电泳槽是凝胶电泳系统的核心部分,其系统的迅猛发展主要也是体现在电泳槽上。根据电泳的原理,凝胶都是放在两个缓冲腔之间,电场通过凝胶连接两个缓冲腔。缓冲液和凝胶之问的接触可以是直接的液体接触,也可以间接通过凝胶条或滤纸条。管状凝胶电泳和垂直板状电泳大多采取直接液体接触方式。这种方式可以有效地使用电场,但在装置设计上有一些困难,如液体泄漏,电安全和操作麻烦等问题。水平板状电泳槽大多通过间接方式,用滤纸桥搭接以及最近使用缓冲液制作的凝胶条和滤纸条搭接,即半干技术,后种方式使装置简化,操作也大大方便。
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各位大神: 最近有个朋友跟我提到了一个测序电泳槽,想问问各位大神什么事测序电泳槽啊?它的工作原理是怎么样的,电泳基本知识我知道,但测序电泳它是如何实现测序和微卫星分析等等功能的?
电泳槽细菌测试流程如下。所用仪器:小冰箱、培养盘、温度控制在30摄氏度的细菌培养盘、无菌棉棒、可以长期保存的标签、可以自由处置的含90%的无菌水瓶。操作流程:1、打开稀释瓶倒入10ml电泳漆。2、塞上瓶塞并且轻摇瓶身,充分摇匀。3、将培养盘移出冰箱,并根据标签进行区分。4、将棉棒伸入稀释过的样品,滴三滴在琼脂上,进行测试。5、保持温度和湿度的稳定性。6、两天后定期做检查,7天后丢弃样品。根据以上实验,电泳漆的主槽要每周进行一次细菌含量的检测,当主槽进行过两次细菌测试时,对包括洗涤系统在内的整个系统进行UF或RO预处理;将主槽内使用的加仑数再加上软管中的加仑数(折合为主槽的10%),来计算增加的杀菌剂的数量。 先后用1.5%的Kathon EDC及硝酸银处理细菌。用在电泳槽以及洗涤槽内的杀虫剂必须是与存在的细菌是相配的。 在24小时内保持细菌的水平。
看到一个说明:水平电泳槽由 UV 盘,胶模盘 ( 可用来制胶 ),电梳,电极,电导线等组成。其中UV盘是做什么的呢?能不能给个图示
水平电泳槽中UV 盘,胶模盘 ( 可用来制胶 ),电梳都是做什么用的。是SCIE-plas HU13型号。借宝地发个贴,tutm你知道吗?有没个什么的说明书呢?急用。
想请教一下各位老师,关于电泳实验里面,电泳槽的缓冲液容量对实验有什么影响没,容量大小对设备的评估有什么意义么?非常感谢。[em09508]
请高人指点!!!电泳仪和电泳槽有什么区别啊??!!小弟在此谢过[em09502]
如题,大型垂直板电泳仪哪几家比较好
为什么蛋白电泳是垂直的,而核酸的是水平的呢??能不能通用??核酸和蛋白的电泳槽有什么样的区别????
琼脂糖电泳步骤之超级基础篇一、电泳前准备准备内容作用1.刷干净电泳制胶的梳子,板子,槽子,蒸馏水洗净晾干防止不必要的重复污染,减少外来的污染。梳子干净有利于梳孔的形成。2.检查电泳槽,根据情况更换buffer排除电泳槽的电极接触不良,确保buffer的缓冲能力,减少污染。3.根据DNA的分离范围选择合适的胶浓度并记录达到较好的分离效果,防止样过快跑出胶或者是过慢浪费时间。4.计算agarose的用量和制胶 buffer的用量记录,胶最终越薄越好。实验记录备查 二、制胶步骤注意事项1.称量agarose和bufferBuffer不要用成H2O,称量相对准确2.融胶,加热到胶产生大量的气泡时,拿出摇匀,继续加热到完全溶解,拿出摇匀,再加热到沸腾。非常热,小心烫手,另外注意不要加热过度使胶冲出瓶子。因此注意选择起码为胶体积2倍以上的瓶子。保证胶混匀和完全溶解,减少可能因此引起的胶中孔径不均匀影响分离效果。3.倒胶,可用水浴的办法使胶冷却到60度左右,即手可以握住瓶子的温度,沿着制胶板的一侧,缓缓地一次性倒入。梳子最好是预先放好并固定的,注意梳孔的体积能点的下所有的样。用枪头赶掉气泡。制胶的桌面相对水平。倒胶时尽量减少气泡的产生。EB如果在制胶时加入,在60度左右时加入,使终浓度为0.5ug/ml。不宜过低,染色成像不明显;不宜过高,导致背景太深。摇匀要沿着瓶壁摇动,尽量减少气泡产生的可能性。高浓度胶例如2%以上的EB很难摇匀,而且凝的速度也相对快,强烈建议跑完胶之后再用EB染色。4.室温凝胶30分钟过程中不要碰到梳子,尽量保持胶的位置不移动。时间不宜过久,导致胶干燥变形;不宜过短,影响胶内部孔径形成。5.拔梳子,放入电泳槽。缓缓地将梳子垂直从梳孔拔出,尽可能使梳子是同时从各个胶孔拔出的。暂时不用的胶最好放入电泳槽电泳液中浸泡。电泳液要浸没胶1mm。 三、上样电泳[
根据电泳仪原理、电泳仪功能、电泳仪的使用方法、电泳仪的用途不同可以为:琼脂糖凝胶电泳、毛细管电泳、凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、醋酸纤维薄膜电泳、高效毛细管电泳、琼脂糖电泳、SDS-PAGE凝胶电泳、蛋白质电泳、血清蛋白电泳、dna电泳、血红蛋白电泳、蛋白质双向电泳、免疫电泳、等电聚焦电泳、单细胞凝胶电泳、蛋白质凝胶电泳、质粒电泳、对流免疫电泳、变性电泳等。电泳仪分类:1、毛细管电泳仪:其主要部件有0~30kV可调稳压稳流电源,内径小于100μm(常用50~75μm)、长度一般为30~100cm的弹性石英毛细管、电极槽、检测器和进样装置。检测器有紫外/可见分光检测器、激光诱导荧光检测器和电化学检测器,前者最为常用。进样方法有电动法(电迁移)、压力法(正压力、负压力)和虹吸法。成套仪器还配有自动冲洗、自动进样、温度控制、数据采集和处理等部件。 2、常规电泳仪:其组成部件为可调稳压稳流电源,垂直电泳槽,水平电泳槽,电极连接线,支持体【非凝胶性支持体区带电泳(支持体有:①淀粉②纤维素粉③玻璃粉,硅胶等) ;凝胶支持体区带电泳支持体有:①淀粉液②聚丙烯酰胺凝胶③琼脂(糖)凝胶】;陶瓷板,抽水泵,输水管,冰水曹等部件组成。3、其他电泳仪:Tiselius或微量电泳、显微电泳、等电点聚焦电泳技术、等速电泳技术、密度梯度电泳等。是一种非支持体的电泳仪也称为自由电泳法的发展并不迅速,因为其电泳仪构造复杂、体积庞大,操作要求严格,价格昂贵等很少使用。毛细管电泳仪、凝胶电泳仪、垂直电泳仪、微电泳仪、高压电泳仪、水平电泳仪、高效毛细管电泳仪、双向电泳仪、bio rad 电泳仪、脉冲场电泳仪、伯乐电泳仪、北京六一电泳仪上海巴玖均可提供!
