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质谱分析分子量

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质谱分析分子量相关的论坛

  • 【求助】如何用质谱分析高分子的分子量

    我们试图用质谱法得出一种树枝状高分子的分子量,请问,除了GPC外,质谱法怎么使用,该作哪种质谱,怎么分析。我们用了CI,但是得出的数据,不清晰,也不知道怎么分析,太多的m/z峰。[em0808] [em0812]

  • 【求助】质谱检测 怎么分析样品分子量?

    求大家帮忙看看这张ESI质谱图以下是我打的质谱图,样品为多肽。我的目的是想看分子量。我是用UPLC-QTOF-MS做的,ESI源,仪牌子是Waters MALDI SYNAPT QTOF MS液相色谱串联四级杆飞行时间质谱。那请问大家,从这张图上如何分析我样品的分子量?其次,图右上角的3.98e3是什么意思?代表样品的能量信号吗?样品含量越高,这个值也就越大吗?不甚感激!!!http://edu.emuch.net/attachment/0b/cd/1217637_1301900306_879.jpg

  • 【求助】求助质谱解析-有没有可以分析出小分子量残片的分子结构的软件?

    wsearch软件可以根据分子量预测出分子式,但不能给出分子结构,有没有软件可以直接给出可能的分子结构的。这样分析残片时可以知道是什么,毕竟小的分子量的元素组合也没多少,可能的就更少了。或者网上有没有什么地方可以用分子量检索出可能结构的。例如:质谱中最小的峰为87,那么可能的分子式是什么呢?

  • 质谱图分析分子量加了一个41

    [color=#444444]做了一个化合物,核磁正确,做了高分辨质谱,分子量加了一个41 解释不清楚,求大家给解释一下[/color][url=http://muchongimg.xmcimg.com/oss2/img/2019/0507/w185h1082532_1557219978_790.jpg#opennewwindow][img=质谱解析]http://muchongimg.xmcimg.com/oss2/img/2019/0507/w185h1082532_1557219978_790.jpg[/img][/url][img]http://muchongimg.xmcimg.com/oss2/img/2019/0507/w94h1082532_1557220316_556.jpg#opennewwindow[/img]

  • 【原创大赛】质谱应用之分子量的测量

    【原创大赛】质谱应用之分子量的测量

    质谱应用之分子量测量 最近10年质谱技术的飞速发展,耐用的离子源,高性能的质量分析器和多种有效的扫描方式推动了质谱仪器走进各个单位,质谱成为功能强大的生物化学分析平台。目前基于质谱的物质定量定性实验应用广泛,从普通色谱-质谱(GC-LC&LC-MS)连用技术的定量分析实验(药理药代、农残筛查、环境污染物分析……),到大规模发现鉴定的组学实验(蛋白质组学和代谢组学)。抛开这些酷炫的方法和技术,我们今天讨论一下质谱的基本应用——测定分子量,通过一些测定分子量的实验我们可以看到分子量代表的更多意义。 质谱分析是一种测量离子质荷比(质量-电荷比)的分析方法,质谱法(Mass Spectrometry, MS)即用电场和磁场将运动的离子(带电荷的原子、分子或分子碎片,有分子离子、同位素离子、碎片离子、重排离子、多电荷离子、亚稳离子、负离子和离子-分子相互作用产生的离子)按它们的质荷比分离后进行检测的方法。测出离子准确质量即可确定离子的化合物组成。这是由于核素的准确质量是一多位小数,决不会有两个核素的质量是一样的,而且决不会有一种核素的质量恰好是另一核素质量的整数倍。分析这些离子可获得化合物的分子量、化学结构、裂解规律和由单分子分解形成的某些离子间存在的某种相互关系等信息(以上内容来自百度百科和高中教科书)。从定义我们看出,测定分子量是质谱的基本技能,一台质谱仪我们首先问的是它测量的分子量范围是多少,测量的准确度怎么样。1小分子的测定 质谱的首先发展是测定元素的相对分子量,比如我们一般说到元素C的分子量是12,其实说的是C在自然界的最高丰度12C的相对原子量,考虑自然界只有12C相对含量1.082%的13C,C准确平均分子量是12.011。化合物一般有C、H、O……多种元素组成,这些元素的同位素互相组合,如果我们的质谱可以区分相邻的同位素的相对分子量,质谱图上会显示的一簇峰,每个质谱峰对应相同的分子式下不同的同位素组成的化合物响应。因为化合物组形成元素的不同,他们的质谱簇峰分子量(momoisotopic mass)组成独特的质谱峰模式(pattern),如果质谱区分不了相邻的同位素峰,这一簇峰变成一个质谱峰所对应的是平均分子量(average mass)。 如果我们测定一个化合物分子量,如果通过质谱可以得到精细的元素分子量(momoisotopicmass)及其相对丰强度(在质谱上表现为簇峰的强度)的信息,可以通过谱图推测化合物的组成写出分子式。图1 A是测的城市污水提取物的分子量,三个主要质谱峰为同一个化合物的同位素质谱峰,推测分子式为C2HO2Br2,采用软件(很多软件都可以进行,最简单的是chem office)模拟此分子式的精确分子量,图2 B即为模拟所得的质谱图。可以看出所测得的质量偏差很小,最高元素峰216.8331-216.8328=0.0003Da,质谱峰分布模式(分子量和相对强度)实际测量图和模拟图几乎一致,可以确定该化合物的分子式是C2HO2Br2。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412131121_526995_2265735_3.jpg图1 污水提取物质谱图。A测量图,B模拟图。质谱Thermo LTQ-orbit,HESI源。 对于有特殊的元素的化合物,测量准确的分子量及其同位素质谱模式可以准确的判定特殊元素的存在,图2是测得某配位化合物的质谱图,通过其特殊的质谱图可以确定此化合物为Os金属配合物。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412131125_526996_2265735_3.jpg图2 Os配合物质谱图。质谱Thermo LTQ-orbit,HESI源。 上述测量过程简单实用,但是这个实验要求质谱有足够的质量准确度,所测的分子量与实际值最好在小数点最后一位有波动,不然预测分子式会有很大的偏差。2更高分子量的测量 对于同位素峰的测量,需要质谱区分相邻的同位素峰。在图1中两个同位素峰相差越2个道尔顿,在测量217分子量时候,只要质谱可以区分2个道尔顿的质谱峰就可以了,在图2中,同位素峰相差1道尔顿,区分度只有1个道尔顿。当分子量达到5K以上的时候,如果化合物仅仅由CHON等简单同位素组成,因为组成原子个数的增多,同位素峰越来越复杂,两个同位素峰之间的区分度越来越小,当质谱区分不开这些同位素峰的时候,测得是平均分子量(average mass)。图3 A测量的是一个分子量为10380Da的多肽,B和C是带10个电荷和11电荷同位素峰的局部方法图。在B中,同位素质谱峰间距(区分度)为0.1001Da。随着分子量的增加,需要质谱对相近同位素峰区分能力更强。评价质谱这种能力的指标是分辨率,我们一般用单位分辨率R=m/Δm来表示(该论述与严格定义有区别),图1需要的分辨率217/2=108,图2的分辨率780/1=780,而图三需要的分辨率1100/0.1=11000。所以说准确测分子量尤其是大分子量需要质谱具有高的分辨率。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412051959_526030_2265735_3.jpg图3多肽质谱测定。 A,质谱图B,,+10电荷质谱放大图C,+11电荷质谱放大图。Thermo LTQ-orbit,HESI源。3不同离子源的测定大分子的策略 目前测定大分子的主要离子源有基质辅助激光解吸(MALDI)和电喷雾(ESI)。图4是采用不同离子源测定聚乙二醇修饰药物分子量,A是MALDI质谱测得,几乎为所有分子的都带一个电荷,质谱间距为聚乙二醇重复单元-CH2-CH2-O-44Da;B为ESI质谱所测谱图,Z为分子所带电荷数,z=4质谱间距为44/4=11,z=3质谱间距为44/3=14.67。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/12/201412052001_526031_2265735_3.jpg图4聚乙二醇化药物质谱图。A AB MALDI-TOF谱图,基质DHB反射模式;B Thermo ESI-LTQ-Orbit谱图。 MALDI电离的离子一般带一个电荷(随着分子量增加,会出现带多个电荷的情况),图5是测得8478和11675多肽质谱图,5737为11675多肽带双电荷所得。采用MALDI测量分子量谱图测量结果直观方便,图6是测量分子

