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超微量分光光度仪校准标准

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超微量分光光度仪校准标准相关的论坛

  • 超微量紫外分光光度及吸光度不准确如何处理？

    各位好！有个问题想请教大家：具体情况如下：配制60mg/L 重铬酸钾溶液，用岛津UV2450(普通紫外分光光度计)测量235nm、257nm、313nm、350nm出的吸光值，然后计算吸光系数，结果符合药典要求。现在有一台超微量紫外分光光度计，加样量2ul左右，测试的吸光度比岛津偏低，计算出来的吸光系数自然就比药典要求低！现在有问题：1、超微量紫外分光光度计是否能够用重铬酸钾溶液衡量吸光准确度？2、是所有的紫外分光光度计（无论普通还是微量），只要在量程范围内，测试同一物质吸光度是否都要一致？个人理解是需要保持一致！3、超微量紫外分光光度计通常用于核酸和蛋白浓度测量，如果重铬酸钾吸光系数不准确，是否影响核酸和蛋白的测量结果？4、如何评价超微量紫外分光光度计的性能？5、测量蛋白溶液的浓度CV很好，但是测量重铬酸钾的吸光值总在变化（不同时间测试变化较大，偏差可大于5%），又是什么原因？虽然对于上面的问题，我认为只要是紫外分光光度计，原理一致，那么在量程内就应该保证结果一致！现在想听听大家的意见和看法！

  • 【讨论】大家来讨论下这几台仪器－－超微量分光光度计

    【讨论】大家来讨论下这几台仪器－－超微量分光光度计

    超微量分光光度计的新选择 检测核酸或者蛋白样品浓度是最常用的实验操作之一，传统比色皿体积大，需要稀释较多样品，造成珍贵的核酸蛋白样品浪费，而且还要反复清洗比色皿，甚烦。好在有超微量分光光度计的出现。早在2004年生物通就已经大力推荐过基因有限公司引进的NanoDrop微量分光光度计，这种技术利用微量液体张力牵引形成光通路，从而替代比色皿，极具创新性和实用性，并得到2004年年度产品仪器类的创新大奖。（点此链接：Nanodrop：只要1微升就可以检测核酸/蛋白浓度 ）这种首创无需比色皿稀释，只要1ul样品溶液即可直接检测核酸/蛋白/或者细胞浓度的新型分光光度计很快在国内科研用户中得到非常热烈的认同。 并非仅仅是个概念。Nanodrop ND-1000的高吸收光检测能力相当50倍于传统分光光度计，使得多数样本不需要稀释即可进行全光谱（220nm-750nm）检测，无需消耗品，即插即用无需预热，操作极为方便。可以进行核酸定量和纯度检测，蛋白A280检测，Bradford检测，蛋白BCA检测，细胞浊度检测等多种紫外/可见光检测。Nanodrop ND-1000令NanoDrop公司声名大振而迅速确立来其在超微量分光光度计市场的领导地位。 但是对于高通量实验，不说384孔，就是96孔，这么一个一个的加样-检测-清洁下来，不累死也要头晕眼花的。因此，顺应这种需求，NanoDrop公司又推出了NanoDrop ND-8000，可一次同时检测1-8个样本，使得检测速度立刻提升8倍----用8道排枪，只要6分钟可以检测96个样品，而且体积非常紧凑----差不多A4纸大小（32x24cm）。设想看检测96孔样品的浓度----可以节省多少样品，节省多少时间和清洗比色皿的精力阿！新技术真是令人喝彩！ Nanodrop延续这个设计理念到荧光信号检测，推出了ND-3300荧光分光光度计。这个体积只有一本字典大小(20x14x12cm)的仪器却拥有强大的功能----3组LED（UV365，蓝光470和白光500-650）覆盖400-750nm全光谱荧光分析，不需更换滤光片，不论是自行研发或市售荧光染剂都可使用，如 PicoGreen、RiboGreen、Hoechst、FITC、Cy3-Alexa555、Cy5-Alexa647, quantum dots等等。只要1.5-2ul样本量，不需比色皿或者毛细管，无需稀释样品，检测发射光峰值波长的荧光强度和±20nm相对荧光输出，通过标准曲线定量。荧光范围可达10的5次方（0.1nmM-1000nM）,采用2048像素CCD检测，内置滤光片去除395nm以下光波干扰，由于使用三组LED冷光源代替传统高能耗光源，NanoDrop ND-3300能耗超低----只需要电脑的USB接口供电，根本无需外置电源！ NanoDrop ND-3300并不能完全替代传统扫描荧光分光光度计，也不适合检测浓度特别低的样品，其检测浓度下限是1pg/ul，不如酶标仪和传统荧光分光光度计。但是NanoDrop ND-3300能检测样品物质量却实在比酶标仪和传统荧光分光光度计小的多----以PicoGreen为例，ND-3300可以检测少至2pg的DNA样品（2ul，1ug/ul），酶标仪/读板机检测下限50pgDNA样品（浓度读数下限以0.25pg/ul为例）；传统分光光度计下限则是25pgDNA样品(浓度读数下限0.025pg/ul为例)。所以生物通特别提示你注意“检测浓度”和“检测物质量”是不同的概念哦。 NanoDrop在快速超微量样品吸收光/荧光检测领域带来的令人耳目一新的变革，新技术可令每个研究人员直接感受到技术进步的愉悦，好用是很好用，这3台仪器价格不菲。2007年10月赛默飞世尔（Thermofisher）宣布收购Nanodrop公司，并将其产品收归Thermofisher旗下。 现在我们又多了一个新选择----GE Healthcare公司最新推出都NanoVue超微量分光光度计！这是一款非常容易操作的微量分光光度计，可以用来精确检测核酸、蛋白和细菌培养液的浓度。只要0.5-5l的样品加在一种全新设计的样品板上检测即可直接得到结果。由于全新的疏水点样表面使得样品检测完之后还可以用Tips直接回收样品，如果不需要当然也可以简单擦拭彻底清洁样品板，减少样品间交叉污染。检测时间5秒之内即可完成读数、出峰识别和检测峰确认。检测波长范围200nm-1100nm。核酸扫描的可视化功能使得可以检测样品中杂质的存在，对于RNA样品测定非常有用。Press-to-Read功能使得按下检测键后才打开光源检测，减少光源工作时间延长光源使用寿命。整体光学结构为固定化设计，避免搬动造成光路偏移。 NanoVue的设计上内置了很多功能，方便使用者的工作----既然要简化操作，当然是越方便越好！比如，仪器内置寡核苷酸引物的分析方法，只要键入66碱基以下的寡核苷酸序列即可计算获得转换因子（ug/ml），分子量理论吸光度（AU/umol）和理论Tm值。内置多种蛋白定量检测方法，包括Bradford, BCA, Lowry, Biuret和直接紫外法，最多可支持27个标准样品制作标准曲线并可以保存。此外，仪器可以自动测定所需光径也可手动调教以满足特殊要求。可以单点校正或者多点校正、自选波长测定目标样品浓度。大面积高分辨率液晶屏上可显示所有结果，包括标准曲线波长扫描图像，处处体现方便用户的宗旨。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/03/200903121121_138121_1631196_3.jpg[/img]

