免疫印迹仪实验原理

鼎昊源全自动转印仪Blotstainer在蛋白免疫印迹上的应用 由于蛋白免疫印迹的步骤操作较为繁琐，要求精度较高，实验中一步出现操作失误就会导致整个实验的白白浪费。并且一抗二抗试剂也比较宝贵，所以采用仪器操作可以降低实验的风险，保证实验的顺利进行。 鼎昊源推出的全自动转印仪就是替代人工操作的好选择，它配有自动移液系统，温控系统和孵育摇床。自动移液系统包括10个管路，相互独立，避免交叉感染。温控系统范围在4℃到80℃之间，满足蛋白免疫印迹，核酸分子杂交实验的孵育温度。整套系统根据客户自定义的操作程序自动完成。为了方便客户使用，全自动转印仪出厂预设了免疫印迹，核酸杂交，原位杂交和免疫组化的自动程序。 内置标准蛋白免疫印迹程序如下： Step Task Time Action Buffer Memo Execute x times 1 Set temp Off Temperature to RT 2 Incubate 00:05 Wash PBST Wash membrane X2 3 Set temp ON, 10℃ Temperature 10℃ 4 Incubate 01:00 Blocking Block solution Blocking 5 Incubate 02:00 AB-step Primary antibody Primary antibody 6 Incubate 00:05 Wash PBST Wash membrane X4 7 Incubate 00:30 Sec. antibody Second antibody Second antibody 8 Set temp Off Temperature to RT 9 Wash 00:05 PBST wash PBST PBST wash X10 10 Ready to stain in dark room 设置温度到室温 用0.01M PBS洗膜，5min × 2次。 设置温度到10℃ 4、加入包被液，平稳摇动，1hr。 5、加入一抗（按合适稀释比例用0.01M PBS稀释，液体必须覆盖膜的全部），2hr。 6、弃一抗，用0.01M PBS分别洗膜，5min× 4次。 7、加入二抗（辣根过氧化物酶偶联）（按合适稀释比例用0.01M PBS稀释），0.5hr。 8、设置温度到室温 9、弃二抗，用0.01M PBS洗膜，5min× 10次。 10、加入显色液，避光显色至出现条带时放入双蒸水中终止反应。 全自动转印仪在上述程序中可以实现在蛋白免疫印迹孵育过程中的温控，更加保证一抗二抗的活性，这是一般手工操作所达不到的。 整套程序5个小时内自动完成，不需要人工换液和取出薄膜。当然上述程序可以按照用户实际需要来调整全自动转印仪的程序。 关键词：蛋白免疫印迹，全自动转印仪

立即免费*试用我们的蛋白免疫印迹试剂盒，亲身体验另类的不同！ 我们将在一定期限内提供免费试用装，试用装包括 Western Lightning™ ECL pro 或 Western Lightning™ Ultra 化学发光底物, KODAK® 科学胶片，PVDF 杂交转印膜以及 HRP 偶联抗体。 Western Lightning Ultra [ 低至飞克 (femtogram) 级灵敏度，信号稳定时间 8小时 ] 最高灵敏度的化学发光底物。 蛋白免疫印迹，最佳条件：C2C12 细胞裂解液 4 倍连续稀释，10 微升样品，兔抗总 AKT 1:20,000，抗兔 HRP 1:100,000，1 分钟曝光。 Western Lightning ECL Pro 对比 [灵敏度 12小时 ] 利用 AlphaScreen SureFire 裂解缓冲液，以 HEK 293 细胞制备裂解液。第 2-9 条带：2 倍连续稀释的裂解液。使用 eBlot 半干转印系统进行转印。用封闭液 (PKI) 封闭 1 小时。在 4 摄氏度下，以 1:1000 稀释的抗 AKT 抗体进行过夜孵育(CST)。在室温下，以 1:100,000 稀释的抗兔 HRP 育孵 1 小时 (PKI)。 请即点击登记，以便当地销售代表致电给您，评估最符合您具体要求的蛋白免疫印迹试剂试用装。 * Western Lightning 产品仅用于化学发光检测，在所有应用中都无法替代 ECL Plus。数量有限。PerkinElmer 有权单方面随时终止试用活动，恕不另行通知。本活动不涉及现金或现金等价物。试剂盒不可退换。活动截止日期：2011 年 12 月 31 日。

一、项目基本情况项目编号：[230801]JMSC[GK]20220017项目名称：全自动免疫印迹仪等进口设备采购项目.采购方式：公开招标预算金额：2,077,000.00元采购需求：合同包1(全自动免疫印迹仪等进口设备采购项目):合同包预算金额：2,077,000.00元品目号品目名称采购标的数量（单位）技术规格、参数及要求品目预算(元)最高限价(元)1-1其他分析仪器单道加样器 （套5支）4(套)详见采购文件32,000.00-1-2分析天平及专用天平十万分之一电子天平1(台)详见采购文件35,000.00-1-3分析天平及专用天平万分之一电子天平1(台)详见采购文件18,000.00-1-4分析天平及专用天平千分之一电子天平1(台)详见采购文件13,000.00-1-5分析天平及专用天平百分之一电子天平1(台)详见采购文件8,500.00-1-6显微镜正置倒置一体荧光显微成像系统1(套)详见采购文件630,000.00-1-7其他分析仪器全自动免疫印迹仪1(台)详见采购文件1,255,500.00-1-8其他分析仪器无线温场综合检测系统1(台)详见采购文件85,000.00-本合同包不接受联合体投标合同履行期限： 合同签订后90个日历日内二、申请人的资格要求：1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定 2.落实政府采购政策需满足的资格要求： 无。三、获取招标文件时间： 2022年12月09日 至 2022年12月15日 ，每天上午 00:00:00 至 12:00:00 ，下午 12:00:00 至 23:59:59 （北京时间,法定节假日除外）地点：公告期内凭用户名和密码，登录黑龙江省政府采购管理平台(http://hljcg.hlj.gov.cn/)，选择“交易执行-应标-项目投标”，在“未参与项目”列表中选择需要参与的项目，确认参与后即可方式：在线获取售价： 免费获取四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点2022年12月30日 09时00分00秒 （北京时间）地点：网上提交五、公告期限自本公告发布之日起5个工作日。六、其他补充事宜无七、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。1.采购人信息名称：佳木斯市疾病预防控制中心地址：中山路南段706号公共卫生大厦联系方式：185566196662.采购代理机构信息名称：佳木斯市政府采购中心地址：黑龙江省佳木斯市市辖区长安西路820号联系方式：0454-66833013.项目联系方式项目联系人：刘天元电话：0454-6683302佳木斯市政府采购中心2022年12月08日

仪器信息网讯 2014年9月24日，第七届慕尼黑上海分析生化展(analytica China 2014)在上海开幕。在本届展会上，GE医疗生命科学科研与应用市场产品部经理王冬接受了仪器信息网的采访。

单克隆抗体制备的原理：B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力、B细胞的这种能力和量是有限的,不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的、将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体.这种技术即称为单克隆抗体技术。单克隆抗体制备的过程：免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。细胞融合采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。单克隆抗体制备的意义：用于以下各种生命科学实验并具有医用价值（1）沉淀反应：Precipitation reaction（2）凝集实验：haemaglutination（3）放射免疫学方法检测免疫复合物（4） 流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离.（5）ELISA 等免疫学检测（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的亲和力 .（7）免疫印记（western blotting)（8） 免疫沉淀：（9） 亲和层析：分离蛋白质（10） 磁珠分离细胞（11）临床疾病的诊断和治疗；

&emsp &emsp 蛋白质免疫印迹杂交实验（Western Blotting）是成熟 mRNA 翻译指导蛋白质合成量分析检测手段中经典和广泛为业界认可的一种,也是论文中常见的数据呈现形式之一。虽然Western Blot实验原理比较简单，但是实验耗时长、步骤繁琐和实验结果重复性差，导致刚进实验室的小伙伴们，实验做的焦头烂额。&emsp &emsp 那么如何做出一手漂亮的Western Blot实验结果呢，请小伙伴们跟随远慕生物的脚步，了解Western Blot实验的相关知识，let's go！&emsp &emsp Western Blotting实验原理：&emsp &emsp 蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot，简称WB。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色，将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。&emsp &emsp Western Blotting实验步骤：&emsp &emsp -样品制备&emsp &emsp 样本制备是决定蛋白质免疫印迹是否成功的关键步骤之一。样本必须进行研磨、匀浆、超声处理。膜蛋白需用剧烈的方法抽提，低丰度膜蛋白可能还要分步抽提(超速离心)。还需要注意的一点就是组织中的蛋白酶活性强，需要加入PMSF抑制酶的活性。远慕为大家提供强、中、弱三种RIPA裂解液，以及适用于各种类型的蛋白酶抑制剂。&emsp &emsp -电泳分离&emsp &emsp 准备好样品后，第二步就是上样和电泳分离了，上样之前小伙伴们要做的必要步骤是确定蛋白质浓度，根据蛋白质浓度确定上样量。远慕给大家推荐BCA和Bradford两款蛋白浓度测定试剂盒，小伙伴们可以根据自己的实验需求自行选择。&emsp &emsp 测完了蛋白质浓度，接下来就是上样了。首先要制备凝胶，选用SDS-PAGE凝胶配制试剂盒（EC0003），简单省时。然后安装电泳槽，将胶片安置在电泳槽中，在电泳装置中加入SDS-PAGE电泳液。远慕提供10×的电泳液，稀释后直接使用，方便快捷。&emsp &emsp 上样结束后，设置电泳程序一般浓缩胶80V，分离胶120V，电泳时间一般为1-2小时，根据溴酚蓝指示位置选择停止电泳时间即可。&emsp &emsp -转膜&emsp &emsp 针对特定分子量大小靶蛋白而选择适当转膜条件（转膜时间，转膜缓冲液和必要低温环境）能够将 SDS-PAGE 胶上蛋白样品尽可能完全转移到印迹膜上，同时减少蛋白不必要的降解，这对于终获得清晰、可信结果也是需要考虑因素。转膜方式主要包括湿式电印迹法（佳转膜方法）、半干式电印迹（可选的替代转膜方法）以及干式电印迹（有限灵敏度的转膜方法）。根据实验室习惯和需求，小伙伴们可以自行选择转膜方式。&emsp &emsp 膜的选择&emsp &emsp 膜的选择主要从实验目的和实验要求来考虑，例如做分子量小于20kDa的小蛋白，0.45um的膜是不可取的，因为可能会使得蛋白因透过膜孔而造成膜结合的目的蛋白含量不确定，从而影响终结果的可靠性。通常小于20KDa的蛋白选择0.2um的膜，而大于20KDa的蛋白选择0.45um的膜。&emsp &emsp 转膜方式的选择&emsp &emsp 湿转：&emsp &emsp 通常我们在做湿转的时候，选择100V恒压（高强度，因为低强度时间较长，且效率较低），电流控制在120-350mA之间，分子量在60KD以下的60分钟即可，分子量在60KD以上的需要延长转膜时间60-150分钟才能确保高效率的转膜。所以如果你所研究的两个蛋白分子量差异比较大（如GAPDH 37KD，Ki67 358KD），你可以考虑将胶从中间分开，两部分分别采用不同时间转印，能达到你理想的效果。电转液一般可以重复使用3次，之后电流会过大，不适合再使用。&emsp &emsp 半干转：&emsp &emsp 对于半干转来说，也需要进行堆叠组装（滤纸，胶，膜需要放在转印buffer中进行预平衡）放在装置电极板的底部，盖上上极板，高强的电流通过三明治结构，转印速度较快，一般小于1h。&emsp &emsp 需要注意的是：低温对于膜的转印是至关重要的，尤其是在转印时间较长而无人监管的情况下。针对刚建的实验室平台或者一些新蛋白的研究，经过转印的胶和膜都要通过染色确定转膜效率（胶用考马斯亮蓝加热染色，膜用丽春红染色，均只需几分钟，并不耽误太多时间），不然后面的实验既费时也费抗体。&emsp &emsp -封闭&emsp &emsp 在做Western blot实验中，因固相载体(如NC膜，PVDF膜)表面有很多孔，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面孔里面，但是蛋白并不是连续的，而有很多空隙，抗体也是蛋白，也会被吸附在空的洞里，这样就会有很多非特异性的信号。&emsp &emsp 因为有“填补”和“覆盖”蛋白结合位点以避免一抗的非特异性结合，所以有“封闭”的说法。星博士在此介绍常见封闭液的一些特点，有助于大家选择：&emsp &emsp 常见的封闭液——BSA&emsp &emsp BSA是常用的封闭液，成分单一适用于大多数情况。若免疫原是偶联BSA的，BSA有很强的免疫原性，会导致产生很多针对BSA的抗体，为避免交叉反应，不能用BSA，脱脂奶粉封闭，可以选用酪蛋白或无蛋白的封闭液。&emsp &emsp 常见的封闭液——脱脂奶粉&emsp &emsp 脱脂奶粉大的优点是价格便宜，但由于成分相对复杂，所以适用范围要狭窄一些。针对磷酸化蛋白的检测不能用脱脂奶粉，脱脂奶粉含有酪蛋白，该蛋白本身就是一种磷酸化蛋白，使用会造成高背景磷酸化抗体也许会导致背景增加，此外，因为自身含有生物素，不能用于生物素标记的抗体系统。&emsp &emsp 封闭体系并不是一成不变的，不同的封闭体系往往会得到不一样的实验结果，由此可见，做Western Blot实验中，封闭液的选择也是需要谨慎的。&emsp &emsp 不同封闭体系结果的差异&emsp &emsp -抗体孵育&emsp &emsp 一抗一般按照说明书进行稀释后，室温孵育1-2h，或者4℃过夜。为了让抗体充分与蛋白结合，大多数实验室一般会选择4℃过夜。一抗孵育结束后TBST洗涤三次，用稀释后的二抗，室温孵育1-3小时，TBST洗涤三次。&emsp &emsp 抗体是决定Western Blot实验成败的关键因素，选择具有一定文献引用数的品牌不仅容易得到清晰可信的结果同时能够得到同行认可，针对一些表达峰度高且稳定的蛋白可以选择国产化抗体，既能保证实验结果准确性又可降低实验成本，抗体的保存往往也是大家容易忽略的一个环节，而因抗体保存不当造成实验失败的例子比比皆是。&emsp &emsp 保存温度和条件（仅供参考）&emsp &emsp 对于很多抗体而言，分装成小等份并冻存于-20℃或-80℃是佳保存条件。分装成小等份可大程度减少由冻融造成的抗体效价降低，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于4℃，建议一周内用完。在收到抗体时，在10000×g下离心20秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液，并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10μl；等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。&emsp &emsp 在大多数情况下，收到抗体时在4℃下保存一至两周，然后再冷冻进行长期保存是可以接受的，但也许腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而应该尽快冻存。不同品牌的抗体保存方式往往不同，具体保存方式需参考产品说明书。&emsp &emsp -检测&emsp &emsp 抗体孵育完，就到了Western Blot实验的后一步——检测了。&emsp &emsp 目前常用的检测方法是ECL化学发光法，主要针对HRP标记的二抗。远慕为大家提供极超敏和超敏两种ECL发光液供大家选择。一款合适的发光液能使你的Western Blot图片加美观

近日，苏州邦器生物技术有限公司宣布已完成数千万元 A 轮融资，本轮融资由敦行资本领投，由啟赋资本和老股东接力基金联合投资。本次募集资金用于产品管线扩充、医疗器械注册申报、以及项目的快速推进。全自动免疫印迹分析仪BQ-BM100试剂盒（免疫印迹法）自身免疫产品名称抗原免疫肾病抗体7项dsDNA、MPO、PR3、GBM、C1q、nucleosome、PLA2R自免肝抗体9项AMA-M2、M2-3E（BPO）、SP100、gp210、LKM-1、LC-1、 SLA/LP、Ro52抗核抗体谱15项 Sm/RNP、Sm、SS-A/Ro、Ro-52、PM-Scl、CENP B、PCNA、dsDNA、nucleosome、histone、ribosomal P、AMA-M2、Scl-70、Jo-1、SS-B抗肌炎抗体10项Mi-2、Ku、PM-Scl 100、PM-Scl 75、SRP、Jo-1、PL-7、PL-12、 EJ、Ro-52风湿病抗体8项U1-RNP、Sm、SS-A/Ro、Ro-52、SSB、SCL-70、Jo-1、Rib糖尿病抗体5项ICA、IAA、GADA、IA-2A、ZnT8A性激素抗体6项ASA、AZP、AEA、AOA、ATA、HCG自身抗体谱11项α-Fodrin、C1q、RF、RA33、BP180、Dsg1、Dsg3、EBM、TG、ACA、CCP自身抗体谱18项dsDNA、His、Nuc、Scl-70、P0、PM-Scl、Jo-1、nRNP/Sm、Sm、SS-B/La、SS-A、AMA-M2、CENP-B、LKM-1、SLA/LP、PR3、MPO、GBM自身抗体谱5项RA33、β2-GPⅠ、CCP、ACL、RF过敏原产品名称抗原吸入性及食物性过敏原19项柳树/杨树/榆树，普通豚草，艾蒿，屋尘螨/粉尘螨，屋尘，猫毛，狗上皮，蟑螂，点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉，葎草，鸡蛋白，牛奶，花生，黄豆，牛肉，羊肉，鱈鱼/龙虾/扇贝，虾，蟹。食物过敏原8项鸡蛋白，牛奶，花生，黄豆，鳕鱼/龙虾/扇贝，鲑鱼/鲈鱼/鲤鱼，虾，蟹吸入性过敏原10项柳树/杨树/榆树，普通豚草，艾蒿，屋尘螨/粉尘螨，屋尘，猫毛，狗上皮，蟑螂，点青霉/分枝孢霉/烟曲霉/交链孢霉，葎草关于苏州邦器生物苏州邦器生物技术有限公司成立于2020年，产品覆盖自免&过敏诊断的仪器和试剂，组建了含研发、生产、注册、质量、供应链和销售的全产业链团队，形成了强大的核心竞争力。公司已申请专利近40项，含发明专利10多项，获国家高新技术企业、国家科技型企业、独角兽企业等称号、入选“2020年相城区创业领军人才”等。2022年部分产品已通过CE认证。邦器生物产品在立足主流检测方法学的同时，还布局了多种方法学检测平台、上游原料开发和下游应用场景的拓展。力争成为自身免疫、过敏原领域龙头企业。邦器生物拥有一支学术领先、经验丰富、执行力强的专业研发团队，通过自研仪器与诊断试剂，在自免&过敏体外诊断领域推出全定量、双阵列、全自动、高通量、超高速的诊断系统；还建立了全程可视化信息管理系统和多重质控功能，从样本到结果输出的全过程质控，保证了多指标检测结果的稳定性和准确性。

