外泌体分离与检测

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  • 外泌体检测服务
    I、外泌体提取样本：全血，血浆；细胞上清液；体液：尿液、心包积液、唾液、脑脊液、腹水等。用于分离外泌体类型及所需量：血清样本： 5ml （全血10ml)；血浆样本： 5ml （全血 8-10ml)；无血清培养细胞上清：50ml；体液： 20ml；运输条件：客户邮寄标本要用干冰运输，提前跟公司销售联系并告知快递单号。分离方法试剂盒法超高速离心法 II、外泌体透射电镜检测实物数据信息实验周期客户提供样本及提取试剂盒6周我们提供分离后的外泌体外泌体鉴定或测序结果注：透射电镜结果与外泌体样品、提取方法，来源等密切相关，有一定失败风险 III、外泌体纳米流式浓度粒径检测 粒径技术原理： 当待测样品的折射率与二氧化硅颗粒的折射率相同或相似时适用。利用二氧化硅标准球建立散射光强度与颗粒粒径的标准工作曲线，即可将相同条件下待测样品的散射强度转化为粒径，获得待测样品的粒径分布。浓度检测原理: 通过检测已标定浓度的荧光微球的个数快速得到特定进样压力（Sampling 压力为1.5kPa）的样品流体积流量，在相同进样压力条件下检测待测样品，即可获得待测样品的颗粒浓度。技术优势:精确检测外泌体颗粒浓度及粒径分布范围；检测消耗样本量低；快速。实物数据信息实验周期 客户提供外泌体PBS重悬液原液或稀释液6周 我们提供所需试剂中文实验流程与结果报告（每个样本提供不少于5张电镜原始照片）送样要求 1. 可测量粒径范围10~1000 nm（不同细胞分泌的外泌体粒径不同）；所需外泌体悬液送样量为1~2 mL 体积（至少1 mL 体积，可以采用经过滤后的PBS 进行稀释）2. 送样时，样品须一直处于低温环境中（干冰条件下运输，避免反复冻融）3. 送样前须告知溶剂的具体情况；默认溶剂为水，也可使用其他非腐蚀性液体作为溶剂，但折射率需与水接近（1.3~1.5），如油不可作为溶剂结果展示 实物数据信息 实验周期客户提供外泌体PBS重悬液原液或稀释液6周 我们提供所需试剂 中文实验流程与结果、报告原始数据（.txt 及.eps）
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    厂商： 广州竞远生物科技有限公司
    品牌： 未知
    型号： 0
    价格： 面议
  • 全自动外泌体荧光检测分析系统 400-860-5168转0980
    全自动外泌体荧光检测分析系统美国NanoView公司所开发的全自动外泌体荧光检测分析系统是一款无需纯化的、全自动的可对单个外泌体进行表征分析的全新设备。该设备能够提供全方位的外泌体表征信息，包括外泌体粒径大小、计数、分布、携带蛋白表达、生物标志物（CD9，CD81，CD63等）共定位等。操作简单，结果可靠。一经推出，便引起了外泌体领域科研工作者的广泛关注，短短两年时间在全球已有50多个实验室采用该技术，发表重要文献近百篇。全自动外泌体荧光检测分析系统的基本原理是一种基于特异性免疫捕获技术，允许研究者直接分析特定群体的外泌体或外囊泡。通过配套的试剂盒，客户一次性能够分析多达9个不同的样本，大大节省了时间和经济成本。全自动外泌体荧光检测分析系统兼容各种生物样本，除了纯化的外泌体之外，对于血液、尿液、恶性肿瘤、腹水中的外泌体也可直接检测分析，大大拓展了研究范围。ExoView&trade 参数信息- 颗粒大小分辨范围：大于50 nm（可分析大于40 nm的病毒颗粒）- 荧光粒径分辨范围：大于20 nm- 所需样本体积：25 μL- 激发波长：410 nm，488 nm，555 nm，640 nm- 可一次检测16个样本，每个样本可同时检测6个不同亚型及3种生物标记的荧光定位- 单个样品检测时间：8分钟- 捕获抗体：一个芯片多允许6种捕获抗体（+阴性对照）- 荧光通道：3个荧光通道应用方向及主要特征生物标记物共定位可量化4种标记物的表达情况计数分析直接从样品中计算抗原阳性外泌体的数量，无需提纯粒径分析高精度统计外泌体的颗粒大小及分布检测外泌体内容物使用ExoView Cargo试剂盒可探测外泌体内部核酸的装载情况，分析装载率荧光检测具备3个荧光通道，能够探测单个蛋白的结合线性工作流程9个样品的全自动分析无须纯化无需担心纯化带来的误差，更的测量样品间的表征和表达信息的差异多重样本分析可使用6种表面标记物来筛选外泌体粒径分析全自动外泌体荧光检测分析系统能够对50 nm的外泌体进行全方面的表征，无论是粒径尺寸、粒径分布还是外泌体的亚型均可在一次测试中得到。并且所用来测试的样本无需进行纯化，避免因纯化带来的样本偏差。分析不同大小和不同尺度的外泌体亚群，在CD171过表达系统中，100 nm以上的外泌体仅表达了CD171。 量化外泌体亚群 通过抗体捕获的模式，全自动外泌体荧光检测分析系统能够量化含有不同标记物的外泌体亚群，并对不同种群的外泌体进行特异性计数和分析。整个过程无需纯化，并且线性范围可跨越3个数量。TSPAN8阳性细胞外囊泡的稀释曲线。使用1:3比例的梯度稀释。用R2 = 0.9986计算与TSPAN8荧光数据的线性拟合。 检测外囊泡中的装载物 MISEV建议在表征外泌体和外囊泡时，应当同时测量表面和载体蛋白。使用ExoView芯片可穿透外泌体，探测膜内蛋白和载体。并且单次可定量3种表面、管腔蛋白。检测细胞外泌体内的Syntenin。WT细胞在未穿膜的条件下几乎观测不到Syntenin的信号。进行穿膜处理后可以观测到Syntenin信号，而KO之后信号消失 生物标志物共定位 全自动外泌体荧光检测分析系统能够在单个外泌体样本上检测多达4种标记物，并同时提供外泌体的其它表征数据诸如计数、颗粒尺寸统计等。 无需纯化全自动外泌体荧光检测分析系统只测量含有靶标抗原的特定细胞外泌体群体。仅需35ul的稀释样品，即可直接获得外泌体的表型、l粒径和计数信息。并且无需担心污染物对测试的影响。无论纯化与否，Exoview均可进行分析ExoView&trade Kit 配置清单:ExoView&trade Tetraspanin KitsCD9 - 捕获抗体CD63 - 捕获抗体CD81 - 捕获抗体Mouse IgG 阴性对照 CD9、CD63、CD81三色共标记荧光抗体。ExoView&trade Tetraspanin Plasma KitsCD9 - 捕获抗体CD63 - 捕获抗体CD81 - 捕获抗体CD41a - 捕获抗体多达三种定制化捕获抗体同种阴性对照 CD9、CD63、CD81三色共标记荧光抗体。ExoView&trade Tetraspanin Custom KitsCD9 - 捕获抗体CD63 - 捕获抗体CD81 - 捕获抗体多达三种定制化捕获抗体同种阴性对照CD9、CD63、CD81三色共标记荧光抗体。ExoView&trade Cargo Kits兼容所有ExoView Kit标准 CD9, CD63和CD81 捕获抗体Mouse IgG 阴性对照 ExoView Cargo 试剂CD9、CD63、CD81三色共标记荧光抗体。Sytenin荧光抗体用户单位中国用户已发表文章☛ 南京大学李靓/张辰宇/张玉婧课题组在《Frontiers in Cell and Developmental Biology》发表文章。☛ 上海大学在《Journal of extracellular vesicles》发表文章。☛ 中国科学院深圳技术研究院在《Lab on a Chip》发表文章。 ☛ 北京天坛医院、国家纳米科学中心、北京航空航天大学在《Advanced Science》发表文章。☛ 同济大学附属上海市肺科医院、上海思路迪转化医学在《Journal of Nanobiotechnology》发表文章。☛ 山东千佛山医院在《NANO LETTERS》发表文章感谢用户老师对Quantum Design China & NanoView设备的认可与支持！2022-2023发表文章&bull Richard J. R. Kelwick …& Paul S. Freemont. (2023) Opportunities to accelerate extracellular vesicle research with cell-free synthetic biology. Journal of Extracellular Vesicles.&bull Laurence Blavier …& Yves A. DeClerck. (2023) The capture of extracellular vesicles endogenously released by xenotransplanted tumours induces an inflammatory reaction in the premetastatic niche. Journal of Extracellular Vesicles.