小鼠肺部给药装置

2013年08月01日 来源： 科技日报 作者： 金立旺http://www.stdaily.com/stdaily/pic/attachement/jpg/site2/20130802/00241dd2ff151365563311.jpg这是成功获得的国内首幅小动物活体肺部的MRI影像（8月1日摄）。新华社记者 金立旺 摄 中科院武汉物理与数学研究所周欣研究员领衔的研究团队是目前国内唯一开展超极化气体肺部磁共振（MRI）成像的研究组，他们的研究目的是“点亮肺部”，不仅获得目前胸透、CT和PET等肺部成像手段可以获得的肺部结构信息，还将对肺部气体交换功能进行可视化研究，从而开展人体肺部重大疾病的诊断前研究。目前，该团队已成功获得国内首幅小动物活体肺部的MRI影像，预计四年左右以后可以开展临床研究。 http://www.stdaily.com/stdaily/pic/attachement/jpg/site2/20130802/00241dd2ff151365563c12.jpg 8月1日，在中科院武汉物理与数学研究所实验室，周欣研究员正在将试验设备放进仪器中。新华社记者 金立旺 摄http://www.stdaily.com/stdaily/pic/attachement/jpg/site2/20130802/00241dd2ff151365564013.jpg 8月1日，在中科院武汉物理与数学研究所实验室，周欣研究员（后）正在和团队成员研究获得的国内首幅小动物活体肺部磁共振成像。新华社记者 金立旺 摄

[b][size=15px][color=#595959]呼吸道合胞病毒（RSV）[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是导致婴幼儿和老年人[b]下呼吸道疾病的常见病原体[/b]，目前尚无疫苗接种。[b]清肺口服液（QF）[/b]是一种中药配方，临床证明具有[b]抗炎作用[/b]。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959]该研究通过[b]脂肪酸依赖性巨噬细胞[/b]极化研究QF是否能够抑制RSV诱导的小鼠模型肺部炎症。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]在RSV[b]感染[/b]后，BALB/c小鼠连续4天灌胃[b]低、中、高剂量QF[/b]。使用[b]H&E染色和细胞因子分析[/b]评估肺部炎症状态。使用超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]/串联质谱（UP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS）分析[b]QF和脂肪酸代谢的活性成分[/b]。通过网络药理学和分子对接研究发现[b]脂质代谢相关途径[/b]。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]Western印迹分析用于测定ATP柠檬酸裂解酶（ACLY）、过氧化物酶体增殖激活受体α（PPAR）、Akt蛋白激酶B及其在Akt信号中的磷酸化形式的水平。流式细胞术用于[b]定量巨噬细胞亚型（M1/M2）的数量，免疫[/b]组织化学用于检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶-1（Arg-1）的表达。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]在RSV感染小鼠的肺组织中，[b]QF抑制促炎蛋白[/b]如白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的转录，同时[b]增加抗炎因子[/b]如白细胞介素-10（IL-10）的水平。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]由Akt信号传导介导的代谢酶活性的改变与[b]QF显著减少肺脂肪酸积累[/b]有关。QF处理后发现低ACLY表达和高PPAR表达，表明这两种酶是[b]Akt信号的下游靶点[/b]，分别[b]控制脂肪酸合成（FAS）和脂肪酸氧化（FAO）[/b]。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959]脂肪酸代谢的重新编程导致巨噬细胞从M1极化为M2[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]，iNOS表达较低，Arg-1表达较高。此外，应用[b]Akt激动剂（SC-79）通过增加FAS和减少巨噬细胞极化来降低QF的抗炎作用[/b]。[/color][/size][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][/color][/size][color=#3573b9]结论[/color][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]QF抑制Akt介导的FAS，极化M1至M2巨噬细胞，具有抗炎作用[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。[/color][/size]

小鼠肺管均质实验

液晶显示器已经越来越多的走进我们的生活，但是，最近日本的科学家在研究中发现，液晶显示器中含有一种叫做铟的元素，而这种元素对人的肺有着巨大的威胁，铟在被人体吸入后，会造成肺炎甚至肺癌，目前已经有两名在液晶显示器工厂工作的工人，由于吸入过多的铟氧化物而住进医院，他们肺中的细微金属颗粒已经大大高出平常人水平，在针对这些工人的一项调查中，2/3的工人肺部都出现了异常状况，但是，究竟液晶显示器会不会对普通消费者也存在相同的威胁目前还在研究之中。

