研究级正置显微镜

在过去的二十年中，冷冻显微镜方法已经成为生命科学家、制药研究人员等广泛使用的有效工具，用于检查接近其原生状态的生物结构1。冷冻显微镜能够可视化蛋白质和蛋白质复合物等物质的生物分子结构，是对现有的方法如x射线晶体学和核磁共振(NMR)等的有价值的补充。确定蛋白质和蛋白质复合物的结构是药物发现的一个重要部分，这对研究药物靶点非常有意义，也是深入了解疾病机制的重要课题。在这篇文章中，我们将阐述冷冻显微镜技术的使用，包括冷冻光学电子显微镜(cryo-CLEM)，冷冻干燥显微镜(FDM)，药物研究中的低温保存，以及温度控制显微镜如何使研究人员能够在低温下推进药物发现和开发研究。冷冻光学电子显微镜（Cryo-CLEM）电子显微镜(EM)使用微量材料，具备接近原子的分辨率，可以研究不同功能状态下的分子。冷冻电镜（Cryo-EM）使用极低温度，克服了真空条件下使用电子束测量高含水量生物标本的难题。在20世纪80年代冷冻电镜商业化之前，生物标本是通过化学固定或染色等方法制备的，但这些方法存在保存伪影，会影响图像分辨率。快速冷冻通常用于将样品保持在与自然生理环境相似的冷冻状态，在临床前阶段取得的结果必须在临床研究中可复制，这在药物研究中尤其重要。Cryo-CLEM结合低温荧光技术和冷冻电镜技术，提高了活检细胞内生物、化学和遗传过程的灵敏度。Cryo-CLEM能够对冷冻固定样品中的分子或分子组件(如细胞内膜、DNA或细胞结构元件)进行直接荧光标记和靶向，精确定位区域，以便后续使用EM进行高分辨率成像。为了使生物样品与EM中发现的真空条件兼容并保存结构细节，样品被嵌入玻璃状的冰中，需要保持在-140°C以下。必须避免与空气中水分接触，因为一旦接触会形成冰晶并污染样品。在低温条件下，荧光信号的结构细节被保留，光漂白显著减少。冷冻光学电子显微镜技术的进步体现在它包含了创新的冷冻荧光级，如Linkam CMS196，它能够自动获取整个电镜网格的高分辨率荧光图。这也用于样品导航，并将cryo-CLEM的案例情况与EM或与x射线显微镜等其他技术相关联。西班牙巴塞罗那的一组研究人员和临床医生使用荧光显微镜、透射电子显微镜(TEM)和低温软x射线断层扫描(cryo-SXT)，可以观察到抗癌药物顺铂在极低浓度下的有效性，确定产生效果所需的最低剂量，以最大限度地降低毒性2。该小组在荧光显微镜上对低温冷冻的细胞样本进行成像，使用CMS196冷冻荧光台在液氮温度下将它们玻璃化，然后使用cryo-SXT对样本进行分析，这使得在纳米尺度上进行3D研究成为可能。得益于现有的低温成像技术，研究结果表明，三甲碱(研究的两种佐剂之一)促进了顺铂在较低剂量下的有效治疗，这可能为化疗治疗的发展铺平了道路，减少了对患者的副作用。冻干显微镜许多药物生产为冻干或冻干配方，以增加稳定性和延长保质期。药物开发人员必须为新的药物化合物创建一个优化的冷冻干燥过程，这可能是一项复杂而昂贵的工作。为了简化流程和开发更高效的冷冻干燥循环，了解三个主要冷冻干燥步骤的温度和压力要求是很重要的。使用冷冻干燥显微镜(FDM)，研究人员可以直接可视化每个步骤，并确定药物产品在不同热条件下的行为。FDM包括一个专用的光学显微镜和一个专用的热工作台，它可以准确地控制样品的温度和压力，并允许实时进行热测量。冷冻干燥的一个关键参数是塌陷温度(Tc)，即产品失去结构完整性并导致加工缺陷的温度。FDM使药物开发人员能够密切监测样品并快速有效地调整冷冻干燥方案。英国国家生物标准与控制研究所(NIBSC)的一个研究小组正在利用先进的FDM技术研究冷冻干燥药物的复杂性。该小组由Paul Matejtschuk博士领导，正专注于研究优化冻干脂质体药物的配方。由于冻干脂质体药物物理和化学性质不稳定，这对开发提出了挑战。Matejtschuk博士和他的团队使用安装在光学显微镜上的专用冷冻台(FDCS196, Linkam科学仪器)(图1)，通过估计冻结、塌陷和融化温度，预测脂质体-冷冻保护剂混合物的理想的冷冻干燥条件3。图1:NIBSC实验室的仪器配置。Linkam FDCS196冷冻干燥冷冻台，T94控制器和液氮泵，真空泵，奥林巴斯BX51光学显微镜。