单位(IU )相当。 细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成,用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价,用于试验中的赏试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。 细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于0.O15EU/ml(用于凝胶法)或0.005EU / ml (用于光度侧定法)且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。 试验所用的器皿需经处理,以去除可能存在的外源性内毒素。耐热器皿常用干热灭菌法(250℃ 、30 分钟以上 ) 去除,也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。若使用塑料器械,如微孔板和与微量加样器配套的吸头等,应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。
细菌内毒素检测新手指南 鲎试剂 鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的蓝色血液中提取变形细胞溶解物,经低温冷冻干燥而成的生物试剂,专用于细菌内毒素与β-葡聚糖检测。 鲎试剂按原料来源分:全世界目前有4个种属的鲎,其中仅有东方鲎(Tachypleus tridentatus Leach) 和美洲鲎(Limulus polyphemus Linnaeus)可制造鲎试剂,对应生产出来的鲎试剂分别为东方鲎鲎试剂(Tachypleus Amebocyte Lysate, TAL)和美洲鲎鲎试剂(Limulus Amebocyte Lysate,LAL),TAL与LAL具有相同的功效。 鲎试剂按方法分: 凝胶法鲎试剂动态浊度法鲎试剂终点浊度法鲎试剂动态显色法鲎试剂终点显色法鲎试剂 凝胶法系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法。凝胶法鲎试剂常见规格为0.1ml/支或0.5ml/支或者更大装量,使用时应加除热原水(细菌内毒素检查用水)复溶后使用。凝胶法是通过观察有无凝胶形成作为反应的终点。此法操作比较简单,经济,不需要专用测定设备,可以进行定性或半定量测定。 特异性鲎试剂,即弃G因子鲎试剂,是国内首创的产品, 它专一对内毒素起反应,避免了G因子旁路的干扰,使检测结果更加可靠,在药检和临床检验方面是不可或缺的理想检测试剂。 动态浊度法鲎试剂、终点浊度法鲎试剂、动态显色法鲎试剂、终点显色法鲎试剂,这四种方法都是定量检测内毒素的。 根据检测原理,终点浊度法和动态浊度法都属于浊度法。浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。终点浊度法未见商品化产品。动态浊度法(又称动态比浊法)是检测反应混合物的浊度上升某一预先设定的吸光度所需要的反应时间,或是检测浊度增加速度的方法。 终点显色法和动态显色法都是属于显色基质法。显色基质法系利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量的方法,根据产物颜色判断内毒素浓度,又称为比色法。厦门鲎试剂厂于2005年推出以鲎四肽为显色底物的鲎试剂盒,抗干扰能力强, 灵敏度高达0.005EU/ml, 质量达到国际领先水平。目前已有500多家单位使用该试剂盒,并有部分单位发表相应文献。国内有少量国外产品,但价格远高于国产试剂,到货周期长。 如果您仅需要检测样品的内毒素限量,可以选择凝胶法鲎试剂,通过确定内毒素限值及最大有效稀释倍数,做样品的干扰试验从而确定使用的鲎试剂的灵敏度。如果您需要定量测定样品中内毒素含量则应选择显色基质鲎试剂盒或动态浊度法鲎试剂。 动态浊度法与动态显色法需要带温育系统的动态光度测定仪器及配套软件,例如,微板鲎试仪ELx808及软件TALgent 或Gen5。动态浊度法与动态显色法简单方便、一步即成,线性范围宽。 终点显色法需要配套酶标仪或可见分光光度计进行检测。配套带有温育系统的酶标仪,如微板鲎试仪ELx808,可减少试剂用量。 相关链接:厦门市鲎试剂实验厂有限公司于1983年成立,于2000年加资改组,是国内最大最早生产鲎试剂的厂家,本厂于1987年研制成功鼓浪屿牌鲎试剂(荣获1978-1979年度福建省重大科技成果二等奖,1983年卫生部甲级成果奖,1988年获卫生部科学技术进步三等奖),1988年获卫生部新试剂生产批件((88)卫药SJ-02号),1995年全国首家推出特异性鲎试剂,2005年又推出显色基质鲎试剂,2007年推出高效、自动、微量的鲎试仪ELX808(内毒素测定仪)及配套软件,2009年重磅推出透析专用鲎试剂盒。目前已有透析专用鲎试剂盒、显色基质鲎试剂、凝胶法鲎试剂、动态浊度法鲎试剂、特异性鲎试剂、内毒素、辅剂及鲎试仪ELX808、除热源耗材等一系列产品。
