分光光度计测浑浊度原理

能否用分光光度计测啤酒的吸光度来表征酒中的浑浊度？浑浊是由糖造成的，那么测量时波长应该选多少？大家有谁测过？好像有很大的难度。不过，发现楼主工作涉及的范围非常的广泛啊

我最近要测微量硫酸根的浓度，国标利用比浊法，但是我觉得人为因素太大了，我可以利用分光光度计，做一个工作曲线，然后利用吸光度得出硫酸根的浓度吗

我最近要测微量硫酸根的浓度，国标利用比浊法，但是我觉得人为因素太大了，我可以利用分光光度计，做一个工作曲线，然后利用吸光度得出硫酸根的浓度吗[em0815] [em0815]

浊度也可以利用比色计或分光光度计等仪器，通过测定光线照射样品时由浊度引起的透射损失而进行估测。但是，这种测定方法不被相应的管理机构认可，其测得的浊度也不符合美国公共卫生组织(APHA)对浊度的定义。 透度测定的结果也会由于色度对光的吸收或颗粒物质对光的吸收等干扰的存在而不够准确。而且，透度测定方法与浊度计测定方法之间没有任何相关关系。不过，色度计和分光光度计有时可用来检测浊度的大幅度变化或用于过程控制。 真正的浊度测定必须使用浊度计。

各位大侠： 我想问一下用紫外可见分光光度计测浊度和用浊度仪测浊度的区别是什么？为什么根据国标GB13200-91配制的浊度标准溶液用浊度仪来测定的时候偏差会很大呢？如：100NTU的浊度标液用浊度仪测出来是200NTU.我想问一下问题出在那里？有谁可以帮帮忙呢？

浑浊是悬浮于水中的胶体颗粒产生的散射现象。水的浑浊程度叫浑浊度。现行通用的计量方法是把1升水中含有相当于1毫克标准硅藻土所形成的浑浊状况作为一个浑浊度单位,简称1度。浑浊度同胶体颗粒的物质种类、粒径大小、表面状态有关。计量浑浊度时应有浑浊度标准品作为对照。 浑浊度检定一般采用浊度计法。浊度过低时可用目视法将水样与标准浑浊度液进行比较。 地面水浑浊主要是泥土、有机物、微生物等物质造成的。浑浊度升高表明水体受到胶体物质污染。中国规定饮用水的浑浊度不得超过5度。

各位前辈，浑浊度测定用到的散射式浑浊度测定仪，大家有没有什么牌子推荐？我找到的价格差距有点大，一千以下的也有，三四千也有，近万的也有。。。。。

紫外-可见分光光度计可不可以用来测溶液浊度?简陋的实验条件让人不得不想法一机多用.[em09]

公司准备对白砂糖进行混浊度及色值的检测，需要用到分光光度计，但是我不太了解这方面的信息，请问有朋友对这个比较熟悉吗？哪个牌子、哪个厂家生产的分光光度计性能好，价格便宜呀？

近日检测一地下水水样，发现里边有肉眼可见物，具体来说就是细小的白色悬浮物，在检测浑浊度的时候，就会有一定的影响，因为悬浮物在水里不稳定，所以浑浊度也会相对不够稳定，影响检测结果判断。想问大家遇到这样的情况会怎么处理？如何去除肉眼可见物的干扰而不影响浑浊度的测定。

【作者】： 【题名】： 智能浑浊度检测装置的研制【期刊】：【年、卷、期、起止页码】：【全文链接】：https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-YBJS803.007.htm

浑浊度测试仪是在有光亮的地方检测，还是在暗处检测，两者之间测出的数据差别好大。

水质实验室日常测定质控样浑浊度时， 要求测定自配的跟踪样（2.00NTU ) , 质控要求允许的偏差多大？ 依据在那里，我找了许多资料都没有明确指出。 例如，我配制2.00 NTU 质控样时，如测定为2.10 这正常吗，另浑浊度2.00 是非常难配制准确的

