色谱积分重叠法

[size=3] 本人用的是安捷伦7890A配置的色谱工作站，样品连续进样6针，跑出来的色谱峰几乎能重叠在一起，但是由于各色谱图中基线高低的微小差异，而使6针之间峰面积的RSD有时候会大于5%。我主要是调节了积分参数中的斜率灵敏度，结果没有什么改善。请问各位高手，如何设置色谱工作站的积分参数，使积分结果更准确。或者是如何设置色谱工作参数，使色谱图的基线保持一致？用基线补偿功能能行吗，如何使用？谢谢！[/size]

如何求两谱图重叠部分面积的积分图见附件

我在做小分子化合物与蛋白质的相互作用实验，其中计算两者集合距离时，需要知道供体和受体两者间荧光光谱和紫外光谱重叠后的积分，请问如何计算呢？是通过origin软件做的吗？

经常遇到氘代氯仿的7。26峰与样品苯环的峰重叠。无法分开。此时如何积分？还积不积7。26的峰。谢谢

[size=4]我正在做一种生物碱与[/size][size=3][font=宋体]牛血清白蛋白（BSA）结合作用的荧光光谱研究，需要求算[/font][/size][size=3][font=宋体]生物碱分子的紫外光谱与牛血清白蛋白（BSA）[/font][/size][size=3][font=宋体]荧光发射光谱的重叠积分，以便求算药物分子与BSA结合的距离，文献上说明可以采用矩形分割法求出两光谱重叠区域的积分值，但用何软件如何求算我还不会。肯请此间高人出手指点，不胜感激！最好能将方法发到我的邮箱[email]zhongming2613@163.com[/email] 谢谢！[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/03/201003121811_205351_1889038_3.gif[/img][/font][/size]

如题，在看中英文文献时均没有找到较详细的说明，有些只说用相关软件。有提到Matlab，不过计算机语言本人不太懂。用origin的话，只能算出一条曲线下的，重叠的似乎不行。最笨的方法手动积分，不过困惑的是两条曲线，其纵坐标都不相同，那么既然是重叠部分，肯定是包含不同的曲线段，不同的单位怎么算到一起。另外，有没有现成的软件可以计算。谢谢！

怎么利用矩形分割法求重叠积分面积，谢谢，有没有傻瓜式操作步骤呀 谢谢

[color=#444444]请问大家做荧光光谱和紫外吸收光谱重叠时，是单独用BSA的荧光光谱和药物小分子的紫外吸收光谱重叠，还是按1：1把二者混合在一起相互作用后的荧光光谱和紫外吸收光谱重叠，谢谢！[/color]

对于色谱图的积分，大家一般都是设定参数自动积分，还是手动积分的呢？报国家的话，手动积分可以吗？

我将个人积分拿出3000个，作为积分基金，新到液相色谱的版友可以在这里跟帖，我将赠送相应的积分。具体格式如下：资料名称：下载链接：所需积分：注意：1、严禁发表与此不相关的帖子，一发现就删除。 2、只给哪些积分不够下载资料的网友。 3、格式不对的也将删除。

通过液相色谱仪做出来的图谱进行积分处理时，对于积分区域的选择总有很多问题，因为有些峰并不规则，如肩峰，分叉峰等，选择不同的积分区域时峰面积都会相应的变化很大，所以想问问大家对图谱积分有什么法规或者讲究吗？