[font=&]新型冠状肺炎[/font]病人痊愈之后，损伤的肺部能完全恢复吗？

小白鼠俗称“小鼠”、尖嘴鼠，由于颜色纯白而得名。我国饲养小白鼠历史最早，据记载，公元307～1641年就有人捕获野生小鼠进行饲养，并作为古代僧侣们的祭物。据资料介绍，从18世纪开始，小鼠开始成为实验动物，有的也进行观赏饲养。一、生物学特性（一）分类学地位小白鼠是野生鼷鼠的变种，隶属于动物界，脊椎动物门，哺乳纲，啮齿目，鼠种。我国目前饲养最广泛的是1946年从印度某研究所引入到云南昆明饲养的品种，又名昆明种。50年代由昆明引到北京生物制品研究所，以后输送到全国各地饲养。（二）形态特生小白鼠经过人们长期选择，定向培育，已形成许多品种类型。一般人们把它分为普通常用小白鼠和满足特殊需要的特种小白鼠两种。特种小白鼠有高癌鼠、低癌鼠、糖尿病鼠及先天性肌肉萎缩病鼠等。有的将小白鼠根据不同杂交方法和获得遗传特性而划分为近交品系、突变品系、远交和杂交群等。1972年以前，国际上公认的小白鼠近交系已有250多个。各品种小白鼠形态特征略有差异，但基本上相差不多。普通小白鼠体长约8厘米，尾略短或略长于体长，面部尖实，嘴前部有长长的触毛，耳耸立呈半圆形，眼睛大，嘴尖，被毛有纯白色和白斑色。90日龄昆明种小白鼠，体长9～11.0厘米，一般雄鼠大于雌鼠，尾有四小白鼠经过人们无数代的定向选择，生活习性有了一定的改变，环境适应性较差。如果把它们放回到室外环境，往往会因缺乏竞争力而难以生存。在人工饲养条件下的小白鼠，胆小怕惊，温顺，较易捕捉。当它受惊时，尾巴挺直并猛力甩动。夜间比白天活跃，喜群居。白日常集群而卧，下午4～5点钟以后活动加强，尤其在晚上更加活跃。当人在晚上进入鼠舍，即可听到小鼠不停地活动与啃咬所发出的沙沙响声。小白鼠喜阴暗、安静的环境，对环境温度、湿度很敏感，经不起温度的骤变和过高的温度。夏季温度过高常影响种母鼠的受胎率和仔鼠生长发育。冬季室温过低，不仅会影响种鼠的生长繁殖，且易发生多种疾病。小白鼠最适宜的室温是18～22℃，相对湿度为50～60％时较理想。此外，小白鼠尚有在干燥角落营巢的习性。白化小白鼠怕强光，在比较强烈光照下，哺乳母鼠易发生神经紊乱，可能发生吃仔鼠的现象。受到噪音的刺激，也会吃仔鼠。雄鼠好斗，性成熟的雄鼠放在一起，常发生互斗咬伤。雄鼠具有分泌醋酸氨臭气的特征，是引起饲养室内特殊臭气的原因。小白鼠为杂食性动物，可供利用的饲料很多，但作为实验动物饲养，应针对不同类型的小白鼠和各个生长发育阶段来制定合理的日粮标准。健康小白鼠一般能活存18个月至20个月，最长的可活至二年半。但年老的小鼠常体弱毛稀，多死于各种疾病，尤以肿瘤为多。（一）饲养设施经过长期入工饲养的小白鼠，对环境的适应性差，不耐冷热，要求生活在清洁无尘，空气新鲜，温度在18～22℃，相对湿度50～60％，噪音85分贝以下，氨浓度20PPm．通风换气8～12次/小时的环境中。因此，它对饲养房舍的建筑、环境条件要求比较严格。目前，国外饲养实验小白鼠多采用全封闭式的饲养设施，室内温度。湿度、光照、通风全部自动控制。国内饲养条件，尽管因陋就简，也要满足小白鼠对生活环境的基本要求。此外，笼具是小白鼠的生活场所，也是从事饲养人员每天都得操作的用具，因而笼具的结构、质量、式样以及重量等，是否合乎科学饲养要求，这对动物的生长繁殖，改善工作人员的劳动条件和提高工作效率等，都是十分重要的。1．鼠舍饲养小白鼠的房舍不宜过大，以20～25平方米为宜。这样有利于鼠群的调整及房舍的消毒。如果是平房，每幢房舍之间应有一定的距离，至少不少于15米，这样既可保证周围环境的宽敞，又可较有效地控制疾病的传播。除饲养房舍之外，还应合理设计辅助设施。例清洁消毒室，饲料、笼具、垫料贮藏室以及工作人员的更衣室、消毒室等。2．鼠罐当前在国内使用的有白瓷罐。泥瓦罐和塑料罐3种，还包括配备相应的罐盖。白瓷罐外形呈桶状，上口直径22厘米，下底直径18厘米，罐高吸厘米。其优点是上口较大，空气流通，夏季小白鼠居住凉爽，因其不渗水，不易引起铁鼠架的腐蚀。缺点是冬季保温性能差，笨重不易操作。泥瓦罐外形呈鼓状，有二个耳把。上口直径16厘米，下底直径15厘米，中间直径18厘米，罐高17厘米。优点是冬季保温性能好，使用轻便，价格便宜。具有防潮、暗光、价廉以及减少疾病传播等优点，是我国饲养小白鼠的传统用具。缺点是易渗水，腐蚀铁架，长期使用时，鼠粪和鼠尿熏染的臭气大。经过洗刷煮沸消毒，其臭味仍不易除去，有的破损率较大,过于笨重。塑料罐外形呈桶状，上口直径23厘米，下底直径19厘米，罐高14厘米，罐口上缘有卷边，罐重约150克。原料为聚乙烯塑料。其优点是使用轻便，不吸水，耐磨损，便于洗刷消毒，易干燥，贮存方便，耐腐蚀，耐用，破损少，老化后仍可回收，劳动强度轻。各种罐盖的外形结构及其大小都是按照鼠罐上口边缘的外形大小用铁丝编制而成。盖面上有填装饲料及饮水瓶的同斗，其孔大小，以逃不出仔鼠为原则。3．鼠盒小型盒长37厘米，宽26厘米，高17厘米。鼠盒可用于一公多母配种生产使用，也可用作待发小白鼠或饲养试验用鼠。利用鼠盒饲养小白鼠，其活动面积较大，但铁皮制作的盒底，容易被鼠的粪尿腐蚀。鼠盒盖的制法与要求同鼠罐。4．鼠架鼠架有木制及铁制两种。现在多为铁制的，材料多选用三角铁和薄铁皮（或塑料板）焊接而成。鼠架的大小根据条件、饲养数量等情况而定。一般的尺寸为高171厘米，长160厘米，宽50厘米，连同架盖分为五层。除顶盖外，每层鼠架可容纳鼠罐12个，每个鼠架分4层，共容纳鼠罐48个。目前国外已推广使用能够拆开的活动鼠架，用不锈钢制成，有很好的防腐性能。5．饮水器饮水器是饲养小白鼠的必备用具。常用的有玻璃瓶、塑料瓶和乳头式自动饮水器3种。其中以玻璃瓶使用最为广泛，一般采用容量250毫升和5吗毫升两种型号的玻璃瓶，瓶口使用生理盐水瓶上的瓶塞，从中间打孔插入铝管或玻璃管，其内径为0．5厘米，外径0．7厘米。6．铺垫物垫料，能吸附水分、动物的排泄物，维持笼内和动物本身的清洁卫生，垫料应不含挥发性、刺激性物质，无毒性，不会干扰动物实验。垫料的原料常用锯末、木刨花、木屑、碎玉米芯等。垫料的原材料常会携带各种微生物和寄生虫，使用前要经加工处理、消毒灭菌、除虫等。欧洲国家多用白杨木屑做垫料，而美国多用碎玉米芯，考虑到了材料的毒性因素和取材的难易。目前我国实验动物垫料尚未标准化，多采用混合木屑，其成分和毒性都不确定，可喜的是，现已开展了相关的研究，莎适合国情的标准化垫料，指日可待。