&bull Hongyun Wang ……& Junjie Xiao. (2022) Extracellular vesicles enclosed-miR-421 suppresses air pollution (PM2.5)-induced cardiac dysfunction via ACE2 signalling. Journal of Extracellular Vesicles.&bull Linglei Jiang……& Santosh Dhakal. (2022) A7 bacterial extracellular vesicle-based intranasal vaccine against SARS-CoV-2 protects against disease and elicits neutralizing antibodies to wild-type and Delta variants. Journal of extracellular vesicles.&bull Shaobo Ruan, Nina Erwin, Mei He. (2022) Light-induced high-efficient cellular production of immune functional extracellular vesicles. Journal of extracellular vesicles.&bull Nasibeh Karimi ……& Cecilia Lä sser. (2022) Tetraspanins distinguish separate extracellular vesicle subpopulations in human serum and plasma – Contributions of platelet extracellular vesicles in plasma samples. Journal of Extracellular Vesicles.&bull Heikki Kyykallio ……& Pia R-M Siljander. (2022) A quick pipeline for the isolation of 3D cell culture-derived extracellular vesicles. Journal of Extracellular Vesicles.&bull Roberto Frigerio ……& Marina Cretich. (2022) Comparing digital detection platforms in high sensitivity immune-phenotyping of extracellular vesicles. Journal of Extracellular Vesicles.&bull Yael Hirschberg ……& Inge Mertens. (2022) Characterizing extracellular vesicles from individual low volume cerebrospinal fluid samples, isolated by SmartSEC. Journal of Extracellular Vesicles.&bull Sukhbir Kaur……& David D. Roberts. (2022) Single vesicle analysis of CD47 association with integrins and tetraspanins on extracellular vesicles released by T lymphoblast and prostate carcinoma cells. Journal of Extracellular Vesicles.&bull Simone M. Crivelli……& Erhard Bieberich. (2022) Function of ceramide transfer protein for biogenesis andsphingolipid composition of extracellular vesicles. Journal of Extracellular Vesicles.&bull Gi Beom Kim …& In-San Kim. (2023) Harnessing Oncolytic Extracellular Vesicles for Tumor Cell-Preferential Cytoplasmic Delivery of Misfolded Proteins for Cancer Immunotherapy. Small.&bull J. Klein, Y. Cao. (2023) Multi-Lipid Synergy In Cartilage Lubrication: Redundancy Or Evolution? Osteoarthritis and Cartilage.Valerie DeLuca …& Michael E. Berens. (2023) Extracellular vesicles as a pharmacodynamic reporter in glioblastoma. Cancer Research.&bull Sarah Pike …& Liya Xu. (2023) Extracellular vesicles in diagnostic retinoblastoma aqueous humor correlate with disease stage and clinical outcome: a pilot study. Cancer Research.&bull D. Cookson …& Y. Ashraf Kharaz. (2023) The Biological Response Of Anterior Cruciate Ligamentocytes Following Treatment With Synovial Fluid Extracellular Vesicles. Osteoarthritis and Cartilage.&bull Mei Lu …& Yuanyu Huang. (2023) Antitumor synergism between PAK4 silencing and immunogenic phototherapy of engineered extracellular vesicles. Acta Pharmaceutica Sinica B.&bull Luke C. McIlvenna ……& Martin Whitham. (2023) Single vesicle analysis reveals the release of tetraspanin positive extracellular vesicles into circulation with high intensity intermittent exercise. The Journal of Physiology.&bull Joseph Blommer ……& Dimitrios Kapogiannis. (2023) Extracellular vesicle biomarkers for cognitive impairment in Parkinson’s disease. BRAIN.&bull Tyler J ……& Atta Behfar. (2022) Exosome biopotentiated hydrogel restores damaged skeletal muscle in a porcine model of stress urinary incontinence. Npj Regenerative Medicine.&bull Min Han ……& Tao Xin. (2022) Three-Dimensional-Cultured MSC-Derived Exosome-Hydrogel Hybrid Microneedle Array Patch for Spinal Cord Repair. Nano Letters.&bull Zijian Yang ……& David A. Issadore. (2022) Ultrasensitive Single Extracellular Vesicle Detection Using High Throughput Droplet Digital Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. Nano Letters.
