新显微分析菌落计

[font=SimSun, STSong, &]最近几次产品做的菌落总数，总是出现蔓延状态，同时做几组不同产品，固定的一种产品出现这种情况（之前没有出现蔓延的情况），麻烦大家分析一下，谢谢！[/font]

菌落长菌了，想用显微镜看一下它的细胞形态，怎么做，望老师不吝赐教

[align=center][/align][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][size=18px][color=#444444]菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的菌落数。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。菌落总数超标的食品，可能会引起急性中毒、呕吐、腹泻等症状，危害人体健康安全。那么，菌落总数超标的原因及其解决方案有哪些呢？下面我们就从六个方面角度来逐个分析。人员食品生产运输销售的各个环节员工的不正确行为都有可能导致菌落总数超标，而其中较为普遍的可能为：1、负责清洗消毒工作的人员对清洗消毒的频率及要求执行不到位或不了解，可能出现生产环境卫生状况不良，生产设备连续使用未进行清洗消毒，对生产设备清洗不干净或消毒不严，产生微生物滞留和滋生等情况造成食品污染，进而导致菌落总数超标。2、生产操作人员不按生产要求进行操作。如负责杀菌工序的人员对杀菌的参数及要求执行不到位或不了解，可能导致杀菌不彻底.03、员工培训不到位，缺乏卫生意识。如加工过程中生熟不分发生交叉污染，进而导致菌落总数超标。设备设备设施的能力和状态也可能与菌落总数超标有关。此处我们以杀菌设备和包装机为例。包装后需进行杀菌的产品，若杀菌设备性能不足、温度计未校准导致杀菌不彻底都有可能引起菌落总数超标。针对杀菌设备，我们可以通过做热力分布和热穿透测试，验证杀菌釜的性能以及定期使用温度记录仪，跟踪杀菌过程产品温度的变化、做好温度计的校准等工作来避免菌落总数超标。同样的，包装机若密封性能不足，可能导致产品在杀菌和后期的贮存过程中出现被污染的情况。针对包装机，我们可以通过建立包装机性能验证，确保密封性良好，同时做好内包车间和包装机的清洁卫生来减少菌落总数超标的可能。物料物料主要包括各种原辅料、内包材、生产用水和冰等，若各种料原始微生物含量较高，还是有增加后期产品菌落总数超标的风险；因此我们应有针对性的对原辅料包材进行评估，制定一定的验收要求并对原辅料包材进行对应的检测，并在贮存和加工过程中做好温湿度控制和环境管理。另外，内包材在使用前还可考虑采取紫外灯或臭氧进行消毒。对于生产用水和冰，可以采取每周一次的频率对其微生物状况进行验证。方法方法主要指的各种有关微生物措施制定的合理性。如，设备设施、环境、人员清洗消毒的频率及方法是否合理？杀菌公式的设定是否合理？生产过程中环境温湿度的控制是否合理？食品储存和运输中设定的条件（如冷链）是否合理等。这种情况，可以采取的措施就是验证。通过对事前事后进行微生物实验，将得出的数据进行比对，确认方法是否可行。除此之外，我们还可以通过调整一定的参数并采集实验数据来对方法进行优化，进而确定最合适的方法。环境从原辅料的运输、贮存、加工成成品以及销售等各个环节场所的不当，都有可能导致产品菌落总数超标。如包装车间卫生不当、生产环境温湿度控制不当、废料间卫生间位置设施不当等等。针对环境，我们可以采取的措施是合理考虑各个场所的布局、严格控制各个环节的温湿度以及持续保持各个场所的卫生等。流通若在流通环节检出多种食品存在菌落总数超标的情况，则问题极有可能是销售方未按照规定要求存储、摆放食品，比如个别超市不具备低温冷藏设施却销售需冷藏的食品，有的食品标签标注储存条件为避光，销售者却将食品置于阳光直射条件下等。[/color][/size][/font]