简介:水质毒性在线分析仪基于发光细菌急性毒性原理而研发,能直接、客观地反映出水体对生物(发光细菌)的综合毒性,具有连续、快速、自动监测等在线监测仪器的特点,同时具有较高灵敏度和可靠性。可响应数千种生物/化学污染物的生物毒性,满足ISO 11348-3以及GB/T 15441-1995等标准要求,保证监督机构对水质变化能够做出快速反应,为全面保障供水安全与环境监管提供一种快速有效的方法,为环境污染事件以及整个地表水体、饮用水等的监测预警提供重要技术支持。其适用范围包括:饮用水水源地和饮用水水质的常规预警监测,瓶/桶装水及饮料生产企业、大型集会直饮水供给、水产养殖的监控预警。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411271501_524892_2966054_3.png基本参数1)试验生物:发光细菌(种类包括:费氏弧菌,明亮发光杆菌,青海弧菌等);2)检测范围:污染物浓度在ppb-ppm之间,光强抑制率-100%~+100%;3)识别污染物:可响应2000种及以上毒性物质(包括:农药、除草剂、PCB 、PAH 、重金属、生物毒物、石油污染物、蛋白抑制剂、呼吸系统抑制剂等有毒物质以及其他微生物等等);4)测量方式:采用序批式检测方式;可设置成时间周期测量模式或外部触发测量模式;5)测量周期:最短15min (接触反应5min),接触反应时间可在5min-60min内任意设置;6)校准及参比:仪器具备标样自动校准功能。采用双路对照检测技术,检测样本的同时,检测纯水作为参考进行对比;7)警报信息:实时自动报警。包括抑制率超标,质控异常,试剂体积异常,仪器运行状态异常等;8)信号输出:RS-485,标准MODBUS通讯协议。功能特点:操作及维护简单、界面友好且稳定性好;响应快速(最快可设置反应时间为5min);运行成本不高;灵敏度高,可检测到低于ppm的含量;在出现高污染情况时不需重新启动机器;机器断电后重新来电时,自动恢复工作状态;运用专用软件可以实现准确控制检测进程、自动生成报告、绘图、分析、保存等功能,并且直接读取相对发光强度、相对发光率、抑制率、毒性级别等。专业配套发光细菌(费氏弧菌):包括在线和便携式http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411271507_524900_2966054_3.png相关指标:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/11/201411271506_524899_2966054_3.png
来源:农民日报 时间:2008年2月26日 位于以色列海法的Checklight公司利用地中海沿岸一种夜间会发光的细菌开发出一种对水中污染物极为敏感的物质,将这种物质做成的基底与发光细菌相结合,再配上一个光度计,即可快速便捷地对水质进行实时监测。只要将这种发光细菌放到含有害物质的水中,它们就会发出报警光信号,对这种信号测量分析,即可对污染物性质和污染程度做出判断。 该公司首席执行官尼瑞特表示,随着污染物和恐怖活动的增多,保证饮用水安全显得格外重要。目前,饮用水质量检测尚缺乏一种便捷有效的实时检测手段,此项技术,正好可以填补这一空白。 实验显示,用这种方法检测水质,只要15分钟即可获得结果,检测成本一次只需数美元,而且能现场完成,即便是浓度很低的污染物也能及时发现,这样便可为管理部门及时采取措施,避免饮用水污染造成的损害赢得宝贵时间。
[size=16px] 如何提高食品细菌毒素检测仪准确率 提高食品细菌毒素检测仪的准确率可以从以下几个方面入手: 实验室环境控制:细菌毒素检测需要在一个无菌的环境中进行,因此要确保实验室的清洁度。实验室内应定期进行清洁消毒,以避免细菌、霉菌等微生物的滋生。 仪器校准和维护:食品细菌毒素检测仪需要定期进行校准和维护,以确保其准确性。校准一般由厂家或专业人员进行,实验室内应定期进行自校准,确保仪器正常运转。同时,应按照仪器说明书进行日常维护,如清洗探头、更换滤膜等。 检测方法选择:不同的食品样品和细菌毒素类型需要采用不同的检测方法。应选择灵敏度高、特异性好的检测方法,以确保检测结果的准确性。 操作规范:实验操作应严格按照仪器说明书和操作规程进行,避免人为误差的产生。在检测过程中,应注意避免交叉污染和样品之间的干扰。 数据处理和分析:实验数据应及时处理和分析,避免因数据丢失或错误而导致结果不准确。在数据处理时,应注意排除异常值和离群值,采用合适的统计方法进行分析。 人员培训:实验人员应具备相应的专业技能和知识,熟悉仪器操作、检测方法、数据处理等方面的知识。实验人员应定期参加培训和技能考核,提高自身的技术水平。 质量控制:实验室内应建立完善的质量控制体系,对检测过程和质量进行监控。例如,可以采用标准物质进行质量评价,比较不同方法的检测结果等。 试剂和消耗品的质量控制:实验所用的试剂和消耗品应符合质量要求,避免因试剂质量问题导致检测结果不准确。在购买试剂和消耗品时,应对供应商进行评估和选择,确保采购的物品质量可靠。 仪器比对和验证:为了确保食品细菌毒素检测仪的准确性和可靠性,应定期进行仪器比对和验证。可以与其他可靠的检测方法或标准物质进行比对,以评估仪器的性能和准确性。 通过以上措施的实施,可以有效地提高食品细菌毒素检测仪的准确率,为食品安全监测提供更加可靠的技术支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/02/202402011016087225_2491_6098850_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/size]
细菌内毒素检查法应用与论坛[R].2005,4(1):9,做细菌内毒素检测,想参考一下,谁有这篇文章啊?