[size=15px][color=#595959]正确使用有毒药物是中医的特点之一。最新公布的《古代经典名方中药复方制剂简化注册审批[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]管理[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]规定》取消了对有毒中药的使用限制，表明有毒中药在临床实践中的使用是不可替代的。目前对这些药物的毒性评价通常遵循现代药物毒性评价体系，然而，[b]中药毒性反应[/b]的发生不仅与药物本身的性质有关，而且与人体的状态有关。中医的使用遵循辨证论治的原则，因此有必要将不同的“证”或“病”状态与中药的毒性结合起来，形成可靠的毒性评价体系。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959]附子[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是乌头的子根，在临床应用中，附子对胸闷心痛、四肢冰冷、脉弱等疾病有奇效。因此，它被认为是治疗与[b]阳虚[/b]和寒凝疼痛相关的各种证候的关键草药。但在临床实践中，附子的用量经常超过药典规定的用量，其毒副作用极大地限制了其临床应用。该研究探讨附子对[b]肾阳虚证候模型[/b]的毒性作用，并试图揭示其潜在机制。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]首先，通过肌肉注射氢化可的松25 mg/kg / d，连续10天建立肾阳虚证小鼠模型。然后探讨附子对正常小鼠和肾阳虚模型小鼠的[b]急性毒性[/b]。最后，通过血浆代谢物浓度和肝脏[b]CYP3A4[/b]酶活性分析，揭示附子在不同体质个体中产生不同药理学和毒理学效应的可能机制。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]附子(138 g/kg)对肾阳虚小鼠有严重的毒性作用，80%的小鼠死亡，而对[b]正常小鼠无致死毒性[/b]。说明附子对肾阳虚小鼠的毒性大于正常小鼠。肾阳虚小鼠肝脏CYP3A4酶活性较对照组降低20%，导致附子中毒性二酯二萜生物碱代谢减慢。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=&][size=16px][color=#232323][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][font=&][/font][font=&][/font][/color][/size][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]综上所述，该研究表明，[b]不同证候个体代谢酶活性的变化导致了中药的不同毒性作用[/b]，强调了在中医临床应用中[b]考虑个体体质证候的重要性[/b]，以及对中药特定证候动物模型进行[b]安全性评价和剂量预测的重要性[/b]。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]

