当前位置: 仪器信息网 > 行业主题 > >

匀浆仪提组织蛋白的标准

仪器信息网匀浆仪提组织蛋白的标准专题为您提供2024年最新匀浆仪提组织蛋白的标准价格报价、厂家品牌的相关信息， 包括匀浆仪提组织蛋白的标准参数、型号等，不管是国产，还是进口品牌的匀浆仪提组织蛋白的标准您都可以在这里找到。 除此之外，仪器信息网还免费为您整合匀浆仪提组织蛋白的标准相关的耗材配件、试剂标物，还有匀浆仪提组织蛋白的标准相关的最新资讯、资料，以及匀浆仪提组织蛋白的标准相关的解决方案。

匀浆仪提组织蛋白的标准相关的论坛

  • 组织研磨仪与组织匀浆器的区别

    在用户咨询产品时我们常常把组织研磨仪与组织匀浆器当做是同一种东西，其实我们通常所说的组织研磨仪与组织匀浆器是有一定的区别的：通常所指的组织研磨仪是利用研磨球对样品的撞击、摩擦使组织破碎研磨的仪器，其体积较大，电驱动摇臂运转，应用广泛；而通常说的组织匀浆器是一种玻璃仪器，体积较小，手动研磨，主要适用于柔软的内脏组织。组织匀浆器的常见种类：1. 杜恩斯组织匀浆器（Dounce Tissue Grinder） 硼硅酸盐玻璃材质，有一松一紧两个研磨杵，用于粗磨和精磨2. 杜阿尔组织匀浆器（Duall Tissue Grinder）特点是内面磨砂，适用研磨肌肉，心脏、肺等器官或组织3. 坦布鲁克组织匀浆器(Tenbroeck Tissue Grinder)4. 锥形组织匀浆器（Tapered Tissue Grinders）5. 槌头组织匀浆器（Potter-Elvehjem Tissue Grinders）

  • 蛋白提取过程方法

    蛋白提取过程中，将组织样本冻干磨粉后加入水，盐、酸、碱等溶液进行提取，然后离心取上清和直接取少量组织以一定料液比加入缓冲液（200mM Tris-HCl、150mM NaCl、10mM EDTA、PH8.0）进行匀浆然后离心取上清这两种提取方式有什么区别？

  • 动植物膜脂和膜蛋白提取方法

    [align=left][font='times new roman'][size=16px]动植物膜脂和膜蛋白提取方法[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]大豆卵磷脂和肺腺癌细胞膜脂提取物的制备[/size][/font][/align]对于大豆卵磷脂样品，首先去除胶囊，将100 mg大豆卵磷脂样品用10 mL正己烷/异丙醇（1:1，v/v）稀释溶解，样品在4℃下超声10 min，样品再经0.45 μm微孔膜过滤，以备后续使用。肺腺癌细胞膜脂的提取方法参照Folch法。首先裂解肺腺癌细胞，向细胞液中加入18 mL已经配好的氯仿-甲醇（2:1，v/v）混合溶剂，摇匀后置于高速低温离心机4℃，3000 r/min离心10 min（摇匀过程中时刻注意溶液的温度，尽量避免温度过高）。然后向该体系中加入约2 mL的超纯水，摇匀后离心。上清液移除后用少量的甲醇-水（1:1，v/v）小心清洗上表面，得到肺腺癌磷脂提取物，过0.45 μm滤膜后，N[font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font]吹干，备用。冰箱-20℃保存，临用时现配溶液。[align=left][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肝脏膜蛋白质的制备[/size][/font][/align]参考试剂盒提取小鼠肝脏膜蛋白质的步骤如下：，试剂准备和组织预处理：取148 mg小鼠肝脏组织，用手术剪刀剪碎，移入4 mL离心管中，加入1 mL的膜蛋白提取剂A，冰浴15 min，之后将离心管中液体移入冰浴预冷玻璃匀浆器中，匀浆70次。去除未破碎的细胞：在4℃下将样品于900 g离心10 min，为了确保上清液的纯度应尽量避免接触沉淀。收集肝脏浆蛋白和细胞膜碎片：将上清液继续在4℃下1400 g离心40 min，获得细胞膜碎片。上清液（肝脏浆蛋白）应置于-70℃下保存备用。提取肝脏膜蛋白质：尽量将上一步骤中上清液吸取干净，避免肝脏浆蛋白的干扰。加入300 μL膜蛋白提取剂B，高速涡旋10 s后立即进行冰浴10 min，重复上述步骤三次。随后立即4℃下14,000 g离心15 min，吸取上清肝脏膜蛋白溶液，-70℃下保存备用。

  • 匀浆是和组织捣碎一个意思吗？

    匀浆是和组织捣碎一个意思吗？

    按国标的要求，蔬菜样品和乙腈用匀浆机高速匀浆2min，我们单位的匀浆机是下面这样的，结果转了一个早上，蔬菜也没有打碎，请问匀浆机就是这样使用的吗？如果不把打碎和乙腈混匀的话，怎么进行后续处理呢？因为没有打碎，后来又用组织捣碎机，结果依然没有打碎，我们单位的组织捣碎机的刀片是下面第二个图那样的，我感觉这种刀片两个朝上的刀片用处不大，而向下的刀片半径太小，只能处理中心附近的蔬菜，如果是容器边缘的菜品刀片是接触不到的。是我们这个捣碎机不行吗？[img=,690,920]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801111317_5955_3160938_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,517]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/01/201801111320_5801_3160938_3.jpg!w690x517.jpg[/img]

  • 做非靶代谢组学，组织匀浆液可以放多久

    用QE做组织的非靶向代谢组学，由于五一假期不能使用仪器，所以只能放假前进正离子模式，假期过后进负离子模式，想问一下组织匀浆液放在-80冰箱可以放多久啊？或者取一定体积上清吹干后放在-80能放多久呢

  • 匀浆机，实验室用的，用于动物组织样品，大家推荐下

    大家实验室一般用什么匀浆机啊，最近打算买一个，但不知道品牌、型号哪个合适。我们多数用来粉碎动物组织，有时候样品量不大，只有几克，不知道哪种合适？匀浆机太大的话，会不会打不碎，因为样品量太少？多谢大家啦！