标准化建设中提到的发光细菌毒性监测仪。自己做了点东西 只为交流 欢迎补充指正[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207061629_376196_2408375_3.jpg[/img] [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207061629_376197_2408375_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207061629_376198_2408375_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207061630_376199_2408375_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207061630_376200_2408375_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207061630_376201_2408375_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207061630_376202_2408375_3.jpg[/img]
注射用水中有一项细菌内毒素的检测,从来没有做过,不知道要购买哪些仪器和试剂,望有经验的老师指点。
[center]非细菌内毒素反应曲线的发现[/center]鲎试剂的特异性系指在药品、生物制品和血液制品中鲎试剂能准确测出被测物质内毒素的能力,既不能造成样品内毒素的漏检,也不能将其它物质错判为内毒素。目前我公司研究证明,已知能与鲎试剂发生反应的物质有细菌内毒素和β-葡聚糖。中国药品生物制品检定所夏振民报道除(1-3)-β-葡聚糖外,(1-4)、(1-6)-β-葡聚糖同样使鲎试验产生阳性结果,这些物质的总称为真菌多糖,普遍存在于真菌细胞壁。如果这类物质具有像内毒素一样的致热活性,细菌内毒素检查和热原检查结果的符合率会接近一致,但是真菌多糖不是一种致热物质。这将导致在使用普通鲎试剂检测这些样品时,出现细菌内毒素检查不合格,热原检查合格的现象,造成对这些物质热原检查的错判(假阳性),将其它物质错判为内毒素,造成企业直接经济损失。判断假阳性的方法: 1、特异性鲎试剂法。特异性鲎试剂经特殊的工艺改造,只与细菌内毒素发生凝胶反应,阻断了β-葡聚糖生成凝胶的反应,避免假阳性的形成。本公司的鲎试剂特异性好,对药品中超量的细菌内毒素分辨率为100%,只与细菌内毒素发生凝胶反应,不与β-葡聚糖生成凝胶反应,避免假阳性的形成,避免将合格药品判为不合格而造成企业的经济损失;同时可避免因样品内毒素的漏检,造成临床用药的不良反应,保证患者用药安全。 2、定量反应曲线分析法。细菌内毒素、β-葡聚糖样物质与定量鲎试剂反应的区别:定量鲎试剂与细菌内毒素反应曲线为规则S型特征曲线,β-葡聚糖样物质与定量鲎试剂反应曲线为经过0点的斜线或不规则曲线;定量鲎试剂与细菌内毒素为变速反应,反应速度先慢然后变快最后又变慢,β-葡聚糖样物质与定量鲎试剂反应基本是恒速。通过观察定量反应的反应曲线及反应速度可以区分细菌内毒素和β-葡聚糖样物质。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/06/200906011408_153048_1626679_3.jpg[/img]该反应曲线能直观的判断内毒素反应类型
本文是USP24细菌内毒素检查法(BACTERLAL ENDOTOXINS TEST)的译文,但目前执行的标准是USP24版第二增补本(USP—NF19 Second Supplement)的细菌内毒素检查法,读者可对照学习,从中可看出USP24细菌内毒素检查的不足之处。本文将介绍用鲎试剂检测样品内或样品上存在的细菌内毒素浓度的方法。鲎试剂(Limulus Amebocyte,LAL)来自鲎的循环细胞,经水提取而行,制备和检验后,用于凝固法。反应的终点是将供检样品稀释后,与平行稀释的参考内毒素标准进行直接比较得到的。测得的内毒素含量用规定的内毒素单位表示。鲎试剂也是用浊度法或显色法来读取数据的,这些试齐只要能满足这些选择方法的要求,就可以使用。在做试验时,需要先做出一条标准曲线,并用该曲线计算供检样品的内毒素含量,包括样品和对照液加鲎试剂后的培育时间和在分光光度计上读取光密度时使用的波长等操作,都应该事先规定好。如果是终点浊度法,则到达培育期后,应立刻读取读数。