  • 德国Implen超微量紫外-可见分光光度计

    德国Implen超微量紫外-可见分光光度计

    NanoPhotometerTM——超微量分光光度计最佳选择摘要：由于传统的紫外-可见分光光度计对样品量的需求较大，而且对所测样品的浓度有一定范围的限制，对于分子生物学实验者来说，对少量又珍贵的核酸蛋白质样品的稀释，无疑是一种糟蹋。为了满足和方便广大生物学科研者的实验需求，德国Implen 公司研发出一款通过改变光程从而达到扩大样品浓度检测范围的目的的超微量紫外—可见分光光度计，它所需上样量只有0.3-2ul，能够检测核酸浓度和纯度，蛋白质A280等，内置BCA，Bradford等多种实用检测方法。同时可使用常规比色皿，用于细胞（细菌）OD600的测量。关键词：超微量，分光光度计，光程，核酸蛋白质浓度，OD600。前言核酸纯度和蛋白质浓度的测定，是分子生物学实验的常规操作之一，传统的紫外—可见分光光度计对样品量的要求较高，一般在500ul（特殊比色皿）以上，而500ul的蛋白质或核酸，对科研人员来说可能是半年来所提取核酸（蛋白质）的总量，因此，常规分光光度计在进行核酸（蛋白质）浓度的测定具有很大的局限性。Implen (德国，慕尼黑) 公司研发的超微量紫外—可见分光光度计通过使用特制的超微量比色皿，使得只需0.3-5ul的上样量就能准确的检测出样品浓度。通过对光程的调节，不但能够检测低浓度的样品（0.2ng/ul）,也能够检测高浓度的样品（18750ng/ul）。NanophotometerTM性能特点具有专利权的样品压缩技术：NanophotometerTM 利用两个光学平面镜将样品固定于上样孔（石英检测窗口和光学平面镜稀释盖）。这种改变光程的技术不依赖样品的表面张力，同时，在很大程度上减少了样品的蒸发，保证了很好的重复性，尤其是溶于易挥发溶剂中的样品。NanophotometerTM有6个不同稀释倍数的样品稀释盖，同时也可使用常规比色皿进行检测。 http://www.wblab.cn/uploadfile/image/20110927164135373.jpg http://www.wblab.cn/uploadfile/image/20110927164141959.jpg http://www.wblab.cn/uploadfile/image/20110927164145737.jpg 由于具有多个稀释倍数的能力，所以NanophotometerTM的检测浓度范围测非常广阔：dsDNA:2-19750ng/ul; ssDNA:2-13875ng/ul; RNA:2-15000ug/ul; Oligo：2-12375ng/ul。蛋白质浓度检测范围在0.04mg/ml至660mg/ml之间。因此，几乎所有样品都不需要稀释而直接可进行浓度测定（适合全波长扫描）。NanophotometerTM 的全波长扫描只需3.5s,每个样品所需要的时间不到5秒钟，快速的检测速度为大量的样品检测节省了宝贵时间。0.3ul的上样量： NanophotometerTM 特制的样品压缩技术，使得所需上样量非常少，仅需0.3ul的样品就可准确检测所测物质的浓度。 2ng/ul到1875ng/ul的检测范围（dsDNA）：NanophotometerTM 特有的样品压缩技术能够将样品自动稀释为1：5，1：10，1：50，1：100和1：250五种倍数，无稀释误差，并减少手动稀释所浪费的时间，保证了样品的稳定性。由于缩短了光程，所以增大了浓度检测的范围。NanophotometerTM 的最小光程为0.04mm，是常规比色皿光程的二百五十分之一，因此比常规紫外—可见分光光度计所测浓度范围大250倍。下表为稀释倍数所对应光程：5→d=2 mm； 10→d=1 mm； 50→d=0.2 mm； 100→d=0.1 mm； 250→d=0.04mm全谱扫描仅需3.5s：NanophotometerTM 的波长范围190—1100nm,系统启动时间小于5s，且无需预热，全波长扫描时间（200—950nm）只需3.5s，宽的波长范围满足常规物质的测定，NanophotometerTM 内置多种波长扫描方法，有单波长扫描、比色测定、波长扫描（自定义范围）、动力学测定、标准曲线测定、多波长扫描（5个波长点）和吸光度比值（两个吸光度比值）。灵活的数据输出方式：NanophotometerTM 的数据输出方式有内置打印机、SD-RAM卡、USB或者蓝牙可供选择。内置打印机可以方便的将实验结果马上打印，方便重要数据的保存和分析；USB接口连接电脑，一些需要长久保留的数据可方便的储存到个人电脑中。卓越的设计：独特的人体工程学理念，超大的背光蓝色液晶显示器，自定义用户界面，易于清洗的可移动样品室，用户友好型操作界面和防滑的控制面板，即使带有内置打印机，也易于携带，可用于户外操作。终身无需校正：密封的光路系统且无拆换部件，采用独特的光程改变技术，使得该NanophotometerTM 超微量紫外—可见分光光度计具有很高的精度，且终身无需校正，免去了昂贵的校正费用，节省宝贵的时间。总结NanophotometerTM 的样品压缩技术使得其具有卓越的检测和稳定性能，在同类产品中，由于它改变光程的技术不依赖于被测溶液的表面张力，从而扩大检测范围，而且这种改变光程的方法不涉及机械磨损或机械疲劳，故光程的改变是非常精确的，终身无需校正。总的来说，Na

  • 如何选择一台性价比超高的超微量分光光度计

    传统分光光度计：样品体积要求大，绝大部分要50μL以上需使用比色皿每次换样品时，比色杯需要清洗，工作繁重光程一般为10mm，样品需要稀释，测量浓度范围小灯源一般由氘灯(紫外)和钨灯(可见)组成，寿命短需要预热半个小时以上显示吸光度值，不显示浓度值仪器体积大，质量重超微量分光光度计所需样品体积小，仅需1～2μL不需要比色皿，用移液枪直接将样品滴加到检测平台上，测量时样品自动形成液柱，检测完成后只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可具有1mm和0.2mm两个光程(电机控制自动选择光程)，样品无需稀释，测量范围可达到常规分光光度计的50倍氙气闪光灯为灯源，寿命长,性能稳定不需要预热，可随时检测显示吸光度值的同时，程序直接给出浓度值（核酸、蛋白和荧光染料）体积小：相当于一本字典大小，仅占16.5厘米实验室空间市场常见的欧美品牌市场上比较畅销的超微量分光光度计有：美国ThermoScientific的Nanodrop系列产品,英国Picodrop公司的CUBE和P200系列产品，美国QUAWELL的Q3000 5000 6000+系列以及其它一些品牌。（选自网络）

  • 超微量分光光度计主要结构组成

    各种型号的超微量分光光度计基本结构都相同，由如下五种部分组成：1)光源(钨灯、卤钨灯，氢弧灯，氘灯、氙灯或激光光源)；2)单色器(滤光片、棱镜、光栅、全息栅)；3)样品吸收池；4)检测系统(光电池、光电管、光电倍增管)；5)信号指示系统(检流计、微安表、数字电压表、示波器、微处理机显像管)。

