体细胞仪检测原理

[align=center][font='calibri'][size=13px]生乳体细胞检测[/size][/font][/align]1、 [size=18px]生乳体细胞检测目的及意义[/size][size=18px]体细胞数的英文是Somatic Cell Count ， 缩写为SCC是指出现在正常牛奶中少量的动物身体细胞。以每毫升牛奶中的体细胞数表示，通常以千个计数。体细胞( scc ) 的组成，白细胞 (即巨噬细胞、嗜中性白细胞和淋巴细胞)和上皮细胞。[/size][size=18px]体细胞(SCC)越低牛奶质量越高SCC越高对原奶质量的影响越大，并对牛奶的保质期和乳制品如酸奶、奶酪等的产量、质量、风味等产生极大的不利影响。因此各国都将体细胞数作为牛奶质量标准中最重要的指标之一。[/size]2、 [size=18px]检测原理[/size][size=18px]采用荧光染色自动镜检原理，染色剂外无需额外的化学试剂；干粉式染色剂无需要样品稀释液。排除液体染色剂挥发的影响；体细胞检测范围1-1000万，建议有效计数范围为5万以上。[/size]3、 [size=18px]操作过程[/size][align=left][size=18px]第一步：充分搅拌后在取样瓶中用 100ul 的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]抽取 [/size][size=18px]100ul [/size][size=18px]奶[/size][size=18px],[/size][size=18px]加入到染色瓶中；第二步：把加入奶样后的染色剂瓶放置在搅拌器上，按 2 秒，松 [/size][size=18px]2 [/size][size=18px]秒，共搅拌 [/size][size=18px]10 [/size][size=18px]次， 静止 [/size][size=18px]2 [/size][size=18px]分钟让它充分染色，然后再放在搅拌器上按压搅拌 [/size][size=18px]3 [/size][size=18px]次。第三步：打开盖子，用另外一个[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]取样出 8ul 奶样在检测板半圆孔处缓慢排出，无需排气， 让样品慢慢渗过去，然后静置 [/size][size=18px]30 [/size][size=18px]秒，直至对面直线处充满样品。[/size][/align][align=left]4、 [size=18px]注意事项[/size][/align][align=left][size=18px]1、开机时，先接电源，打开机器，最后开平板，避免第二步自检不成功[/size][/align][align=left][size=18px]2、在进行检测时，若点击按钮没有反应，则机器可能进入了仿真模式，若出现 [/size][/align][align=left][size=18px]这种情况，可返回自检界面，调整箭头所指模式即可。[/size][/align][align=left]3、 [size=18px]仪器使用较长时间后，会出现卡顿现象，这种情况下可以清除以往检测数据，点击参数选项，进入页面。[/size][/align][align=left][size=18px]4、仪器使用时，请勿在平板上下载游戏，视频等占内存的软件，避免出现卡顿现象。 [/size][/align][align=left][size=18px]5[/size][size=18px]、仪器使用结束后，关机时请先关闭平板，再关闭机器，最后拔下电源。[/size][/align]

你检测体细胞了吗，用的啥仪器，啥方法？？？

关于生乳中体细胞检测，目前主流的有流式细胞仪法，电子显微镜法，粘度测定法，电导率法等技术，你用的哪种方法？

[b]新上讲座：牛奶中细菌和体细胞检测技术举行时间：2017-12-15 10:00立即免费报名：[/b][url]http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_2925.html[/url][b][/b]主讲人：罗海峰，理学博士 福斯中国应用技术部经理 有10多年近红外应用和开发经验, 主要负责原料奶检测及乳制品加工过程的方案的推广和应用。[b]主要内容：[/b][color=black]1. 为什么检测牛奶中的细菌数和体细胞数？2. 细菌数和体细胞数的指标反映了牛奶中的什么问题？3. 是否可以同时获得牛奶细菌数和体细胞数，并快速获得检测结果？3. 总体细胞数的检测和体细胞分型计数；4. 福斯相应的解决方案。[/color]

体细胞检测一直没有国家标准，啥时候出台啊

体细胞检测什么时候纳入生奶国标检测项目啊

[align=center][font='calibri'][size=18px]如何检测牛奶中的体细胞数？[/size][/font][/align] [size=18px]1.检测牛奶体细胞数的必要性[/size] [size=18px]1.1牛奶体细胞数和乳品质量关系密切；[/size] [size=18px]1.2牛奶体细胞数反映奶牛健康盒科学养殖水平；[/size] [size=18px]1.3牛奶体细胞数发出疾病防控信号，利于及时行动减少损失；[/size] [size=18px]1.4改善我国乳制品的出口现状。[/size] 2. [size=18px]检测原理[/size] [size=18px]采用荧光染色自动镜检原理，呲除染色剂外无需额外的化学试剂；干粉式染色剂不需要样品稀释液。排除液体染色剂挥发的影响；体细胞检测范围0-200万个/mL；[/size] 3. [size=18px]仪器、耗材准备[/size] [size=18px]仪器：国产HLD-SCC 800 牛奶体细胞计数仪、水浴锅、5-50[/size][font='times new roman'][size=18px]μ[/size][/font][size=18px]l[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]、20-200[/size][font='times new roman'][size=18px]μ[/size][/font][size=18px]l[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]、试管架、涡旋仪；[/size] [size=18px]耗材：体细胞试剂、枪头；[/size] 4. [size=18px]操作步骤[/size] [align=left][size=18px]检测流程分为取样、样本处理、加样、上机检测、结果判读五个步骤。[/size][/align][align=left][size=18px]4.1取样[/size][/align][align=left][size=18px]奶样应为 [/size][size=18px]8 [/size][size=18px]小时内挤出的鲜奶，冻藏奶样需温浴后方可检测。 [/size][/align][align=left][size=18px]4.2样本处理[/size][/align][align=left][size=18px]取出体细胞计数片和装有染色剂的离心管。用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]取 [/size][size=18px]100ul[/size][size=18px]奶样加到有干燥试剂的离心管中，吹打混匀 [/size][size=18px]8-10 [/size][size=18px]次，静置 [/size][size=18px]3min[/size][size=18px]，再次对样本吹打混匀 [/size][size=18px]8-10 [/size][size=18px]次；[/size][/align][align=left][size=18px]4.3加样[/size][/align][align=left][size=18px]将混匀的样本使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]吸取8[/size][size=18px]ul[/size][size=18px]在芯片的进样口完成注样（注样后 [/size][size=18px]15min[/size][size=18px]内应完成检测）。[/size][/align][align=left][size=18px]4.4上机检测[/size][/align][align=left][size=18px]将已经注样的体细胞计数片插入仪器检测孔中，点击检测，仪器进入检测流程、确认通道界面，选择要检测的通道点击下一步即可进入检测；[/size][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061007223251_1309_6198252_3.png[/img][font='calibri'][size=13px]图 [/size][/font][font='calibri'][size=13px]1[/size][/font][font='calibri'][size=13px] 检测状态[/size][/font][/align][align=left][size=18px]4.5结果判读[/size][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061007226577_7174_6198252_3.png[/img][font='microsoft jhenghei ui'][size=13px]图 [/size][/font][font='microsoft jhenghei ui'][size=13px]2[/size][/font][font='microsoft jhenghei ui'][size=13px]检测结果[/size][/font][/align][align=left][size=18px]整体操作流程示意图如下图3所示：[/size][/align][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061007224054_6384_6198252_3.png[/img][/align][align=center][font='calibri'][size=13px]图 [/size][/font][font='calibri'][size=13px]3[/size][/font][font='calibri'][size=13px]整体操作流程示意图[/size][/font][/align] [size=18px]检测完成后点击“返回”返回主界面；点击“继续”，进入提示界面，进行下一次的检测；点击“打印”，打印此次结果。[/size] 5. [size=18px]检测结果[/size] [table][tr][td=3,1][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]检测样本：生鲜乳[/color][/size][/font][/align][/td][td=3,1][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]样本状态：正常[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]序号[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]样品1（万个/毫升）[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]样品2（万个/毫升）[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]样品3（万个/毫升）[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]样品4（万个/毫升）[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]样品5（万个/毫升）[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]流式细胞仪参考值[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#e54c5e]51.50[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#e54c5e]43.90[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#e54c5e]44.80[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#e54c5e]53.80[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#e54c5e]29.90[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]1[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]54.94[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]40.85[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]49.36[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#000000]50.97[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]33.40[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]2[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]52.48[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]39.71[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]48.13[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#000000]46.55[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]34.55[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]3[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]52.67[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]39.81[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]46.90[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#000000]51.42[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]33.59[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]4[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]52.86[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]41.89[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]45.67[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#000000]49.05[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]31.39[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]平均值[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]53.24[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]40.57[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]47.52[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#000000]49.50[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]33.23[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]STD[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000] 0.99 [/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000] 0.89 [/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000] 1.38 [/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#000000] 1.92 [/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000] 1.15 [/color][/size][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]cv[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]1.86%[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]2.18%[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]2.89%[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=14px][color=#000000]3.88%[/color][/size][/font][/align][/td][td][align=center][font='microsoft yahei ui'][size=13px][color=#000000]3.46%[/color][/size][/font][/align][/td][/tr][/table] [size=18px]由上表的CV值可以看出，该仪器检测同一样品重复性好、准确率高；[/size] 6. [size=18px]注意事项[/size] [align=left][size=18px]6.1使用原厂配置的适配器，并有效接地； [/size][/align][align=left][size=18px]6.2仪器有松动和掉落时，请勿使用并联系售后支持；[/size][font='宋体'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][/align][align=left][size=18px]6.3不在倾斜、振动及不稳定的环境下使用仪器； [/size][/align][align=left][size=18px]6.4请勿使仪器进入水份； [/size][/align][align=left][size=18px]6.5移动仪器需先拔出插头； [/size][/align][align=left][size=18px]6.6仪器与周围墙面应留有不小于 [/size][size=18px]5cm [/size][size=18px]的间隙便于散热； [/size][/align][align=left][size=18px]6.7不要在仪器表面堆放其他物品；[/size][font='宋体'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][/align][align=left][size=18px]6.8处理潜在污染物时，应做好个人防护，并按要求处理样品和检测后的卡片，并定期清洁并消毒仪器。[/size][/align]