而动力学检测(凶手浊度法和显色法),光密度的测定是贯穿于整个反应期间,而用于计算结果的百分数就是从这些读数中计算出来的。在用终点法的显色法检测时,在到达事先规定的反应时间后,添加停止酶反应的试剂使反应停止后,再读取数据。1、参考内毒素标准与对照内毒素标准参考内毒素标准(Reference standard endotoxin,RSE)是美国药典(USP)的内毒素参考标准,其效价为每瓶10 000个USP内毒素单位(EU)。每瓶参考内毒素标准加5ml鲎试剂用水(LAL Reagent Watet),用旋转搅拌器间歇搅拌30min使其溶解,制成原液,用这一原液制作合适的系列稀释。原液应保存于冰箱中,用于以后的稀释,但保存时间不得超过14d。用前,用旋转搅拌器强力搅拌至少3min,每一步稀释,至少搅拌30s,然后才能用它稀释下一步。经稀释的参考内毒素不得贮存待以后使用,因为吸附作用会使其失去活性。对照内毒素标准(Contuol standard endotoxin,CSE)是以参考内毒素标准为标准另行制备的。一批新的对照内毒素标准在使用前应进行检定。检定时使用的鲎试剂应为试验中使用的同批鲎试剂。参考内毒素标准对照内毒素标准进行检定时,可使用鲎试剂的凝固法,按“试验操作”进行。每批对照内毒素标准,至少取1瓶与1瓶参考内毒素标准进行对比。参考内毒素标准的每个稀释度作4管。每瓶或每个样品的对照内毒素标准的每个稀释度也都要4管。参考内毒素标准终点的对数Log10的平均值和对照内毒素标准终点的对数Log10平均值之间的差值的反对数等于对照内毒素标准效价的标定值。可根据情况,将其变换成每ng干燥制剂的单位数或每瓶所含的单位数。适宜的对照内毒素标准的效价应不小于2EU/ng也不大于50EU/ng。2、试验的准备鲎试剂的灵敏度应经过确证。试验中使用的所有容器和用具,都必须在≥250℃的烤箱中,用足够的时间进行加热处理、破坏这些用具表面上可能存在的外源性内毒素。内毒素试验的结果是否可靠,还必须从试验使用的各种用具、溶液、洗涤用品中取样或提取样品,并用适当的方法证明它们对反应没有抑制或拉强或其它干扰作用。可按下述方法进行抑制试验或增强试验。试验中应设置阴性对照。如果鲎试剂的原材料、生产方法或处方发生改变时都要重新进行试验。3、鲎试剂灵敏度的确认试验为了确认鲎试剂标签上的灵敏度,每批至少取1瓶样品进行检定。参考内毒素标准(或对照内毒素标准)作2倍系列稀释,稀释成2.0λ,1.0λ,0.5λ和0.25λ。其中λ是鲎试剂标签上的灵敏度EU/ml。上述4个稀释度和阴性对照都要重复做4管。所得结果的几何平均值的对数应大于或等于0.5λ,小于或等于2.0λ。每一批新的鲎试剂,使用前都必须作标签灵敏度的确认试验。4、抑制试验和增强试验用不超过地大有效稀释而检测不出内毒素的样品,不加或内毒素,使最后浓度等于2.0λ,1.0λ,0.5λ和0.25λ。按照试验操作(Test Procedure)项的规定用标准内毒素进行检定。不加和加内毒素的样品管至少做4管。同时,用水稀释上述相同浓度的内毒素和阴性对照各两管,做平行两管试验。按照计算和判定项的方法,计算样品终点内毒素浓度的几何平均值。如果所得结果大于或等于0.5λ,小于或等于2.0λ,则该样品适合作细菌内毒素检查。用中和、灭活或除去干扰物质方法或用不超过最大有效稀释度稀释检品后,可重做抑制试验和增强试验。如果用不超过最大有效稀释法,对已知加量的内毒素可以克服抑制和增强作用。则样品可以经过稀释后,再作内毒素检查。如果在试验条件下,对未处理的样品检查出有内源性内毒素。则该样品不适合用于作抑制或拉强试验。不过,这种样品可用超过滤法将存在的内毒素去掉或做适当稀释、使之适合于作抑制或增强试验。稀释未处理样品(像开瓶溶解或在使用前注射前稀释那样),稀释到检验不到内毒素但不超过最大有效稀释倍数。再用这些已稀释的样品重作抑制试验或增强试验。5、最大有效稀释度(MVD) 最大有效稀释度是指在使用时将药物溶解或稀释成恰好用于注射或其它非经口途径使用的浓度。有时为了避免给药量的体积(EU/ml)计算。用试剂标签上的灵敏度(EU/ml)λ除限定浓度,就可以得到MVD因子。如果某一试剂的限量浓度是按重量或按药品的活性单位