电泳技术发展简史 1809年俄国物理学家Рейсе首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极,加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊,即带负电荷的粘土颗粒向正极移动,这就是电泳现象。 1909年Michaelis首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。他用不同pH的溶液在U形管中测定了转化酶和过氧化氢酶的电泳移动和等电点。 1937年瑞典Uppsala大学的Tiselius对电泳仪器作了改进,创造了Tiselius电泳仪,建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法,并首次证明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白组成的,由于Tiselius在电泳技术方面作出的开拓性贡献而获得了1948年的诺贝尔化学奖。 1948年Wieland和Fischer重新发展了以滤纸作为支持介质的电泳方法,对氨基酸的分离进行过研究。 从本世纪50年代起,特别是1950年Durrum用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后,开创了利用各种固体物质(如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等)作为支持介质的区带电泳方法。 1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶作为支持介质,创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳,极大地提高了电泳技术的分辨率,开创了近代电泳的新时代。30多年来,聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍,分辨率最高的分析鉴定技术,是检验生化物质的最高纯度:即“电泳纯”(一维电泳一条带或二维电泳一个点)的标准分析鉴定方法,至今仍被人们称为是对生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段,即“Last Check”。 由80年代发展起来的新的毛细管电泳技术,是化学和生化分析鉴定技术的重要新发展,己受到人们的充分重视。4.2 电泳的基本原理 电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。 电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937年进行的自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜,目前这些介质在实验室已经应用得较少。在很长一段时间里,小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析,但目前则一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。这些介质适合于分离小分子物质,操作简单、方便。但对于复杂的生物大分子则分离效果较差。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展,使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝胶是淀粉凝胶,但目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。 电泳装置主要包括两个部分:电源和电泳槽。电源提供直流电,在电泳槽中产生电场,驱动带电分子的迁移。电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。垂直板式电泳是较为常见的一种,常用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质的分离。电泳槽中间是夹在一起的两块玻璃板,玻璃板两边由塑料条隔开,在玻璃平板中间制备电泳凝胶,凝胶的大小通常是12cm ? 14 cm,厚度为1mm~2 mm,近年来新研制的电泳槽,胶面更小、更薄,以节省试剂和缩短电泳时间。制胶时在凝胶溶液中放一个塑料梳子,在胶聚合后移去,形成上样品的凹槽。水平式电泳,凝胶铺在水平的玻璃或塑料板上,用一薄层湿滤纸连接凝胶和电泳缓冲液,或将凝胶直接浸入缓冲液中。由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行的,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。
如题.电泳槽使用久了,Pt丝上会覆盖一层象盐一样的东西,请问是什么东西啊,怎么产生的呢?会不会影响电泳结果啊,怎样去除这东西啊?
1.称量agarose和buffer Buffer不要用成H2O,称量相对准确。 这步悄悄地说可以稍微粗糙点,影响不大。2.融胶,加热到胶产生大量的气泡时,拿出摇匀,继续加热到完全溶解,拿出摇匀,再加热到沸腾。非常热,小心烫手,另外注意不要加热过度使胶冲出瓶子。因此注意选择起码为胶体积2倍以上的瓶子。保证胶混匀和完全溶解,减少可能因此引起的胶中孔径不均匀影响分离效果。这步非常重要,如果胶热不匀会跑出非常科幻的条带。 3.倒胶,可用水浴的办法使胶冷却到60度左右,即手可以握住瓶子的温度,沿着制胶板的一侧,缓缓地一次性倒入。梳子最好是预先放好并固定的,注意梳孔的体积能点的下所有的样。用枪头赶掉气泡。 制胶的桌面相对水平。倒胶时尽量减少气泡的产生。EB如果在制胶时加入,在60度左右时加入,使终浓度为0.5ug/ml。不宜过低,染色成像不明显;不宜过高,导致背景太深。摇匀要沿着瓶壁摇动,尽量减少气泡产生的可能性。高浓度胶例如2%以上的EB很难摇匀,而且凝的速度也相对快,强烈建议跑完胶之后再用EB染色。 其实也可以滴加EB进胶槽,用枪头搅匀,跑完了再染有时候效果不是很好。至于60度怎么掌握。。。勉强不烫手就是了 4.室温凝胶30分钟 过程中不要碰到梳子,尽量保持胶的位置不移动。时间不宜过久,导致胶干燥变形;不宜过短,影响胶内部孔径形成。 这个一定要晾够时间,建议盖个一次性手套,不然胶失水过多就没法用了。5.拔梳子,放入电泳槽。缓缓地将梳子垂直从梳孔拔出,尽可能使梳子是同时从各个胶孔拔出的。暂时不用的胶最好放入电泳槽电泳液中浸泡。电泳液要浸没胶1mm。这个不比PAGE胶,一般拔不出问题来。
