质谱测定糖含量

[size=16px]　　还原糖测定仪(Reducing Sugar Assay)是一种用于测定样品中还原糖含量的方法，包括蜂蜜。还原糖是一类能够还原氧化剂的碳水化合物，如葡萄糖和果糖。在蜂蜜中，主要的还原糖是葡萄糖和果糖。　　以下是使用还原糖测定仪检测蜂蜜中还原糖含量的一般步骤：　　制备标准曲线： 首先，你需要制备一组还原糖的标准溶液，浓度逐渐递增。这可以通过稀释已知浓度的葡萄糖或果糖溶液来完成。每个标准溶液都会被测定仪测量，以建立浓度与检测信号之间的关系，从而创建标准曲线。　　制备蜂蜜样品： 取一定量的蜂蜜样品，然后将其稀释。稀释的目的是确保样品中还原糖的浓度在标准曲线的线性范围内，以获得准确的测量结果。　　反应： 使用还原糖测定仪中的试剂，通常是一种能够与还原糖发生化学反应的试剂，如费林试剂(Fehling's reagent)或尼尔森试剂(Nelson's reagent)，将标准溶液和稀释后的蜂蜜样品进行处理。这种反应会将还原糖氧化，产生可以被测量的信号，如颜色变化。　　测量： 测量产生的信号，通常是颜色的变化。测量可以使用分光光度计或其他适当的仪器进行。测量结果将与标准曲线相对应，从而确定样品中还原糖的浓度。　　计算： 通过标准曲线，将测量的信号转换为还原糖的浓度。这将提供你蜂蜜样品中还原糖的含量。　　需要注意的是，还原糖测定仪的具体步骤和试剂可能因仪器型号和实验室方法而异。因此，云唐建议在执行实际测量之前，最好查阅仪器的操作手册以及相关的标准方法，以确保准确性和重复性。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308301626554737_4549_6098850_3.png!w690x690.jpg[/img][/size]

[align=center]保健品中粗多糖含量的测定[/align]本文研究了苯酚-硫酸法检测不同基质的保健品中粗多糖的含量，论述了不同基质的前处理方法和经验。1 前言市场上常见的保健品多种多样，胶囊、口服液、药片等等。多糖含量作为保健品中的有效成分之一，越来越引起人们的关注。从药理学上讲，多糖具有抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力、抗氧化、抗心血管疾病等。因为具有诸多功效，许多保健品生产公司也开发越来越多的含多糖保健品，通过在保健品中添加含有多糖的中药材或者海洋生物，从而使该保健品具有较高的多糖含量，增强其功效。不仅在胶囊、口服液等常规的保健品中添加含有多糖的成分，甚至在一些咖啡、饮料、食品中也添加含有多糖的组分，使其成为功能性的产品。多糖的含量对其功效的发挥至关重要，那么怎么准确、有效地检测出保健品中多糖的含量是一个重要的环节。保健品由于种类繁多，基质复杂，找到一种简单、有效的检测方法，能够检测出各种基质的保健品中多糖的含量具有重要的意义。本实验中采用了常见的苯酚-硫酸法检测保健品中粗多糖含量，选用乙醇提取以除去单糖、低聚糖、甙类及生物碱等干扰成分，然后用去离子水提取其中所含的多糖类成分。多糖在硫酸作用下，水解成单糖，并迅速生成糖醛衍生物与苯酚综合成有色化合物，用分光光度法测定其多糖含量。2 实验部分2.1 试剂95%乙醇 葡萄糖：优级纯；葡萄糖标准液：精确称取105℃干燥恒重的葡萄糖100 mg,置100 ml容量瓶中，加蒸馏水溶液解并稀释至刻度（可加几滴甲苯或几粒苯甲酸防腐）。此标准溶液1.00 ml含葡萄糖1.00 mg，储存于冰箱冷藏；苯酚；苯酚液：称取优级纯苯酚10.0 g,加水150 g ,置棕色瓶中备用，储存于冰箱；浓硫酸。2.2 仪器分光光度计。2.3 分析步骤2.3.1 样品预处理（1） 口服液等液体样品准确移取2.00～10.00 mL液体口服液试样,置于250 mL圆底烧瓶中，加入9倍体积的95%乙醇,混匀，静置1 h，回流提取1 h,趁热过滤,残渣用95%乙醇5 ml洗涤三次。将残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水50 mL，在60℃水浴中加热提取30 min,趁热过滤，残渣用5 mL热水洗涤三次，洗液并入滤液，放冷后移至100 mL容量瓶中，稀释至刻度，备用。（2）内容物为膏状的胶囊样品或者膏状类样品准确称取0.50～1.00 g膏状内容物或膏状样品,倘若其中含有油脂类辅料，加入乙醚或者石油醚脱脂，离心，弃去乙醚或者石油醚层。