热原检查法和细菌内毒素检查药典附录并没有统一的给药剂量和标准限度,均在各品种项下具体规定,故是否能有效地保证临床用药的安全性,其标准限值是我们在制订质量标准时首先要关注的。 对于内毒素限值的确定,药典附录有相应计算公式,即当今世界各国普遍采用的细菌内毒素计算公式,即:L=K/M,式中K为按规定给药途径,人每公斤体重每小时可以接受的不产生任何不良反应的细菌内毒素剂量(亦称致热阈),它基本上是一固定值,药典上对每一给药途径的K值都有具体的规定。M为按规定的给药途径,人每公斤体重每小时给药的最大剂量。这一个值的确定实际上才是计算限值的关键。 原则上一般根据药品使用说明书来确定最大剂量。通常以一次剂量为准,如注明输2小时,则除以2,否则均以1小时为准;不足1小时的,也以1小时计;如未给出一次剂量,而是一日剂量,如一日2~4g,分2~4次用,这种情况以计算后的最大剂量,即2 g/次计算。用法用量中有成人剂量、儿童剂量、重症剂量时,要体现出最大剂量。通常儿童剂量以Kg计算时大于成人剂量,所以,此时应用儿童剂量,因为儿童与重症病人更易出现问题,故应更严格。用于感染、肿瘤、心血管、中枢疾患易感的药物建议加上安全系数。复方、输液、工艺易污染者从严,大输液一般计为0.5EU/ml。 有时候,细菌内毒素限值也以国外药典为参考,甚至就直接采用国外药典的限值。这一点在实际应用的时候,必须从中国的临床用药的实际出发,不能不加区分地把同品种中国外药典规定的限值移至中国药典,总的原则是,对这一类国外药典已建立细菌内毒素检查法的品种,原则上要求将国外药典规定的限值与按公式计算出的数值进行比较,一般应以严格者为该品种的限值。另外以热原剂量作参考的问题,现在原则上已不再考虑热原的剂量。但大容量输液细菌内毒素限值为0.5EU/ml,主要是由热原试验中以10ml/kg iv家兔剂量得出的。 细菌内毒素的限值确定后,需要关注的第二个方面就是细菌内毒素方法学研究问题。在申报资料中,无论是仿制药还是创新药,申请人一般均会提供有关物质、溶出度、含量测定等主要检测项目的方法学研究资料,而对于细菌内毒素检查,给予的关注似乎要少得多,而申报资料中提供了这方面资料的也少之又少。实际上,处方工艺的改变对检测方法所带来的影响,对有关物质、溶出度、含量测定等项目的影响绝对不会比对细菌内毒素检查法带来的影响大,因为,细菌内毒素检查法实际是一种较为特殊的检查方法,中国药典2005年版对什么时候该进行细菌内毒素的干扰试验进行了相关规定【1】: 当进行新药的细菌内毒素检查试验前,或无细菌内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时,须进行干扰试验。 当鲎试剂、供试品的配方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时,须重新进行干扰试验。 所谓干扰试验,换句话说就是方法的可行性试验。从药典对它的要求可以看出,不论是新药,还是已有国家标准的仿制药,只要须控制细菌内毒素的,有这样一项检查项的,均应在质量研究中对其方法的可行性进行验证。在以往工作中遇到的一个实例可以对其进行说明,我们曾经对硫酸头孢匹罗这个品种进行标准复核,结果发现不同厂家的硫酸头孢匹罗,几乎相同的含量、相同的工艺,对其细菌内毒素检查所产生的干扰情况却存在较大的差别,通过进一步的试验研究,结果发现造成这种结果最大的可能是由于生产过程中引入的微量杂质的不同所引起的。这个例子进一步说明了在申报资料中提供细菌内毒素方法学研究资料的必要性。 进行内毒素干扰试验时,首先要确定限值,然后采用至少两个厂家的鲎试剂进行干扰预试验,得到一最大不干扰浓度或最小稀释倍数后,即可用这一最大不干扰浓度进行正式的干扰试验。预试验一般不要以市售鲎试剂灵敏度计算所得的MVD作为起始浓度来做。注射液建议以原液来做,粉针剂建议至少往上几个浓度级来做,探索其干扰程度,如没有干扰,方法则更可靠。
1968年美国科学家Dr. Levin和Bang建立了鲎试验法。此后世界各国对鲎试剂的生产和应用得以迅速发展。1980年美国药典20版首先收载了细菌内毒素检 查法。随后,英国药典、日本药局方、中国药典等也相继收载了该方法。本文主要对中国药典1995年版与英国药典1995年增补本、美国药典23版和日本药局方13版等的细菌内毒素检查法进行了比较。1 检验品种的比较中国药典1995年版二部共收载细菌内毒素检查品种12个,2000年版二部增至47个,而美国药典23版收载了471个品种进行细菌内毒素检查。因此,我们需加紧对更多的品种进行细菌内毒素检查方法的研究,加快该法对药品检验的普及和推广工作,提高我国药品标准和检验水平。2 检验方法的比较细菌内毒素试验的方法有凝胶法、浊度法、显色基质法、免疫学法等。其中凝胶法多为限量 检查法,浊度法和显色基质法为定量检查法,且后两种方法都属于分光光度法。浊度法还可 分为终点浊度法和动态浊度法;显色基质法也可分为终点显色基质法和动态显色基质法。凝胶法是较为经典的方法,各国药典都有收载,而收载了细菌内毒素定量测定法的有美国药典、英国药典、欧洲药典和日本药局方等。