[color=#333333]检测鲜牛乳的体细胞含量为什么要用到十二万基磺酸钠[/color]

生鲜乳中体细胞数(SomaticCellCount，简称SCC)反应生鲜乳卫生状况和奶牛乳房健康的状态。体细胞通常由巨噬细胞、淋巴细胞、脱落上皮细胞和中性白细胞等组成。当乳腺被感染或受机械损伤后，体细胞会上升，受感染乳区的乳汁中大约99%的细胞是白细胞。　　1、高体细胞数对乳制品的影响主要有：(1)牛奶味道变异;(2)牛奶贮存期缩短;(3)乳清量增加、酪蛋白收缩性降低，导致奶酪的产量下降。　　2、引发高体细胞数原因有：(1)可能有隐性乳腺炎发生 发生隐性乳腺炎时，感染牛很少有临床症状，肉眼观察乳汁正常，故常常误将感染乳区的乳作正常牛奶处理，造成生鲜牛奶中体细胞的升高。(2)牛群结构偏老 一般而言，胎次越小的牛只体细胞越低。因为老龄牛只长期接触乳腺炎病原菌，免疫功能下降，有更多的被感染机会。　　3、降低生鲜乳中SCC，重点应从以下方面着手：(1)减少乳房机械性损伤。牛床、运动场、挤奶厅、饲槽、水槽等奶牛活动区域无尖锐物品，机械挤奶时不可过挤，以避免引起乳房损伤。(2)减少病原菌等生物侵袭。加强环境消毒，及时杀灭环境中的有害微生物。(3)日粮营养充足、均衡，提高机体抗感染能力。(4)定期(至少每月1次)进行牛群隐性乳房炎检测，及时进行乳房炎预防。(5)隔离患有传染性乳房炎的奶牛，淘汰患有慢性乳房炎的母牛等。

牛奶体细胞数的英文为somatic cell count,SCC。牛奶体细胞数是指每毫升牛奶中的细胞总数，多数是白细胞，通常由巨噬细胞、淋巴细胞、多形核嗜中性白细胞和少量乳腺组织上皮细胞等组成，约占牛体细胞数的95%，其余是乳腺组织死去脱落的上皮细胞。体细胞数反映了牛奶质量及奶牛的健康状况,在正常情况下,牛奶中体细胞数一般在20万～30万个/mL。

[b]奶牛体细胞测定与牧场管理[/b]是DHI（Dairy　Herd　Improvement）的必修课题。DHI即奶牛生产性能测定也称牛群改良，是一套完整的奶牛生产性能记录和管理体系，是一个实实在在通过度量和分析解决奶牛生产实际问题的方法，其目的是提高牛群的整体素质和生产水平，使用方法是从群体着眼，针对个体解决存在的问题。DHI检测的项目：一是牛群的产奶性能，包括每头牛的产奶量、乳脂率、乳蛋白率等；二是收集牛群饲养管理与经营方面的资料，如系谱资料、产犊日期、干奶日期、淘汰日期和牛群的年龄结构等，并将这些资料信息进行系统加工处理，所得结果再返回牛场指导牛场的经营管理，帮助提高牛场经济效益。DHI的用途具体体现为追踪个体牛表现、观察牛群表现、开发新目标、乳房炎管理、选种等方面的。　 针对于[b]奶牛体细胞测定与牧场管理[/b]课题，最关键是乳脂率、乳蛋白率、体细胞数，其中体细胞直接影响产奶量、乳脂率、乳蛋白率和其它乳成分。通过体细胞数的变化，可反映牧场管理水平及牧场经营状况。DHI检测设备推荐本特利NexGen系列新一代牛奶成分+体细胞检测，检测速度400-600/小时，可以根据牧场需要进行配置，同时检测模块有丙酮和乳铁蛋白，对于预防奶牛酮病和乳房炎有提前预警作用。 [b]体细胞数（SCC）[/b]是指每毫升牛奶中所含的体细胞量，它反映牛场奶牛乳房健康状况，几乎参加DHI项目的每头泌乳牛都进行体细胞检测。它包括多种类型的细胞如白细胞和脱落的上皮细胞等，高SCC记录预示着大量的白细胞的存在和乳房感染几率较大。DHI报告可提供全群奶牛各胎次每月体细胞数值，可按照不同胎次统计出不同SCC水平的牛头数及所占百分比。　　个体[b]奶牛体细胞数（SCC）[/b]直接反映了奶牛乳房健康状况，并能反映防治措施是否有效，需要说明一点，SCC的高低反映了乳房受感染的程度，而并非超过某一特定值就表示该牛一定有乳房炎而需要治疗。 牛群[b]体细胞数（SCC）[/b]是整个牛群乳房健康程度的标志。体细胞数、体细胞评分反映了该牛群的健康状况。对于体细胞高的牛群，应从挤奶设备的消毒效果，挤奶设备真空度及真空稳定性，奶衬性能及使用时间，牛床、运动场等卫生环境等方面找问题。 在DHI报告中提供了因[b]奶牛体细胞数（SCC）[/b]太高而造成奶牛产奶量的损失，应用该数据可以计算出奶牛场全年产奶量损失及直接经济损失。[b]奶牛体细胞数（SCC）[/b]与奶量损失的关系　　DHI报告分析：脂肪蛋白比。一个牛群正常的脂肪和蛋白比例在1.1-1.2的范围内，或蛋脂比在0.8—0.85如果变化范围超过上限或下限，说明奶牛饲养管理方面有问题。　　当脂蛋比低于1.1时表明　　A、奶牛粗饲料在瘤胃中的发酵率降低　　B、粗饲料的质量差　　C、精料比例过大　　D、瘤胃亚临床或临床型酸中毒　　E、奶牛反刍减少，日粮中缺乏缓冲物质　　当脂蛋比高于1.2时表明：　　A、奶牛日粮中蛋白质不平衡，品质差，缺乏必需氨基酸，如蛋氨酸和赖氨酸。　　B、日粮中能量不足，瘤胃微生物蛋白合成不足　　C、奶牛干物质采食量不足　　D、夏天热应激　　E、饲料中添加了大量的油脂类脂肪　　F、可发酵碳水化合物含量不足DHI报告中奶牛繁殖状况分析：平均泌乳天数。如果一个牛群具有正常的牛群结构，且常年均衡配种，那么该牛群的平均泌乳天数应改为150-170天。如果超过上限则表明：　　A、所提供的产犊日的准确性　　B、奶牛产后繁殖问题严重　　C、配种技术员水平不高 D、存在严重的饲养管理问题　　DHI报告在生产实践中的重要意义：DHI分析报告是奶牛场改进饲养方法、提高管理水平的基础。如根据奶牛泌乳曲线的变化、乳成分和奶牛体细胞和尿素氮测定结果，分析各类营养的平衡关系，以调整饲料配方和优化饲喂程序，保证牛群的正常管理，而使牛群发挥最大的生产潜力，提高生产水平。