生化实验讲义(理论部分)--电泳技术 4.1 电泳技术发展简史1809年俄国物理学家Рейсе首次发现电泳现象。他在湿粘土中插上带玻璃管的正负两个电极,加电压后发现正极玻璃管中原有的水层变混浊,即带负电荷的粘土颗粒向正极移动,这就是电泳现象。1909年Michaelis首次将胶体离子在电场中的移动称为电泳。他用不同pH的溶液在U形管中测定了转化酶和过氧化氢酶的电泳移动和等电点。1937年瑞典Uppsala大学的Tiselius对电泳仪器作了改进,创造了Tiselius电泳仪,建立了研究蛋白质的移动界面电泳方法,并首次证明了血清是由白蛋白及α、β、γ球蛋白组成的,由于Tiselius在电泳技术方面作出的开拓性贡献而获得了1948年的诺贝尔化学奖。1948年Wieland和Fischer重新发展了以滤纸作为支持介质的电泳方法,对氨基酸的分离进行过研究。从本世纪50年代起,特别是1950年Durrum用纸电泳进行了各种蛋白质的分离以后,开创了利用各种固体物质(如各种滤纸、醋酸纤维素薄膜、琼脂凝胶、淀粉凝胶等)作为支持介质的区带电泳方法。1959年Raymond和Weintraub利用人工合成的凝胶作为支持介质,创建了聚丙烯酰胺凝胶电泳,极大地提高了电泳技术的分辨率,开创了近代电泳的新时代。30多年来,聚丙烯酰胺凝胶电泳仍是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍,分辨率最高的分析鉴定技术,是检验生化物质的最高纯度:即“电泳纯”(一维电泳一条带或二维电泳一个点)的标准分析鉴定方法,至今仍被人们称为是对生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段,即“Last Check”。由80年代发展起来的新的毛细管电泳技术,是化学和生化分析鉴定技术的重要新发展,己受到人们的充分重视。4.2 电泳的基本原理电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物分子,如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团,它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电,在电场的作用下,这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。电泳过程必须在一种支持介质中进行。Tiselius等在1937年进行的自由界面电泳没有固定支持介质,所以扩散和对流都比较强,影响分离效果。于是出现了固定支持介质的电泳,样品在固定的介质中进行电泳过程,减少了扩散和对流等干扰作用。最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜,目前这些介质在实验室已经应用得较少。在很长一段时间里,小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析,但目前则一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。这些介质适合于分离小分子物质,操作简单、方便。但对于复杂的生物大分子则分离效果较差。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展,使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。最初使用的凝胶是淀粉凝胶,但目前使用得最多的是琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。蛋白质电泳主要使用聚丙烯酰胺凝胶。电泳装置主要包括两个部分:电源和电泳槽。电源提供直流电,在电泳槽中产生电场,驱动带电分子的迁移。电泳槽可以分为水平式和垂直式两类。垂直板式电泳是较为常见的一种,常用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中蛋白质的分离。电泳槽中间是夹在一起的两块玻璃板,玻璃板两边由塑料条隔开,在玻璃平板中间制备电泳凝胶,凝胶的大小通常是12cm 14 cm,厚度为1mm~2 mm,近年来新研制的电泳槽,胶面更小、更薄,以节省试剂和缩短电泳时间。制胶时在凝胶溶液中放一个塑料梳子,在胶聚合后移去,形成上样品的凹槽。水平式电泳,凝胶铺在水平的玻璃或塑料板上,用一薄层湿滤纸连接凝胶和电泳缓冲液,或将凝胶直接浸入缓冲液中。由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变,进而影响其电泳迁移的速度,所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行的,缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。为了更好的了解带电分子在电泳过程中是如何被分离的,下面简单介绍一下电泳的基本原理。在两个平行电极上加一定的电压(V),就会在电极中间产生电场强度(E),L是电极间距离。在稀溶液中,电场对带电分子的作用力(F),等于所带净电荷与电场强度的乘积。这个作用力使得带电分子向其电荷相反的电极方向移动。在移动过程中,分子会受到介质粘滞力的阻碍。粘滞力(F’)的大小与分子大小、形状、电泳介质孔径大小以及缓冲液粘度等有关,并与带电分子的移动速度成正比,对于球状分子,F’的大小服从Stokes定律,即:
请高手指点!!电泳仪(槽)性能价格的关系!小弟最近在看电泳仪电泳槽的信息,不同型号的仪器价格差别很多,请问:电泳仪(槽)的价格跟什么有关系呢??多谢各位!!
简单的说,电泳仪电源一般可分为两类:精简型和多用型,精简型均为双稳型,而多用型都是三稳(三恒)型。无论有几种稳定功能,电泳仪电源在实际工作时只能稳其中一种参数,至于稳哪一种参数,要看电泳仪电源的设定以及电泳仪的等效负载电阻而定。市面上销售的电泳仪电源,按电压分为高压1500~5000V、中压500~1500V、低压500V以下三种;按电流分为大电流500mA~2000mA、中电流100~500mA、小电流100mA以下三种;按功率分为大功率200~400W、中功率60~200W、小功率60W以下三种。从电压的角度来看,用于核酸(琼脂糖)水平电泳、PCR电泳、DNA回收、印迹转移等实验只需最高电压300V;用于蛋白垂直电泳、种子纯度电泳、醋酸纤维膜电泳等需要使用最高电压600V左右的电泳仪;用于DNA测序(SSR分子标记)、等点聚焦电泳、双向电泳等要求最高电压3000V;用于DNA测序电泳(AFLP分子标记)要求最高电压3800V。电泳仪电源输出的所有参数根据其型号的不同都有一个特定的工作范围,如果实际需要超过这一范围,就应当选择能够满足使用的另外型号的电泳仪电源。因为高、低压电泳仪内部结构特征不同,由于高压电泳仪常附加着多功能,而且高压电泳仪决不能空载运行(容易造成人身伤害内部器件损坏),导致操作上难易程度的不同等。因此,选用合适规格的电泳仪很重要。用户如果需要一台电泳仪电源带几个电泳槽工作时,首先要确定总电流不要超过仪器的最大范围,其次各电泳仪之间是并联的,因而每个电泳仪的电压都是相同的,总电流为各电泳仪电流之和。使用时注意不能超出电泳仪电源额定的范围。
贵州环境监察的垂直草案出来了,不知道监测什么时候出来?