中国药典1995年版只收载了凝胶法,2000年版才涉及到定量测定法。因此,我们还需要对细菌内毒素定量测定进行研究,需要有供定量测定 用的标准品、仪器和试剂,以后逐步建立起我国的细菌内毒素定量测定方法。3 细菌内毒素标准品各国药典均设置了细菌内毒素的标准品,其中中国药典、英国药典和美国药典还可采用根据标准品为基准进行标定的工作标准品或对照标准品。除英国药典采用U为内毒素的单位外,其余各国药典都用EU为内毒素的单位。美国药典和中国药典对内毒素标准品每一步稀释时的混匀时间作出了明确规定。除中国药典外,其余各国药典规定了内毒素标准贮备液在冰箱里保存不得超过14d,且用前应在旋涡混 合器上充分混合至少3min。
细菌内毒素的概念 细菌内毒素,英文称作Endotoxin,是G-菌细胞壁个层上的特有结构,内毒素为外源性致热原,它可激活中性粒细胞等,使之释放出一种内源性热原质,作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖中的类脂A 细菌内毒素这个概念在1890年的时候就已被提了出来,它是在研究发热物质过程所引成的,1933年Boivin最先由小鼠伤寒杆菌提取出来,进行化学免疫学方面的研究,到1940年时候,Morgan使用志贺氏痢疾菌阐明了细菌内毒素是由多糖脂质及蛋白质三部分所组成的复合体,到了1950年以后,随着生物学,物理化学,免疫学以及遗传学等的进步发展,细菌内毒素的研究工作,尤其是其化学结构组成及各种生物活性间的关系也更加明确起来。 细菌英文叫Bacteria:为原核生物中的一类单细胞微生物由二分裂法繁殖。若按革兰氏染色法可将细菌分为G+菌和G-菌两大类。这两类细菌细胞壁的结构和化学组成存在很大差异。唯有肽聚糖为其共同成分,但其含量的多少和肽链的性质有所不同,见下表:细胞壁结构革蓝氏阳性菌革蓝氏阴性菌厚度厚,15—50薄,10—15肽聚糖含量多,占胞壁干重50—80%少,占胞壁干重10%左右脂类含量少,约1—4%多,约11—22%磷壁酸有无外膜无有脂蛋白无有脂多糖无有 细胞壁较薄,厚约10-15nm,结构也较复杂。肽聚糖含量低,仅占细胞干生10%左右,层薄又较疏松,因肽聚糖之间仅四肽侧链直接联结,缺乏五肽桥;肽聚糖居于细胞最内层,外面由内向外还有脂蛋白,外膜和脂多糖的三层聚合物。 (1)脂蛋白(lipoprotein) 由类脂和蛋白质构成,联结在外膜与肽聚糖层之间,类脂一端经非共价键联结到外膜的磷脂上,另一端由共价键联结到肽聚糖肽链中的二氧基庚二酸 残基上,使外膜和肽聚糖层构成一个整体。 (2)外膜(outer membrane) 是革兰氏阴性菌细胞壁的重要结构,位于肽聚糖的外侧,其结构类似细胞膜,为液态的磷脂双层,其中镶嵌一些特异蛋白质,穿透外膜的内外双层,呈液态镶嵌体。外膜中间有微小孔道,容许水溶性的小分子通过,以进行细胞内外的物质运输和交换。除此之外,外膜还能防止胰蛋白酶和溶菌酶等进入,起到保护性屏障作用。(3)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS) 由多糖O抗原、核心多糖和类脂A(lipid A)组成(图1-8),位于最外层。多糖O抗原向外,由若干个低聚糖的重复单位组成的多糖链,即革兰氏阴性菌的菌体抗原(O抗原),有特异性。核心多糖由庚糖、半乳糖、2-酮基-3-脱氧辛酸(2-keto-3-deoxyoctonic acid, KDO)等组成,所有革兰氏阴性细菌都有此结构。类脂A是以脂化的葡萄胺二糖为单位,通过焦磷酸酯键组成的一种独特的糖脂化合物,具有致热作用,是革兰氏阴性细菌内毒素的毒性成分。 细菌内毒素即:许多病原性细菌所产生的毒素。 一般细菌毒素可分为两类,一类为外毒素(Exotoxin);它是一种毒性蛋白质,是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。如白喉杆菌、破伤风杆菌、肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰氏阴性菌。另一类为内毒素(Endotoxin)。是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构。细菌在生活状态时不释放出来,只有当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时,才表现其毒性,内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂A成分。