蛋白质印迹实验具体操作步骤 蛋白质印迹免疫分析的过程包括蛋白质经凝胶电泳分离后，在电场作用下将凝胶上的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜上，经封闭后再用抗待检蛋白质的抗体 作为探针与之结合，经洗涤后，再将滤膜与二级试剂-放射性标记的或辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶 偶联抗免疫球蛋白抗体 结合，进一步洗涤后，通过放射自显影或原位酶反应来确定抗原-抗体-抗抗体复合物在滤膜上的位置和丰度。 【蛋白质印迹实验所需试剂】 1.IgG 标准品 2.羊抗人辣根过氧化物酶（HRP）标记的IgG 抗体 3.转移buffer:Tris 3.03g,Gly14.4g,甲醇200ml,加三蒸水至 1000ml充分溶解，4℃冰箱贮存。 4.Tris buffer（TBS）：Tris 2.42g,NaCl 29.2g,溶于600ml三蒸水，再用1N HCl调至pH7.5,然后补加三蒸水至1000ml. 5.漂洗液（TTBS）：TBS液500ml,加 Tween20 250ul. 6.封闭液：5%脱脂奶粉。 7.抗体buffer:1.5g BSA溶于50ml TTBS. 8.显色液DAB（3.3-diaminobenzidine,3.3-二氨基联苯胺）配制：5mg DAB溶于10ml 柠檬酸buffer（0.01mol/L 柠檬酸2.6ml,0.02 mol/L Na2HPO4 17.39ml），加30% H2O2 10 &mu l（临用时现配）。 9.脱色液：甲醇250ml,冰醋酸100ml,加蒸馏 水至1000ml. 10.氨基黑染色液（0.1%氨基黑 -10B）：0.2g 氨基黑-10B 溶于200ml 脱色液中，充分搅拌溶解，滤纸 过滤。 【蛋白质印迹实验操作步骤】 一、样品的SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳 按实验四操作步骤进行。加样时，注意在同一块胶上按顺序做一份重复点样，以备电泳结束时，一份用于免疫鉴定，一份用于蛋白染色显带，以利相互对比，分析实验结果。 二、转移印迹 1.转移前准备：将滤纸，硝酸纤维素膜（NC）剪成与胶同样大小，NC膜浸入蒸馏 水中 10-20min 后浸入转移buffer中平衡30min . 2.凝胶平衡：将电泳后的SDS -PAGE胶板置于转移buffer 中平衡 30-60min. 3.按图操作：逐层铺平，各层之间勿留有气泡和皱折。 4.开始转移，连接正负极，盖好盖子，接上电源，恒流 0.8mA/cm,室温下转移1h,转移后的凝胶再用氨基黑10B染色液染色20min ,然后脱色检测转移效果。 三、免疫染色 1.转移后的NC膜于5%脱脂奶粉中封闭，4℃过夜。 2.TBS洗膜1-2次，10min/次。 3.加HRP标记的抗体，室温1h . 4.TBS 洗3次，10min/次。 5.NC膜再转入DAB显色液中，置暗处反应，待显色反应达到最佳程度时，立即用三蒸水洗涤终止反应。

2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议召开 　　仪器信息网讯 由国家自然科学基金委、中国化学会联合主办，复旦大学和上海交通大学联合承办的“2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议”于2010年10月18日在上海复旦大学召开。会议主题为“科技让生活更美好，微纳让科技更奇妙”。400余名国内同行和20余名国外专家参加，将讨论交流微/纳尺度分离、微全分析、以及微/纳技术在化学生物学和生物医学领域中的应用等学术问题。 会议现场 本次学术会议倡议者杨芃原教授致辞 　　开幕式上，本次学术会议倡议者杨芃原教授致开幕辞。在大会报告环节，张玉奎院士、刘爱群教授、林炳承研究员、刘冲教授、蒋兴宇研究员、庄乾坤教授分别作报告。 中国科学院大连化物所 张玉奎院士 报告题目：定量蛋白质组分析的挑战 　　张玉奎院士在其报告中详细阐述了近年来发展的多种蛋白质组分离鉴定新技术新方法： 　　在高丰度蛋白质去除方面，发展了基于多维阵列液相色谱的通用型高丰度蛋白质去除技术；一次运行可去除58 种高丰度蛋白质，并将样品中蛋白质的鉴定数目提高2倍以上。此外，还发展了基于蛋白质印迹材料的高丰度蛋白质选择性去除技术和基于蛋白质均衡器技术的降低蛋白质丰度分布范围的方法。利用上述策略，均显著提高了低丰度蛋白质的鉴定能力。 　　在低丰度蛋白质富集方面，研制了多种固载金属亲和色谱材料，包括无机有机杂化整体材料、聚合物颗粒和介孔材料，以及金属氧化物气溶胶和复合金属氧化物微球，实现了磷酸化肽的高选择性富集。此外，还研制了亲水材料和硼酸功能化材料，实现了糖肽的高选择性富集。 　　在蛋白质分离鉴定平台方面，研制了多种固定化酶反应器，实现了蛋白质组的在线快速酶解。研制了多种色谱柱和毛细管等电聚焦柱，提高了蛋白质和多肽分离的柱效和分辨率。建立了多维液相色谱、多维毛细管电泳和多维芯片毛细管电泳分离方法；通过与样品预处理或在线酶解的集成，不仅提高了系统的分析通量，而且提高了蛋白质鉴定的可靠性。 　　在液质联用高灵敏度鉴定方面，合成了新型磁性微纳米材料，提高了基体辅助激光解吸离子化质谱对蛋白质鉴定灵敏度。发展了针对磷酸化肽的衍生技术，可不经过富集，直接实现磷酸化肽的高灵敏度鉴定。此外，还建立了多种质谱数据处理新方法。新加坡南洋理工大学 刘爱群教授 报告题目：A Breakthrough Tuning Point from Microfluidics to Optofluidics 　　微流控技术(microfluidics) 是在微流控芯片上实现微量化学或生物样品的合成与分析等操作的技术，微流控光学技术(Optofluidics)则是在微观尺度上通过操控流体，探索微流控系统与光子的相互作用规律，目的是开发具有可调化、集成化和微型化的微流控光学器件与系统。微流控光学技术用于光学器件的研究是可谓是一次全新的突破。 中国科学院大连化学物理研究所 林炳承研究员 报告题目：功能化微流控芯片实验室的构建 　　林炳承研究员长期从事毛细管电泳和微流控芯片的研究，并以医学诊断和药物筛选为研究和应用的主要背景，在理论、技术平台、方法发展及重大应用等方面取得了一系列的成就，在国际、国内相关领域产生了重要影响。 　　许多主要的分析化学操作模式已经在微流控芯片上实现，从原理上讲，几乎所有的分析化学操作模式均可以在微流控芯片及其周边完成。微流控芯片分析化学实验室具有微型、可控的操作单元灵活组合规模集成的本质特征，还可用于复杂体系从而在系统层面上认识事物和解决问题的能力。构建和完善微流控芯片分析化学实验室应当成为未来十年、二十年中分析化学领域发展和研究的主流趋势之一。 　　以细胞生物学的系统研究为基本目标的微流控芯片细胞实验室正呼之欲出。微流控芯片研究的热点正逐步转向构建各种不同类型的芯片实验室，从化学、生物到信息、光学、材料，林林总总。微流控芯片中流体的流动通常通过通道或液滴实现，通道和液滴是微流控芯片实验室的重要组成部分。 　　林炳承研究员课题组通过微泵微伐对通道网络中流体的控制，实现了大样本量线虫的衰老研究，显示了环境、营养等因素对线虫寿命的显著影响，对人类衰老的研究具有借鉴作用，有望在此基础上构建微流控芯片衰老研究实验室。借助于大规模液滴操控技术，实现了不同生物材料的液滴内合成，是微流控芯片材料实验室的一种理想模型。 大连理工大学微系统研究中心 刘冲教授 报告题目：聚合物多层微流控芯片及新型无源仿生微泵的设计与制作 　　刘冲教授设计与制作了一种集成浓度梯度发生器和细胞培养阵列的多层微流控芯片，利用厚胶光刻工艺和干法刻蚀工艺分别制作了SU-8 胶模具和硅模具，浇注PDMS制得芯片。 　　该芯片由4 层PDMS 键合而成：第一层可以实现细胞培养及检测，水滴状微结构为细胞培养腔，其一端具有微柱阵列，相邻微柱间隙为5μm，用于拦截细胞；第二层为浓度梯度发生器，从两个入口分别注入含药物和不含药物的培养液，经过混合，在通道末端形成5种不同浓度的药物溶液，经通孔垂直进入第一层的细胞培养腔；第三层为30μm 的微阀薄膜；第四层为气体通道层，与第三层共同构成微阀，用于对浓度梯度发生器和细胞培养腔之间连通与关断的控制。 　　利用制作的芯片进行了A549肺腺癌细胞的培养实验，该细胞可很好地贴壁生长，为研究不同浓度的抗癌药物对癌细胞的抑制作用提供了条件。 　　刘冲教授设计与制作了一种新型无源仿生微泵，该泵具有植物通过气孔蒸腾进行水分运输的优势。其蒸腾速率远大于自由水面，可以获得较高液体流速；运输水分是一个被动运输的过程，无需外部能源；可以通过调整参与蒸腾的微孔开度或微孔数量来控制水分流量；可以持续不间断进行水分运输，工作时间长。 国家纳米科学中心 蒋兴宇研究员 报告题目：微流控芯片生化分析及读出技术 　　建立在芯片系统中的生化分析具有自动化、即时现场检测、快速等特点，其中很多都应用到了微流控技术。由于微流控芯片分析中所需的样品、试剂量少，集成度高，使其在各类芯片分析中都成为一项重要的技术。但是在芯片分析微型化的进程中，遇到的一个最重要的问题就是信号的读出技术，很多芯片使用本身体积很小，但是由于检测仪器的体积过大而限制了其微型化的相关应用。随着材料科学的快速发展，出现了很多具有优良性能的材料以及基于这类材料的新型检测方法。这些方法与微流控技术的结合，将会使微流控芯片的检测效率更加提高。 　　利用静电纺丝制备的纳米纤维薄膜具有很高的比表面积，大大提高了生物大分子在表面的吸附，结合微流控芯片，纳米纤维薄膜可以提高固相免疫检测的灵敏度。蒋兴宇研究员课题组建立的新型HIV免疫检测方法可以提高检测的灵敏度、效率。一般需要4小时或更长时间才可以完成的试验减少到8分钟之内，将多种物质之间的相互作用同时加速进行，大大加快了检测物质相互作用的速度，并且减少了疾病检测以及检测物质相互作用试验的时间、降低对于试验条件的要求。 　　蛋白质免疫印迹分析是分子生物学和细胞生物学研究中的一个重要方法，蛋白质免疫印迹分析能够检测细胞中目标蛋白质的含量，并且可以得到目标蛋白质的近似分子量。但是传统的蛋白质免疫印迹分析技术的缺点是一次实验只能检测到细胞中的一种蛋白质，并且会消耗相对大量的抗体溶液。然而大多数的生物学研究中都需要对细胞中的多种蛋白质含量进行监测，这导致生物学家往往需要收集大量细胞来进行多次免疫印迹分析，并且会消耗较大量的昂贵的抗体溶液。开发新型的蛋白质免疫印迹技术一直备受生物技术产业界和生物学家关注。 　　蒋兴宇研究员课题组将微流控技术和传统的免疫印迹技术相结合，解决了以上难题。该方法利用SDS-PAGE凝胶电泳将细胞中的蛋白质按分子量大小分离为蛋白质条带，然后将凝胶中的蛋白质条带在电场的作用下转移到PVDF高分子膜上。在传统的免疫印迹分析技术中，后续的免疫检测会将这张PVDF印迹膜直接浸泡在抗体溶液中进行免疫反应。本方法创造性的将印迹了蛋白质条带的PVDF膜作为PDMS微流控芯片的基底，微流控芯片上平行的排列了很多微流管道，微流管道的方向与膜上蛋白质条带方向垂直。这样，通过在不同的微流管道中通入针对不同蛋白质的抗体，可以实现一次实验检测细胞中的多种蛋白质(n10)，并且将抗体溶液的用量从原来的大约1毫升降低到小于1微升。实验结果表明，这种新方法的蛋白质检测灵敏度不亚于传统的免疫印迹方法。 　　这种微流控免疫印迹的新方法可以大大的降低免疫印迹实验中的人力物力消耗。并且所需的微流控芯片成本低廉、操作简单。该方法有望运用于细胞信号通路、蛋白质组学等研究。 国家自然科学基金委员会化学科学部主任 庄乾坤教授 报告题目：分析化学资助现状与思考 　　庄乾坤教授介绍了自然科学基金项目系列、各类项目资助侧重点、科学基金最新动向、分析化学进一步发展等内容。国家自然科学基金主要的定位是：引导源头创新、支持基础研究；强调三大战略(源头创新、科技人才和创新环境)，资助种类已形成了三大系列(研究项目系列、人才培养系列、科研环境系列)。科学基金的新动向：青年基金纳入到人才基金板块，并降低资助额度(约18~20万/项)，扩大青年基金的资助率，希望逐步达到30%；控制面上项目的资助率约为申请面上项目总数的1/5，并增加资助额度，近两年将逐步达到40万/项；更加侧重基础、更加侧重人才、更加侧重前沿。 　　各类项目资助侧重点分别是：面上项目起到全面协调的作用，强调可持续、创新；重点项目鼓励学科前沿分析发展；重大项目强调集成、力争出重大成果；杰青项目的目标是培养学科带头人；重大研究计划保护创新；国际合作项目注重强强合作、平等互惠、以我为主；仪器专项则是实现创新的手段。 　　近两年，在基金委的支持下，已培养了一大批创新的团队和人才，比如：国家实验室、国家重点实验室、省部属重点实验室、重点学科、优秀团队和973项目首席科学家。 　　分析化学进一步发展的问题：据AC统计，1996年-2008年中国分析化学论文数在全球排名已达第二位，仅次于美国；但在引用因子和被引用数目上还低于美国、日本、德国等国家；尤其是每篇论文的被引用次数还低于很多国家。所以中国的分析化学研究还有待再上一个新台阶。 　　关于如何再上一个新台阶，庄乾坤教授谈到了几点思考。从分析化学的研究目标来说，是要追求“3S+2A”，3S即Sensitivity, Selectivity and Speediness灵敏度、选择性、高速度；2A为Accuracy, Automatics，准确度、自动化。从研究创新方面来说，庄乾坤教授强调3点：1)引入物理学新概念和新技术；2)创建分析仪器装置；3)瞄准国际公认的有影响的重大科学问题。庄乾坤教授还提出了理论基础的学科源头论，认为数学是源头，物理是上游，化学是中游，生命科学、环境等应用领域是下游，而一个学科的发展准则是“下游”离不开“上游”，“上游”可独立于“下游”。 　　本次会议历时2天，含特邀报告、专题报告、墙报等交流形式，是我国微/纳技术近十年研究成果的一个阶段性总结，也将对未来该技术的发展方向以及对其他学科的影响进行展望。

