多孔球悬浮填料

硅胶填料的全多孔和实心薄壳有什么区别？

1、 粒径一般认为，基质的颗粒形状和大小，主要影响流体动力学行为，影响分离效率。填料的粒径决定了填充液相色谱柱的柱效。从VanDeemter方程可知，在优化的流动相线速度下，最佳理论塔板高度为： H min=2.48 dp根据这一公式，可以计算出不同力度填料填装的柱子可获得的最大理论塔板数。例如，3um粒子可获得13.4万理论塔板/米，5um粒子可获得8万理论塔板/米。但是，小粒子填料容易造成柱压高、易堵塞、寿命较短。为保证一定的流动相线速度就得提高输液压力，虽然，大多数高效液相色谱仪的压力上限可允许达到42Mpa,但因长时间工作在高压状态下肯定会缩短输液泵及进样阀的使用寿命。为此，小粒径的柱子一般较短。2、 填料形状现在，10um以下的分析型柱多使用球形填料，而制备型的柱子则多选用无定形填料，因为无定形填料较为便宜且大粒度填料的粒间孔较大，所填装的柱子并不需太高的压力便能很好的运行。3、 孔径及孔径分布填料粒子的孔径及孔径分布，主要从三个方面影响反相色谱的色谱行为。首先，是孔径影响了粒子必表面积的大小，从而对配基的数量，即碳含量造成影响，它涉及到样品的负载量。其次，孔径的大小，从空间上必然对溶质的分子量大小有所限制。此外，孔的不均一性，及孔径分布，也会带来尺寸排阻效应。4、 比表面积 填料的多孔性，极大地增加其比表面积。对于无孔的小球，其比表面积是很小的。但是一旦具多孔性，则多孔微球的比表面积为球 外比表面积与孔内表面积之和。比表面积不同，其键合配基的量亦有所不同。所以，即使是以相同的反应条件制备的同样配基的反 相填料，也会有不同的保留行为。特定溶质的保留值随比表面积的增大而减少。 5、 基质硅胶的纯度硅胶基质上残存的硅羟基和杂质金属离子，共同造成了以硅胶为基质的反相填料的“次级保留行为”。较多的杂质金属离子，会使具有螯合作用的样品被吸附在柱子上。在生物医药体系的分离、分析中，经常会遇到强极性的溶质，他们在制造不良的反相色谱柱中，经常会因强烈的非特异性吸附而难以获得良好分离。究其原因，除孔径大小的因素外，最大的可能是硅胶表面的覆盖率低和基质含金属离子太多所致。

一般情况下，我们在购买色谱柱时，很少考虑色谱柱孔径方面的信息，其实，色谱柱填料孔径对分析也有些影响，具体如下：*HPLC吸附介质是多孔的颗粒，绝大多数的反应表面于孔内。因此，分析物必须进入孔内才能被吸附和分离*孔径小，含孔率高，则比表面积大，碳载量高，色谱柱分离性能也随之提高*另外，孔径大小必须和分子大小相匹配。一般情况下，分子量小于2000的分析物使用100 Å 或更小；分子量在2000-10000之间的分析物使用100-200 Å的填料；大于10000的包括多肽，蛋白质等需要选用300 Å或更大的孔径。为了达到最佳分离，一般要求孔径直径是分子直径的3倍以上

[font=none][font=none]答：现在多孔填料的[/font] 95%以上表面积在孔内部，这样只有分析目标物进入孔内，才能达到分析分离的目的。而只有样品分子直径小于平均孔径，才能进入微粒内部。对于小分子的反相分离，选择小孔径（60? ~120?）填料柱，对于小分子和多肽，使用100? ~150?，而只有当目标物的分子量大于2000 时我们才会选择300?孔径的填料。 [/font]

高效液相色谱(HPLC)不仅是一种有效的分析分离手段,也是一种重要的高效制备分离技术。色谱柱是HPLC系统的核心,不同性能的填料是HPLC广泛应用的基础。液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。　　正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3—10 μm的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。　　反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。　　常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 μm之间。1960年代，由于气相色谱对高沸点有机物分析的局限性，为了分离蛋白质、核酸等不易气化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱。1960年代末科克兰（Kirkland）、哈伯、荷瓦斯（Horvath）、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。　　1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书，标志着高效液相色谱法（HPLC）正式建立。在此后的时间里，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在医`学教育网搜集整理有机化学、生物化学、医学、药物开发与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛的应用。高效液相色谱同时还极大的刺激了固定相材料、检测技术、数据处理技术以及色谱理论的发展。　　1960年代前，使用的填充粒大于100μm，提高柱效面临着困境，后来的研究人员便采用微粒固定相来突破着一瓶颈。科克兰、荷瓦斯制备成功薄壳型固定相，这种在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄壳，实现了高速传质，为高效液相色谱技术的发展奠定了稳固的基础。随着填料粒径的降低，更高的柱效也得以实现。　　1960年代研制出气动放大泵、注射泵及低流量往复式柱塞泵，但后者的脉冲信号很大，难以满足高效液相色谱的要求。1970年代，往复式双柱塞恒流泵，解决了这一问题。1970年代后科克兰制备出全多孔球形硅胶医`学教育网搜集整理，平均粒径只有7μm，具有极好的柱效，并逐渐取代了无定形微粒硅胶。之后又制造出的键合固定相使柱的稳定性大为提高，多次使用成为可能。1970年后，适合分离生物大分子的填料又成为研究的热点。1980年后，改善分离的选择性成为色谱工作者的主要问题，因此改变流动相的组成提高选择性是关键。如今利用基于亚2μm填料的超高压液相色谱技术、基于核-壳型填料的快速分离技术、基于杂化硅胶填料的高温液相色谱技术等。硅胶经表面化学键合、聚合物包覆等有机改性可制得先进的大分子限进填料、温敏性填料、手性填料等,大大扩展了HPLC的应用范围，随着科学技术的进步填料的发展朝着多样性多功能的综合型方向发展。