  • 质谱图 样品分子量?

    质谱图 样品分子量?

    [color=#444444]求大家帮忙看看这张ESI质谱图[/color][color=#444444]以下是我打的质谱图,样品为多肽。[/color][color=#444444]我的目的是想看分子量。[/color][color=#444444]我是用UPLC-QTOF-MS做的,ESI源,仪牌子是Waters MALDI SYNAPT QTOF MS液相色谱串联四级杆飞行时间质谱。[/color][color=#444444]那请问大家,从这张图上如何分析我样品的分子量?[/color][color=#444444]其次,图右上角的3.98e3是什么意思?代表样品的能量信号吗?样品含量越高,这个值也就越大吗?[/color][color=#444444]不甚感激!!![/color][color=#444444][img=,690,216]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908281609380409_3981_1806906_3.jpg!w690x216.jpg[/img][/color]

  • 那位做过分子量在322的有机物的质谱分析啊

    [color=#444444],我做了一个东西的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url], 其中一个质谱的荷质比为以下:[/color][color=#444444]m/z 322.07 309.07 271.05 270.05 269.05 253.02 239.01 195.03 139.51[/color][color=#444444]丰度 6 11 3 18 100 52 6 6 9[/color][color=#444444]请问各位能帮我解释以下吗,可不可能是对甲苯磺酰氧甲基瞵酸二乙酯CAS 号:31618-90-3 分子式:C12H19O6PS 分子量:322.31 ,[/color]

  • 转贴:质谱分析(一)