一、实验原理稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个细胞，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些产品检定，如根瘤菌剂等产品检定，生物制品检验，土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。在自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的，因此土壤是人类开发利用微生物资源的重要基地。土壤中的微生物数量、种类与土壤肥力有关，肥沃的土壤中多，贫瘠土壤中少。其生理类群则与土壤的其它理化性质，如通气、pH有关，例如在通气良好的菜园土中，好气性微生物占有绝对优势。本实验以菜园土为材料分离土壤中的好气性细菌，并进行数量测定。分离微生物时，一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其它菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单个菌落进一步分离纯化。在用稀释平板分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。放线菌与细菌同属原核微生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其是在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。本实验采用高氏一号琼脂培养基分离和计数菜园土中的放线菌。真菌在土壤中的数量次于细菌和放线菌，主要在有机质丰富、透气性好的偏酸性土壤中较多。分离土壤中的真菌并不难，但由于其菌落大，容易扩展，计数准确性较低。本实验采用加有氯霉素或庆大霉素和孟加拉红的马丁氏培养基分离及计数菜园土中的真菌。按一般资料介绍为链霉素，但此种抗生素要先配成一定浓度的溶液，且应于倒平板前才加入培养基中。在此培养基上，放线菌和细菌被氯霉素或庆大霉素和孟加拉红所抑制，但大多数真菌能够生存，且其菌落受孟加拉红的抑制而较小，从而避免了某些真菌的扩散蔓延而带来的数量上的误差。

[em09508]，最近一批货，本人检测的时候，微生物为560 ，对方居然检测到1300，由于要求标准为1000。本人分析原因，排除：1。平板的培养基温度没有问题，重新检测时倒完培养基时都有点结块了（两个稀释度加两空白）。培养基是买人家配好，可以溶解直接灭菌检测用的。2。样品称样量。如果是这个原因，电子称的差距也太大了吧。3。灭菌。时间短，那应该染菌。时间长也不能(我们的灭菌锅是手提的，盛水量就3.5L），达到灭菌温度，40min干锅。4。配试剂的水是蒸馏水。5。培养相温度，用温度计检测在35-36之间，符合国标阿。 由于本人多年不做微生物，且企业比药厂的差距比较明显，所以，这种时候，再请求第三方检验前，大家帮忙看看，还会使哪些小细节出了问题。再此先感谢诸位战友了。 注：由于对方按照的是05药典，所以按照的是食品卫生无学检验-总菌落数gb04789.02-2003。所以我也不用０８版的培养基，仍用营养琼脂。

看饮用水国标里微生物指标的检测方法好像都是用显微镜，肉眼计数，大家都用的都是什么牌子的显微镜？另外，肉眼计数太痛苦，用菌落计数器可不可以？另外，检测“两虫”的仪器哪些厂商有？

一、菌落总数介绍：　　菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。　　菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。　　菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。二、检验方法　　菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。　　基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。　　国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。　　检验方法参见：　　GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定》　　SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准 出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：　　1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。　　固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1：10的均匀稀释液。　　用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1：100的稀释液。　　另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。　　2．无菌操作：操作中必须有“无菌操作”的概念，所用玻璃器皿必须是完全灭菌的，不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装，应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。　　操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。　　3．采样的代表性：如系固体样品，取样时不应集中一点，宜多采几个部位。固体样品必须经过均质或研磨，液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。　　4．样品稀释误差：为减少样品稀释误差，在连续递次稀释时，每一稀释液应充分振摇，使其均匀，同时每一稀释度应更换一支吸管。　　在进行连续稀释时，应将吸管内液体沿管壁流入，勿使吸管尖端伸入稀释液内，以免吸管外部粘附的检液溶于其内。　　为减少稀释误差，SN标准采用取10mL稀释液，注入90mL缓冲液中。　　5．稀释液：样品稀释液主要是灭菌生理盐水，有的采用磷酸盐缓冲液（或0.1％蛋白胨水），后者对食品已受损伤的细菌细胞有一定的保护作用。如对含盐量较高的食品（如酱油）进行稀释，可以采用灭菌蒸馏水。（二）倾注培养　　1．操作方法：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。　　将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。　　待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。　　2．倾注用培养基应在46℃水浴内保温，温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易于凝因而不能与菌液充分混匀。如无水浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。　　倾注培养基的量规定不一，从12~20ml不等，一般以15ml较为适宜，平板过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾注时，培基底部如有沉淀物，应将底部弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。　　3．为使菌落能在平板上均匀分布，检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过[