高中程度的看了以后都肯定能做1.刷干净电泳制胶的梳子,板子,槽子,蒸馏水洗净晾干 防止不必要的重复污染,减少外来的污染。梳子干净有利于梳孔的形成。这步是非常容易被忽略的,有时候怎么做都出不来,彻底洗一遍就好了。 2.检查电泳槽,根据情况更换buffer 排除电泳槽的电极接触不良,确保buffer的缓冲能力,减少污染。 3.根据DNA的分离范围选择合适的胶浓度并记录 达到较好的分离效果,防止样过快跑出胶或者是过慢浪费时间。 4.计算agarose的用量和制胶 buffer的用量记录,胶最终越薄越好。实验记录备查
一、实验目的了解等电聚焦的原理。通过蛋白质等电点的测定,掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管式等电聚焦电泳技术。二、实验原理等电聚焦(Isoelectric focusing,简称IEF)是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展,已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点(pI)只差0.001pH单位的生物分子。由于其分辨力高,重复性好,样品容量大,操作简便迅速,在生物化学、分子生物学及临床医学研究中得到广泛的应用。蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的pH环境中解离成带负电荷的阴离子,向电场的正极泳动,在小于其等电点的pH环境中解离成带正由荷的阳离子,向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的pH环境中,即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个有pH梯度的环境中,对各种不同等电点的蛋白质混合样品进行电泳,则在电场作用下,不管这些蛋白质分子的原始分布如何,各种蛋白质分子将按照它们各自的等电点大小在pH梯度中相对应的位置处进行聚焦,经过一定时间的电泳以后,不同等电点的蛋白质分子便分别聚焦于不同的位置 。这种按等电点的大小,生物分子在pH梯度的某一相应位置上进行聚焦的行为就称为“等电聚焦”。等电聚焦的特点就在于它利用了一种称为两性电解质载体的物质在电场中构成连续的pH梯度,使蛋白质或其他具有两性电解质性质的样品进行聚焦,从而达到分离、测定和鉴定的目的。两性电解质载体,实际上是许多异构和同系物的混合物,它们是一系列多羧基多氨基脂肪族化合物,分子量在300~1000之间。常用的进口两性电解质为瑞典Pharmacia-LKB公司生产的Ampholine 和Pharmalyte,价格昂贵。国产的有中国军事医学科学院放射医学研究所和上海生化所生产的两性电解质,价格便宜,质量尚佳。两性电解质在直流电场的作用下,能形成一个从正极到负极的pH值逐渐升高的平滑连续的pH梯度。若不同的pH值的两性电解质的含量与pI值的分布越均匀,则pH梯度的线性就越好。对Ampholine两性电解质的要求是缓冲能力强,有良好的导电性,分子量要小,不干扰被分析的样品等。在聚焦过程中和聚焦结束取消了外加电场后,如保持pH梯度的稳定是极为重要的。为了防止扩散,稳定pH梯度,就必须加入一种抗对流和扩散的支持介质,最常用的这种支持介质就是聚丙烯酰胺凝胶。当进行聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳时,凝胶柱内即产生pH梯度,当蛋白质样品电泳到凝胶柱内某一部位,而此部位的pH值正好等于该蛋白质的等电点时,该蛋白质即聚焦形成一条区带,只要测出此区带所处部位的pH值,即为其等电点。电泳时间越长,蛋白质聚焦的区带就越集中,越狭窄,因而提高了分辨率。这是等电聚焦的一大优点,不像一般的其他电泳,电泳时间过长则区带扩散。所以等电聚焦电泳法不仅可以测定等电点,而且能将不同等电点的混合的生物大分子进行分离和鉴定。早期的等电聚焦电泳是垂直管式的,其特点是体系是封闭的,不与空气接触,可防止样品氧化。近年来,又发展了超薄层水平板式等电聚焦电泳。此法的优点是加样数量多,节省两性电解质,电泳后固定、染色、干燥都十分迅速简便,其最大优点是防止了电极液的电渗作用而引起正负两极pH梯度的漂变。测定pH梯度的方法有四种:1.将胶条切成小块,用水浸泡后,用精密pH试纸或进口的细长pH复合电极测定pH值,然后作图。2.用表面pH微电极直接测定胶条各部分的pH值,然后作图。3.用一套已知不同的pI值的蛋白质作为标准,测定pH梯度的标准曲线。4.将胶条于-70℃冰冻后切成1mm的薄片,加入0.5ml 0.01M KCl,用微电极测其pH。三、仪器和用具1.电泳仪2.垂直管式园盘电泳槽一套3.注射器与针头4.移液管:10ml、5ml、2ml、1ml、0.1ml5.小烧杯若干6.培养皿一套7.直尺8.小刀9.精密pH试纸和带细长复合pH电极的pH计10.塑料薄膜和橡皮筋
[size=10px][b]一、琼脂糖凝胶电泳原理[/b] 琼脂糖凝胶电泳是一种重要的分子生物学研究方法,?它利用琼脂糖凝胶的网络结构,?通过电场作用使带电颗粒(?如DNA或RNA)?在凝胶中移动,?根据分子大小和电荷性质的不同实现分离。?这种技术不仅操作简单迅速,?而且具有高分辨率,?因此在基因操作中扮演着关键角色,[font='PingFang SC']其[b]原理主要基于DNA分子的两大特性:电荷效应和分子筛效应。[/b][/font] ?琼脂糖是一种天然的长链状聚合分子,它在沸水中溶解,当温度降至45℃时开始凝固并形成多孔刚性立体网状结构,其孔径的大小取决于琼脂糖的浓度。 [b]分子筛效应[/b]指的是琼脂糖凝胶由琼脂糖分子交联形成的网状结构,其孔径大小与琼脂糖浓度成反比。当DNA分子通过凝胶时,会受到凝胶孔径的阻碍。较小的DNA片段可以通过凝胶孔隙,而较大的DNA片段则会被阻挡,导致迁移速率降低。?? [/size][align=center][size=10px] [/size][/align][size=10px][b]电荷效应[/b]指的是DNA分子在碱性条件下(pH7)会电离,带负电荷。当DNA样品置于电场中时,在外加电场的作用下受到电场力的作用,向正极方向移动。DNA分子的迁移速率与其所带的电荷量成正比,而电荷量又与DNA片段的长度成正比。因此,在相同电场条件下,较长的DNA片段迁移速率较慢,而较短的DNA片段迁移速率较快。不同DNA的分子量大小及构型各不相同,因此它们在电泳中的迁移率也会有所不同,从而可分离出不同的区带。[b]为什么核酸条带显示荧光?