以发光的费氏弧菌为检测菌种,应用SKALAR TOXTRACER 毒素分析仪测定液态奶中三聚氰胺对费氏弧菌的毒性效应。结果表明:发光强度的抑制率与三聚氰胺溶[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]量浓度呈正相关,相关系数在0.83~0.99 之间;发光强度的抑制率与液态奶中的三聚氰胺质量浓度呈负相关,相关系数在0.79~0.94 之间。发光菌对液态食品中三聚氰胺等毒性物质的检测具有快速、简便、灵敏和低廉的特点,发光菌的生物毒性检测法有望在食品安全方面得到广泛应用。
热原和细菌内毒素 一、热原(progon) 医院临床在使用药品注射剂时,常有发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐、肤色灰白、休克、严重时导致死亡,这种症状称为热原反应。 为提高药品质量和用药安全,人们对热原进行了广泛的研究,直到1923年Seibert提出了用家兔检测热原的方法。在1942年美国药典首先将家兔热原检查项收入药典成为法定方法,中国药典1953年版开始收载该方法,随后的世界各国药典都以动物热原检查法作为药品质量监测的方法之一。 家兔热原检查法的优点,可在规定时间里观察到家兔的体温变化,相应反应了热原质引起哺乳类动物复杂的体温反应过程。所以,在半个多世纪以来热原检查法,为保障药品质量和用药安全发挥了重要作用。 但随着制药工业的发展和临床用药的要求,该方法的局限性越来越明显。这种热原检查法,只局限于某种药物进入体内(血循环)是否能引起体温变化或热原反应作为判断药品是否污染热原的方法,已不能满足医药工业发展的需要。其缺点: ①标准化程度低,无法判断检查样品中存在的热原质到底是什么或是哪一种物质。 ②由于试验动物家兔是处在被细菌污染的环境中,通过吸入或皮肤感染细菌内毒素而被免疫,导致动物的个体差异较大。 ③试验动物受到药品的药理活性干扰,而影响体温变化(如放射性药品、抗生素、生物制品等),实验结果难以判断。 ④设备及实验费用昂贵(如建设动物房、水电、动物饲料等耗费),做一种药品需要几百元/次,而鲎试剂仅几十元/次。 综上情况分析,鲎试验法可避免以上动物热原检查法的不足,该技术的成功和应用真可谓是药品质量监控一场大革命。 什么是热原?目前国内外仍未有统一的认识,但从国内外文献报道中,一个共同的意见,都普遍认为:它是指细菌内毒素的脂多糖。 欧洲药典委员会副主席J.Van Noordwijk提出:“严格地讲,不是每一种热原都具有脂多糖的结构,但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。在药品生产质量管理规范(GMP)条件下,药品生产的质量控制一般可以接受的观点是:不存在细菌内毒素意味着不存在热原。 二、细菌内毒素(Endotoxin) 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖(Lipoply Saccharide)和微量蛋白(Protein)的复合物,它的特殊性不是细菌或细菌的代谢产物,而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。其化学成分广泛分布于革兰氏阴性菌(如大肠杆菌、布氏杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌、沙门氏菌等)及其它微生物(如衣原体、立克次氏体、螺旋体等)的细胞壁层的脂多糖,其化学成份主要是由O-特异性链、核心多糖、类脂A三部分组成。(附图1) 、O—特异性链:位于脂多糖分子最外层的多糖链,是由3—5个单糖(一般不多于25个)连成为一个多糖链。其单糖包括戊糖、氨基戊糖、已糖、氨基已糖、脱氧已糖等,单糖的种类、位置和排列顺序和空间构型,因菌种不同而异。因此,它决定菌体热原的特异性。 核心多糖:核心多糖的变异性较小,位于类脂A和0—特异性链(内层)之间,在结构上分为内核心和外核心。外核心含有数种己糖,包括葡萄糖、半乳糖、乙酰氨基葡萄糖等组成。内核心含有庚糖及特殊的酮糖(3-脱氧-D-甘露糖-辛酮糖KDO)。这部分结构对不同菌株的LPS基本相似,而且KDO是以不耐酸的酮糖链与类脂A的氨基葡萄糖连接,是构成内毒素脂多糖的核心部分。 类脂A:位于LPS分子结构的外层,是由氨基葡萄糖、磷酸和脂肪酸(10—18C)组成,故称之为糖磷脂,也是细菌外膜的一种,形成单体聚合物。具有疏水性(强)和亲水性(弱)的双相性。但是,类脂A可从O-特异链及核心多糖分离出来,游离的类脂A可自身凝聚成大分子的复合体而难溶于水,并具有生物活性。所以,类脂A(Lipida)是内毒素多种生物活性或毒性反应的主要基团。