再用一定体积的水溶解，转移至250 mL圆底烧瓶中，加入9倍体积的95%乙醇,混匀，静置1 h，回流提取1 h,趁热过滤,残渣用95%乙醇5 ml洗涤三次。将残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水50 mL，在60℃水浴中加热提取30 min,趁热过滤，残渣用5 mL热水洗涤三次，洗液并入滤液，放冷后移至100 mL容量瓶中，稀释至刻度，备用。（3）内容物为粉状的胶囊样品或者粉状片剂、咖啡等准确称取0.10～0.50 g均质后的粉状样品,倘若其中含有脂肪类辅料，先加入一定体积的水，溶解粉状样品，再加入乙醚或者石油醚脱脂，离心，弃去乙醚或者石油醚层。将水层转移至250 mL圆底烧瓶中，加入9倍体积的95%乙醇,混匀，静置1 h，回流提取1 h,趁热过滤,残渣用95%乙醇5 ml洗涤三次。将残渣连同滤纸置于烧瓶中，加蒸馏水50 mL，在60℃水浴中加热提取30 min,趁热过滤，残渣用5 mL热水洗涤三次，洗液并入滤液，放冷后移至100 mL容量瓶中，稀释至刻度，备用。2.3.2 标准曲线的制备吸取葡萄糖标准液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL，分别置于50 mL容量瓶中，加水定容。吸取上述溶液各2.00 mL,再加苯酚液1.00 mL,涡旋混合均匀,迅速沿管壁加入浓硫酸5.00 mL,摇晃后涡旋混合，放置5 min,置沸水浴中加热15 min,取出后冷却至室温,于490 nm处以水代替样品作参比测吸光度,绘制标准曲线。2.3.3 样品中多糖含量测定吸取2.00 mL样品液，置于10 ml容量瓶中,加水定容。吸取2.00 mL上述溶液，按标准曲线制备项下方法测定吸光度。另以2.00 mL水，同上操作做空白。查标准曲线得样品液中葡萄糖含量。2.3.4 液体样品分析结果的计算计算液体样品中酸性多糖的含量按式(1)或者（2）计算,分别以mg/mL或者mg/g表示。[img=,503,114]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181709449978_4859_3246897_3.png[/img][sub] [/sub] 式中: X—保健品中酸性多糖含量(以葡萄糖计), mg/g或者mg/mL表示；A—从浓度-吸光度曲线上查得样品溶液的葡萄糖浓度，μg；B—从浓度-吸光度曲线上查得空白溶液的葡萄糖浓度，μg；V[sub]1[/sub]—多糖溶液总体积，mL，如按本方法为100 mL；V[sub]2[/sub]—移取多糖溶液的初始体积，mL，如按本方法为2 mL V[sub]3[/sub]—待测多糖浓度溶液的总体积，mL，如按本方法为10 mL；V[sub]4[/sub]—待测多糖溶液的移取体积，mL，如按本方法为2 mL m—保健品的称取质量，g；V[sub]0[/sub]—保健品的测试体积，mL；如两次测定符合允许差时，取两次测定结果的算术平均值作为结果，报告结果取三位有效数字。2.3.5 允许差同一样品的两次测定值之差不得超过两次测定平均值的10％。2.3.6 结果与分析（1）含油脂类样品脱脂与否的影响含有油脂类的保健品，脱脂前后采用上述方法进行酸性多糖含量测定时，多糖含量有一定的差别，未脱脂的样品进行多糖含量测定时，过滤过程十分缓慢，耗时长，多糖含量数据经常不平行，而且数值偏高。[align=center][img=,300,307]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708230846_01_3246897_3.jpg[/img][/align][align=center]图1 乙醚脱脂[/align]样品经过乙醚脱脂后有明显的油脂层。[align=center][img=,300,296]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708230846_02_3246897_3.jpg[/img][/align][align=center]图2 回流后的未脱脂样品[/align][align=center][img=,300,302]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708230847_01_3246897_3.jpg[/img][/align][align=center]图3 回流后的脱脂样品[/align]通过比较图2和图3，脱脂后的样品溶液更加澄清，无论是过滤还是洗涤，反应更快速，洗涤效果也更好。