数字摄影显微镜

第二章 进行显微摄影一． 显微摄影的基础知识1． 显微摄影装置的放大倍率照片的放大倍率，决定于照相目镜的型号和显微摄影装置的投影长度。如前所述，目前光学显微镜的光路系统是万能无限远光学校正系统，与以前的有限远光学校正系统有了很大的改进。所以两种系统的照片放大倍率计算方法不同。(1) 有限远光学校正系统：　照片总放大倍率=物镜放大倍率X照相目镜放大倍率（没有中间附件时）或 照片总放大倍率=物镜放大倍率X照相目镜放大倍率X中间附件系数（连接有中间附件时）。(2) 万能无限远光学校正系统：　照片总放大倍率=物镜放大倍率X照相目镜放大倍率（中间附件不影响放大倍率）。(3) 大版照相：照片总放大倍率=物镜放大倍率X照相目镜放大倍率X 3。照片的总放大倍率是指底片上图象的放大倍率，而不是指底片冲洗到相纸后的放大倍率。2． 物镜与目镜的不同组合，得到的分辨率不同即使照片的总放大倍率相同，它的分辨率是根据物镜、目镜的不同组合而不同的。在显微摄影时应尽量使用低倍照相目镜与高倍物镜组合，这样能改进底片平面象的分辨率。3． 标本画面的构图显微摄影时，视场中的标本往往不适合摄影构图，克服这个问题的办法是转动照相机，以使标本成比例得适合构图的要求。但这时要进行操作显微镜来适合摄影构图就更困难了。一般人们乐用的方法是转动载物台，将标本调到画幅理想的构图中。 二． 显微摄影技术1． 工作前的准备(1) 光路系统的清洁　　显微摄影必须保证光路系统的清洁，任何光学部件有了污垢及灰尘，均会影响照片的质量。物镜、目镜及聚光镜等部件，如污垢长期得不到清理，还会引起霉菌的生长，致使不能应用。各部件在擦拭时，只能清理表面，而不应任意拆卸。(2) 光轴中心的调整　　显微摄影时光轴中心的调整是绝对不可忽视的，否则拍出的图象，各部分的感光不匀。关于调整的方法前已述及，这里不予重复。(3) 其它准备工作　　检查镜体与照相系统的安装是否正确；根据被检物体的情况选用何种感光片；如为半自动和全自动照相系统，需调节好相应的按钮。拍摄前需用观察目镜观察，先调好两眼的瞳距，使两个视场的象合而为一，再调节好两眼的屈光度以适应观察者的视力。 2． 视场光阑与孔径光阑的应用[color=#3333