用GB/T4789.2-2010分析菌落总数的时候，是先加1mL稀释样液到培养皿中，再往培养皿中倒入10～15mL的营养琼脂，如果我是先加入10～15mL的营养琼脂，再加入1mL稀释样液到培养皿中，有区别吗？谢谢

微生物只做空气菌落总数，阳性菌不做，对微生物实验室有什么要求？需要显微镜吗？需要阳性对照间吗？需要生物安全柜吗？最基本需要什么？欢迎大家讨论。

扫描电子显微技术与X射线显微分析 (美)戈尔茨坦(Goldstein,J.I.)等著 科学出版社 1988.8 79.871/9最好是电子版的，谢谢啦！！！

我都不知道该怎么说好，我们局长不知道从哪弄了个什么项目，是关于上游水库的，让我们给分析，昨天晚上送来三个，是临时用车里的矿泉水瓶子采的样，本来说没带无菌瓶就不分析总大肠菌群和菌落总数了，可是今天早上又变卦了，又要分析这两荐，我和科长跟他争辩，不用无菌瓶采数值做出来也不准，局长告诉我们，不管那些，只要做出数就行。我当时感叹了一句：[color=#827e7f][size=5]这是上帝派来整我的啊[/size][/color]。[img]http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09501.gif[/img]没办法，我又现烘的管子，现配的试剂，终于在下午14：30分析完毕。这水样是前一天采的，放在保鲜柜里了，然后第二天下午分析总大肠菌群和菌落总数，你们说这数能准吗？

[b]菌落计数的计数和培养步骤[/b] [align=center] [/align][b][font=宋体][size=16px][color=#535053]样品的稀释[/color][/size][/font][font=宋体][size=16px][color=#535053][/color][/size][/font] [font=宋体][size=16px][color=#535053]固体和半固体样品[/color][/size][/font][/b] [font=宋体][size=16px]称取25 g置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1min～2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用[color=var(--weui-LINK)]拍击式均质器[i][/i][/color]拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。[/size][/font] [align=center][b][font=宋体][size=16px][color=#535053]液体样品[/color][/size][/font][/b][/align] [font=宋体][size=16px]以[/size][/font][font=宋体][size=16px]无菌吸管[i][/i][/size][/font][font=宋体][size=16px]吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。[/size][/font] [img=图片]https://mmbiz.qpic.cn/mmbiz_jpg/fKutukicS8AY5sOWJb7yIaHibr1icWrdc7T0zUghd7XcjY8WtDUAqo0jItIA55dbqMiccNRa9L1ibwcMiaFnO3AIr57g/640?wx_fmt=other&wxfrom=5&wx_lazy=1&wx_co=1&tp=wxpic[/img] [font=宋体][size=16px]上步完成后，用1mL无菌吸管或微量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。[/size][/font] [font=宋体][size=16px]移液过程使用的器具，都应避免微生物污染。使用耐高压[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]，核查洗耳球无菌程度，避免[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url]触及[color=var(--weui-LINK)]均质袋[i][/i][/color]或试管内壁……[/size][/font] [font=宋体][size=16px]样品匀液完成后，可按相同操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。[/size][/font] [font=宋体][size=16px]根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。[/size][/font] [font=宋体][size=16px]之后，及时将15 mL～20 mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。[/size][/font] [b][font=宋体][size=16px]培养和计数[/size][/font][/b] [font=宋体][size=16px]样品稀释完成后，就要进行培养和菌落计数了[/size][/font] [font=宋体][size=16px]待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。[/size][/font] [font=宋体][size=16px]如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养[/size][/font][font=宋体][size=16px]基 （约4mL），凝固后翻转平板，按相同条件进行培养。[/size][/font] [font=宋体][size=16px]培养完成后，就要进行菌落计数了，计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录[color=var(--weui-LINK)]稀释倍数[i][/i][/color]和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units, CFU）表示。[/size][/font] [font=宋体][size=16px][back=url(&]选取菌落数在30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。[/back][/size][/font] [font=宋体][size=16px]大片菌落[/size][/font] [font=宋体][size=16px]其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。[/size][/font] [font=宋体][size=16px]链状生长[/size][/font] [font=宋体][size=16px]当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 [/size][/font] [align=center][b][font=宋体][size=16px]结果与报告[/size][/font][/b][/align] [font=宋体][size=16px]为了生成结果和报告，需要根据计数结果和公式计算出菌落总数。需要注意的是，对于菌落数量不同的培养皿，[color=var(--weui-LINK)]计数原则[i][/i][/color]有所不同。 [/size][/font] [font=宋体][size=16px][back=url(&]若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。[/back][/size][/font]