相反，未脱脂的样品，整个容器壁上都黏附着脂肪、油脂层，即使离心后过滤，过滤速率也很差，滤液也很浑浊，如下图4所示。[align=center][img=,300,268]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708230847_02_3246897_3.jpg[/img][/align][align=center]图4 脱脂前后滤液的比较[/align][align=left]没有脱脂的样品，油脂层包裹着含有单糖或者寡糖的乙醇溶液，不容易被乙醇洗涤干净，这部分残留的单糖或者寡糖导致结果偏高。因此，对相应的含油脂保健品提前进行脱脂后再检测多糖，不仅能减少操作的时间，还能获得更为准确的结果。 [/align][align=left]（2）醇沉时间的影响[/align][align=left]对以含有大豆油辅料的胶囊内容物进行脱脂后沉淀粗多糖，对比了加入9倍95%乙醇后立即回流提取多糖和加入9倍95%乙醇后室温下静置1 h再回流提取多糖，结果显示，加入乙醇后立即回流提取多糖与静置1h后再回流检测出的多糖含量分别为41.69 mg/g、48.08mg/g。可以看出，室温下醇沉时间的增加可以使更多的粗多糖醇沉完全，检测含量增高。[/align][align=left]（3） 苯酚硫酸法操作方法的影响[/align][align=left]苯酚硫酸法检测粗多糖含量最为常见，操作简单，适用于常规检测。在实验过程中发现，无论苯酚和浓硫酸的加入比例是1:5还是1:10，苯酚的体积分数是5%还是6%，在进行加入时最好是一个样品加完苯酚，混匀后，立即沿管壁加入浓硫酸，混匀后，再加另一个样品的苯酚和浓硫酸，这样显色更稳定。实验中发现，倘若对所有样品全加完苯酚混匀后，再统一加浓硫酸，显色及不稳定，标准曲线甚至不成线性。苯酚易挥发，长时间与空气接触也容易被氧化，造成结果不稳定。[/align][align=center][img=,300,287]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/08/201708230848_01_3246897_3.jpg[/img][/align][align=center]图 5 苯酚-硫酸法检测多糖含量[/align][align=left]图5为苯酚硫酸法侧多糖含量的标准曲线和样品，采用了单个样品加完苯酚和浓硫酸后再加另一个样品的苯酚好浓硫酸，显色稳定有规律，经过分光光度计检测，线性良好，样品数据平行，能够有效避免苯酚-硫酸法重现性差这一缺点。[/align]3. 结论采用苯酚-硫酸法检测保健品中粗多糖含量时，针对各种基质进行相应的脱脂操作、增加回流前的醇沉时间、进行显色反应时加入苯酚后混匀立即加入浓硫酸，能够使检测的数据更可靠、稳定。

[size=16px]　　全自动还原糖测定仪是用于分析食品中还原糖含量的一种仪器。蜂蜜中的主要糖类包括葡萄糖、果糖和蔗糖。检测蜂蜜中蔗糖含量是否超标可以通过以下步骤进行：　　样品制备： 准备蜂蜜样品，确保样品足够新鲜且充分混合，以获取代表性样品。　　样品稀释： 有时候样品可能太浓，需要将其稀释到适当的浓度，以确保测量结果的准确性。　　仪器预热： 打开全自动还原糖测定仪，根据仪器的说明进行预热，确保仪器处于稳定的工作状态。　　标定： 使用已知浓度的蔗糖标准溶液进行仪器的标定，以建立测量的基准。　　样品处理： 将稀释后的蜂蜜样品加入测量池中，根据仪器的操作指南进行样品处理。一般来说，全自动还原糖测定仪会进行一系列化学反应，将还原糖转化为对应的还原物，然后通过检测还原物的浓度来计算原始样品中还原糖的含量。　　测量： 仪器会自动执行还原糖测定的步骤，包括加入试剂、催化反应、颜色变化等。测量过程可能涉及光学检测、电化学检测或其他方法，以获取准确的测量结果。　　计算结果： 仪器会根据标定曲线和测量值计算出样品中蔗糖的含量。如果蔗糖含量超过了预定的标准限制，仪器会显示超标警告。　　数据记录： 记录测量结果和样品信息，以备将来参考。　　需要注意的是，操作云唐全自动还原糖测定仪需要一定的专业知识和操作技能，以确保结果的准确性和可靠性。此外，建议根据所在地的法律法规和标准，将测量结果与相应的蔗糖含量标准进行比较，以确定是否超标。如果蔗糖含量超过了规定限制，可能需要采取相应的措施，如调整生产工艺或调查蜂蜜供应链。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308301630451103_9612_6098850_3.png!w690x690.jpg[/img][/size]