牛奶体细胞数的英文为somatic cell count,SCC。牛奶体细胞数是指每毫升牛奶中的细胞总数，多数是白细胞，通常由巨噬细胞、淋巴细胞、多形核嗜中性白细胞和少量乳腺组织上皮细胞等组成，约占牛体细胞数的95%，其余是乳腺组织死去脱落的上皮细胞。体细胞数反映了牛奶质量及奶牛的健康状况,在正常情况下,牛奶中体细胞数一般在20万～30万个/mL。

牛奶中的体细胞有两个来源。一是来自乳腺分泌组织中的上皮细胞（也称腺细胞）；二是来自与炎症进行搏斗时而死亡的白血细胞。腺细胞是正常的体细胞，是乳腺进行新陈代谢过程的产物，在奶中的含量相对恒定。而白细胞是一种防卫细胞，可以杀灭感染乳腺的病菌，还可以修复损伤的组织。因此白细胞在牛奶中的数量随奶牛的生理状态和健康水平有很大变化。 一、牛奶中体细胞上升的原因 1 、 由于乳腺被细菌感染出现乳房炎而使体细胞数量上升 。 牛奶中正常的体细胞为 20 万 /ml （标准）。但初产母牛和管理良好的牛群可能低于 10 万 /ml 。如果体细胞数超过 25 ～ 30 万个 /ml ，就接近不正常，说明有细菌传染，引起乳房炎。引起乳房炎的细菌有两大类：传染性的细菌和环境中的细菌，详见另文所述。 2 、 牛的年龄及泌乳状态 体细胞数随着牛的胎次（年龄）及泌乳阶段而上升。这是母牛自然免疫系统在分娩之前所表现出的一种免疫反应，其目的是为了提高乳腺的防御机能。到了分娩以后，如果乳腺未遭病菌感染，则牛奶中的体细胞数量会很快下降。 3 、应激和季节 高温和高湿条件下所引起的热应激，一般多出现在 7 、 8 月份，也可能引起牛奶中的体细胞数的上升。母牛表现发情症状时也有伴随体细胞上升的趋势，但报道不太一致。 4 、乳房创伤 在没有传染源的情况下，乳房内部创伤（如挤奶机负压过大，空吸时间过长或乳房被压伤等）也可以导致牛奶中体细胞数量增加。但当创伤愈合后，体细胞又可恢复正常。 5 、其它原因 包括挤奶设备的完好及工作状况，如脉动频率、真空负压大小及稳定性、集乳器的通透性，橡皮奶衬的完好及柔软性等都可以影响牛奶体细胞的数量。 此外，挤奶过程的卫生状况，乳头的护理及乳头的封闭影响着细菌进入乳头的机会，同时也影响着牛奶中体细胞的数量。 二、体细胞数制约着牛奶的产量及质量 1 、对牛奶产量的影响 当牛奶中的体细胞数量超过 30 万 /ml 时，日产奶量开始下降。上升幅度越大，产量下降幅度也越大（详细材料参考另文）。 2 、对牛奶质量的影响：当体细胞增加时，可以伴随乳白蛋白质的上升和酪蛋白质含量的下降，可以使奶酪的产量随之下降；在这种条件下奶牛的货架期和风味也随之受到影响。因此奶业发达国家一般均根据体细胞的数量标注奶价。对体细胞少的生产场家给予特殊奖励。

[b][font=等线]体细胞标准样品存在的问题及解决方案[/font] [font=等线] [/font][/b] [font=等线]1、 [/font][b][font=等线]仪器[/font][/b] [font=等线]仪器在平常测样的时候是否正常出结果。如果正常，仪器没问题。[/font] [font=等线]2、 [/font][b][font=等线]FMA等荧光微球[/font][/b] [font=等线][font=等线]用[/font][font=等线]FMA等荧光微球检测仪器的性能。[/font][/font] [font=等线]3、 [/font][b][font=等线]控制样[/font][/b] [font=等线]控制样检测，是否体细胞结果在控制样标识及误差范围内。[/font] [font=等线]4、 [/font][b][font=等线]模拟校准[/font][/b] [font=等线][font=等线]可以先找[/font][font=等线]3-5个测定过的样品，样品的选择要有高有底，有梯度。保证校准过程的正确。最后一步，最好不要确认，确认了会改变仪器内体细胞标准曲线的斜率截距。[/font][/font] [font=等线]如果模拟校准有问题，可能在校准的过程中，设置有问题，需要修改。反之，正常。[/font] [font=等线]模拟校准，一是为了练手，熟悉体细胞的校准过程。二是为了防止标准体细胞样品的浪费。[/font] [font=等线]5、 [/font][b][font=等线]把标准样品当质控样进行测定[/font][/b] [font=等线]现在存在的问题，是校准过程中，体细胞标准样品测定结果为零。如果把标准样品当质控样来检测，结果和证书标示值一致，可能是校准过程的设置。反之，可能是标准样品的问题。[/font] [font=等线]6、 [/font][b][font=等线]校准[/font][/b]

