低温超高压破碎仪原理

你好，我们开发出150MPa集破碎、乳化、合成、分散功能于一身的超高压均质机，有5L/Hr和 75L/Hr两种型号，请问目前主要有哪些竞争者，该产品主要用途。 谢谢！

超高压液相色谱中使用亚2μm填料,以其高效、快速的特点已成为液相色谱发展的新方向之一。该文在回顾压力对液相色谱行为影响研究的基础上,对超高压液相色谱仪器的进展及相关问题加以系统综述,引文36篇。【作者单位】：南京理工大学工业化学研究所 南京理工大学工业化学研究所 南京理工大学工业化学研究所 大连依利特分析仪器有限公司 中国科学院大连化学物理研究所 江苏南京210094 大连依利特分析仪器有限公司 辽宁大连116023 江苏南京210094 大连依利特分析仪器有限公司 辽宁大连116023 江苏南京210094 辽宁大连116023 中国科学院大连化学物理研究所 辽宁大连116023 辽宁大连116023 华东理工大学 上海200237【关键词】：超高压液相色谱仪 亚2μm填料 柱效 综述【基金】：国家自然科学基金面上基金资助项目(No.20675083)【分类号】：O657.72【DOI】：CNKI:SUN:SPZZ.0.2008-01-020【正文快照】：　　在进行色谱方法建立时,人们力求在尽可能短的分析时间内获得尽可能多的样品信息。因此,高效、快速的色谱分离方法始终是分析学家追求的目标。在液相色谱方法中,采用小粒径的填料通常可以得到更高的柱效及更快的分离速度。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=107372]超高压液相色谱仪的研究进展及超高压引起的相关问题[/url]

巴浦洛夫说：“科学是依赖于方法的进步程度推动而前进的。”被列为二十一世纪十大尖端科技之一的超高压生物处理技术，是一次工业革命，它将对生物工艺学产生巨大的影响。它提出了大量的新的研究课题，丰富了生物学理论，蕴含着极大的技术开发潜力，具有广阔的市场前景。　　超高压生物处理技术应用领域非常广泛，为生物、医药和食品工程的科学研究、产品开发、工艺改革提供新的平台。1.病毒灭活　　200～300Mpa超高压能破坏病毒膜结构内部的非共价键结合。使膜衣壳蛋白亚单位之间解体，空间结构变化，构象转换，生物活性改变，从而使病毒颗粒丧失感染性。但超高压不破坏共价键，因此抗原的单个亚单位未被破坏，保持了免疫原性不变。用此方法可以获得没有传染性而免疫原性不变的完整的病毒颗粒。２.制取疫苗　　传统的制取疫苗方法均采用热力和化学处理灭活病毒，这些方法存在很大弊端。例如流感病毒灭活疫苗传统制备方法为化学方法。它使用化学试剂甲醛灭活病毒，易使病毒表面粒子受损，影响疫苗的免疫原性。同时甲醛具有刺激性和副作用，接种后易引起人体反应。超离心机和层析色谱技术使病毒纯度大大提高，但儿童使用仍有不良反应。流感病毒亚单位和表面抗原疫苗接种，虽然不良反应有所减少，但其免疫原性不如纯化的全病毒粒疫苗。而超高压250Mpa灭活疫苗的方法，不仅保留流感全病毒完整结构不被破坏，而且病毒完全灭活，同时抗原的免疫原性不受影响，反而效价提高。它不残留化学物质成分，使用安全。超高压灭病毒具有广谱性，对于这种变异快，变种多的流感病毒最为适宜，它工艺简便，生产周期短，成本低。３.处理血浆　　目前已有多种方法应用于血液制品的病毒灭活处理，如：巴斯德法、S/D法、亚甲兰光照法等。但现有的这些方法都有一定缺陷。S/D法只对有脂质包膜的病毒有效，而且在给病人输血前必须将灭活剂彻底清除。过滤法处理过程缓慢，价格昂贵，而且只对高纯度血液制品有效。加热处理会使蛋白质变性，需加入稳定剂。更重要的是目前所采用处理过程都有降低血液及血液制品中蛋白质治疗功能的可能性。超高压灭活血浆中的病毒是一个物理过程，无化学品加入，也不同于高温处理，施压和泄压都是即时的，均匀的。它对致病微生物的杀灭有广谱效果。没有交叉污染。实验证明，适当的超高压对血液制品的活性成分无明显的损伤，是一种高效的、简洁的、可靠的病毒灭活方法，具有很好的应用前景。