菌落总数的快速测定方法1 适用范围：可用于各类食品及原料中菌落总数的测定。也可用于与食品接触的容器、操作台和其他设备表面的卫生检测。2 方法原理：将营养培养基、凝胶和氯化三苯基四氮唑（TTC）显色剂等加载在试纸片，经加样、培养后，细菌菌落在测试片上显现出红色菌斑，通过计数报告结果。3 操作方法3.1样品处理：无菌称取样品25g（或25mL）放入含有225mL无菌生理盐水的采样瓶或均质杯内，经充分振摇（均质）做成1:10的稀释液。用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，用1mL灭菌吸管反复吸吹制成1:100的稀释液。以此类推，做出1:1000等稀释度的稀释液，每个稀释度更换一支灭菌吸管。3.2接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如食用纯水和矿泉水等）可直接用原液检测。将测试片放在水平台面上，揭开上面的透明薄膜，用灭菌吸管吸取样品原液或稀释液1mL，均匀加到中央的纸片上，轻轻将上盖膜放下，静置5 min使培养基凝固，最后用手轻轻地压一下。每个稀释度接种两片。3.3培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。培养温度为36℃±1℃，培养15～24h。4 结果判断与计数：4.1细菌在纸片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（10个～100个）的纸片进行计数，乘以稀释倍数后即为每克（或毫升）样品中所含的细菌菌落总数。菌落数在100以内时，按实有数报告。大于100时，用二位有效数字，二位有效数字后面的数字，以四舍五入方法计算，并以10的指数来表示。4.2计数原则与报告方式4.2.1通常选择菌落在10个～100个之间的纸片进行计数，乘以稀释倍数报告之（见下表中例次1）。国家标准菌落总数报告方式术语为cfu/g或mL，cfu的含义为菌落形成单位。4.2.2若有两个稀释度的菌落数在10个～100个之内，两者的比值小于2，则取其平均数，若大于2，则采用稀释度小者报告（见下表中例次2和例次3）。4.2.3若三个稀释度的菌落数都有在10个～100个之内时，应选择二个低数值的平均数（见下表中例次4）。4.2.4若三个稀释度的菌落数均小于10个或大于100个时，应重新试用更低或更高的稀释度进行菌落计数；或采用均小于数量标准的最小值，或采用均大于数量标准的最大值（见下表中例次5和例次6）。 例次稀释度两稀释 度之比选定计数 稀释度报告方式 （个/g或 个/mL）10-110-210-31 2 3 4 5 6158 208 265 98 8 295

X射线衍射与电子显微分析[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=48585]X射线衍射与电子显微分析[/url]

显微分析技术.电子显微镜,包括SEM，TEM，6个PPT课件，100多页[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=141769]显微分析技术.电子显微镜[/url]