仪器信息网讯 2010年12月10日，北京理化分析测试技术学会北京色谱学会举办的“2010年北京色谱年会”在京东宾馆第一会议室隆重召开。400多位来自科研院所、大专院校、质检机构、企业的业内人士参加会议。 2010年北京色谱年会会场 　　首先，由北京色谱学会理事长、中科院化学研究所刘国诠研究员致开幕词，北京色谱学会副理事长、中国石油科学研究院武杰研究员主持大会，大会报告环节由北京色谱学会副理事长汪正范研究员主持。 北京色谱学会理事长刘国诠研究员 北京色谱学会副理事长武杰研究员 北京色谱学会副理事长汪正范研究员 　　为促进北京地区色谱技术的应用与交流，展望色谱技术的发展趋势，本届色谱年会邀请了国内色谱领域著名的学者、专家及色谱知名厂家作大会报告，介绍了色谱技术的最新成果与进展，并就健康与环境热点分析技术进行了研讨。 报告人：中科院大连化学物理研究所 张玉奎院士 报告题目：蛋白质组分离鉴定方法进展 　　张玉奎院士在介绍蛋白质组分离鉴定新技术新方法时，着重介绍了以下四方面内容：高丰度蛋白质去除方面，发展了基于多维阵列液相色谱、蛋白质印迹材料的高丰度蛋白质去除技术；低丰度蛋白质富集方面，研制了杂化材料、整体材料、磁性纳米材料和介孔材料，以及选择性富集材料、通用性富集材料，实现了磷酸化肽、糖肽高选择性富集；蛋白质分离鉴定平台方面，分别建立了快速酶解、高效快速分离在线同位素标记分析平台；液质联用高灵敏度鉴定方面，发展质谱衍生技术、数据处理新方法等。 报告人：香港浸会大学 蔡宗苇教授 报告题目：环境有毒有害物质的生物化学研究 　　蔡宗苇教授为香港浸会大学化学系教授，二噁英分析实验室主任。蔡宗苇教授是质谱分析专家，从事质谱的基础理论和应用研究，特别擅长于高分辨质谱、GC-MS、LC-MS、CE-MS及其在环境、生物、药物和痕量有机污染物分析方面的应用研究。此次报告中主要介绍了日常生活用品牙膏以及游泳池水等中痕量有机污染物分析研究成果。 报告人：中国疾病预防控制中心吴永宁研究员 报告题目：Food Safety S&T Support Roadmap: From Chemical Analyst to Analytic Toxicologist 　　吴永宁研究员报告中以三鹿牌婴幼儿奶粉事件为例，分析了我国食品生产面临的挑战及国内食品安全面临的严峻形势，介绍了目前国内食品安全风险评估能力建设体系的总体内容和应对措施，并向大家讲述了国内食品安全有关的标准和法律。 报告人：国家纳米科学中心蒋兴宇研究员 报告题目：用微流控和金纳米颗粒的微型化快速检测 　　蒋兴宇研究员将微流控技术和传统的免疫印迹技术相结合，开发出微流控免疫印迹的新方法。该方法与传统免疫印迹方法相比，单次实验可检测蛋白数增加了至少10倍；检测一种蛋白消耗抗体溶液体积由1毫升降至1微升，成本由20元降至0.2元；检测一种蛋白所需细胞权蛋白质量由100微克降至4微克 免疫反应时间由1小时降为30分钟。该方法可以大大的降低免疫印迹实验中的人力物力消耗，并且所需的微流控芯片成本低廉、操作简单。该方法有望运用于细胞信号通路、蛋白质组学等研究。 　　此次色谱年会上，还有来自安捷伦科技、岛津公司、戴安公司、博纳艾杰尔的技术专家做大会报告，分别介绍了液相色谱仪、检测器、色谱柱等方面的新技术及其应用。 报告人：安捷伦科技肖尧博士 报告题目：UHPLC改善液相色谱分析的通量与结果质量 　　肖尧博士的报告中介绍了安捷伦科技2010年6月推出的全新液相色谱系列1200 Infinity的技术特点及其应用。1200 Infinity系列包括新的1220 Infinity LC 和1260 Infinity LC、以及增强型 Agilent 1290 Infinity LC，该系列产品均是基于UHPLC平台。UHPLC技术在提高分析速度、节省化学试剂、提高工作通量、提高分离度及提高实验效率等方面都具有很大的优势，其正在为大多数的人所期望拥有。 报告人：岛津公司冀峰博士 报告题目：岛津超快速液相色谱仪LC-30A性能特点及最新应用 　　冀峰博士的报告中介绍了岛津公司2010年3月发布的最新一代Nexera UHPLC LC-30A的性能特点及最新应用。LC-30A最大工作压力高达130MPa，其在获得极佳的精密度、接近零水平的交叉污染、优秀的线性范围、出色稳定性和耐用性的基础上，实现了超快速和超高分离度分析。 报告人：戴安中国有限公司李浪博士 报告题目：新型电雾式检测器Corona ultra Charged Aerosol Detection 　　2009年9月，戴安公司收购了ESA公司，将其电喷雾检测器技术引入戴安液相色谱产品中。李浪博士的报告中介绍了新发布的第二代电雾式检测器Corona CAD ultra的原理及性能特点，其在灵敏度、响应一致性、动态范围、重现性等方面均具有优势。Corona CAD ultra所兼容的流速范围比较广，它不仅可用于高效液相色谱，还可用于超高效液相色谱。 报告人：博纳艾杰尔科技有限公司杨定忠博士 报告题目：色谱分离材料的科学与艺术 　　杨定忠博士报告中介绍了博纳艾杰尔公司的硅胶表面处理技术以及另一项Optimix新技术。Optimix技术可以解决同时分离强极性和强疏水性化合物的难题，还可以解决离子化化合物分离需要添加高浓度盐的为您提，拓宽了LC-MS的适用范围。 　　会议同期还举办小型仪器展览会，珀金埃尔默、戴安、迪马科技、天美、普立泰科等公司纷纷参展，向与会者展示了色谱相关产品以及全面的解决方案。 仪器展览会现场 　　在广大色谱业内人士的支持、参与和热情鼓励下，2010年的北京色谱年会已经是第八届了。北京色谱学会是北京色谱界同仁们以文会友的一种群众性的民间组织，在大家的支持下，一年一度的北京色谱学会已经成为行业中的一个“节日”。

食物过敏是指过敏原蛋白引起的异常或过强的免疫反应，从免疫学机制而言，可以将食物过敏反应分为4 种类型，即：免疫球蛋白（Ig）E介导的I型超敏反应、II型细胞毒性超敏反应、III型免疫复合型超敏反应以及T细胞介导的迟发性超敏反应。目前可以从广义的角度将食物过敏分为IgE介导和非IgE介导两大类，其中以IgE介导的食物过敏反应最为常见。IgE介导的过敏反应是指过敏原与特异性抗体形成复合物后，与细胞（如肥大细胞、嗜碱性细胞）相结合，随后细胞释放组胺、5-羟色胺及白三烯等大量活性介质，这些物质作用于组织与器官，引起局部或者全身性的过敏反应。河北科技大学食品与生物学院的宁亚维和河北省食品检验研究院的李 强*、张 岩*等人介绍了8 类常见致敏食品中主要过敏原的结构与致敏特点，对常用的食物过敏原方法以及现阶段一些新兴的检测技术进行了综述，并对检测方法未来的发展方向进行展望，期望能对促进食物过敏原检测方法的开发提供参考。1、食品中常见过敏原大豆大豆引发的过敏为IgE抗体介导的速发型过敏反应，会损害患者的皮肤系统、呼吸系统以及消化系统，引发荨麻疹和皮疹等皮肤病，呼吸障碍、呼吸急促、哮喘等呼吸道疾病，腹痛、腹泻等消化道症状，甚至会导致过敏人群发生过敏性休克。世界过敏原数据库收录数据显示，引起过敏反应的大豆过敏原43 种，但大多数过敏反应由两种主要过敏原蛋白引起，即大豆球蛋白和β-伴大豆球蛋白。小麦小麦中蛋白含量占10%～15%，按其在不同溶剂中的溶解度不同主要分为4 类：清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和麦谷蛋白，这些蛋白成分是小麦中的重要营养物质，同时也是小麦过敏原的主要来源。与小麦过敏相关的疾病主要有小麦运动激发过敏症、接触性荨麻疹、特异性皮炎、面包师哮喘症、恶心呕吐以及腹泻等，大多数小麦过敏涉及的是轻度反应，在某些特殊情况下也会导致生命危险。世界卫生组织/国际免疫学会联合会过敏原命名小组分委员会已经提供了13 种小麦过敏原，包括Tri a 14、Tri a 18、Tri a 19、Tri a 20、Tri a 25、Tri a 26、Tri a 36、Tri a 37、Tri a 41～Tri a 45。坚果类能够引起过敏反应的坚果类食物主要包括杏仁、腰果、核桃、榛子、开心果、巴西坚果等，过敏人群食用后，会出现胸闷、咽喉痛，呼吸困难以及恶心、胃痉挛，呕吐腹泻等症状。坚果一般作为植物的种子或者果实，因此大多数坚果蛋白属于3 种保守的种子贮藏蛋白，包括2S白蛋白、7S豆球蛋白和11S豆球蛋白。2S白蛋白属于醇溶蛋白超家族，此家族中的植物源性过敏原具有低分子质量和序列中含有多个半胱氨酸残基的特征。通常，8 个半胱氨酸参与建立4 条链内的二硫键，构成蛋白质三维结构所必需的α-螺旋。醇溶蛋白超家族的大多数过敏原由于其结构小而紧凑，对热、pH值和胃肠道酶具有高度耐受性。花生花生常引起食物过敏反应，过敏症状包括血管性水肿、低血压、腹痛到危及生命的哮喘和过敏性休克等。目前花生中已鉴定出16 种蛋白质过敏原，并将其命名为Ara h 1～17，由于Ara h 4与Ara h 3的序列重复率大于90%，因此2012年Ara h 4被重新命名为Ara h 3.0201，将其与Ara h 3作为相同的过敏原。50%以上过敏患者血清IgE检测结果表明，最常见的花生过敏原为Ara h 1～3和Ara h 6。牛奶牛奶含有丰富的蛋白质，主要包括酪蛋白和乳清蛋白两类，分别占乳蛋白总量的80%和20%。乳蛋白是主要的食物过敏原，常引起婴幼儿过敏性疾病。牛奶过敏通常表现为湿疹、特异性皮肤炎等皮肤症状以及恶心、呕吐、腹痛、腹泻和大便干燥等消化道症状。牛奶中的过敏原主要有3 种，分别是酪蛋白以及乳清蛋白中的α-乳白蛋白、β-乳球蛋白。鸡蛋鸡蛋也是引起食物过敏的主要食品之一，过敏症状主要表现为湿疹、皮炎和风团疹，消化道出现呕吐、腹泻、胃食道反流等。鸡蛋中的主要过敏原有6 种，蛋黄中存在2 种，分别是α-卵黄蛋白和卵黄糖蛋白；蛋清中有4 种，分别是卵类黏蛋白、卵白蛋白、卵转铁蛋白和溶菌酶，这4 种蛋白分别占蛋清蛋白总量的11%、54%、12%和3.5%。鱼类鱼类肉质鲜嫩且营养价值高，但是鱼类常引起过敏人群发生食物过敏反应。过敏症状主要表现为脸红、荨麻疹、恶心呕吐、腹泻、体温逆转、视力模糊等神经系统症状以及血压下降、心传导阻滞等心血管症状。鱼类主要过敏原为小清蛋白、醛缩酶和烯醇化酶。小清蛋白具有保守蛋白结构，分子质量为10～13 kDa，属于食物过敏原中最大的蛋白质家族之一的钙结合蛋白。小清蛋白的热稳定性极高，对食品加工和酶消化的耐受能力极强，不容易通过物理化学方法去除，因此小清蛋白是导致70%以上的鱼及鱼类产品引起过敏反应的原因。其次，醛缩酶和β-烯醇化酶也是重要的鱼类过敏原，分子质量分别为40 kDa和47～50 kDa。醛缩酶和烯醇化酶对热处理敏感，对食品加工的耐受度低于小清蛋白，因此过敏反应的发生概率也低于小清蛋白。甲壳及贝类甲壳及贝类食品味道鲜美且营养丰富，然而因含有过敏原常引起过敏人群发生海鲜过敏反应。过敏症状表现为恶心呕吐、腹泻腹痛的胃肠道症状，也会导致指尖和脚趾的刺痛感，甚至出现肌肉麻痹。甲壳及贝类过敏原主要存在于肉的可食用部分，其主要过敏原包括原肌球蛋白和精氨酸激酶。2、食物过敏原常用检测技术基于蛋白水平的免疫学检测技术酶联免疫吸附试验法：ELISA法基于免疫酶的特点对待测物质进行免疫测定，检测结果可根据底物与酶反应后的产物颜色对抗原进行定性或定量分析。ELISA法根据检测原理以及检测对象的不同分为多种类型，用于食物过敏原检测的主要是夹心法和竞争法。ELISA法是目前在食物过敏原的检测中应用最广泛的一种方法，特异性强、灵敏度高，现阶段多采用成品化的试剂盒进行样品检测。ELISA法检测结果的准确性依赖于抗体对致敏蛋白的识别，但由于食品加工过程中蛋白结构的改变使抗体无法准确识别结合部位，导致检测灵敏度下降，容易产生假阳性结果。虽然ELISA法存在一定局限性，但其仍是主要的食品过敏原定量方法，尤其是在检测花生、大豆和鸡蛋等过敏食物中的致敏组分应用较广。免疫层析技术：免疫层析技术是酶联免疫吸附技术原理的扩展应用，层析时，标记物与待测物之间形成的复合物被相应的配体捕获而聚集到硝化纤维膜上的检测线上，之后复合物在膜上呈现出标记物所带有的颜色，最后可通过纤维膜上显色条的有无、颜色的深浅和反射光线强弱等实现定性或定量检测。免疫层析技术多应用于花生、榛子等坚果的过敏原检测，也有研究人员将其应用到鱼类过敏原的检测中。免疫印迹技术：免疫印迹技术，又称蛋白质印迹技术。该法首先利用凝胶电泳根据蛋白质分子质量的不同将样品分离，随后将凝胶上的蛋白质样品转移至硝酸纤维素膜上，使用放射性物质或者酶标记抗体来进行样品的检测与分析。免疫印迹技术主要用于食物过敏原的鉴定以及半定量分析，Willison等利用小鼠单克隆抗体4C10对杏仁主要过敏原Pru du 6的构象表位进行定位，免疫印迹实验的分析中，该单克隆抗体与非还原性的Pru du 6发生反应，证明了该过敏原构象表位识别的准确性。生物传感器技术：生物传感器主要由生物识别元件和信号转换元件两大部分组成，通过将目标分析物与识别元件进行特异性结合后将产生的物理、化学信号转化为可以检测的光、电信号以达到检测目的。目前用于食物过敏原检测的传感器主要为免疫传感器，根据测定原理的不同可进一步分为电化学免疫传感器、场效应生物传感器和表面等离子体共振（SPR）传感器等。基于基因水平的分子生物学检测技术实时荧光定量PCR技术：实时荧光定量PCR技术在体外模拟体内的DNA复制，利用扩增后的核酸产物来进行样品检测。通过在PCR体系中加入荧光基团，利用荧光基团产生的荧光信号变化来动态监测整个反应过程的实时荧光定量PCR技术在食物过敏原的检测中应用更加广泛。传统PCR技术主要对样品进行定性检测，而实时荧光定量PCR可以实现多种复杂食品中过敏原的定性定量分析以及物种的鉴定。环介导等温扩增检测技术：LAMP是近些年发展起来的一种新型的核酸扩增技术，通过设计4～6 条特异性引物，使用具有链置换活性的DNA聚合酶，在等温条件下每小时将目标基因扩增9～10 倍。由于其操作简单、检测时间短，目前已经应用于食品微生物检测、转基因食品检测以及过敏原成分检测等多个方面。质谱技术近年来，随着质谱技术的不断成熟与完善，在食品过敏原检测中的应用得到了越来越多的关注。使用质谱法检测食物过敏原时多与高效分离纯化技术如液相色谱、毛细管电泳等相结合，最常用的检测方法为 液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），在选择合适的样品预处理方式和稳定的特征肽段的前提下，可以提高检测的灵敏度和准确性。尽管质谱法在应用时需要昴贵的仪器以及专业的技术人员，但质谱法具有快速、高特异性、高通量的优势，可以克服免疫学方法存在的通量低和交叉干扰的弊端，也克服了 PCR技术不能直接检测致敏蛋白质的缺点，具有较好的开发潜力。3、新型食物过敏原检测技术每种食物过敏原检测技术都兼具优缺点，没有一种单独的方法能够将所有优点结合起来，对所有相关的过敏性食品成分进行经济、可靠、快速和明确的识别和定量（图1）。对于一些复杂的分析样品，可能需要使用一种以上的技术来进行全面的检测。结 语目前在世界范围内，过敏性疾病的发生率仍呈现不断上升的趋势，明确食品中的过敏原并建立相关的检测技术对于预防食物过敏的发生至关重要。在目前的食物过敏原检测技术中，基于蛋白水平的ELISA检测技术和基于核酸水平的实时荧光定量PCR技术应用最为广泛，已经逐渐商业化、标准化。蛋白质容易在加工过程中发生变性、聚集等现象，导致其线性表位以及构象表位发生改变，给过敏原的检测带来困难，因此更容易造成检测误差，出现假阳性以及假阴性结果。相比之下，核酸检测更不易于受到外界条件影响，但由于是间接性检测，无法检测到蛋白质谱引起的过敏反应。而质谱法既可以改善免疫学方法中存在的检测通量低和交叉干扰的影响，同时避免了核酸检测技术不能直接检测致敏蛋白的缺点，能够对蛋白质和多肽进行明确鉴定，并且可以同时检测多种过敏原。但昴贵的仪器成本以及对检测人员的高素质要求在一定程度上限制了其进一步的发展。为了减少过敏性疾病的发生，未来的主要发展方向有两点：一方面，开发有效的过敏原减除技术，如通过热加工、高压及微生物发酵降解等方式降解过敏原蛋白从而降低致敏性；另一方面，开发便捷、快速、高效的过敏原检测技术，以帮助消费者更好地避免摄入过敏原。