    质谱分析本是一种物理方法,其基本原理是使试样中各组分在离子源中发生电离,生成不同荷质比的带正电荷的离子,经加速电场的作用,形成离子束,进入质量分析器。在质量分析器中,再利用电场和磁场使发生相反的速度色散,将它们分别聚焦而得到质谱图,从而确定其质量。第一台质谱仪是英国科学家阿斯顿(F.W.Aston,1877—1945)于1919年制成的。出手不凡,阿斯顿用这台装置发现了多种元素同位素,研究了53个非放射性元素,发现了天然存在的287种核素中的212种,第一次证明原子质量亏损。他为此荣获1922年诺贝尔化学奖。质谱仪开始主要是作为一种研究仪器使用的,这样用了20年后才被真正当作一种分析工具。它最初作为高度灵敏的仪器用于实验中,供设计者找寻十分可靠的结果。早期的研究者们忙着测定精确的原子量和同位素分布,不能积极地去探索这种仪器的新用途。由于同位素示踪物研究的出现,质谱仪对分析工作的用处就越发变得明显了。氮在植物中发生代谢作用的生物化学研究要求用15N作为一种示踪物。但它是一种稳定的同位素,不能通过密度测量来精确测定,所以质谱仪就成了必要的分析仪器。这种仪器在使用稳定的13C示踪物的研究中以及在基于稳定同位素鉴定的工作中也是很有用的。标准型的质谱仪到现在已经使用了大约45年。40年代期间,石油工业在烃混合物的分析中开始采用质谱仪。尽管这种质谱图在定量解释时存在着难以克服的计算麻烦,但在有了高速计算机后,这种仪器就能在工业方面获得重大的成功。(1)近20年来质谱技术随着新颖电离技术,质量分析技术,与各种分离手段的联用技术以及二维分析方法的发展,质谱已发展成为最广泛应用的分析手段之一。其最突出的技术进步有以下几个方面:新的解吸电离技术不断涌现,日趋成熟,可测分子量范围越来越高,并逐步适用于难挥发、热敏感物质的分析,例如海洋天然产物、微生物代谢产物,动植物二次代谢产物以及生物大分子的结构研究。最有发展前景的电离方法有:①等离子解吸采用252Cf的裂介碎片作为离子源,使多肽和蛋白质等生物大分子不必衍生化而直接电离进行质量分析。它与飞行时间质谱相配合,已成功地用于许多合成多肽的质谱分析,并已在一些实验室中作为常规分析方法来鉴定多肽和蛋白质。目前它的可分析的质量极限大约是50000D。②快原子轰击,把样品分子放入低挥发性液体中,用高速中性原子来进行轰击,可使低挥发性的,热敏感的分子电离,得到质子化或碱金属离子化的分子离子。由于很容易在磁质谱或四极杆质谱上安装使用,因此得到广泛应用,分子量很容易达到3000—4000。如果与带有后加速的多次反射阵列检测器的高性能磁质谱配合使用,可测分子量可达到10000amn以上,最高记录可达25000amn。③激光解吸,利用CO2激光(10.6μm),Nd/YAG激光(1.06μm)的快速加热作用使难挥发的分子解吸电离,与飞行时间质谱或离子回旋共振质谱相配合成功地分析了一系列蛋白质和酶的复合物,并创造了蛋白质分子质量分析的最高记录(Jack Bean Urease Mr~27万)。④电喷雾(electro spray,electrostatic spray,ion spray)把分析样品通过常压电离源,使分子多重质子化而电离。由于生成多重质子化的分子离子可缩小质荷比,因此一个分子量为数万的生物大分子,如果带上几十个,上百个质子,质荷比可降低到2000以下,可以用普通的四极杆质谱仪分析,其次由于得到一组质荷比连续变化的分子离子峰,通过对这些多电荷分子离子峰的质量计算可以得到高度准确的平均分子量。第三是这种多重质子化的分子离子峰可进一步诱导碰撞活化,进行串联质谱分析。第四是这种电离技术的样品制备要求极低,溶于生物体液的样品分子或HPLC,CZE的流出液都可直接引入常压电离源进行联机检测。

  • 单四级杆质谱测得分子量误差大吗

    刚入手单四级杆质谱,发现分子量误差比较大,分子量大比如1000左右的误差0.5,分子量小的大概300误差0.2,不知道是不是正常,还有厂家让进样浓度很低,紫外都快观察不到,一般正常紫外吸收多高分析合适,进样浓度太低,主峰都很矮,杂质峰就看不到,怎么提取分子量,还忘各位大师指点

  • 在分析中用质谱做定性问题??

    讨论一下影响二级质谱的因素欢迎大家分享一下你们 做 质谱定性方面的 经验。在分析中用质谱做定性,首先已经知道化合物的结构,分子量,1. 直接进样,分析母离子的形式以及碎片离子。2.用LC-MS,测定SIM和SRM模式。影响SRM和SIM 的因素有哪些呢???

  • 蛋白质质谱分析

    PS1利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间(MALDI-TOF)技术来表征生物分子。样品溶于固定的底物中形成晶体,用激光脉冲使其离子化,离子被加速后通过飞行管时分离,所有离子均可被检测。系统包括三个组成部件:样品点样制备工作站(SymBiot 1)、生物质谱工作站(Voyager-DE PRO)和自动化分析软件(AutoMS-Fit)。SymBiot1 是一个自动样品处理系统,支持亚微升级微量点样,具有快速省时、重现性好的特点;Voyager-DE PRO是为蛋白质组研究专门设计的自动飞行时间质谱分析系统,配有AB公司之专利—延迟检测技术,具有高分辨率、质荷比宽等特点;AutoMS软件可以批处理方式或实时动态方式检索Protein Prospector蛋白数据库或您指定的蛋白数据库,查询参数可以任意设定,检索结果以Microsoft Access格式分类编号及储存。 PS 1技术平台建立伊始便受到了许多蛋白质课题研究组的关注。中国科学院上海生物化学研究所戚正武院士课题组从猪肝中提取某一活性蛋白组分,该组分理化性质不清楚,天然含量十分低,并无相关文献报道。用HPLC分离以后对活性组分的成分不能确定。上海基康生物技术有限公司运用PS 1系统对HPLC分离后的活性组分作了质谱分析,仅在一个工作日内就精确确定该组分由分子量极为相近的几种蛋白质构成,分子量精确度达到10 ppm。后经HPLC再次细分(洗脱梯度增加了2.5倍),证实了质谱的结论。此活性组分曾滤过1kD分子筛,基康的质谱数据纠正了研究人员过去对该活性组分分子量的误判,为研究人员明确实验方向、优化实验步骤提供了强有力的依据。 PS1除了可以进行生物大分子的精确分子量测定,还可用于蛋白的肽指纹图谱分析(peptide mass fingerprint,PMF),提供相关生物信息学服务,并且还可以利用源后衰变(Post Source Decay,PSD)技术来获得样品的MS/MS数据,以得到一级结构信息。PSD方法通常增加了激发激光的功率,使其超过产生一般肽指纹谱图所需功率的阈值,过剩的能量使前体离子在源内离子化之后发生裂解,产生一系列碎片离子,在反射器的作用下,最终可以得到一张连续的碎片离子图谱。经特定的软件分析后,即可在数据库中检索到肽段的氨基酸序列。利用PSD分析技术,还可以对磷酸化,糖基化等翻译后修饰进行定位分析,同样也可以鉴定产生翻译后修饰肽段的蛋白质。Neville et al.(1997)将这一方法成功的用于磷酸肽的序列分析。作为重要的蛋白质鉴定手段之一,PS1的精确度可以达到10 ppm,灵敏度为fmol,分子量检测范围可达到500 kDa,每天可自动分析40-100个样品,适用于大规模“蛋白质组学”研究。