  • 分光光度计的校准

    新买分光光度计或用过一段时间的分光光度计要校准。分光光度计的校准分为波长校正和吸光度校正两部分。前者可采用辐射光源法校正，常用氢灯、氘灯、低压汞灯的特征波长来校正，也可用镨钕玻璃在可见区的特征吸收峰或苯蒸气在自歪曲的特征吸收峰来校正。后者常用重铬酸钾溶液在25摄氏度时的特征吸收曲线的标准值来校正。/ )

  • 分光光度法流动分析仪的校准探讨

    [b]分光光度法流动分析仪的校准探讨[/b][size=14px][b]一、波长示值最大允许误差[/b][/size][size=14px] 一般来说，作为校准滤光片用的标准器——紫外可见分光光度计为了保证仪器的稳定性是不会带到现场的，那么滤光片就需要送检。但是滤光片很容易受潮，而且受潮后性能降低，项目分析的灵敏度会大幅度降低。建议每次送检时，将滤光片用干净的纸包好放入带有干燥剂的密封袋中送检，流转进入实验室后，放进专用干燥器中，并保证干燥器的硅胶处于无水状态。[/size][size=14px] 对滤光片的校准，首先需要对滤光片表面进行清洁处理:(1)可用洗耳球吹净表面浮尘；(2)经委托方允许后，对污染严重的滤光片用脱脂棉蘸清洗液(乙醇和乙醚的1:4混合物)擦净表面。接着，按照JJF1568-2016《分光光度法连续流动分析仪校准规范》要求，就可以顺利进行波长示值误差的校准。需要注意的是，不同厂家的流动分析仪对应的滤光片，对同一个物质的分析，它所对应的波长是有区别的。例如，荷兰SKALAR生产的SAN++总氮的滤光片为540nm，而德国SEAL生产的AA3总氮的滤光片为550nm。针对这种情况，需要分辨清楚各个厂家的滤光片的波长标称值。此外，对于采用多通道全谱直读式CCD检测器的流动分析仪，是不需要滤光片选择波长的，只要仪器自检通过便可进行其他项目的校准。[/size][size=14px][b]二、测量线性[/b][/size][size=14px] 校准前的准备:开机前检查各条试剂管路连接是否良好，防止漏气或不严实导致泵液不正常；仪器开机后，先走纯水，清洗管路，检查管道有无漏水或压力是否稳定；纯水冲洗一段时间后，将管道放入对应的试剂瓶中，从管路内溶液的颜色可以看出试剂是否置换掉纯水通过流通池，接着便是等待基线稳定后进行校准。一般来说，整个稳定的时间需要(1～2)h，可以利用这段时间配制[/size][size=14px]根据规范描述，配制范围约为两个数量级，均匀分布5个浓度点的系列标准溶液，来测量仪器的线性。但是在实际应用中发现，若配制的浓度点相差100倍跨越两个数量级，会导致最低点基本被基线掩盖，无法读出准确的响应值。根据经验，不管是SKALAR还是SEAL厂家生产的系列仪器，通常最佳的配制范围为一个数量级，浓度最低点和最高点最好不要超过20倍。以AA3仪器为例，在确定好系列标准浓度后，在开始分析前，需要对仪器的增益进行调整。用标准浓度中的最高点来进行调节，响应太高超出100%，则降低增益；响应太低则调高增益，最终使信号响应的峰值落在纵坐标的80%以上，在90%附近更好。当然，如果仪器的基线噪声不是太好，在排除试剂中微小颗粒物或气泡影响、泵管老化、透析膜破裂等原因之后，在保证最低浓度点能够读出的情况下，可牺牲响应值，适当调低增益，以得到较好的基线，使后续校准能够顺利进行。[/size]（未完待续）