2010年《GB 19301-2010 食品安全国家标准 生乳》发布，该标准出台后即被冠以 “挤奶时相当于苍蝇到处乱飞”、“中国牛奶倒退25年”、“中国生乳标准全球最差”等各种标签。时隔6年，生乳标准被再一次掀起波澜：今年4月份，中国农垦乳业联盟召开《中国农垦生鲜乳生产和质量标准》发布会，会议指出该标准菌落总数与欧盟和美国标准一致，并且按照欧盟标准规定了体细胞数。同期，黑龙江省奶业协会《黑龙江省生乳团体标准》，标准根据蛋白、脂肪、菌落总数、体细胞数对生鲜乳分了特级、一级、二级三个等级，并且提出特级标准已比肩欧美。为什么我国的生乳标准时至今日还被热议，菌落总数和体细胞指标有什么意义，我国和欧美针对这两项的规定到底有什么不同？以下将进行详细分析。[b]1. 指标解读：菌落总数[/b]菌落总数是指在一定微生物培养条件下每克（或每毫升）检样所生长出来的细菌群落总数。生乳中菌落总数的多少是评定质量的重要指标，目前被各国广泛采用。它可用来判定产品被细菌污染的程度及卫生质量，以便做出适当的卫生学评价。造成菌落总数超标的原因很多，挤奶环节控制不严是导致超标的主要原因，如挤奶器具不卫生特别是散户人工挤奶的情况，将会直接导致菌落总数不合格。[b]体细胞数[/b]牛奶体细胞数是指每毫升牛奶中的细胞总数，它是牛奶中的白细胞和脱落上皮细胞的总称。体细胞数是衡量牛乳房健康状况和原料奶质量的重要指标，它的升高可导致乳制品货架期缩短，风味发生改变。体细胞数高说明奶牛乳腺感染了微生物病原菌，通过不同的微生物检测或根据体细胞数升高状况诊断是否患有隐性乳房炎，此外，若奶牛患病也会因为系统免疫反应导致体细胞升高。2。[b] 标准比较：我国标准[/b]我国生乳现行标准GB 19301-2010，标准中对生乳的脂肪、蛋白质等理化指标，及微生物、污染物等指标做了规定，其中菌落总数要求为200万CFU/mL，但是并没有体细胞数的要求。[b]欧盟法规[/b]欧盟拥有完善的乳品质量安全监管体系，在其法规EC 853中对生乳的体细胞和菌落总数做了详细规定。 [table=100%][tr][td=1,1,25%] 类别项目[/td][td=1,1,20%] 生牛乳[/td][td=1,1,21%] 其他动物的生乳[/td][td=1,1,33%] 其他动物的生乳（用于加工乳制品，且加工过程中无加热工序）[/td][/tr][tr][td=1,1,25%] 菌落总数，万CFU/mL[/td][td=1,1,20%] ≤10[/td][td=1,1,21%] ≤15[/td][td=1,1,33%] ≤5[/td][/tr][tr][td=1,1,25%] 体细胞数，万个/mL[/td][td=1,1,20%] ≤40[/td][td=1,1,21%] /[/td][td=1,1,33%] /[/td][/tr][/table]欧盟非常注重标准的科学性，基于牛和其他动物如山羊的养殖条件、养殖规模等不同，分别设定了不同的微生物要求，虽然其他动物的生乳限量表面看来更低一些，但是如果用于生产无加热工艺的产品，则要求非常高。欧盟标准科学性的另一点体现在生产和收奶会设定不同限量。对于到达工厂后经过混合的牛乳，该法规指出其指标限量可以是牧场环节的三倍。因此准备生产乳制品的原料乳菌落总数限量为≤30万CFU/mL（如果该牛乳已经经过一定的加工，那么需要低于10万CFU/mL）。[b]美国法规[/b]美国《联邦法规》（CFR）第7卷对原料乳的指标限量、检测方法、不合格整改措施都做了具体规定，其中包括体细胞数和菌落总数。 [table][tr][td=1,1,155] 类别项目[/td][td=1,1,126] 生牛乳[/td][td=1,1,151] 山羊乳[/td][td=1,1,187] A级原料乳[/td][/tr][tr][td=1,1,155] 菌落总数，万CFU/mL[/td][td=1,1,126] ≤50[/td][td=1,1,151] ≤50[/td][td=1,1,187] ≤10（单个样本）≤30（杀菌前的混合样本）[/td][/tr][tr][td=1,1,155] 体细胞数，万个/mL[/td][td=1,1,126] ≤75[/td][td=1,1,151] ≤150[/td][td=1,1,187] ≤75[/td][/tr][/table]美国是非常提倡实施安全整改措施的国家，联邦法规中就有明显的体现。如对生乳中菌落总数的要求，法规规定每个奶户每月至少要有1次随机抽样，一旦出现不合格就会被警告，如果4次连续抽检中有两次不合格，那么将会在随后的3至21天再抽一个样品，如果仍然不合格，就需要整改直至获得满意的结果才可以继续对外供应牛乳。[b]Grade “A” Pasteurized Milk Ordinance[/b]除了CFR的要求，美国还有一个非常重要的法令《Grade “A” Pasteurized Milk Ordinance》，该标准适用于优级乳制品，标准包含收奶、运输、加工、包装等各环节的规范，可操作性非常强。标准中指出单个奶户的奶中菌落总数不得超过10万CFU/mL，不同奶户的奶经混合后，在杀菌前不得超过30万CFU/mL；体细胞方面，该法令指出单个奶户的奶中不得超过75万个/mL。和CFR一样，该标准也规定了不合格的处理措施。联邦政府以及各州会定期检查工厂，一旦发现问题就会临时吊销生产许可证，此后连续3周每周不少于2次取样检查，直至合格才准予恢复正常生产。[b]总结[/b]1. 我国设定的指标限量低于欧美，这与当时的制定背景息息相关。但实际上，由于最近几年政府和企业对生乳质量意识的提高，我国生鲜乳尤其是自有牧场的生乳的质量远高于国家标准规定。很多牧场逐步开始监控体细胞数量，优质牧场平均体细胞数可达10万个/mL以下。同时部分地区也根据当地生乳的质量优势，制定了一些高于国家要求的标准。2. 我国在指标设定方面的科学性有待提高，如上面提到的欧美在收奶及加工时设定不同指标限量，而我国目前收奶、贮奶都是一个限量，不利用保护奶农利益，更不利于指导企业实际生产。3. 缺乏对奶农的系统监管，如美国政府机构会长期监控每个奶场的生乳，制定整改措施并监控整改效果，这点值得我国学习。

目前血细胞分析仪检测原理包括电学和光学两种，电学包括电阻抗法和射频电导法，光法包括激光散射法和分光光度法。电阻抗法根据Coulter原理及血细胞非传导的性质，以电解质溶液中悬浮的血细胞在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础，进行血细胞计数和体积测定。当有细胞通过小孔时，由于电阻增加，于瞬间引起电压变化及通过脉冲。细胞体积越大，脉冲振幅越高，细胞数量越多，脉冲数量也越多。脉冲信号经过：放大、阈值调节、甄别、整形、计数而得出细胞技术结果。电阻抗法可准确量出细胞（或类似颗粒）的大小，是三分类血液分析仪的主要应用原理，并与光学检测原理组合应用于五分类血液分析仪中。激光散射法应用了流式细胞术检测原理及细胞通过激光束被照射时，产生与细胞特征相应的各种角度的散射光。对经信号检测器接受的散射光信息进行综合分析，即可准确区分正常类型的细胞。激光散射法在区别体积相同而类型不同的细胞特征时，比电阻抗法分群更加准确。故激光散射法已成为现代五分类血液分析仪的主要检测原理之一。射频电导法是用高频电磁探针渗入细胞膜脂质可测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、细胞核和细胞质、颗粒成分等特征信息。射频电流是每秒变化大于10000次的高频交流电磁波，能够通过细胞壁。分光光度法是所有类型的血细胞分析仪检测血红蛋白的原理，它利用血红蛋白与溶血剂在特定波长下比色，吸光度的变化与液体中血红蛋白含量成比例。

HLD-SCC 800牛奶体细胞操作视频 [font=宋体][color=#000000][font=宋体]适用范围：仪器与体细胞计数片配套使用，用于生乳中体细胞计数。[/font][/color][/font][font=宋体][color=#000000][font=宋体]生乳体细胞数量检测是牧场预防、检查和治疗奶牛乳房炎非常重要的一项工[/font][/color][/font][font=宋体][color=#000000][font=宋体]作，为乳制品的质量控制和产品开发，以及对牧场中奶牛疾病的防治提供可[/font][/color][/font][font=宋体][color=#000000][font=宋体]以量化的科学数据[/font][/color][/font]