积分，还是积分本文去年就在筹划，因为种种原因，一直未能成文，实在愧对极限色谱版面版主的职位，以至于我都不好意思跟小S他们打招呼。谨以此文作为对极限色谱版和月旭公司对本人的信任的感谢，所以谢绝其他网站和个人的转载。版权所有，谢谢合作。在色谱检测中，几乎所有的结果都由积分得来，不管是峰面积还是峰高定量，积分参数的调整都会带来对最终结果或多或少的影响。如何正确积分是一个色谱工作者必须掌握的技能，然而在实际工作中，因为色谱图的千奇百怪，因为积分算法的多种多样，因为积分参数的复杂变化，迄今还未见到有文章或资料能对此做出比较合理的操作方式和令人信服的解释。给出一套令人信服的积分操作SOP几乎是一件不可能完成的任务，但是实际状况又确实需要这样一个东西，来解除大家工作中的疑惑，使不同实验室不同单位之间色谱数据的交流更加有效合理。作为色谱工作者的一员，我也在热切期盼中，苦苦等到现在，我认为，虽然这是一个我无法建立起来的高楼大厦，但是我可以尽自己的力量去添加一砖一瓦，哪怕我自己盖的小茅屋经不起一阵风，我至少可以给后来人看到它如何倒下。Q1为什么要积分？色谱发展史大部分人都比较了解，但是色谱定量的历史很少有相关资料。按照本人的猜想，最初的记录仪就像我们在电视上常见的地震记录一样，热敏纸，指针抖啊抖的，划出来一张色谱图，数据处理什么的想也别想，要想知道含量？可以，自己拿尺子量去！也许这就是以前以峰高定量方式采用比较多的原因？毕竟量个峰高比量半峰宽什么的方便简单。估计是大家钢板尺瞅的眼睛也花了，而且XX大会召开，为了确保安全，钢板尺这样的凶器也要实名购买，十分不便。所以后来就有了数据处理机。现在还有很多实验室有这个东西，当然现在用的最古董处理最麻烦的型号拿到以前电脑技术没发展的时候，也能让N多诺贝尔化学奖得主感动的泪流满面。说到底，还是技术的进步带来的数据计算处理的方便，大家不再满足于峰高的定量，因为峰高定量受限很多，只有很完美的峰型出现的偏差才较小。解释1，峰高定量的缺陷。峰高和峰面积定量的基本区别（受各种参数制约，不一定完美线性展现，但是普遍规律是有的）浓度型检测器，流速降低，峰面积增加，峰高不变；（代表检测器UV）质量型检测器，流速降低，峰面积不变，峰高降低。（代表检测器FID）书摘：“辛格提出，如果色谱峰比较对称，相对于峰面积，峰高受色谱峰重叠的影响比较小。“Meyer认为，轻微重叠的色谱峰，用峰高定量是更安全的选择。书摘：“峰高的线性范围比峰面积窄；“再者，峰高是峰宽的函数。因此还与柱效有关，不仅仅和待测物质的量有关系。书摘：“积分仪的使用，使得‘测量比较容易’不再被考虑。（显然指的是手工测量）“不同次测量的误差，意味着分析过程没有被良好的控制。在这一方面，峰面积比峰高更为灵敏。（峰面积包含两个参量，峰高和峰宽）书摘：“选择峰高或峰面积要考虑的因素：噪声：噪声对峰面积的影响比峰高大。（影响蜂起点终点的位置确定）信噪比比较差的时候，峰高优先考虑对称度：不对称的色谱峰，峰面积更加准确。重叠峰：重叠峰可能会干扰峰高和峰面积。但除非（就两个峰来说）某一个峰的最高点在另一峰以内，峰高不受影响。基线漂移：基线漂移的时候，峰切割对峰高的影响要小。峰高定量的线性范围比峰面积要小。即便发生信号刚刚超出线性范围，峰面积的偏离也比峰高要小。检测器类型：浓度型检测器，如果流速不是很稳定，用峰高定量比较好。检测器滤波常数：检测器滤波常数过大会降低峰高，峰面积不变。