图像显示FDM系统的旧版本图2: Linkam FDCS196冻干显微镜系统的最新版本这样的实验对于继续努力开发快速、可转移和可扩展的冷冻干燥方法来稳定脂质体等药物化合物至关重要。低温贮藏储存用于研究的生物标本有赖于有效的保存技术，以保持细胞的物理和生物完整性。冷冻或冷冻样品可能会导致冰晶的积聚，导致终端细胞损伤。冷冻保护剂是在冷冻过程中通过降低水的熔点来防止细胞损伤的重要物质。许多生物，如极地昆虫、鱼类和两栖动物，会产生自己的冷冻保护剂或防冻化合物。科学家们正在研究这些化合物，以开发新的冷冻保护剂来保存研究用的细胞。例如，由Matthew Gibson博士领导的英国华威大学的研究人员，正在研究防冻剂(糖)蛋白(AFP)，目的是开发新的合成AFP模拟化合物。该实验室使用低温生物学工作台(BCS196，Linkam Scientific Instruments)来测量细胞中的冰晶生长，依靠该仪器的温度控制能力来观察AFP。Gibson博士研究了使用金纳米颗粒作为探针来测量冰再结晶抑制活性现象，使用低温生物学工作台来改变温度，并开发出一种高通量方法来筛选类似AFP具有结构特征的材料。4诸如此类的发现为开发新型冷冻保护剂提供了潜力，这种保护剂可以防止冷冻保存细胞中冰的生长，从而保持细胞的完整性，因此在生物医学和药学研究中具有潜在用途。未来药物研究本文中描述的技术强调了目前已有的各种冷冻显微镜方法的选择，这些方法有助于推进药物研究。Cryo-CLEM结合了cryo-EM和低温荧光的力量，作为一种相对较新的技术，它的成功依赖于专用冷冻工作台的发展，从而促进了Cryo-CLEM工作流程。这种工作台能够在液氮温度下保持玻璃化样品，使它们在从荧光显微镜移动到冷冻电镜成像时保持无污染。其他专用的冷冻台可与广泛的显微镜技术兼容，如FDM，可在成像过程中精确控制样品的温度，低至-196°C。这些创新为制药研究人员新疗法和生产工艺评估，以及生物样本保存以供未来研究等大量应用提供了工具。 作者：Linkam Scientific Instruments销售及市场部经理Clara Ko参考文献：1. Booy, F. and Orlova, E.V. Cryomicroscopy, in: Chemical Biology: Applications and Techniques (eds Larijani, B., Rosser, C.A., and Woscholski, R.) 2007.2. Gil, S., Solano, E., Martinez-Trucharte, F., et al. Multiparametric analysis of the3. effectiveness of cisplatin on cutaneous squamous carcinoma cells using two different types of adjuvants. PLoS ONE. 2020 15(3): e0230022.4. Hussain M.T., Forbes N., Perrie Y., Malik K.P., Duru C. and Matejtschuk P. Freeze-drying cycle optimization for the rapid preservation of protein-loaded liposomal formulations. International Journal of Pharmaceutics 573, 2020 118722.5. Mitchell, D. E., Congdon, T., Rodger, A., and Gibson, M. I. Gold Nanoparticle Aggregation as a Probe of Antifreeze (Glyco) Protein-Inspired Ice Recrystallization Inhibition and Identification of New IRI Active Macromolecules. Scientific Reports, 2015 5: 15716.