现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对不同类型色谱柱填料的特点有一定的认识和了解。 一、硅胶基质填料1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基团(NH2,APS)和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene Chloride）等。2、反相色谱反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。 二、聚合物填料聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～14均可使用。相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。 三、其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化锆填料也可用于HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应用PH范围1～14，温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。

Kromasil是一种适合分析和工业化HPLC用的高性能多孔球型硅胶填料，它可以分离小分子化合物以及分子量几千的生物蛋白,例如分子量在5千的胰岛素,小分子多肽药物以及天然产物活性成分。　　Kromasil可以提供多种表面化学性能(C4，C8，C18，氰基，氨基，二元醇基，裸硅胶)及不同粒径的填料(5um,7um,10um,13um,16um)，应用于正相、反相、超临界流体色谱和手性色谱中。　　Kromasil耐碱的特性，所以可以多次用低浓度碱溶液清洗吸附在硅胶上的胰岛素的多聚体，通过多次再生，使它的寿命要远高于其他品牌填料。

在色谱研究的过程中，一定有遇到过市面上无法找到适用的色谱柱，符合要求的色谱柱需要定做，但是定做色谱柱费用大，对于可能只需要测定几次的样品来说十分不划算，因此需要自己寻找合适的填料进行自己手动安装的情况。这里，我来介绍一下我本人在自装填保护柱的过程中遇到的一些小问题以及解决方法。介绍一下装填背景，我需要装的填料是多孔石墨化碳，使用的柱子是AG-15的保护柱，目的是在线去除样品中的一些磺酸盐。接下来我来介绍一下装填步骤。首先，我们先将报废的AG-15保护柱的一端用扳子旋开，小心的保存它的垫片和一些组件。之后，将保护柱的另一端和高压色谱泵相连，流动相为水，将流速缓缓的提高，把保护柱的填料压出，保持流速一段时间后关闭。接着，进行对填料的预处理。因为我们需要对萘磺酸盐进行保留，因此查阅文献，需要最后使用高浓度的碱水溶液处理就可以。我们处理过程为：10%盐酸浸泡30min，超纯水浸泡10min，1mol/L氢氧化钠浸泡30min。每次浸泡后都有填料漂浮在溶液上，将他们倒出后再进行下一步处理。然后，我们来进行填料的湿法装填。首先需要找到一截比较粗的干净管路，我们使用的是用超纯水冲洗过的废液管，中间需要用各种大转小接头连接，之后先将填料吸入管中，将这根含有填料的管子装在挤出填料的保护柱前，将他们连接上高压泵。开启高压泵，记住将流速缓慢的提升，可以设置一个程序，将流速从0开始缓慢的提升至正常使用流速的3倍左右。保持装填柱在高流速下冲洗一个小时以上，保证填料挤压紧实。最后，将这根柱子的两端压上垫片，用扳手旋紧，之后就可以使用了。注意：1. 查阅文献，寻找目标填料的性质，是否需要进行一些特殊的预处理；2. 保护柱的组件一定要保存好，我在装填时就因为把垫片弄掉找了半天；3. 最重要的一点，在这里用仪器的分析泵，虽然最好用专门装柱的专用泵。分析泵能维持较高的流速，在较高流速下，才能有一定的压力，压紧填料。虽然这种装填简单，但在实际的使用过程中，效果良好。

