液相色谱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的外标法和内标定量有何区别?是如何处理的?
[color=#444444]液相色谱使用外标法定量,但是经常出现所有组分含量总和超过100%的现象~~这是为什么,希望高人能够指点一下。[/color]
高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](HPLC)中外标法是一种常用的定量分析方法,其基本概念是通过测量已知浓度的标样(外标)和未知浓度的样品的色谱峰面积或峰高,从而计算出样品中目标物质的浓度。一般分为外标单点法和外标曲线法,现在对不同国家的外标法进行对比。 [size=18px][b][color=#595959]01.中国药典中的外标法(2025版的公示稿) [/color][/b][/size][b][size=16px][color=#595959]1)外标法的一般步骤:[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41](可以理解为外标法) [/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.按照各品种项下的规定,精确称取或量取对照品和供试品,配制成溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.分别精确量取对照品溶液和供试品溶液的一定体积,进行色谱分析; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.记录色谱图,并测量待测物质的峰面积(或峰高); [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.使用公式 C[sub]X[/sub]=C[sub]R[/sub]×A[sub]X[/sub]/A[sub]R[/sub]计算含量,其中 C[sub]X[/sub]是供试品中待测物质的浓度,C[sub]R[/sub]是对照品的浓度,A[sub]X[/sub]是供试品溶液中待测物质的峰面积(或峰高),A[sub]R[/sub]是对照品溶液中待测物质的峰面积(或峰高)。 [/color][/size][b][size=16px][color=#595959]2)[/color][/size][size=16px][color=#595959]对于成分复杂或待测成分含量变化较大的药物体系,可以采用[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]外标标准曲线法[/color][/size][size=16px][color=#595959]进行含量测定。[/color][/size][/b][size=16px][color=#595959]a.精确称取适量的对照品,或从对照品储备液中精确量取,配制成不同浓度的系列溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.精确量取这些系列溶液,进行色谱分析,记录色谱图,并测量峰响应; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.利用峰响应(或经转换)对浓度绘制标准曲线,并通过最小二乘法计算出回归曲线方程; [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.在相同的色谱条件下,精确量取供试品溶液,进行色谱分析,记录色谱图,并测量待测成分的峰响应; e[/color][/size][size=16px][color=#595959].根据待测成分的峰响应(或经转换)和回归曲线方程,确定供试品溶液中待测成分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#ff4c41]简单理解就是做一条标准曲线,得出标准曲线方程,再将待测品的峰相应代入方程进行计算,得出样品浓度。 [/color][/size][size=16px][color=#ff4c41][b][color=#595959]02.欧洲药典中的外标法 [/color][/b][/color][/size][color=#ff4c41][b][size=16px][color=#595959]1)[b]多点校准(使用校准函数): [/b][/color][/size][/b][/color][size=16px][color=#595959]a.准备一系列含有不同梯度浓度的对照品溶液,这些浓度应该在已经证明可以得到线性响应的范围内; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.取固定体积的这些对照品溶液进行色谱分析; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到峰面积或峰高,并以此绘制校正曲线,横坐标是对照品的量,纵坐标是峰面积或峰高; [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归得到校准函数; [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.按照各论中规定的程序准备待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的操作条件下进行色谱分析; [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.测量待测组分的峰面积或峰高,并根据校准函数读取或计算组分的含量; [/color][/size][size=16px][color=#595959]2[b])单点校准: [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中,通常选择一个校准曲线线性范围内的对照品溶液,以及一个浓度接近该对照品溶液的待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析,通过比较得到的响应来定量分析组分的含量; [/color][/size][color=#595959]c.