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    厂商： QUANTUM量子科学仪器贸易（北京）有限公司
    品牌： NanoView Biosciences
    型号： ExoView R200
    价格： 面议
  • 建筑外窗现场气密性检测设备GTI660 400-860-5168转6002
    建筑外窗现场气密性检测设备GTI660GTI660建筑外窗气密性测试系统用于检测建筑外窗的现场气密性能，使用时关闭建筑外窗，在测试现场通过安装专用窗用密封框与建筑外窗形成静压箱，在此空间内加压或减压，来测试建筑外窗的气密性能。 产品特点3.2寸高分辨率彩色LCD屏，中文界面，操作简单方便；可正负双向加压，气流稳定，压力变化快速主机背部强磁体设计，可方便悬挂于专用支架上可同时显示压力、大气压力、温度、渗透量移动平均模式有效控制数据因波动带来的测试误差仪器主机可以直接估算渗漏量并给出定级建议，方便用户现场了解检测对象状态RS485通讯、WiFi通讯，配置专用软件；专业的密封波纹管连接套件，可快速安装及拆卸，并配有专用支架，便于折叠收纳安装步骤简易，设备小巧，便于运输及维护符合标准：GB/T 7106-2019、JG/T 211-2007、GB/T 31433-2015； 建筑外窗现场气密性检测设备GTI660性能指标建筑外窗气密性测试系统 GTI 660型号参数供风主机流量范 围1 ～ 60 m3/h精 度读数的±3% ± 0.5 m3/h分辨率0.01 m3/h压力范 围0 ~ 500 Pa精 度读数的±0.5% ± 1Pa分辨率0.1 Pa大气压范 围70～130kPa精 度读数的±2%分辨率0.1kPa温 度测试范围0～60℃精度±0.5℃分辨率0.1℃电源AC220V重 量约10kg尺 寸（长度×深度×高度）约370mm×295mm×315mm控制主机显示屏3.2寸电源4节AA电池或DC5V适配器重 量约250g（不含电池）附件 波纹管连接套件长度2.5米包装布箱（长度×深度×高度）约 590mm×350mm×500mm支架套件(选件)升降高度0.7～1.5米 注：如遇产品设计、规格、参数变更，均以我司提供的最新数据为准，恕不另行通知。建筑外窗现场气密性检测设备GTI660
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    厂商： 吉泰精密仪器（沈阳）有限公司
    品牌： GTI
    型号： GTI660-
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  • 【原创大赛】新型外泌体分离方法

    【原创大赛】新型外泌体分离方法

    [align=center][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]新型[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]外泌体分离方法[/color][/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]肿瘤细胞来源的外泌体在分子水平上促进肿瘤的进展、侵袭和转移。因此，在探索细胞间信号传导，分析功能分子成分（蛋白质、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]mRNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]microRNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）前需要有效的检测和分离肿瘤源性外泌体的能力，这可能为癌症诊断和预后提供关键信息。[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][color=#000000]1[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]基于尺寸排阻的外泌体分离技术[/color][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]外泌体是直径在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30-200 nm[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的囊泡，其尺寸小于绝大部分的细胞外囊泡，因此，基于这一特性，可利用具有限制相对分子量或大小的过滤器来分离外泌体。目前，最常用的基于尺寸的外泌体分离技术就是超滤离心法。该方法是一种基于悬浮颗粒或聚合物大小的外泌体分离技术，小于膜孔径的物质会通过过滤膜，大于膜孔径的物质被截留在膜上。超滤法比[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]速度更快，且不需要特殊的设备，已有研究表明该方法可以成功从[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.5 mL[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]尿液中分离外泌体。[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]目前已经开发了一种适合无细胞样品的商用外泌体分离试剂盒，兼具外泌体分离和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]提取的功能。如图所示，该试剂盒利用注射过滤器双层膜结构，当样品通过两层膜时，较大的细胞外囊泡（如凋亡小体和微囊泡）被保留在上层膜上，而外泌体捕获在下层膜上。与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和外泌体沉淀法相比，超滤法从尿液中获得的外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]产量最高。该方法的主要缺点在于分离的外泌体容易堵塞过滤膜，导致分离效率下降。此外，该方法可能会导致囊泡的变形和破裂，影响下游分析的结果。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]另一种基于尺寸的外泌体分离方法是尺寸排除色谱法[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SEC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。