高效液相色谱(HPLC)是一种现代分离、分析方法。20世纪60年代以来，HPLC作为一种分析技术在生命科学、环境科学、药物分析等领域的应用日益普遍。其中色谱填料可谓是色谱技术的核心，它不仅是色谱方法建立的基础，而且是一种重要的消耗品。色谱柱作为色谱填料的载体，当之无愧被称为色谱仪器的“心脏”。高性能的液相色谱填料一直是色谱研究中最丰富、最有活力、最富于创造性的研究方向之一。　　近年来，液相色谱填料技术呈现二大趋势。 第一个趋势是快速液相，利用亚 2um小粒径硅胶、核壳型硅胶；第二大趋势是越来越丰富的选择性。下面就这二大趋势做一个简单介绍。　　(一)快速液相色谱填料技术　　硅胶基质的色谱填料因为其优异的色谱性能是目前应用最为广泛的液相色谱填料，尤其是针对有机小分子的分离和分析，硅胶基质的色谱填料占据绝大多数的市场份额。最近10年，这个领域最激动人心的进展是基于以下二个方向的快速液相技术的发展。　　1、超高效液相色谱(UHPLC)填料技术　　从2004年Waters公司推出UPLC仪器，超高效液相色谱技术以其快速、高分离度和高灵敏度的优势得到了广泛的应用。而这种技术的核心是基于亚 2um小粒径硅胶的色谱填料。当填料颗粒小于2um时，不仅柱效明显提高，而且随着流速的增加，分离效率并不降低。采用高流速可将分离速度和峰容量扩展到一个新的极限，但同时柱压也显著升高。小粒径填料需要使用压力更高的超高效液相色谱仪系统，对色谱柱的生产工艺也有更高的要求，必须解决色谱柱的装填难度大、柱头容易漏液、填料容易堵塞等问题。目前，除了国际知名色谱仪器和色谱柱公司(如Waters、Agilent、Phenomenex)生产UHPLC色谱柱，国内的色谱柱厂家也陆续推出此类产品。虽然UHPLC仪器还是国际知名品牌垄断市场的情况， 但是国产的UHPLC色谱柱已经可以取代进口品牌。 图1为月旭公司Ultimate® XB-C18 UHPLC色谱柱(2.1×100 mm, 1.8um)对奶制品中黄曲霉毒素M 1、M 2测定的色谱图。http://bimg.instrument.com.cn/show/NewsImags/images/2014699042.jpg　　2、核壳型色谱填料　　核壳型(core-shell)色谱填料是由著名色谱科学家 Jack Kirkland 在2006年研制成功的一种新型色谱填料。它是将多孔硅壳熔融到实心的硅核表面而制备的。这些多孔的“光环”状颗粒具有极窄的粒径分布和扩散路径，可以同时减小轴向和纵向扩散，允许使用更短的色谱柱和较高的流速以达到快速、高分辨率分离。并且，核壳型色谱柱所产生的反压明显低于UHPLC色谱柱，低反压可以使仪器承受压力降低，使得在常规的液相仪上就能够实现超高效液相仪的分离效果。但是，核壳型色谱柱对仪器的柱外死体积要求高、且柱容量小于全多孔色谱填料，因而并不适用于大规模的制备液相分离需求。　　过去3-5年全球的色谱研究人员发表了大量的有关核壳型色谱填料的学术文章，但是其在工业界的应用是一个渐进式推进的过程，不会一下子大面积被采用。国内还没有报道有国内厂家生产核壳型填料。http://bimg.instrument.com.cn/show/NewsImags/images/2014699116.jpg　　(二)具有丰富选择性的色谱填料　　液相色谱技术的广泛应用也得力于近年来各种色谱填料技术的发展为色谱分离提供了越来越多样的选择性。近年来人们制备了大量的含有不同键合基团的色谱填料以增强色谱柱的选择性，从而满足实际样品分离的需要，例如亲水作用色谱(HILIC)填料、立体保护键合色谱填料、极性嵌入反相色谱填料、有机-无机杂化色谱填料、亲水性体积排阻色谱填料、混合模式色谱填料、手性色谱填料以及聚合物基质色谱柱填料等。　　1、HILIC色谱填料。它采用极性固定相和含有一定水的水溶性有机溶剂为流动相，不仅克服了正相色谱和反相色谱对极性化合物分离的不足，而且提供了与反相色谱截然不同选择性，在强极性和离子型化合物如氨基酸、碳水化合物和多肽等的分离中发挥着重要作用。并且，由于其流动相含有高浓度的有机溶剂，有利于增强电喷雾离子源质谱的离子化效率，进而提高其灵敏度，与质谱具有很好的兼容性。过去5-6年HILIC模式色谱柱的应用增长非常快。目前商品化的HILIC色谱填料种类繁多，基于硅胶基质的HILIC填料包括裸硅胶、氨基、氰基、二醇基、酰胺型以及两性离子型等。目前生产HILIC色谱填料的国内公司主要有月旭、艾杰尔、迪马以及赛分等公司。http://bimg.instrument.com.cn/show/NewsImags/images/2014699132.jpg　　2、极性嵌入反相色谱填料。它通过在硅胶键合烷基链的中下部镶嵌一些极性基团，如烷基胺、酰胺、季铵或者氨基甲酸酯等极性基团来降低未反应硅醇基活性和改善对极性化合物的保留能力。这种填料具有的最大优势是减少了填料表面游离硅羟基与碱性化合物间的“次级保留”作用，从而改善碱性化合物峰型的拖尾，而且由于极性基团的嵌入，增强了对极性化合物的保留，提供和普通C18很不一样的选择性。月旭公司的Ultimate® Polar-RP色谱柱装填的即为该类型色谱填料。　　3、立体保护键合相。它是在硅胶的烷基链侧链键合含异丙基和异丁基的C18固定相。由于在C18烷基链上引入了较大的基团以及立体效应，阻碍了硅醇基与分析物的相互作用，因而对碱性化合物的分离呈现出对称的峰型并具有良好的柱效，防止碱性化合物在色谱柱上的拖尾，并且在低pH值时有较高的水解稳定性。月旭Ultimate® LP色谱柱填充的即为此类型的色谱柱填料，特别适合在极低pH条件下(例如pH=0.8)分离极性化合物。此款色谱柱可以很好地取代市场上广泛应用的安捷伦 Zorbax SB 色谱柱。　　4、有机-无机杂化色谱填料。它是在超高纯全多孔硅胶微球基质表面涂覆一层厚度均匀的有机-无机杂化层，进而提高填料的pH耐受范围和应用能力的一种填料(其填料结构示意图如图4所示)。这种类型的填料能够耐受pH值很高的流动相，并且具有很好的pH值稳定性，它的pH耐受范围可以达到1.5-12，而常规的硅胶基质色谱填料pH值范围一般仅为2-8;它能够耐受各种缓冲液体系，柱寿命长。目前，月旭科技的Xtimate®反相填料、菲罗门公司的Gemini NX®均是属于此类有机-无机杂化硅胶色谱填料。Waters 公司的X-Bridge 色谱填料采用的是其专有的有机-无机整体杂化技术，不是表面涂覆。http://bimg.instrument.com.cn/show/NewsImags/images/201469920.jpg　　5、亲水性体积排阻(SEC)色谱填料。它是在超高纯全多孔硅胶表面包覆一层具有良好稳定性的亲水性聚合物的体积排阻色谱填料，其填料的作用基团为二醇基(填料结构示意图如图5所示)。其填料表面因受二醇基官能团保护而不与蛋白质相互作用。使得蛋白、生物酶、多肽等样品的非特异性吸附极小;因而广泛应用于生物大分子的分离。月旭Xtimate® SEC填料即为此类型的色谱填料。目前已有120 Å、300 Å、500 Å和1000 Å等四种孔径尺寸规格的SEC色谱柱产品。国内外也有一些色谱柱厂家成功研发了该类型产品，例如TOSOH公司的TSK gel SW-型色谱填料、安捷伦公司的ZORBAX GF色谱填料。http://bimg.instrument.com.cn/show/NewsImags/images/2014699221.jpg[size