[/b]主要便于观察,对核酸进行了染色。溴化乙锭EB是一种扁平状分子,在紫外光照射下能发射荧光。当EB与DNA分子形成EB-DNA复合物后,其发射的荧光强度比游离状态的EB提高10倍以上,且荧光强度与DNA的含量呈正比。 [b]二、?琼脂糖凝胶电泳的详细操作步骤(1%琼脂糖凝胶电泳为例) [font='Times New Roman', 'serif']1.安装制胶模具[/font][font='Times New Roman','serif']:[/font][/b]利用电泳托盘,安装制胶模具,水平放置于试验桌上。 [b][font='Times New Roman', 'serif']2.[/font]制备琼脂糖凝胶:[/b]将琼脂糖粉末溶解于缓冲液中,加热煮沸,冷却后凝固成凝胶。(根据电泳所需要的分辨率准备琼脂糖-电泳缓冲液凝胶溶液)[font='Times New Roman','serif'](1)[/font]称取[font='Times New Roman','serif']1g[/font]琼脂糖,放入盛有[font='Times New Roman','serif']100mL 0.5×TBE[/font]缓冲液的[font='Times New Roman','serif']500mL[/font]三角瓶中,摇匀用天平称量其重量,摇匀。在微波炉中,使琼脂糖完全溶解,放回天平上,加入蒸馏水补齐至初始重量。冷却至不烫手([font='Times New Roman','serif']55℃[/font]左右),加入[font='Times New Roman','serif']100μL[/font][font='Times New Roman','serif']0.5mg/mL EB[/font]溶液(终浓度为[font='Times New Roman','serif']0.5 μg/mL[/font]),或加入[font='Times New Roman','serif']5-10μL[/font][font='Times New Roman','serif']StarGreen DNA Dye(GenStar)[/font],摇匀。 [font='Times New Roman','serif'](2) [/font]将凝胶溶液倒入安装好的制胶模具中,凝胶厚度应在[font='Times New Roman','serif']3-5mm[/font]。 [font='Times New Roman','serif'](3) [/font]选择合适的梳子,梳子的插入深度应使齿的底部和板的表面距离在[font='Times New Roman','serif']0.5[/font]到[font='Times New Roman','serif']1.0mm[/font]。要检查梳子齿下方或之间是否有气泡,在室温下冷却凝固。 [font='Times New Roman','serif'](4) [/font]待凝胶充分凝固后,垂直向上小心拔出梳子,以保证点样孔完好。 [font='Times New Roman','serif'](5)[/font]将凝胶置入电泳槽中,加入[font='Times New Roman','serif']0.5×TBE[/font]缓冲液[font='Times New Roman','serif'],以浸没凝胶约1mm为合适。[/font] [/size] [size=10px][b][font='Times New Roman','serif']3[/font][font='Times New Roman','serif'].[/font]制备DNA样品:[/b]将DNA样品与上样缓冲液混合。[/size] [size=10px]把DNA样品和上样缓冲液混合,利用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]把电泳样品加到没入缓冲液中凝胶槽中,在凝胶的两侧样品槽内加入合适的分子量标准品。[/size] [size=10px]上样量的多少根据样品中DNA片断的多少和大小而定,已知浓度的DNA用于估测样品质粒DNA的浓度。 [b][font='Times New Roman','serif']4.[/font]电泳:[/b]将DNA样品加载到凝胶上的样品孔中,在电场的作用下进行电泳。[/size] [size=10px]盖上电泳槽的盖子,正确连结电泳槽上的导线。电泳电压以正负电极的距离的一到五倍为合适(1到5V/cm)。如果电泳线连接正确,那么在进行电泳时可以看到有气泡从电泳槽内电极导线处产生,同时,在几分钟后,可见溴酚蓝条带从负极向正极移动,从上样槽内移入胶体。[/size] [size=10px][b]5.观察:[/b]当核酸样品移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳。电泳结束后,利用紫外灯观察DNA片段的迁移情况。当DNA样品在凝胶内移动到合适的距离时,关闭电源,去除电泳导线和电泳槽盖子。在室温下,用电泳缓冲液或水配制的EB溶液(0.5 μg/ml)对凝胶进行染色[b][font=-apple-system, helvetica, sans-serif]。[/font] 三、琼脂糖凝胶电泳的主要应用[/b] [/size] [size=10px][b]1.DNA片段的鉴定:[/b]通过比较DNA片段的迁移距离,与标准品进行对照,可以判断DNA片段的大小。[/size] [size=10px][b]2.DNA片段的分离:[/b]利用不同大小DNA片段的迁移速率差异,可以将DNA片段进行分离。[/size] [size=10px][b]3.DNA的纯化:[/b]通过电泳将目的DNA片段与其他杂质分离,得到纯化的DNA片段。(割胶回收)[/size] [size=10px][b]四、操作技巧和注意事项[/b][/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]1.EB毒性[/size][/font][/b] [size=10px]EB是一种很强的诱变剂。在接触含有EB溶液时,应该全程戴手套和口罩。[/size] [size=10px]电泳中使用的溴化乙锭(EB)为中度毒性、强致癌性物质,务必小心,勿沾染于衣物、皮肤、眼睛、口鼻等。所有操作均只能在专门电泳区域操作,戴一次性手套,并及时更换。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]2. 