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蛋白层析仪检定规程

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  • 求助:国产液相色谱层析仪

    请问一下,有没有用过国产液相色谱层析仪来纯化蛋白质的?仪器的性能如何?上海沪析好象有,但以前用的是pharmacia的AKTA,不知道国产的能不能用,不敢买,大家给提供一下意见吧

  • 离子交换层析在蛋白纯化优缺点介绍

    [font=宋体][font=宋体]离子交换层析[/font][font=Calibri](IEX)[/font][font=宋体]是一种主要基于蛋白净电荷的色谱分离方法，通常用于追踪脱酰胺和琥珀酰亚胺的形成。[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]有两种类型：阳离子交换和阴离子交换层析法。当缓冲液[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值高于此[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]时，蛋白带负电（阴离子）；当[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值低于此[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]时，蛋白带正电（阳离子）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]所有蛋白都表现出净电荷，这取决于蛋白氨基酸组成和任何共价连接的修饰。蛋白净电荷受溶解它的溶剂[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]所影响，因为溶剂会与蛋白进行氢离子交换。通常情况下，蛋白与[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]的结合必须通过反复试验来确定，使用一系列[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值的溶剂以确定蛋白保留的最佳[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]。通常溶剂的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值与[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]相差约一个[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]单位就足以实现蛋白结合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]离子交换层析优缺点介绍：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换层析法是一种常用的分离分析技术，具有分离效率高、操作简单、可靠性高、灵敏度高等优点。其优点如下：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]分离效率高：离子交换层析法可以快速、有效地分离各种生物分子和配体，对于复杂的生物样品可以获得较高的分离效果。[/font][font=宋体]操作简单：离子交换层析法的操作相对简单，不需要过多的手动操作，可以自动化进行，减少了人为误差。[/font][font=宋体]可靠性高：离子交换层析法的分离过程相对稳定，分离结果重现性好，可以用于大规模的分离分析。[/font][font=宋体]灵敏度高等优点：离子交换层析法对于低浓度的样品也能够获得较好的分离效果，对于痕量物质的分离和鉴定具有重要意义。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]但是，离子交换层析法也存在一些缺点：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]生产率低：离子交换层析法的生产率相对较低，对于大规模的分离分析可能不太适合。[/font][font=宋体]需要使用大量的缓冲液和洗脱液：离子交换层析法需要使用大量的缓冲液和洗脱液，对于环境保护有一定的影响。[/font][font=宋体]对样品条件要求严格：离子交换层析法对于样品的条件要求比较严格，对于不同性质的样品需要使用不同的离子交换剂和分离条件。[/font][font=宋体]总的来说，离子交换层析法是一种有效的分离分析方法，但是也存在一些缺点，需要根据具体的实验条件和要求进行选择和使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification]蛋白层析纯化[/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification[/font][/font]

  • 重组蛋白亲和层析分离纯化的方法

    目的要求（1）了解克隆基因表达的方法和意义。（2）了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。实验原理克隆基因在细胞中表达对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理，同时克隆基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统，其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。本实验中，携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。试剂和器材一、试剂 LB液体培养基：Trytone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, 用蒸馏水配至1000mL. 氨苄青霉素：100mg/mL 上样缓冲液：100 mM NaH2PO4, 10 mMTris, 8M Urea, 10 mM2-ME, pH8.0 Washing Buffer：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8 M Urea, pH6.3 Elution Buffer:100 mM NaH2PO4, 10 mMTris, 8M Urea, 500 mM Imidazole, pH8.0 IPTG二、器材摇床，离心机，层析柱（1′10 cm）操作方法一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白的大肠杆菌BL21菌株于5mL LB液体培养基中（含100ug/mL 氨苄青霉素），37℃震荡培养过夜。2. 转接1mL过夜培养物于100mL（含100ug/mL 氨苄青霉素）LB液体培养基中，37℃震荡培养至OD600 = 0.6 - 0.8。取10ul 样品用于SDS-PAGE 分析。3. 加入IPTG至终浓度0.5 mmol/l, 37℃继续培养1-3h.4. 12，000rpm 离心10 min, 弃上清，菌体沉淀保存于-20℃或-70℃冰箱中。二、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的分离、纯化1. NTA层析柱的准备：在层析柱中加入1mL NTA介质，并分别用8mL 去离子水，8mL上样缓冲液洗涤。2. 重组蛋白的变性裂解：在冰浴中冻融菌体沉淀，加入5mL上样缓冲液, 用吸管抽吸重悬，超声波破裂菌体，用振荡器等轻柔的混匀样品60min, 4℃ 12000rpm 离心 30 min, 将上清吸至一个干净的容器中，并弃沉淀。取10ul 上清样品用于SDS-PAGE 分析。3. 上清样品以10-15mL/h 流速上Ni2+-NTA柱，收集流出液，取10ul样品用于SDS-PAGE 分析。4. 洗脱杂蛋白：用Washing Buffer以10-15mL/h流速洗柱，直至OD280 = 0.01.分步收集洗脱液，约3-4h,取10ul洗脱开始时的样品用于SDS-PAGE 分析。5. 洗脱目标蛋白：用Elution Buffer洗柱，收集每1 mL 级分，分别取10ul样品用于SDS-PAGE 分析。

  • 亲和层析纯化蛋白原理、步骤及优缺点

    [font=宋体][font=宋体]亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子，抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原，激素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]受体蛋白、载体蛋白，外源凝集素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]多糖、糖蛋白、细胞表面受体，核酸[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等，具有高效、简单、快速的优点，是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析纯化步骤：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、捕获阶段[/font][/font][font=宋体]在样品捕获阶段，通过将速度和容量进行优化组合，使样品中的目标产物被有效的分离、浓缩和稳定化处理。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]捕获阶段一般选择亲和层析，离子交换层析或者疏水层析，通过吸附作用使样品和杂质实现分离。如果样品带有标签，第一步可以选择标签蛋白亲和层析；如果样品不带有标签，可以考虑使用离子交换[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]疏水层析。由于捕获阶段一般样品量较大，杂质较多，所以捕获阶段分辨率不是特别主要考虑的因素，可以主要考虑增加上样量和速度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、中度纯化阶段[/font][/font][font=宋体]在中度纯化阶段，应将注意力集中于将目标样品和大多数大体积的杂质分开。在中度纯化阶段，速度不是最重要的因素，因为经过捕获阶段样品体积会缩减。中度纯化阶段一般建议使用离子交换层析或者疏水层析进一步提高样品的纯度。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、精细纯化阶段[/font][/font][font=宋体]在精细纯化阶段，关注的重点就是如何达到高分辨率，从而完成最终的纯化。在此前的步骤中已经去除了大部分的污染物和杂质。如果需要达到较高的分辨率，可能会在此步骤造成一些回收率的损失。精细纯化阶段一般建议使用高分辨率的分子筛或者高分辨率的离子交换层析柱。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析纯化优缺点：[/b][/font][font=宋体][font=Calibri]1. [/font][font=宋体]亲和层析法是分离蛋白质的一种极为有效的方法，它经常只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很复杂的蛋白质混合物中分离出来，而且纯度很高。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2. [/font][font=宋体]是最有效的生物活性物质纯化方法，它对生物分子选择性的吸附和分离，可以取得很高的纯化倍数。此外蛋白在纯化过程中得到浓缩，结合到亲和配基后，性质更加 稳定，其结果提高了活性回收率。此外它可以减少纯化步骤，缩短纯化时间，对不稳定蛋白的纯化十分有利。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3. [/font][font=宋体]除特异性的吸附外，仍然会因分子的错误认别和分子间非选择性的作用力而吸附一些杂蛋白质，另洗脱过程中的配体不可避免的脱落进入分离体系。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4. [/font][font=宋体]载体较昂贵，机械强度低，配基制备困难，有的配基本身要经过分离纯化，配基与载体耦联条件激烈等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以参看义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析纯化蛋白[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac[/font][/font]