[align=center][b]C18柱的填料对色谱柱的影响[/b][/align]柱填料的物理性能对填料色谱行为有重要影响。填料主要的物理性能包括如下：颗粒度、孔径、孔体积、键合相化学、含碳量及烷基化处理。(1)颗粒度是指柱填料的颗粒直径的大小。实际上色谱柱上所标的粒径是一个平均值。如粒径“5μm”并不是柱中填料所有的颗粒直径都是5μm，实际上有一个颗粒分布度。这种分布度对柱反压及柱效有重要作用。一般来说，平均颗粒度越小，颗粒分布度越小，色谱柱效越高，反压亦越高。目前C18柱填料粒径在4～10μm之间。(2)孔径是指填料颗粒间的孔间隙。一般所说的孔径是指填料的平均孔径。球形填料装柱后平均孔径分布比较窄，柱床结构均匀，柱效高，重现性好；无定形填料平均孔径分布较宽，柱床结构不均匀，流动相线性速度不均匀，谱带扩宽。平均孔径的大小对分离大分子化合物有较大的影响，在分离含有较大分子的样品时可能会有分子排阻效应，或产生吸附效应从而影响定量的回收率及准确度。因而在用反相色谱分离诸如蛋白或多肽样品时应考虑选用大孔径(如30 nm)的反相柱填料。孔体积作为硅胶多孔性的参数，在分离分析较大分子化合物时可作参考，选用较大孔体积的反相柱填料。(3)化学键合相填料在高效液相色谱法中占有极重要的地位。它可以键合极性较大的有机基团，采用极性较小的溶剂作流动相。亦可键合极性较小的有机基团，选用极性较大的溶剂作流动相。C18色谱柱是以硅烷化键合型(Si-O-Si-C)存在的，这类键合反应目前应用最为普遍。(4)碳含量即填料中的含碳量。传统的测量技术是将填料加热到碳氢键断裂，然后通过测定损失的重量或形成的二氧化碳来计算碳含量。可以通过增加碳键的长度或增加键合密度来增加碳含量。碳含量增加，柱子的保留值增加。键合相的色谱行为与键合密度有关，也与硅胶的密度及填料的表面积有关，填料的密度越高，填柱所需的硅胶量越多，柱子的含碳量也越高。如果用2种不同密度相同碳含量的填料填充柱子，其保留行为将明显不同。因此，单独以碳含量来预测色谱行为是不够的。(5)C18硅烷化试剂是一个大于2 nm大分子，因此会与已键合在相邻的硅醇基上的C18硅烷化试剂产生严重的立体位阻。其结果导致在硅胶表面有大量的残留硅醇基没有与硅烷化试剂反应，这些极性的硅醇基在一定色谱条件下会与碱性化合物相互作用引起峰形拖尾，从而可影响定量分析结果。这些问题在一定程度上可以通过烷基化处理加以克服。烷基化处理是在键合相上完成的独立反应，以减少在硅胶表面的硅醇基。烷基化处理采用小分子(如三甲硅烷)的试剂，其空间位阻远小于C18基团。大多数固定相仅有30%可覆盖的键合位置。据报道，通过某些极活跃的化学试剂及特殊的反应条件，最高的覆盖量可达50%。很好地了解硅胶键合相的物理特性将有助于在高效液相色谱的反应中选择合适的色谱柱。表面上看C18柱虽然化学官能团相同，而实际上不同品牌的C18柱性能可能有很大差别，从而产生不同的分离结果。本文节选于微信公众号《化工仪器网》，对部分内容进行了修改