加热熔化琼脂糖[/size][/font][/b] [size=10px]用微波炉加热熔化琼脂糖时,溶液体积不能超过三角瓶容量的1/3,以免煮沸时溶液溢出。同时,琼脂糖必须完全熔化,否则可能导致电泳图像模糊不清。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]3.凝胶厚度[/size][/font][/b] [size=10px]凝胶的厚度一般为4-6nm,若太厚可能会影响检测的灵敏度。待凝胶充分凝固后才能拔出梳子,以保证点样孔形状完好,防止漏样。[b][font='Times New Roman','serif']4.上样[/font][/b][/size] [size=10px]上样时,须先除去点样孔中的气泡,并且加样操作需小心谨慎,以免漏样或损坏胶孔。[/size] [b][font='Times New Roman','serif'][size=10px]5.电泳电压[/size][/font][/b] [size=10px]选择适当的电泳运行条件很重要,包括电压和距离。推荐的电压范围是4-6V/cm,电压太低会降低迁移率,电压太高会降低分辨率。[/size]
单细胞凝胶电泳步骤:1. 分离制备单细胞悬液:(1) 体外培养的细胞株:用胰酶消化,最后用PBS悬浮吹打成单细胞悬液,细胞要计数,具体的量我前边已经说过。(2) 体内脏器细胞:处死动物,取出脏器,于Hanks’液中制备成单个细胞悬液。2. 胶板制备:(1) 取100μl于45℃水浴中保温的0.5%NMA,铺于磨沙载玻片上,形成底胶。盖玻片推匀,不能有气泡,4度凝固5至8分钟。(2) 水平取下盖片,取100μl于37℃水浴中保温的0.5%LMA与20μl细胞悬液(约400个细胞)混匀,立即铺片,加上盖玻片,4度凝固5至8分钟。3. 细胞裂解与电泳:(1) 将制备好的胶板去掉盖玻片后,浸于4℃预冷的细胞裂解液中,在4℃下裂解2.5到3小时。(2) 取出胶板,用双蒸水浸没漂洗后放入电泳槽中,浸泡在4℃预冷的电泳液中解旋20分钟。(3) 玻片水平放置阳极端附近,4℃电泳20到25分钟(25V,300mA)。可在电泳槽周围加冰块以保持低温。4. 中和与染色:(1) 电泳结束,将胶板浸泡于中和液中,每次10分钟,共中和3次,每次要更换中和液。最后晾干。(2) 取出胶板,置于染色缸中,在2μg/ml的EB染色液中,暗处染色5到10分钟。(3) 蒸馏水漂洗2次,每次5分钟。稍晾干,滤纸吸去多余水分,尽快在荧光显微镜下观察。从胶板制备开始到最后都应该在暗光下操作。先讲这些,你们可以先开始摸索,真正做了才能发现具体的问题,到时我们再探讨。
1.首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接,注意极性不要接反。 2.电泳仪电源开关调至关的位置,电压旋钮转到最小,根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。 3.接通电源,缓缓旋转电压调节钮直到达到的所需电压为止,设定电泳终止时间,此时电泳即开始进行。 4.工作完毕后,应将各旋钮、开关旋至零位或关闭状态,并拨出电泳插头。
仪器名称型号单位用途市场单价SNP芯片检测系统ISCAN1台高通量3500000生物大分子分析仪Labchip GX1台转基因实验950000核酸提取工作站Zephyr1台转基因实验900000序列分析系统ABI35001台转基因实验1750000有机溶剂试剂柜依拉勃 AVPD 8041台转基因实验42000干燥箱三洋 MOV-112P1台灭菌设备23000研磨仪M4001台种子粉碎150000电动移液器EPPENDORF2台前处理90008道移液器(含架)Research2台前处理2600012道移液器(含架)Research2台前处理34000单道连续移液器Research4台前处理50000384孔梯度PCR仪Mastercycler pro 3841台基因扩增,转基因130000梯度PCRT1002台基因扩增,转基因80000实时荧光定量PCR系统CFX96 Touch1台基因扩增,转基因550000台式冷冻小型离心机Fresco 211台前处理设备60000高压电泳仪JY-ECP30002套DNA检测电源9200普通低压电泳仪JY600D1套蛋白电源4980水平电泳槽JY-SPDT3套DNA检测电泳槽1980垂直测序电泳槽JY-CX2A2套[
双向电泳篇 1. 重泡胀后的胶可以不用转移到另一个电泳槽,直接跑 2D 的一向吗? 一般情况下是可以的。但当上样量特别大时,可能会有一部分蛋白质没有被胶条吸收,这样跑完 1D 和 2D 胶后,会有很多横向条纹。所以在这种情况下,最好在重泡胀后,将胶条转移到另外一个电泳漕中进行电泳。 2. 为什么我在等电聚焦前加的矿物油在聚焦后会减少,暴露出了胶条的背面? 这是因为 BioRad 的电泳槽有个盖子。为了固定电泳槽中的胶条,这个盖子上设计了对应的突起,以便压住胶条。由于虹吸作用,这个突起会导引矿物油到相邻的空电泳槽,从而降低有胶条的电泳槽中的矿物油液面。如果由此把胶条暴露在空气中,那对等电聚焦的影响将是毁灭性的。为了防止这个现象的发生,可以在相邻的空电泳槽里,也加入适量( 80 %满)的矿物油。 3. 跑第一向时,为什么要设定一个电流的最大值电压(50 μ A/ 胶)? 电流的平方和功率成正比。电流增大,功率增大,放出的热量也随之增大,就会导致胶条的温度增加。当温度超过 30 摄氏度时,缓冲液里的尿素就容易解离,产生一些极性分子,从而对等电聚焦产生影响。 4. 跑第一向时,为什么刚开始的电压比较低,而后逐渐增高? 刚开始时,体系内的带电小分子比较多(比如无机盐和双极性分子)。所以在这个阶段,电流主要是由这些小分子的移动所产生的。由于这些分子质量小,移动他们不需要很高的电压。当这些小分子移动到他们的目的地时(无机盐移动到极性相反的电极;两性分子移动到对应的 pH 条带),体系内的蛋白质才开始肩负起运载电流的任务,逐渐向所对应的 pH 区域移动。 5. 跑第一向时,为什么会产生一条蓝色的条带,并逐渐向酸性端移动? 蓝色条带是缓冲液中痕量的溴酚蓝被聚焦所产生的。溴酚蓝也是 pH 指示剂,当它移动到酸性区时( pH4 ),颜色会变成黄色。溴酚蓝的这个移动过程大体上发生在极性小分子的聚焦之后,蛋白质大分子聚焦之前。 6. 跑第一向时,为什么电压总达不到预定值? 当上样量比较大时或体系内盐分比较多时,聚焦的电压有可能达不到所设定的数值。 7. 跑第一向时,在电压达到预定值后,电流为什么会降低? 