最近要买一台超高压微波消解仪，在CEM、安东帕和麦尔斯通三家中纠结，大家用的都是哪家的啊?

单位买了一台超高压[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]做农残，大家能交流一下都用什么柱子做农残比较好哇

理论塔板数跟保留时间和半峰宽有关，现在的超高压液相用的柱子更短，粒径更小，能在很短时间内实现分离，但是按照现在的标准，往往塔板数就达不到要求，原来10分钟出峰的物质可能只需要不到1分钟就出峰了，峰型是挺尖锐挺好看的，可问题是踏板数缺只有几百。如果按照药典的要求，我相信很多超高压液相是无法达到塔板数要求的，但是超高压的优势在于快速，我们不能因为这个不用吧，而且这是未来的趋势。 小弟在这里抛砖引玉，大家发表一下高见。

目前国内对细胞破碎机的研究局限于实验研究,仅对某种结构均质阀的均质效果进行验证与分析,或是选择结构参数。实验研究的局限性使这种分析不够全面。高压细胞破碎机是目前生物工程领域广泛使用的一种细胞破碎机。作者结合近期国外对高压细胞破碎机的理论研究工作,应用半经验半理论的方法,分析探讨了高压细胞破碎机的均质理论。高压细胞破碎机的结构及工作原理： 高压细胞破碎机由高压泵和破碎阀两部分组成,高压泵通常采用柱塞往复泵,其结构与一般柱塞泵相同。破碎阀安装在柱塞泵的排出管路上,一般由阀芯和阀座构成,阀芯和阀座的结构形式对破碎效果、能耗以及阀的磨损影响极大。国外对破碎阀的结构进行了大量研究,设计出许多不同结构的破碎阀,研究主要围绕下列问题进行：1，在较低操作压力下提高破碎效果2，提高阀的使用寿命。意大利Niro Soavi公司为此，开发出R型细胞破碎阀，经过多年的实际使用，获得用户的认可。高压细胞破碎机工作原理： 高压细胞破碎机有一个或数个往复运动的柱塞，物料在柱塞作用下进入可调节压力大小的阀组中，经过特定宽度的限流缝隙（工作区）后，瞬间失压的物料以极高的流速（1000米/秒，最高可达1500米/秒）喷出，碰撞在阀组件之一的碰撞环上，产生三种效应： 空穴效应：被柱塞压缩的物料内积聚了极高的能量，通过限流缝隙时瞬间失压，造成高能释放引起空穴爆炸，致使物料强烈粉碎细化。（主要应用于均质） 撞击效应：物料通过可调节限流缝隙的以上述极高的线速度，喷射到用特殊材料制成的碰撞环上，造成物料粉碎。（主要应用于细胞破碎） 剪切效应：高速物料通过泵腔内通道和阀口狭缝时会产生剪切效应。（主要应用于乳化）经过这三种效应处理过的物料可均匀细化到0.1μm-2μm粒径。

哪里有卖二手的UPLC超高压泵？

1200 安捷伦超高压液相色谱系统好用不？

有再次购买液相设备的预算。因为我们就是从事液相检测，对液相设备还是比较了解的。但是买什么就真的不好决定了。备注：我们现有Agilent 1100（自动进样），waters 600（手动）。目前见到很多关于超高压液相的资料和说明，但是毕竟才出来几年，姑且先不考虑其技术成熟问题，认为其可以用。但是目前还是涉及到一个很实际的问题：超高压液相的信价比问题，它真的比目前非常成熟的普通液相好很多吗？买它值吗？？？？？希望诸位有经验的版友能提供一些可参考的信息。谢谢！如果有相关经验的版友最好能够说明是对W还是A的设备评价。

