微生物涂布棒

[font=宋体, SimSun]涂布平板法是一种常用的微生物学实验技术，主要用于分离、纯化和计数微生物。以下是该方法的详细介绍：[/font] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]实验原理[/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]涂布平板法的基本原理是通过[b][color=#ab1942]将微生物悬液进行稀释，然后将稀释后的悬液均匀涂布在固体培养基表面。[/color][/b]这样，微生物在培养基上生长时能够形成单个菌落，从而实现微生物的分离和纯化。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]操作步骤[/b][/color][/font] [list][*] [font=宋体, SimSun]准备培养基：选择适当的固体培养基，如营养琼脂、胰蛋白胨大豆琼脂等，按照说明书或实验要求配制并灭菌。待培养基冷却至适宜温度后，倒入无菌平板中，使培养基在平板底部均匀铺展。[/font] [/list][align=center] [/align][list][*][font=宋体, SimSun]稀释微生物悬液：取一定量的微生物悬液，用无菌生理盐水或其他适当的稀释液进行逐步稀释。通常需要进行10倍系列稀释，以获得不同浓度的微生物悬液。[/font][*][font=宋体, SimSun]涂布平板：取适量稀释后的微生物悬液，用无菌玻璃刮刀或涂布器均匀涂布在固体培养基表面。涂布时要保持手法的稳定性和一致性，以确保微生物在培养基上分布均匀。[/font][*] [font=宋体,SimSun]培养微生物：将涂布好的平板倒置放入恒温培养箱中，设置适当的温度和湿度条件进行培养。[b]培养时间根据微生物的种类和生长特性而定，一般需要24~48小时。[/b][/font] [/list] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]注意事项[/b][/color][/font] [list][*][font=宋体, SimSun]无菌操作：实验过程中要使用无菌器具和培养基，并在无菌工作台或超净工作台上进行操作，以避免微生物污染。[/font][*][font=宋体, SimSun]稀释倍数的选择：选择合适的稀释倍数是实现微生物分离和纯化的关键。稀释倍数过高可能导致微生物在培养基上无法形成菌落；稀释倍数过低则可能导致微生物在培养基上过度生长，形成菌落重叠。[/font][*] [font=宋体, SimSun]涂布技巧：[color=#ab1942][b]涂布时要保持手法的稳定性和一致性，涂布速度要适中，避免过快导致微生物分布不均或过慢导致培养基干燥。[/b][/color][/font] [/list] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]结果分析[/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]通过对涂布平板法得到的平板进行观察和计数，可以估算出原始微生物悬液中的微生物数量。观察平板上菌落的形态、大小和颜色等特征，可以初步判断微生物的种类和生长状态。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#021eaa][b]稀释涂布平板法计数微生物的计算公式[/b][/color][/font] [font=宋体,SimSun]稀释涂布平板法是一种常用的微生物计数方法，通过对样品进行稀释并将稀释液均匀涂布于平板上，再根据平板上生长的菌落数量进行统计计算。在该方法中，每克样品中的菌株数可以通过以下公式计算得出：[color=#ab1942][b]菌株数 = （C ÷ V） × M。[/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用稀释液的体积，M代表稀释倍数。通过这个公式，我们可以准确地根据实验结果计算出样品中微生物的数量，为微生物学研究和实验提供了重要的定量依据。[/font] [align=center] [/align][font=宋体, SimSun][color=#3daad6][b][size=17px]误区一——对平均菌落数的理解[/size][/b][/color][/font] [font=宋体,SimSun]在微生物实验中，对平均菌落数的理解至关重要，它反映了样品中微生物的数量，并直接影响到实验结果的准确性和可靠性。[b]在实验过程中，如果空白对照显示有菌生长，说明可能存在污染现象，即质控不在控，此时就不能简单地将所有实验得到的菌落数取平均值。