  • 重磅！《复合蛋白饮料》行业标准发布！

    [align=left][font='宋体'][size=16px]导读： 日前，国家工业和信息化部发布2023第38号公告，由中国饮料工业协会牵头起草的《复合蛋白饮料》（QB/T 4222-2023）行业标准获得批准，将于2024年7月1日正式实施。[/size][/font][/align][font='宋体'][size=16px]近年来我国消费者对食品安全的关注度持续提升，国务院及有关部门陆续颁布了一系列涉及食品、乳品的法律法规及标准，形成了完善的法规标准体系，对于规范蛋白饮料企业生产经营、保障产品质量安全、维护消费者利益发挥着重要作用。[/size][/font][size=16px][/size][size=16px][font='宋体'] [/font][font='宋体']日前，国家工业和信息化部发布2023第38号公告，由中国饮料工业协会牵头起草的《复合蛋白饮料》（QB/T 4222-2023）行业标准获得批准，将于2024年7月1日正式实施。[/font][font='宋体'][color=#c00000]复合蛋白饮料是指以乳或乳制品，和不同的植物蛋白为主要原料，经加工或发酵制成的饮料。 [/color][/font][/size][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/01/202401101157586438_1004_5874949_3.jpeg[/img][font='宋体'][size=16px]行业标准《复合蛋白饮料》（QB/T 4222-2023）由中国饮料工业协会组织国内多家复合蛋白饮料生产企业修订完成。在该标准修订过程中，进行了深入的行业调研、专家审定等相关工作。[/size][/font][size=16px][font='宋体'] [/font][font='宋体']该标准规定了复合蛋白饮料的原辅料、感官、理化、食品安全等要求，描述了相应的试验方法，规定了检验规则、标签、包装、运输和贮存的内容，在修订时充分考虑了目前蛋白饮料产品在原辅料等方面的创新需求，兼顾了产品质量分级的市场需求。[/font][/size][size=16px][/size][size=16px][font='宋体'] [/font][font='宋体']与2011版相比，[/font][font='宋体'][color=#c00000]该标准对复合蛋白饮料的定义、蛋白质贡献率进行了修改完善，提高了蛋白质含量，并且根据产品质量分级，新增了浓型复合蛋白饮料、特浓型复合蛋白饮料，为复合蛋白饮料产品质量升级奠定了基础，满足了消费者对不同蛋白质含量的消费选择。同时对复合蛋白饮料产品的标签标示进行了完善，更有利于向消费者明示产品信息。[/color][/font][font='宋体'] [/font][/size][size=16px][/size][size=16px][font='宋体']复合蛋白饮料是我国蛋白饮料的主要品类之一，近年来，随着人们健康意识的不断加强，复合蛋白饮料迎来新的发展机遇。根据行业对主要生产企业的统计，复合蛋白饮料年产量达到60万吨以上。行业标准《复合蛋白饮料》（QB/T 4222-2023）的实施将在饮料健康产品的丰富度方面[/font][font='宋体']起到促进作用。[/font][/size][size=16px][/size][size=16px][font='宋体'][color=#c00000] [/color][/font][font='宋体'][color=#c00000]2021年国家“十四五”规划和2035年远景规划中明确“碳达峰、碳中和”为国家整体规划布局的重要组成部分，鼓励“绿色、健康、可持续发展”，《国民营养计划》明确“植物蛋白”为主要的营养基料，植物基产品发展前景广阔。[/color][/font][/size]

  • 【分享】高密度脂蛋白胆固醇的检测方法及标准化研究进展

    众多流行病学研究证实，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平与动脉粥样硬化(AS)呈负相关。美国Framingham的研究显示，HDL-C每减少0.026 mmol/L(1 mg/dl)，冠心病(CHD)发生的风险将增加2%～3%。目前临床上已广泛采用HDL-C 众多流行病学研究证实，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平与动脉粥样硬化(AS)呈负相关。美国Framingham的研究显示，HDL-C每减少0.026 mmol/L(1mg/dl)，冠心病(CHD)发生的风险将增加2%～3%。目前临床上已广泛采用HDL-C下降作为CHD危险因素指标。低HDL-C是CHD的主要危险因素，而高HDL-C被认为是负危险因子，具有保护性。作者参考美国国家胆固醇教育计划(NCEP)有关文件及新近文献资料，对HDL-C检测方法及标准化问题作一简述。 一、HDL的生物化学 与乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)相比，高密度脂蛋白(HDL)是密度最大的脂蛋白(d=1.063～1.210kg/L)。其组分中蛋白质(Pro)、磷脂(PL)、胆固醇(chol)和甘油三酯(TG)各约占50%、25%、20%和5%。HDL中Pro主要是载脂蛋白(apo)AI和AII；chol占总胆固醇(TC)的25%～35%，酯化胆固醇(CE)和游离胆固醇(FC)之比约为3∶1。HDL可通过酶和受体的作用，将周围组织的chol移至肝脏降解处理，同时抑制细胞结合和摄取LDL-C，阻止chol在动脉壁的沉积，故HDL被认为是AS的预防因子。