  • 用凝胶过滤层析进行蛋白纯化的流程及优势

    [font=宋体]在生物科学领域，蛋白质纯化是一项关键的技术，它对于研究生物分子的结构和功能至关重要。凝胶过滤层析是一种常用的蛋白质纯化技术，它具有分辨率高、分离效果好的优点。本文将介绍用凝胶过滤层析进行蛋白纯化的流程，包括实验准备、样品处理、层析柱的制作和上样、洗脱和收集等步骤。通过学习本文，读者可以了解凝胶过滤层析在蛋白纯化中的应用及其优缺点，为后续的实验和研究提供参考。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]用凝胶过滤层析进行蛋白纯化的流程，主要分为以下步骤：[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]准备凝胶柱：选择适当的凝胶材料和柱子，根据待纯化蛋白的分子大小选择合适的孔径。[/font][font=宋体]杂质去除：使用缓冲液预先洗脱凝胶，去除其中的杂质和阻塞物。[/font][font=宋体]样品加载：将待纯化的蛋白溶液加载到凝胶柱中，注意保持柱子的垂直姿势，防止样品泄漏。[/font][font=宋体]洗脱：使用缓冲液进行洗脱，以去除非目标蛋白和杂质。[/font][font=宋体]收集纯化蛋白：收集洗脱液，进行后续的分析或使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]以上步骤只是粗略的概述，实际操作时还需要注意许多细节和技巧。例如，选择合适的凝胶类型和柱子对纯化效果有很大影响；样品加载时需要防止样品泄漏；洗脱时需要选择合适的缓冲液等。因此，建议在进行实验前仔细阅读相关文献和资料，并请教有经验的实验人员。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]凝胶过滤层析（[/font][font=Calibri]Gel Permeation Chromatography[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]GPC[/font][font=宋体]）具有以下优点：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①操作条件温和：[/font][font=Calibri]GPC[/font][font=宋体]不需要使用有机溶剂等强烈的条件，因此对样品的活性影响较小。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②高分离效果：[/font][font=Calibri]GPC[/font][font=宋体]可以分离不同分子量的蛋白质，且分辨率较高，能够实现样品的较纯分离。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③重复性好：[/font][font=Calibri]GPC[/font][font=宋体]的层析柱可以重复使用，分离效果稳定，有利于提高实验的可重复性和数据可靠性。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]④适用范围广：[/font][font=Calibri]GPC[/font][font=宋体]可用于各种生化物质，如肽类、激素、蛋白质、多糖、核酸等的分离纯化、脱盐、浓缩以及分析测定等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在应用方面，[/font][font=Calibri]GPC[/font][font=宋体]被广泛应用于蛋白质和其他生物分子的分离纯化。例如，从混合物中分离纯化蛋白质、去除蛋白质中的盐和缓冲剂、脱去多糖和脂质等杂质、对蛋白质进行分子量测定等。此外，[/font][font=Calibri]GPC[/font][font=宋体]还可以用于分离合成多肽和基因克隆产物的纯度鉴定等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]总之，凝胶过滤层析具有温和的操作条件、高分离效果、重复性好等优点，被广泛应用于蛋白质和其他生物分子的分离纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注：义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification][b]蛋白层析纯化[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification[/font][/font]

  • 请教半制备色谱和自动层析仪的选择？用于有机物纯化后核磁用

    主要是做反应中间产物的分离和鉴定。把反应体系中的有机物提出来，进行核磁、红外等分析，确定最后的物质结构。需要的量不多，我想也就是几十毫克，顶多100毫克级别的吧。查了下文献，发现可以用半制备色谱，也有用自动层析仪的。由于对这些仪器都没有什么概念，也不知道如何选择。自动层析仪好像也就2-3万左右，我们这有一台闲置的LC100分析性液相色谱，如果要改造成半制备性，可能也要往里投钱。所以想请有经验的能否指导一二。非常感谢！

  • 亲和层析纯化蛋白原理解析

    [font=宋体]蛋白纯化介质主要应用于研究目的蛋白的结构、功用以及相互作用的和过程中。比如：在蛋白纯化过程中，由于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析法[/b][/url]的选择性和结合力较强，分辨率也高。所以，亲和层析法是一种常用的蛋白、抗体纯化方法，天地人和生物多种简单易用的亲和纯化介质，适用于批量或利用重力进行纯化，可以高效、便捷、可靠地从品中分离蛋白和抗体，为下游应用提供有力保证。[/font][font=宋体][b]亲和层析法的原理：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]亲和层析是应用生物高分子与配基可逆结合的原理，将配基通过共价键牢固结合于载体上而制得的层析系统。这种可逆结合的作用主要是靠生物高分子对它的配基的空间结构的识别。常用的生物亲和关系有酶[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]底物、底物类似物、抑制剂、激活剂、辅因子，抗体[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]抗原，激素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]受体蛋白、载体蛋白，外源凝集素[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]多糖、糖蛋白、细胞表面受体，核酸[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]互补核苷酸序列、组蛋白、核酸结合蛋白等，具有高效、简单、快速的优点，是当前最为理想的分离纯化蛋白的方法。[/font][/font][b][font=宋体][font=宋体]亲和层析的操作步骤[/font][font=Calibri]:[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在亲和层析中，蛋白在影响蛋白[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]或标签[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]与其配体之间结合的条件下被加载到柱子上。在不破坏特定相互作用但能破坏污染蛋白与固定相之间任何非特异性相互作用的条件下洗涤结合的蛋白。然后用含有竞争性分子的缓冲液或破坏所有蛋白[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]蛋白相互作用的条件洗脱结合的蛋白。竞争分子与配体结合，取代目标蛋白，这种竞争分子通常通过另一种色谱流程或透析法从目标蛋白中去除。[/font][/font][font=宋体] [/font][table][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#232323]亲和层析配体和洗脱条件[/color][/font][/b][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][td][font=微软雅黑] [/font][/td][/tr][tr][td][b][font=微软雅黑][color=#232323]需纯化的蛋白[/color][/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑][color=#232323]配体[/color][/font][/b][/td][td][b][font=微软雅黑][color=#232323]洗脱条件[/color][/font][/b][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]抗体（抗原特异性）[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]抗原肽[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]游离肽[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]多聚组氨酸标签蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]Ni2+或Co2+[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]咪唑或游离组氨酸[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]FLAG标签蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]FLAG特异性抗体[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]FLAG肽或低pH值[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]GST标签蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]还原型谷胱甘肽[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]游离谷胱甘肽[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]Myc标签蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]Myc特异性抗体[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323][font=微软雅黑]低[/font][font=微软雅黑]pH[/font][/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]抗体（类特异性）[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323][font=微软雅黑]蛋白[/font][font=微软雅黑]A、G和L或精蛋白[/font][/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]pH极端值[/color][/font][/td][/tr][tr][td][font=微软雅黑][color=#232323]DNA结合蛋白[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]肝素[/color][/font][/td][td][font=微软雅黑][color=#232323]高离子强度[/color][/font][/td][/tr][/table][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac[/font][/font]

  • 半制备色谱和自动层析仪，进行微量提取，哪个更省事？

    主要是做反应中间产物的分离和鉴定。把反应体系中的有机物提出来，进行核磁、红外等分析，确定最后的物质结构。需要的量不多，我想也就是几十毫克，顶多100毫克级别的吧。查了下文献，发现可以用半制备色谱，也有用自动层析仪的。由于对这些仪器都没有什么概念，也不知道如何选择。希望这个功能实现，比较方便，不用操作那么麻烦。因为我们的主要核心研究不是 这个有机物提取。我们主要做有机物的质谱分析的。自动层析仪好像也就2-3万左右，我们这有一台闲置的LC100分析性液相色谱，如果要改造成半制备性，可能也要往里投钱。所以想请有经验的能否指导一二。

