细菌的实验室检测方法进展——金黄色葡萄球菌的鉴定方法摘要:金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界,多存在于人和动物的鼻腔、咽喉、皮肤及与外界相通的腔道。能引起人和动物机体局部、脏器的化脓性感染,重者可引起败血症、脓毒血症等全身感染。金黄色葡萄球菌也是国内外最常见的细菌性食物中毒病原菌之一,在我国由金黄色葡萄球肠毒素引起的食物中毒占细菌性食物中毒事件的前几位。典型的金黄色葡萄球菌为球型,显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌肠毒素被分为7 个血清型,A、B、C(C1、C2、C3)、D、E。目前实验室对金黄色葡萄球菌的检验有传统培养法,金黄色葡萄球菌肠毒素的检测方法,脉冲场凝胶电泳检测分型方法和聚合酶链式反应(PCR)技术对金黄色葡萄球菌的检测方法。
近日来,思念水饺事件搅和的整个食品行业对金黄色葡萄球菌都畏惧,我们公司也不敢怠慢,按照国家的要求进行检测,但是国家标准特别的讨厌,金黄色葡萄球菌虽然有三个方法,但是不同的产品要求的不一样,比如说乳制品中的要求:未检出,必须采用第一法,其他的好像速冻食品要求的单位是:cfu/g,那就要用第二法,还有哪个产品来着?国家标准要求:MPN/g,那就必须用第三法,我们一个微生物实验室做一个金黄色葡萄球菌就要用三个方法,没办法啊,单位不同,不能统一,多讨厌啊。 国家标准制定有待改善啊,大家在使用国标的时候都遇到什么样的问题呢?
亲们,最近的金黄色葡萄球菌可是咱们微生物界的大明星啊!你们都曾经培养过它吗?在学校里做微生物实验室有不少童鞋都培养过吧?你们对金黄色葡萄球菌的培养有什么想法吗?最近速冻食品里的金黄色葡萄球菌你有没有检测一下呢?很希望论坛里有版友分享一下啊,我算是外行人了,很想知道知道。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/11/201111141615_330423_2356122_3.gif我常常买一些速冻的鸡柳和鸡块来吃,不知道这些里面会不会也有呢?
金黄色葡萄球菌及检验 一、生物学特性 典型的金黄色葡萄球菌为球型,直径0.8μm左右,显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛,大多数无荚膜,革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高,在普通培养基上生长良好,需氧或兼性厌氧,最适生长温度37°C,最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起,直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性,可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖,产酸不产气。甲基红反应阳性,VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸,水解尿素,还原硝酸盐,液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力,对磺胺类药物敏感性低,但对青霉素、红霉素等高度敏感。二.流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而,食品受其污染的机会很多。近年来,美国疾病控制中心报告,由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位,仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题,在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多,占45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点: 季节分布,多见于春夏季;中毒食品种类多,如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外,剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。