GS-Smart小型自动凝胶染色仪与台式水平脱色摇床在CBB染色法中的应用对比 台式水平脱色摇床是生物学实验室常见的仪器设备，常用于普通凝胶电泳条带固定、考马斯亮蓝（CBB）染色脱色、硝酸银染色、蛋白质免疫印迹（Western Blot）、细胞培养和放射自显影等实验中。一般的台式水平脱色摇床主要是通过调节定幅载具的摆动频率，从而控制样品在溶液中的摆动快慢，这既是该仪器的基本工作原理，也是她在以上实验中主要发挥的作用。 在普通考马斯亮蓝染色、脱色实验中，台式水平脱色摇床是科研工作者们经常会用到的设备。一般是设定工作池的摇摆频率后，先后加入CBB染色液、脱色液，使摇床工作池持续摇摆，再置入蛋白凝胶使其在摇摆的液体中充分浸润洗涤，从而实现染色脱色。但一般的台式水平脱色摇床除了工作池的摆动频率可调外，没有其他参数能设置，虽然某些型号摇床还增加了定时功能，但也无法设置自动完成复杂的步骤。因此，前期进液、换液和排液都需要实验人员手动操作，另外，染色、脱色时间也只能靠实验人员自己把握。 再者，台式水平脱色摇床的工作池一般裸露在外，摇摆过程中，有可能溅出溢出CBB染色液、脱色液，还有可能挥发出有毒化合物。这样不仅容易造成污染，甚至可能产生安全隐患，进而危害实验人员的健康。 相比之下，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色仪无论在功能上、设计上还是外观上均领先台式水平脱色摇床，例如： 1.智能编程功能： GS-Smart内置3种标准的染色程序，可编程存储47个自定义程序，可以轻松实现进液、换液、出液、定时摇动和废液回收等步骤，无人值守，让实验全程自动完成，这将为那些还在使用传统台式水平脱色摇床做CBB染色脱色实验的科研工作者们节省大量时间精力。 2.可封闭可定制的染色池： GS-Smart染色池可封闭，既能防止液体溅出溢出、阻隔挥发物质，还可选择并定制各种尺寸。有些科研工作者为实现&ldquo 快速&rdquo CBB染色脱色，习惯将CBB染色液或脱色液加热至沸腾然后进行染色脱色处理，而高温状态的液体会加速挥发甲醇乙酸等化合物，如果此时使用台式水平脱色摇床，无疑具有一定的安全隐患。 3.机身与储液瓶一体化设计： 该设计属于国际首创，与市场同类产品相比，减少了分散在外的瓶瓶罐罐，从而整机占地面积与普通台式水平脱色摇床相当。不仅节省了实验室空间，同时也美化了整体外观。 综上，在CBB染色脱色实验应用方面，鼎昊源GS-Smart小型自动凝胶染色仪无论在功能上、设计上还是外观上均全面领先于台式水平脱色摇床。事实上，GS-Smart从2013年春季推出之初，就定位成了一款为考马斯亮蓝染色脱色实验而生的仪器，她的最终使命是全面取代CBB染色脱色实验中的台式水平脱色摇床，从而让所有CBB染色脱色自动进行！ 本文关键词：摇床,脱色摇床,水平脱色摇床

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自新冠病毒奥密克戎变异株出现以来，其子代变异株井喷式涌现，并呈现出“趋同演化”的趋势，大量中和抗体药物和康复者血浆已经“被逃逸”，这给新冠疫情的防控带来了十分严峻的考验。“趋同演化”现象的形成机制以及演化终点亟需深入探究。北京大学生物医学前沿创新中心（BIOPIC）、北京昌平实验室曹云龙研究员/谢晓亮教授课题组联合中国食品药品检定研究院王佑春课题组于2022年12月19日在《自然》（Nature）杂志在线发表了题为“Imprinted SARS-CoV-2 humoral immunity induces convergent Omicron RBD evolution”的研究论文，系统地探究了新冠病毒受体结合域（RBD）“趋同演化”的机制，并前瞻性地对病毒未来突变演化方向进行了预测，为广谱疫苗和抗体药物的设计与研发提供了宝贵的理论与数据支持。研究人员对不同免疫背景人群中分离得到的抗体进行了大规模中和测定和逃逸图谱表征，发现病毒趋同进化产生的变异株几乎逃逸了目前所有中和抗体药物、疫苗接种者或康复者血浆，包括BA.5突破感染者血浆。并且，由于“免疫印迹”现象的存在，奥密克戎亚型变体突破感染后产生的抗体多样性逐渐降低，特别是BA.5突破感染，这提示基于BA.5变异株研发的疫苗加强针不能对新出现变异株产生良好的交叉防感染保护效果。另外，研究者基于抗体的大规模中和测定和逃逸图谱表征的数据建立了一个计算模型，对病毒演化方向进行了合理预测。尽管这些新突变株，特别是其中的XBB、BQ.1.1和CH.1.1等支系具有前所未有的免疫逃逸能力，作者团队此前筛选出的广谱中和抗体药物组合SA55+SA58，特别是SA55，仍然强效中和所有主要突变株和未来短期内可能流行的突变株，且能同时具有治疗和预防作用，是目前唯一已知能够高效中和所有新突变株的、处于临床阶段的药物抗体，相关论文此前于12月初发表于知名生命科学期刊《细胞报道》（Cell Reports）。该抗体具有广谱中和能力强、将很难被未来变异株逃逸、半衰期长等特征，将特别适用于不适合接种疫苗的老年人、免疫缺陷人群等群体的防护。本研究最早于2022年9月16日在线发布于bioRxiv预印本平台，是世界首篇系统性研究新冠病毒“趋同演化”机制，预测病毒进化方向的研究论文，在国际学术界引起了广泛关注。病毒的持续突变演化使得多种较高增长优势的变异株陆续涌现，BA.2.3.20、BA.2.75.2及其支系，乃至最近出现的BQ.1.1和XBB等变异株相比于BA.5都具有更高的增长优势。尽管它们的进化过程各不相同，处于奥密克戎的不同支系，但其受体结合结构域（RBD）上的突变都集中于R346、K356、K444、V445、G446、N450、L452、N460、F486、F490、R493和S494等位点，呈现出“趋同演化”的趋势（图1）。图1 奥密克戎亚型变体RBD蛋白携带的突变中和测定的数据提示“趋同演化”产生的变异株具有极强的逃逸能力，绝大多数中和抗体药物都被以XBB为代表的变异株逃逸（图2），包括此前已初步进入国内市场的阿斯利康公司Evusheld（“恩适得”）预防抗体药物。由于此类新突变株的流行，美国FDA也取消了礼来公司Bebtelovimab（贝特洛韦单抗）的使用授权。唯一的例外是作者团队开发的SA55抗体，它是目前唯一对包括XBB和BQ.1.1等在内的所有突变株仍旧有效的进入临床阶段的抗体药物（图3）。图2 奥密克戎亚型对中和抗体药物的逃逸情况图3 广谱中和抗体SA55和SA58血浆中和数据也显示，XBB，CH.1.1和BQ.1.1.10（或BQ.1.18）等毒株不仅逃逸了三针灭活疫苗接种者的血浆，也几乎完全逃逸奥密克戎BA.1/BA.2/BA.5突破感染者的血浆样本，显示出极大的免疫逃逸能力（图4）。图4 奥密克戎亚型逃逸疫苗接种者与康复者血浆中和为了探究不同奥密克戎变异株呈现“趋同演化”现象的具体机制，团队从BA.1、BA.2或BA.5突破感染康复者体内富集了抗原特异性记忆B细胞，发现其中大部分记忆B细胞交叉结合新冠原始株和奥密克戎变异株，印证了之前作者团队报道的存在于奥密克戎突破感染中的“免疫印迹”现象。基于高通量深度突变扫描技术，团队对不同来源的3051个交叉结合新冠原始株与奥密克戎变异株的抗体进行了突变逃逸图谱测定与聚类分析（图5a），发现奥密克戎特别是BA.5变体突破感染刺激产生的有效中和抗体种类明显减少，产生的主要是E2.2、E3和F1等不竞争ACE2结合表位且中和能力较弱的抗体（图5b-d)。图5 奥密克戎亚型变异株突破感染刺激产生抗体的表位表征基于抗体逃逸图谱、抗体中和活性、RBD突变对于ACE2亲和力变化等数据，团队建立了一个模型，分别计算了BA.2和BA.5突破感染刺激产生抗体的突变逃逸图谱（图6a），结果显示，BA.5突破感染刺激产生抗体的突变逃逸位点显著减少，表明其结合表位多样性明显减少。这提示，免疫印迹现象使得奥密克戎变异株突破感染刺激产生中和抗体表位多样性降低，导致免疫压力集中，从而加速了病毒的趋同进化。在此基础上，研究者基于2022年8—9月真实世界的主流免疫状态，基于计算模型预测了BA.2.75和BA.5的进化趋势（图6b），这在随后趋同进化产生的新毒株中得到验证。图6 免疫印迹效应加速了抗体逃逸突变的趋同进化另外，研究人员基于BA.2.75和BA.5突变株的预测进化趋势，设计了携带不同RBD和NTD预测突变组合的假病毒（图7a），并测定了这些假病毒对不同中和抗体药物和血浆样本的中和情况及ACE2亲和力（图7b-g），结果显示，对BA.5或BA.2.75突变株最少引入5个突变就可以逃逸包括BA.5突破感染者在内的不同免疫状态下的几乎所有血浆样本。并且，合成的假病毒与之后真实世界流行的BQ.1.1支系、CH.1.1支系等高度相似，验证了预测模型的准确性。图7 趋同逃逸突变的累积能够几乎完全逃逸BA.1/BA.2/BA.5突破感染血浆的中和作用本研究揭示了“免疫印迹”造成的奥密克戎突破感染刺激产生抗体表位多样性降低，进而导致免疫压力集中化，促使新冠病毒RBD蛋白发生趋同演化的现象，这些积累趋同进化突变的病毒在获得极强突变逃逸能力的同时，也保持了较高ACE2亲和力。本研究中的预测方法为预测病毒突变演化趋势、开发广谱疫苗和抗体药物提供了参考资料，且具有扩展到其他体系的潜力。同时，研究结果也提示，基于BA.5突变株研发的疫苗对于其他变体的交叉保护效果很可能不够理想，进一步开发设计能够克服免疫印迹、激活广谱中和抗体的新型疫苗至关重要。而以SA55+SA58抗体组合为代表的广谱中和抗体既可以通过鼻喷给药方便快捷地在呼吸道建立短效预防，又可以通过注射实现感染初期的治疗和中长期预防，特别适用于保护高风险的医护人员以及不宜接种疫苗的免疫缺陷人群和老年人。SA55与SA58已经授权给科兴生物进一步开发，初步的单盲随机对照试验显示，喷雾吸入一次提供的即时保护可维持6—12小时，预防感染效率可达到80%以上，且成本较低，方便使用，目前正在进行更严谨的临床试验，预计将来可以大规模推广。北京昌平实验室、北京大学生物医学前沿创新中心曹云龙研究员，北京大学博士研究生简繁冲、王菁、宋玮良，中国食品药品检定研究院于原玲为Nature论文的共同第一作者。北京昌平实验室、北京大学生物医学前沿创新中心曹云龙研究员、谢晓亮教授、中国食品药品检定研究院王佑春研究员为Nature论文的共同通讯作者。北京昌平实验室、北京大学生物医学前沿创新中心曹云龙研究员，北京大学博士研究生简繁冲、张志莹、阿依江伊斯马衣，地坛医院郝晓花博士，北京协和医学院鲍琳琳研究员为Cell Reports论文的共同第一作者。北京昌平实验室、北京大学曹云龙研究员、谢晓亮教授、肖俊宇教授，北京协和医学院秦川教授，地坛医院金荣华院长为Cell Reports论文的共同通讯作者，北京大学、昌平实验室、动物所、中检院、科兴公司等单位的相关科研人员为共同作者。本系列研究得到科技部、昌平实验室基金、国家自然科学基金和北京市科技计划支持。参考文献[1] Cao, Y. et al. Imprinted SARS-CoV-2 humoral immunity induces convergent Omicron RBD evolution. Nature (2022).[2] Cao, Y. et al. Omicron escapes the majority of existing SARS-CoV-2 neutralizing antibodies. Nature (2022).[3] Cao, Y. et al. BA.2.12.1, BA.4 and BA.5 escape antibodies elicited by Omicron infection. Nature (2022).[4] Cao, Y. et al. Rational identification of potent and broad sarbecovirus-neutralizing antibody cocktails from SARS convalescents. Cell Rep. (2022)专家点评：清华大学医学院祁海教授：这一工作深入探究了构成当前新冠大流行的多个奥密克戎毒株对人类群体免疫的逃逸规律。曹云龙/谢晓亮联合团队发现，多个奥密克戎株亚型在受体结合蛋白上都显现出相同或类似的逃逸突变。这些突变，在保证病毒结合其受体的同时，躲避了之前中和抗体的抑制作用。这说明，人群序贯疫苗接种和自然感染所构建起的群体免疫，的确在阻断并降低既往毒株感染；同时，这种群体免疫的压力，也为未来病毒变异留下了越来越少的潜在逃逸路径。那么，我们是否可以根据已有的群体免疫状态和现有毒株的受体结合蛋白，来预测未来最有可能出现的逃逸突变呢？曹云龙/谢晓亮联合团队利用他们开发的一种高通量深度突变扫描（DMS）方法，分析、鉴定了BA5和BA2可能逃逸群体免疫的突变。非常重要的是，他们预测出来的突变，确实出现在了其它具有流行潜力的毒株上。曹云龙/谢晓亮联合团队这项研究所提供的这种预测能力，可以帮助我们更高效地设计广谱抗新冠疫苗，也会使我们更可能为所有潜在逃逸现有群体免疫的毒株准备好“特效药”。中国科学院生物物理所王祥喜研究员：新冠病毒一直在持续性进化，衍生出多种突变株；然而在奥密克戎出现之后，新冠病毒的演变速度明显加快。近半年来，就有BA.5、BF7、BA.2.75、BQ、XBB等近十种新突变株在一些国家成为主要流行突变株。这些新突变株往往其传染性和抗体逃逸能力都在增强。总体来讲，人类对新冠病毒的研究是被动地跟着病毒跑，一个新突变株出现后再去了解它的病毒特性，去探究新突变株对现有疫苗和药物的影响。如何前瞻性预测病毒演变的方向，提前预判未来一段时间内可能出现的突变株具有重要的战略意义。2022年12月19日，北京大学谢晓亮/曹云龙团队联合中检院王佑春团队在Nature上发表题为“Imprinted SARS-CoV-2 humoral immunity induces convergent OmicronRBD evolution”的研究论文，这是该团队继新冠中和抗体、新冠疫苗效果评估、追踪新突变株免疫逃逸特性后，又一系统性而创新性工作。该项研究有五点重要发现：1）从庞大的数据库中分析出近期有几十个新突变株其生长优势超越BA.5，且这些突变株有一定的共性，在某些特定位点携带相同或相似的突变，呈现趋同进化规律；2）这些新突变株展示出极强的抗体逃逸特性，基本逃逸国际上已批准上市的抗体药物；3）一个抗体对组合SA55/SA58（也是该团队的研究成果）依然高效中和这些新突变株；最后两点更精彩：4）从原始株感染康复者、BA.1/BA.2/BA.5突破感染者等不同免疫背景分离2000余株抗体，并绘制出不同免疫背景下抗体谱系特征。相对之前的免疫背景，BA.5突破感染者的主要中和抗体类别相对单一，非中和抗体比例提高，更容易滋生病毒变异去逃逸宿主免疫；5）利用高通量酵母展示技术精准绘制出抗体免疫逃逸图谱，与BA.2突破感染的免疫背景相比，BA.5突破感染中和抗体的免疫逃逸位点相对集中且大多出现在近期出现的突变株上。实验数据与真实世界监测结果高度一致。这一研究成果能够实现对未来一段时间内新突变株的精准预测，预先了解这些新突变株的病毒特性能够为科学精准防控留出宝贵的时间窗口。

全球新冠疫情受Delta变异株席卷，各个国家关于加强针的讨论十分激烈。Delta变种的传染率前所未有，对比新冠病毒原始毒株高出43%以上。科兴灭活疫苗三针加强数据近日首次披露，疫苗接种6个月后，需要第三剂强化。接种第三剂后，28天中和抗体滴度比第二剂后28天中和抗体滴度显著增加3-5倍。目前，大部分疫苗需要接种两针。莫德纳（Moderna）CEO Stephane Bancel指出，Moderna的mRNA疫苗由于不会提供永久保护，可能需要补打第三针。我国智飞生物曾发布公告，其重组蛋白疫苗需要接种三剂。晕针的小伙伴们听闻此消息不禁胳膊一紧。是否有接种一剂，就起到终身防护作用的疫苗呢？是否有接种一剂，就能起到多种传染病免疫保护的疫苗呢？比利时鲁汶大学Rega研究所的病毒学家率先在仓鼠上实验成功，接种一剂基于黄热病毒YF17D载体的新冠病毒候选减毒疫苗（YF-S0）即可保护仓鼠免受新冠病毒和黄热病的感染。本项研究发表在Nature（IF：43）杂志上。研究结论候选疫苗YF-S0具有良好的安全性，可诱导仓鼠、小鼠和猕猴产生高水平SARS-CoV-2中和抗体，并同时产生具有抗黄热病的保护性免疫；体液免疫由小鼠中Th1细胞介导的免疫反应补充；在仓鼠和非人类灵长类动物模型中，YF-S0可预防SARS-CoV-2感染；单剂量注射即可在10天内保护大多数接种过疫苗的动物免受肺部疾病侵袭；为何选择黄热病毒减毒株YF17D为疫苗载体？黄热病毒减毒株YF17D疫苗载体，可快速诱导广泛的多功能先天免疫、体液免疫和细胞介导的免疫反应。YF17D作为疫苗载体，安全吗？YF17D做为载体，已有两个获批许可上市的人类疫苗：日本脑炎（Imojev® ）和登革热病毒（Dengvaxia® ）。试验动物模型及免疫流程？仓鼠、小鼠和猕猴研究展望该项研究基于临床前动物实验，单剂接种后可快速产生高质量保护性免疫反应，需要正式的临床试验数据加以证明。不过小编和大家一样真心期待，一剂就起效的疫苗尽早上市！要疫苗，不要疫苗苗苗。ProteinSimple全自动Digital Western贡献&亮点不同YF-S候选疫苗转导BHK-21细胞后，SARS-CoV-2刺突蛋白(S1/2, S0和S1) 表达免疫印迹分析。分析前，细胞裂解液经PNGase F（肽-N-糖苷酶F）处理后，去除其N-连接寡聚糖或者未经处理（黑箭头：糖基化形式的S蛋白；白箭头：无N-连接寡聚糖的去糖基化蛋白）。对同一试验进行两次重复，得到相似结果。研究人员利用ProteinSimple全自动Digital Western Blot系统，检测候选减毒疫苗（YF-S0）抗原 S 蛋白（糖基化和去糖基化的 S1/2, S0,S1）的表达情况。分子量高达440 KDa的糖基化S1/2和S0蛋白，可轻松检出。对于小分子量蛋白（细胞因子、趋化因子、神经递质，等等），全自动Digital Western Blot系统的检测下限为2 KDa。从该组图片中，不难感受到突破传统Western Blot的极佳重复性。参考文献：A single-dose live-attenuated YF17D-vectored SARS-CoV-2 vaccine candidate[J]. Nature，2021.