该方法利用多孔固定相将悬浮颗粒和聚合物按照大小进行分类[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]流体动力半径小的物质能够通过孔隙，而流体动力半径较大的物质会被截留在孔隙上。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]此外，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]该方法结合其他方法使用可取得更好的效果[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]例如，与单纯的超滤法或[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相比，该方法分离的外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]结合[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]后续超速离心可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]提高[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]尿外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的捕获效率[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，从而有利于寻找肾脏疾病生物标志物。该方法分离外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]主要[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]缺点在于干扰物多[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔隙极易堵塞，导致色谱柱重复率低，分离效率较低。[/size][/font][align=left][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108012209419773_3887_5111497_3.png[/img][/align][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']1-3[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']连续过滤原理图[/font][font='times new roman'][size=13px][68][/size][/font][/align][align=center][font='times new roman']Figure [/font][font='times new roman']1-[/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']Schematic illustration of sequential filtration[/font][font='times new roman'][size=13px][68][/size][/font][/align][align=center][/align][font='times new roman'][color=#000000]2[/color][/font][font='times new roman'][color=#000000]基于聚合物沉淀的分离技术[/color][/font][font='times new roman'][size=16px]聚合物沉淀[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]技术是通过添加水性聚合物使外泌体溶解度或分散性改变，减少外泌体的水合作用，使外泌体沉淀以达到分离的技术。通常使用分子量为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8000 Da[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的聚乙二醇（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PEG[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）与样品共孵育，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]℃过夜后，用低速离心或过滤法分离含有外泌体的沉淀物。目前，已开发了一系列聚合物沉淀试剂盒可用于体液和培养基中外泌体的分离。聚合物沉淀分离外泌体的方法易于使用、回收率高，且不需要专门的设备。该方法的主要缺点在于容易引入蛋白质和聚合物材料等其他污染物，使得提取的外泌体纯度较低。[/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=14px][color=#000000]基于免疫亲和的分离技术[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外泌体磷脂双层膜中含有丰富的蛋白质和受体，如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD81[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD63[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TSG101[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、上皮细胞粘附分子等，利用这些受体与配体之间的相互作用，使外泌体与特殊设计的磁性颗粒之间建立免疫亲和作用，可用于外泌体的分离富集。例如，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Zarovni[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等报道了一种基于微孔板的酶联免疫吸附试验（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ELISA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）用于捕获和定量检测外泌体。尽管与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]UC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]产量相当，但是该方法具有快速、易于使用和与常规设备兼容的优势。该报道继续开发了一种基于磁免疫捕获的外泌体分离试剂盒用于从细胞培养基和生物液中分离外泌体，其质量和纯度均优于其他技术。此外，这种方法对样品的初始体积没有要求，可以很容易地缩小或增大样品容量。而该技术主要缺点在于缺乏最佳的外泌体标志物。此外，随着肿瘤的进展，肿瘤抗原表达和调节的异质性可能导致低估和假阴性，并且有些抗原表位可能被阻断或掩蔽。[/size][/font]