  • 分光光度法流动分析仪的校准探讨

    分光光度法流动分析仪的校准探讨

    [align=center][b][size=16px]分光光度法流动分析仪的校准探讨[/size][/b][/align][size=14px][b]一、波长示值最大允许误差[/b][/size][size=14px] 一般来说，作为校准滤光片用的标准器——紫外可见分光光度计为了保证仪器的稳定性是不会带到现场的，那么滤光片就需要送检。但是滤光片很容易受潮，而且受潮后性能降低，项目分析的灵敏度会大幅度降低。建议每次送检时，将滤光片用干净的纸包好放入带有干燥剂的密封袋中送检，流转进入实验室后，放进专用干燥器中，并保证干燥器的硅胶处于无水状态。[/size][size=14px] 对滤光片的校准，首先需要对滤光片表面进行清洁处理:(1)可用洗耳球吹净表面浮尘；(2)经委托方允许后，对污染严重的滤光片用脱脂棉蘸清洗液(乙醇和乙醚的1:4混合物)擦净表面。接着，按照JJF1568-2016《分光光度法连续流动分析仪校准规范》要求，就可以顺利进行波长示值误差的校准。需要注意的是，不同厂家的流动分析仪对应的滤光片，对同一个物质的分析，它所对应的波长是有区别的。例如，荷兰SKALAR生产的SAN++总氮的滤光片为540nm，而德国SEAL生产的AA3总氮的滤光片为550nm。针对这种情况，需要分辨清楚各个厂家的滤光片的波长标称值。此外，对于采用多通道全谱直读式CCD检测器的流动分析仪，是不需要滤光片选择波长的，只要仪器自检通过便可进行其他项目的校准。[/size][size=14px][b]二、测量线性[/b][/size][size=14px] 校准前的准备:开机前检查各条试剂管路连接是否良好，防止漏气或不严实导致泵液不正常；仪器开机后，先走纯水，清洗管路，检查管道有无漏水或压力是否稳定；纯水冲洗一段时间后，将管道放入对应的试剂瓶中，从管路内溶液的颜色可以看出试剂是否置换掉纯水通过流通池，接着便是等待基线稳定后进行校准。一般来说，整个稳定的时间需要(1～2)h，可以利用这段时间配制[/size][size=14px]根据规范描述，配制范围约为两个数量级，均匀分布5个浓度点的系列标准溶液，来测量仪器的线性。但是在实际应用中发现，若配制的浓度点相差100倍跨越两个数量级，会导致最低点基本被基线掩盖，无法读出准确的响应值。根据经验，不管是SKALAR还是SEAL厂家生产的系列仪器，通常最佳的配制范围为一个数量级，浓度最低点和最高点最好不要超过20倍。以AA3仪器为例，在确定好系列标准浓度后，在开始分析前，需要对仪器的增益进行调整。用标准浓度中的最高点来进行调节，响应太高超出100%，则降低增益；响应太低则调高增益，最终使信号响应的峰值落在纵坐标的80%以上，在90%附近更好。当然，如果仪器的基线噪声不是太好，在排除试剂中微小颗粒物或气泡影响、泵管老化、透析膜破裂等原因之后，在保证最低浓度点能够读出的情况下，可牺牲响应值，适当调低增益，以得到较好的基线，使后续校准能够顺利进行。[/size][size=14px][b]三、检出限[/b][/size][size=14px] 根据规范描述，取计量特性的表格中对应测量成分检出限3倍的浓度点作为检出限的测量点，例如水中挥发酚的检出限要求为≤0.002mg/L，则取0.006mg/L作为测量点。笔者认为没必要非得刚好3倍关系，可采用0.005mg/L作为配制曲线系列标准浓度的起始点，也即检出限的测量点。一是考虑便于曲线系列标准浓度选取点的时候呈现倍数关系；二是考虑测量点在稀释过程中引入的不确定度。