上面的内容比较碎，我们以紫外检测器举例说明吧，如果把HPLC的紫外检测器当成一个紫外分光光度计，那么我们得到的就不会是一张色谱图，而是每个样品对应的一个吸光度的点（一维信息），和浓度数据一起放在坐标体系内，x，y轴分别是浓度和吸光度，然后根据朗伯比尔定律计算样品的纯度。在色谱系统中，紫外检测器的数据会多一维的信息，那就是时间。液相的紫外检测器是不间断扫描提取结果，样品在色谱柱经过分离后，以时间为坐标与杂质或其它响应区别开来，于是有了二维的色谱图。x轴是时间，y轴依然是吸光度。跟一维的坐标体系相比，我们可以这样理解：x轴依然是浓度，但是每个时间△t点上的浓度。峰面积定量比峰高定量就多了这么一点要求：峰型完美的高斯峰。一个是铺平在桌面上看大小，一个竖起来从坐标轴的y轴看高低。打个比方，要测量wangzijin和kaikaifeng的质量比值，但是没有秤，只有一把尺子，怎么办呢？峰高定量法就是测量一下这两人的身高，然后得出结论，wangzijin：kaikaifeng=X：Y。如果这俩人宽度相宜厚度相当，那么这个结果是比较靠谱的；峰面积定量法就是把俩人铺在桌子上（汗，扑街的感觉），测量头部的宽度，肩膀的宽度，等等，然后计算，如果这俩人厚度差不多，那么这个结果也是比较靠谱的。PS：细心的板油肯定注意到了，即使这样定量依然不是完美的，因为wangzijin和kaikaifeng同学俩人的厚度没参与计算，其实这正说明我举例子的严肃性，任何定量方法都不是完美的，只能说峰面积定量与峰高定量相比有很大优势。即使引进了DAD,MS检测器，得到更多一维的数据，把厚度算上，实际的结果仍然会有差异，因为wangzijin和kaikaifeng的密度啊什么的也不一致，会带来误差。综上，峰面积定量比峰高有很大的优势，限制小，信息量大，但是峰面积从哪里来呢？——积分来的，看吧，说了这么多，终于进入正题了，前面都没积分什么事儿。Q2积分如何影响结果？要研究这个问题，首先要知道算法。这些算法都是手动计算时期留下的宝贵遗产，要说明我们的结果，了解这些还是必须的。基本的算法有以下几种：1，峰高X半高峰宽法其实就是三角形底边X高/2，选取的底边就是峰的起点和终点的连线。2，三角形切线法就是拐点做切线，然后计算这个三角形的面积，跟方法1的区别就是底边选取的是切线出来的三角形的底边，而不是直接用的峰起点终点连线。据说近似等于峰高0.607处的峰宽X2.以上适用于对称峰型。3，峰高X峰宽的平均值法这里适用于不对称峰，外观上看就是把三角形的峰面积公式换成了梯形面积计算公式。选取峰高0.15处的峰宽为上底边，选取峰高0.85处的峰宽为下底边。但是我们计算的不是这中间的梯形的峰面积，所以公式里面的峰高不是（0.85-0.15=0.6）倍的峰高，而是全峰高。4，分割计算后加合法不参考梯形面积计算方式，而是把不对称的峰分割成几小块计算。以上适用于不对称峰型再以上一下，方法1-4都说的是基线良好，分离良好的单个峰的面积计算，然后我们的重点来了，基线漂移，分离不太好的俩峰或是几个峰如何计算峰面积？其实算法还是前面的算法，不过峰高发生了变化。5&6，竖直向下法和垂直于基线法竖直向下法就是从峰顶点作时间轴（t）的垂线，然后用峰顶点和垂线与基线的交接处的连线当高；垂直于基线法就是从峰顶点作基线的垂线，以此做高。从三角形的面积计算来说，垂直于基线法显然更加准确，但是色谱峰毕竟不是规整的三角形，所以哪个方法更加准确会受峰型的影响，不能想当然的以为。对于漂移不大，或者峰比较窄的时候，采用竖直向下