[/b]相反，需要分析可能的污染原因并重新进行实验，以确保实验结果的可信度。[/font] [font=宋体, SimSun]另外，重复实验也是确保实验结果准确性的重要手段。通过在同一稀释度下涂布多个平板并统计菌落数的平均值，能够减小实验误差并提高数据可靠性。在重复实验中，如果某个平板的菌落数与其他平板相差较大，说明可能存在操作失误，这时应该舍弃该数据，并找出原因进行修正。[/font] [font=宋体, SimSun]在计算每克样品中某种菌株数量时，应只考虑符合该菌落特征的菌落数的平均值，避免将其他菌种形成的菌落数计入其中，以确保数据的准确性和可比性。深入理解平均菌落数的概念和正确运用相关原则，能够为微生物实验结果的可靠性提供保障。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#3daad6][b][size=17px]误区二——对稀释倍数的判定[/size][/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]在微生物计数实验中，稀释倍数的合理设定对于确保有效活菌数的准确测定至关重要。稀释倍数过大会导致菌落数过少，可能引起计数误差过大；而稀释倍数过小会导致菌落数过多，使计数变得困难。因此，在选择稀释倍数时，需要根据待测样品中微生物数量的预估值来合理设定，以求得准确可靠的实验结果。[/font] [font=宋体, SimSun]举例来说，若测定土壤中细菌数量，[color=#ab1942][b]一般选择10[sup]4[/sup]、10[sup]5[/sup]和10[sup]6[/sup]倍稀释，因为土壤样品中细菌数量可能较为丰富；而测定放线菌数量时，一般选用10[sup]3[/sup]、10[sup]4[/sup]和10[sup]5[/sup]倍稀释，因为放线菌的数量相对较少[/b][/color]。对于真菌数量的测定，则一般选用10[sup]2[/sup]、10[sup]3[/sup]和10[sup]4[/sup]倍稀释。对于自来水中大肠杆菌数量的测定，一般不需要进行稀释，可以直接进行涂布培养。[/font] [font=宋体, SimSun]通过合理选择稀释倍数，可以使待测样品中微生物的数量落在适宜计数范围内，既能保证准确性又能提高实验的操作性。因此，对稀释倍数的判定不宜盲目一致，而应根据具体实验需要和待测微生物数量进行科学合理的设定，以确保微生物计数实验结果的可靠性和准确性。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#3daad6][b][size=17px]误区三——对体积与质量的单位换算[/size][/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]在微生物计算中，涂布平板时所用的稀释液体积通常表示为V，一般为0.1mL（毫升）。[b]然而，当待测样品中微生物数量较少时，接种0.1mL稀释液到平板上培养后菌落数未达到30，这时可以考虑增大接种量，例如接种1mL稀释液，以增加菌落数的检测灵敏度。[/b][/font] [font=宋体, SimSun]在实验中，可以通过体积和质量的单位换算公式来进行计算，即体积 = 质量 / 密度(V = m / ρ)。水的密度为1g/cm3，因此质量为1g的水的体积为1cm3，也等于1mL。这意味着1cm3等于1000μL，1mL等于0.001L。通过这样的换算公式，可以方便地在体积和质量之间进行转换，确保实验中的计量单位正确无误。[/font] [font=宋体, SimSun]因此，在微生物实验中，正确理解和使用体积与质量的单位换算是确保实验数据准确性和可靠性的重要步骤。合理选择适宜的接种体积，可以提高微生物计数的准确度，从而获得更可靠的实验结果。[/font] [font=宋体, SimSun][color=#3daad6][b][size=17px]误区四——对统计误差的分析[/size][/b][/color][/font] [font=宋体, SimSun]从稀释涂布平板计数的原理来看，该方法统计的菌落数往往会低于活菌的实际数量，这主要是因为样品难以完全分散为单个细胞，当存在两个或多个活细胞连在一起时，在平板上观察到的只会形成一个菌落。[/font] [font=宋体, SimSun][b]在整个稀释涂布平板计数的过程中，稀释倍数的选择是否合适、涂布是否均匀、培养环境是否能够促进微生物正常生长，以及计数过程是否存在漏计或重复计数等情况，都会对实际统计结果产生影响。[/b][/font] [font=宋体, SimSun]除了以上因素外，还需要考虑到培养时间对菌落数的影响。菌落数目应该在一定时间间隔内进行统计，选择菌落数目相对稳定时的记录作为最终结果。这样能够避免因培养时间不足而导致漏计菌落的情况发生。[/font]