  • SEC分离提取外泌体

    大家好，新手科研小白，想求助大家SEC分离外泌体需要采购的仪器有哪些，暂定是用血清外泌体

  • 外泌体综述

    [align=center][size=16px]外泌体综述[/size][/align] 外泌体是直径30-150纳米之间的细胞外囊泡，在疾病发生和进展中起着重要作用。因此，外泌体在早期诊断、靶向治疗等方面均具有很大的潜力。 外泌体生物发生及作用 外泌体的生物发生 1967年，Wolf在人血浆中首次发现一种来源于血小板膜泡的物质，并将其称之为“血小板尘埃”。之后，所有的生物体液以及体外培养的细胞上清中都被检测到含有囊泡。外泌体的生物发生涉及多种机制，这些机制有助于蛋白质和RNA等在细胞间的传递，从而生成具有源细胞特定成分的外泌体。多囊泡体(MVBs)的极限膜向内萌芽形成腔内囊泡(ILVs),等到晚期内体成熟后，MVBs可以与质膜融合，在细胞外空间中释放封闭的ILVs，被释放出去的ILVs称为外泌体。外泌体主要通过两种不同的机制释放，即跨反式高尔基网络释放和诱导释放。Rab家族蛋白，如Rab27a和Rab27b，是外泌体分泌的关键调节剂。除了Rab27a和27b外，其他Rab家族成员Rab35和Rab11也已被证明通过与GTPase激活蛋白TBC1结构域家族成员10A-C(TBC1D10A-C)相互作用来调节外泌体的分泌。研究还表明，癌症抑制蛋白p53能通过调节各种基因的转录（如TSAP6和CHMP4C）来刺激和增加外泌体分泌的速率。 外泌体的作用 外泌体是由细胞释放的纳米级囊泡，存在于不同的生物体液中，如血液、唾液和尿液。这些囊泡携带丰富的“货物”，包括蛋白质、信使RNA(mRNA)和microRNA(miRNA)。1983年，Pan在大鼠网织红细胞中首次观察到内吞囊泡的分泌。1987年，科学家Johnstone将这类囊泡定义为“外泌体”。最初，科学家认为外泌体是由细胞产生的代谢废物。然而，随着对外泌体的研究更加深入，人们逐渐抛弃这一误解。越来越多的研究表明，外泌体参与细胞间通信，是细胞微环境和旁分泌信号的重要组成部分。1998年，L.Zitvogel等人发表了一项关于树突细胞（DCcell）能产生有抗原提呈能力的外泌体的研究，阐明了外泌体含有功能性的MHC-I类II类分子和共刺激因子。2007年，H.Valadi等人的研究证实，细胞之间可以利用外泌体RNA交换遗传物质。这说明了细胞之间可以通过外泌体互相影响，甚至可以将一个细胞的基因强加到另外一个细胞上。2013年，美国科学家JamesE.Rothman、RandyW.Schekman及德国科学家ThomasC.Südhof共同获得当年诺贝尔生理医学奖，以表彰他们发现并阐明了细胞囊泡运输系统及其调控机制。来自癌细胞的外泌体已被证实可以调节癌症细胞生长、增殖、迁移过程，还能影响癌症的化疗耐药。因此，外泌体是理想的可作为非侵入性诊断和预后的生物标志物。 外泌体的分离分析方法 基于对外泌体研究的需要，科学界对外泌体的高效分离、定量和分析方法也在不断尝试和深入。由于样品基质和外泌体理化性质的复杂性，从体液中准确分离外泌体仍存在重大挑战。在过去的几十年里，研究主要使用差分和密度梯度离心、超滤和免疫分离等方法。目前，已有商业外泌体分离试剂盒投入使用。商业试剂盒通过用聚乙二醇或类似成分沉淀囊泡来减少耗时，但是存在非囊泡与外泌体一起共沉淀的弊端，外泌体的常规检测方法仍需向快速、高效、可重复和低成本的方向改进。近年来，基于研究和临床需要，越来越多的分析方法已经被用来分析外泌体。例如，酶联免疫吸附测定（ELISA）、纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）、流式细胞术和荧光活化细胞分选（FACS）已成功开发用于外泌体定量。 蛋白质谱分析在外泌体中的应用 外泌体蛋白质组学是对外泌体中的蛋白质进行全面分析，以了解其生物学功能和疾病相关性。外泌体蛋白质组学分析涉及到外泌体的分离纯化、鉴定、数据分析等过程。蛋白质谱是外泌体蛋白质组学研究的手段之一，通过质谱可以获得蛋白质的名称、组成、表达量等信息，进而找到与疾病相关的蛋白质，探索可以用于疾病早期诊断和预后评估的生物标志物。质谱分析具有灵敏度高、通用性强、准确性高等优点，在研究中发挥了重要作用。

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  • ExoView外泌体全面表征试剂盒—外泌体检测服务
    ExoView外泌体全面表征试剂盒外泌体计数、粒径、蛋白表达、蛋白共定位一次完成 检测样本类型对细胞培养上清、血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液等生物样本中的外泌体直接进行分析捕获抗体种类anti-CD81, anti-CD9, anti-CD63, 同型IgG对照；可自定义单次上样体积35 μl稀释样本重复检测数目3复孔荧光抗体种类CD9（Blue）/ CD81（Green）/ CD63（Red） 实验原理① 35 μL外泌体样品滴加在芯片上孵育；② 预先包被的抗体特异结合外泌体表面蛋白以捕获外泌体；③ 再使用荧光抗体特异性标记需要表征的标记物； ④ 后用ExoView R100检测外泌体粒径、计数、蛋白表达（CD9，CD81，CD63等）及共定位。检测流程产品类别产品货号产品名称EV-TETRA-C人外泌体检测试剂盒EV-TETRA-P人血浆外泌体检测试剂盒EV-TETRA-M2鼠外泌体检测试剂盒EV-TETRA-C-CAR人外泌体内容物检测试剂盒EV-TETRA-P-CAR人血浆外泌体内容物检测试剂盒EV-TC-FLEX自由捕获人外泌体检测试剂盒EV-TP-FLEX自由捕获人血浆外泌体检测试剂盒EV-TC-FLEX-CAR自由捕获人外泌体内容物检测试剂盒EV-TP-FLEX-CAR自由捕获人血浆外泌体内容物检测试剂盒EV-TM-FLEX自由捕获鼠外泌体检测试剂盒EV-TM-FLEX-CAR自由捕获鼠外泌体内容物检测试剂盒EV-FLEX-2自由捕获外泌体检测试剂盒EV-FLEX-2 -CAR自由捕获外泌体内容物检测试剂盒EV-CTETRA-1/2/3人外泌体检测试剂盒+1/2/3个自定义捕获抗体EV-CTETRA-1/2/3-CAR人外泌体内容物检测试剂盒+1/2/3个自定义捕获抗体EV-CUST-1/2/3/4/5/6自定义1/2/3/4/5/6抗体捕获外泌体检测试剂盒EV-CUST-1/2/3/4/5/6-CAR自定义1/2/3/4/5/6抗体捕获外泌体内容物检测试剂盒试剂盒特点特异性捕获芯片上可包被多达6种捕获抗体，特异性捕获含特定蛋白标记物的外泌体。