  • 蛋白层析纯化方法的选择：从凝胶色谱到电泳的精细化策略

    [font=宋体]层析法无疑是下游处理中主要和常用的操作，因为层析法相比其他单元操作具有某些优势。例如层析法支持高分辨率的效率，可以分离分子性质非常相似的复杂粗制混合物。此外，层析法是生物工艺中遇到的稀释溶液中捕获分子的理想选择。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]柱色谱法[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]层析法[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]的原理是将一个大的蛋白池分离成许多小的蛋白池，其中一些富集了目标蛋白。虽然柱色谱法有昂贵的专业设备，但只需要基本的设备就可以了。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]在所有色谱技术中，亲和层析法占主要地位。事实上，亲和层析是最特异、最有效的蛋白纯化技术，为靶蛋白纯化提供了合理的依据。它利用了生物分子识别的原理，即生物活性大分子与亲和配体形成特定的可逆复合物的能力。随着高价值蛋白的传统纯化方案被基于亲和色谱等先进的方法所取代，人们的关注重点转向了设计和选择具有高亲和力和特异性的配体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]从用于生化表征的浓缩蛋白提取物的制备到治疗性重组蛋白的大规模生产，任何纯化过程都需要经济且足量地获得纯化蛋白。因此，下游处理面临的挑战是高产能、高分辨率和高成本效率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]亲和层析法适用于基于高特异性相互作用的生化混合物的分离。在纯化过程中可以利用具有明确特性的靶蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析法[/b][/url]是一种常见的蛋白纯化方法，该方法基于与离子交换器的亲和力分离离子和极性分子。可溶性分子在通过色谱柱时与带相反电荷的不溶性固定相结合。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]尺寸排阻色谱法，根据分子的大小和分子量分离分子。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]疏水作用层析分离表面有疏水氨基酸侧链的靶蛋白，与疏水基团相互作用并结合在一起。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白纯化的原理为：不同蛋白质的氨基酸序列及空间结构不同，导致其在物理、化学、生物学等性质上存在差异，利用待分离蛋白质与其它蛋白质性质上的差异，即可以设计出一套合理的蛋白纯化方案。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段两个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]等分开，常用的方法为硫酸铵沉淀法。精细纯化阶段的目的是把目的蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来，[b]常用的方法有：凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析等。[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]凝胶过滤层析[/b][/font][font=宋体]凝胶过滤（也叫排阻层析或分子筛）是一种根据分子大小从混合物中分离蛋白质的方法。不同蛋白的形状及分子大小存在差异，在混合物通过含有填充颗粒的凝胶过滤层析柱时，由于各种蛋白的分子大小不同，扩散进入特定大小孔径颗粒内的能力也各异，大的蛋白分子会被先洗脱出来，分子越小，越晚洗脱，从而达到分离蛋白的目的。一般来说，凝胶过滤层析柱越细、越长纯化的效果越好。凝胶过滤层析详细介绍[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]凝胶过滤层析所能纯化的蛋白分子量范围很宽，纯化过程中也不需要能引起蛋白变性的有机溶剂。缺点是所用树脂有轻度的亲水性，电荷密度较高的蛋白容易吸附在上面，不适宜纯化电荷密度较高的蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]离子交换层析[/b][/font][font=宋体][font=宋体]离子交换层析是一种依据蛋白表面所带电荷量不同进行蛋白分离纯化的技术。蛋白表面通常会带有一定的电荷，电荷的氨基酸残基均匀地分布在蛋白质的表面，在一定条件下可以与阳离子交换柱或阴离子交换柱结合。这种带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的，在改变[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]或者用逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时，离子交换剂上结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同，其与离子交换剂的结合能力也不同，所以被洗脱到溶液中的顺序也不同，从而达到分离的效果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]亲和层析[/b][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析纯化[/b][/url]是利用生物大分子物质具有与某些相应的分子专一性可逆结合的特性进行蛋白纯化的技术。该方法适用于从成分复杂且杂质含量远大于目标物的混合中提纯目标物，具有分离效果好、分离条件温和、结合效率高、分离速度快的优点。亲和层析技术可以利用配基与生物分子间的特异性吸附来分离蛋白，也可以在蛋白上加入标签，利用标签与配基之间的特异性结合来纯化蛋白。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]疏水作用层析[/b][/font][font=宋体][font=宋体]疏水作用层析是利用盐[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]水体系中样品分子的疏水基团和层析介质的疏水配基之间疏水力的不同而进行分离的一种层析方法。该法利用了蛋白的疏水性，蛋白经变性处理或处于高盐环境下疏水残基会暴露于蛋白表面，不同蛋白疏水残基与固定相的疏水性配体之间的作用强弱不同，依次用从高至低离子强度洗脱液可将疏水用作由弱至强的组分分离。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/chromatography-purification[/font][/font]

  • 亲和层析纯化蛋白注意事项有哪些？

    亲和层析纯化蛋白注意事项有哪些？

    [font=宋体]亲和层析依赖于蛋白对基质结合配体的特异性和可逆性结合。该配体可以直接与目的蛋白结合或共价连接到蛋白的标签上。亲和层析通常是最有效的纯化方法，通常用在纯化方案的早期阶段。这种特定的亲和相互作用能够捕获目标蛋白，同时去除溶液中的污染物或其他分子，并一步富集或纯化目标分子，使其与其他不能结合配体的分子分离。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]除了理论上蛋白能够通过免疫亲和层析纯化之外，亲和法仅限于具有特异结合特性的蛋白，而免疫亲和层析是所有亲和技术中特异性最强的。[font=宋体]下面是关于亲和层析纯化蛋白的注意事项！[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]一、[/font][font=Calibri]Ni[/font][font=宋体]柱进行蛋白纯化时注意点：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](1)[/font][font=宋体]避免缓冲液中有高浓度的电子供体基团，比如：[/font][font=Calibri]NH4[/font][font=宋体]，甘氨酸，精氨酸，等等；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]各种缓冲液中不能有强螯合剂，如[/font][font=Calibri]EDTA[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]EGTA[/font][font=宋体]，等等；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](3)[/font][font=宋体]各种缓冲液里不能有高浓度的强还原剂，，比如[/font][font=Calibri]DTT[/font][font=宋体]，防止二价[/font][font=Calibri]Ni[/font][font=宋体]被还原；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](4) [/font][font=宋体]不能含离子型的去垢剂，比如[/font][font=Calibri]SDS[/font][font=宋体]，防止[/font][font=Calibri]Ni[/font][font=宋体]流失；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](5)[/font][font=宋体]在破碎细胞的时候建议加入蛋白酶抑制剂，比如[/font][font=Calibri]0.1-1mM[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]PMSF[/font][font=宋体]，防止目的蛋白被降解；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](6)[/font][font=宋体]缓冲液里可以加入甘油，防止蛋白之间由于疏水相互作用而发生聚集沉淀，甘油浓度最高可达[/font][font=Calibri]50%[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]v/v[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](7)[/font][font=宋体]应避免含碳酸氢钠，柠檬酸等物质；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](8)[/font][font=宋体]缓冲液里[/font][font=Calibri]NaCl[/font][font=宋体]的浓度应在[/font][font=Calibri]300mM[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]2M[/font][font=宋体]之间；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](9)[/font][font=宋体]可加入变性剂促溶，盐酸胍（最高可[/font][font=Calibri]6M[/font][font=宋体]），尿素（最高可[/font][font=Calibri]8M[/font][font=宋体]）[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](10)[/font][font=宋体]可加入非离子型去垢剂，如[/font][font=Calibri]Triton[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]Tween[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]NP40[/font][font=宋体]等，最高[/font][font=Calibri]2%[/font][font=宋体]，可以减少背景蛋白污染和去除核酸污染；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]二、[/font] [font=Calibri]gst[/font][font=宋体]柱进行蛋白纯化时注意点[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](1)[/font][font=宋体]在细胞裂解时，加入终浓度[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]10 mM DTT[/font][font=宋体]可以显著提高[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白的结合效率， 在[/font][font=Calibri]Binding Buffer[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Elution Buffer[/font][font=宋体]中加入[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]10 mM DTT[/font][font=宋体]，可以提高蛋白纯度，但是会导致其产率降低[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]超声太剧烈或时间过长会引起蛋白变性，导致蛋白不能与介质结合。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](3)[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值低于[/font][font=Calibri]6.5[/font][font=宋体]或高于[/font][font=Calibri]8.0[/font][font=宋体]结合效率会降低，使用前需用[/font][font=Calibri]pH6.5[/font][font=宋体]～[/font][font=Calibri]8.0[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]Buffer[/font][font=宋体]如[/font][font=Calibri]PBS[/font][font=宋体]进行平衡；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](4)[/font][font=宋体]增大[/font][font=Calibri]Elution Buffer[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值。[/font][font=Calibri]Elution Buffer[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值调至[/font][font=Calibri]pH 8[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]可以提高洗脱效率而不需要增加[/font][font=Calibri]glutathione[/font][font=宋体]的浓度；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](5)[/font][font=宋体]增加[/font][font=Calibri]Elution Buffer[/font][font=宋体]的离子强度。加入[/font][font=Calibri]0.1[/font][font=宋体]–[/font][font=Calibri]0.2 M NaCl[/font][font=宋体]能提高洗脱效率；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](6)Elution Buffer[/font][font=宋体]中加入非离子型变性剂。非特异性的疏水作用可能会阻碍[/font][font=Calibri]GST[/font][font=宋体]融合蛋白从介质上增溶和洗脱。加入[/font][font=Calibri]0.1% Triton X-100 or 2% N-octylglucoside[/font][font=宋体]可以显著增加洗脱效率[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]三、[/font] [font=Calibri]proteinA[/font][font=宋体]柱进行蛋白纯化时注意点[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri](1)[/font][font=宋体]介质的选择[/font][font=Calibri]A,G or [/font][font=宋体]其他，其结合能力的选择[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](2)[/font][font=宋体]上样流速尽量小，让[/font][font=Calibri]Protein G[/font][font=宋体]和抗体有充分的结合时间[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](3)[/font][font=宋体]在低[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值洗脱后，快速中和。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](4)[/font][font=宋体]长时间保存加入[/font][font=Calibri]0.02-0.05[/font][font=宋体]％叠氮钠；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](5)[/font][font=宋体]加入[/font][font=Calibri]10%[/font][font=宋体]甘油，可有效防止疏水作用引起的聚集。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri](6)[/font][font=宋体]抗体纯度不够，杂蛋白含量高，易引起蛋白的沉淀。 [/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]四、亲和层析配体和洗脱条件[/b][/font][align=center][font=宋体][b][img=亲和层析配体和洗脱条件,690,224]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/09/202309061557423472_5868_5907840_3.png!w690x224.jpg[/img][/b][/font][/align][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析纯化蛋白[/b][/url]参看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac[/font][/font]