想问下老师们，色谱峰积分的平滑参数一般怎么设置比较合理而不会造成色谱图的失真，积分平滑参数设置如图。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2020/05/202005211432310034_4886_3957768_3.png[/img]

继去年帮助了42个版友，共计发了550分后，今年我仍然将个人积分拿出3000个，作为积分基金。新到液相色谱的版友如果需要积分下载资料，可以在这里跟帖，我将赠送相应的积分。具体格式如下：资料名称：下载链接：所需积分：[B][size=4][color=#DC143C]注意：1、严禁发表与此不相关的帖子，一发现就删除。2、只给哪些积分不够下载资料的网友。3、格式不对的也将删除。[/color][/size][/B]

1、大家色谱的积分参数都是怎么定的呢，手动积分我们一般不让使用，自动积分的斜率灵敏度、峰宽等都怎么确定呢，有时候同序列某些色谱图峰积分效果不理想，是否可以手动调整斜率灵敏度。2、在做不同批号同种样品的时候，数据分析方法是否需要采用同一个分析方法。还是说只要保证单批次对照与样品采用同样积分参数即可，不去管之前的积分参数是怎样的。

业界的朋友们，请问行业内有没有对色谱图积分的指导原则一类的标准或者文献或者文章，如何评价什么时候是峰什么时候不是峰，该不该积分等指导思想！天天在质量控制实验室做实验，却不知道怎么积分才是对的，只知道用设备系统自带的功能，但是遇到积分事件的设置就会各种不明白和纠结

业界的朋友们，请问行业内有没有对色谱图积分的指导原则一类的标准或者文献或者文章，如何评价什么时候是峰什么时候不是峰，该不该积分等指导思想！天天在质量控制实验室做实验，却不知道怎么积分才是对的，只知道用设备系统自带的功能，但是遇到积分事件的设置就会各种不明白和纠结

岛津审计版的工作站软件不能手动处理色谱图的积分吗？

对于一些没有达到基线分离的色谱峰，大家是怎么积分的呢？ 峰谷到峰谷，还是从中间切呢？

液相色谱峰积分时，什么时候适合自动积分，什么时候适合手动积分？

[b][color=#444444]谱图中重叠峰是垂直分割积分好，还是用其他方法来进行积分好？[/color][/b]

请问气相色谱积分参数怎么选择？我们要按照USP检测方法检测有机溶剂残余，但求助积分参数怎么确定？峰宽、峰面积、斜率 谢谢 急

关于给予液相色谱版每月发帖前五名积分奖励的规定从2008年06月开始，液相色谱版将对每月发帖子前五名的版友进行积分奖励。奖励如下：第一名：50分第二、三名：20分第四、五名：10分希望大家共同为LC的繁荣努力！！ 灌水者一律按照版规处理8月前5名xky0230699 (140帖) ：50分 kikiboy (138帖) ：20分 cbjcn1985 (76帖) ：20分 wangzijin (69帖) ：10分 juju11 (54帖) ：10分

1.关于色谱积分，想请教各位大神，什么样的情况可以采用谷到谷积分，又在什么样的情况下可以采用垂线积分，有大神知道具体依据没？如果出现一个小的杂质峰，但是附近基线走的不好（有点有点像双峰的感觉），又该如何合理积分？2.关于数据处理，按照GMP要求：是不是每次数据处理方法必须要一致，不允许有任何改动？如果是，具体原则是什么，出于药典哪条法规？3.峰识别，系统溶液中各组分峰的保留时间与样品中相应组分峰之间的保留时间相差多少，是可以被接受的？这个问题同样站在审计角度！

在气相色谱法中，各组分的含里与峰面积存在着比例关系。计算峰面积的方法，借助于记录仪、记录纸的方法有:(1)峰高法;(2)半峰宽面积法;(3)峰高乘保留距离(时间)面积法(适用于同系物);(4)剪纸称重法;(5)面积仪法。 与气相色谱仪直接连接计算面积的方法有: (1)电气自动积分法;(2)直接连接计算机法。 实验室气相色谱仪大都采用(1), (2), (3)的方法，间或使用(4)方法。对于工业气相色谱仪，从仪器自动化出发，最简单的 (1)方法占大多数。但是峰高法有下列缺点: 易受操作条件的影响。峰高不一定与浓度成比例，为了正确地定量，一般要用校正曲线，这是比较麻烦的、由于采用多重刻度，满刻度值各不相同，各组分含盈的读取比较困难。 由于上述这些原因，工业气相色谱仪用的积分器就应运而生，从峰高定量改为求面积定量，提高了分析精度。而且，在测定产品的杂质时，不必将各个杂质分离后测定(这在某些情况下是难以做到的)，只要测其杂质总量就成了。

大家知道SIM的灵敏度比SCAN高，但请问SIM得到色谱峰的积分峰面积大还是SCAN得到色谱峰的积分峰面积大（同样进入仪器的样品量的情况下）？为什么？