[b]牛奶体细胞概念的提出[/b]乳汁中细胞计数或者说是白细胞计数在奶牛乳房炎监测中已运用的大概有百多年的历史。体细胞这一概念是在 1910 年由 Prescott 和 Breed首先提出，当时他们建议用“Body cells”，因为当时认为奶中细胞是从上皮细胞脱落下来的。直到1960 年左右，“Somatic cells”已逐渐被人们所普遍接受。[b]牛奶体细胞的组成[/b] 现今我们通常所说的牛奶体细胞主要指白细胞，包括巨噬细胞、淋巴细胞以及多形核白细胞（PMN）。乳中细胞类型研究表明，腺泡上皮细胞，无论是在干奶期还是泌乳期，在乳中很少，仅占细胞总数的7%以下。所以说泌乳期乳中细胞数的增加不是由于上皮细胞的脱落造成的。巨噬细胞是正常乳中的主要细胞，占细胞总数的 30％~70%。[b]牛奶体细胞出现的原因牛奶体细胞[/b]主要是白细胞对乳腺有重要的作用，它对病原微生物的入侵起监视和杀灭作用。巨噬细胞及PMN具有吞噬功能，可以杀死入侵病原微生物，乳中淋巴细胞包括T淋巴细胞和B淋巴细胞，它们在对入侵微生物的特异性免疫中起很重要的作用，病原微生物一旦通过乳头管进入乳腺并在其中增殖，就会引起一系列的炎性反应。此时乳中的细胞就同病原微生物相互斗争，并且产生一系列的炎性因子,而这些炎性因子将导致一系列的病理变化，这些炎性因子包括补体，前列腺素，白三烯、组胺、5-HT（5-羟色胺）、白介素，TNF（肿瘤坏死因子）、白细胞杀菌素以及一些其他细胞因子，典型的症状包括血管通透性增加，血管扩张，血流量增加，水肿，中性粒细胞转移，以及乳腺合成能力降低，并伴有疼痛，发热。在炎症初期乳腺最主要的防御机制就是 PMN 的迁入，正常情况下，PMN 可自由通过毛细血管，而不黏附或很少黏附在血管壁上，一旦出现炎症，黏附分子被大量表达，从而使得 PMN 黏附、迁移并通过细胞间隙而进入乳腺。乳中白细胞和被损伤的组织释放一些因子能吸引 PMN 大量涌入乳中，在炎症初期乳中细胞 90%以上的是 PMN，有报导表明大量要进入乳腺的 PMN 在腺泡外聚集，甚至在某些腺泡受损较严重的地方，PMN 可通过上皮间隙而进入腺泡，因此 PMN 在感染区的大量迁移是造成[b]牛奶体细胞[/b]SCC 大量上升的主要原因，因而有人认为，PMN 迁入的速率是消除感染乃至决定病情的关键因素。 另外，据报道 PMN 也可在乳头导管、乳头池、乳腺池等处透过基底膜而进入乳汁。因此，这些地方被认为是炎症初期机体作出反应并允许 PMN 通过的地方，乳腺以此来抵御微生物的入侵，值得注意的是，在慢性炎症反应过程中，单核细胞也可透入。因此，SCC 增加也是白细胞迁入造成的。乳中 PMN执行吞噬入侵微生物的功能，但是它也可以吞噬诸如脂滴、酪蛋白这样一些物质，而这些物质被吞入后 PMN 吞噬微生物的功能将降低。即便如此，PMN 仍是乳腺中起关键作用的因素，当然它也可以释放一些物质以增加血管通透性和吸引更多的白细胞到炎性部位。在一些顽固性感染病例中，虽然 PMN 数量会有所波动，但总体上是处在一个高水平上，而且即便是将感染的病原微生物清除后，它仍会维持在高水平上直至乳腺修复。还有报道说：微生物被清除后 PMN 在高水平上仍要维持几天、几周甚至更长一点时间。[b]影响牛奶体细胞的因素[/b]据报道，[b]牛奶体细胞[/b]变化受到很多因素的影响，如年龄、乳期、昼夜、挤奶过程，感染等。近年来报道渐趋于一致即认为，感染是引起变化的最主要因素。[color=inherit]1 ）微生物感染的影响[/color] 有研究表明，[b][color=#d92142]体细胞[/color][color=#d92142]S[/color][color=#d92142]CC的主要影响因素就是微生物感染，这不论是在乳区水平、个体还是桶奶水平上都是如此。[/color][/b]有人对感染后的奶牛同其 BTSCC（桶奶 SCC）联系加以分析后认为，BTSCC 之所以发生变化，感染是主要影响因素。感染乳腺的微生物被划分为二大类，即重要微生物及次要微生物，重要微生物一旦感染将使SCC大幅增加，这类微生物包括金黄色葡萄球菌，无乳链球菌及其他一些链球菌，大肠杆菌等；次要微生物包括牛棒状杆菌以及凝固酶阴性的一些葡萄球菌，它们感染后，通常使得感染乳区化正常乳区的 SCC 高出 2～3 倍。现今，许多研究表明，仅用SCC一项来作为衡量乳区感染与否是不可信的，因为常出现假阳性和假阴性的情况。造成这种误差的部分原因可能是感染期间 SCC 的正常波动所致；这种变化在人为用各种病原微生物感染乳腺的实验中得到证实。即在感染的早期阶段数量急剧上升，可以在几小时或几天内达到峰值，（这与感染微生物种类有关）随后由于中性粒细胞的吞噬而适度下降。而 SCC变化范围依感染微生物及转归结果以及牛个体差别而变化很大。有研究表明被感染乳区 SCC 是呈波动态势，在慢性感染乳区，微生物数量及SCC二者均随时间而上下波动，同时未感染乳区SCC也在变化，但始终处在 200,000/mL 以下。另外主要微生物感染后，SCC的变动幅度也由于牛个体不同而不同，所以仅凭 SCC 一项来判别乳区感染与否及微生物种类并不十分可靠。[color=inherit]2 ）年龄、乳期对SCC的影响[/color] 研究者普遍认为，牛奶体细胞SCC 随胎次增加及乳期向后延伸而增加，但 Harmon研究却不同，他将牛群中分成感染牛与未感染牛，结果显示：在未感染牛群中，牛奶体细胞 变化都很小，无论是年龄还是泌乳期影响都很小， Sheldrak等人也证实无论是胎次数目增加，还是不同乳期阶段，它对未感染牛群的 SCC影响都很小，有研究显示，在同一乳期中，从分娩35天到205天截止，SCC数目从35天的83,000/mL 逐渐升到285天的160,000/mL，但是相同的时间内金黄色葡萄球感染的乳区中，SCC的数量却从234,000/mL升至1,000,000/mL。当然，在娩后所有乳区SCC均有增加，但那些未感染的乳区和感染了次要微生物的乳区是SCC分娩后35天均很快的下降。Harmon研究也表明，[b][color=#d92142]在微生物未感染的牛群中，SCC受胎次、泌乳乳期的影响不大。[/color][/b][color=inherit]3 ）应激对SCC的影响[/color]Wells等报道，各种应激因素都能引起SCC上升。但据 Paape 等人报道，无论将牛只放入可以控制环境条件中的隔离室内，还是给牛注射 ACTH 或者是皮质醇类激素，未感染的牛只其SCC只有很小改变或者说是没有改变。Elvinger调查表明，经受热应激的牛只SCC有大量的上升，他们通过将牛圈在可以控温的房间内或予其他的热刺激，未感染牛与感染金黄色葡萄球的牛的SCC分别是145,000/mL和105,000/mL，分析认为造成这种差异的部分原因可能是由于热应激造成的产奶量下将所致，因热应激造成产奶量下降10%～20%也是很常见的。将牛单独圈起这种应激会不会造成SCC上升，LefcourtA M研究表明这一应激虽可使牛的行为有所变化，但对SCC影响甚微。在法国科学家们进行了一项非常有趣的试验，他们将牛组成二组，一组圈起来，另一组在每天早晨挤奶后走上9.6 km，结果显示：走路的一组中受感染的牛其SCC达185,000/mL，而未感染的牛SCC为47,000/mL，这二者SCC都多于另一组牛的SCC。同时显示运动不仅会使奶牛奶量下降，而且使饲料的摄入量也减少，研究者将已感染和由于剧烈运动损伤乳房而造成感染的牛联系起来分析，认为SCC变动与感染的关系很大，表明[color=#d92142][b]各种各样的应激对受微生物感染牛的SCC影响较未感染牛的大。[/b][/color][color=inherit]4 ）季节的影响[/color]据报道，[color=#d92142][b]夏季 SCC 较冬季高，这与夏季临床型乳房炎多是发是吻合的[/b][/color]。研究表明，夏季乳腺对环境中病原微生物易感与牛群中存在大量的大肠杆菌是相一致的。同时也表明了热应激不仅可增加乳腺的易感性而且使得环境中病原微生物的数量也大大增加，热应激本身不能单独使SCC上升，但SCC上升却是由于夏季乳头长时间处于有大量病原微生物的环境中而造成感染和引起临床症状的结果。[color=inherit]5 ）其他因素[/color]奶中SCC有一个正常的变化（如昼夜变化），正常挤奶时间所收集的奶与两次挤奶间隔期间收集的奶SCC也有所不同，一般规律是，末期乳中SCC最多，而挤奶前奶中SCC最低，对同一乳区来说，它们相差多达4~7倍，而且挤奶后，高水平的SCC可持续 4 个小时左右后才开始下降。Brolund 报道饲料改变也影响SCC，他认为个体间差别对 SCC 影响有较大的作用，但后来研究表明，这与感染相比影响很小。[color=#d92142][b]牛奶体细胞作为牛群乳腺的健康与否的一个指标，其优势是显而易见的 ，以月为基准测定牛群SCC可以很好地监控奶汁的质量和乳腺的健康程度。但值得强调的是，传染性病原微生物感染后牛奶SCC数量变化比较明显，而条件性病原微生物感染后，由于其感染恢复快，它们感染后，尤其是在管理良好的牛场即便是转归为临床型乳房炎，它们SCC也能维持在300,000/mL以下，在这样一种情况下，SCC 就不能直观地反映出乳腺的健康状况。[/b][/color]也由于这些病原感染后，高水平的SCC维持时间短，而且它们感染率也很低，无论什么时候均小于10%乳区，但以全年经济收入来说，由条件性病原微生物造成临床型乳房炎引起损失还是比较大的。SCC主要影响因素是微生物感染，而其他一些因素只要不影响到乳腺的健康，它的影响就不是很大，而SCC的上升，是乳腺防御微生物入侵而采取的相应措施，应激等可使已感染到乳腺SCC上升，而对于未感染的乳区来说除了昼夜变化对 SCC 有影响外，其他因素影响都非常小。