金黄色葡萄球菌第二法涂布法中，1ml接种到三块平板是用一条玻璃涂布棒涂布就好还是同个样品不同平板也要更换涂布棒涂布，谢谢解答

看到电视画面上日本做微生物检测涂布平皿用的是金属耙子（应该是购买的成品），不过好像国内并没有见到，不知道您用的是什么样的？

[font=宋体][size=3]和大家分享几个微生物检验操作[/size][/font][size=3][font=Arial]Flash[/font][font=宋体]短片，请用暴风影音打开。[/font][/size][font=Arial][/font][font=宋体][size=3]之八涂布法平板计数[/size][/font]

请教前辈们一下，我用玻璃的涂布棒一直在平板上涂布不均匀，一样的板一个长菌一个就不长，还有其他的涂布方式吗

请大侠帮忙分析一下。在做胶粘剂涂布量测试时数据重复性极差，使用两根不同的丝棒数据竟然会差不多，请教哪些因素会影响涂布量？应该如何控制

请问各位，涂布器是什么样子啊？我们要做薄层色谱，要铺板，想买涂布器，又不知道涂布器什么样子？谁有涂布器的图片，发张来看看，感激感激！！

25%苯基-75%甲基聚硅氧烷为固定液，涂布浓度为20%的填充柱，这里的20%是指“25%苯基-75%甲基聚硅氧烷”吧？另外80%是什么？然后“25%苯基-75%甲基聚硅氧烷”这里面的25%的苯基和75%的甲基聚硅氧烷是分别配好再混合还是一起配的，这个用什么溶的？

FZ/T 01081-2009 热熔粘合衬热熔胶涂布量和涂布均匀性试验方法

求推荐款价格不是很贵的小型实验室用可连续涂布的机器，常温，需要精确涂布厚度2μm,喷涂也可，其它要求不大，有好设备联系QQ 314446081 谢谢

请问薄层涂布器哪家好,其价格大约多少

实验室需要模拟做贴合实验，求购一台水性涂布机，求推荐！

关于涂布纸挺度的单位，挺度的单位有g.cm，mN,mN.m，请问一下它们之间是怎样换算的？还有挺度有纵横两个方向，分另是CD/MD表示，请问CD表示横向，而MD表示纵向吗？

同志们好，最近想买个手动薄层涂布器，自己铺板子用，但是一直找不到卖的地方，谁知道在哪儿可以买到啊，知道卖家的联系方式也好啊，着急用，谢谢各位！！

双面涂布的实验室设备用谁的好?请大家畅所欲言.谢谢.

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公司 要检测一个瓜尔豆胶的细菌总数……不知道怎么搞了……主要问题是瓜儿豆胶1%浓度的溶液粘度很大，取1mL不好取，而且就算取1mL了，可是因粘性大，在使用倾注法的时候无法让样品和培养基混合均匀，如果使用涂布法很容易沾到涂布棒上而导致实际样品量减少。如果是0.1%浓度的，实际上就没什么实际测量意义了啊！求救！菜鸟的烦恼！是否有什么试剂可以在不影响微生物生长的前提下稀化样品呢？

