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在植物样品中,水稻的叶片因含有较多硅,故比较难磨。即便是用机械研磨设备,有时也不容易研细,可以说如果水稻叶片如果研好了,草本植物的叶片就都没啥大问题了。我们是通过在某省农科院的实验室反复试验,得到以下条件提供参考: 1 将离心管编号,对应编号将相应的水稻叶片截成1cm左右的小段,每个离心管中放3段,用镊子夹住中间位置,放入管底。2 分装珠子:内侧两排装2颗5mm珠子和5颗3mm珠子;外侧两排装1颗5毫米珠子和6颗3mm珠子。3 冷冻:将摆好的夹具,放到泡沫盒中,加液氮冷冻,3-5分钟,充分冷冻夹具及管内样品。4 *转速与时间设定:1500转/分钟 3min5 研磨:在上夹具时,要注意一是要带上厚一点的手套,防止被液氮冻伤;一是要迅速,且要保证螺栓拧紧,卡上保险扣。然后,启动研磨。6 取下夹具,使整体离心管盖子向上,在桌面上拍一拍,使样品粉末沉落管底,进行下一步实验。*目前研磨仪的速度可以达到更高,但考虑离心管材质差异,建议一开始不要设定太高的速度,根据实际情况调整。感谢大家的积极回复,虽然没有像样的照片,但我还是很佩服各位的见识,正如“雾非雾”所说,刚研磨出的样品就是粉末状的,细度比咱们平时冲的豆奶,芝麻糊之类的粉末更细一点,但由于在常温下很容易化冻,如果不抓紧处理,这种粉末很快就会变成“菜泥”状,就是给宝宝吃的那种蔬菜泥。 另外其实就像雾非雾所说,很多实验室也是将样品经低温冷冻,一般是-80℃,这种低温对样品中温度敏感的成分保护已经足够了,但浸液氮的作用除了降温还有一个重要的作用就是脱水,使样品变干变脆,研磨过程中研磨珠与样品进行刚性作用,就像铁锤砸石头,作用力完全被样品吸收,才会被打得粉碎。以前像水稻叶片这种样品之所以不好磨,就是因为叶片本身比较韧,低温冻过之后变蔫变软,研磨珠有劲使不上。 目前我们在植物样品的研磨上获得了不少的经验,下一步还会在其他类型的样品上下功夫,当然,在不透露更多机密的情况下,我会拿来和大家分享。
TJ2011高通量组织研磨仪对植物叶片的液氮冷冻研磨实验处理材料:植物叶片 (水稻、玉米、小麦、草、蔬菜叶等)1 装物料:将植物叶片截成所需的小段,用镊子夹住,放入1.5/2ml的离心管管底,对离心管进行编号。现以24空离心管适配器为例;2 装研磨珠:每个离心管内装上1个5mm碳化钨(或氧化锆)研磨珠,或3mm碳化钨(或氧化锆)研磨珠5个;3 冷冻保存:将铝合金夹具夹住24孔,固定好,放到专业液氮盒中,加液氮冷冻,3-5分钟,充分冷冻夹具及管内样品。4 溶剂加入:如有需要,在每个离心管中,小心加入裂解液或其他溶剂;4 主机运转:设定转速与时间例如1500转/分钟 3min,点击Start5 研磨过程:在典型研磨时间(2~3min)内,研磨结束。可同时得到2*24=48个通量的样品;6 取下夹具,进行下一步实验。注意事项:在上夹具时,要注意一是要带上厚一点的手套,防止被液氮冻伤;一是要迅速,且要保证螺栓拧紧,卡上保险扣。然后,启动研磨。TJ2011高通量组织研磨仪同时适用动物组织(骨骼、肌肉、内脏、毛发等)的研磨,高通量提取DNA/RNA。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/02/201202141110_349211_1812435_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/02/201202141110_349212_1812435_3.jpg
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