一、项目基本情况项目编号：11000023210200059359-XM001项目名称：北京市疾病预防控制中心艾滋病检测试剂采购项目预算金额：2221.4632 万元（人民币）采购需求：包号品目号采购品目明细采购数量（盒）是否接受进口产品总价（人民币万元）11-1人类免疫缺陷病毒(HIV 1+2型)抗体检测试剂盒(免疫印迹法A)100否77.520022-1人类免疫缺陷病毒(HIV 1+2型)抗体检测试剂盒(免疫印迹法B)100是60.120022-2CD4/CD8 淋巴细胞检测试剂（C）16是12.800033-1人类免疫缺陷病毒(HIV1+2)抗体确证试剂盒(条带免疫法)10是3.370033-2CD4/CD8 淋巴细胞检测试剂（A）342是273.258033-3CD4/CD8 淋巴细胞检测试剂（B）40是44.360044-1人类免疫缺陷病毒（HIV-1）病毒载量检测试剂（A）268是1129.459255-1人类免疫缺陷病毒（HIV-1）病毒载量检测试剂（B）102是216.648066-1人类免疫缺陷病毒（HIV-1）病毒载量检测试剂（C）110否151.008077-1人类免疫缺陷病毒（HIV-1）病毒载量检测试剂（D）250是107.000088-1CD4/CD8 淋巴细胞检测试剂（D）384否145.9200■本项目1包、4-8包为单一产品采购项目。■本项目第2包为非单一产品采购项目，核心产品为： 人类免疫缺陷病毒(HIV 1+2型)抗体检测试剂盒(免疫印迹法B)■本项目第3包为非单一产品采购项目，核心产品为： CD4/CD8淋巴细胞检测试剂（A）其他详见附件合同履行期限：自合同签订之日起至合同项下全部义务履行完毕。本项目不接受联合体投标。二、获取招标文件时间：2023-09-19 至 2023-09-26 ，每天上午09:00至11:00，下午13:30至17:00（北京时间，法定节假日除外）地点：北京市政府采购电子交易平台方式：供应商持CA数字认证证书登录北京市政府采购电子交易平台（http://zbcg-bjzc.zhongcy.com/bjczj-portal-site/index.html#/home）获取电子版招标文件。售价：￥0 元，本公告包含的招标文件售价总和三、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。1.采购人信息名 称：北京市疾病预防控制中心　　　　　地址：北京市东城区和平里中街16号　　　　　　　　联系方式：郝冲,64407307　　　　　　2.采购代理机构信息名 称：中招国际招标有限公司　　　　　　　　　　　　地　址：北京市海淀区学院南路62号院1号楼6层(601-615室)、9层(903-915室)　　　　　　　　　　　　联系方式：范君、曹武宁、卢燕、梅建伟，010-62108225　　　　　　　　　　　　3.项目联系方式项目联系人：范君、曹武宁、卢燕、梅建伟电　话：　　010-62108225

GEWestern Blot实验相关产品秋季开学特惠 活动日期： 2012年即日起至10月31日 GE从蛋白制备、电泳、转印及杂交到显色、成像，为您带来完全的蛋白印迹方案。 详情请见www.reagent.com.cn 细胞组织裂解 -- 样本研磨试剂盒 蛋白抽提 -- 蛋白抽提缓冲液试剂 蛋白稳定化 -- 混合蛋白酶抑制剂及核酶 混合物 蛋白分级化 -- 蛋白分级试剂盒 蛋白定量 -- 蛋白定量试剂盒 垂直电泳 -- SE250/SE260 电泳试剂 蛋白Marker -- 彩虹分子量标准 蛋白Marker -- Amersham ECL DualVue 免疫 印迹标准

2014年9月24日-26日，中国上海——GE医疗生命科学隆重亮相第七届慕尼黑上海分析生化展。作为生命科学领域客户的首选合作伙伴，期间全球同步发布新产品Amersham WB一体化蛋白免疫印迹系统，并展示了多款先进仪器与解决方案。 GE医疗生命科学科研与应用市场大中国区总经理牟一萍女士表示：“GE医疗生命科学旗下拥有众多享有盛誉的技术和产品，很多品牌都在业界居领导地位，曾经帮助全球众多科学家取得科研成就，得到诸如诺贝尔奖这样的殊荣。此次我们借助第七届慕尼黑上海生化分析展这个盛会平台，将更多更先进的仪器展示介绍给广大中国生命科学研究人员，希望可以帮助中国的用户取得更大的成就，从而推动中国生物制药和生命科学研究的发展。” Amersham WB，开启蛋白免疫印迹技术新时代GE医疗生命科学在展会期间全球同步发布Amersham WB蛋白免疫印迹系统，这是第一台完全集成化的系统，将传统蛋白免疫印迹实验方法标准化，电泳、扫描、转印、印迹一气呵成，从而帮助研究人员获得可信赖的一致性定量蛋白分析结果。Amersham WB系统由Amersham WB分析仪、Amersham WB软件和用于电泳与蛋白免疫印迹的专用耗材组成。此一体化系统在每个步骤都使用标准化的方案以将实验数据差异减少到最小，并且仅需4个小时就可以完成整个过程得到最后结果。通过将传统蛋白免疫印迹流程标准化，不同操作者的数据差异可以显著地降至10%1以下。该系统的一致性和重现性为增进疾病研究和开发新治疗方案提供了强大的定量数据，而差异的减少意味着无需进行多次重复和对照实验就可以获得确定的、定量的数据，从而节省大量科研经费和时间。 AKTA avant五周年庆祝活动，与客户共同回顾辉煌历程作为GE医疗生命科学经典品牌之一，AKTA凭借一贯优异的实验表现，在蛋白纯化领域的始终占据领先地位。2009年，GE医疗生命科学正式发布AKTA avant系列，也开启了AKTA的红色时代，相继推出AKTA pure、AKTA start等不同功能的纯化平台。此次慕尼黑上海生化分析展，正值AKTA avant 发布五周年，GE医疗生命科学在展台举办庆祝活动，与客户共同回顾这一著名蛋白纯化品牌的发展历史和辉煌成就。当天下午展台举办的AKTA pure模型拼插大比拼活动，吸引众多现场观众参加，在紧张的拼插游戏中找回童趣，也更直观地了解了AKTA pure模块化设计的理念。 三大科技平台，完整展示生命科学研究解决方案GE医疗生命科学旗下拥有众多知名品牌，多年来在相关领域占据领导地位。此次展会期间，GE医疗生命科学带来包括生物分子互作与活性功能平台、蛋白纯化与过滤平台、蛋白免疫印迹系统三大类技术，完整展示生命科学研究解决方案。来宾可以在展台看到多款明星产品，包括AKTA avant 蛋白纯化系统、AKTA flux膜过滤系统、Biacore X100生物分子互作系统、HiTrap层析柱、Cytell全自动细胞分析仪、以及Whatman过滤及样品收集、样品前处理产品等。同时，来宾还可以通过现场的iPad展示和多场活动深入了解GE医疗生命科学的产品和技术。展会同期举办的 “组学与个性化治疗” 专题研讨会上，GE医疗生命科学的产品经理宁丰收将就“蛋白质相互作用—从体内到体外的相互验证研究”与现场听众进行交流。 了解更多GE医疗生命科学展会信息，敬请光临第七届慕尼黑上海分析生化展N1馆1400号展台。 1、 GE医疗生命科学内部测试数据，将于9月28日举行的ComBio2014大会上作为海报展示 关于GE医疗集团GE医疗集团提供革新性的医疗技术和服务，以满足需求，使全世界更多的人能够以更可负担的成本获得更好的医疗服务。GE（纽约证交所：GE）专注于世界至关重要的问题，以优秀人才和领先技术致力于应对行业重大挑战。GE医疗集团在医学成像、软件和信息技术、患者监护和诊断、药物研发、生物制药技术、卓越运营解决方案等多个领域，助力专业医务人员为患者提供优质的医疗服务。

前言免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，它是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体（或抗原）上，与其相应的抗原（或抗体）结合后，在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织，从而确定抗原或抗体的性质和定位，以及利用定量技术（比如流式细胞仪）测定含量。直接法将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。间接法如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。标记的抗抗体是抗球蛋白抗体，同于血清球蛋白有种的特异性，如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应，因此，制备标记抗体适用于任何抗原的诊断。一、实验步骤免疫荧光实验的主要步骤包括 样片制备、固定及通透（或称为透化）、封闭、抗体孵育、封片及荧光检测等。1、 样品准备对于单层生长细胞，在传代培养时，将细胞接种到预先放置有处理过（70%乙醇中浸泡）的盖玻片的培养皿中，待细胞接近长成单层后取出盖玻片即可，操作过程要小心，防止细胞脱片。对于悬浮生长细胞，有两种方式，一种是取对数生长细胞，制备细胞片或直接制备细胞涂片，把细胞片浸入封闭液中固定，封闭后滴加一抗和二抗孵育；另一种是先在悬浮液中进行固定和染色，离心洗脱后，用移液管移至盒式玻片进行后续抗体孵育。对于冰冻切片制备，建议用新鲜组织，否则组织细胞内部结构破坏，易使抗原弥散。组织一定要冷冻适度，切片时选用干净锋利的刀片，防止裂片和脱片。对于石蜡切片的制备，要先进行脱蜡和抗原修复的处理。2、固定做好切片并风干后立即用合适的固定液（固定液包括有机溶剂和交联剂，其选择取决于抗原的性质及所用抗体的特性）进行固定，尤其要较长时间保存的白片，一定要及时固定和适当保存。固定时间则取决于固定组织切片的大小和类型，对大多数组织，18-24h即可，而细胞的固定时间较短。3、通透针对胞内抗原，使用0.5% Triton X-100或丙酮等通透剂进行通透，这一步的目的是使抗体进入胞内。 4、封闭为防止内源性非特异性蛋白抗原的结合，需要在一抗孵育前先用封闭液（一般包括与二抗同一来源的血清、BSA或者羊血清）封闭，减弱背景着色。封闭开始后，要注意样品的保湿，避免样品干燥，否则极易产生较高的背景。5、一抗孵育一抗孵育温度一般分为：4℃、室温、37℃，其中4℃效果更佳；孵育时间与温度、抗体浓度有关，一般37℃孵育1-2h，4℃过夜（从冰箱拿出后37℃复温45min）。具体条件还要根据样品、稀释液等条件进行摸索尝试。6、荧光二抗孵育荧光二抗孵育一般在室温或37℃孵育30min-1h，该过程必须在避光环境下进行，防止荧光淬灭。荧光素标记的二抗随着保存时间的延长，可能会有大量的游离荧光素残留，需要注意配制时采用小包装并进行适当的离心。7、复染一般采用DAPI进行复染，目的是形成细胞轮廓，从而更好地对目标蛋白进行定位。8、封片为了长期保存，我们需要对样本进行封片，用吸水纸吸干爬片上的液体，一般用缓冲甘油等或专门的抗荧光淬灭的封片液。9、 荧光观察有条件的话最好立即用荧光显微镜观察拍照，若不能及时拍照，也要做好封片和封固，保持避光和湿度。荧光显微镜的成像能力对最终的结果也会造成很大的影响，好的荧光显微镜能够最大限度地收集荧光信号，并呈现高分辨率的图片，使细节更清楚，更易得到一张效果极佳的结果图。注意：切片清洗：为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色，所以适当地加强清洗(延长时间和增多次数)尤为重要，一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次，而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。(1)单独冲洗，防止交叉反应造成污染；(2)温柔冲洗，防止切片的脱落。可使用浸洗方式；(3)冲洗的时间要足够，才能彻底洗去结合的物质；(4)PBS的PH和离子强度的使用和要求（建议PH在7.4-7.6，浓度是0.01M；中性及弱碱性条件有利于免疫复合物的形成，而酸性条件则有利于分解；低离子强度有利于免疫复合物的形成，而高离子强度则有利于分解）。根据上述步骤完成免疫荧光实验后，就需要进行荧光显微成像，得到我们想要的结果。选择一款操作简单、成像清晰、效果卓越的荧光显微镜进行观察拍照，才能轻松得到更为理想的结果图，达到事半功倍的效果。Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜Echo Revolve正倒置一体荧光显微镜作为一款电动化、智能化的显微镜，具有以下优势：☑ 正倒置一体快速切换：切片、细胞观察随心切换，无惧任何耗材；☑ DHR数字降噪功能：极大地降低了背景噪音和荧光干扰，提高图像锐度，加深细节，得到分辨率更高的图片；☑ 强大的Z-Stacking功能：通过高精度电动化Z轴层扫来扩大景深，解决厚样本观察问题，提高图像分辨率；☑ 500MP单色相机：能够采集更多荧光信号，助力低荧光强度样本观察；☑ 多通道荧光自动拍摄叠加功能：可自动进行多通道成像的叠加，个性化选择查看/保存各通道的组合图像。

一、项目基本情况项目编号：[231101]HHSC[GK]20230008项目名称：黑河市中心实验室突发急性传染病病原体快速检测能力建设项目采购方式：公开招标预算金额：21,353,000.00元采购需求：合同包1(黑河市中心实验室突发急性传染病病原体快速检测能力建设项目):合同包预算金额：21,353,000.00元品目号品目名称采购标的数量（单位）技术规格、参数及要求品目预算(元)最高限价(元)1-1其他医疗设备病毒载量仪2(台)详见采购文件3,400,000.00-1-2其他医疗设备微生物飞行质谱鉴定仪1(台)详见采购文件3,000,000.00-1-3其他医疗设备流式细胞仪1(台)详见采购文件1,500,000.00-1-4其他医疗设备全自动HIV病毒载量检测系统2(台)详见采购文件1,200,000.00-1-5其他医疗设备原子荧光分光光度计1(台)详见采购文件500,000.00-1-6其他医疗设备液相色谱-原子荧光联用仪1(台)详见采购文件700,000.00-1-7其他医疗设备三重四级杆质谱仪1(台)详见采购文件3,200,000.00-1-8其他医疗设备全自动氮吹浓缩仪1(台)详见采购文件200,000.00-1-9其他医疗设备色度仪1(台)详见采购文件10,000.00-1-10其他医疗设备浊度仪1(台)详见采购文件10,000.00-1-11其他医疗设备测汞仪1(台)详见采购文件500,000.00-1-12其他医疗设备超纯水制备系统1(台)详见采购文件450,000.00-1-13其他医疗设备气相色谱仪1(台)详见采购文件468,000.00-1-14其他医疗设备自动洗板机1(台)详见采购文件35,000.00-1-15其他医疗设备均质器1(台)详见采购文件30,000.00-1-16其他医疗设备荧光定量PCR（分析纯）2(台)详见采购文件3,600,000.00-1-17其他医疗设备全自动免疫印迹仪1(台)详见采购文件150,000.00-1-18其他医疗设备数字PCR1(台)详见采购文件2,400,000.00-本合同包不接受联合体投标合同履行期限：自合同签订之日起6个月二、获取招标文件时间： 2023年12月14日 至 2023年12月21日 ，每天上午 00:00:00 至 12:00:00 ，下午 12:00:00 至 23:59:59 （北京时间,法定节假日除外）地点：公告期内凭用户名和密码，登录黑龙江省政府采购管理平台(http://hljcg.hlj.gov.cn/)，选择“交易执行-应标-项目投标”，在“未参与项目”列表中选择需要参与的项目，确认参与后即可方式：在线获取售价： 免费获取三、对本次招标提出询问，请按以下方式联系。1.采购人信息名称：黑河市疾病预防控制中心地址：黑河市电业街132号联系方式：0456-61037372.采购代理机构信息名称：黑河市政府采购中心地址：黑河市通江路10号联系方式：0456-26661843.项目联系方式项目联系人：郭睿电话：0456-2666184

了解ibright™ 智能成像系统——蛋白质免疫印迹成像的最新进展。新品发布——ibright智能成像系统全新invitrogen™ ibright™ 智能成像系统重磅上市！通过强劲的系统配置、先进的自动化功能和友好的用户界面，ibright成像系统可显著提升蛋白免疫印迹实验体验，助您轻松获得理想结果。灵活多样的成像方案——适用于多色荧光western blot印迹、化学发光western blot印迹、蛋白凝胶和核酸凝胶成像一键式优化曝光——smart exposure™ 智能曝光技术与高灵敏910万像素冷ccd相机的结合，具备强劲的成像性能简洁流畅的操作体验——直观友好的界面设计结合高度自动化功能，帮助各种经验水平的研究人员快速上手多重成像能力——实现多达4色荧光western blot的多重成像，拓展了在单块印迹上同时检测多种蛋白质的能力小体积，大视野——紧凑的一体化设计与大尺寸成像视野兼具，可一次采集多达4块小型印迹膜或凝胶图像即刻加速您的蛋白质免疫印迹研究进程，请点击thermofisher.com/ibright