全自动菌落计数仪因其使用的自动化程度高、分析结果可核对、样品信息可留存等，已逐渐被越来越多的科研院所、卫生疾控部分所喜爱。如何选型，才能获得性能卓越的菌落计数仪，并取得高性价比呢?这得从该类仪器的原理来解释。现今面市的所有全自动菌落计数仪器均是采用成像分析法实现自动计数的，即由【成像硬件+分析软件】所组成，这二块内容的任何一块上出现失分，都会严重影响计数分析结果的稳定性。　　一、成像硬件的选型　　成像硬件用于获得清晰有效的菌落图像，以便分析计数。现今的成像硬件有拍照成像的、扫描成像的。由摄像头拍照成像的优点是：成像速度快，能确保在0.5秒内获得菌落图像。由单反相机、卡片机拍照成像的优点是：能自动对焦、且像素分辨率一般更高，但其成像需要3～4秒的时间。然而，拍照成像的致命弱点是：成像环境中的光线强度，无论是暗视野，还是背光，想要做到图像中心与边缘保持完全一致，是不可能的。从而引起平皿上亮度的不一致，这就严重干扰了菌落目标的自动识别。因此，如果要选购拍照成像的，其分析软件就一定要具有背景矫正功能，以便自动改善成像的效果。扫描成像与在灯箱中营造均匀面光源不同，是将线光源通过移动变成面光源的，因此光线强度非常均匀，其均匀度通常比拍照灯箱的面光源要高一个数量级，从成像硬件的根本上解决了菌落目标的亮度不匀问题，因此计数分析非常稳定。目前，以300dpi分辨率(3482×2396像素成像)扫描6个90mm直径平皿的速度，暗视野成像约12秒、背光成像约20秒，就其成像速度而言，与单反相机、卡片机拍照成像的速度相当。由于扫描成像的光线均匀度远远高于拍照成像，为获得高质量的成像效果，以便实现“傻瓜式”分析。扫描成像的另一优点是：成像分辨率可调，单平皿成像最高可达4800dpi(即：25.4/4800=0.00529mm/像素)，是任何拍照成像远不及的。可以预期：扫描成像将很快成为主流选择。　　二、分析软件的选型　　分析软件是全自动菌落计数仪的另一块核心成分。因为菌落生物的存在多样性，在培养基上的表现或显像不可能大体一致，针对这类变化，在分析软件选型上要考虑：对于各类成像干扰的自动排出能力。比如：是否能自动矫正背景，等等。另外，对于严重粘连在一起的团装、链状分布菌落，将其自动分割开来的水平，也是评价分析软件的考量指标。尤其是：对于同类菌落的“一键”化的智能分类计数能力，以及对于菌落计数分类的自动识别学习能力，更是评价分析软件的关键考量指标。现在比较好的分析软件，还集成了对6个90mm直径平皿的抑菌圈全自动测量功能，以及对抗生素效价分析、药敏分析功能，可避免用户重复购置成像用的硬件。一般分析软件都具应具备对于分析结果和标记图像的保存、查看功能。　　三、精准、稳定的傻瓜式操作　　全自动菌落计数仪就是为了减轻工作人员工作强度的，在现今的高技术下，若还需要估算才能测出菌落数的话，应是比较落后了。最好的是：能“不变应变”精准、稳定地傻瓜式操作的分析软件，其对于菌落形态和样品状态的不确定性，能够自动适应，以避免不断地调节菌落分割参数，其最多由对话交互来擦除那些个污染部分，即可。

选用电子显微分析仪时应从那几方面考虑?

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1．菌落总数的测定：是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或mL检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。2．鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。3．每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。因此，要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的，因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。

