质谱共沉淀实验

[font=宋体]染色质免疫共沉淀[/font][font=宋体][font=宋体]染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]Chromatin Immunoprecipitation Assay, ChIP[/font][font=宋体]）：[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]是一项比较流行的研究转录因（[/font][font=Calibri]transcriptionfactor,TF[/font][font=宋体]）与启动子（[/font][font=Calibri]promoter[/font][font=宋体]）相互结合的实验技术。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]复合物，并通过超声或酶处理将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过抗原抗体的特异性识别反应沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]相互作用的信息。它能真实、完整地反映结合在[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]序列上的调控蛋白，是目前确定与特定蛋白结合的基因组区域或确定与特定基因组区域结合的蛋白质的一种很好的方法。 [/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）实验的优点[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]与传统的研究转录因子和[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]相互作用的方法相比，染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）技术是一种在体内研究[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]与蛋白质相互作用的理想方法。染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）的优点在于能够在体内捕获转录因子和靶基因的相互作用，能同时快速地提供一种或者多种基因的调控机制，因此有着非常重要的应用价值。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）实验的局限性[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]染色质免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]ChIP[/font][font=宋体]）技术也有一定的局限性：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第一，该技术需要抗目的蛋白或者特殊修饰标签的高度特异性抗体。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第二，假阴性信号可能源于无效的抗体结合或者在交联过程中抗原受到干扰。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第三，甲醛固定可能是暂时的，甚至是非特异的，可能导致相邻的蛋白形成假阳性信号。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]第四，难以同时得到多个蛋白质对同一序列结合的信息等。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫共沉淀[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀[/font][font=Calibri](Co-IP)[/font][font=宋体]是免疫沉淀的延伸[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]主要用于蛋白[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]蛋白相互作用检测。如果样品溶液中存在与靶蛋白相互作用的目的蛋白[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]也会被一同捕获及纯化得到[/font][font=Calibri],[/font][font=宋体]通过[/font][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Western[/font][font=宋体]和质谱等方法鉴定与靶蛋白结合的蛋白。其原理是如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相互作用的话，那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时，另一个蛋白也会被同时沉淀下来。其基本流程如下[/font][font=Calibri]:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]Co-IP[/font][font=宋体]） [/font][font=Calibri]/ [/font][font=宋体]免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）技术服务，推荐理由：[/font][/font][font=宋体][font=宋体]①一站服务[/font][font=Calibri], [/font][font=宋体]方便快捷[/font][/font][font=宋体][font=宋体]您只需提供细胞或组织裂解液，义翘神州助您完成免疫沉淀[/font] [font=Calibri](IP) [/font][font=宋体]和免疫共沉淀 [/font][font=Calibri](Co-IP) [/font][font=宋体]实验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②经验丰富[/font][font=宋体][font=宋体]长期从事[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]相关检测的技术团队，具有丰富的实践经验。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③价格实惠[/font][font=宋体][font=宋体]使用义翘神州优质的[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]抗体和磁珠[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]胶珠，享受优惠价格。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/ip-co-ip-service[/font][/font]

[b][font=宋体]一、引言[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]在生物学和医学研究中，免疫技术已经成为一种重要的研究工具。其中，免疫沉淀（[/font][font=Calibri]Immunoprecipitation[/font][font=宋体]）和免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]Co-Immunoprecipitation[/font][font=宋体]）是两种常用的技术，它们在探索蛋白质相互作用、定位蛋白质复合物等方面发挥着至关重要的作用。本文将对这两种技术的定义、应用、优缺点以及常见问题进行解析。[/font][/font][b][font=宋体] [/font][font=宋体]二、[url=https://cn.sinobiological.com/services/ip-co-ip-service]免疫沉淀与免疫共沉淀[/url]的定义[/font][font=宋体][font=宋体]：[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫沉淀：免疫沉淀（[/font][font=Calibri]immunoprecipitation[/font][font=宋体]）是指利用抗体可与抗原特异性结合的特性，将抗原（常为靶蛋白）从混合体系沉淀下来，初步分离靶蛋白的一种方法。它通常用于蛋白质的纯化和富集，以便进行后续的分析，如蛋白质谱分析或[/font][font=Calibri]Western blot[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]免疫共沉淀：免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]co-immunoprecipitation[/font][font=宋体]）是一种用于检测两种或多种蛋白质之间相互作用的技术。当一种蛋白质与特异性抗体结合后，可以通过共沉淀的方式将与之相互作用的蛋白质一同沉淀下来。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]三、应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）免疫沉淀（[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]）一般可用于以下的研究分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]磷酸化位点分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]激酶活性分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]乙酰化位点发现与鉴定[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）免疫共沉淀（[/font][font=Calibri]Co-IP[/font][font=宋体]）一般可用于以下的研究分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]利用质谱鉴定相互作用蛋白[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]蛋白相互作用的验证[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]缺失分析联合[/font][font=Calibri]co-IP[/font][font=宋体]进行蛋白互作结构域分析[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]测定两种目标蛋白质是否在体内结合[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5.[/font][font=宋体]确定一种特定蛋白质的新的作用搭档[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]6.[/font][font=宋体]分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]四、优缺点[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫沉淀：优点在于特异性高，能够有效地将目标蛋白与其他蛋白分离；缺点是需要大量的抗体和较长的实验时间。[/font][font=宋体]免疫共沉淀：优点在于能够直接检测蛋白质间的相互作用，且操作相对简单；缺点是可能会受到非特异性结合的干扰，导致结果出现偏差。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]五、常见问题解析[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）免疫共沉淀中的[/font][font=Calibri]input[/font][font=宋体]是指什么？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]input[/font][font=宋体]是阳性对照。免疫共沉淀实验中，会直接取细胞裂解液进行[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]，用于验证细胞裂解液中确实存在目的蛋白，即阳性对照。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）如何避免重链，轻链的影响（点击此链接详述）[/font][font=Calibri]?[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]设计合适的[/font][font=Calibri]IP[/font][font=宋体]实验；[/font][/font][font=宋体]选择合适种属的抗体；[/font][font=宋体][font=宋体]选择特异性识别重链[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]轻链的二抗。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]（[/font][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）[/font][font=Calibri]Input[/font][font=宋体]对照组出现假阴性结果？[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]裂解液过于剧烈，采用温和的裂解条件；[/font][font=宋体]选择目的蛋白或相互作用蛋白含量低的样品：过表达提高目的蛋白的含量，进行免疫共沉淀。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]六、结论[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]总的来说，免疫沉淀和免疫共沉淀是两种强大且常用的免疫技术，各自具有独特的优势和局限性。了解这两种技术有助于我们更准确地理解和应用它们。在未来，随着生物技术的发展，这两种技术也将会更加完善，为科学研究提供更多的可能性。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

共沉淀分离富集重金属中，加温加酸解吸实验的解吸率如何计算

共沉淀中分离富集重金属，探讨机理，加温加酸解吸实验应该如何做

大佬们，共沉淀-火焰[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]法测定重金属时，可以ph大于11吗，用的是什么缓冲溶液