当上样量比较少时,所有蛋白在较短的时间内就移动到所对应的 pH 值区域值,从而变成中性分子。这样,体系的电阻越来越大,在恒定的电压下,电流就会越来越小。 8. 跑第一向时,为什么在两个电极丝附近有气泡产生? 等电聚焦完成后,所有的蛋白质都移动到了相应的 pI 值区域,而成为中心分子。这是加在体系上的电压就开始电解水分子,在阳极产生氧气,在阴极产生氢气。 9. 重泡胀缓冲液(rehydration buffer)中的硫脲的作用是什么,双极性分子的作用是什么? 硫脲的作用是增加蛋白质的溶解性,特别是碱性蛋白的溶解性。双极性分子的作用也是增加蛋白质的溶解性。当蛋白移动到相应的 pH 值后,就变成了中性分子。而不带电荷的蛋白质分子容易聚集,从而降低其在随后的二向胶时的迁移效率,可能会造成竖的脱尾。而硫脲和双极性小分子则会鉴定中性蛋白质之间的相互作用,防止它们的聚集。 10. 怎样估计 2D 胶上蛋白质点的分子量和 pI 值? 可以用 BioRad 生产的 2D 胶标准蛋白来校准。也可以用体系内已知蛋白来做比对。 11. 为什么 2D 胶上的蛋白点有横的和竖的脱尾? 横的脱尾可能是: 1 )一向等电聚焦不完全; 2 )某些蛋白质本身的原因(糖蛋白); 3 )蛋白的丰度太高。竖的脱尾是因为跑二向时,蛋白的溶解度不好。 12. 什么成分会影响 2D 胶的效果? 核酸,盐,去垢剂等等。 13. 2D 胶的上样量应该在什么范围? 上样量和样品有关。样品内蛋白种类多的上样量要大些,这样每个点才有足够的量被检测到。一般的全细胞裂解体系,上样量大概在 100 微克(银染)到 500 微克(考染)之间。 14. 我的蛋白质浓度很低,应该用什么方法来浓缩? 蛋白质的浓缩有很多方法。大致有超滤法,沉淀法和透析法。超滤比较温和,对蛋白质不会有修饰和改变,蛋白的种类一般不会有丢失。它的缺点是总样品的量可能会减少(被膜所吸附)。另外超滤对样品的要求比较高。甘油,去垢剂都会堵塞滤膜,影响超滤的效果。沉淀法比较快速,容易操作,对盐,甘油,去垢剂的耐受性好。缺点是可能会有部分种类的蛋白没有被沉淀下来(丢失)。沉淀法中,又以 TCA 法最为普遍使用。使用 TCA 法时,一定要用冷的纯丙酮清洗蛋白沉淀两次,去处残留的 TCA 和其他沉淀下来的杂质。透析法只使用于量比较大的样品,量小时,操作困难。 透析法可以和超滤法联用。先把样品透析到一个比较干净的环境( 不含盐,甘油,去垢剂或其它杂质,比如碳酸氢氨溶液),然后再进行超滤。
电子政务建设中,“电子”部分的建设内容脱离不开“政务”。无论是网络和信息安全建设、应用系统建设,还是信息资源建设,都需要密切联系政府部门的机构部署、政务运作等特色内容。笔者认为,电子政务建设成功的关键,不是围绕技术、方案、项目而转,而是研究政府部门的组织机构和政务特色,分析政治利益源动力和商业动机满足程度。 “垂直”管理是我国政府管理中的一大特色,而且在行政体制改革中作为中央对地方进行调控的重要手段有不断被强化的趋势。我国目前比较重要的政府职能部门,主要包括履行经济管理和市场监管职能的部门,如海关、工商、税务、烟草、交通、盐业的中央或者省级以下机关多数实行垂直管理。1998年人民银行撤销省级分行,设立9家大区制分行,此后,银监、证监、保监均参照实行垂直管理,同年,省级以下工商管理机关实行垂直管理。2000年,省以下质量技术监督检验检疫局和药监局都实行垂直管理。2004年,国家统计局各直属调查队改制为派出机构,实行垂直管理。同年,省级下土地部门的土地审批权和人事权实行垂直管理,借以强化中央政府的宏观调控能力。2005年,国家安监总局下面的国家煤监局实行垂直管理,安监局仍然属于属地化管理。 此外,审计、环保、安监等部门积极寻求垂直管理,把垂直管理作为其改革的目标。除了上述形式的垂直管理以外,我国实行的督察制度又催生了来自不同中央部门的跨省区的大区机构,通过巡视、检查来督察中央政令在地方的实行情况,这也可以看成另外一种特殊的垂直管理形式。 “垂直”管理部门的四大特点 “垂直”管理和分级管理(即属地化管理)是相对而言的。与垂直管理相对应的是属地化管理,采用这类管理机制的政府职能部门通常实行地方政府和上级部门的“双重领导”,上级主管部门负责管理业务“事权”,地方政府负责管理“人、财、物”,且纳入同级纪检部门和人大监督。政府职能部门实行垂直管理,就意味着脱离地方政府管理序列,不受地方政府监督机制约束,直接由省级或者中央主管部门统筹管理“人、财、物、事”。不同部门的垂直管理机制在具体运作过程中,还有很多差别,如部分业务职能局独立出来实行垂直管理,不是全部事务实行垂直管理,垂直管理层延伸到地级市、区县或者乡镇街道。实行垂直管理部门共同的特点就是垂直性、相对独立性,业务运行基本上脱离同级政府的行政管理框架,封闭在系统的条条框架内,而且特别强调业务的敏感性和保密性。 电子政务的建设模式需要考虑垂直管理对其造成的影响。垂直管理和分级管理孰优孰劣,电子政务不予以置评。但是垂直管理部门业务封闭性运行这个显著的特点,必然对各级政府电子政务建设造成影响,需要加以综合考虑。垂直管理部门在政府信息化建设方面有四个特点。 第一,垂直管理部门的业务系统建设自成体系,业务系统经常由中央部委或者省级管理部门统一派发,不太鼓励基层部门自行开发共性的业务系统。第二,区县这个级别的基层垂直管理部门常常充当数据采集的终端,为省级或者中央部委垂直管理部门业务系统提供业务数据保障服务,不过,基层部门可以查询调阅省级或者中央部委业务系统的存档数据和权限内的业务状况。第三,多数垂直管理部门的业务网络自成体系,还没有通过政府外网或者内网与同级政府部门互联互通,如果要与其他业务关联部门交换数据,常采用新设孤立终端来倒换数据或者网闸摆渡的方法。第四,多数垂直管理部门属于具有经济管理或者行政执法权的强势部门一类,信息化建设经费相对而言比较充足,尤其是2002年正式确定金关、金卡、金桥、金财、金盾、金审、金保、金农、金质、金宏、金水等12金工程以后,信息化发展势头强劲,核心业务信息化的深度和广度都取得不错的进展,批评人士将此称为信息化“烟囱”越建越粗,信息化的“川”字越描越刚劲有力。 单纯从垂直部门自身的电子政务建设来看,这四大特点确实是推动了部门信息化进程,有利于推动部门核心业务的全面开展。但是,对于区县或地级市这样的地方政府而言,垂直部门业务系统和网络平台自成独立体系,数据资源集中合留置在省级或者中央部委级业务系统中,不言而喻,地方政府的政务信息资源就日渐空壳化。 业务数据不宜垂直封闭 地方政府依靠电子政务开展行政管理,迫切需要垂直部门提供数据支持,获得垂直部门的业务支撑保障。