阳性外泌体计数芯片捕获外泌体后，可通过SP-IRIS技术直接检测样品中外泌体的数量。 单个外泌体蛋白共定位分析检测每个外泌体的荧光信号并进行统计，可获得荧光共定位信息，用于分析样品中不同表型外泌体的比例（如右图所示）。 无需纯化使用抗体捕获模式，防止样品中杂质影响结果，可直接检测血液、尿液和细胞培养液中的外泌体，未纯化样品的测量结果与纯化后基本一致（如右图所示）。粒径分辨率高 高精度SP-IRIS技术，可检测≥50 nm的外泌体，测量结果与电子显微镜检测结果基本一致，并统计生成外泌体的粒径分布结果（如右图所示）。可检测外泌体内容物 试剂盒配套相应的穿膜剂，可穿透外泌体并对外泌体内容物进行染色并检测，未穿膜时只能检测到跨膜蛋白CD9的荧光信号，穿膜后即可检测到外泌体内容物Syntenin的表达（如右图所示）。测试数据外泌体荧光数量统计 外泌体粒径检测荧光强度与粒径关系 荧光共定位分析 发表文章• Andras Saftics.(2021) Data evaluation for surface-sensitive label-free methods to obtain real-time kinetic and structural information of thin films: A practical review with related software packages. Advances in Colloid and Interface Science. • Kyoung-Won Ko.(2021) Integrated Bioactive Scaffold with Polydeoxyribonucleotide and Stem-Cell-Derived Extracellular Vesicles for Kidney Regeneration. ACS Nano. • Tanina Arab. (2021) Characterization of extracellular vesicles and synthetic nanoparticles with four orthogonal single‐particle analysis platforms. Journal of Extracellular Vesicles. • Niaz Z.Khan.(2021) Spinal cord injury alters microRNA and CD81+ exosome levels in plasma extracellular nanoparticles with neuroinflammatory potential. Brain, Behavior, and Immunity. • Dario Brambilla. (2021) EV Separation: Release of Intact Extracellular Vesicles Immunocaptured on Magnetic Particles. Analytical Chemistry. • Enkhtuya Radna. (2021) Extracellular vesicle mediated feto-maternal HMGB1 signaling induces preterm birth. Lab on a Chip. • Li, M., Soder. (2021) WJMSC‐derived small extracellular vesicle enhance T cell suppression through PD‐L1. Journal of Extracellular Vesicles. • Crescitelli, R. (2021) Isolation and characterization of extracellular vesicle subpopulations from tissues. Nature protocols. • Berger, A. (2021). Local administration of stem cell-derived extracellular vesicles in a thermoresponsivehydrogel promotes a pro-healing effect in a rat model of colo-cutaneous post-surgical fistula. Nanoscale. • Vidal, M. (2020) Exosomes and GPI-anchored proteins: Judicious pairs for investigating biomarkers from body fluids. Advanced drug delivery reviews. • K Cho, H Kook.(2020)Study of immune-tolerized cell lines and extracellular vesicles inductive environment promoting continuous expression and secretion of HLA-G from semiallograft immune tolerance during pregnancy. Journal of Extracellular Vesicles. • Maximillian A. Rogers.(2020)Annexin A1–dependent tethering promotes extracellular vesicle aggregation revealed with single–extracellular vesicle analysis. Cell Biology. • Annette M. Marleau.(2020)Targeting tumor-derived exosomes using a lectin affinity hemofiltration device. Cancer Research. • Alessandro Gori.(2020)Membrane-Binding Peptides for Extracellular Vesicles On-Chip Analysis. Journal of Extracellular Vesicles. • Rossella Crescitelli.(2020)Subpopulations of extracellular vesicles from humanmetastatic melanoma tissue identified by quantitative proteomics after optimized isolation. Journal of Extracellular Vesicles. • Maria S. Panagopoulou.(2020) Phenotypic analysis of extracellular vesicles: a review on the applications of fluorescence. Journal of Extracellular Vesicles.• WeiYan.(2020) Immune Cell-Derived Exosomes in the Cancer-Immunity Cycle. Trends in Cancer. • Daniel Bachurski. (2019) Small RNA Sequencing across Diverse Biofluids Identifies Optimal Methods for exRNA Isolation. Cell.用户单位 外泌体检测流程：仅需7步实现外泌体快速检测