[/size][size=14px] 配制0.005mg/L和0.006mg/L水中挥发酚标准溶液稀释所用的量器如表1所示(标准物质母液浓度为1000mg/L)，其中5mL单标线吸量管的容量允许误差为±0.015mL，量取6mL的溶液需要的10mL分度吸量管的容量允许误差为±0.05mL，两者配制过程中引入的不确定度显然配制0.005mg/L的小。除了水中挥发酚，其他测量成分的测量点也类似，可稍微变通一下。[/size][img=,616,201]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/04/202104161615479422_175_1626275_3.jpg!w616x201.jpg[/img][size=14px] 关于仪器检出限，需要注意的是规范对氨氮的要求是≤0.04mg/L，而环境保护部发布的HJ665-2013《水质氨氮的测定 连续流动-水杨酸分光光度法》中对于直接比色模块的要求是≤0.01mg/L(检测池光程为30mm)，采用在线蒸馏模块的要求是≤0.04mg/L(检测池光程10mm)。[/size][size=14px] 对于直接比色模块，若检出限校准结果是0.035mg/L，虽然符合校准规范的要求，但实际上已经超出了环保要求，对于客户来说这台仪器已经超范围了，这时需要及时跟客户沟通说明情况。如有必要，重新对仪器从基础维护、配制试剂等方面逐个排查问题后，再校准一遍来确认仪器的检出限。另外，建议给出检出限的同时应标注检测池光程大小以及使用的是直接比色模块还是在线蒸馏模块。[/size][size=14px][b]四、重复性[/b][/size][size=14px] 取系列标准浓度的中间点重复7次求RSD，即为仪器的重复性。校准规范中重复性的参考指标RSD只要≤5%，在仪器正常工作条件下，基本不会超过这个值。而超过限值的原因主要有两个:[/size][size=14px] 一是基线漂移太大，造成多次进样的数值偏差较大，直接影响重复性。造成基线漂移的原因有:[/size][size=14px](1)试剂不稳定、受污染或过期。[/size][size=14px](2)使用陈旧的滤光片、光源。[/size][size=14px](3)流通池受污染。[/size][size=14px] 二是峰形异常造成数据不准确。造成这种情况的原因及解决办法:[/size][size=14px](1)电压不稳定导致峰形不好，需要使用稳压器。[/size][size=14px](2)泵管弹性不好，需要检查更换泵管。[/size][size=14px](3)流通池带有气泡过多的液体流过流通池，需超声除气。[/size][size=14px](4)进样管部分堵住使峰忽大忽小等。具体需要根据实际情况，逐一排查解决问题。[/size][size=14px] 收尾工作:流动分析仪最常发生问题就是部件堵塞，需要及时冲洗。校准结束后应对管路进行清洗，一般用纯水进行清洗，清洗时间不应少于化学延迟时间(从进样开始到第一个峰出现的时间，也可以用目视的方法观察管路内试剂的颜色是否都已经被水冲洗干净)。管道清洗结束后，需将泵管从泵管卡位上松开，以延长泵管寿命。[/size][size=14px][b]五、结束语[/b][/size][size=14px] 本文针对分光光度法流动分析仪在实际校准工作中可能会遇到的问题进行探讨，并结合工作经验指出校准过程中需要注意的环节，是对日常工作的一个总结，同时期望能够给同样从事化学计量的同行们带来帮助。[/size][size=14px][/size][align=center][color=#888888]作者：江苏省无锡市计量测试院 王灵燕 王知 沈亚芹 周夏英[/color][/align]

