色谱原理分子量

凝胶渗透色谱仪原理测试原理 和分子量导出原理及程序

请问GPC测高分子分子量分布的原理是？

1分离原理　　让被测量的高聚物溶液通过一根内装不同孔径的色谱柱，柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙（较大）和粒子内的通孔（较小）。当聚合物溶液流经色谱柱时，较大的分子被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多。经过一定长度的色谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面（即淋洗时间短），相对分子质量小的在后面（即淋洗时间长）。自试样进柱到被淋洗出来，所接受到的淋出液总体积称为该试样的淋出体积。 当仪器和实验条件确定后，溶质的淋出体积与其分子量有关，分子量愈大，其淋出体积愈小。　　（1） 体积排除 　　（2）限性扩散 　　（3） 流动分离 校正原理　　用已知相对分子质量的单分散标准聚合物预先做一条淋洗体积或淋洗时间和相对分子质量对应关系曲线，该线称为“校正曲线”。聚合物中几乎找不到单分散的标准样，一般用窄分布的试样代替。在相同的测试条件下，做一系列的GPC标准谱图，对应不同相对分子质量样品的保留时间，以lgM对t作图，所得曲线即为“校正曲线”。通过校正曲线，就能从GPC谱图上计算各种所需相对分子质量与相对分子质量分布的信息。聚合物中能够制得标准样的聚合物种类并不多，没有标准样的聚合物就不可能有校正曲线，使用GPC方法也不可能得到聚合物的相对分子质量和相对分子质量分布。对于这种可以使用普适校正原理。

本人凝胶色谱新手，在做一个项目，需要用凝胶色谱。美国药典论坛上已有方法，重复了人家方法发现有些地方不对，撇开这些不谈，先说说我的疑问吧！1 美国药典上的流动相加了0.1M的硝酸钾，我试了一针加的，一针不加的，发现不加盐峰会前沿，加盐的峰很对称，请问在凝胶色谱里加盐的目的除了改善峰形还有什么作用吗？我更好奇的是盐是通过什么原理来改善峰形的？2 还有一个很奇怪的现象，我的样品和两个杂质出峰时间重叠，即专属性不合格，这三种物质虽然都是钠盐，但大家请注意样品的分子量范围是1000-2000，而两个杂质的分子量一个是100多，一个是300多，就是说在分离原理为分子排阻的凝胶色谱里，分子量1000多的和100,300的一起出峰，改变流动相（换过纯水，也试过加大有机相比例）变化并不明显，这是为什么呢？难道现在的凝胶色谱已经不是单纯的分子排阻原理了，还是说样品的出峰时间除了和分子量有关，还和他们的水溶性有关？这两个问题快把我折磨疯了，请高手解答！

凝胶色谱仪的原理?是基于分子筛原理，利用不同分子量的物质在凝胶孔隙中的渗透速度不同来实现分离。具体来说，当样品进入凝胶色谱柱时，较大的分子（体积大于凝胶孔隙）会被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多；中等体积的分子可以渗入较大的孔隙中，但受到较小孔隙的排阻，介乎上述两种情况之间。 凝胶色谱仪的工作机制可以进一步解释为：样品通过凝胶柱时，按分子的流体力学体积不同进行分离，大分子先流出，而小分子则会在色谱柱中滞留更长时间，最后流出。这种分离机制使得凝胶色谱仪能够根据分子量差异对各组分进行分离。 此外，凝胶色谱仪的检测系统包括通用型检测器、示差折光仪检测器、紫外吸收检测器、粘度检测器等多种检测器，适用于所有高聚物和有机化合物的检测。 凝胶色谱仪的应用包括水性和油性高分子聚合物的分子量大小及分子量分布检测，以及糖类、醇、脂肪酸、脂类的定性定量分析。