随着Waters的UPLC问世，并得到分析工作者的广泛认可，越来越多的液相厂商也开始研发并推出类似产品。比如Jasco、Agilent、Shimadzu、ThermoFisher和Hitach都开始角逐这个市场，不过好象并不是所有的产品都是真正的超高压，彼此之间都有什么特点，不知道用过这些奢侈品的高人能不能有一些可以分享的经验供大家学习。

超高压消解的优点和缺点？

改为超高压液相分析，其方法要验证吗。我们公司检查提到这个问题，我感觉是需要验证的，但是苦于没有这样的经验，希望园子的前辈指点啊！

[color=#444444]今天拆开一根报废的安捷伦超高压液相色谱柱1.8um的，准备倒出就填料，重新填充手性填料。可是我发现这款超高压色谱柱的筛板卡在柱管里，填料用液相高压泵300bar也冲不开，不知道怎么弄出来，如果有高手曾经拆过这种柱子请赐教拆柱方法。不胜感谢。[/color]

在大家使用的超高压液相色谱中有没有碰到管接件发生问题的?比如接头松动，管道不均匀等。

样品消解需要高压到超高压都可　Anton Parr的multiwave 3000和CEM mars的easyprep各有什么特点？温度压力哪个控制更好？安全性呢？耗材更换频率(按照样品数或使用时间)? 谢了

求 毛细管电泳仪和 水介质超高压实验机的 相关信息和询价我采购啊请发资料到mengqi_0315@sina.com

[b]请问如何利用超高压液相色谱逐步确定植物组织中花色苷种类?[/b]

各位老师： 新手上路，求教安捷伦1290-6470超高压液相色谱三重串接四极杆质谱仪操作！

超声波细胞破碎仪是利用一种超声波在液体中产生的空化效应而使目标细胞破碎的多功能、多用途的仪器。超声波细胞破碎仪的原理：由换能器将电能转换为超声能，超声能量作用于液体介质产生密集的空泡，随着空泡的生长破裂，产生巨大的剪切力及高温高压，从而起到将目标细胞破碎乳化的目的。超声波细胞破碎仪用途广泛：1、超声波提取生物纳米在超声波化学反应中，由空化效应产生的强压力脉冲，能够产生许多化学合成所要求的高温高压，超声波化学合成所利用的正是空化效应的能量，利用这些能量能在一些特殊粉末表面合成出需要的纳米粒子。 2、超声波制药（1）注射用药的细化、均化——将磷脂类与胆固醇混合用适当方法与药物混合在水溶液中，经超声细化、均化得到更小的利于静脉注射的微小药物粒子。（2）中草药提取——利用超声分散破坏植物组织，加速溶剂穿透组织作用，提高中草药有效成分提取率。如金鸡纳树皮中全部生物碱用一般方法侵出需5小时以上，采用超声分散只要半小时即可完成。（3）制备混悬剂——在超声空化和强烈搅拌下，将一种固体药物分散在含有表面活性剂的水溶液中，可以形成1um左右口服或静脉注射混悬剂。例如“静注喜树碱混悬剂”、“肝脏造影剂”、“硫酸钡混悬剂”等。（4）疫苗制备——将细胞或病菌借助于超声作用将其杀死以后，再用适当方法制成疫苗。 3、超声波对化妆品的分散为了更进一步提取药物精华和粒子微细化，并节约生产成本，达到分散、乳化效果，使化妆品更深入渗透到肌肤里层，让肌肤很好的吸收，发挥药物的效力和作用，采用超声波乳化可达到非常理想的效果。 4、超声波对酒的醇化酒味醇厚的主要影响因素是酸的形成、酯化。刚出厂的白酒含有戍醇，有辛辣味，传统制造时，这种气味要经过很长时间贮藏才能使酒味变醇。而利用超声波处理的白酒可使酒的老熟时间缩短1/3到1/2。超声波细胞破碎仪可以并且已经被广泛用于生物化学、微生物学药理学、物理学、动物学、农学、医学、制药等领域的教学、科研、生产。