近期，西湖大学理学院何睿华课题组连同研究合作者一起，发现了世界首例具有本征相干性的光阴极量子材料，其性能远超传统的光阴极材料，且无法为现有理论所解释，为光阴极研发、应用与基础理论发展打开了新的天地。3月8日，相关论文“Anomalous intense coherent secondary photoemission from a perovskite oxide”，已提前线上发表于Nature期刊。西湖大学博士研究生洪彩云、邹文俊和冉鹏旭为共同第一作者，西湖大学理学院长聘副教授何睿华为通讯作者。全部实验和理论工作都在西湖大学完成。摄影师镜头下，首例具有本征相干性的光阴极量子材料：钛酸锶。光阴极：辉煌的出身，沉寂的领域，现代科技的基石之一1887年，德国物理学家赫兹在实验中意外发现，紫外线照射到金属表面电极上会产生火花。1905年，爱因斯坦基于光的量子化猜想，提出了对该现象的理论解释。这标志着量子力学大门的正式开启，因为这个贡献，爱因斯坦于1921年被授予诺贝尔物理学奖。由此，将“光”转化为“电”的“光电效应”，以及能够产生这个效应的“光阴极”材料，正式进入了人类的视野。伴随着对光电效应理解的加深，人们后来发展出了更完善的理论，能够解释所有光阴极材料的基本性能，并成功预言了当时未知的光阴极材料。这些光阴极材料基本上都是传统金属和半导体材料，大多数在60年前被发现。它们已经成为当代粒子加速器、自由电子激光、超快电镜、高分辨电子谱仪等尖端科技装置的核心元件。这类高精尖设备除了常见于实验室，还被应用在大众生活中，如粒子加速器已被用于治疗癌症、杀灭细菌、开发包装材料、改进车辆的燃料注入等。简单说来，光阴极材料是否“好用”，直接关系着这类设备的性能。然而，这些传统的光阴极材料存在固有的性能缺陷——它们所发射的电子束“相干性”太差，也就是电子束的发射角太大，其中的电子运动速度不均一。这样的“初始“电子束要想满足尖端科技应用的要求，必须依赖一系列材料工艺和电气工程技术来增强它的相干性，而这些特殊工艺和辅助技术的引入极大地增加了“电子枪”系统的复杂度，提高了建造要求和成本。钛酸锶：量子材料之光，光阴极领域的潜在重启者尽管基于光阴极的电子枪技术最近几十年来有了长足的发展，但它已渐渐无法跟上相关科技应用发展的步伐。许多前述尖端科技的升级换代呼唤初始电子束相干性在数量级上的提升，而这已经不是一般的光阴极性能优化所能实现的了，只能寄望于在材料和理论层面上的源头创新。长期深耕材料物理性质研究的西湖大学理学院何睿华团队，意外在一个同类物理实验室中“常见”的身影——钛酸锶上实现了突破。近年来兴起的一大类新的材料——量子材料，以其复杂多变的性质和丰富多样的功能而著称。具有钙钛矿结构的钛酸锶（SrTiO3）是这类材料的重要代表之一。被誉为“钛酸锶之父”、高温超导发现人、诺贝尔物理学奖获得者K. A. Muller教授称钛酸锶为“固体物理中的果蝇”，因为很多重要的固体物理现象都是首先从该材料上发现的，其中还包括许多尚未被理解的现象。然而，以钛酸锶为首的氧化物量子材料研究，其主流是将这些材料当作硅基半导体的潜在替代材料来研究，主要关注的是它们独特的电子学相关性质。但何睿华团队却在实验中发现，这些熟悉的材料竟然同样承载着触发新奇光电效应的能力——它有着远超于现有光阴极材料的光阴极关键性能：相干性（见图1说明），从而极大地弥补了现有光阴极材料的缺憾。图1. 钛酸锶和其他材料的初始电子束能谱分析对比。前者具有更高的初始电子束相干性，具体体现为：电子发射动能能量发散度小于0.01 eV（a），发散角小于2°（b），相比普通材料的约0.5 eV和20°有了数量级上的提升。Nature论文匿名审稿人指出：“与类似实验条件下的其他现有光阴极相比，钛酸锶光阴极最重要的性质是它所发射的初始电子束所具有的相干性有了数量级上的提升。这种性能上的巨大飞跃允许（人们）完整获得具有本征相干性的电子束，而无需为了提高相干性而牺牲电子束流强度。这一发现可能会导致光阴极技术发生范式转变，该技术长期以来一直受困于（电子枪）电子束不能同时具有高相干性和高束流强度的矛盾，（这个矛盾的）根源就在于初始电子束的本征非相干性。”超快电镜专家、论文合作者、西湖大学理学院研究员郑昌喜认为，合作团队发现的重要性“不在于往钛酸锶的神奇性质列表增添了一个新的性质，而在于这个性质本身，它可能重启一个极其重要、被普遍认为已发展成熟的光阴极技术领域，改变许多早已根深蒂固的游戏规则”。角分辨光电子能谱：以子之矛，攻子之盾图片设计师：林晨科学探索常常在意外中触碰出新的火花。为什么何睿华团队能在“常见”的材料上获得新的发现？这得归功于一种强大的、但很少被应用于光阴极研究的实验手段：角分辨光电子能谱技术。以往，由于大部分具有较高性能的传统光阴极材料其表面具有多晶或非晶结构，光阴极领域的主流研究方法依赖的主要是光电流探测，这个135年前已开始使用的实验手段。这也使得一大类新近发展出来的研究单晶量子材料的实验利器无用武之地，其中包括角分辨光电子能谱技术。究其本质，角分辨光电子能谱技术这个技术的工作原理，就是光电效应。它被用于探测材料的电子结构，即了解电子如何在材料里运动。在过去的几十年里，角分辨光电子能谱技术主要用于研究跟材料的光学、电学和热学性质相关的那部分电子结构。受这种强烈的科学关注的驱使，现有大多数实验设施针对相关能量区域内的电子结构测量进行了相应的配置和优化。谁能想到，这个运用了光电效应原理的技术，竟然能“以子之矛，攻子之盾”，挖掘出光电效应中新的物理——在实验中，西湖大学何睿华团队使用了这个源自光电效应的量子材料研究利器，出乎意料地捕捉到了单晶量子材料的独特光电发射特性。通过对角分辨光电子能谱仪进行“非常规”配置，以实现对非常规能量区域内、与光电效应相关的电子结构测量，他们发现钛酸锶优越的光阴极性能来自于其独特的光电发射性质（图2），而这些性质明显不同于所有已知的光阴极材料。可以说，它们几乎在每个主要方面都超出了已有光电发射理论的预期。图2. 普通光阴极材料（a）和光阴极量子材料钛酸锶（b）所发射的初始电子束的区别。关于西湖大学团队的以上结论，角分辨光电子能谱理论权威、论文合作者、美国东北大学教授Arun Bansil进行了理论确认，他指出：“（这个发现）表明我们对光电效应相关物理过程的完整理解缺少一些很基本的东西，而这个缺失的元素可能成为开启整个光阴极量子材料家族之门的钥匙，（这些材料）具有独特的、不为现有材料所具有的光阴极性能。”展望：从理论到应用的待解之谜而发现，往往只是驶向未知浩瀚海洋的第一步。在激动人心的发现过后，何睿华实验室立刻投身于下一步的探索之中。据本成果的第一作者、西湖大学理学院2019级博士生洪彩云介绍，接下来，他们将进一步在理论和应用方面展开对钛酸锶材料的研究工作。在理论方面，既然现有理论失灵了，那就意味着需要建立新的理论，来解释观察到的钛酸锶光阴极性能。何睿华对此给出了一个非常大胆的猜想，跟Bansil组合作提出了一个全新的光电发射机制。按照这个新的理论，他们预测了一大类由此新机制主导的候选光阴极量子材料，实验团队正计划对这些材料预测进行一一验证。在应用方面，既然钛酸锶材料比已有的光阴极材料表现都要更理想，团队也计划与相关领域的团队合作，挖掘这种材料的实际应用价值。何睿华在西湖大学的个人介绍页面上，写着对这所学校的心愿：“希望西湖大学能成为一个具有独特定位，鼓励学科交叉和大胆创新的冒险家乐园”。事实上，首个光阴极量子材料钛酸锶的发现，也正开花于他带领团队进行的长达数年的沉浸式“冒险”探索之中。原本，实验室所进行的一个“小”研究项目是研究量子材料的逸出功（注：在光电效应中，电子跃出材料表面需要付出一定的能量“代价”，即逸出功）。依托物质科学平台的超高真空互联系统，以“高通量”手法批量测量各材料的逸出功时，他们偶然发现钛酸锶有些“与众不同”，并且抓住了这个“意外”，这才得以有了后面的发现。有趣的是，何睿华实验室“无心插柳柳成荫”的发现，似乎在冥冥中，也呼应了人类与光电效应意外“相遇”的起始点——1887 年，赫兹为了证明麦克斯韦的电磁波预言，进行了火花放电实验，而偶然发现了这种神奇的现象。探索前人未达之境。热爱“冒险”的西湖科学家们，将进一步挖掘光阴极材料的更多奥秘。

p style=" text-indent: 2em " strong 仪器信息网讯 /strong 为助力国产科学仪器发展，筛选和扶持一批优秀的科学仪器产品和企业，在中国仪器仪表行业协会、中国仪器仪表学会、北京科学仪器装备协作服务中心等单位的支持下，由仪器信息网主办、我要测网协办的“国产科学仪器腾飞行动”于2013年9月5日正式启动。 /p p 　　秉承“国产科学仪器腾飞行动”宗旨，仪器信息网于2018年启动“国产科学仪器腾飞行动”之“创新100”项目，筛选、挖掘一批具备自主创新能力的中小仪器厂商，通过公益性的报道、走访、调研、视频、线下座谈会等方式展现其基本情况，在企业发展的关键时期“帮一把”。 /p p 　　2019年3月1日，仪器信息网“创新100”项目走访团队来到莫纳(苏州)生物科技有限公司(以下简称：莫纳生物)，特别采访了莫纳 (苏州)生物总经理聂尚海博士。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/4110b951-94f2-4a10-88ec-4d7657931d6a.jpg" title=" 合影.jpg" alt=" 合影.jpg" width=" 600" height=" 404" border=" 0" vspace=" 0" style=" width: 600px height: 404px " / /p p style=" text-align: center " strong 莫纳生物总经理 聂尚海(左2)、仪器信息网副总经理 赵鑫(左3) /strong /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " strong ——企业概况 /strong /span /p p 　　莫纳生物成立于2017年，但其董事长燕东平先生已经在生命科学研究工具行业从业近20余年，并有长达十年的创业史。总经理聂尚海博士也有25年生命科学研究工具的研发生产经验，足见莫纳生物具有非常深厚的行业市场与技术积累。该公司是一家集研发、生产、销售和服务于一体的生物科技公司，致力于生命科学基础科研产品、生物技术企业工具和高标准生产原料的研发和供应，拥有莫纳(苏州)生物科技有限公司、莫纳(武汉)生物科技有限公司、莫纳(连云港)生物科技有限公司三家研发和生产基地，并在上海漕河泾国家级开发区普天信息产业园建立了运营总部。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/87ac3cfd-2949-414e-b5e7-a60cf6fdc0bc.jpg" title=" 莫纳苏州.jpg" alt=" 莫纳苏州.jpg" / /p p style=" text-align: center " strong 莫纳(苏州)生物科技有限公司 /strong /p p 　　公司现有员工200余人，主要技术研发负责人均为生物相关专业博士以上学历，并有多年的研发生产经验。公司从成立至今，申报专利已多达43项，其中发明专利11项。同时，莫纳生物始终坚持“质量第一、客户至上、全员参与、追求卓越”的质量方针，在公司成立短短不到两年的时间内顺利通过了ISO9001：2015质量管理体系认证。 /p p style=" text-indent: 2em " strong span style=" color: rgb(255, 0, 0) " ——产品创新 /span /strong /p p 　　目前，莫纳生物产品主要包括四大类，生物仪器、莫纳小工具、试剂耗材和基础生化试剂，其中，目录产品已多达200余个，定制化产品也在不断地满足客户个性化需求。接下来，给大家展示莫纳生物具有代表性的几款创新产品： /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 1. 液体冷却PCR仪 /span /p p 　　PCR系统最重要的参数指标就是温度控制。与传统PCR仪风冷降温温控系统不同， strong 莫纳PCR仪采取液体冷却与风冷复合式散热策略，这样一来极大消除了单一风冷降温均一性差的缺陷 /strong ，将96孔间温差控制在± 0.2℃区间内。同时，提高了整个过程的升降温速度，显著减少了PCR反应时间。 /p p 　　为了更好的满足不同类型客户的需求，增加客户体验感，莫纳生物将会分别推出适用于工业客户和科研客户两款机型。工业版PCR仪可叠加放置，大大节省了生产空间。而科研版PCR仪，采用更大屏幕界面，方便客户的操作。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/a77f8a85-0297-4f8b-9cdc-805dd174d1d2.jpg" title=" PCR.png" alt=" PCR.png" width=" 433" height=" 225" border=" 0" vspace=" 0" style=" width: 433px height: 225px " / /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 2. 多温区工作台 /span /p p 　　这款产品更多的体现了莫纳生物体验式创新的研发理念。 strong 该产品包含三个不同温度的工作区域，分别适用于高温、中温反应及低温加样过程，从加样到反应一机即可完成 /strong ，减少样品从一处到另一处的转移过程，实现很多科研工作者一体化个人工作台的梦想。同时，工作区域的温度分区更能精准的控制温度，提高了实验的成功率。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/d34fbe58-261f-4286-9ec9-a9857145ecbd.jpg" title=" 多温区工作台.jpg" alt=" 多温区工作台.jpg" width=" 600" height=" 405" border=" 0" vspace=" 0" style=" width: 600px height: 405px " / /p p style=" text-align: center " strong 多温区工作台 /strong /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 3. 免疫印迹仪 /span /p p 　　莫纳生物此款免疫印迹仪专为研究人员设计，可以单泳道、多泳道和整张膜自由组合使用。 strong 采取膜片插入式设计，试剂用量少，且一抗、二抗可以灵活放置 /strong 。独立区域的温度控制，提高了实验的效率并有利于珍贵试剂的回收再利用，更加经济。除了具有优良的重复性和操作便捷外，莫纳生物免疫印迹仪还可以自由设计实验方案，节约试剂及人力成本。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/0e35dfff-1891-43ac-99bd-6eb107c9b81b.jpg" title=" 莫纳生物免疫印迹仪.jpg" alt=" 莫纳生物免疫印迹仪.jpg" width=" 400" height=" 500" border=" 0" vspace=" 0" style=" width: 400px height: 500px " / /p p style=" text-align: center " strong 莫纳生物免疫印迹仪 /strong /p p 　　 span style=" color: rgb(0, 112, 192) " 4. 整体解决方案之专业做酶 /span /p p 　　莫纳生物是一家做整体解决方案的公司，这也是莫纳生物与目前很多生命科学工具企业不同之处。除了仪器之外，配套的试剂耗材也是公司重点发展的方向，同样坚持“首创加体验式创新”“质量源于设计”等理念，进行产品的研发生产。 /p p style=" text-align: center" img src=" https://img1.17img.cn/17img/images/201903/uepic/adfe3487-4d40-409c-b7cc-7843ef286174.jpg" title=" 分子克隆整体解决方案.jpg" alt=" 分子克隆整体解决方案.jpg" width=" 600" height=" 400" border=" 0" vspace=" 0" style=" width: 600px height: 400px " / /p p style=" text-align: center " strong 分子克隆整体解决方案 /strong /p p 　　以限制性内切酶为例，由于技术原因，国内生产厂家寥寥无几，限制性内切酶市场长期被国外巨头垄断。莫纳生物自主研发的限制性内切酶，打破了国外44年的技术垄断， strong 反应仅需5-15分钟，而且目前已有的酶可以共用一种酶切Buffer，大大简化了酶切反应 /strong ，同时，与下游去磷酸化、连接反应兼容，减少了中间的产物的纯化步骤。目前，莫纳生物已经研发出40余种限制性内切酶产品，基本满足了市场上常用内切酶的需求。 /p p 　 strong span style=" color: rgb(255, 0, 0) " 　——市场发展 /span /strong /p p 　　莫纳生物将主攻两大方向， strong 一是生命科学分子和蛋白研究整体解决方案，包括仪器、试剂、耗材和服务。二是做原料酶的研发，这也是莫纳生物2019年的重要目标之一 /strong ，此项工作主要在莫纳(武汉)生物开展。 /p p 　　以定量PCR仪为例，从销售场所来看，分子实验室定量和逆转录份额达40%。而目前市场进口产品占据主导地位，国内产品创新性不足，同质化竞争现象严重。尽管如此， strong 国产替代进口仍是必然趋势，分子实验室也是生命科学厂商必争之地。 /strong /p p 　 strong 　打造行业品牌形象，这是莫纳生物创立的初衷。 /strong /p p 　　莫纳生物以生命科学人的思路去做生命科学，下一步将会以应用为导向进行研发和生产，进行体验式创新。“‘至简至真’是我们市场的口号，‘至简’就是要便捷化、标准、智能化，‘至真’就是准确性、可靠性、高重复性，” 聂尚海博士向仪器信息网走访人员介绍。 /p p 　　莫纳生物2019年拟重点上市仪器包括两款PCR仪、自动免疫印迹仪、自动核酸提取仪、凝胶成像系统和化学发光系统。2020年拟上市产品也在计划中。 /p p 　　为了进一步拓宽市场，莫纳生物除了与经销商合作，一方面会加大对江浙沪和北上广深等地区的工业定制化产品投入，另一方面积极拓展海外市场，进一步提升品牌影响力。 /p p 　　 span style=" color: rgb(255, 0, 0) " strong 附：国产仪器腾飞行动“创新100”介绍 /strong /span /p p 　　 span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 为秉承“国产科学仪器腾飞行动”宗旨，在中国仪器仪表行业协会的指导下，仪器信息网于2018年启动“国产科学仪器腾飞行动”之“创新100”项目，筛选一批具备自主创新能力的中小仪器厂商，通过公益性的报道、走访、调研，在企业发展的关键时期“帮一把”，助力国产仪器中小厂商腾飞发展。 /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 　 strong 　一、“创新100”入选标准 /strong /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 　　(1) 企业主营业务为科学仪器 /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 　　(2) 企业主营产品具有自主知识产权，具备创新性 /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 　　(3) 企业总部设在中国 /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 　　(4) 企业科学仪器产品的年产值在3000万元以下 /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 　　(5) 企业需是中国仪器仪表行业协会、中国仪器仪表学会、仪器信息网会员之一。 /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 　 strong 　二、“创新100”申报流程 /strong /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 　　国产仪器腾飞行动“创新100”筛选流程包含以下环节：企业在线申报——企业创新能力审核——公益报道服务——线下资源对接——最具成长潜力企业评选。 /span /p p span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 　　更多相关内容请点击进入专题 /span a href=" https://www.instrument.com.cn/zt/chuangxin100" target=" _self" style=" text-decoration: underline font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 112, 192) " span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 112, 192) " 《 strong span style=" text-decoration: underline font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 112, 192) " “创新100”助力国产腾飞 /span /strong 》 /span /a span style=" font-family: 楷体, 楷体_GB2312, SimKai color: rgb(0, 0, 0) " 。 /span /p