浊度仪的测定方法　　目前我国测定水的浑浊度有以下方法：　　(1)透射式(包括分光光度计与目视法)：根据朗伯一比尔定律，以透过光的强度来确定水样的浑浊度，水样浑浊度与透光率的负对数呈线性关系，浑浊度越高，透光率越小。但受到天然水中存在的黄色的干扰，湖泊、水库水还因含有藻类等有机吸光物质，对测定也有干扰。选用680rim波长，可避免黄色和绿色的干扰。　　(2)散射浊度仪：根据瑞利(Rayleigh)公式(Ir/Io=KD，h为散射光强度，10为人射光强度)，测定某一角度上的散射光的强度，以达到测定水样浑浊度的目的。当入射光被粒径为人射光波长1/15～l/20的颗粒物所散射，强度符合瑞利公式，粒径大于l/2入射光波长的颗粒对光进行反射。这两种情况均可用Ir∝D来表示，一般采用90度角的光作为特征光来测定浑浊度。　　(3)散射-透射式浊度仪：应用Ir/It=KD或Ir/(Ir+It)=KD(Ir为散射光强度，It为透射光强度)，测定透射光和反射光的强度之和，来对样品浑浊度进行测定。因同时测定了透射和散射光的强度，所以在入射光强度相同的情况下具有较高的灵敏度。　　在上述三种方法中，以散射一透射浊度仪较好，灵敏度高，并且水样中的色度不干扰测定。

环境检测中，采样时对水的样品状态该怎么描述，从颜色，嗅和味，浑浊度？？

求助：地下水水质分析浑浊度与含沙量测定方法及相关标准，谢谢大哥大姐

做浑浊度实验时，配制标准浊度溶液用高岭土方法太复杂而且耗时太长，最近看见简单的方法：硫酸肼和己撑四胺就可以配制浊度标准溶液，可是硫酸肼和己撑四胺在哪里能买的到？？？请各位谁知道能告诉下。。。己撑四胺有别的名称吗？

各位老师，绵白糖的检测标准QB/T5012中色值和浑浊度的计算都需要用到折光锤度，附录B中最大可以换算到30.8Bx；但是附录C中的表格只给出了折光锤度Bx40-44.9之间的锤度与浓度的换算，我想知道附录B中修正后的锤度是附录C中需要的折光锤度吗？在折光锤度在40Bx以下和44.9以上时我们需要参考哪个标准？麻烦各位老师。[img=,690,626]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403271535020024_2644_5542483_3.png!w690x626.jpg[/img][img=,690,488]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403271535091424_6598_5542483_3.png!w690x488.jpg[/img]

紫外分光光度计根本作业原理和红外光谱仪类似，使用必定频率的紫外可见光照耀被剖析的有机物质，导致分子中价电子的跃迁，它将有挑选地被吸收。一组吸收随波长而改变的光谱，反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内，关于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因而测量光谱可以进行定性剖析，而且根据吸收与已知浓度的标样的对比，还能进行定量剖析。　　紫外-可见分光光度计　　紫外-可见分光光度计的类型很多，但可概括为三种类型，即单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。　　1、单光束分光光度计　　经单色器分光后的一束平行光，轮番经过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简便型分光光度计结构简略，操作方便，维修容易，适用于惯例剖析。　　2、双光束分光光度计　　经单色器分光后经反射镜分解为强度持平的两束光，一束经过参比池，一束经过样品池。光度计能主动对比两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它变换成吸光度并作为波长的函数记载下来。　　双光束分光光度计通常都能主动记载吸收光谱曲线。由于两束光一起别离经过参比池和样品池，还能主动消除光源强度改变所导致的差错。　　3、双波长分光光度计　　由同一光源宣布的光被分红两束，别离经过两个单色器，得到两束不同波长1和2 的单色光;使用切光器使两束光以必定的频率替换照耀同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波利益的吸光度差值。关于多组分混合物、混浊试样(如生物组织液)剖析，以及存在布景搅扰或共存组分吸收搅扰的情况下，使用双波长分光光度法，通常能进步办法的灵敏度和挑选性。使用双波长分光光度计，能取得导数光谱。　　经过光学系统变换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长作业方式。假如能在1和2处别离记载吸光度随时刻改变的曲线，还能进行化学反应动力学研讨.