请教各位高手：我总是做不好共沉淀，回收率做不上来，是怎么回事啊?条件是不是很苛刻啊？（比如说各种离子的浓度，温度，PH值），还有就是载体和被吸附离子的性质，离子量很大和微量的时候，被吸附的性质一样吗？比如说痕量硒可能会被La的沉淀吸附，那当硒是基体的时候，用La沉淀吸附硒中的其它杂质可行吗？怎么才能知道哪些离子会被吸附，哪些离子不能吸附啊？查书？通过仪器检测？

化学实验室汞主要来源由于汞盐。在常温常压下，汞倾向和氧结合成氧化汞。如果汞排入河流微生物能将浮在水面的汞转换成甲基汞（methyl mercury），而该物质易被大部分水生生物吸收。甲基汞以其造神经受损出名，而鱼类是主要从水中吸收甲基汞的生物。甲基汞储积在鱼中，进而入侵到整个食物链内。进食这些鱼的动物，历经长期吸收汞所导致的中毒现象，包括了生殖能力退化，消化系统损坏，胃崩解，DNA异变，和肾败坏。[b]处理原理：[/b]用Na2S或NaHS把Hg2+转变为难溶于水的HgS，然后使其与Fe（OH）3共沉淀而分离除去。如果使其pH在10以上进行反应，HgS即变成胶体状态。此时，即使用滤纸过滤，也难于把它彻底清除。如果添加的Na2S过量时，则生成2-而沉淀容易发生溶解。如果添加的Na2S过量时，则生成2-而沉淀容易发生溶解。[b]操作步骤：[/b]1、于废液中加入对于FeSO4（10ppm）及Hg2+之浓度的1∶1当量的Na2S9H2O，充分搅拌，并使废液之pH保持在6～8范围内。2、上述溶液经放置后，过滤沉淀并妥善保管好滤渣（用此法处理，可使Hg浓度降到0.05ppm以下）。3、再用活性炭吸附法或离子交换树脂等方法，进一步处理滤液。4、在处理后的废液中，确证检不出Hg后，才可排放。

大神们，对于样品体积的影响应该如何测定？假设最初样品体积为100，当样品体积为200时，载体离子和共沉淀剂用量成倍增加，待测离子用量如何加？

免疫共沉淀和western blot区别

有没有那位朋友用共沉淀-火焰[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收[/color][/url]法测定生活饮用水中的铅镉，我想知道此种方法的可靠性有多大啊？

用洗涤的方法能有效地提高沉淀纯度的是 ( )。(A) 混晶共沉淀 (B) 吸附共沉淀 (C) 包藏共沉淀 (D) 后沉淀

晶形沉淀进行陈化的目的是（ ）。（A）使无定形沉淀转为晶形沉淀 （B）除去混晶共沉淀带入的杂质（C）使沉淀颗粒变小 （D）除去吸留的杂质

求购GB/T 18606-2001[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱法测定沉淀物和原油中生物标志物求购GB/T 18606-2001[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱法测定沉淀物和原油中生物标志物

！铁氧体法工艺流程！本人处理用高铁曝气的铁氧体法共沉淀废水中重金属离子，欲设计装置，求工艺流程？！！！！！

教学目的：1、掌握沉淀滴定法对反应的要求。2、掌握银量法确定理论终点的方法原理。3、明确分级沉淀及沉淀转化的概念。4、理解测定氯化物的条件。教学重点与难点：莫尔法（铬酸钾作指示剂）作为教学重点。教学内容： 一、方法简介沉淀滴定法（precipitation titration）：也称容量分析法（volumetric precipitation method），以沉淀反应为基础的滴定分析方法。用作沉淀滴定的沉淀反应必须满足以下条件：（1）反应速度快，生成沉淀的溶解度小；（2）反应按一定的化学式定量进行；（3）有准确确定理论终点的方法。应用范围：含量在1%以上的卤素化合物和硫氰化物的测定。解释：沉淀反应很多，但能用于沉淀滴定的沉淀反应并不多，因为很多沉淀的组成不恒定，或溶解度较大，或形成过饱和溶液，或达到平衡速度慢，或共沉淀现象严重等。目前比较有实际意义的是生成微溶性银盐的沉淀反应。Ag+ + Cl- = AgCl↓Ag+ + SCN- =AgSCN↓以这类反应为基础的沉淀滴定法称为银量法。主要测定Cl-、Br-、I-、Ag+ 及SCN-等。如有一些沉淀HgS、PbSO4、BaSO4等也可用于沉淀滴定法，但重要性不及银量法。

[size=3][font=宋体]免疫共沉淀（[/font][font=Times New Roman]Co-Immunoprecipitation[/font][font=宋体]）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是：当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质[/font][font=Times New Roman]X[/font][font=宋体]的抗体免疫沉淀[/font][font=Times New Roman]X[/font][font=宋体]，那么与[/font][font=Times New Roman]X[/font][font=宋体]在体内结合的蛋白质[/font][font=Times New Roman]Y[/font][font=宋体]也能沉淀下来。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]其优点为：（[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=宋体]）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。缺点为：（[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=宋体]）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]实验流程为：[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]）转染后[/font][font=Times New Roman]24-48 h [/font][font=宋体]可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解[/font][font=Times New Roman]30min, [/font][font=宋体]细胞裂解液于[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]°[/font][font=Times New Roman]C[/font][font=宋体]，[/font][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]最大转速离心[/font][font=Times New Roman]30 min[/font][font=宋体]后取上清；[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]）取少量裂解液以备[/font][font=Times New Roman]Western blot[/font][font=宋体]分析，剩余裂解液加[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]g[/font][font=宋体]相应的抗体加入到细胞裂解液，[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]°[/font][font=Times New Roman]C[/font][font=宋体]缓慢摇晃孵育过夜；[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=宋体]）取[/font][font=Times New Roman]10[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l protein A [/font][font=宋体]琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗[/font][font=Times New Roman]3 [/font][font=宋体]次，每次[/font][font=Times New Roman]3,000 rpm[/font][font=宋体]离心[/font][font=Times New Roman]3 min[/font][font=宋体]；[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]）将预处理过的[/font][font=Times New Roman]10[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l protein A [/font][font=宋体]琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]°[/font][font=Times New Roman]C[/font][font=宋体]缓慢摇晃孵育[/font][font=Times New Roman]2-4h[/font][font=宋体]，使抗体与[/font][font=Times New Roman]protein A[/font][font=宋体]琼脂糖珠偶连；[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]5[/font][font=宋体]）免疫沉淀反应后，在[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]°[/font][font=Times New Roman]C [/font][font=宋体]以[/font][font=Times New Roman]3,000 rpm [/font][font=宋体]速度离心[/font][font=Times New Roman]3 min[/font][font=宋体]，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用[/font][font=Times New Roman]1ml[/font][font=宋体]裂解缓冲液洗[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=宋体]－[/font][font=Times New Roman]4[/font][font=宋体]次；最后加入[/font][font=Times New Roman]15[/font][font=宋体]μ[/font][font=Times New Roman]l[/font][font=宋体]的[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]×[/font][font=Times New Roman]SDS [/font][font=宋体]上样缓冲液，沸水煮[/font][font=Times New Roman]5[/font][font=宋体]分钟；[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]6[/font][font=宋体]）[/font][font=Times New Roman]SDS-PAGE, Western blotting[/font][font=宋体]或质谱仪分析。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]注意的问题：[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]1[/font][font=宋体]）细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（[/font][font=Times New Roman]NP40[/font][font=宋体]或[/font][font=Times New Roman]Triton X-100)[/font][font=宋体]。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。不能用高浓度的变性剂（[/font][font=Times New Roman]0.2[/font][font=宋体]％[/font][font=Times New Roman]SDS)[/font][font=宋体]，细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的[/font][font=Times New Roman] cocktailer[/font][font=宋体]。[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]2[/font][font=宋体]）使用明确的抗体，可以将几种抗体共同使用[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]（[/font][font=Times New Roman]3[/font][font=宋体]）使用对照抗体：[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]单克隆抗体：正常小鼠的[/font][font=Times New Roman]IgG[/font][font=宋体]或另一类单抗[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]兔多克隆抗体：正常兔[/font][font=Times New Roman]IgG[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] [/font][font=宋体]在免疫共沉淀实验中要保证实验结果的真实性，应注意以下几点：[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] (1) [/font][font=宋体]确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的，而并非外源非特异蛋白，单克隆抗体的使用有助于避免污染的发生；[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] (2) [/font][font=宋体]要确保抗体的特异性，即在不表达抗原的细胞溶解物中添加抗体后不会引起共沉淀；[/font][/size][size=3][font=Times New Roman] (3) [/font][font=宋体]确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中，而不是由于细胞的溶解才发生的，这需要进行蛋白质的定位来确定。[/font][/size]