Kromasil柱Kromasil是瑞典AKZO NOBEL公司生产的高性能硅胶基质液相色谱柱填料品牌。 Kromasil是一种高纯度球形硅胶填料，金属杂质含量极低，减少了有些金属螯合物在硅胶基质上的络合作用。 Kromasil硅胶的表面由独特的硅羟基基团组成，硅烷的覆盖率高，在较高的或较低的PH条件下不易水解和分解，可在PH=1.5～9.5条件下稳定使用。 Kromasil的含碳量高，表面极性小，分离效能高。通常在分析碱性样品时，与酸性硅羟基反应会产生不利的拖尾现象，而Kromasil化学纯度极高，它的表面由分布独特、相对中生的硅羟基基团组成，并使不需要的酸性硅羟基基团减少到最低，从而使之具有良好的峰对称性种较高的柱效。Hypersil BDSHypersil BDS 类色谱填料是极好的反相柱填料，有很好的耐久性及重现性，应用范围极其广泛。Hypersil BDS 硅胶担体键合前经过专门的碱钝化处理，将残余硅羟基降至极限，这种改善的表面，使得键合后的硅胶具有很高的配位度，大大降低了硅羟基与分析物之间的相互作用，改善了色谱峰形，降低了色谱峰的拖尾程度，提高了峰的对称性。Hypersil BDS填料的特征：l 对碱性化合物有更好的峰型。l 更长的寿命。l 更好的稳定性。l 同碱性化合物一样，酸性和中性化合物也有非常优异的峰值--真正的通用柱填料。紧管常规填料色谱柱具有优异的选择性和较长的色谱柱寿命。且对于简单的两元流动相(如甲醇/水)，当样品为酸性、中性和弱碱性化合物时均可获得较佳的峰不对称度。但当分析药物等样品中的强极性含氮的化合物时，样品峰型就极查，拖尾严重，并导致定量分析精度下降，时常会出现一些小峰埋没于前一拖尾峰的尾巴中，造成该现象的原因是固定相上尚有残余的硅羟基。尽管很多厂家对硅胶表面作了第二次反应，即所谓的“封尾”，以减小残余硅羟基的作用，但往往都不能完全消除残余的硅羟基的影响。Hypersil公司开发的将残余的硅羟基降至极限的Hypersil BDS(Base Deactived Silica,碱纯化硅胶)系列产品，并用现代衍生反应技术生产出特别适用于碱性化合物的真正均一反相填料。Hypersil 300A 填料是基于5um和10um,孔径为300A 的硅胶为基质的HPLC填料适合越来越多的生物大分子分离与分析的需要,现可提供C18 C8 C4 的填料*Hypersil 300A C18　适合亲水性强的分子量大于5000的小肽酶的水解片断及各种天然和合成小肽的分析*Hypersil 300A C4　　适合疏水性的小肽及大分子的多肽分析*Hypersil 300A C8　　选择性介于C18和C4之间适用于亲水性及弱疏水性的小肽和蛋白质酶的水解片断及各种天然和合成小肽的分析。 Hypersil ODS填料Hypersil 填料是基于粒度为3um 、5um和10um, 孔径为120A的硅胶为基质的HPLC填料其生产过程的质量控制标准非常严格全世界数千个实验室使用Hypersil色谱柱已长达20多年很多应用实例可以从多种文献及著名杂志上查到。大量的试验测试已经证实Hypersil ODS2填料是替代Waters Spherisorb ODS2的最佳填料无论是在酸性还是碱性样品的分析上选择性与峰型几乎与其保持一致。LiChrosorb填料常规色谱分析柱产品介绍： LiChrosorb是德国MERCH公司出品的一种多孔无定型硅胶基质填料品牌，在过去的25年中非常成功地应用于液相色谱分离。产品特点：LiChrosorb RP-8和RP-18适合于碱性样品的色谱分析。技术参数：LiChrosorb填料参数