根据《地方政府组织法》,区县政府依法管理本行政区域内的经济、教科文卫体事业、环保、城建和财政、民政、公安、民族事务、司法行政、监察、计划生育等行政工作;保护各类合法财产,维护社会秩序,保障公民的人身权利、民主权利和其他权利等。为了有效履行法定职责,“保一方平安,服务一方百姓”,地方政府也需要全面掌握政府职能部门的信息资源和数据资料,在本级政府属地管理的权限内调用政府职能部门的业务系统,依靠信息化的手段提高地方政府的决策指挥能力和公共服务水平,提升地方政府的基层基础管理能力。虽然垂直管理意味着地方政府和上级政府在事权方面重新划分,但是,政务之间的密切相关性和地方政府的公共管理压力,迫切要求获得垂直部门的信息资源,实现行政相对人公共行政信息在不同政府部门的信息对称,填补政务割裂可能出现的管理漏洞,实现地方的善治。 垂直管理部门在电子政务层面与地方政府实现数据对接,并不违背中央部委或者省级部门垂直管理政府职能部门的初衷。根据多数人的认识,实行垂直管理,就是为了将政府职能部门从地方各级政府序列中分离出来,保持政府职能部门“人、财、物、事”等的相对独立,摆脱地方政府对部门事权的干预,用更高级别的行政权力来制约地方政府“有可能被滥用的权力”,强化中央对地方的宏观调控能力,实现“全国行政一盘棋”。垂直管理部门,在电子政务层面对地方政府开放数据资源,完全不影响垂直管理和属地管理的权力配置格局,也不会导致垂直管理部门受制于地方政府,相反,地方政府通过分享垂直管理部门采集的行政相对人的数据,可以提升管理能力和服务水平,而且,地方政府也可以采取灵活的方式向垂直管理部门开放自己掌握的行政相对人的信息资源,帮助垂直管理部门提升宏观调控能力,落实垂直管理的初衷。不同层级政府的的不同级别的法定行政权限,完全可以通过完善电子政务系统的权限分配机制等技术手段和辅助制定相关管理办法来解决。 退而言之,垂直管理部门可以通过将地方政府的数据调取权限设置到最低级别来约束地方政府的访问能力。 “垂直”管理,业务数据不宜垂直封闭起来,完全隔离于地方政府部门信息化范围之外。垂直部门的信息资源也需要为区县或地级市等地方政府提供共享服务。地方政府和垂直管理部门通过垂直数据的共享,可以实现行政相对人信息的信息对称,对于整个政府行政系统都是双赢,对于提高政府的管理能力和服务水平来说都有推动作用。[color=#DC143C][size=4][font=黑体]大家可能对垂直管理都不是非常了解,今天来说说什么是垂直管理[/font][/size][/color]
分子生物学仪器常用到:中型台式冷冻离心机、PCR仪、超纯水系统、水浴锅、紫外分光光度计、酶标仪、紫外透射仪、电泳仪、垂直电泳槽、凝胶成像系统、电激仪、恒温摇床、制冰机、酸度计、电子分析天平、PCR仪:移液枪(套):紫外分光光度计:高压电泳仪:全自动高压灭菌锅、分子杂交炉:
SuperBuffer(100X)简介主要用途DNA的快速电泳,取代传统的TAE和TBE。产品介绍SuperBuffer是一种革命性的超快高分辨核酸电泳液,由于其产热低,故可以以高达20-25V/cm的电压电泳,并且分辨率比传统电泳液更高。该产品能彻底替代TAE、TBE等传统DNA电泳液。主要特点1:快速工作电压可高达20-25v/cm,比TAE和TBE的5-8V/cm(见分子克隆手册)高2-4倍,电泳时间只有使用TAE或TBE时的1/4。分辨率要求不高的定性检测(如PCR检测和酶切检测)可以在十分钟内完成。2:高分辨快速电泳防止了DNA的扩散,用0.5%的胶得到的电泳分辨率与用2-3%的胶(TAE或TBE电泳)得到的相当(效果图见www.tiandz.com网站相关内容)。3.不影响后续的杂交,回收和连接等反应。4.节约成本,0.5-1%的胶适合于分离大小在100bp-50kb之间的DNA,不需要高浓度胶。本产品能反复使用数次。5.销售价格与市售国产TBE更便宜,产品有粉剂、预配液两种规格供客户选择。物理特性无色液体,4度或常温保存二:SuperBuffer(100X)的使用SuperBuffer(100X)必须在使用前用水稀释100倍,其后的使用方法跟TAE或TBE的使用完全一样。如果使用高电压则有以下建议。1.琼脂糖胶浓度分离从100bp到50kb的DNA片段均可使用0.5-1%的胶并能得到较高的分辩率。使用SuperBuffer电泳时由于可以高压电泳,胶浓度似乎越低电泳效果越好,也许是因为电泳速度越快,小片段DNA的弥散现象越轻,速度对小片段DNA弥散的影响超过了胶浓度对它的影响,故不必靠高浓度的胶来提高分辨率。使用高浓度的胶反而会使电泳时间加长,得不偿失。2.EB染色如果使用20-25V/cm电压,最好不要把EB加入上样液中,否则EB很容易在高压下与DNA分离。建议在倒胶前将EB直接加入琼脂糖中, EB的最佳终浓度为0.4 -0.5μg /ml。原理上SuperBuffer与EB以外的其它核酸染料(如SYBR Green)兼容,但天泽基因暂时没有进行相关实验,有待用户自己实验验证。3.样品的离子强度SuperBuffer比TAE和TBE对样品离子强度更敏感。如果待测样品(如酶切产物,PCR产物)的离子强度与DNA分子量对照(如DNA ladder)的离子强度不同,则离子强度低的泳动稍快,估算得到的DNA分子大小可能稍有误差。如果需要准确估计,建议电泳使分子量标准和待测样品的盐浓度一样(在分子量标准中加酶切或PCR缓冲液)。4:电泳液用量与电压的关系 如果电泳槽的容量在100-200ml左右的(迷你型电泳,电极距离10cm左右),可以使用200-250V电压进行电泳。电压如果超过20V/cm,则电泳时间不宜超过三十分钟 (在此电泳条件下,电泳三十分钟足够将0.1-5kb的DNA分开)。如果电泳槽的容量为600ml或更大,22.5V/cm(按正负两极距离)电泳一小时以上一般没有任何问题。5:SuperBuffer的重复使用SuperBuffer缓冲液最多可重复使用4-5次左右(如果电泳槽的容量为600ml的话);重复使用前最好将其搅拌混匀并放置片刻,以恢复其缓冲能力。随着重复使用次数增加,相同电压下DNA电泳速度会稍微加快,但分辨率变化不大。6:电流电压降低现象若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象,请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限,如果有上限设置,需将其调高使之与电泳电压匹配。如果原因不明,请与仪器生产厂家联系。部分电泳仪器做最高使用电压为200V。7:与RNA变性胶, 碱变性胶,脉冲电泳和PAGE的兼容性天泽基因没有进行相关兼容性实验。
测试需要把1cm的样品槽换成3cm,怎么检查样品槽与入射光垂直?