  • 【分享】凝胶层析法测定蛋白质分子量

    一、实验目的1. 了解凝胶层析的原理及其应用。2. 通过测定蛋白质分子量的训练，初步掌握凝胶层析技术。二、实验原理凝胶层析又称排阻层析，凝胶过滤，渗透层析或分子筛层析等。它广泛地应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等，而测定蛋白质的分子量也是它的重要应用之一。凝胶是一种具有立体网状结构且呈多孔的不溶性珠状颗粒物质。用它来分离物质，主要是根据多孔凝胶对不同半径的蛋白质分子（近于球形）具有不同的排阻效应实现的。亦即它是根据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。分离原理参见“理论部分的凝胶层析一节”。对于某种型号的凝胶，一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外，只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外；而一些小分子不被排阻，可自由扩散，渗透进入凝胶内部的筛孔，尔后又被流出的洗脱液带走。分子越小，进入凝胶内部越深，所走的路程越多，故小分子最后流出柱外，而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间，只能进入一部分凝胶较大的孔隙，亦即部分排阻，因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶层析后，分子便按照从大到小的顺序依次流出，达到分离的目的。凝胶层析分离原理示意动画。对于任何一种被分离的化合物在凝胶层析柱中被排阻的范围均在0～100%之间，其被排阻的程度可以用有效分配系数Kav（分离化合物在内水和外水体积中的比例关系）表示，Kav值的大小和凝胶柱床的总体积（Vt）、外水体积（V0）以及分离物本身的洗脱体积（Ve）有关：Kav = (Ve－V0)/(Vt－V0) ----------- (1)在限定的层析条件下，Vt和V0都是恒定值，而Ve是随着分离物分子量的变化而改变。分子量大，Ve值小，Kav值也小。反之，分子量小Ve值大，Kav值大。有关凝胶层析柱中凝胶自身（基质）体积（Vg）、外水体积（V0）、内水体积（Vi）及柱床总体积（Vt）的参见示意图。凝胶层析柱中的几种层析峰。有效分配系数Kav是判断分离效果的一个重要参数，同时也是测定蛋白质分子量的一个依据。在相同层析条件下，被分离物质Kav值差异越大，分离效果越好。反之，分离效果差或根本不能分开。在实际的实验中，我们可以实测出Vt、V0及Ve的值，从而计算出Kav的大小。对于某一特定型号的凝胶，在一定的分子量范围内，Kav与logMw (Mw表示物质的分子量) 成线性关系：Kav ＝－b logMw + C --------- (2)其中 b,C为常数。同样可以得到：Ve ＝－b'logMw + C' --------- (3)其中 b', C'为常数。即 Ve 与 logMw 也成线性关系。我们可以通过在一凝胶柱上分离多种已知分子量的蛋白质后，并根据上述的线性关系绘出标准曲线，然后用同一凝胶柱测出其它未知蛋白的分子量。三、器材与试剂（一）器材1. 玻璃层析柱（(20mm×60cm）2. 恒流泵（或下口恒压贮液瓶）3. 自动部分收集器4. 紫外分光光度计5. 100ml试剂瓶6. 1000ml量筒7. 250ml烧杯8. 50ml、100ml烧杯9. 10ml（或5ml）刻度试管（二）试剂1. 标准蛋白（1）牛血清白蛋白：Mw=67,000（上海生化所）（2）鸡卵清清蛋白：Mw=45,000（美国SIGMA公司）（3）胰凝乳蛋白酶原A：Mw=24,000（美国SIGMA公司）（4）溶菌酶：Mw =14,3002. 未知蛋白质样品：由实验室准备3. 0.025M KCl－0.1M HAC(乙酸)（洗脱液1000ml）4. 蓝色葡聚糖－2000

  • 蛋白质纯化方法详解——离子交换层析步骤及作用

    [font=宋体]离子交换层析是一种在生物化学和生物技术领域中广泛使用的分离和纯化技术。它基于离子间的相互作用，特别是离子与固定在层析介质上的带电基团之间的相互作用，从而实现对混合物中不同离子的分离。以下将详细介绍离子交换层析的步骤及其作用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、步骤[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、预处理：在开始离子交换层析之前，通常需要对样品进行预处理，以去除大颗粒杂质和不需要的成分。这通常包括离心、过滤和可能的浓缩步骤。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、选择合适的离子交换剂：离子交换剂是层析过程的核心。根据待分离离子的性质（如电荷、大小和与交换剂的亲和力）选择合适的离子交换剂。常见的离子交换剂包括阳离子交换剂和阴离子交换剂。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、平衡离子交换剂：在将样品加载到离子交换柱之前，需要用适当的平衡溶液（通常是水或盐溶液）冲洗离子交换剂，以去除可能存在的杂质并确保离子交换剂处于最佳状态。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、加载样品：将预处理过的样品加载到离子交换柱上。样品中的离子会与离子交换剂上的带电基团发生相互作用。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]、洗脱：用洗脱液（通常是盐溶液，其浓度逐渐增加）将结合的离子从离子交换剂上洗脱下来。这一步骤是离子交换层析中最为关键的一步，因为它决定了不同离子之间的分离效果。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]、收集和分析：收集洗脱下来的各个组分，并进行分析，以确定每个组分中包含的离子种类和浓度。常见的分析方法包括电导率测量、紫外[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]可见光谱和质谱等。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]7[/font][font=宋体]、后处理：根据需要对收集到的组分进行进一步的处理，如浓缩、脱盐或重新配制等。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]二、作用[/font][/b][font=宋体]离子交换层析在生物化学和生物技术领域有着广泛的应用，主要作用包括：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、分离和纯化蛋白质：离子交换层析可用于从复杂的混合物中分离和纯化蛋白质，这对于后续的生物化学研究和药物开发至关重要。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、去除杂质：离子交换层析能够有效地去除样品中的离子杂质，提高样品的纯度。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、样品制备：在进行其他分析或实验之前，离子交换层析可用于样品的制备和预处理。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、研究蛋白质与离子的相互作用：通过离子交换层析，可以研究蛋白质与不同离子之间的相互作用和亲和力，这对于理解蛋白质的生物学功能和调控机制具有重要意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]三[/font] [font=宋体]、应用领域[/font][/font][/b][font=宋体]离子交换层析法在许多领域得到广泛应用：[/font][font=宋体]●生物制药：用于药物蛋白质的纯化，确保生物制剂的质量和稳定性。[/font][font=宋体]●生物学研究：在分离和纯化特定电荷性质的蛋白质时被广泛使用，尤其在基因表达和蛋白质互作研究中。[/font][font=宋体]●食品工业：用于提取和纯化食品中的蛋白质，改善食品的质地和口感。[/font][font=宋体]●环境监测：可用于从环境样品中分离和检测特定蛋白质，例如水体中的生物标志物。离子交换层析法凭借其良好的选择性和高效性，是生物分离和纯化领域不可或缺的重要工具。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析蛋白纯化[/b][/url][/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • His-Tag重组蛋白亲和层析标准操作规程（SOP）