在这种方法中,所有操作步骤,如进样程序,都必须在恒定条件下进行 [img=,690,801]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061421193322_2231_3203140_3.jpg!w690x801.jpg[/img] 图1.欧洲药典原文描述[b][color=#595959]03.美国药典中的外标法 [/color][/b][size=16px][color=#595959][b]1)校准函数法(多点校准): [/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.制备一系列含有不同浓度的对照品标准溶液,这些浓度应在已知能够产生线性响应的范围内; b[/color][/size][size=16px][color=#595959].取固定体积的这些标准溶液进行色谱分析,并注射到色谱系统中; [/color][/size][size=16px][color=#595959]c.通过色谱图得到的峰面积或峰高,绘制校准曲线,横坐标是对照品的量,纵坐标是峰面积或峰高; [/color][/size][size=16px][color=#595959]d.通常通过线性回归方法得到校准函数; [/color][/size][size=16px][color=#595959]e.根据各论中规定的程序制备待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]f.在与制备校准函数相同的色谱条件下分析样品,测量待测组分的峰面积或峰高; [/color][/size][size=16px][color=#595959]g.通过校准函数计算出样品中待测组分的含量。[/color][/size][size=16px][color=#595959][b]2)单点校准法:[/b][/color][/size][size=16px][color=#595959]a.在各论中,选择一个浓度在线性范围内的标准溶液,以及一个浓度接近该标准溶液的待测样品溶液; [/color][/size][size=16px][color=#595959]b.在固定条件下进行色谱分析,通过比较得到的响应来定量分析组分的含量; [/color][/size][color=#595959]c.这种方法中,所有操作步骤,包括进样程序,都必须在恒定条件下进行,以确保分析结果的一致性 [img=,690,214]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061424187996_390_3203140_3.jpg!w690x214.jpg[/img] 图2.美国药典原文描述 [color=#595959][b]总结一下:[/b][/color][size=16px]1)中国药典提供了外标法的一般步骤和标准曲线法的详细描述,但没有明确描述单点校准法。 [/size][size=16px]2)欧洲药典和美国药典都详细描述了多点校准和单点校准的方法,并且强调了所有操作步骤需要在恒定条件下进行。(这两家基本是一 致的描述) [/size][size=16px]3)三种药典都强调了在色谱分析中保持操作条件的一致性,以确保分析结果的准确性和重现性 [img=,690,249]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409061426098030_8014_3203140_3.jpg!w690x249.jpg[/img] [/size][/color][/color]
做液相色谱正相外标的时候,如果样品峰面积和稀释100倍后的对照液的峰面积不成100:1的时候该怎么办?
液相色谱,外标法定量,对标准样品的纯度有要求吗?是不是一定要大于98%?现在只能买到FLUKA质保书上纯度为95%的标准品(GC),可以用于外标法定量吗。大家平时有没有碰到过标准品纯度不高的问题,是不是说明这种物质很难提纯?
各位好,我刚学习液相,不是很明白在做液相时内标法和外标法,哪位能详细解释下啊。谢谢~~~
岛津的液相色谱,配有自动进样器。用外标定量时,只配一个标样,选择用改变的进样量(即1微升,2微升。。。。)这种方式来做标准曲线,是不是线性更好一些。
请问各位专家:液相色谱外标法测定含量(80%左右)时一般允许的误差是多少呢?2%以内可以吗?
[color=#444444]最近做的不同批次的同一样品,用的是安捷伦1200液相色谱仪,流动相为70%乙腈,波长为215nm。结果如下[/color][color=#444444]1、用面积归一化法计算,纯度为85%,可是用外标法计算含量时,却高达97%(没有乘以总重量,下同)[/color][color=#444444]2、另测一批样品,归一化纯度为86%,外标法计算含量时,却高达100%。[/color][color=#444444]请问这是什么情况?[/color]
如题,外标法在液相色谱中是使用最广的。但由于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的进样重复性没有液相色谱那么理想,使用内标法比较多,但现在仪器技术发展了,用外标法是主流了吗?
液相色谱制作校正曲线以后,使用曲线时,打印报告结果显示是实际值的0.1倍
使用液相色谱定量分析时候采用外标法分析,请问按国家标准的话,配制标准溶液和试样溶液各几份?目前我都是配一个标准溶液 和2份 试样溶液(标识:试样A+试样B)分析的,请问这可行吗?进样顺序如下:进数针标样平行后+ 2针试样A + 2针试样B + 1针标样 请问下同行了兄弟姐妹,这样做法可行否?还有算结果时我是取最后1针标样和数针标样中的一针加和平均来算
用高效液相色谱仪外标法测定兽药含量可不可以不建立标准曲线?测出标准品和样品的色谱峰之后直接带入公式求含量可以吗?
大家好,请大家来帮助讨论一下外标法测一样品的杂质含量:我现在有一个样品要求用外标法测其含量小于100ppm,现在已经有一杂质的标准品,请问如用外标法测的话如何配制标准杂质的浓度和样品浓度?