一、IP前的准备工作：coIP：分为内源性蛋白的相互作用和非内源性蛋白相互作用（后者包括外源蛋白之间以及外源拖内源蛋白）。非内源性蛋白的相互作用，主要是通过过表达来实现，通常为简化实验、提高IP效率会让外源蛋白带上标签（tagged；这也是没有相应的可用于IP的内源蛋白抗体之前唯一可行的方案），因此就tag的使用而言存在很多小技巧。1. His-tagged主要用于纯化蛋白。有些人喜欢用His-tagged蛋白然后进行coIP，实际上它存在潜在的隐患。当初鄙人用Sigma a-His（鼠单抗；免费广告）WB外源蛋白发现CE里面一塌糊涂（带型漂亮就是非常多的带），那时候还抱怨这个抗体特异性不好。后来，当了解到很多蛋白会有富含histidine的domain以后，恍然大悟，恰恰是因为效价非常好，所以很多内源性的蛋白都被该抗体识别。同理，如果用Ni-NTA beads去PD His-tagged的蛋白，完全有可能PD那些内源性的富含histidine domain的蛋白，造成coIP的假象，而这样的蛋白还非常多。2. tandem-tagged不能用于分析钙调信号通路。tandem tag实际上从成本角度和His tag差不多，洗脱试剂价格低廉，因此可用于大规模PD之后的质谱分析，能获取最全面的相互作用的信息。然后由于其中包含钙调蛋白相互作用domain，天然会结合钙信号相关蛋白，从而干扰或掩盖靶蛋白与钙信号蛋白之间的相互作用，有一定的应用局限。当然，笔者不太清楚近年来该方法有无改进，但正是由于引入钙调domain才实现了降低成本的目的，因此猜测可能性不大。3. Myc、HA、Flag-tagged：Myc仍然会有天然的干扰，应用略有局限；相较后两者是人工合成专门用于tagged蛋白（有相应的专利，因此目前无论抗体或交联好的beads价格都非常昂贵），因此干扰最小、最常用。如需进一步细致区分，a-Flag效价比a-HA略高，因此更适合IP。当然，公司仍在努力寻找效价更好的a-HA以及IP HA的抗体（Flag系Sigma专利，因此目前只能忍受其过高的定价）。那么，之前颇流行的a-HA鼠源单抗（其clone名称为12CA5）为何被潜在地摒弃了？原因大概是：该克隆株可以轻易获取，流传甚广，因此可以取腹水自制；效价不高，特异性很差。尤其是特异性的问题，用该抗体去交联的beads做coIP，隐患很大（可以轻易PD非常浓的非特异性蛋白）——因此，购买商品化a-HA beads时，请仔细阅读产品说明（避开12CA5系列）。4. tag的位置。将tag构建到蛋白的N端还是C端，也是一个潜在的能够影响coIP结果的因素。比如，分泌蛋白的N端通常有分泌信号肽，如果将tag构建到N端，则外泌时会被信号肽酶连同信号肽一起切除；所以这时必须构建在C端。再如，多数蛋白的C端是疏水区，有的时候将tag构建在C端会影响蛋白原来的空间结构，如恰好C端同时是相互作用的结构域，某些时候还可能被遮蔽，从而干扰相互作用。因此，通常构建质粒的时候是N端、C端tagged同时分别构建，以备万一。内源性蛋白的相互作用，主要依靠抗体IP，WB或者质谱分析。另外一条途径，是用外源性蛋白的coIP指代内源性蛋白，上文提到的tandem-tag技术的目的就是为了实现这种可能。它的核心是将外源性蛋白的过表达降低极低水平用于模拟体内环境。实际上，在构建外源过表达体系的时候，通常可以得到一系列表达水平差异的稳定单克隆，可以通过进一步筛选获得外源与内源相加与原内源蛋白水平相当的细胞株（在细胞调控承受的范围以内，内源性蛋白水平会因为相应的外源蛋白表达而适当下调），这样的细胞株可以用于模拟内源性蛋白的相互作用；因为理论上未改变细胞的生理特异，相应的生命过程仍受内源因素调控。当然构建相应的细胞株需要转染并筛选，又因为要控制表达量水平，筛选工作耗时更长；并且细胞状态会因为传代过多而有些改变。因此，绝对的内源性蛋白的相互作用仍是一个不可或缺的数据，尤其对一个新发现的蛋白复合体。IP内源性蛋白首先要确认相应的抗体是否能够用于IP。能够用于IP的抗体，通常其识别区域恰是天然状态下靶蛋白暴露于外的区段，常为疏水性结构域；因此在自己制备抗体的时候要更多考虑这个因素，至于商品化的要仔细阅读说明。在确定抗体可以用于IP A蛋白以后，抗体投入量如何掌握呢？通常情况下0.1ug-3ug较常用（纯化的抗体），其变化取决于抗体的效价，但通常未知情况下0.5ug或1ug是最常用。一般如果样品易制备则尽量用样品过饱和抗体，让投入抗体能物尽其用；相反，通常1ug抗体已经是过量的。另外一个需要考虑的因素是B蛋白的大小，尤其B蛋白已知。当B蛋白分子量接近55KDa或24KDa附近的时候，问题会比较复杂。因为在最后一步洗脱的过程，很容易将轻链和重链带入到IP终产物，它将严重干扰实验结果。二、解决方案1. IP外源tagged-A蛋白，洗脱尽量用相应的peptide，一方面提高特异性，另一方面由于洗脱条件温和，重链和轻链脱落也会较少；在IP前，尤其对于新Flag、HA beads可以用washing buffer或者低pH Glycine-HCl漂洗一下beads，把结合不牢的重链和轻链先洗掉。此外，Flag、HA-beads通常是鼠抗，那么IB B蛋白的抗体应该选用兔抗。针对beads的新旧，反过来说，采用再生的旧beads有利于避免轻重链的干扰，且IP前的封闭可以省去——不要指望高盐、酸洗能彻底去除已经非特异结合到beads上的杂质，通常这些蛋白都比较黏。高盐、大量纯化蛋白时，采用再生的beads可以获取即便银染，背景仍非常干净的高纯度蛋白样品。2. IP内源性蛋白，尤其最后涉及低pH Glycine-HCl洗脱或者SDS LB煮beads（后者重、轻链更严重），如B蛋白为60KDa即能与55KDa重链分开时，且抗体效价许可的前提下，降低抗体投入量会显著减弱重、轻链信号，从而不会使得B蛋白信号不致被重链信号吞没；若有条件再配合交错抗体种属来源，即IP A蛋白的抗体为兔抗，IB B蛋白用兔抗以外任何一种诸如鼠抗、羊抗；反之亦然。即使交错抗体的种属，实际上当重轻链脱落过多时（尤其是重链），在IB的时候它符合《WB实战指南》提到的杂蛋白过浓会非特异结合任意抗体，这在coIP的实验结果分析中要格外小心。有人会说可以用未免疫的IgG做阴性对照，但是偶尔会发生一些未知意外，恰好IgG的重链没有显影（毕竟这不是抗原抗体特异性结合）。BTW：偶尔这样的结果还能重复出来，但是反过来IP B蛋白，IB A蛋白可能就100%失败。所以，当蛋白分子量接近重、轻链的时候，下结论要格外小心，除严格阴性、阳性对照外，reverse IP的结果也很重要。最好加一个不相干的蛋白的同种属的抗体做阴性对照beads封闭和样品的preclear：如果采用新beads，beads的封闭就显得非常必要。封闭用1-5mg/ml BSA（ChIP还要加鱼精DNA）扔buffer里一直静置就好了；若临时添加可考虑翻转半小时；样品preclear用protein A beads翻转半小时。实际经验，杂蛋白若是很黏怎么处理都只是相对好一些。所以，IP、漂洗的盐浓度影响更大。coIP：抗体剂量上文提过了；其他flag、protein A等等beads一般用10ul足够了，偶尔根据需要微调，诸如过表达纯化蛋白。总之，一般CE的成本较低，若用CE饱和抗体、beads，只要你抗体、beads和操作始终一致，最后IP的A蛋白能保证一致，结果有效。干粉状的beads用IP buffer充分溶胀后离心去beads的碎片；其他液态的不需要此过程。现在市售的商品化beads如sigma flag可不需要IP buffer漂洗直接IP，未发现对coIP结果的明显干扰。通常，再生的beads由于放置-20度延长保存期需要加入大量甘油，不漂洗直接使用不容易把beads分匀，从而造成不同tube间初始差异，这时候会对IP结果影响很大。用抗体做内源性IP时，个人喜欢抗体2hr+beads 1hr，抗体孵育可过夜；beads不超过3hrs（含flag等等标签蛋白IP情况）。这里面提到一个细节，就是先加beads还是先加抗体。在某些情况下，CE离心去除细胞碎片后的上清是一个刚好的溶解平衡体系，添加其他物质如beads这类可作为沉淀凝结核的物质会破坏原本的溶解平衡；它可能类似水蒸气凝结成雨水或雪花需要灰尘作为凝结核，其结果就是让一些原本溶解完全的蛋白发生沉淀。那么，beads翻转越久蛋白会沉淀越多，而这种沉淀无法靠漂洗去除干净，最终进入sample从而可以检测到任意蛋白的结合。因此，限制beads翻转孵育时间非常关键；通常beads孵育1-2hr已经充分结合了。做IP的beads其物理性质跟吸附DNA的或诸如Ni-NTA之类的差异很大，不需要高速离心，通常台式小离心机4-5K、30sec就足够了；有时候忘记了，静置较久beads已自然沉降甚至不需要离心。在这种情况下，不必要的高速离心只会给beads施加巨大的离心力，次数多了beads通通碎裂，严重影响再生beads的质量——避免一些不必要的操作；当然不打算重复使用就无所谓了。三、Beads再生商品化的