    材料琼脂糖凝胶介质镍亲和柱紫外检测仪蛋白电泳装置及夹子、玻璃板、灌胶支架、缓冲液槽等附件5 ml 注射器0.45 μm 滤器超声破碎仪试剂1. 结合缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，10 mM 咪唑，pH=8.02. 洗脱缓冲液：20 mM Tris-HCl，150 mM NaCl，不同梯度浓度的咪唑，pH=8.03. 20%乙醇4. 三蒸水5. 透析液：20 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH=8.0注：纯化所用所有试剂均用三蒸水进行定容，溶液配完后均用0.22 μm 滤膜经滤器过滤，4℃保存。在实验中，可以先配制相应pH值的高浓度母液，在使用时进行稀释。如：（1）1 M Tris-HCl，pH=8.0称取60.57 g Tris溶于400 mL 三蒸水中，充分溶解，调pH至8.0，补加三蒸水定容至500 mL。用0.22 μm 滤膜过滤，置于玻璃瓶中4℃保存。（2）2.5 M NaCl，pH=8.0称取36.53 g NaCl溶于200 ml 三蒸水中，充分溶解，调pH至8.0，补加三蒸水定容至250 mL。用0.22 μm 滤膜过滤，置于玻璃瓶中4℃保存。（3）1 M 咪唑，pH=8.0称取17.02 g 咪唑溶于200 mL 三蒸水中，充分溶解，调pH至8.0，补加三蒸水定容至250 mL。用0.22 μm 滤膜过滤，置于玻璃瓶中4℃保存。步骤样品制备将经过IPTG诱导的菌液离心，7000 rpm，10 min。收集菌体细胞，用PBS漂洗两遍，再用纯化所用的平衡液漂洗一遍，最后用平衡液重悬（35 mL/g 菌体沉淀），将收集好的菌液超声破碎，直至澄清，13000 rpm，离心10 min，取上清，用0.45 μm 滤器过滤。纯化过程1. 准备将保存于4℃的试剂开盖超声脱气40 min，平衡到纯化的温度。2. 装柱装柱前先在柱子内加满三蒸水，打开开关至最大流速，使三蒸水快速流过柱子以去除柱子中的气泡。将凝胶填料从4℃冰箱内取出，用吸管将上层20%乙醇吸走，加入三蒸水轻轻重悬，缓缓加入柱内，加满三蒸水，打开开关至最大流速，保持柱子垂直，使凝胶压紧，必要时可以用注射器从出口轻吸，给凝胶一定负压，使凝胶压的更紧密。3. 平衡提前打开紫外检测仪，调节波长至280 nm，灵敏度为100%，预热。向柱内加满结合缓冲液，打开开关，使液体匀速向下流（3 mL/min）。此时，调节光量，使吸光值保持100稳定，此时为调满。待吸光值稳定后，调节灵敏度为0.5 A/0.2 A，使吸光值保持0稳定，此时为调基线。4. 上样将提前处理好的样品加入20 mM 咪唑，有时可根据不同蛋白特性适当提高上样咪唑浓度，以减少非特异性结合。沿壁缓缓加入柱内，尽量避免气泡的产生。打开开关，保持尽量较低的流速（1 mL/min），待吸光值大于20时，用50 ml 离心管接流出的蛋白溶液，称流穿。流穿内的蛋白应为未与凝胶结合的菌体蛋白。5. 洗涤沿壁缓缓加入结合缓冲液，打开开关，走大于10柱体积的结合缓冲液，流速3 mL/min。使吸光值恢复到基线或接近于基线水平。6. 洗脱初次纯化一个新的重组蛋白一般选择40 mM、60 mM、80 mM 咪唑作为流洗浓度，主要洗脱非特异结合在凝胶中的菌体蛋白，100 mM、200 mM、300 mM 咪唑作为洗脱浓度，主要洗脱目的蛋白，500 mM 咪唑洗脱与凝胶结合较顽固的蛋白。将每个洗脱浓度的蛋白进行SDS电泳检测，确定洗脱杂蛋白以及目的蛋白的最佳浓度，作为以后洗脱条件。每个浓度洗涤（脱）时，都要使吸光值达到一个稳定的最低值。一般作为流洗的洗涤液尽量多一些。7. 平衡最后洗脱结束后，加入结合缓冲液，直至吸光值平衡基线或接近于基线水平。8. 保存向柱内缓缓加入5倍凝胶体积的20%乙醇，使凝胶充分浸在乙醇中。最后，用乙醇慢慢重悬凝胶，取出置于干净的离心管中，用乙醇冲洗柱子几次，使凝胶的损失达到最小。做好使用记录，4℃保存凝胶。9. 透析（1）将存放于4℃的透析袋从水中（用于煮透析袋的去离子水）取出，戴一次性手套，去掉水，将一头折起，用封闭夹封闭。透析液试漏。（2）倒掉透析液，将不同梯度洗脱的蛋白加入透析袋内，上口折起，用封闭夹封闭。检查不漏后放入2 L 透析液中。（3）用玻璃棒将透析袋固定在烧杯内，以防止透析袋随透析液转动，影响透析效果，4℃透析，两小时后更换透析液，然后透析过夜。10. 电泳检测上样、流穿、洗涤、各个梯度洗脱的蛋白，每个样品取20 μL，加入等量2×SDS-buffer，沸水煮样8 min，进行SDS-PAGE电泳检测。常温染色过夜，为避免染色时污染，染色液仅回收一次。蛋白浓度测定每纯化出的蛋白在保存之前都要进行蛋白浓度测定方法如下：取5 mL 考马斯亮蓝G-250置于干净试管中，空白对照加入100 μL 0.9%NaCl，测定组加入适量（考马斯亮蓝G-250由棕红色变为蓝色为止）未知蛋白，用0.9%NaCl补齐到100 μL，混匀，放置5 min。用721型分光光度计（需提前预热20 min）测定其595 nm的吸光值（玻璃比色皿，用空白对照调0），带入标准曲线，得出蛋白浓度。做好标记，保存于-20℃。蛋白浓缩若纯化出的蛋白浓度过低，在浓度测定之前要使用超滤杯或硫酸铵沉淀的方法对其进行浓缩。1. 超滤杯使用使用前先将超滤杯用三蒸水涮洗三遍，然后在超滤杯内加入三蒸水，3000 rpm，离心10 min，目的将滤膜彻底清洗干净。倒掉三蒸水，加入待浓缩的蛋白样品，3000 rpm，离心，直至达到所需体积后停止离心，将浓缩后的蛋白样品取出，进行电泳检测和蛋白浓度测定。超滤杯如同使用前用三蒸水涮洗三遍，加入三蒸水，3000 rpm，离心10 min。最后加入20%乙醇，是滤膜浸泡在乙醇中，4℃保存。2. 硫酸铵沉淀法蛋白溶液与饱和硫酸铵按1：1比例混合，4℃放置30 min，13000 rpm离心10 min，弃掉上清，沉淀的蛋白用500 μL PBS溶解（可根据沉淀的量适当增加PBS用量），溶解后用透析液透析。

  • 【求助】请教：疏水层析和反相层析相比对蛋白质吸附能力较弱

    请教：疏水层析和反相层析相比对蛋白质吸附能力较弱？？原文大意如下——疏水等系和反相层析的原理都是利用疏水作用分离蛋白质、多肽的但是二者使用的介质和流动相有一定的差别其中疏水层析介质的极性反相层析介质的极性所以疏水层析的介质对于蛋白质的吸附能力较弱 可以使用温和的盐水就可以洗脱但是反相层级的介质极性较弱 需要更强的有机溶剂洗脱之【问题是——蛋白质应该是水溶性的啊？ 应该是和极性更强的疏水层析介质接近 继而疏水层析介质对蛋白质的吸附能力更强？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？】 [em0808]