超声破碎的原理：超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它既是一种波动形式,又是一种能量形式。超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热（42－43℃）。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温（约5000℃）、高压（可达500×104Pa），可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。损伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。所以如果使用玻璃管，可能会碎裂，而通常使用的是塑料试管。 1、大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。 2、3、酵母破碎的问题/a、一般的PROTOCOL都是用glass beads，破碎酵母细胞sigma G-8772 酵母破碎效果好的我所做过的方法中还是玻璃珠，效率很高，而且对目的蛋白活性不会有什么影响。一般应该用这个方法。 b、化学裂解的方法，10g酵母 加1ml的乙酸乙酯，充分搅拌至液体状。此法的裂解效果不错的。加尿素裂解液（尿素8mol/L, NaCl 0.5mol/L,Tris 20mmol/L, EDTA 20mmol/L, 2%SDS, PH值8.0），据说效果可以c、毕氏酵母细胞破碎法文献上的方法： The pelleted cells were resuspended in 200 ll 1±8 M NaOH, 1±2 M b-mercaptoethanol, and incubated for 5 min on ice. After addition of 200 ll 10%TCA, the mixture was incubated for 5 min, centrifuged, and the pellet was resuspended in 50 ll 2?SDS-PAGE loading buffer and neutralized at pH 7±0 by adding 5±10 ll 1 M Tris base. The samples were heated to 95 °C for 3 min before loading onto SDS-PAGE gels (12% acrylamide). 若是想得到胞内蛋白可以用蜗牛酶处理，效果比较好！

法国Automation 2000公司推出的DGPT2-HP变压器测控保护装置，是一款专为超高压环境下油浸变压器设计的综合监测与保护设备。以下是对该产品的详细介绍： [b]一、产品概述[/b] DGPT2-HP变压器测控保护装置集成了多种先进的监测技术和保护功能，能够实时监测变压器的关键参数，如绝缘液压力、温度和液位等，并在异常情况下及时发出报警信号，确保变压器的安全运行。该产品特别适用于需要设置压力高于0.5bar的超高压应用场景，为变压器提供全面的保护。 [b]二、主要功能[/b] [list=1][*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]超高压报警[/font]：DGPT2-HP能够监测变压器油箱内的绝缘液压力，当压力超过预设的超高压阈值时，立即发出报警信号，提醒运维人员采取措施，防止因压力过高导致的安全事故。[*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]温度监测与报警[/font]：内置高精度温度传感器，实时监测变压器油温，当油温超过设定阈值时，同样会发出报警信号，确保变压器在允许的温度范围内运行。[*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]液位监测[/font]：通过液位传感器监测变压器油箱内的油位变化，及时发现并处理油位异常问题，防止因油位过低或过高导致的变压器故障。[*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]综合保护功能[/font]：除了上述监测功能外，DGPT2-HP还具备过流保护、短路保护等多种保护功能，确保变压器在各种运行条件下都能得到全面的保护。[/list] [b]三、技术特点[/b] [list=1][*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]高精度测量[/font]：采用先进的传感技术和算法，能够准确测量变压器的各项参数，提供可靠的数据支持。[*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]快速响应[/font]：在监测到异常情况时，能够迅速发出报警信号，缩短故障处理时间，降低损失。[*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]用户友好[/font]：提供用户友好的界面和便捷的操作方式，方便运维人员进行参数设置、数据查看和故障排查。[*][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]远程监控[/font]：支持远程监控和诊断功能，运维人员可以通过网络远程访问设备状态信息，实现远程管理和维护。[/list] [b]四、应用场景[/b] DGPT2-HP变压器测控保护装置广泛应用于电力、能源、工业等领域，特别是在超高压环境下的油浸变压器保护中发挥着重要作用。它能够适应各种复杂的工作环境，确保变压器在极端条件下的稳定运行。 [b]五、总结[/b] 法国Automation 2000公司推出的DGPT2-HP变压器测控保护装置是一款功能全面、性能卓越的设备。它以其高精度测量、快速响应、用户友好和远程监控等特点，在超高压环境下为油浸变压器提供了全面的保护。随着电力行业的不断发展，该产品将在更多领域得到广泛应用和推广。