大家好： 最近实验室在做海水中总铬分析，第一次做，出现了一些问题，想像大家求助一下，看能不能解决。 该方法是原理是海水中六价铬在酸性条件下，被亚硫酸钠还原成三价铬，以氢氧化铁共沉淀富集，该沉淀去溶于酸中，在酸性条件下，被高锰酸钾氧化为六价铬，分离铁后，六价铬和二苯碳酰二肼显色反应，来测定吸光度值。 实验过程中完全按照国标操作，到第五步骤将沉淀加热溶解浓缩时，出现大量絮状物沉淀(前一步骤加硫酸溶解)，且此时溶液ph 值为1左右，导致下一步实验无法进行判断（下一步为加入氢氧化钠调至刚出现沉淀，滴加盐酸是沉淀溶解调制PH为1）。按照国标上的步骤，应该是碱性状态下出现沉淀，加酸溶解沉淀，但是我们的沉淀却在酸性条件下析出。不知道我们问题出在哪了，想问问大家有没有做这方面试验的可以帮忙解惑。

难溶物的沉淀目的原理1.学会运用溶度积理论，掌握沉淀反应的规律，并用以预测、验证、分析某些实验现象以加深对溶度积概念的理解，增加沉淀反应的感性认识。2.利用沉淀反应来分离或鉴定某种物质。过程步骤一、沉淀现象1.在试管中加10滴0.1moldm-3Pb(NO3)2，加入等量0.1moldm-3K2ClO4溶液，记录现象。2.取10滴0.1moldm-3Pb(NO3)2，加入等量0.1moldm-3Na2S溶液，记录现象。3.根据溶度积判断下列溶液是否有沉淀生成，并用实验证明之。在两支干燥试管中各加10滴0.1moldm-3 Pb(NO3)2溶液，然后分别加10滴0.2moldm-3 NaCl和0.1moldm-3 NaCl溶液。二、分步沉淀向试管中加入2滴0.1moldm-3 Na2S溶液和5滴0.1moldm-3 K2CrO4溶液，用水稀释至5吨。然后逐滴加入0.1moldm-3 Pb(NO3)2溶液，观察首先生成沉淀的颜色。待沉淀沉降后，继续向清液中滴加Pb(NO3)2溶液。会出现什么颜色的沉淀?根据有关溶度积数据加以说明。三、沉淀的转化1.已知Ksp,AgCl = 1.8×10-10，Ksp,AgI = 3.5×10-17，设计利用浓度均为0.1moldm-3的AgNO3、NaCl、KI溶液，实现AgCl沉淀转化成AgI沉淀的实验。2.设计制备Ag2CrO4沉淀的实验，观察其颜色，试验Ag2CrO4沉淀能否与0.2moldm-3的NaCl发生反应?注意沉淀及溶液的变化，解释观察到的现象。四、沉淀的溶解1.在试管中加入2moldm-3MgSO4溶液，加入2moldm-3NH3H2O水数滴，此时生成的沉淀是什么?再向此溶液中加入1moldm-3NH4Cl溶液，观察沉淀是否溶解?用离子平衡移动的观点解释上述现象。2.取5滴0.01moldm-3Pb(Ac)2溶液，加入5滴0.02moldm-3KI溶液，待沉淀生成，再加入少量固体NaNO3，振荡试管观察PbI2沉淀又溶解，为什么?五、用沉淀法分离混合离子1.Pb2+、Ca2+、K+的混合液的沉淀分离用0.1MPb(NO3)2、0.1MCa(NO3)2、0.1MKNO3溶液各5滴滴入一支试管中然后加入饱和H2S溶液数滴，振荡试管，产生什么沉淀?离心沉淀后，在清液中再加一滴饱和H2S溶液，若无沉淀出现，则表示Pb2+已沉淀完全，离心分离。用滴管将清液移入另一试管中，在清液中加入1moldm-3Na2CO3溶液，直到沉淀完全，离心分离。写出分离过程示意图。2.混合AgNO3、Fe(NO3)3、Al(NO3)3溶液用沉淀法使Ag+、Al3+、Fe3+分离。试设计其分离程序。分析思考 1.根据溶度积判断10滴0.1moldm-3 Pb(NO3)2溶液加10滴0.2moldm-3 NaCl溶液是否有沉淀产生?2.估计Ag2CrO4沉淀与2moldm-3NaCl反应的综合平衡常数。估计该反应的可能性及主要现象。3.设计沉淀法分离Ag+、Fe3+、Ap3+离子的分离程序。

