质谱样品酶解法

hey，大家好，不知道这里有没有蛋白组实验室的，想交流一下关于质谱性能测试样品的选择。我指的不是校正液哦。一般我们实验室就是平常自己BSA酶切后上质谱来看多肽峰的丰度，保留时间，当然搜库后还可以看看序列覆盖度等。有时评估一些前处理的技术有时也会用到BSA酶切后的多肽。我想问一下国内有没有卖已经酶切好的BSA？或者有没有比较便宜的TPCK-trypsin可以买？ 老是用promega的质谱级胰酶切BSA感觉有点贵。谢谢了！

质谱为什么对某些样品响应低？而对某些响应好，和电离能有关还有其他因素没

[color=#444444][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]-质谱联用样品前处理，我的样品为洗煤滤液，想测试下其中的有机物含量，想知道怎么样萃取出来[/color]

[align=center]【我们不一YOUNG】淀粉的测定--酶水解法[/align]（一） 原理[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/07/202407261509074564_753_1615838_3.png[/img]（二）适用范围及特点 因为淀粉酶有严格的选择性、只水解淀粉而不会水解其他多糖，水解后通过过滤可除去其他多糖。所以该法不受半纤维素、多缩戊糖、果胶质等多糖的干扰，适合于这类多糖含量高的样品，分析结果准确可靠，但操作复杂费时。（三）说明与讨论酶水解开始要使淀粉糊化 将烧杯置沸水浴上加热15分钟，冷至60℃以下，然后再加入20mL淀粉酶溶液，在55—60℃保温1小时，并不时搅拌。 取1滴此液于白色点滴板上，加1滴碘液应不呈蓝色，若呈蓝色，再加热糊化，冷却至60℃以下，再加20mL淀粉酶溶液，继续保温，直至酶解液加碘液后不呈蓝色为止，加热至沸使酶失活，冷却后移入250mL容量瓶中，加水定容。混匀后过滤，弃去初滤液，收集滤液备用。淀粉糊化——淀粉吸水溶胀，破坏晶格结构，变成粘度很大的淀粉糊，使其易被淀粉酶作用。糊化 = α－化糊化度又称α－化度酶水解未糊化淀粉速度：酶水解糊化淀粉速度= 1：20000 方便快餐食品经α－化后，复水性强，好消化。 方便面检测项目中有α－化度的测定。淀粉α化度的测定原理：已糊化的淀粉，在淀粉糖化酶的作用下，可水解为还原糖， α化度越高，即糊化的的淀粉越多，水解后生成的糖越多。先将样品充分糊化，经淀粉糖化酶水解后，用碘量法测糖含量。以此作为标准，糊化程度为100%。然后另取样品，不糊化，用淀粉糖化酶直接水解，用同样方法测定糖含量，通过计算可求出被测样品的相对糊化程度，即样品的α化度。

各位老师好！icp oes测有机磷样品磷含量，前处理用微波消解法会导致磷元素损失严重吗？另外在测试的时候磷应该选哪条谱线？

[color=#444444]打算过色谱柱研究一个盐酸多巴胺的破坏杂质，液相上有色谱峰响应，峰高大概8mAu左右，因为极性和分离的原因，流动相是纯水相10mM醋酸铵，进质谱后发现所有样品TIC结果基本都一样，包括破坏的，没破坏的和空白的样品，正负离子模式结果也一样，目标杂志没响应，请问谁知道该怎么做吗？增大浓度和在流动相里加点甲酸看能不能提高响应？[/color]

[color=#444444]请问质谱跑hela酶解液，出现的特征多肽峰及分子量（1-2条就可以），谢谢！[/color]

仪器分析中样品前处理处于极其重要的地位，本方法摒弃了传统的电热板加热法，采用常见的超声仪来分解样品，具有实用性与独创性，本视频介绍了全封闭超声分解法的工作原理，仪器组成，实用优点，实际演示了日常分析中

[color=#444444]打算过色谱柱研究一个盐酸多巴胺的破坏杂质，液相上有色谱峰响应，峰高大概8mAu左右，因为极性和分离的原因，流动相是纯水相10mM醋酸铵，进质谱后发现所有样品TIC结果基本都一样，包括破坏的，没破坏的和空白的样品，正负离子模式结果也一样，目标杂志没响应，请问谁知道该怎么做吗？增大浓度和在流动相里加点甲酸看能不能提高响应？[/color]