文献丨生乳中体细胞数对乳品质量安全的影响文献丨生乳中体细胞超标的危害及应对措施

[size=4][font=宋体]乳中所含细胞成分是白血球和一些上皮细胞，也有一些红血球。[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]牛乳中的细胞数（体细胞）是乳房健康状况的一种指标。牛乳细胞数可作为衡量牛乳卫生品质的指标之一。一般正常牛乳细胞数不超过[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]50[/font][/size][size=4][font=宋体]万个[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]/[/font][/size][size=4][font=宋体]毫升。[/font][/size][size=4][/size][size=4][font=宋体]乳房炎的诊断标准[/font][/size][size=4][/size][table=660][tr][td=1,2,180][align=center][size=4][font=宋体]细胞数[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]/[/font][/size][size=4][font=宋体]万个[/font][/size][size=4][font=Times New Roman].mL[sup]-1[/sup][/font][/size][/align][/td][td=2,1,480][align=center][size=4][font=宋体]乳房中有害葡萄球菌与链球菌的检查结果[/font][/size][size=4][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,228][align=center][size=4][font=宋体]未检出[/font][/size][size=4][/size][/align][/td][td=1,1,252][align=center][size=4][font=宋体]检出[/font][/size][size=4][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,180][align=center][size=4][font=宋体]小于[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]50[/font][/size][/align][/td][td=1,1,228][align=center][size=4][font=宋体]正常[/font][/size][size=4][/size][/align][/td][td=1,1,252][align=center][size=4][font=宋体]潜在性乳房炎[/font][/size][size=4][/size][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,180][align=center][size=4][font=宋体]大于[/font][/size][size=4][font=Times New Roman]50[/font][/size][/align][/td][td=1,1,228][align=center][size=4][font=宋体]分泌障碍[/font][/size][size=4][/size][/align][/td][td=1,1,252][align=center][size=4][font=宋体]乳房炎[/font][/size][size=4][/size][/align][/td][/tr][/table][size=4][font=Times New Roman] [/font][/size]

在奶牛场生产出体细胞　　数及细菌含量低的牛奶　　奶牛场受到污染的牛奶一直会存在于整个生产链之中，虽然其后的生产程序可能会尽量减低牛奶的腐败程序以满足消费者的质量要求，但是品质却永远也比不上刚刚从奶牛乳房产出的牛奶了。因此，为消费者提供卫生乳制品的第一步开始于牛场。　　1. 体细胞数　　1.1体细胞的来源　　动物体抵御一些入侵细菌的措施之一就是将白细胞渗透到受感染区域。白细胞来自动物血液,被称为体细胞。以示与入侵微生物细胞的区别。正常情况下，少数白细胞可经乳腺而进入乳汁，但在病原菌入侵时，机体会向乳腺内释放大量的白细胞。若乳腺受到损害，也会造成乳腺上皮细胞脱落，成为乳汁内的体细胞的一部分，但不超过体细胞总数的百分之几。与细菌不同，体细胞一旦进入乳汁内，其总数是不会发生变化的。白细胞包括巨噬细胞、淋巴细胞和嗜中性细胞。正常乳中含有巨噬细胞，其作用是清除乳腺中的细菌和细胞碎片。淋巴细胞在抵抗感染的机制中起主要作用，此时要占体细胞总数的90%以上。体细胞数是变化的，在完全健康奶牛的乳汁中低于200000/亳升;乳腺感染严重，会高于5000000/毫升。　　1.2 高体细胞含量牛奶的缺点　　体细胞数偏高，表明牛奶产于受损或受感染的乳腺。细菌污染会极大降低牛奶的质量，而体细胞本身也对牛奶质量不利，特别是对这些用于生产发酵乳制品的牛奶。牛奶变质表现为：①牛奶味道变坏 ②牛奶的贮存期缩短 ③乳清量增加，酪蛋白的收缩性降低，导致奶酪产量下降。　　1.3 体细胞数的估测　　体细胞数(SCC，单位为：细胞数/亳升)可经显微镜人工测定，但耗费时间，一位技术员每天仅能测定很少的样品。体细胞数常常是由称为细胞计数器的电子仪器来测定，但该仪器较昂贵，不易搬运，这就得把奶样送到实验室去分析。在牛舍内实际上可采用一项简单的技术，即用化学试剂来测定白细胞的数量，其最初称为加州乳房炎测定(CMT)，但现有众多地方测定方法，如兰州乳房炎测定法(LMT)。CMT法可把牛奶评为0、T、1、2和3级，其大致相对应的细胞数为：　　CMT测试等级 大致体细胞数/毫升　　0 100,000　　T(=微量) 300,000　　1 900,000　　2 2,700,000　　3 8,100,000　　1.4 引起体细胞增高的因素　　1.4.1 乳房受到细菌感染。这大概是导致体细胞数增加的主要因素。　　1.4.2乳房受到损伤。奶牛的乳房并非不会受到损伤，比如经常由于地滑而摔伤乳房。有些奶牛，特别是那些乳房过度下垂的奶牛，站起来时容易踩到自己的乳房。乳房受到伤害，牛奶中体细胞数会暂时升高，随着伤口的愈合，体细胞数又会恢复正常。　　1.4.3 奶牛的年龄和泌乳阶段。老龄奶牛似乎更易患乳房炎，这样，体细胞数常常较高。美国的研究表明，未患乳房炎奶牛乳中的体细胞数并不随年龄的增加而提高。这样，随着年龄的增长，对于那些一生中某一阶段曾患过乳房炎的奶牛，其体细胞数增加的机率会增大。　　1.5 降低体细胞数。体细胞数值高常常是由于乳房受到了细菌所至，因此降低体细胞数值的最好方法就是防止感染。　　2. 乳中的细菌　　牛奶通常是老、幼、病、残者的食品，他们也最需要健康食品。奶牛场是微生物污染牛奶的理想环境，最危险的途径之一就是通过存在于乳房中并引起乳房炎的细菌而污染。这些细菌都是病原菌，对牛和人类都有害。　　一旦受到这样的污染，牛奶就成为劣质产品。加热处理可减缓或停止细菌的作用，但不管如何处理，这种牛奶仍就是含有活的或死的微生物及其所产生的生化物质。这些物质有的会降低乳制品的品质，有的对消费者的健康有害。来自粪便的细菌还会产生酶类和耐毒素。因此，防止乳制品被污染，应从提供优质鲜奶开始。　　细菌进入乳房引起乳房炎的许多途径与其污染牛奶的方式密切相关，有些细菌可引起乳房炎，随后进入牛奶。　　2.1牛奶中细菌的类型　　下表为牛奶中常见的微生物，经分离，也许可见到其它类型的微生物。大概有95%的乳房炎是由表中前三种细菌引起的。　　微生物 来 源 所产毒素 致病性　　奶牛 人类　　金黄色葡萄球菌 乳房炎　　人类污染　　环境　　牛粪 肠毒素 致病 致病　　无乳链球菌 乳房炎 致病 致病　　大肠埃西氏杆菌 乳房炎　　环境　　牛粪 耐热和不耐热肠毒素 致病 有些致病　　空肠弯曲菌 受感染的乳房　　牛粪 肠毒素 致病 致病　　小肠结肠炎耶尔森菌 牛粪　　沙门氏菌群 环境　　牛粪 肠毒素 致病 致病　　产单核细胞李斯特菌 环境　　牛粪　　饲料—特别是劣质青贮　　乳房炎(少数) 致病 致病　　结核分支杆菌 受感染乳房　　人类污染 致病　　牛分支杆菌 受感染乳房 致病 致病　　布鲁氏菌属 受感染乳房　　牛粪　　环境 致病 致病　　伯内特柯克斯体 牛粪　　受感染乳房 致病 致病　　普通变形杆菌 水　　环境　　假单包菌属 水　　环境　　2.2 乳房对乳房炎的抵御　　乳房低御感染的部位有两处, 其中之一就是乳头的通道一乳头管,乳头上有良好的括约肌,可使乳头口封闭,阻止异物进入通道。　　2.3 防止乳房暴露于细菌之中　　防止乳房炎最理想的方法首先是防止细菌接触乳房，这就涉及到奶牛管理的各个方面。　　2.3.1养牛设施。奶牛舍的设计标准与良好的人类住房的设计原则是相近的，其可归纳如下：　　① 尽量减少疾病的传播。　　② 奶牛拥有一个舒适和较干燥的环境。　　③ 应具备有效地消除废物的设施。　　④ 奶牛容易获得饲料以满足产奶的需要。　　⑤ 奶牛的环境条件不得发生急剧变化。　　⑥ 温度、太阳辐谢、湿度应尽量接近奶牛的“舒适区”。　　⑦ 奶牛易于接近饮水。　　⑧ 易于观察成母牛、育成牛的行为变化，特别是发情鉴定，还有牛群健康观测。　　⑨ 便于将奶牛从主要的饲养区域赶至一些特殊的地点，如挤奶台、配种架等。　　⑩ 整体设计应考虑到尽量节省劳动力。　　前三点直接涉及到奶牛所处的环境,但饲料也可成为传播微生物的潜在因素(见2.3.1.3)。　　2.3.1.1 栓系式牛舍。中国的许多奶农都采用了栓系式牛舍饲养奶牛，这种牛舍的设计对奶牛的环境卫生有很大的影响。设计原则之一就是既简便又能及时地将粪、尿与奶牛分开。再勤快的奶农也不可能整天在那儿清粪以避免奶牛卧下时弄脏牛体。奶牛是站立排粪尿的，因此，设计上就必须让粪尿直接排入粪尿沟内。荷斯坦牛舍牛床的尺寸应设计为：从饲槽后沿至粪尿沟前沿的长度为1.55-1.65米，而中国奶牛舍内的尺寸一般都为1.8—1.9米, 这样牛粪常被排泄于奶牛躺卧之处,常常污染牛腿、肋部和乳房。　　如果奶牛可直接将粪便排入粪尿沟内，说明其站立位置正对饲槽，如果奶牛斜向站立，粪尿将会排在牛床上。但可设置分隔栏，分隔出独立的牛床，以使奶牛保持正确的姿势。不一定一牛一隔栏，可两牛一隔。　　牛床应有某种铺垫，以保证栓系式牛舍奶牛肢蹄的健康。铺垫物应清洁、干燥。常采用的有秸秆、沙子、锯末，也可使用专用的橡胶垫。目前中国可生产这种橡胶垫，也买得到。使用时最重要的一点是不要太频繁冲洗橡胶垫。以免潮湿。　　2.3.1.2运动场。 在讨论牛奶质量时不宜过多叙述运动场设计的各个方面，必须强调的一点就是干燥。也就是说，如果是土地面，排水应通畅。在许多奶牛场之中，这与生产卫生牛奶是完全不相适应的。水泥运动场应铺成2-3的坡度，以便尽快排走雨水。若水泥地表地设计成沟槽状以增加牛蹄阻力，其方向应顺坡向而走。　　2.3.1.3饲养。有人奇怪为什么麽将饲养作为病菌传播的因素之一，但在中国它确实是紧密相关的。李斯特菌对动物和人类都是致病菌。在霉菌适宜的类似环境，特别是发酵度不足的青贮饲料，特别适宜李斯物菌增殖　　2.3.2 挤奶　　农业生产的挤奶过程是十分独特的,因为在充满了潜在有害微生物污染的环境中获得人类食品。正常的卫生标准应依据食品业的，而非农业的标准。在挤奶的过程中，存在着微生物对奶牛和牛奶污染的极大危险，其过程可分为三步：乳房准备、挤奶和乳房的后处理。　　2.3.2.1乳房准备。乳房准备基于以下三个原因：　　-刺激奶牛的泌乳反射。　　-保证泌乳过程中不受微生物的侵袭。　　-保证乳房上的污物不会污染牛奶。　　就象野生祖先母牛看到犊牛、闻到犊牛的气味、乳房受到犊牛碰撞而产生的反应一样，品种化的奶牛对擦洗和按摩乳房也产生同样的反应。奶牛对热水冲洗和按摩会习惯性地产生泌乳反应。但擦洗乳房的毛巾和挤乳工的手都会将细菌从一头奶牛传染到另一头奶牛，这是对奶牛健康最大的危险。正确操作的要求是：每头牛分别用洁净水冲洗。现代化的挤奶台采用软管和喷嘴冲洗乳房。用一桶水洗多头牛简直就是在奶牛之间传播病菌，这是不可原谅的错误。即使按照乳品厂的标准加入消毒剂，从一头奶牛到另一头奶牛的挤奶间隔时间也保证不了化学药品的消毒作用。如果增加消毒剂的浓度，乳房细薄的皮肤受到损害的程度就会加大，这也就促进了乳房内部微生物感染的机会。如果不具备软管、喷头这些条件，那麽，用一只手提喷水器也就足够冲洗乳房了。用于擦干乳房的毛巾是微生物的主要载体，再也找不到什麽比这更有效的东西在牛群中传播病原菌了。奶业发达国家主要采用一牛一纸擦试方法，也可采用洁净的报纸替代，虽然效果不如纸巾，但便宜，起码比反复使用毛巾要好的多。　　有些专家建议