  • 【求助】微量分光光度计光栅以及检测问题

    看了tutm老师几篇关于微型分光光度计发展的帖子，很受启发，现在有几个疑问，希望版上了解的前辈们不吝赐教。1、微型光度计采用微型光谱仪分光检测，比色皿或者点样台/头置于光谱仪前端，则样品吸收的是全波长光，这样吸光度是不是非常不准确？但是已经有很多仪器做出来了，这个应该不是大问题，只是按照我目前的水平难以理解2、经过样品后进入微型光谱仪再进行分光检测（其实是延续了第一个问题），光栅固定，这时通过CCD阵列去选择关注波长的吸光度即可？有时需要进行全波长扫描，为扫描要全波长扫描，目的是什么？这个全波长扫描是通过光栅分的单色光在CCD不同位置所记录下的光强来实现的是吗?那么设计时CCD阵列就要宽到光谱色散开的宽度是吗？3、一般微型分光光度计采用的光栅是闪耀还是其他类型？（注：网上没有查到他们用的光栅类型，希望有了解的人给予解答）若为闪耀光栅，则光强大部分集中在所闪耀的波长上，全波长扫描还有意义吗？这时如果需要测量其他样品，仪器是不是就需要换光栅，或者说换一台仪器？4、微型分光光度计光路传输采用光纤，而ND2000C采用点样头和比色皿共用方式测量，那么光路怎么实现切换，点样头相当于一根光纤中部切断这个比较容易理解，从氙灯出来的光如何经过微量比色皿？两根光纤？还是从氙灯出来的光纤分成相等的两路？PS：新手，问题比较多，也很白痴，望大家见谅，先谢过

  • 微量分光光度计

    大家好，我这里有一台韩国美卡西斯的微量分光光度计，操作界面卡住了，不能进行任何操作，强制关机后开机还是一样，想请教一下大家有什么处理意见吗？谢谢大家、

  • 【讨论】哈希色度计或分光光度计需要校准吗？

    [size=3][b][align=center][img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09505.gif[/img][back=#ffed43][size=5]以下观点对吗？？？[/size][/back]应该校准Hach色度计或分光光度计吗？[/align][/b][/size][作者]:Hach import [来源]: [时间]:2008-11-10[b][font=宋体][font=Verdana][b][size=2][b]问题描述：[/b][/size][/b][/font][/font][size=3][/size][/b][font=宋体] 管理者要求我校准色度计或分光光度计。这样做好吗？[/font][b][font=宋体][font=Verdana][b][size=2][b][/b][/size][/b][/font][/font][/b][b][size=3][font=宋体][font=宋体][b][size=2][b]问题解答：[/b][/size][/b][/font][/font][/size][/b][size=3][/size][font=宋体] 首先应明确你的管理者是要求做新校准而不是仅对你的测试做一个校准检验。重新校准不仅浪费时间而且有可能引入错误从而得到错误的数据。[/font]Hach[font=宋体]仪器是由经验丰富的化学工作者使用多种试剂、标准溶液并应用多种仪器校准过的，且经过独立核对，确保了其准确性。[/font][font=宋体] 较安全的操作是使用标准溶液对仪器中已有的校准曲线进行核对，而不是输入新校准曲线。如果使用标准溶液检验得到了正确结果，则没有必要输入新校准曲线。[/font][font=宋体] 如果使用标准溶液检验得到的浓度结果与已知标准溶液的浓度存在显著差异（误差大于[/font]10~20%[font=宋体]），可能是测试操作有误，此时需要进行检查并确保精确执行了各操作步骤，使用的程序编号、样品管和指定试剂均正确无误，且玻璃器皿均清洗干净彻底。[/font][font=宋体] 同时，还需保证标准溶液的化学表示式与仪器的测定结果相符，例如，如果磷酸盐标准溶液标签上的标注为“[/font]PO[sub]4[/sub][font=宋体]”，须明确仪器或工具箱显示的结果也是“[/font]PO[sub]4[/sub][font=宋体]”而不是“[/font]P[font=宋体]”。[/font]