  • 【第三届原创参赛】掰掰我的一次凝胶过滤层析初步分离金属硫蛋白

    【第三届原创参赛】掰掰我的一次凝胶过滤层析初步分离金属硫蛋白

    [color=#d801e5][color=#dc143c][size=2]维权声明：本文为lily002原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的，均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。[/size][/color]大家好，我是凝胶色谱一名新手，以前常常在咱们论坛中学习和下载资料，看到论坛中轰轰烈烈的第三届原创大赛开始了，还有各位达人们的攻略、帮助，心里有点小激动呢~~~于是就拿出自己的一些实验和研究的东东来与大家分享！！说实话拿出来有点小担心，毕竟自己的水平不高拿出来有点献丑了！本着分享第一荣誉第二的原则，就硬着头皮绣出来了！！也希望大家轻拍哦！[/color][align=center][color=#d40a00]===================================Show Time========================================[/color][/align] 我在本次试验中研究的是金属硫蛋白(Metallothionein, MT)又名金属组氨酸甲基内盐，是分子量较小，富含半胱氨酸的非酶蛋白质，其内含有镉、铜、锌、汞等金属元素，不含芳香组胺酸残基。MT与微量元素代谢、重金属解毒、自由基清除以及应急反应有关。是一种广泛存在于各种组织的蛋白质。这些蛋白具有很高的结构稳定性。分析不同的动物和不同的组织器官，发现MT氨基酸组成差异很小。在真菌和动物体内，MT能够缓解镉、汞等有害元素的毒害并在不同应激条件保护机体，被认为是和生物体解毒有关的蛋白，在脊椎动物，MT则被更多地认为和锌的储藏和代谢有关。最显著的功能是可消除体内过量的自由基、重金属及有害物质的污染。在如今环境污染日趋严重的情况下，这种能增强自 身抗污染能力的产品，将越来越为人们所需要。香菇多糖、糖蛋白及 其衍生物具有较强的保肝、抗衰老、增食欲等功效，它是一种有效的免疫激活剂和调节剂，能通过提高机体免疫功能，抑制癌细胞的生长 和扩大。　　聚丙烯酰胺是以丙烯酰胺和甲撑双丙烯酰胺聚合而成的具有三维网状结构的凝胶，其孔径可调，性质稳定，无色透明。用聚丙烯酰胺凝胶作为电泳的支持物分离蛋白，具有分辨力高、酶活性影响小、显带效果好等优点，因此应用广泛。　　近年来，河流湖泊及近海海域不同程度受到重金属的污染，镉被美国毒理委员会列为第6位危及人体健康的有害物质。镉(Cd)是人体非必需元素，在自然界中常以化合物状态存在，一般含量很低，在正常环境下，不会影响人体健康。镉被人体吸收后在体内形成了镉硫蛋白，选择性地储存于肾、肝中，其中肾脏可吸收进入人体近1/3的镉，是镉 中毒的“靶器官”。其它如脾、胰、甲状腺和毛发等也有一定量的积蓄。镉在体内可与含羟基、氨基、硫基的蛋白质分子结合，使许多酶系统受到抑制，从而影响到肝、肾器官中酶系统的正常功能。由于镉损伤肾小管，病者出现糖尿、蛋白尿和氨基酸尿，特别是使骨骼的代谢受阻，造成骨质酥松，萎缩，变形等症状。　　本实验通过体外暴露氯化镉染毒法处理长江华溪蟹，对华溪蟹的蛋白进行SDS-PAGE电泳，得到相应的分子量，并通过紫外分光光度计对华溪蟹体内的金属硫蛋白进行鉴定。 [b]一、实验材料和仪器[/b] 1.材料：华溪蟹于家门口的水场市场购回，先在实验室的饲养池中用清水驯养数天，不喂任何食物，选取大小均等、重量相似的个体进行染毒处理。 2.部分主要仪器：高速冷冻离心机Centrifuge 5804R(eppendorf)，高速台式离心机 Centrifuge 5415D(eppendorf)，恒温水浴锅，循环水式多用真空泵，超低温冰箱MDF-U50V(日本SANYO)，国产凝胶柱(上海华美实验仪器厂,26*100)，SephadexG-50(Amerchsham)，AKTA Prime蛋白纯化系统(Amersham)，UV-2102 PC型紫外可见分光光度计(UNICOTM) [b]二、 实验过程：[/b]　　1.体外镉暴露法染毒　　因为镉对金属硫蛋白有高度的诱导作用，所以在的、高镉环境中可以诱导华溪蟹的金属硫蛋白的产生。[14]　　通过查阅资料及进行预实验，最终确定染毒的镉溶液浓度为58mg/l染毒时间为30h提取组织为肝胰腺。实验华溪蟹的解剖，用镊子将华溪蟹从染毒缸中取出，用清水冲洗干净，在解剖盘中先将其附肢剪掉，然后打开蟹壳，腮为半片状，分布在两侧，可以很轻易的取出，卵巢分布在中后部，颜色为亮黄色，颗粒状，用镊子可以方便取出，肝胰腺在卵巢和心脏的下面，将心脏剥离后向下夹入便可夹出整个肝胰腺，其呈暗黄色，絮状，从华溪蟹的螯中取出肌肉，先将其剪开，再用手术刀从螯壁上刮下肌肉组织，其半透明粘性大。　　2. MT粗提取的制备　　取染毒华溪蟹的肝胰腺，按每克湿组织用3ml0.02mol/lTris-Hcl缓冲液(pH8.6)在玻璃研钵中充分匀浆，将匀浆液放入-800C的冰箱中保存备用。　　3. Sephadex G-50凝胶柱的制备　　（1）凝胶柱的清洗　　将购买国产凝胶柱(26*100)用70%浓盐酸浸泡过夜，用洗衣粉水浸泡，冲洗，最后用去离子水冲洗干净。　　（2）凝胶填料的溶胀　　商品凝胶是干燥的颗粒状固体,将凝胶均匀铺洒在干净并且干燥的烧杯内,缓缓家入超纯水,使其溶胀.待凝胶体积超过烧杯容积1/2后,将一般凝胶转移至另一干净烧杯,防止凝胶溢出.用封口膜封住烧杯放2d,然后将烧杯放入真空泵抽滤2d,排除凝胶中的气泡.　　(注意在凝胶溶胀和处理凝胶悬浮液的整个过程中,不能进行激烈的搅拌,这样会使凝胶颗粒破碎而产生碎片,以至影响层析的流速,在处理凝胶时,严禁使用电磁搅拌,它会象磨一样,在很短时间内把凝胶碾碎.)　　（3）凝胶柱的装填　　把凝胶柱竖直固定好(有滤膜的一端为底部),用Ph8.6Tris-Hcl缓冲液润洗后加入柱体积1/3Tris-Hcl缓冲液,将少量凝胶转移至小烧杯中家Tris-Hcl缓冲液,用玻璃棒轻轻搅拌均匀,并观察凝胶是否有不均匀处(若有不均匀处,可将不均匀凝胶重新搅拌使重新沉降),然后用玻璃帮引流到凝胶柱内并不停地轻轻搅拌使凝胶均匀沉降,直至凝胶沉降至柱顶约10cm处,加Tris-Hcl缓冲液至柱顶,盖好柱顶螺帽,并将凝胶柱与蛋白纯化系统连接好,用Tris-Hcl缓冲液反复洗脱.　　（4）Sephadex G50 凝胶层析分离纯化MT　　将装着已提取的染毒华溪蟹组织的EP管从冰箱中取出解冻,把组织倒入研钵加入1.5mlTris-Hcl缓冲液,充分研磨,将样品转至5mlEP管中,把EP管插在漂浮板上,放入80℃恒温水浴锅5min,取出后抽去表层脂肪,上样.　　（5）洗脱峰紫外光谱扫描分析　　（6）洗脱峰SDS-PAGE分析　　[b]三、实验结果与分析[/b]　　1.SephdexG50凝胶层析分离纯化MT[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/07/201007291845_233096_1917139_3.jpg[/img]　　图1为匀浆热沉淀处理上样经SephadexG-50凝胶柱层析图,洗脱液为0.01mol/L Tris-Hcl缓冲液,pH为8.60,洗脱速度为0.5ml/min,在254nm处检测吸光度,结果显示,层析后样品分为Ⅰ,Ⅱ两个峰.　　2. 洗脱峰紫外光谱扫描分析　　由于金属硫蛋白中不含有芳香族氨基酸,所以在紫外不能形成280nm特征光谱.但是由于金属硫蛋白在二级结构中形成特征性的巯基金属簇,而导致在紫外光谱中出现对应于金属簇结构的特殊吸收峰,吸收峰的位置主要决定于金属的种类,如:镉硫金属簇的吸收位于250nm附近,而锌硫金属簇的吸收峰位于225nm附近. 将接收峰Ⅰ,Ⅱ分别在190nm-300nm扫描。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/07/201007291848_233097_1917139_3.jpg[/img]　　图2，3分别为匀浆热沉淀处理上样洗脱峰Ⅰ,Ⅱ稀释8倍后在190nm-300nm间紫外吸收光谱.结果显示,洗脱峰Ⅰ在280nm处都有一个高的吸收峰,而洗脱峰Ⅱ在250nm附近具有一个高的吸收峰,在280nm处急剧下降,据此分析MT主要存在于峰Ⅱ中.　　3.洗脱峰SDS-PAGE分析[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/07/201007291856_233100_1917139_3.jpg[/img]　　图4，5为匀浆上样后洗脱峰SDS-PAGE电泳图谱,如图8所示峰2峰3蛋白浓度过低,经冷冻干燥浓缩再次上样,图9显示MT存在于峰Ⅱ中但未能得到完全纯化,还需进一步上离子交换柱层析分离.