[size=4]人类体细胞克隆胚胎是福还是祸？！进行人类治疗性克隆研究，造福人类呢？还是制造克隆人的时代到来？福兮？祸兮？[/size]

[b][font=宋体][font=宋体]细胞周期[/font][font=Calibri]cell cycle [/font][/font][/b][font=宋体]是指从一次细胞分裂形成子细胞开始到下一次细胞分裂形成子细胞为止所经历的过程，它反映了细胞增殖的速度。在临床上，有很多研究证明，细胞周期分析对人肿瘤的诊断预后具有很高的价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一个完整的细胞周期包含间期和分裂期（[/font][font=Calibri]M[/font][font=宋体]期）两个阶段，间期又分为[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成前期（[/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期）、[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成期（[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期）和[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成后期（[/font][font=Calibri]G2[/font][font=宋体]期），处于不同时期的细胞的[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量存在差异。一般认为，[/font][font=Calibri]G 1 [/font][font=宋体]期细胞具有增殖活性，参与细胞周期循环，是二倍体细胞；[/font][font=Calibri]S [/font][font=宋体]期细胞，[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量逐渐增加，从二倍体变成四倍体，随后进入 [/font][font=Calibri]G 2 [/font][font=宋体]期，最终进入 [/font][font=Calibri]M [/font][font=宋体]期。检测细胞周期常用的方法是检测[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量，可以选择能与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]结合的荧光染料（如[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]等），再根据细胞各个时期[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量不同从而荧光强度不同的方法，分析各个阶段的细胞比例。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]流式细胞仪[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]染色法检测细胞周期的原理[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]由于细胞周期各时相的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]不同[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]通常正常细胞的[/font][font=Calibri]G1/G0[/font][font=宋体]期具有二倍体细胞的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量[/font][font=Calibri](2N),[/font][font=宋体]而[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期具有四倍体细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量[/font][font=Calibri](4N),[/font][font=宋体]而[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的[/font][font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量介于二倍体和四倍体之间。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]（碘化丙啶）为插入性核酸荧光染料，能选择性嵌入核酸[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]双螺旋的碱基之间与之结合，结合量与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量成正比关系，其荧光强度直接能反映细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]因此[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]通过流式细胞仪[/font][font=Calibri]PI[/font][font=宋体]染色法对细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量进行检测时[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]可以将细胞周期各时相区分为[/font][font=Calibri]G1/G0 [/font][font=宋体]期[/font][font=Calibri],S [/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M [/font][font=宋体]期[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]获得的流式直方图对应的各细胞周期可通过特殊软件计算各时相的细胞百分率。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]通过定量测定[/font] [font=Calibri]DNA [/font][font=宋体]含量来分析细胞周期是流式细胞术最早的应用之一。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]流式细胞周期（[/font][font=Calibri]cell cycle[/font][font=宋体]）检测结果分析常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量（横坐标）来分析的：[/font][font=Calibri]G0[/font][font=宋体]期：静止期，有丝分裂完成后，脱离细胞周期暂时停止分裂的一个阶段，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量保持二倍体；[/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期：[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成前期，从有丝分裂到[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]复制前的一段时期，此期主要合成[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]和核糖体，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量保持二倍体；[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期：[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成期，在此期，合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]及组蛋白，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量介于[/font][font=Calibri]G1[/font][font=宋体]期与[/font][font=Calibri]G2[/font][font=宋体]期之间；[/font][font=Calibri]G2[/font][font=宋体]期：[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成后期，是有丝分裂的准备期，合成[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]及蛋白质，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成终止，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量为四倍体；[/font][font=Calibri]M[/font][font=宋体]期：细胞分裂期，胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]含量为四倍体；[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]流式细胞检测正常范围[/font][/b][font=宋体]流式细胞检测的正常范围通常依赖于被检测细胞或生物粒子的类型以及所测参数的性质。一般而言，正常的细胞数量、细胞大小、细胞形态、细胞内物质的浓度和分布等参数都在一定的范围内。这些正常范围通常是通过对比大量健康个体或样本的流式细胞检测结果而得出的。例如，正常血细胞的计数和比例，各种免疫细胞的分布，以及细胞内的荧光强度等，都有相应的正常范围。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url]，同时还提供完善的[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]流式单[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting][b]细胞分选平台[/b][/url]，详情关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/platform/facs-b-cell-sorting[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