    供应商： QUANTUM量子科学仪器贸易（北京）有限公司
    品牌： NanoView Biosciences
    价格： 面议
  • SHUV-10紫外-可见光检测器
    SHUV-10紫外-可见光检测器采用高速信号处理技术，具有较高的采样率和出色的分离度，先进的光路设计、多色滤光片和光栅，测试波长更加稳定，保证了更好的线性范围，波长便于拆卸、清洗、维护的流通池，有效的延长了检测器的使用寿命。
    供应商： 青岛盛瀚色谱技术有限公司
    品牌： 盛瀚
    价格： 面议
  • 紫外检测仪
    1、分析、定性： 　凡对紫外光敏感的物体，均可在ZF-401紫外线检测仪上进行分析，定性。但各种物质对紫外线波长的敏感又不同，故您在定货时，请选择您需要的，适合您工作的波长（254nm,310nm,365nm）如果您对物质敏感的波长不熟悉时，您可将以上三种波长的灯管都订上货，以便在研究时有充分的选择，免走弯路，而完成神圣的事业。另外选择合适的透射紫外线滤色片的面积，也很重要，如果紫外线滤色片面积大，而您的分析物小时，多余的紫外光将会炽坏你的面部和眼晴。如果紫外线滤色片的面积小而你的分析物大时，就没有充足的紫外光源通过您的分析物致使您的研究达不到预期效果（紫外线滤色片面积下祥）。 2、一般文献图表和纸层纸样的拍摄： 　先把随机所附的有机玻璃罩在仪器上放平，然后把要拍的样纸放在该罩上，打开可见光源开关，调节两侧光源位置和角度；相机安装在相机托架上，校正焦距、光圈、即可进行曝光拍摄。 3、DNA RNA电脉胶的拍摄 　向外移开两侧白炽灯，移开底座上的有机玻璃罩，把样品胶（如经EB染色的需装上红色滤色镜）直接放在紫外线滤色片上，在可见光下调好焦距（焦距略高于样品胶1-2mm），曝光时间自己掌握，关掉白炽灯，打开紫外灯，在暗下待紫外光稳定后即可拍摄。照相后，如发现有灯管影同时出现在底片上时，应考虑将短波紫外灯管换成波长较长的。例如：254nm换成310nm或365nm的灯管。
    供应商： 北京金欧亚科技发展有限公司
    品牌： Fortis
    价格： 面议
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  • 从ISEV到CSEV：贝克曼分离纯化和检测方案助力外泌体研究
    外泌体作为当前生物领域的前沿热点之一，备受国内外研究人员的持续关注。多伦多ISEV大会刚结束，由中国研究型医院学会细胞外囊泡研究与应用专业委员会CSEV主办的第一届全国细胞外囊泡功能与临床应用研讨会于广州成功举办。ISEV主席Andrew Hill等到场祝贺并领头系列高质量讲座。会上，多位知名国内外专家学者，介绍分享了EVs领域最新研究成果，包括EVs及其内容物标记检测技术、Evs在疾病中的机制作用及其在临床诊断治疗中的应用研究等内容。当大家讨论到外泌体等胞外囊泡的分离技术时，ISEV和CSEV的多位专家委员均不约而同地推荐使用超速离心的方法，并提供了各种试剂盒与超离结果的对比分析。使用超速离心分离外泌体，产出高，成本低， 结果准确，可以说是当前最为成熟、使用也最多的经典方法。会议第一天的上午，贝克曼库尔特离心机产品经理霍德华先生也应邀作了大会技术报告，详细解说了超速离心分离外泌体的两大类技术（差速沉淀和密度梯度离心法）和相关实验流程的优化细节。技术报告中还赠送福利，提供了超速离心自我制备无外泌体血清的详细protocol，为国内用户节约了大量科研经费。同时，贝克曼的讲座和展位，一如既往地再次受到了与会者的热捧。贝克曼针对外泌体应用，打造了一套从离心纯化到分析检测的整套解决方案，致力于为外泌体研究者提供全面的解决方法。了解更多贝克曼外泌体整体方案，欢迎点击此处，注册领取贝克曼外泌体方案大会讲座PPT。
    时间： 2017-06-19
    作者： 贝克曼库尔特
  • 【聚焦外泌体】之从细胞培养上清液中分离外泌体的准备
    对于外泌体研究的新手来说，细胞培养上清液是非常好的实验材料，外泌体相对容易收集。我们可以首先从细胞上清开始来熟悉整个外泌体的研究流程，充分了解整个流程需要使用的仪器、试剂以及准备时间，对我们后续的实验安排有很大帮助。其中比较重要的一点是要确定有足够的初始细胞上清液来收集外泌体，以保证我们能够拿到足够多的蛋白、核酸来进行后续分析。我们可以逆向思维，通过后续检测所需蛋白/核酸量——外泌体量——细胞上清量，来确定初始细胞上清体积。先从细胞上清开始，熟悉了整个过程后，我们再进行其他相对较难的实验材料进行研究。01细胞系选择无论贴壁细胞或是悬浮细胞，能分泌更多外泌体的细胞系肯定是优先选择的。一般说来，肿瘤细胞的外泌体分泌水平要高一些，但并不是所有肿瘤细胞系都能分泌足够多的外泌体，我们可以借鉴文献中的细胞系推荐1。以常用基因转染的HEK293为例，是比较公认的分泌外泌体水平较高的细胞系。或者，以每100ml的细胞上清收集到的外泌体蛋白可达到5~20μg范围作为标准2，例如我们可以从100ml的细胞上清中获得10μg的外泌体蛋白，如果后续要做蛋白质组学分析（需50μg蛋白），那么初始细胞上清就需要扩大到之前的5倍，500ml，500ml上清差不多是通过离心方法可处理的大样品量了。如果后面收集到的外泌体蛋白都不够进行一次WB，那就要考虑一下是不是要换个细胞系了。如果外泌体蛋白小于3μg，那么考虑到扩大体系的实验难度和后续实验的顺利进行，那证明我们用的细胞系不太合适做外泌体研究。*虽然很多生物样品或是细胞系在文献中没有出现过，许多外泌体相关的数据库（ExoCarta, Vesiclepedia, Evpedia等）可以提供帮助，在上面我们可以查到有哪些细胞系已经有人成功进行外泌体提取了。或者也可以咨询一些做外泌体的生物公司，看看他们是用哪些细胞系来制备商业化的标准外泌体样品的。02优化细胞培养条件及细胞系选择影响外泌体质量和回收率的另外一个重要因素是在收集之前细胞的培养状态。好的收集时间段是细胞状态好、生长旺盛，即处于对数期的细胞3，并且在细胞传代之前收集细胞上清，这个时候细胞所分泌的外泌体量达到高4。