  • 不同种类匀浆机特点

    匀浆机大致可分为：组织捣碎匀浆机，可调高速分散器（匀浆机）、固体样品粉碎机。组织捣碎匀浆机广泛应用于科研，医疗，化工制药，食品工业等领域，物料在匀浆杯中通过电机旋转驱动旋刀同时进行劈裂，碾碎，掺和等过程，是物料搅拌捣碎的过程。可调高速匀浆机是科研单位，大专院校，医药工业，农业，环境卫生，森林保护等部门实验室进行细碎，匀化，分散，强烈搅拌，润温，溶解有机物或无机物等的理想设备。 采用高速串激电机，稳定的硅控调节系统，操作较简单。固体样品粉碎机适用于工业，农业，厂矿，医药卫生，煤炭地质等科研单位。可以对各种植物，土壤，矿石，矿物质以及各种粮食进行粉碎处理。

  • 胰蛋白酶原 标准操作规程(SOP)

    名称：胰蛋白酶原 标准操作规程(SOP)关键词：胰蛋白酶原目的：用于急性胰腺炎检查。**科胰蛋白酶原 标准操作规程(SOP)实验室名称 项 目 编 号 制定日期急 诊 室 胰蛋白酶原 JZ022 20040620手工法。标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并根据下述人员批准签字：专业主管，科主任。采用免疫层析法，包括两种人胰蛋白酶原-2抗体。一种结合在蓝色的乳胶粒子上，另一种被固定在膜上，捕捉与抗原抗体复分 物并与之结合，显示阳性结果。由上海基因生物技术公司技术公司提供。 新鲜尿液。1、让贮存罐与尿液达到室温。从贮存罐中取出所需数目的试纸条，紧闭贮存罐。不要接触浸渍区，在试纸条上做好标记；2、将浸渍区浸入尿液，保持到液体进入反应区，液面不要超过黄色区域，从标本溶液中取出试纸条，水平放置。五分钟后读结果，若反应区出现：两条蓝线 一条为阴性；无蓝线时为检测失效。正常人应为阴性。1、正常人为阴性。2、急性胰腺炎时尿液中的胰蛋白酶原-2抗原明显升高，可早期诊断。1、不要让试纸条留在标本中，吸收的量过大或过小检测将不准确。2、不要超过黄色浸渍区。试纸条上面部分不能弄湿。3、不要使用已变湿的试纸条。4、如果使用前反应区有蓝色，请不要使用。5、如果没有出现质控线表示结果无效。 操作人员 部门主管 质量负责人姓 名日 期

  • 【原创大赛】胶原蛋白知多少

    胶原蛋白是结缔组织的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的[font='Times New Roman',serif]25%~30%[/font]，作为一种生物高分子，胶原蛋白具有良好的生物相容性、可生物降解性及生物活性，在食品、医药、组织工程、化妆品等领域应用广泛。 胶原蛋白作为医美产品植入剂，能够增加皮肤的紧缩性、弹性和保湿度，使肌肤更显亮丽，有效改善肌肤纹理，使松弛的肌肤恢复年轻状态。补充胶原蛋白后，外来信号刺激细胞记忆功能可使缺损、凹陷、松弛的肌肤组织复原，对痤疮疤痕、表皮或真皮组织受损、上皮紧缩、深度细纹或其他软组织的缺损，均能明显改善。还能够帮助提升皮肤的机能，平衡干性及油性肌肤的油脂分泌，增强免疫保护能力。 胶原蛋白的质量控制是其流向市场的重要一环，首先要鉴别胶原蛋白，方法是取该产品[font='Times New Roman',serif]1g[/font]，加[font='Times New Roman',serif]3mL[/font]纯化水溶解后，制成[font='Times New Roman',serif]1:4[/font]的供试液，按[font='Times New Roman',serif]SDS-[/font]聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测[font='Times New Roman',serif]97000Da[/font]处有条带，相对偏差不超过[font='Times New Roman',serif]5%[/font]。 然后对产品中的胶原蛋白含量进行测定，原理是在强碱性溶液中，蛋白质与双缩脉试剂形成紫色络合物，紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比利用标准蛋白质溶液作对照，采用紫外可见分光光度法测定样品中重组胶原蛋白含量。操作过程如下：[font='Times New Roman',serif]1.[/font]精密取牛血清白蛋白[font='Times New Roman',serif] (BSA)[/font]标准品适量，用纯化水作溶剂，稀释成每[font='Times New Roman',serif]1mL[/font]含[font='Times New Roman',serif]10mg[/font]的溶液，再用纯化水作溶剂准确配制成[font='Times New Roman',serif]0mg/mL.2mg/mL[/font]，[font='Times New Roman',serif]4mgmL[/font]，[font='Times New Roman',serif]6mgmL[/font]，[font='Times New Roman',serif]8mg/mL[/font]，[font='Times New Roman',serif]10mg/mL[/font]的标准蛋白溶液备用。[font='Times New Roman',serif]2.[/font]双缩脉试剂：准确称取[font='Times New Roman',serif]15g[/font]硫酸铜、[font='Times New Roman',serif]6.0g[/font]酒石酸钾钠和[font='Times New Roman',serif]5.0g[/font]碘化钾，用[font='Times New Roman',serif]500ml[/font]纯化水溶解，在搅拌下加入[font='Times New Roman',serif]300mL10%[/font]氢氧化钠溶液，用水稀释到[font='Times New Roman',serif]1000mL[/font]，摇匀，即得。[font='Times New Roman',serif]3.[/font]分别取不同浓度标准蛋白质溶液各[font='Times New Roman',serif]1mL[/font]，然后加入[font='Times New Roman',serif]4mL[/font]双缩脲试剂。用漩涡式混合器允分摇匀后，室温放置[font='Times New Roman',serif]30[/font]分钟，于[font='Times New Roman',serif]540nm[/font]处进行比色测定。用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。以蛋白质的浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标椎曲线。[font='Times New Roman',serif]4.[/font]取重组胶原蛋白植入剂中溶液[font='Times New Roman',serif]1mL[/font]，操作同上，平行做两份。 在标准曲线中求出待测样品中重组胶原蛋白的含量，重组胶原蛋白含量应符合：[font='Times New Roman',serif]3.5mg/mL≤[/font]含量[font='Times New Roman',serif]≤5.5mg/mL[/font]。