一般说,金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品: 食品加工人员、炊事员或销售人员带菌,造成食品污染;食品在加工前本身带菌,或在加工过程中受到了污染,产生了肠毒素,引起食物中毒;熟食制品包装不严,运输过程受到污染;奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时,对肉体其他部位的污染。 肠毒素形成条件: 存放温度,在37°C内,温度越高,产毒时间越短; 存放地点,通风不良氧分压低易形成肠毒素; 食物种类,含蛋白质丰富,水分多,同时含一定量淀粉的食物,肠毒素易生成。三.致病性 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶:a.溶血毒素:外毒素,分α、β、γ、δ四种,能损伤血小板,破坏溶酶体,引起肌体局部缺血和坏死;b.杀白细胞素:可破坏人的白细胞和巨噬细胞;c.血浆凝固酶:当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关;d.脱氧核糖核酸酶:金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌;e.肠毒素:金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素,分为A、B、C、D、E及F五种血清型。肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏。它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。此外,金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。
求助金黄色葡萄球菌的图片
固体食品作金黄色葡萄球菌检测时,取10倍稀释液5ml接种于7.5%NaCl或胰酪胨大豆肉汤()中,置温箱培养。 A、10ml B、50ml C、100ml D、150ml
金黄色葡萄球菌在血平板上的菌落特点是()。 A、金黄色,大而凸起的园形菌落 B、金黄色,表面光滑的园形菌落,周围有溶血环 C、金黄色,透明,大而凸起的园形菌落 D、白色透明圆形菌落
两大速冻食品知名品牌近期相继检出,令新的食品安全国家标准《速冻面米制品(征求意见稿)》备受关注。这个征求意见稿将金黄色葡萄球菌由原来的不得检出改为有限量。针对公众"要求降低了"的质疑和担忧,卫生部11日回应称,新标准征求意见稿更加符合国际食品微生物采样检测要求,是科学合理的。 我国现行《速冻预包装面米食品卫生标准》(GB19295-2003)规定金黄色葡萄球菌等致病菌不得检出。而卫生部今年9月公布的《速冻面米制品食品安全国家标准(征求意见稿)》,将金黄色葡萄球菌检测由定性转向定量,规定每批产品抽检5个样品中,至多只能有1个样品每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量在1000至10000个之间。 卫生部表示,老标准是微生物定性检测方法,采用一个样品检测来判定产品微生物污染情况,这种采样方案和限量规定不能全面、真实地反映产品微生物污染状况和可能产生的健康影响,与国际上食品中微生物控制和管理方式有明显差距。新标准征求意见稿正在卫生部网站公开征求意见。卫生部表示欢迎各方提出修改意见和建议。
金黄色葡萄球菌 有哪些形态学特征,谈谈
一、金黄色葡萄球菌及其肠毒素 葡萄球菌属(Staphylococcus)至少包括有20个种。其中金黄色葡萄球菌是一种引起人类和动物化脓感染的重要致病菌,也是造成人类食物中毒的常见致病菌之一,可引起许多严重感染。本菌广泛分布于自然界,如空气、土壤、水及其它环境中。在人类和动物的皮肤及外界相通的腔道中也存在次菌。1.病原学特征 革兰氏阳性球菌,直径为0.8-1.0μm,成对或成短链状排列,或呈葡萄状聚集,无芽孢,无鞭毛(见图6-6)。 图6-6 金黄色葡萄球菌显微形态结构 file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/ksohtml/wps_clip_image-28057.png file:///C:/DOCUME~1/ADMINI~1/LOCALS~1/Temp/ksohtml/wps_clip_image-27880.png 不能运动,一般不形成荚膜,但在少数菌株的外层可见有荚膜样的粘液物质。