全自动细菌鉴定仪原理

[size=4] 传统的微生物分离、鉴定方法操作繁杂，周期长，准确性差，灵敏度低，对实验室技术人员的专业技术、操作技能、工作经验要求极高，快速和准确获得细菌的鉴定及药敏结果是非常必要的。近年来随着计算机的发展及广泛应用，微生物鉴定的自动化技术近十几年得到了快速发展。先后出现了许多全自动细菌鉴定与药敏系统，比如VITEK 系统、MicroScan WaikAway系统、MicroScan AS-4 微生物分析仪、PHOENIXTM系统等。这些技术的应用，为医学微生物检验工作提供了一个简便、科学的细菌鉴定程序，大大提高了细菌鉴定的准确性,在很大程度上提高了工作效率，但同时也应注意一些问题，本文对几种常用的鉴定系统在临床微生物检验中的应用情况做一综述。[back=rgb(243, 40, 255)]1 全自动微生物鉴定系统的基本原理 [/back] 全自动微生物鉴定系统是基于生物信息编码（数码）鉴定细菌的新方法。数码鉴定是指通过数学的编码技术将细菌的生化反应模式转换成数学模式，给每种细菌的反应模式赋予一组数码，建立数据库或编成检索本。通过对未知菌进行有关生化试验并将生化反应结果转换成数字（编码），查阅检索本或数据库，得到细菌名称。其基本原理是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。 鉴定系统的工作原理因不同的仪器和系统而异。不同的细菌对底物的反应不同是生化反应鉴定细菌的基础，而试验结果的准确度取决于鉴定系统配套培养基的制备方法、培养物浓度、孵育条件和结果判定等。大多鉴定系统采用细菌分解底物后反应液中pH的变化，色原性或荧光原性底物的酶解，测定挥发或不挥发酸，或识别是否生长等方法来分析鉴定细菌。 药敏试验分析系统的基本原理是将抗生素微量稀释在条孔或条板中，加入菌悬液孵育后放入仪器或在仪器中直接孵育，通过测定细菌生长的浊度，或测定培养基中荧光指示剂的强度或荧光原性物质的水解，观察细菌的生长情况。在含有抗生素的培养基中，浊度的增加提示细菌生长，根据判断标准解释敏感或耐药。[/size]

请问不同点在哪里？高通量实时荧光定量PCR系统：瑞士，Roche，型号是Ligtcler 480全自动荧光法微生物鉴定药敏分析系统：英国，SENSITITRE，型号是ARIS是不是前者可用于致病菌，微生物的定性定量检测，而后者只能是定性的筛选快速检测啊？并且想具体问下PCR如何用于致病菌、转基因食品的检测？大概原理，因为我本身不是读这个专业的，单位决定买这两台仪器，但是单位派我去开个什么购买仪器专家听证会之类的，所以想问问，因为资料上我看得不是很明白

[size=4] 我们对现今应用较为普遍的VITEK-AMS鉴定系统中报告“不能鉴定细菌”(UIO)菌株作了进一步分析，探讨其发生原因、处理方法，以期建立一套切实可行的仪器与手工方法相结合的细菌鉴定方法。[/size][size=4]　　[b]一、材料与方法[/b][/size][size=4]　　1. 仪器与试剂：VITEK-AMS 60型全自动细菌鉴定仪及其配套GNI、GPI、YBC试验卡（生物梅里埃公司产品)。[/size][size=4]　　2. 试验菌株：1 025株本院1999.10.21-2000.3.3临床标本分离的菌株进行了Vitek- AMS鉴定，其中应用GNI 卡631例、GPI卡334例、YBC卡60例。[/size][size=4]　　3.VITEK-AMS鉴定法：根据细菌表型特征，选择相应GNI+、GPI、YBC卡，严格按仪器操作说明进行，孵育后当检验地带网仪器报告结果为UIO时，挑取生长对照孔(GPI卡第1孔、GNI+卡第3孔、YBC卡第24孔)悬液于非选择性培养基上重新分离，观察是否纯培养，若是，分别按同法及以下两法鉴定。否则， 经纯培养后重新上机鉴定。[/size][size=4]　　4. 双歧检索鉴定法：根据Vitek全自动微生物分析系统技术资料提供的双歧检索表，依生化结果检索至属或种。[/size][size=4]　　5. 常规鉴定法：按照全国临床检验操作规程［1］进行，并经API系统(生物梅里埃公司) 复核鉴定至种。部分菌株鉴定依据文献［2］进行。 [/size][size=4]　　[b]二、结果[/b][/size][size=4]　　1. UIO发生机率：总共1025株细菌鉴定中，共出现UIO 44株，占4.3%。其中GPI卡334株，出现UIO16株，占4.8%；GNI+卡631株，出现UIO 24株，占3.8%；YBC卡60株，出现UIO4株，占6.7%。[/size][size=4]　　2.UIO发生原因：在44株出现UIO中，9株（0.9%)为待检细菌不纯，3株(0.3%)为浊度不合要求，2株(0.2%)为接种物孵育时间过长（超过48h），2株(0.2%)为超出试验卡鉴定范围（均为臭鼻克雷伯菌），1株(0.1%)为菌悬液不乳化（粘液型绿脓假单胞），其他如冲液时气泡过多，或其他原因不确定者27株（2.6%）。[/size][size=4]　　3.处理：（1）9株不纯菌株，经纯培养后，重新上机，均能成功鉴定。（2）35株纯培养但报告UIO菌株中，18株(1.8%)可通过双歧检索法获得结果，并与常规分类法结果完 全一致。3株（0.3%）浊度不合要求者经调整浊度后重新上机获得结果。 2株(0.2%)接种物超过48h菌株，经重新孵育后得以鉴定。1株(0.1%)为悬液不乳化菌株经|检验地带网|配制3个麦氏单位菌悬液，然后低速离心1～2 min(1 000r/min)，取上清液比浊并调节到所需的浓度后，得以鉴定。(3)余下11株(1.1%)菌中，仅2株(1株为大肠埃希菌，另1株为臭鼻克雷伯菌)不能从双歧检索表中查出结果，其他9株(主要为洋葱假单胞菌、琼氏不动杆菌、木糖产碱氧化杆菌等)，虽能从双歧检索表获得结果，但与常规鉴定法结果不相符合，或出现矛盾的生化结果，需增加试验项目，按常规鉴定方法及 API系统报告结果。[/size][size=4]　　[b]三、讨论[/b][/size][size=4]　　实验表明95.7%的临床分离菌株可通过VITEK-AMS正确鉴定，仅4.3%菌株无法一次性成功鉴定。细菌不纯是产生这部分菌株的主要原因（占近1/5），其他如待检菌菌龄、菌液浓度也是关系鉴定成败的关键。由于仪器本身原因（如对于罕见生物型、新种或不典型菌株无法鉴定）也不可忽视。正确处理这部分菌株，有重要的临床意义。实际应用自动化仪器时，必须挑取纯培养菌落，可提高鉴定率，对确认为纯培养而无法鉴定者，可通过传统分类法，参照双歧检索表能成功鉴定将近一半菌株，因此合理应用双歧检索表不失为一种较好的辅助方法。但仍有占总数1.1%菌株需用常规方法或其他方法如API系统重新鉴定。[/size][size=4]　　参考文献[/size][size=4]　　1，叶应妩，王毓三，主编. 全国临床检验操作规程. 第2版. 南京： 东南大学出版社,1997.5.[/size][size=4]　　2，Patrick R. Manual of clinical Microbiology (7th Edition). Washington DC: American Society for Microbiology, 1999.316-647. [/size]