事件 　　公司2013年1月9日公告:浙江迪安诊断与北京欧蒙生物技术有限公司(以下简称“北京欧蒙”)共同签署了《战略合作协议》,双方拟在建立特殊项目检测实验室、诊断试剂经销领域开展紧密合作。 　　评论 　　德国欧蒙是全球自身免疫试剂的领航者。北京欧蒙是德国欧蒙医学实验诊断股份公司(简称“德国欧蒙”)在中国独资兴办的全资子公司。德国欧蒙(EUROIMMUN)创建于1987 年,主要致力于抗体的血清学检测, 在自身免疫性疾病、感染性疾病和变态反应性疾病的血清学诊断领域尤为突出。德国欧蒙2012 年实现销售收入1 亿欧元,在Munich Strategy Group 评选的“德国最佳中小企业百强“中,德国欧蒙以卓越的成长性和竞争力排名第五。 　　北京欧蒙产品与技术储备丰富。欧蒙的检测技术平台主要有间接免疫荧光法,微孔板ELISA 法,各种印迹技术(免疫印迹法,欧蒙斑点法,欧蒙印迹法和EUROLINE-WB)和分子生物学技术等,可实现400 多种体外诊断项目。欧蒙除了拥有高水平的血清学诊断技术,同时在自动化仪器、实验室管理软件系统以及基因芯片等领域也拥有备受信赖的优秀产品和服务。北京欧蒙成立于2001 年,是德国欧蒙在亚洲的生产、研发和技术服务基地。北京欧蒙在浙江省杭州市设立有生产基地,并拥有德国欧蒙的世界性专利技术、先进的生产设备和管理经验,还拥有一批经过德国培训的专业人才。 　　迪安诊断与北京欧蒙的战略合作内容如下:(1)北京欧蒙协助迪安诊断建立特殊项目诊断实验室 (2)北京欧蒙授权迪安诊断为江西、安徽两省一级经销商,代理经销其部分产品 (3)合作产品:自身免疫试剂、病原体试剂及过敏原试剂 (4)合作期限:自2013 年 1 月 1 日至2015 年12 月31 日。 　　合作将提升公司诊断技术实力,并提前布局安徽、江西市场:北京欧蒙将帮助迪安建立针对自身免疫性疾病、感染性疾病和变态反应性疾病等疑难杂症的特检科室,从而提高迪安在血清学诊断领域的技术实力。同时,迪安获得欧蒙产品江西、安徽两省一级经销商,将借助北京欧蒙的产品优势,提前布局江西、安徽市场,锻炼销售团队,为后续江西、安徽实验室的异地复制铺平道路。

p 　　2月19日，科技部网站发布关于发布重大科学仪器设备开发专项2016年度指南的通知，本指南共设置了关键核心部件、高端通用科学仪器和专业重大科学仪器3类任务，下设10个重点方向。其中核心关键部件开发与应用中包括：源部件、探测器与传感器、分析分离与控制部件。而空心阴极灯项目列于源部件项目的第一位, 为原子吸收光谱仪和原子荧光光谱仪等仪器提供核心部件。据业内人士说，该考核指标稍高于进口产品的指标，对于目前国产空心阴极灯相关企业来说，具有一定难度，但是，是完全可以达到的(具体指标详见文后)。 /p p 　　回顾历史，在上世纪60年代，中国已经研制出自己的空心阴极灯，与国外基本同时起步。如今，HCL国产厂商主要是有色金属研究院、曙光明、河北衡水宁强光源等，国外厂商主要有贺利氏、珀金埃尔默、安捷伦(原瓦里安)等。近年来，中国市场HCL年销售量约为10万支，其中国产产品占据了95%左右的市场份额。 /p p 　　但是，在高端空心阴极灯方面，国产产品还存在一定差距。“与进口HCL比较，国产HCL在外观、一致性方面有一定的差距，但是，性能方面的差距非常之小，而长期稳定性已经完全没有问题。” 生产工艺或生产技术方面是否还存在一些难点?对此，有色院李中建说，“HCL生产过程中手工作业的比例较大，但是，我们已经在不断改进，尝试投入更多的自动化生产设备。在生产工艺上还需要继续提高，以克服一致性、噪音问题，以及整体的设计工艺。所以说，今年国家科学仪器重大专项支持的到来，对于促进国产HCL产业发展是一个非常好机遇。” /p p 　　 strong 空心阴极灯产品概况 /strong /p p 　　空心阴极灯(HCL)是原子吸收、原子荧光光谱仪必不可少的组成部分。原子荧光的灯和原子吸收的灯原理是一样的，但是结构上有一定的区别。 /p p style=" text-align: center " img src=" http://img1.17img.cn/17img/images/201603/insimg/37ad5e5a-c896-45ae-826f-65e38938e022.jpg" title=" HCL.jpg" / /p p 　　原子吸收的空心阴极灯有单元素灯、多元素灯、高性能灯和多阴极灯。最常用的空心阴极灯由一个钨(W)棒阳极和含金属元素或其合金的空心圆柱杯阴极组成。两极之间充满低压的惰性气体(Ne或Ar气)，密封在一种特性玻璃筒里，应用辉光放电和阴极溅射原理将HCL点亮。充Ne气的HCL呈橘红色，充Ar气的HCL呈浅蓝色。 /p p 　　单元素灯阴极由1种金属元素或其合金构成。多元素灯阴极由2～7种金属元素合金或混合物构成 优点是可以在不换灯情况下连续测定多种元素，缩短预热时间和换灯的麻烦 缺点：比单元素发射强度弱，有些元素搭配不当会造成相互影响，并可能降低寿命。多阴极灯由一个阳极放置中间位置，其周围放置6种金属元素6个阴极。其原理与单元素(HCL)相同，其价格昂贵。 /p p 　　高性能灯除了和普通HCL一样有1个阴极和1个阳极外，还增加了一对辅助电极。辅助电极间通过几百mA的低压直流电，使其产生电离的气体原子流，使从空心阴极溅射出来的金属原子与之碰撞后进一步激发，从而提高共振线的强度。这种灯光强度比普通HCL强几倍到几十倍，不产生谱线变宽，适用于As、Sb、Bi、Se、Ag、Cd、Pb或某些稀土元素。 /p p 　　 strong 难以替代的空心阴极灯 /strong /p p 　　空心阴极灯是原子吸收、原子荧光光谱仪的关键核心部件，而原子吸收、原子荧光光谱仪的市场规模都相对较大，仪器生产商数量非常多。其中，原子吸收光谱仪器是现代分析检测实验室必备的重要检测手段，有着广泛的应用。据现有不甚完整的资料显示，近年来中国市场原子吸收光谱仪器年销售量约为5000多台。据初步统计，目前全国有AAS生产厂家达20家，国外在华厂商近10家。如普析通用、东西分析、上海光谱、北京海光、北京瑞利，岛津、珀金埃尔默、德国耶拿、安捷伦、赛默飞、日立等。 /p p 　　而原子荧光光谱仪是我国少数具有自主知识产权、技术水平超过进口的分析仪器。目前国内外生产AFS的主要仪器厂商有10多家，有北京海光、北京吉天、北京瑞利、普析通用、廊坊开元、东西分析、金索坤、江苏天瑞、卓信博澳、欧罗拉等。近年来，原子荧光光谱仪每年销售量大致在2500~3000台。 /p p 　　原子吸收、原子荧光光谱法是元素分析领域现行标准方法的主力军。现有各国颁布各类原子吸收光谱分析的标准共计2600多个，中国颁布的国家标准和行业标准近800个。原子荧光光谱法在各个领域中先后建立了相关的国家标准、行业标准和地方标准，截至2011年5月为止已建立的各项标准己达111项。正是这些标准的建立，有力推动了原子吸收、原子荧光光谱仪的推广和普及，现已成为众多实验室常规的分析仪。 /p p 　　未来对HCL的需求与国家经济的发展状况息息相关。“目前，采购、使用原子吸收、原子荧光光谱仪的用户多是基层单位和工业企业。”对于基层单位和工业企业，日常检测的元素比较固定，且数量不多，对这样的用户原子吸收光谱仪器具有最好的性价比。而对于As、Hg等元素的检测，原子荧光具有ICP-MS都不具有的优势，方法简便、灵敏度高，并且在仪器价格和使用成本上具有很大的优势，适合地级市等小型实验室及检测中心的使用，符合中国经济发展的现状，是元素分析非常必要的补充仪器。 /p p 　　由于原子吸收、原子荧光光谱仪在未来的不可替代性，这样大的一个‘用户群’也为HCL打下了坚实的基础，使得HCL也同样具有了不可替代性。可预见，未来20年内HCL行业都会平稳发展。 /p p style=" text-align: right " 撰稿：刘丰秋 /p

蛋白免疫印迹（Western blot）是生物学领域应用广泛的一项基本技术，用于检测从细胞或组织中提取的特定蛋白质。Western blot成像技术的核心在于将印迹膜上的蛋白质信号转化为可视化条带，并分析蛋白分子量和相对丰度。有数据显示，全球Western blot成像仪市场在2022年已达到26.95亿元人民币，预计至2028年，全球市场将增至60亿元人民币，预示着这一领域的无限潜力。在Western blot成像领域，易孛特生命科学（上海）有限公司（e-BLOT）（以下称为：e-BLOT）自成一脉，创新性地将接触式化学发光技术应用到Western blot成像仪当中，产品一经上市吸引了业内广泛关注。近日，仪器信息网一行走进e-BLOT，与公司联合创始人张志豪对话，深入了解这家企业的发展历程和技术创新。e-BLOT联合创始人张志豪去掉镜头，接触成像e-BLOT的故事始于2014年。这一年张英豪和张志豪两兄弟创立了上海清流生物医药科技有限公司，他们在蛋白药物研发过程中发现，现有Western blot成像技术限制重重。Western blot主要依靠底物、化学发光或荧光显色，由光学胶片或数字（CCD相机）成像。其中，胶片成像虽然灵敏度高，但存在耗时长、胶片成本高、线性范围窄、定量不准确等缺点；冷CCD技术虽然不需要暗室了，定量范围相对于胶片有提升，但是由于镜头导致的光损失和芯片尺寸太小，导致成像的灵敏度不够。这些问题促使他们萌生了一个大胆的想法：开发一种全新的Western blot成像技术——接触式化学发光成像技术（简称电子压片）。接触式化学发光成像技术通过去除镜头，采用直接接触感光芯片的方式，有效减少90%以上的样品光信号损失，其感光芯片面积高达165cm2，是冷CCD芯片的130多倍，感光单元的面积是冷CCD的400多倍，成像的灵敏度和定量范围相对于冷CCD成像提升2个数量级，且成像时间可以降低到1秒钟。电子压片成像与光学胶片、数字（冷CCD）成像对比技术落地，电子压片成像仪应运而生2016年，接触式化学发光成像技术获得专利。据张志豪介绍，当时虽然已经完成技术的验证，但一开始并没想过做成商业仪器，由于始终认为“这个事很有意义”，他最终决定成立公司将其商业化。2017年，e-BLOT成立，于2020年正式推出商业化产品Touch Imager&trade 并实现量产。该产品首次革命性的将接触式成像方式应用到Western blot化学发光成像领域，体积相较于主流成像仪大幅缩小，仅不到一张A4纸大小，有效节省了实验室空间。此外，仪器本身损耗低，还可以节省50%以上的实验耗材成本。Touch Imager&trade 电子压片成像仪Touch Imager&trade 先后荣获德国红点设计大奖、上海白玉兰最佳技术创新奖等多项荣誉，并且陆续有公司向e-BLOT抛出橄榄枝，希望收购e-BLOT。此时，创始团队面临两种选择，卖掉公司或自己运营。最终，张志豪决定亲自操刀，在完成从“0”到“1”的跨越后，继续推动从“1”到“100”的发展。尽管面临诸多挑战，但他表示，“可以看见希望的曙光，我相信我们的产品一定能满足生命科学实验的需求。”张志豪展示Touch Imager&trade 成像原理产品多说话，销售少说话作为一家创新型企业，在谈到市场策略时，张志豪自豪地宣称：“我们的核心理念是产品多说话，销售少说话。产品进入市场后获得了客户高度认可，其中，首都医科大学校长饶毅教授成为e-BLOT的第一个客户也正是这一理念的最好证明。”e-BLOT的眼光不仅仅局限于中国市场，产品逐步销往美国、韩国、欧洲、俄罗斯、日本等海外市场。张志豪分析比对了日本、欧洲和美国企业的商业模式。日本企业往往强调简单，追求“够用就好”的实用主义哲学；美国的商业模式更倾向于快速扩张和高风险投资，甚至以被收购为荣。他对e-BLOT的规划则是“稳一点、慢一点”，做好产品、搭好产品线，布局Western blot整体解决方案，持续创新，拓展国内外市场，提升品牌知名度，最终实现“立足中国，放眼世界，构建全球市场网络”的宏远目标。对于“慢一点”的规划，张志豪解释道“我们推出产品的周期比较长，但其实产品发布较早，只是一直在优化测试，因为把产品做扎实是对客户和品牌负责的表现，实际上除了Touch Imager&trade 电子压片成像仪，目前还有微量蛋白纯化仪、动态高速湿转仪、安全研磨仪等产品陆续发布。” 动态高速湿转仪 微量蛋白纯化仪 安全研磨仪e-BLOT联合创始人张志豪与仪器信息网一行人合影（从左至右：仪器信息网生命科学编辑樊雪竹、仪器信息网生命科学编辑李兆坤、e-BLOT联合创始人张志豪、仪器信息网生命科学主编李博、仪器信息网客户成功经理康龙）后记：谈及创业苦不苦时，张志豪特别介绍了公司的骑行文化，他讲到，“团队一年共计骑行了8万多公里，有时候还会遇到恶劣的天气或者艰难的路况。创业之路很多时候就像我们的骑行之路，虽然很苦，但是很美。”e-BLOT2023年中环千岛湖骑行照片问及给创业者的建议，他认为，在当今瞬息万变的市场中，创业的基石在于深刻理解并聚焦于客户，优质的产品与卓越的服务是企业最重要的两件事情。创业者们应该保持一颗匠心，细心聆听市场的声音，尤其是客户的心声，不断优化产品，提升服务体验，让每一次与客户的接触都成为传递价值的桥梁。这样，才能赢得客户的长期信赖与支持，为企业的可持续发展奠定坚实的基础。

项目编号：[230101]zzgj[GK]20220022项目名称：核酸检测基地仪器设备购置采购方式：公开招标预算金额：5,070,000.00元采购需求：合同包1(高通量实时荧光定量PCR仪):合同包预算金额：2,500,000.00元品目号品目名称采购标的数量（单位）技术规格、参数及要求品目预算(元)最高限价(元)1-1临床检验设备高通量实时荧光定量PCR仪（96与384双模块）2(台)详见采购文件2,500,000.00-本合同包不接受联合体投标合同履行期限：自合同签订后60日内到货，质保期1年。合同包2(高通量生物大分子分析仪等):合同包预算金额：1,320,000.00元品目号品目名称采购标的数量（单位）技术规格、参数及要求品目预算(元)最高限价(元)2-1临床检验设备高通量生物大分子分析仪1(台)详见采购文件750,000.00-2-2其他专用仪器仪表超纯水系统2(台)详见采购文件320,000.00-2-3临床检验设备全自动蛋白免疫印迹仪1(台)详见采购文件250,000.00-本合同包不接受联合体投标合同履行期限：自合同签订后60日内到货，质保期1年。合同包3(全自动测汞仪等):合同包预算金额：1,250,000.00元品目号品目名称采购标的数量（单位）技术规格、参数及要求品目预算(元)最高限价(元)3-1临床检验设备贾第鞭毛虫/隐孢子虫检测分析系统1(台)详见采购文件800,000.00-3-2其他专用仪器仪表全自动测汞仪1(台)详见采购文件450,000.00-本合同包不接受联合体投标合同履行期限：自合同签订后60日内到货，质保期1年。