需氧或兼性厌氧菌,营养要求不高,于普通培养基上生长良好,37℃孵育24~48h形成直径1~2mm圆形、隆起、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、边缘整齐的菌落。在室温下长时间培养产生脂溶性色素,使菌落呈金黄色。于血液琼脂平板上培养,金黄色葡萄菌菌落周围可形成完全透明溶血环(β溶血)。在液体培养基中呈混浊生长。生长温度在6.5-46℃之间,最适温度为30-37℃,能在冰冻环境下生存,能在质量分数为15%NaCl和40%胆汁中生长。在水分活度为0.87的条件下仍能存活。分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖,产酸不产气。分解甘露醇产酸在鉴定致病性方面有一定意义。 在不形成芽胞的细菌中金黄色葡萄球菌抵抗力最强。于干燥的脓汁或痰液中可存活2~3个月;加热60℃1h或80℃30min才能将其杀死。在2%石炭酸中15min或在0.1%升汞中10-15min死亡。耐盐,在含有10%~15%NaCl的培养基中仍能繁殖。对某些染料较敏感。如1︰10-20万倍稀释的龙胆紫溶液能抑制其生长。对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感,对链霉素中度敏感,对万古霉素也敏感;但对磺胺、氯霉素敏感性差。近年来由于抗生素的选择作用,耐药菌株逐年增多,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)已成为医院内感染最常见的致病菌。 金黄色葡萄球菌可通过化脓性炎症的病人或带菌者在接触食品后,使食品污染。金黄色葡萄球菌在20~37℃及适宜的pH和合适的食品条件下能产生肠毒素,如被金黄色葡萄球菌污染的食物,通常在21~30℃下,放置3~5h,就能产生足以引起中毒的肠毒素。50%以上的金黄色葡萄球菌可产生肠毒素,并且一个菌株能产生两种以上的肠毒素,引起食物中毒的肠毒素是一组对热稳定的低分子量可溶性蛋白质,分子量为26000-30000。 常用噬菌体分型。目前国际上将金黄色葡萄球菌分为4个噬菌体群、23个噬菌体型。噬菌体分型可用于流行病学调查按抗原性可分为A、B、C1、C2、C3、D、E、F共8个血清型且均能引起食物中毒,尤以[font=Ti
昨日“湾仔码头”也有产品检出金黄色葡萄球菌超标,这是继思念、三全后又一家身陷“细菌门”的企业。昨日,微博上热传一份标称为南京工商局最近的检验报告,显示该品牌一个批次的“上汤小云吞(荠菜猪肉)”由于检出该菌不合格,并质疑结果仅通知厂商处理而未对外公布。为此昨日记者联系南京市相关主管部门查询,他们并没有给出明确的回复,而记者在广州的多家超市发现涉及的产品仍在销售。 记者了解到,微博上热传的这份检验报告由南京市工商局委托国家轻工业食品质量监督检测南京站检验,样品为标称湾仔码头的上汤小云吞(荠菜猪肉),规格为106克/袋(20只袋),生产单位是上海品食乐冷冻食品公司,生产日期是“20111008A”,在南京苏果超市马标连锁店购买。检验结果显示,上述样品金黄色葡萄球菌的检验结果是“检出”,由于技术要求是不得检出,所以该单项判定为“不合格”。该报告显示收样日期是10月22日,签发日期是11月6日。 昨日,致电南京市工商局办公室欲了解事件更多细节,该局一位工作人员表示,关于湾仔码头产品检测结果的查询统一由该市食安办发布。随后记者再致电南京食安办,食安办方面则表示,还在跟南京市工商局了解情况。另外,记者也向湾仔码头客服热线查询事件,对方表示并不知情,并称将把事件向上级反映有结果后向记者回复,但是至记者截稿时止仍未有回复。 而记者在广州多家超市均发现“问题”小云吞仍在销售,表示还没有收到有关部门下架通知。 新国标或容许”毒菌”存在 卫生部早前曾发布了“食品安全国家标准-速冻面米制品”征求意见稿,其中规定,金黄色葡萄球菌不再是严禁检出的项目,在每克生制品中检出的金黄色葡萄球菌含量只要在1000~10000个之间,都为合格产品。而针对思念、三全等接多个大品牌速冻面米食品近期在各地检出金黄色葡萄球菌。卫生部指出,金黄色葡萄球菌广泛分布在大气、土壤中,对热敏感,加热80℃、30分钟可被杀灭,通常每克大于10的5次方菌落数时可产生致病性肠毒素,常规烹饪等处理方式不能破坏肠毒素,引起食物中毒。但市民普遍不可能将云吞煮30分钟。
金黄色葡萄球菌血浆凝固酶的增菌液选用BP平板的菌落还是血平板的菌落啊?我们实验室做了一个样品,选BP平板的菌落的增菌液做血浆凝固酶试验,凝集;选血平板的菌落的增菌液做血浆凝固酶试验,不凝集。这是为什么?结果判定为金黄色葡萄球菌阳性还是阴性呢?