  • 【第三届原创参赛】掰掰我的一次凝胶过滤层析初步分离金属硫蛋白

    【第三届原创参赛】掰掰我的一次凝胶过滤层析初步分离金属硫蛋白

    [color=#d801e5][color=#dc143c][size=2]维权声明：本文为lily002原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的，均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。[/size][/color]大家好，我是凝胶色谱一名新手，以前常常在咱们论坛中学习和下载资料，看到论坛中轰轰烈烈的第三届原创大赛开始了，还有各位达人们的攻略、帮助，心里有点小激动呢~~~于是就拿出自己的一些实验和研究的东东来与大家分享！！说实话拿出来有点小担心，毕竟自己的水平不高拿出来有点献丑了！本着分享第一荣誉第二的原则，就硬着头皮绣出来了！！也希望大家轻拍哦！[/color][align=center][color=#d40a00]===================================Show Time========================================[/color][/align] 我在本次试验中研究的是金属硫蛋白(Metallothionein, MT)又名金属组氨酸甲基内盐，是分子量较小，富含半胱氨酸的非酶蛋白质，其内含有镉、铜、锌、汞等金属元素，不含芳香组胺酸残基。MT与微量元素代谢、重金属解毒、自由基清除以及应急反应有关。是一种广泛存在于各种组织的蛋白质。这些蛋白具有很高的结构稳定性。分析不同的动物和不同的组织器官，发现MT氨基酸组成差异很小。在真菌和动物体内，MT能够缓解镉、汞等有害元素的毒害并在不同应激条件保护机体，被认为是和生物体解毒有关的蛋白，在脊椎动物，MT则被更多地认为和锌的储藏和代谢有关。最显著的功能是可消除体内过量的自由基、重金属及有害物质的污染。在如今环境污染日趋严重的情况下，这种能增强自 身抗污染能力的产品，将越来越为人们所需要。香菇多糖、糖蛋白及 其衍生物具有较强的保肝、抗衰老、增食欲等功效，它是一种有效的免疫激活剂和调节剂，能通过提高机体免疫功能，抑制癌细胞的生长 和扩大。　　聚丙烯酰胺是以丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺聚合而成的具有三维网状结构的凝胶，其孔径可调，性质稳定，无色透明。用聚丙烯酰胺凝胶作为电泳的支持物分离蛋白，具有分辨力高、酶活性影响小、显带效果好等优点，因此应用广泛。　　近年来，河流湖泊及近海海域不同程度受到重金属的污染，镉被美国毒理委员会列为第6位危及人体健康的有害物质。镉(Cd)是人体非必需元素，在自然界中常以化合物状态存在，一般含量很低，在正常环境下，不会影响人体健康。镉被人体吸收后在体内形成了镉硫蛋白，选择性地储存于肾、肝中，其中肾脏可吸收进入人体近1/3的镉，是镉 中毒的“靶器官”。其它如脾、胰、甲状腺和毛发等也有一定量的积蓄。镉在体内可与含羟基、氨基、硫基的蛋白质分子结合，使许多酶系统受到抑制，从而影响到肝、肾器官中酶系统的正常功能。由于镉损伤肾小管，病者出现糖尿、蛋白尿和氨基酸尿，特别是使骨骼的代谢受阻，造成骨质酥松，萎缩，变形等症状。　　本实验通过体外暴露氯化镉染毒法处理长江华溪蟹，对华溪蟹的蛋白进行SDS-PAGE电泳，得到相应的分子量，并通过紫外分光光度计对华溪蟹体内的金属硫蛋白进行鉴定。 [b]一、实验材料和仪器[/b] 1.材料：华溪蟹于家门口的水场市场购回，先在实验室的饲养池中用清水驯养数天，不喂任何食物，选取大小均等、重量相似的个体进行染毒处理。 2.部分主要仪器：高速冷冻离心机Centrifuge 5804R(eppendorf)，高速台式离心机 Centrifuge 5415D(eppendorf)，恒温水浴锅，循环水式多用真空泵，超低温冰箱MDF-U50V(日本SANYO)，国产凝胶柱(上海华美实验仪器厂,26*100)，SephadexG-50(Amerchsham)，AKTA Prime蛋白纯化系统(Amersham)，UV-2102 PC型紫外可见分光光度计(UNICOTM) [b]二、 实验过程：[/b]　　1.体外镉暴露法染毒　　因为镉对金属硫蛋白有高度的诱导作用，所以在的、高镉环境中可以诱导华溪蟹的金属硫蛋白的产生。[14]　　通过查阅资料及进行预实验，最终确定染毒的镉溶液浓度为58mg/l染毒时间为30h提取组织为肝胰腺。实验华溪蟹的解剖，用镊子将华溪蟹从染毒缸中取出，用清水冲洗干净，在解剖盘中先将其附肢剪掉，然后打开蟹壳，腮为半片状，分布在两侧，可以很轻易的取出，卵巢分布在中后部，颜色为亮黄色，颗粒状，用镊子可以方便取出，肝胰腺在卵巢和心脏的下面，将心脏剥离后向下夹入便可夹出整个肝胰腺，其呈暗黄色，絮状，从华溪蟹的螯中取出肌肉，先将其剪开，再用手术刀从螯壁上刮下肌肉组织，其半透明粘性大。　　2. MT粗提取的制备　　取染毒华溪蟹的肝胰腺，按每克湿组织用3ml0.02mol/lTris-Hcl缓冲液(pH8.6)在玻璃研钵中充分匀浆，将匀浆液放入-800C的冰箱中保存备用。　　3. Sephadex G-50凝胶柱的制备　　（1）凝胶柱的清洗　　将购买国产凝胶柱(26*100)用70%浓盐酸浸泡过夜，用洗衣粉水浸泡，冲洗，最后用去离子水冲洗干净。　　（2）凝胶填料的溶胀　　商品凝胶是干燥的颗粒状固体,将凝胶均匀铺洒在干净并且干燥的烧杯内,缓缓家入超纯水,使其溶胀.待凝胶体积超过烧杯容积1/2后,将一般凝胶转移至另一干净烧杯,防止凝胶溢出.用封口膜封住烧杯放2d,然后将烧杯放入真空泵抽滤2d,排除凝胶中的气泡.　　(注意在凝胶溶胀和处理凝胶悬浮液的整个过程中,不能进行激烈的搅拌,这样会使凝胶颗粒破碎而产生碎片,以至影响层析的流速,在处理凝胶时,严禁使用电磁搅拌,它会象磨一样,在很短时间内把凝胶碾碎.)　　（3）凝胶柱的装填　　把凝胶柱竖直固定好(有滤膜的一端为底部),用Ph8.6Tris-Hcl缓冲液润洗后加入柱体积1/3Tris-Hcl缓冲液,将少量凝胶转移至小烧杯中家Tris-Hcl缓冲液,用玻璃棒轻轻搅拌均匀,并观察凝胶是否有不均匀处(若有不均匀处,可将不均匀凝胶重新搅拌使重新沉降),然后用玻璃帮引流到凝胶柱内并不停地轻轻搅拌使凝胶均匀沉降,直至凝胶沉降至柱顶约10cm处,加Tris-Hcl缓冲液至柱顶,盖好柱顶螺帽,并将凝胶柱与蛋白纯化系统连接好,用Tris-Hcl缓冲液反复洗脱.　　（4）Sephadex G50 凝胶层析分离纯化MT　　将装着已提取的染毒华溪蟹组织的EP管从冰箱中取出解冻,把组织倒入研钵加入1.5mlTris-Hcl缓冲液,充分研磨,将样品转至5mlEP管中,把EP管插在漂浮板上,放入80℃恒温水浴锅5min,取出后抽去表层脂肪,上样.　　（5）洗脱峰紫外光谱扫描分析　　（6）洗脱峰SDS-PAGE分析　　[b]三、实验结果与分析[/b]　　1.SephdexG50凝胶层析分离纯化MT[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/07/201007291845_233096_1917139_3.jpg[/img]　　图1为匀浆热沉淀处理上样经SephadexG-50凝胶柱层析图,洗脱液为0.01mol/L Tris-Hcl缓冲液,pH为8.60,洗脱速度为0.5ml/min,在254nm处检测吸光度,结果显示,层析后样品分为Ⅰ,Ⅱ两个峰.　　2. 洗脱峰紫外光谱扫描分析　　由于金属硫蛋白中不含有芳香族氨基酸,所以在紫外不能形成280nm特征光谱.但是由于金属硫蛋白在二级结构中形成特征性的巯基金属簇,而导致在紫外光谱中出现对应于金属簇结构的特殊吸收峰,吸收峰的位置主要决定于金属的种类,如:镉硫金属簇的吸收位于250nm附近,而锌硫金属簇的吸收峰位于225nm附近. 将接收峰Ⅰ,Ⅱ分别在190nm-300nm扫描。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/07/201007291848_233097_1917139_3.jpg[/img]　　图2，3分别为匀浆热沉淀处理上样洗脱峰Ⅰ,Ⅱ稀释8倍后在190nm-300nm间紫外吸收光谱.结果显示,洗脱峰Ⅰ在280nm处都有一个高的吸收峰,而洗脱峰Ⅱ在250nm附近具有一个高的吸收峰,在280nm处急剧下降,据此分析MT主要存在于峰Ⅱ中.　　3.洗脱峰SDS-PAGE分析[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/07/201007291856_233100_1917139_3.jpg[/img]　　图4，5为匀浆上样后洗脱峰SDS-PAGE电泳图谱,如图8所示峰2峰3蛋白浓度过低,经冷冻干燥浓缩再次上样,图9显示MT存在于峰Ⅱ中但未能得到完全纯化,还需进一步上离子交换柱层析分离.