最近做计算需要用到柴油的超高压情况下的粘压关系，不知道能不能做实验，或者哪里可以做这个实验？压力的确很大，200兆帕，也就是2000bar。先在此谢过

各位老师，做DON毒素，方法GB 5009.111里用到的是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]，现在想换超高压[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]做，需要做仪器的方法验证吗？还是只要仪器检定合格就可以做样了？求助各位老师，非常感谢！

配置如下：安捷伦1260 600Bar超高压液相色谱仪（包括四元泵带真空脱气机+自动进样器+温控模块+柱温箱+紫外检测器+软件）：Item NumberProduct Number/DescriptionNet Unit Price(USD)QtyTotal(USD)1G1311B 四元泵带真空脱气机1260 Quaternary Pump12G1311B 001起始工具包HPLC System Tool Kit13G1311B 003起始管线包HPLC Starter Kit incl. 0.12mm id cap1[/

超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它是一种波动形式，因此它可以用于探测人体的生理及病理信息，既诊断超声。同时，它又是一种能量形式，当达到一定剂量的超声在生物体内传播时，通过它们之间的相互作用.超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它是一种波动形式，因此它可以用于探测人体的生理及病理信息，既诊断超声。同时，它又是一种能量形式，当达到一定剂量的超声在生物体内传播时，通过它们之间的相互作用，能引起生物体的功能和结构发生变化，即超声生物效应。超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热（42-43℃），因为正常组织的临界致死温度为45.7℃，而肿瘤组织比正常组织敏感性高，故在此温度下肿瘤细胞的代谢发生障碍，DNA、RNA、蛋白质合成受到影响，从而杀伤癌细胞而正常组织不受影响。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡，使肿瘤出血、组织瓦解以致坏死。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温（约5000℃）、高压（可达500×104Pa），可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。杀伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。工作原理 同时，它又是一种能量形式，当达到一定剂量的超声在生物体内传播时，通过它们之间的相互作用.超声波是物质介质中的一种弹性机械波，它是一种波动形式，因此它可以用于探测人体的生理及病理信息，既诊断超声。同时，它又是一种能量形式，当达到一定剂量的超声在生物体内传播时，通过它们之间的相互作用，能引起生物体的功能和结构发生变化，即超声生物效应。超声对细胞的作用主要有热效应，空化效应和机械效应。热效应是当超声在介质中传播时，摩擦力阻碍了由超声引起的分子震动，使部分能量转化为局部高热，因为正常组织的临界致死温度为45.7℃，而肿瘤组织比正常组织敏感性高，故在此温度下肿瘤细胞的代谢发生障碍，DNA、RNA、蛋白质合成受到影响，从而杀伤癌细胞而正常组织不受影响。空化效应是在超声照射下，生物体内形成空泡，随着空泡震动和其猛烈的聚爆而产生出机械剪切压力和动荡，使肿瘤出血、组织瓦解以致坏死。另外，空化泡破裂时产生瞬时高温、高压，可使水蒸气热解离产生.OH自由基和.H原子，由.OH自由基和.H原子引起的氧化还原反应可导致多聚物降解、酶失活、脂质过氧化和细胞杀伤。机械效应是超声的原发效应，超声波在传播过程中介质质点交替地压缩与伸张构成了压力变化，引起细胞结构损伤。杀伤作用的强弱与超声的频率和强度密切相关。超声波细胞破碎仪的原理并不是太神秘、太复杂。简单说就是将电能通过换能器转换为声能，这种能量通过液体介质而变成一个个密集的小气泡，这些小气泡迅速炸裂，产生的象小炸弹一样的能量，从而起到破碎细胞等物质的作用