1.首先盐浓度至少0.15M或以上。盐浓度主要指Na盐浓度。有人会问为什么不是钾盐？因为钾盐会更容易跟某些试剂（或离子）形成沉淀，诸如SDS，因此在某些情况下，钾盐会对后续的某些实验带来未知的麻烦，所以一般盐浓度指Na盐。盐浓度过低对某些与染色体结合较牢的蛋白的抽提（非破膜的温和裂解）效率也较差，可能会丢失部分信息；而盐浓度过高又会造成某些相互作用较弱的复合体解体，因此，通常选择0.15——0.3M做细胞裂解。纯化蛋白通常选取0.6M以上进行IP。 小技巧：最初几遍的漂洗buff要和IP时的盐浓度相同。经验上，纯化蛋白时，若用低盐裂解细胞、高盐漂洗去杂质，蛋白丢失较多；所以，一般如前所述。当然，也可以高盐裂解低盐漂洗，但是对除杂质不利。 2.通常IP体系中NP40含量0.2——0.5%。NP40在0.5——1.0%时，染色体很容易析出（很黏，成胶状会裹住beads，同时粘下很多蛋白），用这样的裂解液破碎细胞则可能需要超声。通常由于习惯上避免增加不必要的操作，所以在非必要的情况下，选择前述的浓度区间。 3.可适当添加EDTA，螯合金属离子保护DNA和蛋白。特殊情况下还可选择添加EGTA，螯合Ca2+研究钙相关蛋白。此外，裂解液中甘油浓度一般介于15%-20%之间。 4.很多市售或自制的裂解液过于温和，需要考虑采用机械或者超声等手段提高裂解效率（超声要慎用，可能破坏弱的相互作用）。但是，有些时候裂解液的冻融又可能影响某些弱的相互作用，所以不太建议冻融裂解液——即最好裂解液制备好后立即进行coIP。当然，如果证实冻融无影响可考虑将蛋白样品保存-80度待用，这对实验日程的安排会更平易。 5.裂解产物的蛋白浓度越高越好。前几日回复一贴子，不知道出于什么动因该LZ主动稀释裂解样品的蛋白浓度再IP，所幸不是做coIP。上面提到过表达会制造相互作用的假象，反过来说蛋白浓度过稀，某些相互作用就测不到（不一定是弱的相互作用）。因此，细胞的裂解效率会直接影响实验的结果。通常细胞裂解产物的蛋白浓度可达7-8mg/ml左右，但是更常规的现象是达不到这种浓度；当然不是说低于7-8mg/ml就不能进行coIP，只是需要考虑这一因素。因此，在多数情况下要尽可能避免稀释你的细胞裂解液。

第六章 重量分析法和沉淀滴定法 一、选择题1．下述（ ）说法是正确的。（A）称量形式和沉淀形式应该相同（B）称量形式和沉淀形式必须不同（C）称量形式和沉淀形式可以不同（D）称量形式和沉淀形式中都不能含有水分子2．盐效应使沉淀的溶解度（ ），同离子效应使沉淀的溶解度（ ）。一般来说，后一种效应较前一种效应（ ）（A）增大，减小，小得多 （B）增大，减小，大得多（C）减小，减小，差不多 （D）增大，减小，差不多3．氯化银在1mol/L的HCl中比在水中较易溶解是因为（ ）（A）酸效应 （B）盐效应 （C）同离子效应 （D）络合效应4．CaF2沉淀在pH=2的溶液中的溶解度较在pH=5的溶液中的溶解度( )（A）大 （B）相等 （C）小 （D）难以判断5．如果被吸附的杂质和沉淀具有相同的晶格，就可能形成（ ）（A）表面吸附 （B）机械吸留 （C）包藏 （D）混晶6．用洗涤的方法能有效地提高沉淀纯度的是（ ）（A）混晶共沉淀 （B）吸附共沉淀（C）包藏共沉淀 （D）后沉淀7．若BaCl2中含有NaCl、KCl、CaCl2等杂质，用H2SO4沉淀Ba2+时，生成的BaSO4最容易吸附（ ）离子。（A）Na+ （B）K+ （C）Ca2+ （D）H+8．晶形沉淀的沉淀条件是（ ）（A）稀、热、快、搅、陈 (B) 浓、热、快、搅、陈（C）稀、冷、慢、搅、陈 (D) 稀、热、慢、搅、陈9．待测组分为MgO，沉淀形式为MgNH4PO46H2O，称量形式为Mg2P2O7，化学因素等于（ ）（A）0.362 （B）0.724 （C）1.105 （D）2.21010．关于以K2CrO4为指示剂的莫尔法，下列说法正确的是（ ）（A）指示剂K2CrO4的量越少越好 （B）滴定应在弱酸性介质中进行（C）本法可测定Cl—和Br—，但不能测定I—或SCN—（D）莫尔法的选择性较强11．Mohr法测定Cl-含量时，要求介质在pH=6.5~10.0范围内，若酸度过高，则会 ( )（A）AgCl沉淀不完全 （B）形成Ag2O沉淀（C）AgCl吸附Cl- （D）Ag2CrO4沉淀不生成12．以铁铵矾为指示剂，用返滴法以NH4CNS标准溶液滴定Cl-时，下列错误的是（ ）（A）滴定前加入过量定量的AgNO3标准溶液（B）滴定前将AgCl沉淀滤去（C）滴定前加入硝基苯，并振摇（D）应在中性溶液中测定，以防Ag2O析出13．有0.5000g纯的KIOx，将其还原成碘化物后用23.36mL0.1000mol/LAgNO3溶液恰能滴到计量点，则x应是（ ）（A）2 （B）3 5 （D）714．在下列杂质离子存在下，以Ba2+沉淀SO42- 时，沉淀首先吸附（ ）（A）Fe3+ （B）Cl- （C）Ba2+ （D）NO3-15． AgNO3与NaCl反应，在等量点时Ag+的浓度为（ ）。已知KSP（AgCl）=1.8×10-10（A）2.0×10-5 （B）1.34×10-5 （C）2.0×10-6 （D）1.34×10-6二、填空题1．滴定与重量法相比，（ ）的准确度高。2．恒重是指连续两次干燥，其质量差应在（ ）以下。3．在重量分析法中，为了使测量的相对误差小于0.1%，则称样量必须大于（ ）。4．影响沉淀溶解度的主要因素有（ ）、（ ）、（ ）、（ ）。5．根据沉淀的物理性质，，可将沉淀分为（ ）沉淀和（ ）沉淀，生成的沉淀属于何种类型，除取决于（ ）外，还与（ ）有关。6．在沉淀的形成过程中，存在两种速度：（ ）和（ ）。当（ ）大时，将形成晶形沉淀。7．产生共沉淀现象的原因有（ ）、（ ）和（ ）。8．（ ）是沉淀发生吸附现象的根本原因。（ ）是减少吸附杂质的有效方法之一。9．陈化的作用有二：（ ）和 ( )。10．重量分析是根据（ ）的质量来计算待测组分的含量。11．银量法按照知识滴定终点的方法不同而分为三种：（ ）、（ ）和（ ）。12．莫尔法以（ ）为指示剂，在（ ）条件下以（ ）为标准溶液直接滴定Cl-或Br-等离子。13．佛尔哈德法以（ ）为指示剂，用（ ）为标准溶液进行滴定。根据测定对象不同，佛尔哈德法可分为直接滴定法和返滴定法，直接滴定法用来测定（ ），返滴定法测定（ ）。14．佛尔哈德返滴定法测定Cl-时，会发生沉淀转化现象，解决的办法一般有两种：（ ）、（ ）。