  • 【资料】双光束紫外可见分光光度计校准水平的提高

    冯金淼等+双光束紫外可见分光光度计校准水平的提高!"双光束紫外可见分光光度计校准水平的提高冯金淼!王 颖!宋增良!白月霞!河北省计量科学研究院%河北 石家庄 20226!"B摘 要C双光束紫外可见分光光度计广泛应用于各行业的分析化验%但仪器性能直接关系到出具结果的准确性& 综述了提高仪器校准水平的技术&B关键词C分析仪器,校准B中图分类号C D@ 9971-E!B文献标识码C FB文章编号C 1226G02/0!-226"20G2280G2!双光束紫外可见分光光度计!以下简称仪器"是目前国际上使用的标准有汞灯’ 氧化钬溶液或依据物质在紫外# 可见光区的吸收光谱特性和朗氧化钬滤光片%这些标准都有较丰富的光谱峰%选用伯$比尔定律的原理% 对物质进行定性定量分析的仪器的)波长扫描*功能%宜用扫描速度慢%响应时间仪器&仪器广泛应用于石油’医药#化工#卫生防疫等小%这样可以避免附加误差&要特别注意)采样间隔*部门(为确保仪器出具数据准确可靠%必须经过计量的设定%为了准确得出峰值波长的数据%宜采用)27!部门的周期检定%对使用频率高’对仪器技术指标要(.*%但有的无法设定)采样间隔*%如日本岛津公司求高的部门%要经常对仪器进行校准(早期生产的 45 --2! 型仪器%)波长范围*的起始波! 校准基线长与终止波长相隔不超过 -22 (. 才能得出准确的仪器使用过程要经常进行基线校正% 对仪器进峰值数据%要想把氧化钬滤光片的特征峰 -60$892行各项校准前一定要校准基线( 不同的仪器操作不(. 扫描一遍%要分三段设定& 大部分仪器可以直接同%有的是点)"#$%&’(%*%有的是点))%*+*%还有其它设定所要的)采样间隔*&操作方法&9 透视比准确度和重复性的测量, 基线平直度的测量操作上使用仪器的)定量测量*功能%用户使用做完)校准基线*后即测量此项指标& 要想得出仪器的该项功能较多%尽量选用)多波长测量*&使用准确的结果%条件设定很关键%选择仪器的)波长扫的标准溶液是质量分数为 272822 2:! 222 ;-*-= 的描*功能%波长范围+全波段,带宽+- (.,扫描速度+27221 .+&:? @&=9 溶液& 为保证测量准确A应正确使中速,纵坐标范围的设定也很重要%单位选择)透射用该标准溶液+ !对测量用吸收池的要求 采用光比*%可设定为 /0!$120!或 /3!$!2-!%以便清径长度为 !2722 .. 的石英池盛装标准溶液%吸收池晰看出 !22!线的变化& 日本岛津公司最新生产的的两透光面应无划痕’油渍或液体污染%否则会产生45 -002 仪器%可不进行范围设定%直接用鼠标放大一些散射光甚至荧光干扰测量% 安装吸收池至样品纵坐标& 该项指标应小于 !!&框架上应遵循一定的方向% 可按吸收池箭头所标方6 波长准确度与重复性的测量向正对入射光方向% 以减少吸收池两透光面的不平B收稿日期C-226G28G-2行性带来的误差& "必须事先对仪器波长进行校准B作者简介C冯金淼!!/89G"%女%高级工程师%从事化学计量工作&后%才能使用标准溶液测量透射比准确度&

  • 求助:用721型分光光度计测微量铁遇到几个问题!

    我在用721型分光光度计测水中微量铁时遇到了以下几个问题请帮忙解决下.1.我测试的水中含铁离子的多少不知道.在配标准铁溶液时,需要怎么做啊!2.测试的水样是地层产出的矿化水,其中有一些泥沙,水样是橘红色. 对测定的结果是不是有影响啊?能用什么方法消除吗?3.有一个地层水中有甲醇、凝析油,对测试结果有影响吗？能用什么方法消除吗?