凝胶色谱法GPC[b]分析原理：[/b]样品通过凝胶柱时，按分子的流体力学体积不同进行分离，大分子先流出[b]谱图的表示方法：[/b]柱后流出物浓度随保留值的变化[b]提供的信息：[/b]高聚物的平均分子量及其分布根据所用凝胶的性质，可以分为使用水溶液的凝胶过滤色谱法(GFC)和使用有机溶剂的凝胶渗透色谱法(GPC)。

是第一次做液质，得到了结果，可是有些地方不知道怎样去分析和考虑，比如有些对应单个总离子流色谱峰的分子量和对应液相色谱峰的分子量不一致，请教各位前辈，为什么会出现这种情况，怎么样去解决？我检测的过程中出现两个峰对应同一分子量的情况，无法确定化合物名称，我做的的类黄酮，可能是因为其中的羟基取代位置不同造成的，请问除了对应标准品的保留时间外，用什么仪器或者方法可以区分两者？先谢谢各位！

我们学习分离血红蛋白时，书上提到凝胶色谱法分离蛋白质原理是蛋白质分子量大小不同导致有些蛋白质能进入凝胶颗粒，另一些不能，所以迁移速度不同，将分子量不同的蛋白质分离。既然这样，那为什么不是因为蛋白质分子大小不同呢？ [b]问题补充：[/b]关键在于为什么是根据蛋白质分子量大小而不是蛋白质分子大小（所占空间）分离呢 小分子蛋白可以在小孔内穿过 从而增加了分离时所走的路程 最后被分离。大分子蛋白主要是通过凝胶颗粒之间的空隙通过 因此路线相对较短最先被分离。 只是做题时这一题选分子量而不选分子大小

本人凝胶色谱新手，在做一个项目，需要用凝胶色谱。美国药典论坛上已有方法，重复了人家方法发现有些地方不对，撇开这些不谈，先说说我的疑问吧！1 美国药典上的流动相加了0.1M的硝酸钾，我试了一针加的，一针不加的，发现不加盐峰会前沿，加盐的峰很对称，请问在凝胶色谱里加盐的目的除了改善峰形还有什么作用吗？我更好奇的是盐是通过什么原理来改善峰形的？2 还有一个很奇怪的现象，我的样品和两个杂质出峰时间重叠，即专属性不合格，这三种物质虽然都是钠盐，但大家请注意样品的分子量范围是1000-2000，而两个杂质的分子量一个是100多，一个是300多，就是说在分离原理为分子排阻的凝胶色谱里，分子量1000多的和100,300的一起出峰，改变流动相（换过纯水，也试过加大有机相比例）变化并不明显，这是为什么呢？难道现在的凝胶色谱已经不是单纯的分子排阻原理了，还是说样品的出峰时间除了和分子量有关，还和他们的水溶性有关？3 还有一个现象我不能理解，就是走空白，也就是流动相的时候会出现一些溶剂峰，走样品的时候也会出现溶剂峰，但是样品中的溶剂峰的响应要比溶剂峰里的高多了，这是怎么回事呢？这几个问题快把我折磨疯了，请高手解答！！

gpc测分子量的原理

凝胶色谱一般是在高分子方面应用的。有没有能用于小分子量化合物（分子量1000以下的）的凝胶色谱柱？上海哪所高校，研究所有呢？

刚接触GPC，公司也没有什么资料，只是保留了以前多糖分子量的谱图，以前测得多糖分子量几万，现在通过标曲再定量分子量只有几千，测灵芝多糖用什么色谱条件比较好啊，以前的要调PH，现在我查文献磷酸盐调PH检测也达不到之前的分子量，双蒸水走出峰是早了，但是分不开。色谱柱型号是Ultrahydrogel 120,Ultrahydrogel 250,Ultrahydrogel 500,三根色谱柱串联，流速是0.8ml/min.温度35度，2414示差检测器，求大神指导迷津。

[color=#444444][color=#444444]我做的是多糖，当时做的时候只通过标准品算出了样品的重均分子量，不知道怎么做出数均分子量和峰位分子量，我看的文献中有提到，用随机的Breese软件分析可以得到，请教一下大家，是不是所有的高效液相色谱都带有Breese软件？还是值要是高效液相色谱，不管用什么软件都可以算出这两个结果呢？希望大家帮忙[/color][/color]