分析化学 课程教案授课题目(教学章节或主题):第6章 重量分析法和沉淀滴定法授课类型 理论课授课时间6学时教学目标或要求:掌握沉淀重量法对沉淀的要求,影响沉淀溶解度的因素,理解溶解度,溶度积和条件溶度积,了解沉淀形成一般过程.掌握减少沉淀沾污的方法,影响沉淀颗粒大小的因素,沉淀条件的选择,理解共沉淀,后沉淀,了解有机沉淀的应用.教学内容(包括基本内容,重点,难点): 第6章 重量分析法6.1 概述一,重量法的分类和特点二,沉淀重量法的分析过程和对沉淀的要求.1. 对沉淀形 要求,2. 对称量形的要求6.2 沉淀的溶解度及其影响因素一,溶解度,溶度积和条件溶度积二,影响沉淀溶解度的因素盐效应,2. 同离子效应,3. 酸效应,4. 络合效应,5. 其他影响因素6.3沉淀的类型与形成过程一,沉淀的类型二,沉淀形成一般过程三,影响沉淀颗粒大小的因素1. 沉淀物质的本性,2. 过饱和程度,3. 临界比6.4影响沉淀纯度的因素一,共沉淀1. 表面吸附,2. 吸留与包夹,3. 生成混晶或固溶体二,后沉淀(继沉淀)三,减少沉淀沾污的方法6.5沉淀条件的选择沉淀条件的选择和沉淀后的处理:1. 晶形沉淀,2. 无定形沉淀,3. 均匀沉淀法6.6称量形的获得――沉淀的过滤,洗涤,烘干或灼烧6.7有机沉淀的应用6.8重量分析结果的计算第6章 重量分析法和沉淀滴定法§6.1 概述重量分析是通过称量物质的质量进行测定的,测定时通常先用适当的方法使被测组分与其他组分分离.然后称重,由称得的质量计算该组分的含量.一,重量法的分类和特点根据被测组分与其他组分分离方法的不同,重量法分为挥发法,电解法和沉淀法三类,其中以沉淀法最为重要.1. 挥发法 利用物质的挥发性质,通过加热或其他方法便待测组分从试样中挥发逸出.例如测定试样中湿存水或结晶水时,可将试样加热烘干恒重,试样减轻的质量即水分质量,或者将逸出的水汽用已知质量的干燥剂吸收,干燥剂增加的质量即水的质量.2. 电解法 利用电解的方法使待测金属离子在电极上还原析出,然后称重,电极增加的质量即为金属质量.3. 沉淀法 利用沉淀反应使待测组分以微溶化合物的形式沉淀出来,再使之转化为称量形式称量.重量法直接通过称量得到分析结果,不用基准物质(或标准物质)进行比较,准确度较高相对误差一般为0.1%―0.2%.缺点是程序长,费时多,已逐渐为滴定法代替.但目前硅,硫,磷,镍以及几种稀有元素的精确测定仍采用重量法.二,沉淀重量法的分析过程和对沉淀的要求.试样分解制成试液后,加入适当的沉淀剂,使被测组分沉淀析出(称为沉淀形),沉淀经过滤,洗涤,在适当温度下烘干成灼烧,转化为称量形,然后称量.根据称量形的化学式计算被测组分在试样中的合量,沉淀形式与称量形式可能相同,也可能不同,以的测定为例试液 沉淀剂 沉淀形 称量形为了保证测定有足够的准确度并便于操作,重量法对沉淀形和称量形有一定要求.1. 对沉淀形的要求:① 沉淀的溶解度要小 ② 沉淀纯度要高 ③ 沉淀要便于过滤和洗涤.以上要求分别涉及沉淀平衡,沉淀的形成过程和共沉淀理论,这些是本章讨论的重点,后面将分别介绍.2. 对称量形的要求:① 称量形必须有确定的化学组成 ② 称量形必须稳定,不受空气中水分,CO2和O2等的影响 ③ 称量形的摩尔质量要大,这样可增大称量形的质量,减少称量误差,提高测定准确度.§6.2 沉淀的溶解度及其影响因素沉淀的溶解损失量重量法误差的重要来源之一,若沉淀溶解损失小于天平的的称量误差(0.1mg)就不影响测定的准确度.实际上相当多的沉淀在纯水中的溶解度都大于此值,但若控制好沉淀条件,就可以降低溶解损失,使其达到上述要求,为此必须了解沉淀溶解度及其影响因素.一,溶解度,溶度积和条件溶度积以1:1型难溶化合物MA为例,在水溶液中达到平衡时有如下平衡关系,其中MA(l)可以是不带电荷的分子MA,也可以是离子对M+A-,它的活度在一定温度下是常数,叫做固有溶解度(或分子溶解度)以表示因纯固体物质的活度等于1,故若溶液中没有影响沉淀溶解平衡的其他反应存在,则固体MA的溶解度S为So和M+(成A-)的浓度之和.对于大多数电解质来说,So都较小,而且大多数未被测定,故一般计算中往往忽略So项.但有的化合物的固有溶解度相当大,例如,若按溶度积计算,它在水中的溶解度约1.7×10-5mol/L,实际测得的溶解度约0.25 mol/L.这说明溶液中有大量HgCl2分子存在.根据沉淀MA在水溶液中的平衡关系,得到是离子的活度积,称为活度积常数,它仅随温度变化,若引入活度系数,就得到用浓度表示的溶度积常数KspKsp与溶液中的离子强度有关,在重量测定中大多是加入过量沉淀剂,一般离子强度较大,应用溶度积作计算,才符合实际情况.附录表17所列微溶化合物的溶度积,均为活度积,应用时一般作为溶度积,但在离子强度较大时应以相应的计算该条件下的Ksp.实际上除了形成沉淀的主反应外,还可能存在多种副反应.组成沉淀的金属离子还会与多种络合剂络合,也可能发生水解作用,组成沉淀的阴离子还会与H+结合成弱酸,即此时溶液中金属离子总浓度[M']为沉淀剂总浓度[A']为引入相应的副反应系数后,则即称为条件溶度积,因＞1,＞1,K'sp＞Ksp, 即副反应的发生使溶度积常数增大,同络合物的,电对的一样,沉淀的K'sp也随介质条件变化,它表示沉淀与溶液达到平衡时,组成沉淀离子的各种形式总浓度的乘积,用它来作计算才能说明沉淀反应的完全程度.