  • 【参数解读】家有搅拌料理机，实验室有匀浆机，一起来参数解读下吧

    家用搅拌料理机对于制作果汁、豆浆、果酱、干粉、刨冰、肉馅等均能轻松应对。榨汁机都变得比较多元化了，既可以榨果汁，又可以搅拌和干磨，所以名字自然也就变成了料理机，也就是厨房的一些小事情它都可以料理，女生的鲜榨果汁，家用的花椒大料，搅拌肉馅等，可谓比较方便.实验室匀浆机就是把动植物组织打散并研磨成均匀的糊状物的机器，匀浆机广泛用于动物组织、生物样品、食品、药品、化妆品、农产品、固体、半固体、非水溶性样品的匀浆处理，可匀浆20ml～250ml。特别适合于微生物检测样本的制备，使从上述样品中提取细菌的过程变得非常简单、快速，只需将样品和稀释液（或乳化剂）加入到灭过菌的杯子中 ，然后将杯子按到匀浆仪上，开机定时即可。家有搅拌料理机，实验室有匀浆机，一起来参数解读下吧◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆列举部分仪器的个别参数，仅供参考：技术参数：一、先看看家用料理机，我们看中的市场上料理机产品的性能标准划分为六大类：出汁率、噪音指标、稳定性、易用性、飞渣情况、杯体材质。首先，料理机出汁率情况。出汁率高，说明一定的果料可以获得更多的果汁(或黄豆、玉米等)；相反，如果出汁率不高，就会导致果渣内留存很多果汁，不仅利用率低，也会造成营养浪费。从市场产品来看，出现这样的问题主要体现在刀齿的形状，转速的高低，以及推进器与刀齿之间距离是否合适等，另外出汁率和滤网的结构也有一定的关系，如果生产不合格或设计不恰当，都会影响到出汁率问题。其次是噪音指标。正常情况下料理机工作时的噪音应小于85dBA，噪音越小越好；如果噪音很大，则一般是因为机器在运转的过程中稳定性不好，在开机运转过程中或停机时产生擦网或磨盘现象。噪音过大对于使用者的享受情趣完全是一种折磨，同样也会降低机器的使用寿命。第三是稳定性。一般的料理机在工作中应是平稳的,不应有抖动、擦网现象出现；但某些料理机在运转过程中不易保持平稳性，甚至有倾倒而致使刀片飞出伤人的事故。而要控制电机的平稳性和噪音，就要设计一个合理的电机装入主机内的减震系统，以达到控制旋转网的平衡的效果，这就对电机及减震系统提出了较高的要求。其四是易用性。易用性体现在操作简单、易清洗以及使用效率上。其五，要看飞渣情况。质量合格的料理机，要求物料残渣能及时排出机体，并尽可能不留在旋转网上，饮品也能第一时间排出。某些质量不合格的料理机，残渣将会留在旋转网内，造成塞网现象；或者饮品不能及时排出，而导致液体进入主机内部，或即刻烧毁电机，或造成极麻烦的清理工程。其六杯体材质。一般料理机的杯体材质可分为两大类：玻璃与塑料，杯体的好坏可分为普通级和食品级，食品级的杯体通过国家认证相对普通级的更加安全。二、实验室的匀浆机技术参数马达输入功率： 500W马达输出功率： 300W处理量（S18N-10G分散刀头）： 1-100ml最大处理粘度： 5,000 mpas转速调节范围： 3500 -24,000 rpm 无级调速刻度式无负载噪音： 73 dB(A)〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓分割线〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓请您来解析：1、你最关心哪个参数？2、我们如何来确定匀浆效果？3、家用和实验室用的原理一样，从参数上看有哪些区别？欢迎大家参与讨论，补充自己想交流的参数，说说自己的认识或者提出自己的疑问！！！往期回顾：【参数解读】普通液相和超高效液相紫外检测器的参数解读与比较

  • 膜蛋白常见问题解析

    [font=宋体]膜蛋白是细胞膜上的重要组成部分，参与了多种生物功能的实现。然而，在膜蛋白的研究和应用中，我们经常遇到一些问题。本文将对膜蛋白常见问题进行解析，旨在帮助读者更好地理解和应用膜蛋白。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]什么是膜蛋白？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白是嵌入或附着在细胞膜上的蛋白质。[/font] [font=宋体]它们在细胞膜的功能中起着至关重要的作用，例如细胞信号传导、分子运输和细胞间通讯。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白的结构是怎样的？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白具有多种结构，但它们通常由疏水区和亲水区组成。[/font] [font=宋体]疏水区域与膜的脂质双层相互作用，而亲水区域面向细胞外或细胞内环境。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白是如何分类的？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白根据它们在细胞膜内的位置及其功能进行分类。[/font] [font=宋体]它们可分为整合膜蛋白、外周膜蛋白、跨膜蛋白或脂质锚定蛋白。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]整合膜蛋白的作用是什么？[/font][/b][font=宋体]整合膜蛋白嵌入细胞膜内，在分子运输、细胞信号传导和细胞粘附中起着至关重要的作用。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]外周膜蛋白的作用是什么？[/font][/b][font=宋体]外周膜蛋白位于细胞膜表面，参与细胞信号传导、细胞粘附和酶活性。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]什么是跨膜蛋白？[/font][/b][font=宋体]跨膜蛋白跨越细胞膜的整个厚度，参与分子运输、细胞信号传导和细胞粘附。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白如何将分子转运穿过细胞膜？[/font][/b][font=宋体]膜蛋白使用多种机制将分子转运穿过细胞膜，包括被动转运、主动转运、促进扩散和渗透。[/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]膜蛋白在疾病中的意义是什么？[/font][/b][font=宋体][font=宋体]膜蛋白参与许多疾病过程，包括癌症、囊性纤维化和阿尔茨海默病。[/font] [font=宋体]了解膜蛋白的结构和功能有助于开发针对这些疾病的新疗法。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白的提取方法[/font][font=宋体]有哪些[/font][font=宋体]？[/font][/b][font=宋体]①冷热交替法、反复冻融法、超声破碎法、玻璃匀浆法、自溶法和酶处理法，使细胞破碎，然后通过梯度离心得到含有膜蛋白的粗组分。[/font][font=宋体][font=宋体]②先分离膜，然后提取。如选用液氮研磨组织，加入匀浆缓冲液及蛋白酶抑制剂，然后差速离心、蔗糖密度梯度离心。收集[/font][font=Calibri]37%[/font][font=宋体]与[/font][font=Calibri]41%[/font][font=宋体]间的成分，即为质膜部分。裂解即可收集膜蛋白。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③刮下细胞后将细胞溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液中，于室温与液氮罐中反复冻融[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]次。[/font][font=Calibri]5000[/font][font=宋体]转[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度离心，驱除核及未裂解的细胞。取上清[/font][font=Calibri]12000[/font][font=宋体]转[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度离心[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液中。[/font][font=Calibri]12000[/font][font=宋体]转[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]度离心[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液[/font][font=Calibri]C[/font][font=宋体]中提取后测蛋白浓度，[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]电泳，分装后[/font][font=Calibri]-20[/font][font=宋体]度保存备用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]以上方法仅供参考，实际操作中可能需要根据具体情况进行调整。提取膜蛋白时，需要注意保持其生物活性，尽量减少对其结构和功能的破坏。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]膜蛋白有哪些？[/font][/b][font=宋体]膜蛋白是一类位于细胞膜上的蛋白质，具有重要的生物功能。根据其结构和功能，可以将膜蛋白分为不同的类型，包括：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①外周膜蛋白：也称为外在膜蛋白，主要分布在细胞膜的内外表面上，多为水溶性，以非共价（氢键或离子键）的形式与膜的极性端结合在一起。[/font][font=宋体][font=宋体]②内在膜蛋白：也称为整合膜蛋白，在膜蛋白中占比最高，约为[/font][font=Calibri]70%-80%[/font][font=宋体]。一般穿过整个细胞膜，分为跨膜部分和膜外部分，跨膜部分可以为β桶状结构，或者由几个α螺旋围成的亲水性孔道，有利于物质的传输。[/font][/font][font=宋体]③脂锚定蛋白：一类以共价键形式与磷脂连接的蛋白，由于磷脂可以插入细胞膜中，带着蛋白质一起镶嵌到膜上。[/font][font=宋体]此外，还有一些特殊类型的膜蛋白，如糖蛋白、转运蛋白和酶等。这些蛋白在细胞的生命活动中起到了至关重要的作用。例如，转运蛋白可以参与物质的跨膜运输，而酶则可以催化特定的化学反应。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在研究膜蛋白时，可以采用不同的技术手段，如[/font][font=Calibri]X[/font][font=宋体]射线晶体学、核磁共振和冷冻电镜等。这些技术可以帮助科学家们了解膜蛋白的三维结构，从而更好地理解其功能机制。同时，由于膜蛋白在药物设计和细胞治疗等领域具有广泛应用价值，因此对其结构和功能的深入研究具有重要的实际意义。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可关注义翘神州[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins][b]跨膜蛋白[/b][/url]页面：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/transmembrane-proteins[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