  • 使用紫外分光光度计校准标准储备液

    国标GB 5413.9-2010中针对维生素ADE标储标定方法，使用的是紫外分光光度计测量吸光值，而后再依据公式计算出实际浓度。我用的试剂空白是色谱纯的乙醇，溶解标准品的溶剂也是色谱纯乙醇，但是空白试机归零后，使用VE标准储备液(500ug/mL)50uL于3mL比色皿中，检测出的吸光值为负数。使用的是普析的紫外分光光度计，用的是石英比色皿，标准品是西格玛的。江湖告急！忘五湖四海兄弟姐妹们伸出援手！疑问：1.试剂空白是否合适？大家是否是一样的操作？2.为什么储备液的吸光值是负值？3.标定后的浓度与理论一般差多少？相差较大的话以标定的为准还是理论为准？

  • 微量紫外可见分光光度计优势特点

    [url=http://www.f-lab.cn/spectrophotometers/nano.html][b]微量紫外可见分光光度计SPECTRO-Nano[/b][/url]是一种优质全光谱紫外可见分光光度计,用于定量评估DNA、RNA、蛋白质等的纯度。该微量光度计采用CCD探测器，耐用的氙灯光源灯，并且使用人性化软件。移液管0.5～2μL采样到底座上，放下取样臂，即可在7秒内完成测量。[b]微量紫外可见分光光度计SPECTRO-Nano[/b]特点开机即可测量，光源灯不需预热。全波长（200～800 nm），扫描范围为200～800 nm，5秒内完成。用户友好型软件，免费更新。将样品移到底座上即可测量，擦拭底座。仅用0.5-2ul样品进行直接微量体积测量，以精确测定核酸和蛋白质浓度耐用的氙气闪光灯，10次闪烁，使用长达10年不需要电池或试管和昂贵的消耗品检测核酸高达4500 ng/UL（dsDNA）[b][img=微量紫外可见分光光度计]http://www.f-lab.cn/Upload/Spectro-nano.jpg[/img][/b]更多分光光度计请浏览：[url]http://www.f-lab.cn/spectrophotometers.html?pagesize=20&p=1[/url][b][/b]

  • 【原创大赛】（十一月）分光光度计计量标准技术报告

    分光光度计计量标准技术报告（因为论坛不支持一些符号祥情见附件）计量标准技术报告 计 量 标 准 名 称 紫外、可见分光光度计检定装置 计量标准负责人 刘彦刚 建标单位名称（公章） 萍乡市计量所 填 写 日 期 目 录一、建立计量标准的目的…………………………………………………………………..( 3 )二、计量标准的工作原理及其组成………………………………………………………..( 3 )三、计量标准器及主要配套设备……………………………………………………………( 4 )四、计量标准的主要技术指标……………………………………………………………..( 5 )五、环境条件………………………………………………………………………………..( 5 )六、计量标准的量值溯源和传递框图……………………………………………………..( 6 )七、计量标准的重复性试验………………………………………………………………..( 7 )八、计量标准的稳定性考核………………………………………………………………..( 8 )九、计量检定或校准结果的测量不确定度评定[fon

  • 紫外分光光度计校准周期

    我们实验室有5-6台紫外分光光度计设备，有几台一年采用几次，相当于备用设备，校准可以2年一次吗，还是必须一年一次。不校准偶尔又需要用。内部增加核查频次，体系内行不行？

  • 分光光度计标准曲线问题

    在分光光度计的标准曲线中，看到资料说通常的校准曲线有三大类12种，有波长不校正、双波长等点校正、三波长梯形校正三种，每一种又分为线性、过零点线性、二次、三次四种，总计12种。请大神帮忙解释一下什么是双波长等点校正、三波长梯形校正？什么情况下用二次、三次？一直以来都是用线性拟合，没接触过其他的拟合曲线，谢谢

  • 【资料】导数分光光度法测定铝材着色槽液中微量铝

    导数分光光度法测定铝材着色槽液中微量铝Derivative spectrophotometric determination of trace aluminium in the solution of coloring trough for aluminium products关键词：导数分光光度法,铝材,着色槽液,铝作者：马毅红,叶晓萍,毛露甜概述：提出了用一阶导数分光光度法测定铝材着色槽液中微量铝的方法,结果表明,在pH5.0～7.0之间,乳化剂OP存在下,Al与铬天青S(CAS)形成稳定络合物,测定633.0nm处的导数值,选择性大为提高,该方法用于铝材着色槽液中微量铝的测定,结果令人满意.参考文献：[1] 王作录,等.光谱实验室[J] ,1995,12(3):38.[2] 张振宇,等.山东大学学报[J] ,1996,31(2):202.[3] 杨泉生,等.双波长分光光度法的原理与应用[M] .北京:化学工业出版社,1992.165.[4] 李友芬,等.湘潭大学学报[J] ,1996,18(4):53.[5] 马林,等.化学世界[J] ,1998,39(7):377.

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