锂电池生产车间从涂布机烘箱排出来的废气如何处理

涂布激光在线测厚仪作为一种非接触式厚度测量仪器，因它的测量非接触式、测量便捷、读数精准，可广泛用于生产线上对各种材料的厚度、宽度、轮廓的实时测量，范围很广阔。但是，在操作的过程中还是有些事项需要注意的，下面大成精密技术人员就为您详细的讲解一下：http://photo26.hexun.com/p/2016/0331/573113/b_C9C9AF6DB71945EC13EDA369342D681C.jpg 　　（1）软件运行前，请务必将设备外壳活动门板关闭，以免被撞伤。　　（2）不准拆卸导轨上方挡板，以免尘埃等异物落在导轨及丝杆上。　　（3）请每星期用棉签蘸酒精轻微擦拭标准陶瓷块两次，保证其洁净。　　（4）严禁拆卸或拆动标准块以及其支架，否则会引起测量不准。　　（5）穿料后必须保证极片处于绷紧状态，不能一边紧一边松。（6）在运行软件前，请先通电预热设备30分钟以上，否则会测量不准确。　　（7）严禁操作人员随便更改系统设置中的参数，特别是描述扫描位置的参数，否则有可能引起电机撞机。如需修改请联系工程师。（8）严禁动激光感应器的任何部件，不准旋转千分尺，否则会引起测量不准。　　时代在进步，科技的发展也越来越先进，如今，各式各样的高科技设备已经成为了不同行业的辅助好帮手。涂布激光在线测厚仪的存在，为很多企业带来了很大的益处，同时产品的质量也得到了更多的保障。

[color=#444444][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的涂布剂需要购买吗？是不是直接买来就可以使用了？ [/color][color=#444444]有没有人用GC测过盐酸拉贝洛尔非对映异构体的比率，方法中溶剂用丁基硼酸，但是我不知道是正丁基硼酸还是叔丁基硼酸？？有没有哪位高手帮帮忙[/color]

有一批纸送检，要求检测判定纸张涂布成分为有机硅，而非聚丙烯。实在不知道该如何下手，用什么方法检测？求救~

只说固定相和涂布浓度，不指明担体时，一般是用什么作担体呢

我做一挥发油的含量测定，原来用0.25ID的石英毛细管柱（PEG涂布）做,现在用0.32ID的石英毛细管柱（PEG涂布）做,后者的峰面积是前者的近10倍,虽说与对照品比较含量均为合格,但二者峰面积相差这么大,如何解释?

请问哪里有4mm*1m,5%G-17涂布的柱子?

请帮我查下这些标准,谢谢你们! QB/T 1011-1991 单面涂布白桨濉　?　　　　QB/T 1012-1991 胶版印刷纸 　　　　QB/T 1320-1991 玻璃纤维高效空气滤纸 　　　　QB 1458-2005 非热封型茶叶滤纸 　　　　QB/T 2250-2005 单面白纸板 　　　　QB/T 3517-1999 单面胶版印刷纸 　　　　QB/T 3518-1999 铸涂纸 　　　　QB/T 3523-1999 白卡纸 　　　　QB/T 3524-1999 凸版印刷纸

无菌操作技术不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，在许多生物技术中也被广泛应用，例如转基因技术、单克隆抗体技术等。 无菌室，微生物实验室内专辟的一个小房间，室外设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭，无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢、便于清洗，室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。工作台的台面应该处于水平状态，无菌室和缓冲间都装有紫外线灯（距离工作台面1米），工作人员进入无菌室应穿戴灭过菌的服装、帽子。 超净台，主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃，通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台（正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去；正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种、细胞株等）。 微生物的培养 在微生物的培养过程中，要保持培养物纯净性；培养微生物的要领，是为所需要的微生物提供良好的生存环境，同时阻止或抑制其他微生物的生长。 （一）培养基1.认识培养基的基本组成成分，从生物体构成的基本元素这一角度理解培养基中为什么都需要具备这些基本成分。2.培养基的用途和种类：液体和固体两大类。3.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方；尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。4.培养基是否合格（无菌试验）：培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长（液体不变浑浊），说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）无菌技术 1. 无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。日常的生活环境中，每时每刻每处都存在着微生物，任何一个不经意的动作都可能将某种微生物引入到培养物中。在具备无菌环境和获得无菌材料后，还要始终保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术：彻底灭菌和防止污染是无菌技术的两个方面。此外，要有效避免操作者自身被微生物感染，还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去（生物安全）。无菌操作非常重要，无论是倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 2. 消毒与灭菌的概念（1）培养细菌用的培养基与培养皿（需要灭菌）（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（需要灭菌）（3）实验操作者的双手（需要消毒）（4）接种环、针、涂布棒：灼烧灭菌（外焰）。 3.倒平板（1）灭菌后，培养基冷却到55 [font='宋