实验室用比色的方法测定COD值出现这样的情况：测定COD时使用的是重铬酸钾氧化比色的方法测定的，加了掩蔽剂硫酸汞怎么还会出现沉淀，在COD试管中不会浑浊，怎么一加到比色皿中就浑浊了，比色皿清洗并干燥过，而且不加硫酸汞的情况不会出现沉淀，加了反而会有。反应也不存在氯离子干扰的情况，因为所有的样品都是标样，标样浓度越低，沉淀越明显，零样的沉淀最明显。标样浓度比较高时，沉淀倒不明显，甚至看不出来。在COD消解管中是完全澄清的，在倒入比色皿后逐渐产生絮状沉淀。担心玻璃比色皿的问题，也用石英比色皿试过，同样也会出现沉淀的情况。加的硫酸汞越多，沉淀越明显。后来减少硫酸汞添加量，加到只有国标的1/3，依然有沉淀的情况。实在是百思不得其解......？？？？？各位高手指点一下[em09512]

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=37986]等离子体质谱法快速测定[/url]

琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳实验。一、单向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清（抗体：抗人IgG或IgA免疫血清）（2）待检血清（抗原）：人血清http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/B1361084631_small.jpg （3）参考血清：全国统一人血清免疫球蛋白参考血清（批号不同，免疫球蛋白含量不同）。（4）其它：生理盐水、琼脂粉、微量进样器、打孔器、玻璃板、湿盒等。2. 方法（1）将适当稀释（事先滴定）的诊断血清与予溶化的2%琼脂在60℃水浴预热数分钟后等量混合均匀制成免疫琼脂板。（2）在免疫琼脂板上按一定距离（1.2~1.5 cm）打孔，见图1。（3）向孔内滴加1：2，1：4，1：8，1：16，1：32稀释的参考血清及1：10稀释的待检血清，每孔10 μl，此时加入的抗原液面应与琼脂板一平，不得外溢。（4）已经加样的免疫琼脂板置湿盒中37℃温箱扩散24小时。（5）测定各孔形成的沉淀环直径（mm），用参考血清各稀释度测定值绘出标准曲线，再由标准曲线查出被检血清中免疫球蛋白的含量。二、双向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清：兔抗人血清（2）待测血清：人血清（3）阴性对照血清（4）其它：生理盐水、琼脂粉、载玻片、打孔器、微量进样器等。2. 方法（1）取一清洁载玻片，倾注3.5~4.0 ml 加热熔化的1%食盐琼脂制成琼脂板。（2）凝固后，用直径3 mm 打孔器，孔间距为5 mm。孔的排列方式如图2所示。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084537_small.jpg（3）用微量进样器于中央孔加抗体，于周围孔加各种抗原。加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。（4）加样后的琼脂板收入湿盒内置37℃温箱中扩散24~48小时。（5）结果观察：若凝胶中抗原抗体是特异性的，则形成抗原—抗体复合物，在两孔之间出现一清晰致密白色的沉淀线，为阳性反应。若在72小时仍未出现沉淀线则为阴性反应。实验时至少要做一阳性对照。出现阳性对照与被检样品的沉淀线发生融合，才能确定待检样品为真正阳性。（6）结果分析：琼脂扩散结果受许多因素影响。①抗原特异性与沉淀线形状的关系：在相邻两完全相同的抗原与抗体反应时，则可出现两单沉淀线的融合。反之，如相邻抗原完全不同时，则出现沉淀线之交叉；两种抗原部分相同时，则出现沉淀线的部分融合。见图3。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084538_small.jpg②抗原浓度与沉淀先导形状的关系：两相邻抗原浓度相同，形成对称相融合的沉淀线；如果两抗原浓度不同，则沉淀线不对称，移向低浓度的一边。见图4。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084539_small.jpg③温度对沉淀线的影响：在一定范围内，温度扩散快。通常反应在0~37℃下进行。在双向扩散时，为了减少沉淀线变形并保持其清晰度，可在37℃下形成沉淀线，然后置于室温或冰箱（4℃）中为佳。④琼脂浓度对沉淀线形成速度的影响：一般来说，琼脂浓度越大，沉淀线出现越慢。⑤参加扩散的抗原与抗体间的距离对沉淀线形成的影响：抗原、抗体相距越远，沉淀线形成的越慢，所以在微量玻片法时，孔间距离以0.25~0.5 cm 为好，距离远影响反应速度。当然孔距过远，沉淀线的密度过大，容易发生融合，有碍对沉淀线数目的确定。⑥时间对沉淀线的影响：沉淀线形成一般在1~3天出现，14~21天出现的数目最多。玻片法可在1~2小时出现，一般观察72小时，放量过久可出现沉淀线重合消失。

琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳实验。一、单向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清（抗体：抗人IgG或IgA免疫血清）（2）待检血清（抗原）：人血清http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/B1361084631_small.jpg （3）参考血清：全国统一人血清免疫球蛋白参考血清（批号不同，免疫球蛋白含量不同）。（4）其它：生理盐水、琼脂粉、微量进样器、打孔器、玻璃板、湿盒等。2. 方法（1）将适当稀释（事先滴定）的诊断血清与予溶化的2%琼脂在60℃水浴预热数分钟后等量混合均匀制成免疫琼脂板。（2）在免疫琼脂板上按一定距离（1.2~1.5 cm）打孔，见图1。（3）向孔内滴加1：2，1：4，1：8，1：16，1：32稀释的参考血清及1：10稀释的待检血清，每孔10 μl，此时加入的抗原液面应与琼脂板一平，不得外溢。（4）已经加样的免疫琼脂板置湿盒中37℃温箱扩散24小时。（5）测定各孔形成的沉淀环直径（mm），用参考血清各稀释度测定值绘出标准曲线，再由标准曲线查出被检血清中免疫球蛋白的含量。二、双向琼脂扩散实验1. 材料（1）诊断血清：兔抗人血清（2）待测血清：人血清（3）阴性对照血清（4）其它：生理盐水、琼脂粉、载玻片、打孔器、微量进样器等。2. 方法（1）取一清洁载玻片，倾注3.5~4.0 ml 加热熔化的1%食盐琼脂制成琼脂板。（2）凝固后，用直径3 mm 打孔器，孔间距为5 mm。孔的排列方式如图2所示。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084537_small.jpg（3）用微量进样器于中央孔加抗体，于周围孔加各种抗原。加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。（4）加样后的琼脂板收入湿盒内置37℃温箱中扩散24~48小时。（5）结果观察：若凝胶中抗原抗体是特异性的，则形成抗原—抗体复合物，在两孔之间出现一清晰致密白色的沉淀线，为阳性反应。若在72小时仍未出现沉淀线则为阴性反应。实验时至少要做一阳性对照。出现阳性对照与被检样品的沉淀线发生融合，才能确定待检样品为真正阳性。（6）结果分析：琼脂扩散结果受许多因素影响。①抗原特异性与沉淀线形状的关系：在相邻两完全相同的抗原与抗体反应时，则可出现两单沉淀线的融合。反之，如相邻抗原完全不同时，则出现沉淀线之交叉；两种抗原部分相同时，则出现沉淀线的部分融合。见图3。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084538_small.jpg②抗原浓度与沉淀先导形状的关系：两相邻抗原浓度相同，形成对称相融合的沉淀线；如果两抗原浓度不同，则沉淀线不对称，移向低浓度的一边。见图4。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/A1361084539_small.jpg③温度对沉淀线的影响：在一定范围内，温度扩散快。通常反应在0~37℃下进行。在双向扩散时，为了减少沉淀线变形并保持其清晰度，可在37℃下形成沉淀线，然后置于室温或冰箱（4℃）中为佳。④琼脂浓度对沉淀线形成速度的影响：一般来说，琼脂浓度越大，沉淀线出现越慢。⑤参加扩散的抗原与抗体间的距离对沉淀线形成的影响：抗原、抗体相距越远，沉淀线形成的越慢，所以在微量玻片法时，孔间距离以0.25~0.5 cm 为好，距离远影响反应速度。当然孔距过远，沉淀线的密度过大，容易发生融合，有碍对沉淀线数目的确定。⑥时间对沉淀线的影响：沉淀线形成一般在1~3天出现，14~21天出现的数目最多。玻片法可在1~2小时出现，一般观察72小时，放量过久可出现沉淀线重合消失。

实验室氯化银沉淀大家都在怎么处理？

对流免疫电泳是在琼脂扩散基础上结合电泳技术而建立的一种简便而快速的方法。此方法能在短时间内出现结果，故可用于快速诊断，敏感性比双向扩散技术高10-15倍。血清蛋白在pH8.6条件下带负电荷，所以在电场作用下都向E极移动。但由于抗体分子在这样的PH条件下只带微弱的负电荷，而且它的分子量又较大（为r球蛋白）。所以游动慢。更重要的是抗体分子受电渗作用影响较大，也就是说点渗作用大于它本身的迁移率。所谓电渗作用是指在电场中溶液对于一个固定固体的相对移动。琼脂是一种酸性物质，在碱性缓冲液中进行电泳，它带有负电荷，而与琼脂相接触的水溶液就带正电荷，这样的液体便向负极移动。抗体分子就是随着带正电荷的液体向负极移动的。而一般的蛋白质（如血清抗原）也受电渗作用的影响，使泳动速度减慢，但它的电泳迁移率远远大于电渗作用。这样抗原体就达到了定向对流，在两者相遇且比例合适时便形成肉眼可见的沉淀线。一、材料1. 诊断血清：免抗人免疫血清2. 待检血清：人血清3. 阴性对照血清4. pH8.6、离子强度0.05 M 巴比妥缓冲液配方：巴比妥1.84 g，巴比妥钠10.3 g，加蒸馏水1000 ml，调pH至8.6。5. 缓冲琼脂板：将纯化的琼脂用pH8.6离子强度0.025的巴比妥缓冲液（用0.05 M 的巴比妥缓冲液稀释一倍即可）配成1.5%的琼脂，加入0.01~0.02%流柳汞防腐，保存冰箱内备用。6. 电泳仪7. 其他：生理盐水、打孔器、微量进样器二、方法1. 琼脂板的制备根据需要可选用大玻板（6 cm×9 cm）和（小玻片）两种。大玻板约需琼脂10 ml，小玻片约需3.5 ml，凝固后按图打孔，方法同琼脂扩散实验。2. 加样：左侧孔内加患者血清（原血清及10倍稀释血清各占一孔），右侧内加抗血清，每片应有阳性对照。http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/02/B1361084632_small.jpg3. 电泳用国产普通电泳仪。其内加0.05 m pH8.6的巴比妥缓冲液，加至电泳槽高度的三分之二处，注意两槽内液面尽量水平。将加好样品的玻板置于电泳槽上，抗原端接负极，抗体端接正极，用2~4层滤纸浸湿作盐桥，滤纸与琼脂板联接处为0.5 cm。以板宽度计算电流，以板的长度计算电压。要求电流量为2~3 mA/cm，即大板为20 mA，小板为10 mA。电压为4~6 V/cm。通电45分钟—2小时后观察结果。4. 结果观察在黑色背景上方，用散射光多个角度观察，在对孔之间有白色沉淀线即为阳性对照应出现明显的白色沉淀线。如果抗原，两极微沉淀条纹不清晰，于37℃保温数小时可增强沉淀条纹的清晰度。5. 影响结果的因素（1）抗原抗体的比例：抗原抗体比例适应时容易出现沉淀带，反之不易发生。当抗体浓度恒定时，被检血清含甲胎蛋白浓度高时，作10倍、20倍或更高倍数稀释可以提高阳性率。随稀释度的增加，抗原抗体的比例发生变化，沉淀线由靠近抗血清孔向逐步移向两孔中间，并可出现不典型的沉淀线如弧形、八字须形、斜线形，这些也是阳性，应予注意。（2）组电泳缓冲液其电泳结果以巴比妥钠—盐酸缓冲液灵敏度最高。巴比妥—巴比妥钠次之，Tris缓冲液更差。（3）电压与电流时电泳时间需要长些：电压电流增大时，电泳时间可更短。但电压过高则孔径变形，电流过大抗原抗体蛋白易变性，干扰实验结果。一般选择5 ml/cm，电泳时间改为1.5小时。

求助求助做的是玉米籽粒中除草剂提取，做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]质谱分析，前处理过滤后放置一段时间后进样小瓶中出现沉淀，想问一下是什么原因导致的呢？是油脂没除净导致的吗？前处理步骤如下：1、取10g玉米籽粒加入10mL乙腈和6mL1%乙酸溶液，涡旋2min2、加入4g无水硫酸镁和1g氯化钠，涡旋2min3、3000r/min离心10min，去上清液加入2g无水硫酸镁和200mgPSA，涡旋2min，再次离心10min4、取上清液过0.22μm滤膜，装入进样小瓶中待测不知道为什么瓶里会有沉淀，刚过滤完是没有的，是变质了还是物质不稳定析出了呢？该怎么解决呀？谢谢大家。

我们学校用的6D型的仪器，现在做实验的时候加入试剂的时候会出现沉淀，这是什么原因呢，我们该怎么解决呢？