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靶向蛋白质降解 蛋白表达和功能异常调控可极大地改变细胞生理学并导致许多病理生理状况如癌症、炎症性疾病和神经退行性疾病等。内源性蛋白质的稳态表达由从头合成和降解速率的平衡来控制。靶向蛋白质降解（Targeted Protein Degradation，TPD）以剂量和时间依赖性方式通过蛋白酶体对致病靶蛋白进行降解。从目前药物研发进展来看，靶向蛋白降解的概念提供了革命性的药物开发机会，预计将带来现代小分子药物研发的转变。 在靶向蛋白降解领域，蛋白质免疫印迹技术（Western Blot，WB）是观察细胞中浓度依赖性蛋白质降解的经典方法。然而，传统的蛋白质印迹非常耗费资源，需要多个洗涤步骤和长孵育时间才能产生高质量的印迹，导致技术操作复杂、通量低、定量不准和重复性差等劣势，难以推动选择性诱导、快速和可持续性的蛋白质降解疗法的快速发展。 根据药物研发需求，工业界迫切需要建立高效、灵敏、可量化和可重现的蛋白质降解技术平台，满足不同通量和不同研发阶段需求。目前全球领先的靶向蛋白质降解药物研发公司基本建立了高低通量结合、筛选和验证一体化的研发平台。下面文章一窥行业领先的药物公司平台建设思路。SLAS Discovery：C4 Tx团队总结加速靶向蛋白降解疗法开发和优化的高通量技术 本文总结了靶向蛋白降解领域最常采用的从低通量到高通量的几种不同方法。详细说明了传统Western blot、基于毛细管电泳技术的Digital Western Blot（ProteinSimple）、高通量流式细胞术（HTFC）、AlphaLISA SureFire技术、时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)技术和Nano-Glo HiBiT技术。01 Digital Western Blot技术 Digital WB技术是传统WB实验系统的高效替代方案。使用该技术，可在同一根毛细管中完成样品分离、捕获、固定、免疫检测和定量分析，从而实现传统WB的所有实验步骤（包括蛋白质上样、分离、免疫印迹、洗涤、检测以及数据分析）自动化，有效提高蛋白质表达定量结果的精确性和重复性。全自动Digital WB技术显著地缩短了样本检测时间到3小时，直接采集化学发光或荧光信号值，利用数字化信号峰面积来表征蛋白含量，短时间内实现了目的蛋白的可视化精准定量分析。ProteinSimple旗下具有系列的Digital WB系统，从25到96个样本通量，可满足靶向蛋白降解药物研发过程中对中低通量检测需求。 本技术可相对和绝对定量检测目的蛋白丰度，适用于内源性的或未修饰靶蛋白分析，如果抗体表位不受干扰，也可检测修饰的标记过的蛋白质。与传统WB相比，Digital WB可实现高分子量蛋白质可靠捕获和定量分析如BRD4案例。同时，需要样本量少，只需要3 μL上样量，特别适用于细胞或降解剂有限的条件下，96孔板中收集处理过的细胞可满足检测需求。除了自动化和标准化之外，批次数据差异CV值较低，重复性好。软件符合21 CFR Part11，数据全程可记录。这些优势使其成为工业领域蛋白表达检测平台的标准配置。02高通量流式细胞术（HTFC）和In-Cell Western (ICW) 流式细胞技术可分析细胞表面和细胞内蛋白质表达水平，技术进步已使流式可作为中高通量筛选方法来辅助药物发现。紧凑型流式细胞仪可检测96孔板中细胞配体或蛋白质的不同荧光强度。本质上，高通量流式细胞术一次检测单个细胞，提供单个细胞信号。而ICW对孔内所有细胞进行批量读取。两种方法使用比率荧光读数来提高重现性和降低标准偏差，进而提高整体数据质量。与传统流式比，这两种技术方案需要更少的样本体积和检测抗体可有效降低成本。但无法根据蛋白质分子量参数来区分特异性和非特异性信号。03AlphaLISA SureFire技术 AlphaScreen是一种多功能的基于微珠相互靠近实验技术，基于生物分子的相互作用，可测定各种分析物包括标记的或内源性蛋白。本技术提高了检测灵活性，微珠种类被设计识别各种不同的工程化蛋白质标签，或AlphaLISA每个微珠能包被针对目标蛋白不同表位的特异性抗体。当与同一蛋白质结合时，Alpha供体和受体微珠会靠近，采用680nm近红外光激发，供体微珠导致单线态氧分子释放。单线态氧的产生本身不足以产生信号，但当受体微珠靠近时，会引发能量转移反应，进而产生放大的荧光信号。AlphaLISA SureFire技术采用改进光谱特性的微珠，只能进行终点分析，需要细胞裂解来观察感兴趣蛋白质信号。对于时效性降解曲线，可通过多个高通量筛选细胞培养板在不同时间点裂解来实现。该技术优势是有助于更快地优化、自动化和小型化，适用于化合物常规和高通量筛选。可减少实际操作时间和信号读取需要的总时间，加速药物发现。具有飞克级灵敏度和 4-5 log 宽动态范围，使其适合于细胞内、分泌或膜结合蛋白检测。 对于靶向蛋白质降解的细胞学实验，384孔板可显著缩短实验时间。使用合适的抗体，通过使用针对靶蛋白翻译后修饰的抗体来区分靶标蛋白。例如使用特异性识别磷酸化蛋白的抗体直接评估具有自磷酸化活性激酶的化合物BiDAC抑制和降解影响，可与总蛋白（磷酸化和未磷酸化）测量值进行比较。获得这两个数据可能会提高降解剂与抑制剂前体区分机制的理解，进一步了解目标蛋白调节对表型影响。 尽管有这些优点，该技术有一些局限性。Alpha 微珠价格昂贵且对环境光高度敏感，需要在暗室环境添加实验试剂，上机前孵育期间尽可能避免在光线下长时间暴露。此外，读板机温度会影响单线态氧的生成和扩散速率，每摄氏度可高达10%。为了最大限度地减少批次间差异，实验微孔板和读板机应保持在温度良好可控环境中。最后需要注意过渡金属可导致单线态氧猝灭效应。04时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)实验 TR-FRET实验可用于检测细胞内蛋白质水平变化，有助于高效快速的靶向蛋白质降解领域的药物发现。与AlphaLISA SureFire 技术类似，TR-FRET 是一种直接的均质混合和读取夹心免疫分析方法，信号检测前不需多次洗涤步骤。通过量化两种荧光团标记的抗体之间的比率信号来确定蛋白降解水平，这些抗体结合同一蛋白质上的两个不同表位，采用供体和受体荧光团标记。 TR-FRET是终点实验，需要细胞裂解来观察检测感兴趣蛋白质的信号。如蛋白降解动力学曲线，必须使用多个高通量筛选细胞板并行设计TR-FRET实验，以便裂解细胞并在每个时间点后添加检测抗体。将这些数据叠加可提供DC50、Emax偏移以及时效曲线。对于生物标志物分析，重要的是两种抗体使用不同表位与同一蛋白质结合，以启用 FRET 信号，同时将背景信号降至最低。与Alpha 技术一样，该方法可用于测量目标蛋白质翻译后的抑制，从而可对通路抑制以及总蛋白质水平进行定量。也可区别癌症样本突变体和正常组织中相同蛋白质野生型具有选择性的降解剂。本技术需要购买高质量特异性抗体，长期药物发现工作时，TR-FRET 分析每个数据点成本可能是该技术的最大缺点，尽管成本可通过批量定制标记抗体降低。TR-FRET实验的灵活性、适应性和可转移性具有优势。一旦针对某个细胞系靶蛋白的 HTRF方法建立，通常很容易转移到表达相同蛋白质的其他细胞系中。HTRF技术具有宽动态范围和信号稳定，而无需担心环境光的猝灭效应。05Nano-Glo HiBiT技术 Nano-Glo HiBiT技术是一种高通量靶向蛋白质降解药物筛选系统。本技术基于分成两部分互补NanoLuc荧光素酶系统，11个氨基酸的HiBiT标签和 17.6 kD LgBiT多肽。采用 CRISPR基因编辑技术将11个氨基酸的 HiBiT标签引入到编码目标蛋白基因内，或设计为可通过质粒转染或慢病毒感染的重组DNA表达载体，两种方式都可实现将标签与感兴趣目的蛋白相连。加入特有的裂解检测试剂，HiBiT会自发的与检测试剂中与HiBiT互补的多肽LgBiT结合，二者结合后可形成有催化功能的NanoLuc 荧光素酶，可催化底物产生明亮的发光信号。该信号强度与细胞裂解物中的 HiBiT 标记蛋白含量成正比。 本技术检测蛋白质浓度线性范围有几个数量级，产生的发光信号可稳定数小时，因此适用于蛋白质降解剂药物发现阶段的高通量筛选。将HiBiT标签基因编辑敲入到感兴趣的蛋白质序列中，并生成稳定表达 HiBiT 标签目的蛋白的细胞系，整个实验开发时间至少需要3-4周。如需要挑取高表达HiBiT信号的单细胞克隆，则这个系统开发时间额外增加2-3周。与不需要基因编辑开发表达HiBiT细胞系技术相比，开发时间长是这种方法的一个缺点。然而，一旦产生稳定表达的具有足够信号的细胞克隆或细胞群，操作只需加样、直接均匀混合和读取检测，比较简单。 HiBiT 技术也可进行实时动力学蛋白降解检测。LgBiT蛋白通过慢病毒转染到已经表达HiBiT标记的目标蛋白细胞中，同时表达HiBiT和LgBiT标签，整个实验过程中重组发光NanoBiT酶都存在，通过与特定底物作用来检测信号随时间变化值。作为单一的非裂解试剂添加步骤，持续几分钟到几小时到几天时间内实时测量目的蛋白质降解，所以这种方法检测板和HiBiT试剂成本方面更具成本效益，但长时间实验需要配置自动化系统。靶向蛋白质降解平台建设策略 纵观目前市面上几种不同通量的靶向蛋白质检测技术，每种技术都各自优势和相关局限性。如何构建高效的靶向蛋白质降解技术平台来推动药物发现计划，需要注意整体策略选择，综合考虑成本、时间和可行性等多种因素。根据具体研发目标，选择最可能受益技术方案。针对某些靶标蛋白可能需要采用分层筛选漏斗原理，根据C4团队的经验，这种分层方法可最大限度地提高数据收集效率，以推动BiDAC降解剂早期发现和优化工作。各种策略前提是针对目标蛋白的抗体，及所有检测方法和试剂都必须在化合物筛选前完整验证。如有Nano-Glo HiBiT技术平台，可作为快速优化降解剂效力的高通量筛选的首选方法，它适用于终点法和连续读取方法，以与TR-FRET相当的成本，但提供更多的数据类型和检测灵活性。如有针对目的靶标高度特异性且经过验证的抗体，同时有相关即用型试剂盒，TR-FRET是一种合适的高通量药物发现工作的替代方案。TR-FRET可为表达相同目标蛋白的不同细胞系后续筛选提供有吸引力的选择。具体那种方案作为高通量筛选阶段优先选择，取决于研发阶段和目标。 本团队建议高通量筛选平台需与其他技术平台配合使用，才能更充分表征异双功能蛋白降解剂。如采用Digital WB确认内源性蛋白质降解，以确保与初步筛选实验中利用HiBiT高通量技术获得一致性实验结果，防止初级筛选试验中数据结果被错误解读。不管首选策略是什么，随着未来几年靶向蛋白降解领域的研究不断加强，利用更高通量技术和更自动化平台来加速药物发现是一项有价值的投资。SLAS Discovery：C4 Tx团队开发一种小分子诱导泛素化动力学检测方法 目前大多数靶向蛋白降解化合物借助最常见的E3泛素连接酶，主要是Cullin环连接酶CRBN或VHL。化合物在E3连接酶和靶蛋白之间形成三元复合物，并促进E3连接酶催化靶蛋白泛素化，多泛素化靶蛋白随后被细胞蛋白酶体降解。BiDACs以催化方式驱动靶蛋白泛素化，时间依赖性的诱导靶蛋白持续降解。作为新兴的治疗策略，理解蛋白质降解的催化基础对于靶向蛋白质降解表征和效用至关重要。 依赖CRBN双功能蛋白降解化合物（BiDAC）的催化速率是药物发现过程中需要考虑的重要参数。C4基于毛细管的全自动数字化WB技术，开发了一种无细胞裂解物泛素化的体外系统来检测BRD4溴结构域1（BD1）泛素化的动力学。采用全自动Digital WB来进行BD1和BRD4泛素化水平，研究发现 BiDAC 在泛素化速率、亲和力和协同性方面存在显着差异，并遵循快速平衡模式。此外，量化发现不同化合物之间泛素化模式有所不同。本研究提供一个框架来优化BiDAC，进而提高三元复合物形成亲和力和泛素化率。只有在形成稳定的靶蛋白-BiDAC-E3泛素连接酶三元复合物时才能高效特异性泛素化靶蛋白，但三元复合物形成不一定决定泛素化率。通过检测无细胞裂解物中BD1结构域泛素化初始速率，来了解相同化学系列BiDAC是否在催化效率方面和热力学参数方面差异。 下图A中 3个化合物CFT-0251，CFT-0743和CFT-0660在不同浓度下，90min时BD1泛素化免疫印迹条带。下图B中用 DMSO或300nM CFT-0251处理样品，不同时间点的BD1和 BD1_Ub代表性化学发光定量峰图。通过Digital Western检测在4个时间点，根据每个时间点获得的曲线下峰面积AUC测量BD1转化为泛素化偶联BD1的量。90分钟时间内DMSO对照显示很低背景泛素化水平。相比之下，CFT-0251在300nM浓度时泛素化水平最高，BD1在整个实验过程中发生明显的泛素化，进而导致蛋白降解。 BiDAC诱导的BD1泛素化水平在不同泛素化位点可变的。下面A图 BD1泛素化模式量化10个化合物对BD1结构域无赖氨酸泛素数量。随着时间变化，最大活性浓度下测试各种BiDAC，只有CFT-0743结果双泛素化比单泛素化更多。 了解泛素化率有助于深入了解BiDAC系列化学过程，可优化E3连接酶降解目标蛋白质过程。特别是对于挑战性的目标蛋白，其中泛素化率可能被证明是需要优化的关键参数。需要开发定量描述热力学和降解动力学的方法工具，来全面了解BiDAC诱导的蛋白质降解过程以及循环的每一步对整体降解速率的影响。

细胞核内的蛋白质在基因的调控、翻译和表达的过程中扮演着重要的角色，常与肿瘤发生、转移以及耐药性有关。但核蛋白被细胞膜和核膜的双重屏障包围，实际检测中，面临比细胞质蛋白检测更多困难。常规蛋白质免疫印迹法、酶联免疫吸附实验和免疫沉淀法均需要将细胞裂解，无法满足活细胞实时检测。而活细胞状态下检测细胞核蛋白主要方法，如分子荧光染料法和质粒表达法，需要特定筛选条件而缺乏一定的适用性，不能满足需求内源核蛋白的精准检测。近日，北京航空航天大学常凌乾课题组在Biosensors and Bioelectronics上发表了题为Companion-Probe & Race Platform for Interrogating Nuclear Protein and Migration of Living Cells的研究论文。该工作设计了一种新型分析生物芯片平台(CPR)，能在活细胞中探测核蛋白，同时实时追踪细胞的迁移；该芯片结合纳米电穿孔技术（课题组标签技术），将一种携带有识别细胞核内蛋白特异性识别肽的相伴型组合探针递送进活细胞核内，到检测到靶蛋白后产生绿色荧光。为了追踪活细胞的迁移，作者在平台上设计了多个带有标志点的放射状微通道，作为细胞的可寻址跑道。通过记录细胞在一定时间内经过的标志点的数量，可以监测细胞的迁移距离和估计迁移速度(图1)。图1. 用于探测活细胞核内蛋白和迁移行为的CPR平台原理图作者将40个标记点定义为四个部分，从细胞内探测区域的边缘（起点）到微通道的静脉孔，每十个标记点设为一组间隔。课题选择与细胞迁移率相关的MDM2蛋白作为检测蛋白，其表达水平与细胞迁移速度呈正相关。综合分析结果显示，45%以上的MDM2蛋白过表达的细胞迁移到20号-40号微标记，而对照组细胞只在20号微标记内迁移，表明MDM2蛋白过表达的细胞的迁移能力增强。作者根据在迁移观察区移动的时间和细胞的迁移距离估计了这些细胞的迁移速度，并验证了MDM2蛋白过表达的细胞的速度明显快于对照细胞。通过CPR平台和MATLAB软件计算的迁移速度具有可比性，证明了CPR平台在一定时期内通过简单地计算标记点来评估细胞迁移速度的可行性。根据MDM2蛋白表达和细胞迁移速度的关系分析，MDM2蛋白的表达水平与细胞迁移速度呈正相关关系(图2)。这一结果与报道的MDM2蛋白高表达促进肿瘤迁移的研究一致。图2. 细胞迁移分析的CPR平台为评估CPR平台的多功能性，作者在CPR平台上分析了六个原发性肺肿瘤细胞样本 (T1-T6) 和六个原发性正常肺细胞样本 (N1-N6) 细胞核内MDM2表达。在所有六个原发性肺肿瘤细胞的细胞核中都观察到明显的绿色荧光，表明MDM2蛋白在肿瘤细胞中的高表达。研究发现，相同时间内，原发性肺肿瘤细胞比原发性正常肺细胞迁移得更远(图3)。原代细胞的成功检测显示了CPR平台在分析不同来源的细胞样本方面的高度通用性。图3. 用于跟踪原代细胞迁移的CPR平台该研究第一单位为北京市生物医学工程高精尖创新中心和北京航空航天大学生物与医学工程学院。常凌乾教授为主要通讯作者。第一作者为孙宏博士、董再再博士和张清洋博士。文章的其他主要共同作者包括，中国科学院大学深圳先进技术研究院任培根研究员，北京大学肿瘤医院吴楠教授。https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0956566322003219