我做一个样品，标准这么说：用硅酮（OV17）为固定相，涂布浓度为1.5%，这是用什么柱子啊，填充柱吧，玻璃的还是钢材的，多长啊

核心提示：1月23日，在深圳打工的女子乘长途大巴回老家，滞留在株州，失去联系。男友为找到她，沿京珠高速的雪地徒步走了100多公里。结果，冻倒在路上，衣服结成了冰，头发上结满冰霜，他说“爬也要爬到她跟前”。 ■寻人启事杜登勇女友周永红，今年20岁，湖北监利县人，在深圳打工。1月23日乘长途大巴从深圳出发回监利老家。目前滞留在株州，失去联系，知情者请与本报联系。南方网1月30日报道 雨水淋湿了衣服，衣服结成了冰，头发上结满冰霜，杜登勇依然没有停下寻找女友的脚步。昨天傍晚，他终于走到了郴州，却与女友失去了联系。此时，他沿京珠高速的雪地已经徒步走了100多公里。杜登勇一度失去联系前天下午6时15分，记者把杜登勇送到梅花收费站后，他不顾记者劝阻，毅然沿着结满厚厚冰层的京珠高速公路，向湖南方向走去，寻找他被困在路上生病的女友。当晚，他的手机开始无法接通，和记者失去了联系。从梅花到郴州，有100多公里。昨天晚上，天空一直飘着雨。根据韶关当地天气预报显示，当地前晚最低气温达到零下4℃。这不由得让人为杜登勇的安危捏了一把汗。热心人士关注杜登勇昨天本报刊登了这名深圳打工男子雪地徒步寻女友的故事后，引起了社会关注。昨天上午，广州丽江花园的彭女士拨通本报记者电话，表示有亲人在株洲，杜登勇到株洲后可以去找她寻求帮助。随后，又有多位读者打进本报热线，表示愿意给予杜登勇帮助。与此同时，株洲晚报和萧湘晨报记者也与本报记者取得联系，表示愿意帮助杜登勇。但直到中午1时许，记者反复拨打杜登勇的电话，依然无法接通。“爬我也要爬到她跟前”昨天下午3时21分，记者终于接通杜登勇的电话。在电话那端，他告诉记者，他已经快走到郴州了。杜登勇说，前晚与记者分别后，他沿京珠高速公路走到坪石收费站后，就拐下京珠高速公路，沿着107国道前往株洲。“衣服都结冰了，头发像打了摩丝一样，硬邦邦的。”雨水打湿了杜登勇的衣服，但他没有停下自己的脚步。他说，“我一定要找到她。就是爬我也要爬到她跟前。”甚至连记者送给他的面包和饼干他也没吃。他说，“我想起她还困在路上，哪里吃得下呀。”早晨9时许，他到了湖南宜章县城。在这里，他碰到了两个同样被困在半路、步行回家的常德同乡。三个人开始结伴同行。两天吃了一顿热饭昨天下午6时许，杜登勇终于走到了郴州。两个同乡得知他的壮举后，请他去饭馆吃了一餐晚饭。这是他27日从深圳出发以来，吃的第一餐热食。这时他才感到，身体有些吃不消了。他在发给记者的短信中说：“我好冷，腿好痛，脚底好像坏了，好痛。”得知他的处境后，记者驱车赶往郴州。但却因为路面结冰等原因，被困在了路上。最后只好委托郴州的一个朋友帮助把他暂时安置在一家旅馆里。昨晚11时30分，记者与杜登勇再次通电话时，他告诉记者，他感觉腿很痛，脚上已经没有了知觉。今日零时40分许，记者赶到郴州，在旅舍见到躺在床上的杜登勇。虽然盖着两床棉被，他仍然感觉身上很冷，甚至连说话也感觉困难。与此同时，因为女朋友的手机没电了，他昨天也一直未能与她取得联系。[IMG]http://cimg23.163.com/cnews/2008/1/30/20080130094546078e5.jpg[/IMG]杜登勇徒步找受困女友[IMG]http://cimg20.163.com/cnews/2008/1/30/20080130094607908cd.jpg[/IMG]杜登勇走到郴州后被冻伤倒下,他的女友被困途中失去联系