HPLC-RID法测定乳糖含量和有关物质 前言： 乳糖是我们制药领域，最常用的辅料之一，我们药用乳糖对其含量和杂质的限量有极其严格的要求。以下就是我们使用《中国药典》2015年版四部标准方法，对购入的一批药用乳糖的含量和有关物质进行分析的过程 ，与大家一起分享，希望各位老师多多指导。一、【含量测定】仪器型号电子分析天平：赛多利斯 BT125D型十万分之一电子分析天平 液相色谱仪：Agilent 1260 四元梯度液相色谱仪色谱条件：色谱柱：氨基柱（上海月旭 拓扑 250*4.6） 检测器：示差折光检测器 检测器温度:40℃ 流速:1.0ml/min 柱温： 45 ℃ 流动相: 乙腈-水（70 ：30 ） 进样量: 10μl 对照品乳糖、蔗糖对照品使用来源： 中国食品药品检定研究院 系统适用性试验： 精密称取乳糖对照品10.15mg、蔗糖对照品10.21mg，置10ml容量瓶内，用水稀释至刻度摇匀。乳糖峰与蔗糖峰的分离度应大于1.5，理论塔板数以乳糖峰计不得低于5000。对照品溶液的制备: 精密称取乳糖对照品两份分别为10.10、10.08mg置10ml容量瓶内，用水稀释至刻度摇匀，即得。供试品溶液的制备:取本品适量，精密称定，两份分别为10.05、10.03mg, 置10ml量量瓶内，用水稀释至刻度摇匀，即得。检测结果:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669315_2204446_3.png 系统适应性试验: 乳糖、蔗糖分离度均大于1.5，乳糖理论塔板数大于5000http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016093023083649_01_2204446_3.png 乳糖对照品色谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016093022320255_01_2204446_3.png 乳糖供试品色谱图通过外标法计算本批按无水物计算含量为98.9%，在药典规定的98.0%至102.0之间，符合标准规定。二、【有关物质】色谱条件同含量测定项下方法测定供试品溶液的配制：取本品，精密称定 1.0023g,置10ml量瓶中，用适量水使溶解，并稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。对照品溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。有关物质供试品色谱图如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016093022502870_01_2204446_3.png通过计算个杂质峰面积之和小于对照峰面积的0.5倍，小于0.5%。 总结：HPLC-RID测定乳糖含量和有关物质，样品处理简单，要注意的是RID平衡很关键，保证检测器外部环境的稳定很受到重要。RID为通用型检测器，容易受到气体流动和温湿度的影响。另外色谱柱的选择也很重要，一般的柱子乳糖理论踏板数上5000很容易，上海月旭拓扑氨基柱优越的性能为检测节省很多宝贵的工作时间。

【作者】 蔡俊安（河南百年康鑫药业有限公司）【摘要】 目的建立测定冬凌草糖浆的冬凌草甲素含量的高效液相色谱法。方法采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-水(50∶50)为流动相,流速为1.0 mL/min,检测波长为239 nm。结果冬凌草甲素进样量在0.093～0.746μg范围内与峰面积积分值线性关系良好,回归方程为Y=413 933.35-63 428.66 X,r=0.999 7(n=5);平均加样回收率为99.0%,RSD为1.06%(n=5)。结论该法简便、准确、专属性和重复性好,为冬凌草糖浆中冬凌草甲素的定量分析提供了科学有效的方法。谱图：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208211753_385117_1609970_3.jpg