做多糖（平均分子量300，000-500，000）的分子量与分子量分布测定，应该选用什么样的凝胶色谱柱？

前一段时间，我在做GPC时，由于柱子的问题，该物质分子量分布虽然正常，但是不同的分子量的物质的分离度并不理想。比如做聚砜分子量分布，流动相为DMF-氯仿，分离度不佳。在反相色谱中，为了增加分离度，可以向流动相中加水。那么，GPC方法如何改变流动相，才能使不同分子量的聚合物分离度提高呢？多谢指教！

请问　用液相色谱测分子量的时候　　检测器是示差检测器　　　　　出峰时间反映分子量　　　　那出峰的峰面积比值是否反映各个组分的含量呢谢谢哦～～～～

小弟新接一工作，需确定一发酵液中蛋白质的分子量，大体在10000Da以下，需新购一批蛋白质标准品和色谱柱，但不知那种色谱柱合适，不知各位前辈能不能给点建议。

凝胶色谱测分子量可以用糖柱吗？DMF相凝胶色谱可不可以测水相？

液相色谱-质谱联用(lc/ms)的原理及应用液相色谱—质谱联用的原理及应用 简介 色谱质谱的在线联用将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析。而且也简化了样品的前处理过程，使样品分析更简便。 色谱质谱联用包括[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]质谱联用(GC-MS)和液相色谱质谱联用([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]互为补充，分析不同性质的化合物。 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用[/color][/url]的区别: [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url](GC-MS)是最早商品化的联用仪器，适宜分析小分子、易挥发、热稳定、能气化的化合物；用电子轰击方式（EI）得到的谱图，可与标准谱库对比。 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]([url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url])主要可解决如下几方面的问题：不挥发性化合物分析测定；极性化合物的分析测定；热不稳定化合物的分析测定；大分子量化合物（包括蛋白、多肽、多聚物等）的分析测定；没有商品化的谱库可对比查询，只能自己建库或自己解析谱图。 现代有机和生物质谱进展 在20世纪80及90年代，质谱法经历了两次飞跃。在此之前，质谱法通常只能测定分子量500Da以下的小分子化合物。20世纪70年代，出现了场解吸（FD）离子化技术，能够测定分子量高达1500~2000Da的非挥发性化合物，但重复性差。20世纪80年代初发明了快原子质谱法（FAB-MS），能够分析分子量达数千的多肽。 随着生命科学的发展，欲分析的样品更加复杂，分子量范围也更大，因此，电喷雾离子化质谱法（ESI-MS）和基质辅助激光解吸离子化质谱法（MALDI-MS）应运而生。 目前的有机质谱和生物质谱仪，除了GC-MS的EI和CI源，离子化方式有大气压电离（API）（包括大气压电喷雾电离ESI、大气压化学电离APCI、大气压光电离APPI）与基质辅助激光解吸电离。前者常采用四极杆或离子阱质量分析器，统称API-MS。后者常用飞行时间作为质量分析器，所构成的仪器称为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）。API-MS的特点是可以和液相色谱、毛细管电泳等分离手段联用，扩展了应用范围，包括药物代谢、临床和法医学、环境分析、食品检验、组合化学、有机化学的应用等；MALDI-TOF-MS的特点是对盐和添加物的耐受能力高，且测样速度快，操作简单。 质谱原理简介： 质谱分析是先将物质离子化，按离子的质荷比分离，然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的的一种分析方法。以检测器检测到的离子信号强度为纵坐标，离子质荷比为横坐标所作的条状图就是我们常见的质谱图。 常见术语: 质荷比: 离子质量(以相对原子量单位计)与它所带电荷(以电子电量为单位计)的比值,写作m/Z. 峰: 质谱图中的离子信号通常称为离子峰或简称峰. 离子丰度: 检测器检测到的离子信号强度. 基峰: 在质谱图中，指定质荷比范围内强度最大的离子峰称作基峰. 总离子流图；质量色谱图；准分子离子；碎片离子；多电荷离子；同位素离子 总离子流图: 在选定的质量范围内，所有离子强度的总和对时间或扫描次数所作的图,也称TIC图. 质量色谱图 指定某一质量(或质荷比)的离子其强度对时间所作的图. 利用质量色谱图来确定特征离子，在复杂混合物分析及痕量分析时是LC/MS测定中最有用的方式。当样品浓度很低时LC/MS的TIC上往往看不到峰，此时，根据得到的分子量信息，输入M+1或M+23等数值，观察提取离子的质量色谱图，检验直接进样得到的信息是否在LC/MS上都能反映出来，确定LC条件是否合适，以后进行MRM等其他扫描方式的测定时可作为参考。 1.0 指与分子存在简单关系的离子，通过它可以确定分子量.[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]中最常见的准分子离子峰是[M+H]+ 或[M-H]- . 在ESI中, 往往生成质量大于分子量的离子如M+1,M+23,M+39,M+18......称准分子离子,表示为:[M+H]+,[M+Na]+等碎片离子： 准分子离子经过一级或多级裂解生成的产物离子. 碎片峰的数目及其丰度则与分子结构有关,数目多表示该分子较容易断裂,丰度高的碎片峰表示该离子较稳定,也表示分子比较容易断裂生成该离子。 Ephedrine, MW = 165 多电荷离子： 指带有2个或更多电荷的离子,常见于蛋白质或多肽等离子.有机质谱中,单电荷离子是绝大多数,只有那些不容易碎裂的基团或分子结构-如共轭体系结构-才会形成多电荷离子.它的存在说明样品是较稳定的.采用电喷雾的离子化技术, 可产生带很多电荷 的离子,最后经计 算机自动换算成单 质/荷比离子。