质谱技术是抗体药物分析最重要的技术手段之一。本文简述了抗体药物的发展和质谱技术的原理。对于质谱技术在抗体药物的分析中应用进行了归类整理，主要分为在一级结构和高级结构分析中的应用。抗体类药物是指含有抗体片段的蛋白类药物，所以在恶性肿瘤、自身免疫性疾病、心血管疾病、感染和器官移植排斥等重大疾病上得到了快速的发展，是当前生物药物领域增长最快的一类药物.1.抗体药物发展新趋势在生物药物领域，抗体药物占据着越来越重要的地位，全球销售排名前10位的药物中有6个为抗体药物，抗体药物按来源分类可以分为：鼠源单克隆抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体和全人源抗体。目前，批准的单克隆抗体药物中，人源化单抗和全人源单抗数量已占据大多数。1.1 抗体药物偶联物（ADC）抗体药物偶联物（ADC）由单克隆抗体和小分子化合物两部分组成。通过抗体的靶向作用，ADC 的抗体部分和肿瘤细胞表面抗原特异性识别并结合，通过细胞内吞作用，将抗体和小分子化合物一起带进肿瘤细胞内部，释放出小分子化合物。这样既可以降低小分子药物的毒性，同时具有靶向结合的作用。已经上市的两个ADC 是Kadyla 和Adcetris。1.2 双特异性抗体（BsAb）双特异性抗体（BsAb）是含有两种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子（细胞）之间架起桥梁，由于基因工程的发展，目前双特异性抗体已经研发出多种类型，主要类型有三功能双特异性抗体、IgG-scFv、三价双特异性分子、串联单链抗体（串联scFv）、DVD-Ig 等多种形式。2.质谱技术近年来质谱仪性能的显著改进主要基于开发出的两种离子化技术：一种是介质辅助的激光解吸/离子化技术。另一种是电喷雾离子化技术。由于这两种电离技术的出现，使原本只能检测小分子的质谱技术，可以运用于检测生物大分子。在过去质谱技术主要运用于对一级结构和序列的表征，而现在质谱技术越来越多地运用于高级结构的分析，而高级结构对于抗体药物的生物活性至关重要。3.质谱技术在抗体药物一级结构分析中的应用3.1 完整抗体药物精确分子量测定当得到抗体药物时，可以直接通过高分辨率的MALDI-TOF或者ESI-MS进行分子量的检测。通过对于脱糖后分子量的检测，可以对于抗体药物进行初步定性分析，并将可以作为药物常规放行的分析方法。对于脱糖前的抗体药物进行分析，可以得到抗体药物的糖基化类型的信息及糖基化水平的分布，对于快速了解生产工艺与药物质量的关系具有十分重要的意义。3.2 药物抗体偶联比（DAR）对于赖氨酸链接的抗体偶联药物，采用C4色谱柱及联用的质谱对去糖基化样品进行分析，根据偶联不同数目药物分子的质量数增加判断偶联数目。对于质谱测定的结果，不仅可以给出确切的药物抗体偶联比值，更能够给出链接不同个小分子药物的分布情况，及反应过程副产物空链接头的分布情况。3.3 肽图谱分析蛋白被特异酶切后的蛋白酶水解后得到的肽片段质量图谱。由于不同的抗体药物具有不同的氨基酸序列，蛋白质被酶水解后，产生的肽片段也各不相同，肽混合物的质量数具有唯一特征。可以通过LC-ESI-MS进行肽片段的一级质量数的鉴定，也可以通过LC-ESI-MS/MS对于每个肽片段进行进一步确证，提高肽图谱的准确性。3.4 翻译后修饰研究蛋白质的翻译后修饰（PTM）对于抗体药物的生物学功能十分重要。常见的翻译后修饰有：磷酸化、脱酰胺、甲硫氨酸氧化、糖基化修饰、N端焦谷氨酸环化，C端赖氨酸切除等。质谱分析仪检测蛋白和肽片段的分子量偏差，可以实现高灵敏、高通量和高精确地鉴别蛋白质的翻译后修饰的种类。3.5 N端氨基酸序列检测常规N端氨基酸检测用Edman降解法进行检测，但是抗体药物有时候会出现N 端环化的现象，在这种情况下用Edman降解法需要先对抗体进行去封闭处理，而直接使用质谱可以直接测出N端的氨基酸序列，同时可以检测出N端环化的相对比例。4.质谱技术在抗体药物高级结构分析中的应用4.1 氢/氘交换质谱（HDX-MS）常规的质谱只能获得蛋白的一级结构信息。氢/氘交换质谱（HDX-MS）可以进行蛋白质构象，溶液动力学和表位映射进行分析。在能够调查的蛋白质的高阶结构和动态结构技术中，HDX-MS已经证明适合单克隆抗体和单克隆抗体-抗原复合物的构象分析。4.2 离子淌度质谱法（IM-MS）离子淌度是根据蛋白的电荷和形状选择性分离的方法，可以区分相同分子量的蛋白和肽段，可用于检测蛋白的简单高级结构。4.3 高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱（FTICR-MS）高分辨率傅立叶变换离子回旋共振质谱（FTICR-MS）能够检测最高质量数的质谱仪器，并且有着很高的分辨率。FTICR-MS 是目前被公认为是蛋白质组学研究的有力工具，特别是和完整的蛋白质鉴定和上/下调翻译后修饰（PTM）蛋白质的鉴定。