  • 质谱分析法MS的工作原理

    [b]质谱分析法MS分析原理:[/b]分子在真空中被电子轰击,形成离子,通过电磁场按不同m/e的变化[b]提供的信息:[/b]分子离子及碎片离子的质量数及其相对峰度,提供分子量,元素组成及结构的信息FT-ICR质谱的分析器是一个具有均匀(超导)磁场的空腔,离子在垂直于磁场的圆形轨道上作回旋运动,回旋频率仅与磁场强度和离子的质荷比有关,因此可以分离不同质荷比的离子,并得到质荷比相关的图谱。

  • 质谱分析的蛋白标准品

    求购 质谱分析的蛋白标准品,MALDI-TOF-MS上用的。 分子量在400--30000da 的或者接近这个质量范围的,如有请联系我。直接给我这个留言就可以,谢谢!

  • 求助:质谱,分子量鉴定问题?

    [color=#444444]为什么分子量多24?[/color][color=#444444]我做了三个化合物,组成原子为C、H、O、N,进行分子量鉴定,质谱数据比理论上的分子量每个化合物都多24!我怀疑是质谱测试的系统误差,可是我不知道这个误差是怎么来的。请专家帮助我!谢谢[/color]

  • 质谱图分析

    质谱图分析

    [color=#444444]求分析分析,灰常感谢~~我的原料是三苯胺(245) [/color][color=#444444]产物 三(4-碘苯)胺分子量(623)[/color][color=#444444]质谱溶剂 甲醇[/color][color=#444444][img=,509,270]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909161123156943_9251_1752342_3.png!w509x270.jpg[/img][/color]

  • 质谱检测中精确分子量的计算

    质谱检测中精确分子量的计算

    1.问题描述在化合物检测中,质谱检测由于其高精密和宽检测范围,是化合物定性和定量分析的必要手段 其检测的离子峰基于精确分子量(ExcatMass),12C为12,1H为1.007825,16O为15.994915,而一般数据库或计算所得均为相对分子量,在实际检测过程中不能满足及时、快速的计算要求。利用[b]小程序-分子量计算器[/b]可以快速、准确解决这一问题。2.搜索小程序-分子量计算器[img=搜索小程序,627,377]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907231138351812_3608_3963607_3.png!w627x377.jpg[/img][align=left]3.分子量计算器主界面[/align][align=left]点击进入小程序后,主界面如下所示:[/align][img=,375,648]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908141636090567_9413_3963607_3.png!w375x648.jpg[/img][align=left]4.小程序计算相对分子量通过键盘输入分子式,如乙酸乙酯分子式为C4H8O2,依次点击’C’-’4’-’H’-’8’-’O’-’2’,然后点击‘≈’(即约等号),即可得到该化合物的相对分子量,结果为88.106。[/align][img=,372,649]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908141636370065_6838_3963607_3.png!w372x649.jpg[/img][align=left]5.小程序计算精确分子量[/align][align=left]同上操作,按‘=‘(即等号),即可得到该化合物的精确分子量,结果为88.05243。[/align][img=,374,644]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908141636560395_842_3963607_3.png!w374x644.jpg[/img]6.结束语简单快捷的操作,准确的计算结果,希望能够成为质谱检测工作者的手边利器。[img=,258,258]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907271601233013_7936_3963607_3.jpg!w258x258.jpg[/img]----------------------------------------[align=left]版本更新,界面稍有变化,功能有所加强。如乙酸乙酯C4H8O2,亦可输入CH3COOC2H5,小程序会自动简化分子式,并计算相对分子量/精确分子量,最大支持原子个数99。如无法使用,请更新至微信最新版本。[/align]

  • 关于ESI源测得的质谱图分析

    [color=#444444]ESI源是很软的电离方法,它通常没有碎片离子峰,那测得的质谱图该怎么分析呢?只看有没有自己的目标化合物的分子量就下定论吗?[/color]

  • 大家来分析下这个质谱!

    大家来分析下这个质谱!