1956年，学者首次将离子交换基团结合到纤维素上制成了离子交换纤维素，成功地应用于蛋白质的分离从此使生物大分子的分级分离方法取得了迅速的发展近年来，离子交换色谱技术已广泛应用于蛋白质、酶、核酸、肽、多糖等的分离纯化~课题组最近在做某植物多糖成分的分离用到了离子交换纤维素，填料的型号是：DE-52，属于阴离子交换剂目前碰到的问题是，部分填料会以絮状悬浮在柱子里的水中是不是这部分填料坏了？请高手指点~

各种品牌的液相色谱填料孔径都有差别，有的60A，有的100A,有的120A,有的180A,有的300A,不同的填料孔径在分析中有什么区别吗》？

多孔材料的孔分析技术与化学吸附基础知识-0

想请教下[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]之所以设置前后孔进样的原因是什么呢。前后孔可以同时进样吗？另外，INNWOX是什么材料的填料。谢谢。

[font=SimSun][/font][size=3] 许多实验室都面临由HPLC色谱柱（常规规格4.6 mm x 15 cm或 25 cm，填装5 µ m填料）开发的HPLC方法与不断增加的样品分析数量之间的矛盾。这些实验室希望在不损失色谱性能的前提下，通过改变原有方法来缩短分析时间。从色谱理论来讲，5 µ m 填料在流速为0.8 mL/min时具有最好的柱效，但实际上线速度经常会超过2 mL/min。因此实验室损失了柱效，峰形也不尖锐。重新获得柱效的最简单办法是改用更小粒径填料的色谱柱。[/size][size=5][b][size=3]使用3.5 µ m填料缩短三分之一的分析时间[/size][/b][/size][size=3] 要在不损失分离度的条件下提高分离速度，可以有多种选择。可以使用2 µ m或 2.5 µ m的填料，但在更高流速下不能保持高柱效。它们与3.5 µ m的填料相当，但后者的的反压更低。另一种选择是整体柱，其柱体结构为均一的刚性或半刚性高分子多孔棒。在宽流速范围内该色谱柱能够保持柱效，其柱效同样可与3.5 µ m的多孔填料相当。那么为什么不都选用3.5 µ m 的填料呢？3.5 µ m填料15厘米长色谱柱的柱效与5 µ m填料25厘米色谱柱的柱效相同，但前者的优势是分析时间缩短33%。如果两个规格的色谱柱使用同样的固定相，选择性会保持不变并且没有必要再开发新方法。[/size][size=5][b][size=3]使用1.8 µ m填料会节省更多时间[/size][/b][/size][size=3] 基于这一概念，使用1.8 µ m 填料的75 毫米色谱柱分析时间节省66%。亚 2 µ m 填料的优点是在更宽的线速度范围内依旧能保持高柱效。因此可以在更高流速条件下使用该色谱柱以进一步缩短分析时间。更短的色谱柱还能够节省相当可观的溶剂消耗并减少废液处理量。[/size][size=5][b][size=3]方法调节简单[/size][/b][/size][size=3] 使用更小粒径的色谱柱，可能需要对分析方法做稍微做些修改。在进行同位素分析时，缩短分析时间如同更换色谱柱一样简单。然而为了保持梯度分析的色谱分离度，必须按照与柱长的减少成比例（或与流速的增加成比例）地缩短梯度时间。当更换为更短的色谱柱时，还需要减少进样量。[/size]