该基团没有种属特异性,所以各属细菌的类脂A结构相似,其毒性反应相似。如发热、血液流动力学改变、弥漫性血管内凝血,并导致休克等。 由于类脂A有4条主链和2条支链的脂肪酸与内酰胺连接组成,所以提纯的内毒素LPS是极为不稳定的。这就要求内毒素应在低温条件下保存,在工作中内毒素稀释应尽可能地缩短时间,并要现配现用。 三、内毒素的生物活性与疾病的相关性 据文献报道,在很早期(约19世纪末)的意大利学者Centanne通过菌属自溶的方法,从革兰氏阴性杆菌中提取出一种类似毒素的物质,因为这种物质对动物体产生致热活性的同时,亦产生出一种病理学病性反应,而被命名为致热毒素(Pyrotoxina)。同时由德国的Buchner也从多种细菌中提取到相似的致热毒素,并证实了这种毒素在导致白细胞数目的改变同时,具有增强机体对细菌感染时的免疫能力。因此建立了“发热疗法”。 在美国纽约的临床医师,William B• Coley用加热法杀死录杆菌和化脓性链球菌,将上清滤液用于各种恶性肿瘤(特别是肉瘤)的治疗,取得较好的疗效。他将这种细菌上清液命名为Coley氏毒素。此后murrayJ.Shear 证实Coley氏毒素中具有抗肿瘤作用的物质为内毒素。 直到1933年Boivin等学者在研究鼠伤寒杆菌的致病机理时,从鼠伤寒杆菌中提取出内毒素。在50年代以后,对内毒素的化学成分和化学结构的研究得到迅速发展。经过大量实验表明,内毒素具有极强的生物学活性,特别是革兰氏阴性菌感染和静脉注射提取的内毒素溶液时,可导致动物体发生内毒素休克和死亡。 内毒素的致病机理,主要是由于革兰氏阴性杆菌(如大肠杆菌、沙门氏杆菌、伤寒杆菌,布氏杆菌、变形杆菌金黄色葡萄球菌等)和其它微生物(病毒、立克次氏体、衣原体螺旋体等)感染时,这类菌属随病灶渗液进入血液循环,并扩散到各种组织器官和体液细胞内繁殖,这类菌属在体内死亡和解体后,才稀放出大量的细菌内毒素脂多糖(LPS),据初步实验表明,当机体内毒素浓度國值 0.005ng/ml时,可诱生内源性热原质如肿瘤坏死因子、白细胞介素和β2—干扰素等。这些因子刺激体温调节中枢导致机体发热,细菌内毒素直接或间接作用于肝脏和胰腺时,可使肝细胞损伤,使糖原异生酶(如葡萄糖—6—6磷酸酶、糖原合成酶)的活性降低,抑制糖原的异生和分解。同时内毒素作用于胰腺导致胰腺功能障碍,并形成胰岛素抵抗,造成血糖升高致使并发心肌炎和心肌肿大的系列高血糖症状。所以,革兰氏阴性菌属感染或在病灶中的细菌进入体液细胞繁殖,当其死亡或解体后产生的内毒素,可多次进入血液,引起反复发作,其病理变化极为广泛,几乎所有的器官和组织都可被侵犯,而引起各器官的功能障碍。其中以网状内皮系统最常见,淋巴、脾、肝、肾、骨髓中均有上皮细胞增生,形成肉芽肿,以肝脏有肉芽肿外,还可发生冲血、水肿和肝细胞坏死,最终导致肝硬化的发生。其它器官亦有相似的毒性反应。
[center]鲎法测定细菌内毒素影响因素的研究进展[/center] 鲎试剂法是利用鲎血细胞溶解物与微量(pg/ml级)细菌(主要是革兰氏阴性细菌,G-)的内毒素反应,从而检出被检物中内毒素的一种生物体外检测新技术。因为其具有快速、简便、经济、灵敏度高、重现性好、一次可同时测几个样品等优点,自从一九六四年美国学者Levin 和 Bang发现此法以来[1],鲎法正被日益广泛地应用于医药卫生、食品卫生、环境卫生、分子生物学、以及微生物学中。 鲎法大致可分为凝胶法、比浊法色原基质法、以及免疫法等。本文依据文献报道,总结了近年来国内外学者在用这些方法测定细菌内毒素时发现的一些影响因素及其消除方法的研究进展,以供试验者参考。 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=153149]鲎法测定细菌内毒素影响因素的研究进展[/url]
最近公司在折腾发光细菌法测急性毒性这个项目(水质 急性毒性的测定 发光细菌法GB/T 15441-1995),我大概看了解了一下,做这个方法的同行总共就没几家,然后提供方法要求的仪器(生物发光光度计)供应商也不好找,朋友们您们用的是什么仪器呢,可以分享一下吗,谢谢!
BET-24A细菌内毒素分析仪器怎样做到定量检测的呢????
中国药典2005年版二部附录细菌内毒素检查法中的干扰试验,说:"使用的供试品溶液应为未检查出内毒素且不超过最大有效稀释倍数(MVD)的溶液."请问如果做注射用水的细菌内毒素,那么供试品溶液是什么样的注射用水?怎样处理不含内毒素?后面的"凝胶半定量试验"A "从通过干扰试验的稀释倍数开始"这个稀释倍数是定值吗?怎样求?"系列溶液A中每一系列平行管的终点稀释倍数乘以λ,"什么是终点稀释倍数?