  • 【求助】蛋白标准物

    请教大虾们哪里有的卖蛋白标准物，我们实验室想要一份做标样，若是有的卖，是不是要证件或是证明之类的东东，谢谢

  • 植物蛋白提取方法

    一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液，样品制备完成。　　蛋白质提取液：300ml1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml2、甘油（Glycerol）75ml3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g　　这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！　二、植物组织蛋白质提取方法　　　三氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。　　药品：提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。　　这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！　　三、组织：肠黏膜　　目的：WESTERNBLOT检测凋亡相关蛋白的表达　　应用TRIPURE提取蛋白质步骤：　　含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）　　倒转混匀，置室温10min　　离心：12000 g，10min，4度，弃上清　　加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量）　　振荡，置室温20min　　离心： 7500g，5 min，4度，弃上清　　重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次　　沉淀中加入100％乙醇 2ml　　充分振荡混匀，置室温20min　　离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀1％SDS溶解沉淀　　离心：10000g，10min，4度　　取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT）　　存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。　　解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。

  • 铁蛋白，C反应蛋白，心肌三项检测试剂

    北京易斯威特生物医学科技有限公司产品介绍 铁蛋白（FER）检测试剂盒 （胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测FER的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的铁蛋白，适用于急性贫血，肝脏损伤等相关疾病的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.血清铁蛋白是血液去铁蛋白和铁核心Fe3+形成的复合物。是检查体内铁缺乏的最灵敏的指标。血清铁蛋白测定在临床上常用于缺铁性贫血的诊断。简单 便捷 快速 灵敏 环保 肌红蛋白/肌酸激酶/心肌肌钙蛋白I，心梗三项检测试剂盒（胶体金法）1.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的肌红蛋白，肌酸激酶，心肌肌钙蛋白I检测，用于临床快速诊断急性心肌梗塞（AMI）.2.最快速准确的辅助诊断方法。3.肌红蛋白：是心肌梗死的标志物，增高表示冠状动脉堵塞引起心肌严重缺血造成心肌梗死；4.肌钙蛋白：是一种心肌蛋白，升高见于心肌损伤，多见于心肌梗死，也见于心肌炎和心肺复苏后患者，特异性较高，阳性的话一般可确诊心肌损伤，阴性的话不能排除，因为肌钙蛋白的升高出现在心肌梗塞3-6小时之后，之前可能出现阴性。肌酸激酶敏感性较高，特异性较低，升高也出现在心梗3-8小时之后。5.肌酸激酶：主要存在于骨骼肌和心肌，在脑组织中也存在，是参与体内的能量代谢的一种酶。在临床上主要用于诊断心肌梗塞。心肌梗塞患者发病后2－4小时，血液中此酶活动即开始升高。比血清中谷草转酸酶和乳酸脱氢酶的活力变化都出现得早。 简单 便捷 快速 灵敏 环保 C反应蛋白（CRP）检测试剂盒（胶体金法）1.国内第一家免疫层析法检测CRP的产品。2.本产品应用世界上最先进的单克隆抗体技术结合胶体金（纳米金）免疫层析技术，以双抗体夹心法快速定性检测人血清，血浆中的C反应蛋白，适用于感染，炎性疾病，组织损伤，手术创伤及组织坏死等病变情况的辅助诊断3.最快速准确的辅助诊断方法。4.是一种能与肺炎球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断简单 便捷 快速 灵敏 环保

  • 有机沉淀法总蛋白提取实用小教程

    从 植物 叶片提取的植物总蛋白不但是家养类动物生长发育的重要营养物质，而且是具有潜力的新一代营养保健食品，因而掌握植物叶蛋白的提取方法至关重要，让我们一起了解这整个实验原理和过程吧。一、实验目的熟悉植物叶蛋白的几种提取原理和方法，了解其意义及其应用价值。二、实验原理植物叶蛋白或称绿色蛋白浓缩物(leaf protein concentration，简称LPC)，是从新鲜植物叶片中提取的高质量浓缩蛋白质，不仅是畜禽生长发育和生产畜产品的主要营养物质，而且目前也正成为人类的保健营养理想食品之一。天然蛋白存在于为数甚多的植物体内，对其分离应依据人们的利用目的及提取蛋白含量和品质加以考虑。天然蛋白质一般在溶液中呈稳定的亲水胶体状态，故LPC 亦称叶蛋白胶。其特点是：(1)水化作用 即蛋白质分子表面附有能有效防止蛋白质分子沉淀析出的水化膜;(2)电荷排斥作用 水化膜外还有电荷层(具阴、阳离子)能有效地防止蛋白质分子的凝集。故溶液蛋白质颗粒(溶质)呈溶解状态;(3)欲提取植物组织中的蛋白质必须利用溶解度的差异进行分离纯化(如盐析、有机溶剂分级沉淀法、疏水层析、结晶、加热、离心分离等法)，利用分子大小和形状差异进行分离纯化(分子筛层析法);还可利用电荷性质的差异分离纯化(离子交换法)。只要创造上述影响因素，即可使蛋白质从植物叶片中分离并沉淀出来。植物叶蛋白提取一般遵循如下基本原则：尽可能提高样品蛋白的溶解度，抽提最大量的总蛋白，减少蛋白质的损失;减少对蛋白质的人为修饰;破坏蛋白与其他生物大分子的相互作用，并使蛋白质处于完全变性状态。根据该原则，植物叶蛋白制备过程中一般需要有四种试剂①离液剂：尿素和硫脲等;②表面活性剂：又称去垢剂，早期常用NP-40、Tritonx-100等非离子型去垢剂，离子型去垢剂有SDS、胆酸钠、LiDS 等，还有象CHAPS(含它的蛋白溶液可以冻存)与Zwittergent 等双性离子去垢剂;③还原剂：DTT、DTE、TBP、Tris-base 等;④蛋白酶抑制剂及核酸酶：EDTA、PMSF、蛋白酶抑制剂混合物(Protease inhibitor cocktails)等，如为了去除缓冲液中存在的痕量重金属离子，可在其中加入0.1～5 mmol/LEDTA，同时使金属蛋白酶失活。三、仪器和试剂仪器离心机、移液器、研钵、离心管、冰箱。试剂1. 20 mL 样品提取缓冲液：2.5 mL 0.5 mol/LTris-HClhttp://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1381399946_small.jpg3. -20 ℃下预冷丙酮(含0.07% β-巯基乙醇)4. -20 ℃预冷的80%丙酮(含0.07% β-巯基乙醇)5. 饱和硫酸铵溶液 称取(NH4)2SO4 80 g，加蒸馏水100 mL，加热50～60 ℃，搅拌溶解，室温过夜，用浓氨水调pH 至7.06. 0.05 molpH7.0的磷酸缓冲液10%NaCl 0.1mol 醋酸95%乙醇7. 植物叶片(草本植物、木本植物叶片等都可)四、实验步骤植物叶蛋白的提取主要有盐析法、有机溶剂沉淀法、加热法(含逐步和快速加热)、 离心分离法、结晶和重结晶法等。依据今后的开发方向(以饲料为基础，以食品、饮品为开发方向)及简便易行和使用的原则，主要采用盐析法、加热法和有机溶剂法分离提取叶蛋白(冷提和热提)。不同的提取方法，对样品的处理方式、程度和要求不同，结果也有差异。1. (NH4)2SO4 沉淀法提取叶蛋白取0.3 g 植物叶蛋白，用液氮充分研磨转入离心管中，加入3 mL 提取缓冲液，摇匀并放在4 ℃条件下提取1 h，充分溶解蛋白后，4 ℃10000 r/min 离心20 min，弃沉淀，上清液中加入(NH4)2SO4，混匀1 h，按1：2(v/v)加入-20 ℃预冷的80%丙酮，混匀后4 ℃12000 r/min 离心10 min，沉淀在-20 ℃冰箱中放置20 min，使丙酮完全挥发后加适量上样缓冲液，待沉淀充分溶解后，4 ℃12000 r/min 离心5 min，取上清液即为所提取的叶蛋白溶液。2. 改良丙酮沉淀法提取叶蛋白取0.3 g 左右的植物叶片，用液氮研磨，色素多的可按材料鲜重的10%加入PVP，并将充分研磨过的样品转入离心管中，加入4 mL 的提取缓冲液，摇匀并放在4 ℃条件下提取1 h，充分溶解蛋白。放置后的样品充分摇匀，4 ℃10000 r/min 离心30min，弃沉淀，上清液中加入2.5～3倍体积的村-20 ℃条件下过夜，让蛋白充分沉淀。之后，4 ℃10000 r/min 离心30min，其上清，沉淀置于-20 ℃下，使丙酮完全挥发，如有必要加入上样缓冲液溶解沉淀。缓冲液用量300 ul，沉淀充分溶解后，转移至1.5 mL 离心管中，4 ℃12000 r/min 离心15min ，取上清液即为所提取的叶蛋白溶液。该方法提取的蛋白质，提取效率高，杂质干扰少，电泳结果蛋白条带清晰，数量多。 3. 植物叶片总蛋白的提取—三氯醋酸—丙酮沉淀法①在液氮中研磨适量的叶片;②悬浮于含10%的三氯醋酸和含0.07% β-巯基乙醇(可用DTT 代替)的丙酮溶液在-20 ℃条件下冰浴;③让蛋白质沉淀过夜后离心(4 ℃ 10000 r/min 离心30~60min)，弃上清;④重悬沉淀浮于含0.07% β-巯基乙醇的预冷丙酮溶液中;⑤离心(同上)后真空干燥沉淀;⑥用上样缓冲液溶解沉淀，离心;⑦Brandford 法定量蛋白，然后分装至Eppendof 管中保存在-78 ℃备用。4. 分步提取可溶性叶蛋白(1)蛋白质浸出①水溶性蛋白质浸出：用0.05 molpH7.0的磷酸缓冲液(或蒸馏水)将样品制成匀浆液，然后离心15min(4000 r/min)，收集上清液即蛋白质浸出液，再将沉淀物按上述操作重复两次。②盐溶性蛋白质浸出用10%NaCl 将前者剩余沉淀物分离提取两次，收集蛋白质浸出液。(2)蛋白质沉淀用0.1mol 醋酸将蛋白质浸出液pH 值调至蛋白质等电点(pH4.5左右)，即8体积蛋白质浸出液加入1体积0.1 mol 醋酸，混匀，离心15min(3000 r/min)，弃去上清液，沉淀物即为可溶性叶蛋白。(3)蛋白质收集于沉淀物中加入95%乙醇，混匀，用定量滤纸过滤或抽滤，待风干后收集。植物总蛋白的提取方法以有机盐沉淀法为主，本文中介绍到的(NH4)2SO4沉淀法、丙酮沉淀法、三氯乙酸—丙酮沉淀法和分步提取法，各个方法各有特点和适用范围，各位如有更好的植物总蛋白提取方法，欢迎补充。