近几年，液相色谱仪器在硬件方面最大了突破就是推出了UHPLC或UPLC系统;但在色谱柱填料及形式方面也还是有一些新的技术，我收集了相关资料，简单回顾一下此方面相关的新技术。　　一、色谱柱填料新技术　　1、亚2微米填料　　首当其冲就是很热门的亚2微米填料。根据色谱速率理论，粒径越小，柱效越高，而且当粒径小到亚2微米左右时，线速度的提高，其分离度就不再降低，而亚2微米填料的优势也正在与此。这个理论很早就有，但是为什么UPLC或UHPLC直到2004年才出现呢?原因主要是粒径减小，柱压的急剧升高，因此亚2微米填料对系统的耐压性能要求很高，长久以来，材料及工艺不能满足亚2微米填料对系统的要求。　　随着材料及技术的进步，2004年沃特世推出了首款商品化地UPLC系统及配套的亚2微米填料的色谱柱。如今已有沃特世、安捷伦、赛默飞（戴安）、岛津、日立、珀金埃尔默等10余家公司推出UHPLC系统;国内上海伍丰也推出了国内首台UHPLC系统。但在填料方面，相比于常规的液相色谱填料，能够生产亚2微米色谱柱的公司还不是很多，色谱柱的种类也偏少。但毫无疑问，UPLC或UHPLC、亚2微米填料是液相色谱发展的主流。沃特世公司首席科学官Thomas E.Wheat先生认为，“未来10-15年，UPLC有可能完全取代HPLC。”　　2、核壳型填料　　最近，多家公司推出了一种新型液相色谱填料——核壳型填料。这种填料的优势在于，其可以缩短分析时间，提高柱效，但是对系统压力的增加却不是很多。换句话说，可以部分实现亚2微米填料的优势，但是由于对系统耐压要求不高，其可以在常规的HPLC上运行，可视为UPLC/UHPLC好的替代品。　　核壳型填料就是在坚实的硅胶核心上生成一个均匀的多孔外壳。由于核心硅球是实心的，这样样品在通过色谱柱时，只需要花费少量的时间便能扩散出硅球表面的颗粒孔中，在较短时间完成扩散，更快地传质，因此分析速度及柱效都较原来普通的色谱柱有很大提高。目前，生产和供应核壳型填料的厂家有安捷伦、菲罗门、Sigma-Aldriich等。　　3、整体柱(monolithic column)　　整体住也是近年来液相色谱柱填料研究的又一大方向。整体柱,又称为棒状柱、连续床层、无术塞术，是一种用有机或无机聚合方法在色谱柱内进行原位聚合的连续床固定相。与常规装填的液相色谱柱相比具有更好的多孔性和渗透性，以及具有灌注色谱的特点，即色谱柱中既有流动相的流通孔又有便于溶质进行传质的中孔(几十个纳米)，目前多应用于对生物大分子进行快速分离分析，应用还具有一定的局限性。目前，商品化的整体柱产品也不是很多，主要还处于科研阶段。在售的整体柱比较有名的是默克公司的ChromolithTM。　　二、色谱柱新形式　　1、色谱饼　　色谱饼这一说法源自西北大学现代分离科学研究所、现代分离科学陕西省重点实验室耿信笃教授课题组，其与普通的色谱柱最大区别在于，其柱直径远远大于柱长，因而呈现饼的形状，故称为色谱饼。　　此种形式的改变带来的好处是，色谱柱的平衡时间、进样、洗脱及色谱柱的平衡时间都显著地缩短，从而实现了快速。当然使用色谱饼的前提是，分离度不能有很大的损失。目前，这一形式的色谱柱在分析蛋白方面有很好地效果。　　2、固定相优化液相色谱(Phase Optinized Liquid Chromatography POPLC)　　固定相优化色谱产品来自于德国BISCHOFF公司，上海通微是该产品在中国的代理。POPLC改变了我们原来创建分析方法的传统思路，不从改变流动相或更换色谱柱来改善分析效果的角度出发，而是从“优化固定相”的角度出发来摸索分析方法。据悉，目前商品化的固定相种类非常多，如何从中选出适合的固定相是头疼的问题。研发者希望通过固定相的组合能帮助方法开发人员更快更好地找到适合的固定相。　　德国BISCHOFF公司开发的POPLC系统由迷你柱管、填装不同填料的可替换短柱芯和分析软件三部分组成。在实验中，先选择几根装有不同填料的短柱芯作为一个实验组，通过单根柱子先做基础实验，然后用配套软件计算可能的柱连接方式(即将各种固定相串联)，再预测分离效果，最后做验证实验。实验表明，这种方式可以有效缩短分离时间，相应提高检测灵敏度。

求吸附管填料及对应的吸附物质，网上查了一下，没有找到比较好的资料，希望哪位大神分享一下

[color=#444444]有两个问题想咨询下，如下：[/color][color=#444444]现在的色谱柱填料多为有孔的，孔径一般为5 um或者3um。[/color][color=#444444]1. 不知道这个孔是指的填料颗粒表面凹凸不平的凹槽，只是为了增大与样品的接触面积？还是填料颗粒上确实有一个个的小孔，样品分子可以穿透过去？[/color][color=#444444]2. 如果是一个个的小孔，那么样品是从填料颗粒之间通过，还是从小孔中通过？上述两种通过方式是不是存在保留差异？[/color]

大家好：小弟我正在做一个好氧三相流化床（也即气提内循环）的实验，投加的载体为塑料材质，直径约一公分，投加量约为反应区容积的5%（反应区容积约60L），当我要计算泥龄或其它参数时，就要涉及到MLSS，而这种投加量填料的曝气池MLSS该如何计算呢？（我先前想着，用实验用水把填料上的膜剥下来，然后过滤烘干，用这个值加上曝气池混合液的MLSS，不知可否？！）另外，我们这个实验的曝气方面设计得不好，曝气装置紧贴反应器底部，一点空隙也没有，悬浮的活性一点沉降的机会都没有，所以每次排泥也就相当于排一些曝气池的混合液，这样可以吗？？谢谢大家！！！