    [color=#444444]本人做了一化合物,分子量为511.16,现在打出的质谱如下图,没有加氢峰,加钠应该是534,现在的峰为530,差的有点大,大家看看是对还是错,打质谱的老师说可能是先合了一个水再加氢,不知道这样分析勉强不?[/color][color=#444444][img=,600,450]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909301446524323_1708_1848218_3.jpg!w600x450.jpg[/img][/color]

  • 【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用项目完成人:桑志红 蔡 耘项目完成单位:国家生物医学分析中心 随着人们对糖蛋白参与生命活动机理的日益深入了解,对天然糖蛋白及重组糖蛋白类药物的分析越来越受到重视。重组糖蛋白类药物的质量控制更是直接关系到药物的疗效及至人类的健康。九十年代以来,随着带有反射功能的基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和纳升电喷雾串联质谱(nano-ESI-Q-TOF)等具有软电离方式的现代质谱 技术的发展,质谱以其高灵敏度和强有力的分析混合物的能力,提供了生物大分子的分子量、序列、一级结构信息以及结构转换、修饰等方面的信息,使糖基化分析有了重要的进展。 通常研究糖蛋白的方法是把蛋白链上的寡糖切下来,分别研究蛋白部分和寡糖部分的结构,因此无法研究与两部分共同相关的结构问题,也不能区分不同糖基化位点上切下来的寡糖。自90年代初,国外有人开始用质谱法研究糖蛋白的结构,同时描述了各个位点的不均一性。我们用建立的现代生物质谱技术研究糖蛋白一级结构的方法,将其应用与基因重组糖蛋白的结构分析。为糖蛋白结构分析及基因重组糖蛋白类药物的质量控制提供新的手段。一、 生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立实验所用仪器为:1.德国BRUKER 公司的REFLEXIII型基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪,N2激光器,波长337nm,线性飞行距离150cm,加速电压2kv。2.英国Micromass 公司Q-TOF型电喷雾串联质谱仪。源温80°C,气体流速40L/h,枪头电压650V,检测频率2.4S,氩气碰撞池压力6*10-5mbar。1. 基质的选择,在MALDI-TOF-MS分析中,基质起着相当重要的作用。不同的基质对不同类的物质响应不同,a-氰基-4-羟基肉桂酸用于测定糖蛋白核糖核酸酶B效果相对较好。2. 糖蛋白分子量的测定,糖蛋白核糖核酸酶B由124个氨基酸组成,在34位Asn处连有一个高甘露糖型N-糖链。由于糖链的微不均一性,与普通蛋白质及核酸不同,其分子离子峰在MALDI-TOF-MS 质谱图上表现为一簇峰,各峰之间约相差一个糖基。正是由于这种微不均一性,使得其分子离子峰变宽,灵敏度降低。糖链分子量越大,峰越宽,灵敏度越低,所以一般只有糖链较短,蛋白的质量不太大的糖蛋白才能测定其平均分子量。用MALDI-TOF可直接测定糖蛋白核糖核酸酶B的平均分子量为 15208.6Da。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211511_284179_1604317_3.jpg3. 糖含量的测定,采用O聚糖酶及内糖苷键酶F分别作用于核糖核酸酶 B,只有内糖苷键酶F能够是其分子量发生变化,表明核糖核酸酶B分子中不存在O-连接糖链存在着N-连接糖链。内糖苷键酶F切断N-糖链五糖核心最内侧的GlcNAc-GlcNAc糖苷键,得到含一个GlcNAc的肽链,减去GlcNAc,可以计算出准确的肽链分子量T=13695.6,与糖蛋白平均分子量之差为糖链的平均分子量G=1513.4,平均糖含量为:(糖链大小/糖蛋白分子量)×100%=9.95%。4. 糖基化位点的确定,研究糖基化类型及糖基化位点的策略:采用蛋白酶酶解与糖苷内切酶酶解相结合的方法,通过酶切前后含糖肽片的位移,结合网上数据库检索,可以确定糖基化类型和糖基化位点。以不同类型的糖苷内切酶作用于糖蛋白(N-糖苷键酶或O-糖苷键酶),在MALDITOF-MS 上观察其质量的变化,可以直接确定糖蛋白中是否含有响应类型的糖链,这是我们确定糖蛋白中糖苷键类型的基础。我们采用先将核糖核酸酶B还原烷基化,加Glu-C酶切,产物再用内糖苷肩酶F酶切,可观察到含糖肽段出现位移,将核糖核酸酶B的肽质量指纹图进行数据库检索,证实发生位移的肽段中含有N-糖链特异连接位点,由此确定34位Asn为糖基化位点。另外我们采用内糖苷键酶F及肽-N-聚糖酶F两种酶进行差位酶切法对含糖肽段进行验证,两种酶酶切后分子离子峰的差值除以GlcNAc的质量,结果就是N-糖基化位点的个数5. 质谱测定氨基酸序列, 我们对核糖核酸酶B肽质量指纹谱中的含糖肽段进行了串联质谱测定,首先在一级质谱图中选择离子4972.23,在串联质谱的碰撞活化室以氩气与其碰撞产生碎片,从碎片的质荷比推算出此肽片中的一段氨基酸序列,检索结果为核糖核酸酶B,从而判断其理论序列是否一致。6. 糖链结构的研究,凝集素对糖肽的亲和提取,进一步分析糖肽序列及糖链结构的关键是含糖肽段的提取。核糖核酸酶B中糖链为高甘露糖型,我们选用对其有特异性吸附的伴刀豆球蛋白对其进行提取利用这种简捷的亲和质谱的方法,对糖肽段进行了分析。建立了亲和质谱分析糖肽类物质的方法,为今后糖肽序列分析及糖链结构分析奠定了基础。二、基因重组糖蛋白人促红细胞生成素(rhEPO)的结构分析。 利用以上建立的方法,我们对样品重组人促红细胞生成素进行了分析,断定此样品为非完全糖基化,样品中只存在N-连接的糖链,无O-糖链。应用酶切法用肽-N-聚糖酶处理后,得到两个含糖肽段,进行数据库检索,测得38位及83位为N-糖基化位点,与文献报道相符,结果可靠。因此,该项课