鸭源金黄色葡萄球菌生长曲线是怎么样的?鸭源金黄色葡萄球菌的培养基可以用哪些啊?谢谢!~
GB4789.10-2016金黄色葡萄球菌检验第二法中,如果都是未检出,该如何表示呢?国标上说“如T=0,则以小于1乘以最低稀释倍数表示”。如果我最低稀释10倍,未检出,最后的表示是不是<1x10?非微生物专业,临时顶替,望各位大神路过帮忙解答一下,谢谢
[color=#333333]乳制品中检验金黄色葡萄球菌的方法[/color]
想请教各位大侠,按照GB 4789.10-2010来检测食品中的金黄色葡萄球菌,结果为检出,但报结果时的单位应该是什么呢??
金黄色葡萄球菌鉴别镜检物镜要用多少倍?望老师不吝赐教
2011年10月19日名牌水饺查出金黄色葡萄球菌可引发肺炎甚至败血病 带菌思念水饺被下架本报讯 (记者 孙宇) 在市食品办公布的新一期下架名单中,知名品牌思念三鲜水饺被检出可引起肺炎的金黄色葡萄球菌,现该批次水饺已经被全市停止销售。金黄色葡萄球菌在食品安全检查中为不得检出物质,该菌是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等,甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶。记者了解到,北京市工商局在近期对本市食品流通领域抽检中共发现不合格食品18个,除思念水饺被检出金黄色葡萄球菌外,甜蜜素过度和二氧化硫仍是食品抽检不合格的主因。北京市工商局提醒,凡已购买上述不合格食品的消费者可凭购物小票和食品外包装向销售单位要求退货。全市下架食品名单样品名称 商标 生产批次 标注生产单位名称 不合格项目 当事人姓名或名称泡菜 南大堡 2011.2.15 永年南大堡顺发酱菜厂 山梨酸 北京采育晨圆超市特级杏肉 津辉 2011.2.25 天津市家发商贸有限公司 二氧化硫 北京采育益廉美超市素牛肉丸 鄉俚人 2011.2.18 浏阳市乡里人食品有限公司 甜蜜素 北京采育益廉美超市红薯沙拉(糕点) 猫耳王 2011.3.18 郏县尔康食品厂 糖精钠 北京晶泽世纪百货商店蓝梅条 华夏开创 2011.3.5 天津市福美商贸有限公司 甜蜜素 北京黄村兴瑞红顶屋食品商店特级杏肉 津辉 2011.5.2 天津市家发商贸有限公司 二氧化硫 北京黄村兴瑞红顶屋食品商店满口福(调味面制食品) 标杰 2011.3.1 郑州市二七区裕和食品厂 甜蜜素 北京康庄联民超市多福源辣子棒(调味面制食品)标杰 2011.2.23 郑州市二七区裕和食品厂 甜蜜素 北京康庄联民超市三鲜水饺 思念 20110628106A郑州思念食品有限公司 金黄色葡萄球菌 北京物美京西便利超市有限责任公司物美河滩店豆油皮 晓帆 2011.2.20 内黄县黄豆制品厂 甲醛次硫酸氢钠苏州雨润发综合超市有限公司北京分公司辣哈哈(调味面制品) / 2011.4.22 菏泽市牡丹区周林食品厂 甜蜜素 北京清水永盛自选商店话梅肉 千峰 2011.5.15 甘肃省镇原县新千年食品 二氧化硫 北京陈天雨商店山楂大华系列 大华 2011.3.20 兴隆县大华食品有限公司 苯甲酸 北京陈天雨商店久味王(铁板烧) 久味赢 2011.4.16 望城县黄金乡久味王食品厂 甜蜜素苯甲酸 北京清水永盛自选商店桂味柠檬 银创 2011.5.1 汕头市果情食品有限公司 甜蜜素 北京陈天雨商店多味豆笋 味之天 2011.3.11 长沙市雨花区光大食品厂 苯甲酸 北京陈天雨商店腐竹 金龙顺昌 2011.4.1 北京金龙顺昌商贸有限公司吊白块 北京三家店振萍超市第一分公司中国红高级红酒 威亚 2010.12.18 青州市长城葡萄酒有限公司 糖精钠 北京三家店振萍超市