  • 【转帖】蛋白质纯化武器—工艺篇（欢迎补充）

    条条大路通罗马，纯化之路千万条。本篇是写给蛋白质纯化新手的，就一些最常用的纯化工艺、概念方法作一些列举。以起始原料的不同来进行分类，分为：大肠杆菌、酵母、细胞培养、腹水、血清、生物组织六个板块。板块一、大肠杆菌（这里讨论的大肠杆菌为非分泌到培养基中的重组蛋白，是否有重组蛋白分泌到培养基中的工程菌我没有见过。）一、关于菌体的量大肠杆菌表达的基因工程蛋白是纯化人员最方便获得的原料，对纯化工艺开发来说几乎没有原料方面的限制。常看到有战友用个几毫升的菌液去做纯化，对此我十分不解，同样要做，为什么不多做点呢？很少的菌体会给纯化带来一些难以估计的问题，工艺的重复性和放大往往出现问题。因此，要做个好工艺就多发酵表达一些菌体吧。我做纯化时，初始工艺摸索用的菌体量一般为10g左右。二、关于是否包涵体表达包涵体的定义我就不讲了。我要讲的是，一个基因工程蛋白是否是包涵体表达的说法本身就不完全准确。至于包涵体在电镜下的晶体颗粒表现等等对我们纯化来说毫无意义，我相信做纯化工艺的人没有谁去看这个电镜，也不关心。我们判断的依据只是SDS-PAGE，目的蛋白在破菌沉淀中，我们就认为是包涵体表达，但这是一个似是而非的结论。看着没问题，实际上是有毛病的。关键在于你用的是什么破菌缓冲液！有些蛋白在用缓冲液A破菌时是在破菌沉淀中，而用缓冲液B破菌时却在破菌上清中。缓冲液A和B的差别可能只是pH上相差1-2个单位。那么它是包涵体表达还是可溶上清表达呢？说这个问题主要在于有些战友往往非常在意他的目标蛋白是否包涵体表达。甚至还有包涵体表达就用专门的包涵体蛋白纯化方法等等。我们应该关心的是目标蛋白在什么缓冲体系下是可溶的，在什么缓冲体系下是不溶的！不要让包涵体这个概念给你误导。三、关于表达量我们常常在发表的文章上看到，我这个工程菌的目标蛋白的表达量达到菌体总蛋白的30%、50%等等。我要说都是文章的作者在忽悠。不知道他们是如何定量的，用的最多的大概就是SDS-PAGE的扫描分析吧。且不说一个SDS-PAGE不能表现出所有的菌体蛋白，电泳的染色方法、染色脱色强度、照片的曝光强度、扫描分析时的条带选择等等无不对这个百分比影响巨大。在公司的QC部门做的对此应该最有体验，20%的条带要它变成30%又有何难？我的观点是对待表达量的描述不可定量，只能定性。如用：很低、较低、中等、较高、很高等来描述。有一个指标与表达量密切相关，那就是单位体积的菌体量。两者的乘积才是单位体积发酵液的目标蛋白产率。与表达量相关的指标还有纯化倍数、纯化收率等，这些指标我们也常常在发表的文章中看到。同样，我也认为都是不准确的。除非你用的是活性测定的方法，用蛋白活性收率来表征。纯化工艺的难易有时候也与表达量相关，表达量高时往往纯化也方便的多。所以，尽量提高你的目标蛋白表达量不只是基因工程上游和产量的问题，还是纯化工艺开发的问题。四、菌体破碎（1）破菌前处理诱导表达的菌体在发酵离心后，最好先用PBS缓冲液或其它缓冲液立即洗涤一次。菌体洗涤可以去除一些培养基中的杂质，及代谢产物，减少对后续纯化的影响。如果菌体已经冻存过，冻融的菌体可能有部分破碎，就不要洗涤菌体了。小量菌体的悬浮可以用5ml的枪头吹打，再磁力搅拌。大量菌体的悬浮可以用分散乳化机。破菌缓冲液的用量一般为1∶10—1∶20，即1g湿菌体用10—20ml的破菌缓冲液。（2）破菌缓冲液的选择选择何种破菌缓冲液，应该与后续的纯化方法密切相关，不能一刀切。而且，破菌缓冲液还与是否可溶表达相关。对于可溶表达的重组蛋白，一般就选用第一步层析纯化的平衡缓冲液为破菌缓冲液。对于不可溶表达的重组蛋白，最简单的就是选用PBS为破菌缓冲液。在选用破菌缓冲液时，有个小小的trick，加EDTA。有个别重组蛋白很脆弱，在超声破菌时就有大量的降解。注意，不是表达降解，而是超声过程中降解。特别是用pET32表达的his-tag融合蛋白容易降解，我运气好，遇到过2次这种超声降解。第一次碰到时，害得我好苦。反复找原因，是诱导表达温度？是超声温度过高？超声功率？外源蛋白酶污染？……最后用EDTA解决了。在破菌缓冲液中加0.5mM的EDTA就不会降解了。推测原因，可能是大肠杆菌自身有那么一种蛋白酶，破菌释放后就正好会攻击我的宝贝蛋白。而这种蛋白酶是金属蛋白酶，加EDTA后把它的枪栓（金属离子）给卸了，我的蛋白小命也就保全了，哈哈。第二次在SDS-PAGE上看到降解时，心里就不慌了。可能有战友会问，his-tag的蛋白加了EDTA后还怎么过Ni柱啊，恭喜你，问对了。我的解决方案是先过离子交换柱。EDTA带负电荷，用Q/DEAE吸附EDTA，或用SP柱吸附目标蛋白后，再透析一下，过Ni柱纯化。