50年前,奥林巴斯科学事业部随同奥林巴斯集团进入中国,并与之一同深耕中国市场至今。32年前,以映像事业起步,奥林巴斯集团在中国广州建立起了中国的首家工厂。今年四月,Evident成立,奥林巴斯科学事业部以新的名字扬帆启航独立运营。八月,奥林巴斯集团广州工厂更名为Evident广州,在番禺新址启动生产,主要从事显微镜及组件的制造、物镜制造及光谱仪维修等业务,以匠人之心为中国客户提供研发制造及定制化服务,通过内在驱动产业链布局发展,进一步赋能中国本土市场。通过运用日本的精益生产(TPS)方式及制造革新活动,Evident广州工厂力争成为具有世界先进制造水平的模范工厂。Evident广州工厂新址中国制造,走向全球中国是Evident实现成长的关键市场,也是Evident以新身份启程,寻求加速创新的重要支柱。而在进入中国市场50周年之际,暨2022年10月,Evident广州工厂在取得NMPA认证后,第一批国产研究级显微镜也顺利出货。研究级显微镜BX3系列出货仪式伴随第一批国产研究级显微镜一同走向市场的,还有Evident对于中国制造的信心,以及将中国制造的高质量产品送往全世界的美好愿景。团结高效，追求速度与效率的企业文化Evident广州工厂有着32年的历史,通过不断地转型革新,最终淬炼出了恪尽职守、精益求精的制造人才队伍,以及团结高效的企业文化精神。发展至今,Evident广州工厂以显微镜为核心业务立足,主要涵盖了17种显微镜本体制造(年出货量达7万台)、45种显微镜组件制造(年出货量达6万件)、58种物镜制造(年出货量达9.5万件)、并涵盖了1300种的零部件销售、5种光谱仪的维修(年维修能力400台以上)等业务。可持续发展,赋能中国本土作为曾经的奥林巴斯科学事业部,Evident视可持续发展为己任,通过构建低碳生产、节能回收等举措,以身作则,引导员工主动参与环保公益事业 ,积极践行可持续理念。同时,Evident将继续践行对中国市场的长期承诺,为中国市场提供更多前沿的生命科学及工业领域的光学产品与服务,为中国人民安心、健康的美好生活做出贡献。Evident中国区CEO出射邦弘Evident中国区CEO出射邦弘先生表示,“Evident会继续在探索与创新的道路上前行,通过持续不懈地转型革新,为中国市场和客户带来前沿的产品技术与高质量的服务支持。Evident的业务模式正从以销售产品为中心转变为专注于解决客户问题和挑战,从产品制造商升级为优化业务流程效率的合作伙伴,向客户提供高质量的产品及服务。同时,Evident也将扩展包括云技术在内的数字技术解决方案,改善研究和检测领域的整体工作流程,增强客户体验,满足客户更新迭代的需求。未来,Evident也将秉持一贯的研发创新精神,利用Evident广州工厂这一制造平台与中国的合作伙伴一起为中国市场提供更多满足中国客户需求的本地化定制化的前沿产品与服务,满足多领域更新迭代的需求。”附注:仪景通光学科技(广州)有限公司是Evident位于广州市番禺区的显微镜制造工厂,属于广州市重点外资企业,已获得ISO9001、ISO13485医疗质量管理体系、ISO14001环境管理体系、 “番禺区A级医疗器械生产企业”、“海关AEO高级认证企业”、“广州市劳动关系和谐企业AA级”、“广东省纳税信用A级企业”等认证。Evident致力于建立以制造为轴心的模范企业,利用精锐的人才队伍,建立能够举全员之力的敏捷组织,锐意创新、快速高效地应对客户需求。

项目编号：CLZ0122ZJ01ZC40项目名称：湛江湾实验室细胞生物学共享平台（一期）正置荧光显微镜、体视荧光显微镜等设备采购项目采购方式：公开招标预算金额：2,500,000.00元采购需求：合同包1(湛江湾实验室细胞生物学共享平台（一期）正置荧光显微镜、体视荧光显微镜等设备采购项目):合同包预算金额：2,500,000.00元品目号品目名称采购标的数量（单位）技术规格、参数及要求品目预算(元)最高限价(元)1-1显微镜正置荧光显微镜1(台)详见采购文件600,000.00-1-2显微镜体视荧光显微镜1(台)详见采购文件450,000.00-1-3显微镜全自动三维立体显微系统1(套)详见采购文件500,000.00-1-4显微镜倒置荧光显微镜1(台)详见采购文件350,000.00-1-5显微镜显微操作系统1(套)详见采购文件600,000.00-本合同包不接受联合体投标合同履行期限：进口设备自合同签订之日起180天内（国产设备自合同签订之日起60天内）完成设备的交货、安装、调试、试运行以及验收合格，交付并投入正常使用。