在形态学研究中，最终取得的照片质量，将是决定实验结果的最终依据。学术期刊编辑和审稿专家对论文的评价，也十分注重照片质量。获得一张好的照片，既取决于组织制备技术，也与显微摄影以及暗室技术有关。本文仅就显微摄影技术，以Olympus New Vanox型万能显微镜配套装置为例简要介绍如下。１显微摄像前的准备工作 　　组织切片的选择：根据论文需要选择组织切片。一类为保存实验原始资料而挑选的切片，由于组织切片年久后易于褪色，所以拍成胶片代替切片，目的是便于长期保存；另一类为入选论文的核心切片，也是显微摄影的重点。在选择组织切片时，应选择切片厚度均一,展片平整,背景反差明显,透明度良好,染色质量较好的切片，不要忘记以记号笔在入选切片周围打上记号，以便于及时而准确地重复找到欲摄部位。在拍摄范围内，不应有任何污尘、组织碎片、气泡及人工假象存在，拍摄时无妨将物镜与目镜不同组合，多拍摄一些帧幅，以便选优，不与前一类切片平均使用胶卷。　选购胶卷：目前新式显微摄影装置多采用氦灯，其光路系统已由旧式钨丝照明转变成近似日光。所以选购胶卷时应为日光型者，即感光速度（ISO/ASA）为100的胶卷。其次，在挑选胶卷商品厂家时，最好对同一实验组织切片，选用同一厂家胶卷，这有利于摸索暗室洗像技术。再者，对黑白负片、彩色负片及彩色反转片（幻灯片），购买与拍摄要有计划；若以黑白片与彩色片相比，应先拍彩色片，以防组织切片放置过长褪色。如果单纯为发表论文拍摄，则只需拍摄黑白片，如果既要彩色负片又要彩色反转片，应先拍反转片。彩色反转胶卷冲洗后，一般能如实反映组织切片的真实色调，因此除可作幻灯片使用外，还可作彩卷扩印时色彩还原的标准参照。通常情况下，彩色照片扩印往往颜色失真，相同的彩卷多次扩印时色调也多不一致，而且背景常有蓝色或绿色。到照像馆扩印彩照时，应以彩色反转片或原有的相同组织相同染色方法的彩照作为参照，并建议用彩色补偿滤片（CC滤片）消掉背影杂色，使无色的背景调为纯白色。通过实践，证明经过这种处理的彩色照片质量明显提高。正确安装胶卷：向照相机内装卷时，常出现的失误是胶卷没有挂上，致使按下自动曝光装置上的“曝光键”后，胶卷并未转动，胶片并未感光，且因一般情况下，自动曝光装置并未因胶卷未挂上有任何异常的警示，故浪费大量精力与时间。正确的装卷方法如下：打开照相机背壳，将胶卷药膜面朝内装在倒卷轴上，拉动片头至摄取卷轴端，因后者上有数条纵沟，有时须将片头剪窄，以确保片头能够插入纵沟，并且不能使片头从另一纵沟伸出来，以手指将胶片边孔套按在摄取卷轴下端的齿轮齿上，按动自动曝光装置上的“曝光”键，确实见到胶片向前卷动到摄取卷轴时，才关闭照相机背，再按动一次“曝光”键，注意倒卷轴应随着转动。核查显微镜及其摄相装置各键钮状态：Olympus New Vanox上的键钮颇多。这里仅指出几点：①依据胶卷上的ISO/ASA值设定胶卷速度（film speed）。②依据胶卷品牌及型号设定倒易失效补偿值（reciprocity failure compensation），此值一般在胶卷盒上没有标明，但在各种摄相装置说明书上均可查到知名胶卷品牌的此值。③核查摄相光路与相关各个键钮接通状态，当接通后，自动曝光装置控制面板上的“安全”灯将亮起来。２常用显微摄影技术细节摄影者对显微摄影装置的调整：包括两目镜瞳孔间距的调整和个人屈光不正的校正。前者指将两目镜的距离按个人的瞳孔间距进行调整，拉动目镜或捻转瞳孔间距调节螺旋。校正屈光时应转动目镜筒上的屈光度调节环，使物镜视野中心的“十”字由单线调成双线，达到完全清晰，并且左右眼应分别调整。每个拍摄者都不宜省略这一步。物镜与摄相目镜不同组合的选择：摄影目镜除放大功能外，并不具备空间分辨功能，只有物镜才具有空间分辨力。在一般条件下，对组织切片厚度在20 μm以下者，应尽量选择较高倍物镜，例如欲放大实物50倍时，选择“20×”物镜配以“

生物摄影师，也为医学或生物医学摄影师，是与某些科学领域的详细的知识熟练的摄影师。 他们利用高质量的设备，在医学，生物学和化学等领域的照片。 生物摄影师医疗学校，医院， 出版公司，药品生产企业和其他组织的工作。 插图 生物摄影师拍照提供科学出版物，医学期刊，教材，教具和研究报告的插图。记录医疗程序 一种生物摄影师的职位描述可能包括采取外科手术或尸体解剖图片或视频。显微摄影 生物摄影师可能需要使用显微摄影，采取微观物体的全面详细的照片，人们可以不用显微镜。解剖照片 生物显微镜摄影师还可以创建在不同的个体不同解剖区的照片，以便研究人员和学生，可以增加他们的知识。取证 一些生物摄影师在取证工作，在刑事和民事诉讼证据的照片。