金黄色葡萄球菌的耐药性分析【摘要】目的了解我院共分离出152株金黄色葡萄球茵在临床住院者标本中的分布构成情况及其耐药趋势,为-临床感染的预防和治疗提供参考资料。方法回顾分析2005--2009年间我院患者标本中金黄色葡萄球菌在标本和病区的分布构成情况以及对16种抗茵药物的耐药率。结果金黄色葡萄球菌在呼吸道标本(痰液+咽拭子)的分离率最高(109/152),其次是分泌物(27/152),血液(16/152);金黄色葡萄球茵株中,耐甲氧西林金黄色葡萄球茵(MRSA)占68.4%;诺氟沙星92.3%耐药、复方新诺明91%耐药、四环素和利福平88.5%耐药、红霉素86.5%耐药、左旋氧氟沙星84.6%耐药、庆大霉素81.7%耐药;万古霉素、替考拉宁均对金黄色葡萄球茵100%敏感。结论在治疗金黄色葡萄球菌引起的感染时,临床医生应根据本地分离金黄色葡萄球菌的耐药情况,合理应用抗生素,减少细茵耐药,使金黄色葡萄球菌得到有效控制;MRSA药物敏感性较好的有万古霉素、替考拉宁、夫西地酸、呋喃妥因;甲氧西林敏感金黄色葡萄球茵除青霉素、庆大霉素、红霉素外,其它药物均具有较好的敏感性,可作为临床用药的参考。MRSA在对16种抗生素的平均耐药率中最高的前三位分别是青霉素100%、苯唑西林100%、诺氟沙星92.3%,最后三位是喹奴普汀·达福普汀23.1%、夫西地酸15.4%、呋喃妥因7.7%。而甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(Methieillin—sensitive staphylococcusaureus,MSSA)耐药率最高的前三位分别是青霉素89.6%、红霉素62.5%、庆大霉素54.1%,最后三位是左旋氧氟沙星10.4%、米诺霉素6.3%、四环素4.1%。
"金黄色葡萄球菌(以下简称"金葡菌")是一种常见细菌,吃了污染少量金葡菌的食品会闹肚子,但对人体的影响比较轻,也不用听到金黄色葡萄球菌就害怕。"中国农业大学生物学院教授、博士生导师王贺祥日前表示。 近期,思念、三全等速冻水饺相继被检出含有金葡菌,不少地方的超市相继将其产品下架,一时间消费者谈之色变。 金葡菌不可怕 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所研究员、国际食品微生物标准委员会(ICMSF)委员、中国食品科学技术学会副理事长刘秀梅介绍说,金葡菌广泛存在于自然环境中,如空气、土壤,是一种常见的微生物。人和动物是主要的病菌携带者,大约50%以上健康个体的鼻腔、咽喉、头发和表皮中都带有这种菌。中国科学院微生物研究所副所长、博士生导师东秀珠也表示,金葡菌哪里都有,人的脸上长疖子了也会有。 王贺祥说:"西餐中未煎熟的牛排和生鱼片中也含有金葡菌,在生产加工过程中,金葡菌分子会吸附在食品上,这个很难避免。而且如果生鱼片保存不当,金葡菌还会滋生。" 刘秀梅表示,金葡菌主要的致病因素是由金葡菌产生的葡萄球菌肠毒素,毒素的产生和菌量的多少有关,国际公认产生葡萄球菌肠毒素的菌量浓度在100000个/g以上。金葡菌肠毒素中毒可使人产生剧烈的恶心、呕吐,同时伴有上腹部绞痛、腹泻。严重者可导致虚脱、肠痉挛和严重失水。但病程较短,1-2天内可恢复,预后一般良好。 据王贺祥介绍,金葡菌的营养细胞壁非常薄,在80℃的开水中煮5到10分钟就死了。一般煮熟了的冷冻食品中,金葡菌肯定死了,根本不用担心。
按照化妆品卫生规范(国标)进行金黄色葡萄球菌的检验测定时,在BP培养基上发现了类似菌落,特点与国标描述相似!划血平板,也是很相似!但镜检,阴性杆状且能发酵甘露醇!我怀疑是普通变形杆菌,因为将BP菌落点到卵磷脂吐温80上呈波纹状扩散!活体镜检游动活泼!但BP培养基应该是选择培养基,且变形杆菌能发酵甘露醇么?求助!谢谢!