爱探险的dora跳着舞，成功啦，you did it！。（3）破菌方法大肠杆菌的破碎方法常用的大概有：反复冻融加溶菌酶法、超声法和压力匀浆法。一般来说处理菌体的量也是这个顺序。冻融方法我不喜欢，处理量太少且费时，要买溶菌酶，还是个外源蛋白。我喜欢强力型的超声和压力匀浆。超声法是小规模和中等规模破碎菌体的首选，选择好相应的超声探头，一次处理菌体量为0.1g-100g。压力匀浆为中到大规模破菌的首选，处理量大、快，破菌效果好，但发热量大，对温度非常敏感的蛋白慎用。超声破菌：以10g湿菌体为例，加入破菌缓冲液100ml，玻璃烧杯中磁力搅拌悬浮充分。冰水浴超声。设置超声时间4s，间隙时间4s，超声功率400-600W，超声次数100-200次。压力匀浆：以200g湿菌体为例，加入4℃预冷的破菌缓冲液3000ml，用分散乳化机充分混匀。匀浆压力800bar左右，压力匀浆发热非常大，流出液要冰水浴加磁力搅拌。一次匀浆完毕后，让菌液充分冷却后再进行二次匀浆。匀浆完毕的菌液如果粘度比较大，可用超声破碎仪超声40次，打碎核酸减小粘度，以方便离心和纯化。（4）破菌后离心高速冷冻离心机离心，50ml的小管18000rpm，20min，4℃；500ml的瓶用10000rpm，30min，4℃。50ml小管的离心效果比500ml的瓶好，如果你的溶液量在300ml以下，还是勤快点，多装几根50ml的小管吧。（5）过滤对上清可溶表达的蛋白在收集破菌离心上清后，必须过滤后才能上柱纯化。在园子里常看到有战友说我的柱流速很慢，层析柱压缩等很厉害，柱头有杂质堵了等等，这多数是因为没有进行过滤操作。过滤一般采用真空负压抽滤，可以选择0.8um的膜或双层滤纸过滤。多数层析的要求都是过柱溶液需经过0.45um的膜过滤，但实际上对破菌后的上清液或包涵体的溶解上清样，0.45um膜太难过滤了，mission impossible，无法完成操作。所以在实际工作中，我们都是采用双层滤纸或0.8um的膜过滤。在此推荐我用的一套设备组合：millipore wp6122050型台式真空压力两用泵和Sartorius 16201不锈钢过滤器，非广告，好用哦。五、包涵体处理前面说过对纯化来说，我不赞成包涵体的提法，但为了表述方便还是不妨借用一下，谁…谁在拍砖头啊。（1）包涵体洗涤我的蛋白是包涵体表达，用什么来洗涤啊？此类问题战友常问。其实还真不好回答。用什么溶液来洗涤包涵体也是与后续纯化方法相关的。例如，后面接离子交换层析，洗涤液不能加盐；后面接Ni柱，洗涤液不能加EDTA等等。罗列了一些可用的洗涤液成分如下，根据自己的需求来增减。pH6.0-pH9.0：高pH使得包涵体倾向于溶解，杂蛋白也去除的好些，但高pH有可能使目的蛋白降解。10-50mM PB，10-50mM Tris：维持缓冲环境，后接离子交换时选低一点的浓度。0-0.5N NaCl：盐洗涤有助于核酸的去除，多年前有位做干扰素的可爱老太太教我，盐洗涤后包涵体的OD280/260的比值（溶解后）会升高很多，也就是核酸去除很多，有利于后续纯化。0.5-5mM DTT：提供还原环境，打开蛋白中的二硫键，使得包涵体倾向于溶解，有利于杂蛋白的去除。但浓度太高了使得包涵体真的溶解就不是洗涤了。后续用Ni-IDA柱不可以加，用Ni-NTA柱少加。0-1%beta-ME：同DTT，还原能力稍弱。气味那个香啊……0-2N Urea：变性剂，有利于包涵体中氢键、疏水键、范德华力……的打开，有利于洗涤去除杂蛋白。同样高浓度会使包涵体溶解。类似的是盐酸胍，更强的变性剂，更高的价格，我等不穷的人也消费不起。当然，你很富就用吧，有时候更有利于包涵体蛋白的线性化。0.05-1%Triton X100：非离子型表面活性剂，像洗衣粉一样用了。同样的还有zwittergent，一种我一直想找机会试试的东东，当年为了溶解beta干扰素包涵体搞得我好苦。0-2mM EDTA：螯合剂，去除金属离子，有利于蛋白的稳定和溶解。Ni柱禁用。其它：期待各路英豪奉献。（2）包涵体溶解看了包涵体洗涤部分，怎么溶解包涵体应该心中有数了。无非就是pH，变性剂，还原剂，表面活性剂等等的组合。经典的包涵体溶解液的配方为：pH8.0，20mM Tris，8M Urea。说它经典，是因为我用的最多，嘻嘻。再根据个性蛋白纯化的需要往这个配方里面加调料，如Ni柱纯化的咪唑、氯化钠；溶解或吸附不好时再加点DTT、Triton。包涵体的溶解也有两个小Trick，独门秘籍哦。第一，包涵体沉淀在溶解时往往会有一些像硬胶状的块块，有弹

Instrument.com.cn Copyright©1999- 2023 ，All Rights Reserved版权所有，未经书面授权，页面内容不得以任何形式进行复制