  • 请哪位高手帮忙分析下下面的质谱图

    本人最近在分离某真菌发酵液中具有降血糖功能的活性物质,目前怀疑一分子量389的物质,想确定其类型,但样品不纯,无法做核磁分析,现在只做了 质谱分析,附件中是一级和二级质谱图,我现在分析的方法是在网上搜M389的生物碱或能降血糖的物质,画出结构式,然后用MassFragment分析,比较碎片,进行筛选,但是找不到合适的,请问哪位高手有没有更好的办法确定该物质,万分感谢!

  • 质谱分析求助

    质谱分析求助

    [color=#444444]最近做一个化合物的合成,分子量745.26,产物结构如图,[/color][color=#444444]用硅胶柱分离,因为产物有颜色,所以从外观上看,分离效果还是不错的,[/color][color=#444444]所测质谱如下,分析半天也没弄出所以然,不知怎么回事,请各位高手帮忙分析下,看看是产物本身不对,还是怎么分析?谢谢[/color][color=#444444][img=,273,94]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910091426293365_6873_1843534_3.png!w273x94.jpg[/img][img=,600,403]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/10/201910091426296125_5812_1843534_3.png!w600x403.jpg[/img][/color]

  • 质谱测小分子的分子量?

    [color=#444444]想用质谱测定一个小分子的分子量,该物质在水、甲醇中不溶解,而在乙腈中溶解度不是太大。。。。想问一下像这种在溶剂中溶解性不太好的物质,测分子量时有没有影响???或者说质谱测定分子量时,对被测物在溶剂中的溶解度有没有要求?[/color]

  • 质谱技术在抗体药物分析中的应用

    质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理,主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物,所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快速的发展,是当前生物药物领域增长最快的一类药物.1.抗体药物发展新趋势在生物药物领域,抗体药物占据着越来越重要的地位,全球销售排名前10位的药物中有6个为抗体药物,抗体药物按来源分类可以分为:鼠源单克隆抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。目前,批准的单克隆抗体药物中,人源化单抗和全人源单抗数量已占据大多数。1.1 抗体药物偶联物(ADC)抗体药物偶联物(ADC)由单克隆抗体和小分子化合物两部分组成。通过抗体的靶向作用,ADC 的抗体部分和肿瘤细胞表面抗原特异性识别并结合,通过细胞内吞作用,将抗体和小分子化合物一起带进肿瘤细胞内部,释放出小分子化合物。这样既可以降低小分子药物的毒性,同时具有靶向结合的作用。已经上市的两个ADC 是Kadyla 和Adcetris。1.2 双特异性抗体(BsAb)双特异性抗体(BsAb)是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体,能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁,由于基因工程的发展,目前双特异性抗体已经研发出多种类型,主要类型有三功能双特异性抗体、IgG-scFv、三价双特异性分子、串联单链抗体(串联scFv)、DVD-Ig 等多种形式。2.质谱技术近年来质谱仪性能的显著改进主要基于开发出的两种离子化技术:一种是介质辅助的激光解吸/离子化技术。另一种是电喷雾离子化技术。由于这两种电离技术的出现,使原本只能检测小分子的质谱技术,可以运用于检测生物大分子。在过去质谱技术主要运用于对一级结构和序列的表征,而现在质谱技术越来越多地运用于高级结构的分析,而高级结构对于抗体药物的生物活性至关重要。3.质谱技术在抗体药物一级结构分析中的应用3.1 完整抗体药物精确分子量测定当得到抗体药物时,可以直接通过高分辨率的MALDI-TOF或者ESI-MS进行分子量的检测。通过对于脱糖后分子量的检测,可以对于抗体药物进行初步定性分析,并将可以作为药物常规放行的分析方法。对于脱糖前的抗体药物进行分析,可以得到抗体药物的糖基化类型的信息及糖基化水平的分布,对于快速了解生产工艺与药物质量的关系具有十分重要的意义。3.2 药物抗体偶联比(DAR)对于赖氨酸链接的抗体偶联药物,采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析,根据偶联不同数目药物分子的质量数增加判断偶联数目。对于质谱测定的结果,不仅可以给出确切的药物抗体偶联比值,更能够给出链接不同个小分子药物的分布情况,及反应过程副产物空链接头的分布情况。3.3 肽图谱分析蛋白被特异酶切后的蛋白酶水解后得到的肽片段质量图谱。由于不同的抗体药物具有不同的氨基酸序列,蛋白质被酶水解后,产生的肽片段也各不相同,肽混合物的质量数具有唯一特征。可以通过LC-ESI-MS进行肽片段的一级质量数的鉴定,也可以通过LC-ESI-MS/MS对于每个肽片段进行进一步确证,提高肽图谱的准确性。3.4 翻译后修饰研究蛋白质的翻译后修饰(PTM)对于抗体药物的生物学功能十分重要。常见的翻译后修饰有:磷酸化、脱酰胺、甲硫氨酸氧化、糖基化修饰、N端焦谷氨酸环化,C端赖氨酸切除等。质谱分析仪检测蛋白和肽片段的分子量偏差,可以实现高灵敏、高通量和高精确地鉴别蛋白质的翻译后修饰的种类。3.5 N端氨基酸序列检测常规N端氨基酸检测用Edman降解法进行检测,但是抗体药物有时候会出现N 端环化的现象,在这种情况下用Edman降解法需要先对抗体进行去封闭处理,而直接使用质谱可以直接测出N端的氨基酸序列,同时可以检测出N端环化的相对比例。4.质谱技术在抗体药物高级结构分析中的应用4.1 氢/氘交换质谱(HDX-MS)常规的质谱只能获得蛋白的一级结构信息。氢/氘交换质谱(HDX-MS)可以进行蛋白质构象,溶液动力学和表位映射进行分析。在能够调查的蛋白质的高阶结构和动态结构技术中,HDX-MS已经证明适合单克隆抗体和单克隆抗体-抗原复合物的构象分析。4.2 离子淌度质谱法(IM-MS)离子淌度是根据蛋白的电荷和形状选择性分离的方法,可以区分相同分子量的蛋白和肽段,可用于检测蛋白的简单高级结构。4.3 高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱(FTICR-MS)高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱(FTICR-MS)能够检测最高质量数的质谱仪器,并且有着很高的分辨率。FTICR-MS 是目前被公认为是蛋白质组学研究的有力工具,特别是和完整的蛋白质鉴定和上/下调翻译后修饰(PTM)蛋白质的鉴定。