2014年食源性致病菌金黄色葡萄球菌风险监测分析 葡萄球菌是革兰氏阳性球菌中的一种,广泛分布于自然界,如空气、水、土壤等,同时存在于人体、动物体的皮肤及其与外界相通的腔道中。绝大部分不致病,少数可引起人类或动物致病,属于人兽共患病原菌。其中金黄色葡萄球菌致病力最强,除了常引起皮肤、组织及器官的化脓性炎症外,其产生的肠毒素也可污染食物而导致食物中毒。近年来,由金黄色葡萄球菌肠毒素引起暴发的中毒事件当首推2000年日本“雪印奶粉”事件,14000多人受感染。金黄色葡萄球菌至今仍是国内外医院获得性感染最常见的细菌之一。能产生大量的侵袭性物质,如各种酶类,多种毒素和菌体的一些成分等。其引起的疾病主要分为两类,侵袭性疾病和毒素性疾病,在我国由金葡菌肠毒素引起的食物中毒占细菌性食物中毒事件的前几位。就这种情况笔者就本地2014年食品金葡菌检验结果做如下总结。 1 材料与方法1.1试剂和仪器 使用的培养基有10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker 琼脂购买于北京路桥公司,兔血浆购买于碧迪公司。主要仪器包括均质器,电子天平:感量0.1g,VITEK-2 Compact 全自动微生物鉴定系统。1.2依据和方法 根据国家食品安全风险评估中心制定的“食源性致病菌监测工作手册”要求进行增菌、分离、鉴定、菌种保存及送上级实验室复核。试验程序见图1。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412051137_526003_2433088_3.jpg
请教一下各位:婴幼儿配方奶粉要不要检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、黄曲霉毒素?或者定期送外测?
一、实验目的 掌握PCR检测乳品中金黄色葡萄球菌具体方法及操作步骤。 二、实验原理 聚合酶链反应(polymerase chain reaction )简称PCR,是一种体外酶促合成反应,扩增特定DNA片断的方法。该技术于1985年由美国的KaryMullis等人首创并由美国GETUS公司开发。其原理是:在存在DNA模板、引物、dNTP、适当缓冲液(Mg2+)的反应体系中,在热稳定DNA聚合酶的催化下,对一对寡核苷酸引物所界定的DNA片断进行扩增。这种扩增是通过模板DNA、引物之间的变性、退火(复性)、延伸等三步反应为一个周期,循环进行,使目标DNA片段得以扩增。由于每一周期产生的DNA片断均能成为下一次循环的模板,故PCR产物以指数形式增加,从而实现信号的放大。 本实验以金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶为靶基因进行检测。 三、实验材料 1.菌种:Staphylococcus aureus(金黄色葡萄球菌)-26003-21 2.乳制品:全脂乳、脱脂乳和奶酪均购自当地超市。 3.培养基:营养肉汤培养基 4.化学试剂:10xPCR buffer、dNTPs、TaKaRa Taq、DNA Marker DL2000, 5.引物: 正向引物:GCGATTGATGGTGATACGGTT 反向引物:AGCCAAGCCTTGACGAACTAAAGC 6.实验仪器:PCR仪、DXY-33A型电泳仪、UVIpro凝胶成像系统 四、实验步骤 1.将已人工污染的乳品25ml接入225ml营养肉汤培养基中,37℃振荡培养过夜 2.取1ml培养液于1.5ml离心管中,11000rpm,离心1分钟,弃去上清液 3.用灭菌的纯水洗涤菌体沉淀两次,再用100ul灭菌纯水溶解沉淀物 4.