分光光度计的应用常识分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230标示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。　　　　分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。　　　　核酸的定量 　　核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。　　　　事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。　　　　除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。　　　　蛋白质的直接定量（UV法） 　　这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg 公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320nm 的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求A280的吸光值至少大于[f

朋友们，光密度是采用什么仪器测定的？是可见分光 光度计还是浊度仪？如果是可见 分光光度计的那对于浊度大的溶液如何测定？请高手指教,谢谢。

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。核酸的定量 核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。 事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。

请哪位专家指点一下分光光度计和比色计有区别吗？本实验室有一个比色仪，只有一个放试样的槽，不知道如何做标准曲线，能替代分光光度计测水和废水中色度、浊度吗？十分谢谢！

最近我做了一批皮革甲醛，分别用高效液相和分光光度计测，标准是采用GB/T 19941-2005，但两种方法做下来结果差好多啊，液相要比分光光度计小很多，前者做下来十几mg/kg，但后者可以做到九十几mg/kg，样液并不浑浊，所以感觉颜色干扰因素应该比较小，搞不懂了。。。 有大侠帮忙分析下吗？

偶尔会发现自来水会有些浑浊，于是公导要求测试自来水浊度，这要如何测试，需要用到什么设备。 目前手上有UV1240紫外分光光度计、DR2800光度计。请了解的同行提供个方法或标准！！不胜感谢！

最近有客户问我，分光光度计能否测DNA/RNA。请指点我，用分光光度计测上述物质的什么呢？原理又是什么？

紫外-可见分光光度计的类型很多，但可归纳为三种类型：单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。　　单光束分光光度计　　其光路示意图如前图(紫外-可见分光光度计的基本结构图)所示，经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶掖，以进行吸光度的测定。这种类型的分光光度计结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。国产722型，751型、724型、英国SP500型以及BackmanDU-8型等均属于此类光度计。　　双光束分光光度计　　其光路示意如下图所示，经单色器分光后经反射镜(M1)分解为弧度相等的两束光，一束通过参比池，另一束通过样品池。光度计能自动比较两束光的强度，此比值即为试样的透射比，经对数变换将它转换成吸光度并作为波长的函数记录下来。双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。由于两束光同时分别通过参比池和样品他，还能自动消除光源强度变化所引起的误差。这类仪器有国产710型、730型和740型，日立220系列，岛津-210，英国UNICAMSP-700等等。　　双波长分光光度计　　其基本光路如下图所示。由同一光源发出的光被分成两束，分别经过两个单色器，得到两束不同波长的单色光;再利用切光器使两束光以一定的频率交替照射同一吸收池，然后经过光电倍增管和电子控制系统，最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值ΔA(ΔA=A1-A2)。　　双波长分光光度计的优点：对于多组分混合物、混浊试样(如生物组织液)的分析，以及存在背景于扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏度和选择性。利用双波长分光光度计，能获得导数光谱。通过光学系统转换，使双波长分光光度计能很方便地转化为单波长工作方式。如果能在两波长处分别记录吸光度随时间变化的曲线，还能进行化学反应动力学研究。