同一个样品,检测两次,均采用外标法,一个是气相色谱,一个是液相色谱含量差距很多,气相含量是百分之90左右,液相含量是百分之95左右,求大神分析原因?
想问一下,一般大家测定一种化合物时,是自建方法还是参照国标呢?用HPLC定量时,如果使用外标法,那么多久需要重新做一条标准曲线呢?还是每次测定样品的时候,都需要同时测定标准品,绘制新的标准曲线?在做标准曲线的时候,是配制不同浓度的标准品(比如1mg/25ml,2mg/25ml,4mg/25ml,8mg/25ml,10mg/25ml...),然后进相同的进样量(比如10ul),还是配制1个浓度的标准品然后进不同进样量?
[color=#444444]请问,液相色谱测定含量双样双针的,f值有没有统一规定的啊?F=称样量/A峰面积/稀释倍数,要不要除以对照品的稀释体积啊?是随便写还是有统一规定写法啊?[/color]
本人刚接触液相色谱,想要检测某饮料中某一物质的含量采用外标法,该物质的大体含量不清楚,看了几篇参考文献说外标法中浓度范围最好包括样品浓度,这该怎么做呢?难道扩大外标法中的浓度范围吗,这样好像比较麻烦又不见得准确啊?还有就是进样量应该怎么确定啊?
我们公司是生产淀粉糖的,通常我们做的检测比如:果葡糖浆、葡萄糖粉等产品 都是用的归一化法,原因是简单,能够适应大生产的需要, 最近我们搞实验室认可了 ,,要求用外标法进行检测,这就出问题了,,我们外标法做的数值总比归一化法高2-3% 请问这是方法的问题 还是 仪器 的问题,还是检测人员的问题??? 我们公司用的岛津的液相色谱。
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]的外标法一个序列必须是一个积分方法吗
之前比较少做液相的实验,想让各位前辈指点一下。检测依据是SCT 3022-2004 水产品中呋喃唑酮残留量的测定液相色谱法,用峰高计算,外标法定量
[color=#444444]想用液相色谱同时测定两种物质含量,但是一种物质含量为33%左右,一种为0.3%左右,用紫外检测器,外标法是否可行,请各位大神赐教[/color]
液相色谱法检测甲醛时(外标法),甲醛保留时间总是漂移,每天都不同,差距太大,怎么解决?
用内标法和外标法,液相色谱上机后的回收率是怎么计算的,我只知道定性就是看保留时间,可是要来定量我就不知道怎么算了。
作者: 李毅(湖南省安乡县人民医院,湖南,安乡,415600)摘要: 目的 建立利用高效液相色谱法测定人血浆中华法林浓度的方法.方法采用二氯甲烷-正己烷(1∶1)对血浆样品进行萃取,高效液相色谱外标法进行含量测定.色谱柱为Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水-冰醋酸(65∶35∶1),流速1ml/min,紫外检测器检测波长308nm,柱温30℃.结果华法林的保留时间为8.2min,定量线性范围0.05-5.0μg/ml. 血浆中华法林萃取同收率为85.3%89.8%(n=5),方法回收率101.3%103.6%(n=5),日内及日间RSD均小于8%(n=5)。结论本方法快速准确,可用于华法林血药浓度监测。谱图:无
[color=#444444]如果用液相色谱,GPC软件,要测定异戊橡胶的分子量,根据什么选择毛细管柱呢?请详细回答。[/color][color=#444444]用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]测定水中的微量乙腈,用外标法,为什么要用峰面积定量,用峰面积百分比可以吗?因为我们是手动进样器。请回答一下。谢谢[/color]
这段时间,在做液相色谱分析时,峰面积重现性不好,是什么原因导致的,我用的是外标法。
本人才接触液相色谱,需学东西甚多。请问哪位高手有关于内标法和外标法的基础知识资料啊?不慎感激[em06]
岛津液相LC20A,外标法制作校准曲线,完全按照pdf上的步骤做,最后打开校准曲线方法的时候,为什么没显示级别,无法添加标准样品的色谱图,求高手帮忙,谢谢!
使用液相色谱定量分析时候,外标法。配制标准溶液和试样溶液各几份?有没必要配制2标样2试样?我通常一份标准,一份试样溶液,待标样溶液进样相对标准偏差在1.5%以内,按标样,试样,试样,标样的顺序做的。请大家说说你们通常是怎么做的?