  • 胰蛋白酶原 标准操作规程(SOP)

    名称：胰蛋白酶原 标准操作规程(SOP)关键词：胰蛋白酶原目的：用于急性胰腺炎检查。**科胰蛋白酶原 标准操作规程(SOP)实验室名称 项 目 编 号 制定日期急 诊 室 胰蛋白酶原 JZ022 20040620手工法。标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并根据下述人员批准签字：专业主管，科主任。采用免疫层析法，包括两种人胰蛋白酶原-2抗体。一种结合在蓝色的乳胶粒子上，另一种被固定在膜上，捕捉与抗原抗体复分 物并与之结合，显示阳性结果。由上海基因生物技术公司技术公司提供。 新鲜尿液。1、让贮存罐与尿液达到室温。从贮存罐中取出所需数目的试纸条，紧闭贮存罐。不要接触浸渍区，在试纸条上做好标记；2、将浸渍区浸入尿液，保持到液体进入反应区，液面不要超过黄色区域，从标本溶液中取出试纸条，水平放置。五分钟后读结果，若反应区出现：两条蓝线 一条为阴性；无蓝线时为检测失效。正常人应为阴性。1、正常人为阴性。2、急性胰腺炎时尿液中的胰蛋白酶原-2抗原明显升高，可早期诊断。1、不要让试纸条留在标本中，吸收的量过大或过小检测将不准确。2、不要超过黄色浸渍区。试纸条上面部分不能弄湿。3、不要使用已变湿的试纸条。4、如果使用前反应区有蓝色，请不要使用。5、如果没有出现质控线表示结果无效。 操作人员 部门主管 质量负责人姓 名日 期

  • 中药分析用单标线容量瓶检定规程

    单标线容量瓶检定规程（一）1 说明1.1 本规程适用于1ml、2ml、5ml、10ml、25ml、50ml、100ml单标线容量瓶的检定。1.2 本规程系参照国家技术监督局JJG196—90“常用玻璃量器检定规程”制订。1.3 检定的原理采用衡量法。衡量法是用天平称量单标线容量瓶中纯水的质量，然后按照该温度下纯水的密度，算出单标线容量瓶的容积。2 检定项目和技术要求2.1 单标线容量瓶的玻璃应清澈、透明。2.2 单标线容量瓶应具有下例标记：2.2.1 厂名和商标2.2.2 标准温度（20℃）2.2.3 标称总容量与单位 xx ml2.3.4 准确度等级 A或B2.3 单标线容量瓶的瓶口与瓶塞之间的密合性要求 当水注入至标线，将瓶塞塞紧，用手指压紧瓶塞，上下颠倒10次，每次颠倒时，在倒置状态下至少停留10S，结束后，用吸水纸在塞与瓶口周围擦看，不应有水渗出。2.4 容量允差、分度线宽度均应符合下表之规定。单标线容量瓶标称总容量（ml）125102550100容量允差（ml）A±0.010±0.015±0.020±0.020[align=cent

  • 离子交换层析分离纯化蛋白质原理、介质及具体步骤

    [font=宋体][b]离子交换层析基本原理：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换层析法是蛋白纯化的一种方式，通过带电的溶质分子与离子交换层析介质中可交换离子进行交换，从而达到分离纯化的目的。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]离子交换层析法主要依据电荷间的相互作用，利用带电分子中电荷的微小差异而进行分离，具有较高的分离容量。几乎所有的生物大分子都是极性的，都可使其带电，所以离子交换层析法的应用很广泛。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]离子交换层析的介质：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]有许多离子交换介质都已经商品化，但不存在一种神奇的介质其最适合各种蛋白质的纯化。选择离子交换介质的标准包括应用的特异性需要、样品成分的等电点和分子大小（即目的蛋白和污染物），以及可得到的装备（如泵和柱子）。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]首先需要选择阴离子或阳离子介质，如果目的蛋白的等电点已知，选择阴离子介质且操作的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]高于目的蛋白的[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]，或选择阳离子介质且操作[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]低于目的蛋白的[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]。如果靶蛋白的[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]未知，开始之前最好先测定它。最佳操作[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]可根据经验确定。因为大多数蛋白质的[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]低于[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]，选择阴离子交换和操作[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]为[/font][font=Calibri]8.5[/font][font=宋体]开始是合理的，然后根据估计结果和优化条件。知道蛋白质溶液中污染物[/font][font=Calibri]pI[/font][font=宋体]和结合特征也是有用的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]离子交换层析应用：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]离子交换层析法是生物纯化中应用最广泛的色谱模式，应用于大多数下游处理平台。在[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]中结合目标蛋白、洗脱柱子和洗脱目标蛋白的典型方案被称为“结合[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]洗脱模式”，经常应用于中间纯化步骤如抗体的下游处理。阴离子交换层析是大多数血浆蛋白纯化平台的组成部分如凝血因子[/font][font=Calibri]VIII[/font][font=宋体]的纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]离子交换层析（[/font][font=Calibri]IEX[/font][font=宋体]）具体操作步骤：[/font][/b][/font][font=宋体]平衡[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]第一步是固定相的平衡。当达到平衡时，所有的固定相带电基团都与可交换的平衡离子结合，如氯或钠。选择起始缓冲液的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]和离子强度，以确保目标蛋白与介质的结合。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]上样和清洗[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第二步的目标是结合目标分子，并清洗出所有未结合的物质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]洗脱[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]随着离子强度的增加，在选定的[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值下净电荷最低的蛋白将最先从柱子上洗脱。同样地，在一定[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值下电荷最高的蛋白被保留得最牢固，并且在最后被洗脱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]再生[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]最后用高离子强度的缓冲液进行最后一次清洗，使色谱柱再生，并去除任何仍结合的分子。然后在开始下一次运行之前，色谱柱需要在起始缓冲液中重新平衡。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析蛋白纯化[/b][/url]详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec[/font][/font]

  • 核酸蛋白检测仪应用和原理

    核酸蛋白检测仪是层析分析的主要装置，核酸蛋白检测仪配上层析柱、恒流泵、部分收集器、层析谱分析系统（根据需要选配）和电脑打印设备即构成一套完整的核酸蛋白检测仪分离层析系统。它是当今从事生命科学研究、药物测定、化工、食品科学及医学研究等行业的现代分析实验仪器。核酸蛋白检测仪分析系统广泛用于工业、农业、科研和大专院校的科学研究和教学实验。其原理是根据物质（样品）对紫外光有明显吸收的特征，实现对样品成份含量比对分析，以便进行样品蛋白、核酸物质识别检测和含量测定。在生化分析、环保科学、食品研究、毒理研究、新药开发等领域中对核酸、蛋白检测、纯化和提取提供了一种独特的分析手段。

  • [分享]分析型扫描电子显微镜检定规程等 5个检定规程!

    分析型扫描电子显微镜检定规程地址: http://www.instrument.com.cn/download/shtml/012567.shtml滤光光电比色计检定规程地址:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/012569.shtml单光束紫外-可见分光光度计检定规程地址:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/012568.shtml紫外和可见吸收光谱方法通则 地址:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/012566.shtml阿贝折射仪检定规程 地址:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/012563.shtml

  • 铁蛋白，C反应蛋白，心肌三项检测试剂

    北京易斯威特生物医学科技有限公司产品介绍 铁蛋白（FER）检测试剂盒 （胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测FER的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的铁蛋白，适用于急性贫血，肝脏损伤等相关疾病的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.血清铁蛋白是血液去铁蛋白和铁核心Fe3+形成的复合物。是检查体内铁缺乏的最灵敏的指标。血清铁蛋白测定在临床上常用于缺铁性贫血的诊断。简单 便捷 快速 灵敏 环保 肌红蛋白/肌酸激酶/心肌肌钙蛋白I，心梗三项检测试剂盒（胶体金法）1.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的肌红蛋白，肌酸激酶，心肌肌钙蛋白I检测，用于临床快速诊断急性心肌梗塞（AMI）.2.最快速准确的辅助诊断方法。3.肌红蛋白：是心肌梗死的标志物，增高表示冠状动脉堵塞引起心肌严重缺血造成心肌梗死；4.肌钙蛋白：是一种心肌蛋白，升高见于心肌损伤，多见于心肌梗死，也见于心肌炎和心肺复苏后患者，特异性较高，阳性的话一般可确诊心肌损伤，阴性的话不能排除，因为肌钙蛋白的升高出现在心肌梗塞3-6小时之后，之前可能出现阴性。肌酸激酶敏感性较高，特异性较低，升高也出现在心梗3-8小时之后。5.肌酸激酶：主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织中也存在，是参与体内的能量代谢的一种酶。在临床上主要用于诊断心肌梗塞。心肌梗塞患者发病后2－4小时，血液中此酶活动即开始升高。比血清中谷草转酸酶和乳酸脱氢酶的活力变化都出现得早。 简单 便捷 快速 灵敏 环保 C反应蛋白（CRP）检测试剂盒（胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测CRP的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的C反应蛋白，适用于感染，炎性疾病，组织损伤，手术创伤及组织坏死等病变情况的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断简单 便捷 快速 灵敏 环保