求教：陈列式分光光度计的工作原理（即后分光式分光光度计）好像这种分光计在国内不多见！

[font=黑体][size=4]分光光度计的应用常识[/size][/font]分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。　　分光光度计的简单原理　　分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。　　核酸的定量 　　核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长 260 nm。 每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上 述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定 可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。　　事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和 溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液，如TE，可大大稳定 读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗 粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1-1.5A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。　　从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气 泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的 比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。　　除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如 A 260 / A 280 的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是 280 nm。纯净的样品，比值大于 1.8（DNA）或者 2.0（RNA）。如果比值低于 1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A 230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸 A 260 / A 230 的比值大于 2.0。A 320 检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A 320 一般是 0。　　蛋白质的直接定量（UV法）　　这种方法是在280 nm波长，直接测试蛋白。选择 Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。　　蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除 320 nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求 A 280 的吸光值至少大于 0.1A，最佳的线性范围在 1.0-1.5 之间。实验中选择 Warburg 公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A 280 的吸光值的变化范围不超过 1%，表明结果非常稳定。　　漂移的原因是因为 Warburg 公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。　　蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单；但是容易受到平行物质的干扰，如 DNA 的干扰；另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。　　比色法蛋白质定量　　蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。　　比色方法一般有 BCA，Bradford，Lowry 等几种方法。　　Lowry 法：以最早期的 Biuret 反应为基础，并有所改进。蛋白质与Cu2+反应，产生蓝色的反应物。但是与 Biuret 相比，Lowry 法敏感性更高。缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含 EDTA，Triton x-100，ammonia sulfate 等物质的蛋白不适合此种方法。　　BCA（Bicinchoninine　acid　assay）法：这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法。要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产 生 Cu+，后者与 BCA 形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在 562 nm 波长。此化合物与蛋白浓度的线性关系极强，反应后形成的化合物非常稳定。相对于 Lowry 法，操作简单，敏感度高。但是与 Lowry 法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰。　　Bradford 法：这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应，产生的有色化合物吸收峰 595 nm。其最大的特点是，敏感度好，是 Lowry 和 BCA 两种测试方法的 2 倍；操作更简单，速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定１小时，方便结果；而且与一系列干扰 Lowry，BCA 反应的还原剂（如 DTT，巯基乙醇）相容。但是对于去污剂依然是敏感的。最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大，无可比性。　　某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致，感到迷惑，究竟该相信哪种方法？由于各种方法反应的基团以及显色基团不一，所以 同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性。例如：Keller 等测试人奶中的蛋白，结果 Lowry，BCA 测出的浓度明显高于Bradford，差异显著。即使是测定同一样品，同一种比色法选择的标准样品不一致，测试后的浓度也不一致。如用Lowry 测试细胞匀浆中的蛋白质，以 BSA 作标准品，浓度1.34 mg / ml，以 a 球蛋白作标准品，浓度 2.64 mg / ml。因此，在选择比色法之前，最好是参照要测试的样本的化学构成，寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品。另外，比色法定量蛋白质，经常出现的问题是样品 的吸光值太低，导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大。关键问题是，反应后的颜色是有一定的半衰期，所以每种比色法都列出了反应测试时间，所有的样品 （包括标准样品），都必须在此时间内测试。时间过长，得到的吸光值变小，换算的浓度值降低。除此，反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因。此外， 非常重要的是，最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材质的比色杯，因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色，导致样品吸光值不准确。　　细菌细胞密度（OD 600）　　实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度。OD600 是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。 以未加菌液的培养液作为空白液，之后定量培养后的含菌培养液。为了保证正确操作，必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数，做出校正曲线。实验 中偶尔会出现菌液的OD值出现负值，原因是采用了显色的培养基，即细菌培养一段时间后，与培养基反应，发生变色反应。另外，需要注意的是，测试的样品不能 离心，保持细菌悬浮状态。　　分光光度计的重要配件 —— 比色杯　　比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根据不同的测量体积，有比色杯和毛细比色杯等。 一般测试核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不适合比色法测定。因为反应中的染料（如考马斯亮兰）能让石英和玻璃着色，所以必须采用一次性 的塑料杯。而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品。　　由于另外测试的样品量不同，所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求。 目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量，亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯，样品用量仅需 50μl，比色杯单个无菌包装，可以回收样品。如Eppendorf UVette?塑料比色杯，是目前比色杯市场上一个革新。 随着生命科学以及相关学科发展，对此类科学的实验研究提出更高的要求，分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器，也成为微生物、食品、制药等相关实 验室的必备设备之一。