[b][font=微软雅黑][size=10.5pt]一、机械破碎法：[/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]是指利用捣碎机、研磨器或匀浆器[/font] [font=微软雅黑]等将细胞破碎开来[/font] [font=微软雅黑]。[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]1. 高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]2. 玻璃匀浆器匀浆：先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机为高，适用于量少和动物脏器组织。[/size][/font][b][font=微软雅黑][size=10.5pt]二、物理破碎法：[/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=10.5pt]指利用温度差、压力差或超声波等将细胞破碎开来。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]1．用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂(借助超声的震动力破碎细胞壁和细胞器）。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]机制：可能与强声波作用溶液时，气泡产生、长大和破碎的空化现象有关，空化现象引起的冲击波和剪刀力使细胞裂解。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]超声波破碎的效率取决于声频、声能、处理时间、细胞浓度和细胞类型等。（使用时注意降温，防止过热）。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]2. 高压破碎：细胞悬浮液从高压室的环状隙喷射到静止的撞击环上，被迫改变方向经出口管流出。此过程中细胞经历了高速造成的剪切的碰撞及高压到常压的变化，从而破碎释放内含物。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]这是一种温和的、彻底破碎细胞的较理想的方法。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]3. 反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。[/size][/font][b][font=微软雅黑][size=10.5pt]三、化学破碎法：[/size][/font][/b][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]指利用甲醛、丙酮等有机溶剂或表面活性剂作用于细胞膜，使细胞膜的结构遭到破坏或透性发生改变[/font] [font=微软雅黑]。[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]有些动物细胞，例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠（[/font]SDS）、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。浓度一般为1mg/ml。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]四、酶学破碎法[/font] [font=微软雅黑]：[/font][/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]选用合适的酶，使细胞壁遭到破坏，进而在低渗溶液中将原生质体破碎开来。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt]细菌细胞壁较厚，可采用溶菌酶处理效果更好。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]裂解液标准配方[/font]: ：50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在这个pH范围内比较好发挥作用) 。[/size][/font][font=微软雅黑][size=10.5pt][font=微软雅黑]综合叙述：无论用哪一种方法破碎组织细胞，都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入二异丙基氟磷酸（[/font]DFP）可以抑制或减慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入PMSF也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，而且应该在破碎的同时多加几次；另外，还可通过选择pH、温度或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提取。[/size][/font]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=97827] HJ/T 24-1998 500 KV超高压送变电工程电磁辐射环境影响评价技术规范[/url]