有没有做过色谱填料浮选的同学，分享一下方法？浮选硅胶，粒径5μm的填料里面有10μm的，该怎么操作？http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09511.gif

凝胶过滤填料的类型及性质 具有分子筛作用的物质很多，如浮石、琼脂、琼脂糖、聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、葡聚糖凝胶等。层析用凝胶都是三维空间的网状高聚物，有一定的孔径和交联度。它们不溶于水，但在水中有较大的膨胀度，具有良好的分子筛功能。它们可分离的分子大小的范围广，相对分子质量在102～108范围之间。在柱层析分离中常用的凝胶有以下几类: 1.交联葡聚糖凝胶 交联葡聚糖凝胶的商品名称为Sephadex，由葡聚糖和3-氯-1.2-环氧丙烷(交联剂)以醚键相互交联而形成具有三维空间多孔网状结构的高分子化合物。交联葡聚糖凝胶，按其交联度大小分成8种型号如表3所示。交联度越大，网状结构越紧密，孔径越小，吸水膨胀就愈小，故只能分离相对分子质量较小的物质；而交联度越小，孔径就越大，吸水膨胀大，则可分离相对分子质量较大的物质。各种型号是以其吸水量(每g干胶所吸收的水的质量)的10倍命名，如，Sephadex G–25表示该凝胶的吸水量为每g干胶能吸2.5克水。在SephadexG–25及G–50中分别引入羟丙基基团，即可构成LH型烷基化葡聚糖凝胶。 表3 Sephadex1的种类与特性型号分离范围（分子量）吸水量（ml/g）最小溶胀时（h）床体积（ml）/（mg）20℃～25℃100℃G10＜7001.0±0.1312～3G15＜1 5001.5±0.2312.5～3.5G25＜5 0002.5±0.2314～6G501500～20 0008.0±0.3319～11G753 000～70 0007.5±0.524112～15G1004 000～15 00010.0±1.072115～20G1505 000～800 00015.0±1.572120～30G2005 000～30 000020.0±2.072130～40 交联葡聚糖凝胶在水溶液、盐溶液、碱溶液、弱酸溶液和有机溶剂中较稳定，但当暴露于强酸或氧化剂溶液中，则易使糖甘键水解断裂。在中性条件下，交联葡聚糖凝胶悬浮液能耐高温，用120℃消毒10分钟而不改变其性质。如要在室温下长期保存，应加入适量防腐剂，如氯仿、叠氮钠等，以免微生物生长。 交联葡聚糖凝胶由于有羧基基团，故能与分离物质中的电荷基团(如碱性蛋白质)发生吸附作用，但可借助提高洗脱液的离子强度得以克服。因此在进行凝胶层析时，常用含有NaCl的缓冲溶液作洗脱液。交联葡聚糖凝胶可用于分离蛋白质、核酸、酶、多糖、多肽、氨基酸、抗菌素，也可用于高分子物质样品的脱盐及测定蛋白质的相对分子质量。 2.琼脂糖凝胶 琼脂糖的商品名称有Sepharose(瑞典)、Bio-gelA(美国)、Segavac(英国)、Gelarose(丹麦)等多种，因生产厂家不同名称各异。琼脂糖是由D-半乳糖和3，6位脱水的L-半乳糖连接构成的多糖链，在温度10O℃时呈液态，当下降至45℃以下时，它们之间相互连接成线性双链单环的琼脂糖；再凝聚即呈琼脂糖凝胶。商品除Segavac外，都制备成珠状琼脂糖凝胶。琼脂糖凝胶按其浓度不同，分为Sepharose 2B(浓度为2％)、4B(浓度为4％)及6B(浓度为6％)。Sepharose与1，3-二溴异丙醇在强碱条件下反应，即生成CL型交联琼脂糖，其热稳定性和化学稳定性均有所提高，可在广泛pH溶液(pH3～14)中使用。通常的Sepharose只能在pH4.5～9.0范围内使用。琼脂糖凝胶在干燥状态下保存易破裂，故一般均存放在含防腐剂的水溶液中。 琼脂糖凝胶的机械强度和筛孔的稳定性均优于交联葡聚糖凝胶。琼脂糖凝胶用于柱层析时，流速较快，因此是一种很好的凝胶层析载体。

键合硅胶填料的SPE与吸附性填料的SPE的作用机理有何不同？请各位大侠指点一下[em0808]！谢谢！

色谱柱填料的粒径越小，是不是孔径也越小呢？

以硅胶为基质的填料，其孔径有100A、120A、300A等，不同的孔径对保留时间、柱效和分离度都有什么影响？

有根废柱子想拿来练下手填下料，是不是要填料柱必须跟要填的色谱柱的硅胶一样才能填料。表面积和孔径是不是有影响。

请问各位老师，在QuEChers方法中，如果我想用一个吸附农药特别强的填料，先吸附药，有没有什么办法可以将药洗脱下来呢?