从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。在分子生物学的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。 　　1、用固体培养基分离和纯化 　　单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。 　　1.1 稀释倒平板法 　　首先把微生物悬液作一系列的稀释(如1:10、1:100、1:1000、1:10000)，然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 　　1.2 涂布平板法 　　因为将微生物悬液先加到较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的微生物悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。 　　1.3 平板划线法 　　最简单的分离微生物的方法是平板划线法，即用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行连续划线(图2)，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、放射法、四格法等。

微生物在自然界中都是混杂地生活在一起，要想研究和利用某种微生物，须把它从混杂的微生物群中分离出来，以得到只含该种微生物的培养物。微生物学中，将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养（pure culture）。分离纯培养的方法通常有以下几种：1．稀释法（1）平皿倾注法 （2）平板涂布法 预先制备平板。然后制备并吸取适度稀释的菌液，滴于各平板中央（每皿一滴，约0.05ml），用无菌刮刀将菌液均匀涂布于平板表面。2．平板划线法 划线的方式很多，其目的都是使平板上菌体逐渐变稀，最终形成单菌落。划线用平板也要预先制备。常用的是以下两种方式：（1）针尖稍弯的接种针火焰灭菌并冷却后，取样；在靠近平皿边缘处的平板上，将针尖的弯曲部位接触平板，接种棒与平板面成30°～40°角，划3条～4条平行线；转动平皿约50°角，灼烧接种针，冷却后，通过前一区划2条～3条平行线，并继续划2条～3条不通过前一区的平行线；再转动平皿……如此划4区～5区（图3—5A）。此种方法适用于分离纯化固体培养基上的培养物。（2）灼烧并冷却的接种环取样后，在平板上作连续划线（图3—5B）。此适用于液体样品。3．单细胞挑取法 把一滴菌悬液置于载玻片上，用安装在显微镜挑取器上的极细的毛细吸管，在显微镜下对准某一个单独的细胞吸取，再接种于培养基上培养。此法限于高度专业化的科研。4．利用选择培养基分离法（1）采用选择性高的培养基 例如，以纤维素为唯一碳源，分离分解纤维素的微生物；用无氮培养基分离自生固氮菌；在15ml培养基中加25％乳酸1滴～2滴以抑制细菌生长，把受细菌污染的霉菌分离出来。（2）培养基中加抑制剂 例如，结晶紫10mg/L可抑制G+细菌生长，利于分离G-细菌；KMnO4100mg/L抑制细菌和霉菌生长，利于分离放线菌；制霉菌素50mg/L或放线酮50mg/L利于分离纯化放线菌；分离纯化霉菌或放线菌时，加链霉素30mg/L、金霉素2mg/L可抑制细菌生长。5．其他 如，高温处理（80℃ 15min或100℃ 10min）分离芽孢杆菌；4％KOH处理痰液，分离结核杆菌等等。