  • 【资料】质谱分析的发展(共1讲)

    [B][center]质谱分析的发展 [/center][/B] 质谱分析本是一种物理方法,其基本原理是使试样中各组分在离子源中发生电离,生成不同荷质比的带正电荷的离子,经加速电场的作用,形成离子束,进入质量分析器。在质量分析器中,再利用电场和磁场使发生相反的速度色散,将它们分别聚焦而得到质谱图,从而确定其质量。第一台质谱仪是英国科学家阿斯顿(F.W.Aston,1877—1945)于1919年制成的。出手不凡,阿斯顿用这台装置发现了多种元素同位素,研究了53个非放射性元素,发现了天然存在的287种核素中的212种,第一次证明原子质量亏损。他为此荣获1922年诺贝尔化学奖。质谱仪开始主要是作为一种研究仪器使用的,这样用了20年后才被真正当作一种分析工具。它最初作为高度灵敏的仪器用于实验中,供设计者找寻十分可靠的结果。早期的研究者们忙着测定精确的原子量和同位素分布,不能积极地去探索这种仪器的新用途。由于同位素示踪物研究的出现,质谱仪对分析工作的用处就越发变得明显了。氮在植物中发生代谢作用的生物化学研究要求用15N作为一种示踪物。但它是一种稳定的同位素,不能通过密度测量来精确测定,所以质谱仪就成了必要的分析仪器。这种仪器在使用稳定的13C示踪物的研究中以及在基于稳定同位素鉴定的工作中也是很有用的。标准型的质谱仪到现在已经使用了大约45年。40年代期间,石油工业在烃混合物的分析中开始采用质谱仪。尽管这种质谱图在定量解释时存在着难以克服的计算麻烦,但在有了高速计算机后,这种仪器就能在工业方面获得重大的成功。(1)近20年来质谱技术随着新颖电离技术,质量分析技术,与各种分离手段的联用技术以及二维分析方法的发展,质谱已发展成为最广泛应用的分析手段之一。其最突出的技术进步有以下几个方面:新的解吸电离技术不断涌现,日趋成熟,可测分子量范围越来越高,并逐步适用于难挥发、热敏感物质的分析,例如海洋天然产物、微生物代谢产物,动植物二次代谢产物以及生物大分子的结构研究。最有发展前景的电离方法有:①等离子解吸采用252Cf的裂介碎片作为离子源,使多肽和蛋白质等生物大分子不必衍生化而直接电离进行质量分析。它与飞行时间质谱相配合,已成功地用于许多合成多肽的质谱分析,并已在一些实验室中作为常规分析方法来鉴定多肽和蛋白质。目前它的可分析的质量极限大约是50000D。②快原子轰击,把样品分子放入低挥发性液体中,用高速中性原子来进行轰击,可使低挥发性的,热敏感的分子电离,得到质子化或碱金属离子化的分子离子。由于很容易在磁质谱或四极杆质谱上安装使用,因此得到广泛应用,分子量很容易达到3000—4000。如果与带有后加速的多次反射阵列检测器的高性能磁质谱配合使用,可测分子量可达到10000amn以上,最高记录可达25000amn。③激光解吸,利用CO2激光(10.6μm),Nd/YAG激光(1.06μm)的快速加热作用使难挥发的分子解吸电离,与飞行时间质谱或离子回旋共振质谱相配合成功地分析了一系列蛋白质和酶的复合物,并创造了蛋白质分子质量分析的最高记录(Jack Bean Urease Mr~27万)。④电喷雾(electro spray,electrostatic spray,ion spray)把分析样品通过常压电离源,使分子多重质子化而电离。由于生成多重质子化的分子离子可缩小质荷比,因此一个分子量为数万的生物大分子,如果带上几十个,上百个质子,质荷比可降低到2000以下,可以用普通的四极杆质谱仪分析,其次由于得到一组质荷比连续变化的分子离子峰,通过对这些多电荷分子离子峰的质量计算可以得到高度准确的平均分子量。第三是这种多重质子化的分子离子峰可进一步诱导碰撞活化,进行串联质谱分析。第四是这种电离技术的样品制备要求极低,溶于生物体液的样品分子或HPLC,CZE的流出液都可直接引入常压电离源进行联机检测。(2)各种联用技术。色谱、电泳等分离方法与质谱分析相结合为复杂混合物的在线分离分析提供了有力的手段,GC—MS联用技术的应用已得到充分的证明。近年来把液相色谱、毛细管电泳等高效分离手段与质谱连接已在分析强极性、低挥发性样品的混合物方面也取得了进步。主要的接口技术有:①粒子束(particle beam),它能把液相色谱与质谱连接起来,其优点是得到的质谱与普通的EIMS谱十分接近,因此可以用标准谱库的数据去检索。缺点是要耗用大量的氦气,并且只能分析中等极性和中等分子量(2000以下)的分子。②热喷雾(thermospray),是目前与HPLC连接最广泛使用的接口技术。它是一种软电离技术,可测的分子量上限大约为8000amn,缺点是流速需要0.12ml/min,对于质谱分析来说仍嫌太大。