药敏鉴定分析仪原理

药敏试验常用K-B法：1从孵育16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。2在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。3用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。4将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。5贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。6孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法.

[size=12px]E-试验（E-test）跟纸片扩散法和稀释法一样，也是药敏试验之一。E-试验是结合了纸片扩散法和琼脂稀释法的原理和特点，是一种抗生素浓度梯度稀释法直接测量MIC的药敏试验的体外药敏试验方法。 [b][b]一、E-试验原理[/b][/b]E-试验要用到E-试条，它是一条带有抗生素浓度梯度的塑料条。该条带表面涂有抗生素，浓度从条带一端的沿条带逐渐降低，形成连续的对数浓度梯度。将E试条放置于已接种有待测细菌的琼脂培养基上，经孵育后，可见一个以试条为中心的对称抑菌椭圆环，椭圆环边缘与试条交界处的刻度即为MIC值。 [font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][b]二[/b][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][b]、E-试[/b][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][b]验操作步骤[/b][/font]前面几个步骤跟纸片扩散法一样。[/size] [b][size=12px]1.菌液制备[/size][/b] [size=12px][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]采用划线法将大肠杆菌受试菌种和标准菌种接种于营养琼脂平板，35℃培养16-18h，然后挑取单菌落，重悬于3mL无菌生理盐水中，混匀后与标准比浊管比浊。[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]调整浊度与标准比浊管0.5麦氏相同。[/font][/size] [size=12px][b]2.倒平板[/b]将MH琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。[i]90mm×15mm，平板厚度均匀，约4mm厚，大约1/3高度。[/i][/size] [b][size=12px]3.涂平板[/size][/b] [size=12px] 用无菌棉棒蘸取菌液（金黄色葡萄球菌）。将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出，涂布在MH琼脂平板整个平面三次，每次旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀，平板加盖室温干燥5min。 [/size][align=center][size=12px] [/size][/align][size=12px][b]4.插入E试条[/b] 用无菌镊夹取试纸条柄端，将其垂直插入MH培养基，并确保E试条与培养基间无气泡。E试条抗菌药物面（通常标有浓度刻度）朝上，抗生素浓度高的一侧（有标记）靠培养皿。 E试条有垂直插入和平放两种，一般建议垂直插入方式。[/size] [b][size=12px]5.孵育[/size][/b] [size=12px][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][/font]将上述平板倒置于37℃恒温培养箱中培养，观察并记录抑菌圈大小。 [b]6.结果分析[/b]孵育后围绕着E试条可形成一个椭圆形的抑菌圈，抑菌圈与试条的横向相交处的读数刻度为 MIC值。[/size][align=center][size=12px] [/size][/align][size=12px][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, Helvetica Neue, PingFang SC, Hiragino Sans GB, Microsoft YaHei UI, Microsoft YaHei, Arial, sans-serif][b]三[/b][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, Helvetica Neue, PingFang SC, Hiragino Sans GB, Microsoft YaHei UI, Microsoft YaHei, Arial, sans-serif][b]、E-试[/b][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, Helvetica Neue, PingFang SC, Hiragino Sans GB, Microsoft YaHei UI, Microsoft YaHei, Arial, sans-serif][b]验与纸片扩散法和稀释法的异同[/b][/font]1.E试验、纸片扩散法和稀释法都是常用的药敏试验，都可以用来选择抗菌药物。[/size] [size=12px]2.E试验和纸片扩散法：操作相似，但E试验更简便，可以直接读取MIC值，相比，纸片扩散法比较繁琐，需要测量抑菌圈的大小。[/size] [size=12px]E试验和稀释法：虽操作上有差异，都可以确定MIC值，但E试条是带有抗生素浓度梯度的塑料条带，在琼脂平板上形成连续的浓度梯度，相比，稀释法比较繁琐，需要连续对倍稀释形成递减的抗生素浓度梯度。 [b]注意事项[/b][/size] [size=12px]1.E试条接触琼脂后，不能移动位置，以免影响抗菌药物在琼脂中的扩散和形成的浓度梯度。[/size] [size=12px]2.E试条需要按照说明书要求进行保存。3.E试条需要正规机构购买。4.平板中E试条的个数要根据平板大小，比如说90cm平板可以插入两条，150cm可以插入6条等。[/size]

求药敏试验标准及方法 最近想作饲料药物添加剂多细菌的药敏试验，请教各位！！