[color=gray]都说“生物是新世纪的朝阳行业”，不知道有多少人和我一样，因此在高考时奋不顾身的报考了生物专业，从此开始了朝（an）气（wu）蓬（tian）勃（ri）的科研狗生涯… 也不知道有多少人在毕业后依然选择了这个方向从业？从毕业到工作十年，时间过的如此之快，让人不禁感慨——我们这些人虽然天天浸泡在EB、聚丙稀酰胺里，五毒不侵，但也天天又是液氮又是干冰，绝对“冻龄”有方…[/color][color=gray]在这里我想简单小结一下“冻龄”的秘密… 其实这也是这些年自己感触最深的一些经验教训，那就是对于每天相处的E.coli也好、Hela细胞也好、果蝇也好、小白鼠也好… 多种多样的生物样本，要想分析过程省力、省心，那提取基因组DNA时的前处理真的是不能小觑。[/color][color=gray]提取的时候，样本所处的环境温度应该尽量低，以保证DNA完整，这样才能确保下游的实验操作的稳定性，例如PCR扩增、限制性酶切等等，免得天天提心吊胆，怕PCR条带不好，酶切切出杂带等等，倒不是怕凝胶回收的麻烦，而是这种品质的DNA往往还会出别的“幺蛾子”，那时候真的叫天天不应叫地地不灵… 老板就算再有钱也是连吃了你的心都有。[/color][color=gray]但矛盾的是，以我们现有的方法去做样本破碎，这个破碎过程本身，无论是研磨还是匀浆，都会因为高速的处理过程而产生热量，导致样本温度升高。那么下面在这里分享一下以往做实验的小结，看看能不能帮到更多人？如果大家有更好的方法也欢迎拍砖：）[/color][b][color=gray]（一） [/color][color=gray]实验室常年备有干冰或液氮：[/color][color=gray]使用液氮：[/color][/b][color=gray]传统方法是使用陶瓷研钵，清洗干净之后灭菌、烘干、冷却，然后倒入液氮先预冷研钵和研磨杵，再放入剪切好的动物或植物组织，补充一些液氮，进行手工研磨。补充液氮后动植物组织内的水分会迅速成冰，如果想研磨成粉，女生会感觉比较费力，所以作者本人已经开始使用仪器的方法研磨，成本很低，也不需要方法验证，如果一个批次要处理很多个体的话会更高效、在提取基因组的时候也可以让第一个样品与最后一个样品的处理结果更加一致。[/color][img=,262,400]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142130_01_3141229_3.png[/img][color=gray]这种小研磨机实验室有好多，主要因为研磨杯和刀头的材质可以耐受液氮的温度，另外主机的马达有防护隔板，可以用酒精擦拭清洁，就能满足基因组提取的要求了。[/color][color=gray] [/color][b][color=gray]使用干冰：[/color][/b][color=gray]干冰的话也是比较方便的，因为不想液氮那样要稍微等待挥发，干冰是可以伴随样品一起研磨的。如果用研钵的话就会很费力了，依然可以采用仪器的方法——[/color][img=,690,611]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142131_01_3141229_3.png[/img][color=gray]这台研磨机我们实验室现在只有一台，一般都是拿来做野外回来的比较珍贵的样品。因为研磨杯有一次性的，这样不用担心样品间有痕量的交叉污染，还可以作为容器把剩下来的样本保存在冰箱里。如果需要提RNA，也可以用DEPC浸泡之后上高温蒸汽然灭菌后再烘干。[/color][color=gray] [/color][b][color=gray]（二）[/color][color=gray]不使用干冰或液氮，低温破碎：[/color][color=gray]低温下的匀浆：[/color][/b][color=gray]① [/color][color=gray]可以在样品容器外加上冰水浴，保持样品的低温。[/color][color=gray]② [/color][color=gray] [/color][color=gray]对于温度敏感的样品，在匀浆过程中，建议采用与分散时间（30秒~1分钟）等长的冷却时间，这样可以极为显著地控制液体温度，然后视样品特性，可重复1次或多次；例如：样品保存温度在6~7℃以下，匀浆破碎使用10000 rpm ，1 min，冷却 1 min，此时样品已得到充分分散，同时样品温度几乎维持不变。[/color][color=gray]③ [/color][color=gray]常见样品分散时间无需过长，匀浆后继续分散对大部分样品来说没有帮助。[/color][b][color=gray]低温下的研磨：[/color][/b][color=gray]可以选择机身带有夹层的分析研磨机，研磨室不需要很大，以免浪费样品。开始处理样本前就可先通入3℃冷却水，这样在没有其它物质接触样品的情况下同样可以维持研磨室内的低温环境。[/color][color=gray] [/color][b][color=gray]（三） [/color][color=gray]不使用干冰或液氮，常温裂解液裂解：[/color][/b][color=gray]有裂解液的情况下，一般用恒温水浴孵育就可以了，中间间歇振荡一下，帮助样本裂解，但消化时间一般也比较长。有一段时间我天天做小白鼠的“大屠杀”，对比不同组织用同一种试剂盒的提取效果，但小白鼠只有肝脏是比较好做的，脾脏、心脏多筋膜，脑部组织又多油脂，需要不同的手法来处理，孵育时间不一样，但又要尽量统筹所有样品在一个时间段内完成，避免步骤之间的时间差影响结果，所以就借用了师姐她们的“神器”，预设几个程序，免得出错，对于有筋膜的就用正反转，对于有油脂的就用低转速的方法，拿来塞上玻璃球做球墨也是好的，总之黑猫白猫能解决问题就是好猫了。[/color][color=#008000][img=,600,600]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709142132_01_3141229_3.png[/img][/color]