③连续流快原子轰击(CF—FAB),利用适当孔径的石英毛细管把液相色谱的流出液直接引入FAB电离源,进行连续的FAB—MS分析。由于它的流速小于5μl/min,与质谱仪更为匹配,因此具有更大的应用潜力。④电喷雾。由于采用常压电离源,因此很容易把微细径柱液相色谱,甚至普通液相色谱(只要有适当的分流装置)通过它与质谱连接起来。最近藉此把毛细管区带电泳与质谱连接起来也取得了成功,实现了高灵敏度(10-15mol),高分离效力(25万理论塔板数)的联用分析。这是一种极有希望,并很有发展前途的联用技术。(3)串联质谱等二维质谱分析方法。如果把二台质谱仪串联起来,把第一台用作分离装置,第二台用作分析装置,这样不仅能把混合物的分离和分析集积在一个系统中完成,而且由于把电离过程和断裂过程分离开来,从而提供多种多样的扫描方式发展二维质谱分析方法来得到特定的结构信息。本法使样品的预处理减少到最低限度,而且可以抑制干扰,特别化学噪音,从而大大提高检测极限。串联质谱技术对于利用上述各种解吸电离技术分析难挥发、热敏感的生物分子也具有重要的意义。首先解吸电离技术一般都使用底物,因此造成强的化学噪音,用串联质谱可以避免底物分子产生的干扰,大大降低背景噪音,其次解吸电离技术一般都是软电离技术,它们的质谱主要显示分子离子峰,缺少分子断裂产生的碎片信息。如果采用串联质谱技术,可使分子离子通过与反应气体的碰撞来产生断裂,因此能提供更多的结构信息。近年来把质谱分析过程中的电离和碰撞断裂过程分离开来的二维测定方法发展很快,主要的仪器方法有以下几种。①串联质谱法(tandem MS),常见的形式有串联(多级)四极杆质谱,四极杆和磁质谱混合式(hybride)串联质谱和采用多个扇形磁铁的串联磁质谱。②傅里叶变换质谱(FT—MS),又叫离子回旋共振谱,它利用电离生成的离子在磁场中回旋共振,通过傅里叶变换得到这些离子的质量谱,这种谱仪过去由于电离造成真空降低与回旋共振要求高真空条件相矛盾,性能不能过关。近年来由于分离电离源技术日趋成熟,这种分析方法得到较大发展,它的优点是很容易做到多级串联质谱分析,目前可分析质量范围已达5万左右,分辨力也可达1万。③整分子气化和多光子电离技术(LEIM—MUPI),它是在微激光解吸电离技术的发展中最近出现的一种新方法。它把解吸和电离二个环节在时间和空间上分离开来,分别用二个激光器进行解吸和电离。使用红外激光器来实现整分子气化,使用可调谐的紫外激光器对电离过程实行宽范围的能量控制,从而得到从电离(只显示分子离子)到各种程度不同的硬电离质谱,并成功地用于生物大分子的序列分析。

  • 求助正离子质谱分析产物结构与底物对比

    求助正离子质谱分析产物结构与底物对比

    [color=#444444]如题 直接上图,预测的物质与质谱分析的结构有差异,请帮助分析下,谢谢!!![/color][color=#444444]底物ST:分子量是324,底物的结构见图底物;[/color][color=#444444]产物分子量是:352,质谱图见产物图;[/color][color=#444444]请问:产物如果是双羟基化合物或者是开环物(二者的分子量都是358),分子量与分离的产物的正离子-MS所示的分子量(352)不是很符合,请指教。[/color][color=#444444]因为产物的积累量不够,还没有作核磁,先把MS图贴上,请大神给分析分析,或者能帮着分析下可能的产物结构,谢谢。[/color][color=#444444][img=,690,426]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091002250247_7652_1843534_3.jpg!w690x426.jpg[/img][/color][color=#444444][color=#008000]底物:MW=324,结构如图,已知[/color][/color][color=#444444][color=#008000][img=,690,409]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909091002449526_3497_1843534_3.jpg!w690x409.jpg[/img][/color][/color][color=#444444][color=#008000][color=#008000]产物的MS:MW=352,结构可能是ST-二羟基化合物或者是开环物(自己猜的)[/color][/color][/color]

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