【序号】：1【作者】： 马洁【题名】：体细胞治疗研究现状与未来趋势【期刊】：药物评价研究. 【年、卷、期、起止页码】：2021,44(02)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKibYlV5Vjs7iy_Rpms2pqwbFRRUtoUImHQe9fMzkf--0jY8R3rLJCfgmNRnS6695hWotDbOIv0Au&uniplatform=NZKPT

近日，德国IBIDI公司成功开发出一款超高分辨率生物显微镜。该公司宣称基于新型随机光学重建显微技术“（d）STORM”，利用该公司独创的特殊塑料底板“μ-Slides”可实现超高分辨率观察活体细胞。 STED，SIM，（F）PALM 和（d）STORM等新型光学显微技术可有效避免衍射极限，获得纳米级水平的超高分辨率成像。这些超高分辨率显示技术可应用到生物实验研究，观察了解组织细胞分子结构。IBIDI公司采用了创新性的含有亲水性膜涂层的塑料材质底板“μ-Slides”替代传统玻璃底板，首次实现了“活体细胞”超高分辨率观察。这种被成为“ibi-Treat”的亲水性膜涂层性能可以与标准的细胞培养瓶和培养皿相媲美。 IBIDI公司相关研发工作受到了德国联邦教研部《生命科学领域光学技术—基本细胞功能》项目的资助。

[font=宋体][font=宋体]在生物学和医学研究中，细胞增殖是一个关键过程，对于理解生命活动的基本规律以及疾病的发病机理具有重要意义。随着科技的发展，流式细胞仪作为一种高效、灵敏的分析工具，广泛应用于细胞增殖的检测。流式细胞仪通过快速分析单个细胞，可以对细胞周期、细胞增殖活性、细胞凋亡等多个方面进行研究。本文将探讨流式细胞仪在检测细胞增殖方面的主要方法，包括但不限于溴脱氧尿苷（[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]）掺入法、细胞周期蛋白检测法以及细胞大小分析法等，以期为读者提供全面的技术应用概览。流式细胞仪检测细胞增殖方法：[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]（氚离子）掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]原理：是在细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时，用[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]脱氧胸腺嘧啶核苷代替普通的脱氧胸腺嘧啶核苷掺入新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中，增殖的细胞因为掺入[/font][font=Calibri]3H[/font][font=宋体]而具有放射性，通过定量检测样品细胞的放射性大小而反映细胞的增值活性[/font][/font][font=宋体][font=宋体]缺点：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）使用的是具有放射性的同位素，操作较为复杂，同时需要采取放射性保护措施 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）低比例高活跃增殖和高比例低活跃增殖可能得到的是相同的结果，用此方法无法进行鉴别 [/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）此方法无法进一步得到具有活性的增值细胞用于下一步的研究 [/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]） 此方法时间较短，无法检测加入前细胞的增殖情况，而且检测到放射性只能说明细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成，而不能提供合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的细胞是否进入增殖阶段的信息[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、相对计数法[/font][/font][/b][font=宋体]原理：将对照组和各实验组控制在相同条件下直接计数然后比较计数结果得到增殖结论[/font][font=宋体]注意点：[/font][font=宋体][font=宋体]对照组与实验组每种细胞所加浓度必须相同，每组至少设置[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔，这样每个孔可以得到[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]个细胞数，将[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]个复孔取平均值后就是这个组的结果。如果同时需要得到每孔目标细胞增殖后的绝对参数，在每孔细胞中加入[/font][font=Calibri]1*105PE[/font][font=宋体]标记的人工微球作为内参[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]收集各组的细胞于[/font][font=Calibri]EP[/font][font=宋体]管中，注意必须尽量将各组的所有细胞都收集起来。标记需要计数细胞的标志表型的荧光素偶联抗体，[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃静置[/font][font=Calibri]30min[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]洗涤一次，洗去游离的抗体[/font][/font][b][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、示踪染料标记法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]示踪染料与细胞结合的方式：[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）能够与细胞内的蛋白质上的氨基发生非特异性的共价结合 [/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）能够非特异性地嵌入细胞膜的脂质双分子层中与细胞发生非共价性结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]原理：示踪染料的荧光信号都很强，当细胞分裂时，母细胞内的染料会被平均分配到子细胞中，细胞荧光信号会被减弱一半，所以通过检测减弱的、发射示踪染料荧光信号的细胞比例就可以判断细胞增殖的强弱。当荧光强度减弱到标记时的[/font][font=Calibri]1/2[/font][font=宋体]以及以下的细胞都是增殖后的细胞，这些细胞所占比例越高则代表细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]标记方法：[/font][font=宋体][font=宋体]①纯化增殖反应的目标细胞，将细胞的浓度调整为[/font][font=Calibri]1*106/ml[/font][font=宋体]，加入[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体]，其标记浓度为[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]微摩尔[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]升。置于[/font][font=Calibri]37[/font][font=宋体]℃水浴中标记[/font][font=Calibri]15min[/font][font=宋体]，在标记过程中每隔一段时间混匀细胞一次[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②加入预冷、含有血清的培养基终止标记，在[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]℃冰箱中静置[/font][font=Calibri]5min[/font][font=宋体]，离心沉淀[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③用培养基再洗涤一次，尽量洗净未结合的游离的[/font][font=Calibri]CFSE[/font][font=宋体]，然后将目标细胞静置在增殖体系中[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]EdU[/font][font=宋体]掺入法[/font][/font][/b][font=宋体][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]：[/font][font=Calibri]5-[/font][font=宋体]溴脱氧尿嘧啶核苷是胸腺嘧啶核苷的类似物，其特点是胸腺嘧啶环上[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]位[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]连接的甲基被溴取代，在细胞增殖[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成时可以与内源性的胸腺嘧啶核苷竞争掺入到新合成的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]中，而[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体可以特异性的识别[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]，不与胸腺嘧啶核苷结合，所以可以用于检测细胞增殖[/font][/font][font=宋体][font=宋体]适用范围：适用于体内检测目标细胞的增殖，一般将[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]掺入小鼠的应用水中或经腹腔注射，经过一段时间后，取出目标细胞制成单细胞悬液然后用多聚甲醛固定细胞，后用打孔剂皂苷在细胞膜上打孔，最后标记荧光素偶联抗[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]抗体，目标细胞的[/font][font=Calibri]BrdU[/font][font=宋体]阳性细胞就是增殖的细胞，阳性比例越高，增殖越活跃。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、其他方法[/font][/font][/b][font=宋体][font=宋体]细胞周期法检测细胞增殖：流式细胞术能够检测细胞内[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的含量，所以可以检测细胞周期。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期的细胞，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的量处于二倍体和四倍体之间[/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]处于[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期时，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]量为四倍体。处于[/font][font=Calibri]S[/font][font=宋体]期和[/font][font=Calibri]G2/M[/font][font=宋体]期的细胞比例越高说明细胞增殖越活跃[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]检测细胞增殖：[/font][font=Calibri]PCNA[/font][font=宋体]（增殖细胞核抗原），在细胞核合成且只存在于细胞核内，是[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]聚合酶的辅助蛋白，所以与细胞[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的合成关系密切，是反映细胞增殖状态的良好指标[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Ki-67[/font][font=宋体]检测细胞增殖：是一种与细胞增殖特异相关的核抗原[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]CD71[/font][font=宋体]检测细胞增殖：是转铁蛋白受体，表达于细胞的表面，该受体广泛表达于各种恶性肿瘤细胞表面，正常细胞表达较少，与肿瘤细胞的增殖密切相关[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service][b]流式细胞检测技术服务[/b][/url]，更多关于流式细胞仪检测细胞增殖详情欢迎咨询，详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/flow-cytometry-service[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

体细胞数量高的原料奶生产全脂奶粉，成品的滋气味会有腥味吗？