将菌悬液于沸水浴中煮沸10分钟,11000rpm,离心1分钟,取上清液,备用 5.PCR反应体系:总反应体系50ul。包括5ul 10XPCR buffer ,4ul dNTPs混合物,0.5ul 40umol正向引物,0.5ul40umol反向引物,0.25ul(5U/ul)Taq酶,模板2ul,水37.75ul。 6.PCR扩增程序:PCR反应采用冷启动。94℃预变性4分钟,再按94℃1分钟-52℃0.5分钟-72℃1.5分钟进行35个循环,最后72℃延伸3.5分钟。 7.电泳检测:取5ul PCR产物在2%琼脂糖凝胶上进行电泳,利用凝胶成像系统观察结果并成像。
金黄色葡萄球菌的分离和耐药性研究金黄色葡萄球菌(SAU)是引起院内感染的主要革兰阳性球菌,标本来源主要为痰液,β内酰胺酶阳性SAU和耐甲氧西林SAU(MRSA)的出现,增加了临床的治疗难度,近年来MRSA的分离率逐年增加。为了解某地区MRSA和β内酰胺酶阳性SAU的耐药现状,本研究对临床上分离出的300株SAU进行回顾性分析,结果报道如下。1材料与方法1.1菌株来源收集2009年1月至2013年9月在某地区住院及门诊患者痰液中分离出的SAU 300株,其中MRSA 240株,对甲氧西林敏感的SAU(MSSA)60株;β内酰胺酶阳性和阴性SAU分别为270株和30株。质控菌株SAU ATCC 25923购自卫生部临床检验中心。1.2方法细菌的分离培养按《全国临床检验操作规程》(第3版)进行;判断标准按临床和实验室标准研究所(CLSI)前一年度的标准执行;细菌鉴定、药物敏感试验(MIC法)均采用法国梅里埃VITEK 2 Compact全自动细菌培养鉴定仪,对苯唑西林耐药的SAU判定为MRSA株。1.3统计学处理采用Whonet 5.6软件进行数据处理。不同之间耐药性的比较采用r检验。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1主要病区SAU的分离数300株SAU主要病区来源见表1。SAU的病区来源主要为神经内科、重症监护病房(ICU)、神经外科、呼吸内科。MRSA的分离率为80.0%(240/300),其中神经内科占34.6%(83/240),ICU占23.8%(57/240),神经外科占18.3%(44/240),呼吸内科占7.9%(19/240)。β内酰胺酶阳性SAU分离率为90.0%(270/300),其中神经内科占31.9%(86/270),ICU占22.2%(60/270),神经外科占17.4%(47/270),呼吸内科占10.0%(27/270)。表1 某地区住院及门诊患者痰标本中主要病区金黄色葡萄球菌的分离数(株,n=300)病区耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌β内酰胺酶阳性β内酰胺酶阴性神经内科80128610ICU病房5611608神经外科457476呼吸内科1910272其他科室4020504合计
水饺中金黄色葡萄球菌超标、食用油中过氧化值、苯并芘超标,纯净水中菌落总数、霉菌超标的原因分析
求助 SN 0172-92 出口食品中金黄色葡萄球菌的检验方法,谢谢
有参加酱油中金黄色葡萄球菌、铅、砷含量能力验证的么?希望交流一下。
谁有GB/T4789.10-2008 食品卫生微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验和GB/T5413.14-1997婴幼儿配方食品和乳粉维生素B12的测定这两个标准的英文版本。谢谢。
有参加CFAPA-154金黄色葡萄球菌能力验证的吗?QQ:158490897