食品卫生微生物学检测菌落总数测定测量结果的不确定度评定依据JJF1059－1999《测量不确定度评定与表示》、CNAL/AG06《测量不确定度政策实施指南》和CNAL/AR11《测量不确定度政策》分析一、测量方法按照国家标准GB/T4789.2-2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》规定的检测程序进行。检测过程为：1） 以无菌操作将检样25g（mL）剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其它稀释液灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做出1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置均置器中以8000r/min～10000r/min的速度处理1min，做出1：10的均匀稀释液。2） 用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水或其它稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液），振摇试管，混合均匀，做出1：100的稀释液。3） 另取1mL灭菌吸管，按上条操作方法，做10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即换用1支1mL灭菌吸管。4） 根据食品卫生标准要求或对标本污染情况的估计，选择2个～3个适宜稀释度，分别在做10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌培养皿内，每个稀释度做两个培养皿。5） 稀释液移入培养皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基（可放置于46℃±1℃水浴保温）注入培养皿约15mL，并转动培养皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1mL稀释液灭菌培养皿内作空白对照。6） 待琼脂凝固后，翻转平板，置36℃±1℃温箱内培养48h±2h。7） 作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。8） 选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平板内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。同一样品重复测量10次,取其平均值作为测量结果。10次重复测量的结果见表1。表1 单一样品重复测量的计算过程序号测量结果xilgxilgxi－ (lgxi－ )21350004.5441-0.030670.0009412880004.94450.369730.136731000005.00000.425230.18082142000005.30100.726230.527415650004.81290.238130.056706696003.9823-0.592470.3510217500004.69900.124230.015433898003.9912-0.583570.340554990003.9542-0.620570.38510710330004.5185-0.056270.003166平均值599404.5748二、数学模型从数据看，由于测量结果发散极大，与之相比其它不确定度来源（人员、标准、设备、环境、方法等）无疑均可以忽略不计，这也是微生物测量的特点。因此仅考虑由测量结果发散引入的不确定度分量。于是数学模型可以简单地写为y=x三、测量不确定度评定由于重复测量结果中最大值和最小值相差20倍。因此用常规的直接根据平均值得到标准偏差的方法显得有些不合理。通常的做法是取对数以后在用常规的贝塞尔方法进行计算。具体计算过程如下：1） 测量结果xi（表1第2列）；2） 取对数lgxi，得到对数lgxi的平均值为： =4.5748（表1第3列）；3） 求残差lgxi－ （表1第4列）4） 求残差的平方（lgxi－ ）（表1第5列），得到残差平方和为 ＝1.9978595） 合成标准不确定度测量结果为10次重复测量的平均值，故平均值的标准不确定度为 =0.14906） 扩展不确定度由于置信概率p=95%，自由度ν=10-1=9，由t分布表可得k=2.26。于是 7） 取反对数，由lgx坐标回到x坐标由于lgx与x之间的非线性关系，不能直接求扩展不确定度U的反对数，只能给出微生物含量的可能区间。因此首先确定lgx的取值范围为：lgx=4.5748±0.3367，或写成4.2381≤lgx≤4.9115取反对数后可得 1.7×104≤x≤8.2×104四、不确定度报告由于微生物测量结果的特殊性，所以其测量结果的不确定度表示也与其他专业不同。按照国家标准GB/T4789.2-2003《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》规定的检测程序进行，被测样品微生物菌落总数（十次测量平均值）在1.7×104和8.2×104之间。[img]http://bbs.instrument.com.cn//images/affix.gif[/img][url=http://bbs.instrument.com.cn/download.asp?ID=194237]食品卫生微生物学检测菌落总数测定测量结果的不确定度评定.doc[/url][color=#DC143C][size=4][font=黑体]应疯子哥的要求，把公式及图片贴上来，在5楼-7楼有版主ROGERSW的完整佳作。[/font][/size][/color]

一固体样品作菌落总数测定，其中10-1平板菌落数多不可计，10-2平板菌落数为271,10-3平板菌落数为60，则该样品菌落总数( )个/g。 A、27000 B、27100 C、60000 D、43550

2014 牛津仪器 学无止“镜”——发现微观之美OI 2014 Learn Beyond the Microscopy - Discovering the Beauty of Microanalysisl 大赛主题：1. 突破技术革新之路，挑战显微分析的最高极限2. 尽享科学研究最美，发现枯燥科研亦别有洞天l 参赛要求：1. 显微分析结果必须使用牛津仪器的设备完成http://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gifhttp://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif2. 参赛文件组成a) 参赛图片, 要求为像素在512X512以上的JPG格式（允许使用Photoshop等图像软件适当美化）b) 参赛图片相关的原始数据文件，如INCA软件采集的ipj格式文件或者Aztec软件采集的数据文件包c) 使用WORD文件陈述参赛项目: 包含根据图像意境命名的参赛作品名称,样品情况说明和采集参数设置 (如放大倍数，加速电压，采集时间等)3. 请将以上所有内容用压缩软件打包后Email发送至大赛组委会l 奖项设置：大会组委会将根据照片的艺术美感和显微分析技术难度分别进行评比奖项评奖人人数奖品最佳艺术奖组委会每种奖项分别设第一,二,三名第一名 iPad mini第二名 iPod nano第三名 iPod shuffle最佳技术奖组委会最佳人气奖用户会现场观众投票1. 优秀参赛图片将录入[size

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我们想买一台菌落计数仪,查了一下,有SC-2010型系列全自动彩色菌落计数仪和SCAN-500型自动影像分析菌落计数仪以及手动菌落计数器等.有没有谁用过这些仪器?感觉如何?价格大概多少呢?谢谢.