准备好的细胞上清液，细胞密度也要适合，贴壁细胞如果细胞密度过高会出现接触抑制，对所分泌的外泌体也会有影响。所以，理想的条件是在细胞融合达到70%~80%后的40~48h后收集外泌体（此时约融合至90%）。要注意，为了避免FBS外泌体的污染5，收集外泌体的40~48h之前需换成无血清培养基，注意此时40~48h仅作为推荐参考。像有些细胞在无血清培养基培养24h后没有发生存活率和细胞形态改变，那么可以进行上清收集。如果出现死细胞增加、细胞形状改变、状态变差等情况时，使用EV-delepted FBS培养基来代替无血清培养基，EV-delepted FBS可以直接购买也可以自己制备（使用SW 41Ti转头在4℃，35,000rpm(Rmax 210,000 ×g)离心16h后小心收集上清）。但是这样仍无法完全避免血清外泌体的污染，需要清楚样品中血清外泌体的含量，增加一组没有培养细胞的培养基的平行样品作为阴性对照是必要的。03外泌体的提取方法目前被大家认可的方法就是超速离心，因为超离的方法可以收集到完整的细胞外囊泡群，并且几乎所有的实验材料（细胞上清、血液、体液等）都可以通过超离的方法来进行外泌体提取。当然超离的方法也有需要改善的地方，比如样品量很小的情况下，超离对外泌体的回收率不高，但是超离作为一种物理分离的方法，可以在不破坏外泌体群体特性的情况下进行分离的。当前，除了超离外还有许多外泌体分离方法，每种方法都有它的优势和劣势，首先我们需要理解各种分离方法的原理和特点，再根据我们的实验需求才能找到合适的外泌体提取方法。超离方法是可以获得整个外泌体群体，适合于研究整个外泌体群体特性。Yoshioka博士：众多外泌体分离方法中，我们使用超离沉降的方法作为实验室提取外泌体的标准方法5（见下图）。这个Protocol主要包括三个步骤：1.小心收集细胞上清并低速（4℃，2,000xg，10分钟）去除悬浮细胞（死细胞）。2.用0.22μm孔径过滤器过滤上步中收集到的包含外泌体的上清液，去除大颗粒和细胞碎片。3.将上步中的滤液进行超离处理，使用贝克曼库尔特SW 41Ti水平转头、13.2ml超净离心管（Product Number:344059，Beckman Coulter），4℃下35,000rpm(Rmax 210,000xg)离心70分钟。离心过后外泌体在离心管底聚集成沉淀，通常是肉眼不可见的。然后用预先过了0.22μm孔径过滤器的PBS进行清洗，洗掉与外泌体一起沉降的成分，例如微颗粒和蛋白。小心倾倒掉第3步超离后的上清，残留少量液体进行2~3s的涡旋振荡重悬沉淀，然后加入PBS，重悬后的样品同样的条件再进行一次超离。再次超离过后的外泌体仍然需要重悬，倾倒掉上清后，再进行2~3s的涡旋振荡重悬，这时的外泌体样品就可以进行下步分析了。从离心管中转移外泌体样品到储存管（比如1.5ml微量离心管）时，在吸取时我们可以用移液枪先大概测量一下样品体积，后面在储存管中补充PBS到我们之前预估的样品体积，比如，我们想收集到100μl的外泌体样品，但是从离心管中转移到微量管中只有80μl（注意：使用13.2ml超净离心管，平均下来每次收集到的外泌体样品大概80μl），我们加20μl PBS到微量管中再混匀一下就可以保存了。外泌体样品可以在4℃保存，并且要尽量早的用于分析。另外，外泌体样品是不能反复冻融的，与细胞类似，反复冻融过程会破坏外泌体。现在大家普遍认为外泌体是具有异质性的，整个外泌体群还可以细分为亚群（例如尺寸、蛋白表达等），不同的亚群也具备不同的特性，正如前文所说，通过超离的方法可以收集完整的外泌体群体。也有些文献也报道过使用不同的离心条件，可以将尺寸大小不同的外泌体亚群分开。目前，还没有特别统一的外泌体超离提取步骤，像转头类型、离心管类型、离心力以及离心时间等离心条件在不同的文献上都会有些许的差异。04参考文献1. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]2. Valadi H et al. Nat Cell Biol. 2007 9(6): 654–6593. Beckman Coulter. Interview article: Basics and Vision of Exosome Research. 20154. Urabe F et al. Clin Transl Med. 2017 6(1): 455. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]
    时间： 2019-09-04
    作者： 北京德泉
  • 我国科学家在肿瘤外泌体检测研究中取得进展
    外泌体作为一种直径约30-150 nm的脂质双层膜囊泡，几乎所有的细胞均可分泌，广泛分布于人体体液中。外泌体携带着起源细胞的多种物质，如膜蛋白、核酸、脂质等，在肿瘤的发生、发展和转移中起着至关重要的作用，是早期癌症临床诊断中的一类重要标志物。电化学方法具有稳定性强、灵敏度高、易操作等特点，使其在临床诊断、生物传感、环境监测等方面得到了广泛的应用。采用电化学生物传感技术实现外泌体的高灵敏精准检测对于癌症的早期诊断、疗效评价及预后分析具有重要意义。　　近期，中国科学院苏州生物医学工程技术研究所与中科院重庆绿色智能技术研究院研究人员开发了一种基于二维过渡金属碳/氮化物MXene材料的新型电化学传感器，用于外泌体的识别与检测。MXene作为一种新兴的二维材料，具备大的比表面积、高的导电性以及较强的催化能力，针对该材料的研究丰富了其在催化、电容器、生物传感和成像等领域中的应用。　　在该研究中，研究人员通过真空辅助的方法制备二维MXene平面膜，并利用电化学外加电位作用在二维膜表面负载金（Au）纳米阵列，得到Au-MXene二维复合膜。一方面，该方法利用了MXene二维材料构筑成膜，能够负载大量的上皮细胞粘附分子蛋白适配体，特异性识别捕获外泌体；另一方面，通过超速离心分离纯化肺癌细胞（A549）分泌的外泌体，对其进行溶酶体相关膜蛋白适配体修饰，能够填充复合膜表面未结合的活性位点，进一步放大检测信号。结果表明，所构建的电化学传感器对外泌体的检出限可以达到每毫升58个，具有良好的重复性、宽的检测范围以及高的灵敏度。该研究为外泌体的精准检测提供了一种高灵敏的新平台，也拓宽了二维材料在生物传感领域的应用。　　相关研究成果以Hierarchical Au nanoarrays functionalized 2D Ti2CTx MXene membranes for the detection of exosomes isolated from human lung carcinoma cells为题发表在Biosensors and Bioelectronics上。研究工作获得了国家重点研发计划、国家自然科学基金委、江苏省自然科学基金等的资助。　　论文链接
    时间： 2022-09-05
    作者： dahua1981
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