  • 【分享】化学计量检定规程目录

    化学计量检定规程目录化学计量检定规程目录：JJG 940-1998 催化燃烧型氢气检测仪 JJG 945-99 原电池法气体氧分析器 JJG 880-94 浊度计 JJG 681-90 色散型红外分光光度计 JJG 682-90 双光束紫外可见分光光度计 JJG 914-96 六氟化硫检漏仪 JJG 119—1984 实验室PH（酸度）计检定规程 JJG 154—1979 标准毛细管粘度计检定规程 JJG 155—1991 工作毛细管粘度计检定规程 JJG 178—1996 可见分光光度计检定规程 JJG 179—1990 滤光光电比色计检定规程 JJG 214—1980 滚动落球粘度计试行检定规程 JJG 215—1981 旋转粘度计试行检定规程 JJG 228—1993 静态激光小角光散射光度计检定规程 JJG 291—1999 覆膜电极溶解氧测定仪检定规程 JJG 342—1993 凝胶色谱仪检定规程 JJG 365—1998 电化学电极气体氧分析器检定规程 JJG 375—1996 单光束紫外-可见分光光度计检定规程 JJG 376—1985 电导仪试行检定规程 JJG 390—1985 船用pH计检定规程 JJG 392—1996 感应式盐度计检定规程 JJG 395—1997 定碳定硫分析仪检定规程 JJG 412—1986 水流型气体热量计试行检定规程 JJG 463—1996 热台法熔点测定仪检定规程 JJG 464—1996 生化分析仪检定规程 JJG 499—1987 精密露点仪试行检定规程 JJG 500—1987 完全吸收式电解法微量水分分析仪试行检定规程JJG 520—1988 粉尘采样器检定规程 JJG 535—1988 氧化锆氧分析器试行检定规程 JJG 536—1998 旋光仪及旋光糖量计检定规程 JJG 537—1988 荧光分光光度计试行检定规程 JJG 538—1988 荧光光度计试行检定规程 JJG 547—1988 尘埃粒子计数器试行检定规程 JJG 548—1988 冷原子荧光测汞仪检定规程 JJG 549—1988 方波极谱仪试行检定规程 JJG 550—1988 扫描电子显微镜试行检定规程 JJG 551—1988 二氧化硫分析仪检定规程 JJG 552—1988 血细胞计数板试行检定规程 JJG 553—1988 血液气体酸碱分析仪检定规程 JJG 629—1989 多晶X射线衍射仪检定规程 JJG 630—1989 火焰光度计检定规程 JJG 631—1989 氨自动监测仪检定规程 JJG 635—1999 一氧化碳、二氧化碳红外线气体分析器检定规程JJG 656—1990 硝酸根自动监测仪检定规程 JJG 657—1990 呼出气体酒精含量探测器检定规程 JJG 658—1990 烘干法谷物水分测定仪检定规程 JJG 659—1990 飘尘采样器检定规程 JJG 662—1990 热磁式氧分析器检定规程 JJG 663—1990 热导式氢分析器检定规程 JJG 672—2001 氧弹热量计检定规程 JJG 673—1990 绝热型氧弹热量计检定规程 JJG 674—1990 标准海水检定规程 JJG 677—1996 光干涉式甲烷测定器检定规程 JJG 678—1996 催化燃烧式甲烷测定器检定规程 JJG 679—1990 冷[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]测汞仪检定规程 JJG 680—1990 烟尘测试仪检定规程 JJG 688—1990 汽车排放气体测试仪检定规程 JJG 689—1990 紫外、可见、近红外分光光度计检定规程 JJG 693—1990 可燃气体检测报警器检定规程 JJG 694—1990 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]分光光度计检定规程 JJG 695—1990 硫化氢气体分析仪检定规程 JJG 700—1999 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]检定规程 JJG 701—1990 毛细管法熔点测定仪检定规程 JJG 705—1990 实验室液相色谱仪检定规程 JJG 713—1990 直接电流法测氰仪检定规程 JJG 714—1990 血细胞分析仪检定规程 JJG 715—1991 水质综合分析仪检定规程 JJG 742—1991 恩氏粘度计检定规程 JJG 743—1991 流出杯式粘度计检定规程 JJG 757—1991 离子计检定规程 JJG 758—1991 罗维朋比色计检定规程 JJG 761—1991 电极式盐度计检定规程 JJG 763—1992 温盐深测量仪检定规程 JJG 768—1994 发射光谱仪检定规程 JJG 800—1993 电位溶出分析仪检定规程 JJG 801—1993 化学发光法氮氧化物分析仪检定规程 JJG 810—1993 波长色散X射线荧光光谱仪检定规程 JJG 814—1993 自动电位滴定仪检定规程 JJG 816—1993 二氧化硫气体报警器检定规程 JJG 820—1993 手持糖量（含量）计及手持折射仪检定规程 JJG 821—1993 总有机碳分析仪检定规程 JJG 822—1993 钠离子计检定规程 JJG 823—1993 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]检定规程 JJG 824—1993 生物化学需氧量（BOD5）测定仪检定规程 JJG 825—1993 测氡仪检定规程 JJG 826—1993 二级标准分流式湿度发生器检定规程 JJG 844—1993 回潮率测定仪检定规程 JJG 845—1993 原棉水份测定仪检定规程 JJG 846—1993 光散射式数字粉尘测试仪检定规程 JJG 847—1993 滤纸式烟度计检定规程 JJG 861—1994 酶标分析仪检定规程 JJG 862—1994 全差示分光光度计检定规程 JJG 871—1994 远红外生丝水分检测机检定规程 JJG 877—1994 蒸气压渗透仪检定规程 JJG 878—1994 熔体流动速率仪检定规程 JJG 891—1995 电容法和电阻法谷物水份测定仪检定规程 JJG 899—1995 石油低含水率分析仪检定规程 JJG 901—1995 电子探针分析仪检定规程 JJG 902—1995 光透沉降粒度测定仪检定规程 JJG 915—1996 一氧化碳检测报警器检定规程 JJG 916—1996 气敏色谱法微量氢测定仪检定规程 JJG 917—1996 棉花测色仪检定规程 JJG 919—1996 pH计检定仪检定规程 JJG 936—1998 示差扫描热量计检定规程 JJG 937—1998 色谱检定仪检定规程 JJG 950—2000 水中油份浓度分析仪检定规程 JJG 385—1985 总光通量标准荧光灯试行检定规程 JJG 748—1991 示波极谱仪检定规程 JJG 1074-2001 酒精密度—浓度测量用表 JJG 964—2001 毛细管电泳仪检定规程 此目录中有若干规程已过期,新规程如下:JJG 119—2005 实验室PH（酸度）计检定规程 JJG 412—2005 水流型气体热量计检定规程JJG 499—2004 精密露点仪试行检定规程JJG 500-2005 电解法湿度仪检定规程JJG 520-2005 粉尘采样器检定规程JJG 535—2004 氧化锆氧分析器检定规程 JJG 537-2006 荧光分光光度计检定规程JJG 548—2004 测汞仪检定规程 JJG 551—2003 二氧化硫分析仪检定规程 JJG 631—2004 氨自动监测仪检定规程JJG 662—2005 热磁式氧分析器检定规程JJG 677—2006 光干涉式甲烷测定器检定规程JJG 693—2004 可燃气体检测报警器检定规程 JJG 695—2003 硫化氢气体分析仪检定规程JJG 705—2002 液相色谱仪检定规程JJG 763—2002 温盐深测量仪检定规程JJG 768—2005 发射光谱仪检定规程JJG 801—2004 化学发光法氮氧化物分析仪检定规程JJG 821—2005 总有机碳分析仪检定规程 JJG880-2006 浊度计检定规程(2007-03-06实施)JJG 657—2006 呼出气体酒精含量探测器检定规程(2007-06-08实施)

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