[color=#444444]请问一下，在[/color][color=#444444]GB/T5009.9-2008[/color][color=#444444]中，第一法酶水解法中有两个公式，第二个公式是关于试样中淀粉含量的计算公式，我始终没弄懂，适中的[/color][color=#444444]A1[/color][color=#444444]和[/color][color=#444444]A2[/color][color=#444444]是怎么求出来的？标准上说，[/color][color=#444444]A1—[/color][color=#444444]测定用试样中葡萄糖的质量[/color][color=#444444] A2—[/color][color=#444444]空白中葡萄糖的质量。难道是通过第一个公式计算得出来的吗，如果是的话不就相当于进行了二次计算，也要进行二次修约了吗，结果会不会不准确啊[/color][color=#444444]......[/color][color=#444444]拜托各位大侠帮忙解释一下[/color][color=#444444].[/color][color=#444444]感激涕零[/color]

土壤样品中铅和镉的微波消解法研究

使用PE claurs 500 GCMS仪器，请问有办法在MS的质谱数据库加入自己样品的质谱图吗，以方便之后进行搜寻比对。即A样品是原本MS数据库里所没有的，我们打入A样品的标准品后得到MS图，想建立到MS数据库中，下次再有其它样品含有A样品时就可以从图库中搜寻到，得知是含有A样品。

微波消解法空白试验比样品结果高?是消解罐污染吗？

请问，做质谱分析时为什么有部分样品老是有残留，多次洗都洗不干净，是和样品的粘度有关，还是和样品在质谱中易电离有关，哪些样品容易有这种残留，我用的是ESI+四极杆质谱仪，常分析多肽及保护氨基酸类样。

如果质谱关机前没卸真空，会有什么影响，突然想到这个问题，又不是特别清晰，求正解！

怎么让样品进入质谱的时间提前呢，现在2分钟才进，没有峰了[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208091034458919_2375_5428127_3.png[/img]

去年寒假前仪器关机休息，今年开学后开机实验，发现无论是空白还是样品，出来的质谱图都是一样的。去年做还是好的，条件也没有变化，真是晕。要是样品没有进去，那出来的质谱图又是什么物质的？我用的是QP-2010

通过使用干燥剂，TCD测得样品中水分浓度32mg/ml（约3%），这么大的值能上质谱（安捷伦6890-5973N）吗？如果不能，那么水分含量要降到什么程度才适宜上质谱，比如10mg/mL，还是其它的浓度？刚才稀释了10倍样品，测得水分含量0.9%左右，这样的值能经常上质谱吗？假如进样1uL，不检测溶剂和水分峰，这样会对仪器部件，比如离子源、柱子有伤害吗？急盼回答！

请问，我在做蛋白质谱的过程中，酶切膜蛋白时，总有一些序列cover不到（哪怕胶内酶解PSM很高时，也没有改善）。请教有没有大佬传授一些经验，谢谢

761处理的样品可以上质谱吗?

高分辨质谱需要多少样品

[color=#444444]最近分离出了一个样品，比较常用的有机溶剂如醇，乙酸乙酯，乙腈等都不能溶解，目前只发现其容易溶于DMSO和吡啶中，请问各位，这两种溶剂能进质谱么？是直接进样的那种。[/color][color=#444444] 还有就是各位能不能顺带把能进质谱的溶剂列举一下，万分感谢！[/color]

[font=仿宋_GB2312][size=21px][color=#6b6b6b]锰的分析测试方法是否可以组合：前段用《土壤和沉积物金属元素总量的测定微波消解法》（HJ832-2017），后段用《固体废物金属元素的测定[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/yp][color=#3333ff]电感耦合等离子体质谱[/color][/url]法》（HJ766-2015）？[/color][/size][/font]

代咨询下各位鱼粉中砷和汞的测定样品前处理能否用微波消解法?谢谢！

有做过毛细管电泳接峰进质谱的么？一般接几针可以质谱检测的到啊？怎么我做的样品接了10针，质谱还检测不到？样品浓度1mg/ml。是不是我根本没接到峰啊？怎么检查？谢谢大家！

为什么要经过质谱检测的样品不能含有金属离子、表面活性剂、磷酸盐、硼酸盐等不挥发盐？