凝胶渗透色谱是怎么测分子量的？

凝胶色谱测分子量可以用糖柱吗？

用液相色谱测分子量的时候　　检测器是示差检测器　　　　出峰时间对应分子量　　　　出峰的峰面积不反映各个组分的含量　我知道了那如果换成紫外检测器呢　　　那出峰的峰面积大小与各个组分的含量　是否有关呢？？？

串联色谱柱分子量大的在前还是在后？

上传一个附件：关于光散射测定高聚物分子量的原理的笔记。欢迎来讨论。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=20753]光散射测定高聚物分子量的原理[/url]

高效液相色谱测定明胶分子量的方法？？要选用什么样的流动相、缓冲溶液、还有标准曲线用什么样的标准物质？？可以的话最好有具体的步骤

[color=#444444]想用高效液相色谱表征蛋白质分子交联前后分子量的变化。[/color][color=#444444] 蛋白质的分子量在2.5-10万之间，资料上建议用C4的柱子。[/color][color=#444444] 不知道流动相和PH值怎么选择。[/color][color=#444444] 第一次用HPLC，急求大神们的帮助！！！！！！！！！！！！！[/color]

有没有做液相色谱时用GPC凝胶色谱柱测多肽分子量的流程，谢啦！

我准备用高效液相色谱测酶水解蛋白的肽的分子量（小于1万道尔顿），应该用凝胶柱吧，不知哪种型号的好些呢？洗脱液用什么呢？可以用蒸馏水么？另外如果是液相的半制备，制备量大概是多少呢？

[color=#444444]想用高效液相色谱表征蛋白质分子交联前后分子量的变化。[/color][color=#444444] 蛋白质的分子量在2.5-10万之间，资料上建议用C4的柱子。[/color][color=#444444] 不知道流动相和PH值怎么选择。[/color][color=#444444] 第一次用HPLC，急求大神们的帮助！！！！[/color]

请教本人想用凝胶色谱法分析褐藻胶（褐藻酸钠）的分子量，据说褐藻胶对凝胶柱损伤大，做十几个样品柱子基本就废了，是这样吗？请高人指点！