如题啊，那天取苯酚的时候不小心吸入了些苯酚，还戴了口罩的，当时弄完就感觉肺部不适，然后就伴有咳嗽，前两天肺部有些痛，一直感觉有点痒，想咳嗽，这很严重吗?

1、 选取7~8周龄雌性小鼠，阴道口封闭，作为供体，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）。2、 47~48小时后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU），并与正常公鼠合笼；另取数只适龄母鼠（2月龄以上）作为受体，阴道口潮红，与结扎公鼠合笼。3、第二天上午9:00前观察供体、受体，有精栓者拿出备用。受体笼拿出作好隔离措施。4、10:30左右，断颈处死供体，手术取出整个输卵管，放入透明质酸酶~0.3mg/M2液中。显微镜下，用镊子撕开输卵管壶腹部，受精卵随同颗粒细胞即一同流出。5、仔细观察放在透明质酸酶M2液中的受精卵，当受精卵周围的颗粒细胞脱离时，将受精卵吸出，放入M2液中洗涤，最后放在M16液中放入5% CO2，37C0培养箱培养。6、在显微镜下观察，挑选细胞饱满，透明带清晰，雄原核清晰可见的受精卵待用。7、安装持卵针和注射针，使其末端平行于载物台，在凹玻片的中央滴入一滴M2液，覆盖石蜡油，移入待注射的受精卵。DNA在注射针中的气泡应在先前全部弹走。8、在高倍镜下，将注射针轻触持卵管，使DNA缓慢流出并控制其流量；反复吹吸受精卵，使其处于最佳位置，将注射针刺入受精卵的雄原核，直至看到原核膨大即退出。将注射过的和未注射过的受精卵上下分开放置，不致于混搅，注射完毕后，放入5% CO2，37C0培养箱培养。9、将受体麻醉，注射计量为1%戊巴比妥钠0.01ml/g，腹腔注射。手术取出卵巢连接输卵管，用脂肪镊固定，在显微镜下找到输卵管开口。吸取注射后经培养成活的受精卵，吸取方法是先吸一段较长的M2，吸一个气泡，然后吸取受精卵，尽量紧密排列，再吸一段液体，吸一个气泡，再吸一段液体，共四段液体三个气泡。除较长的那段液体，其余的液体大致1cm左右，气泡0.2cm左右。将移植管口插入输卵管口，轻轻将移植管内的液体吹入，看到输卵管壶腹部膨大并清晰地看到三个气泡，即移植成功。将卵巢连同输卵管放回腹腔，缝合肌肉和皮肤。10、受体每隔一个星期称体重一次，当第二次比第一次称重增加时，即可初步判断怀孕。手术后19~21天仔鼠分娩，待仔鼠3周后，剪耳、编号，剪尾，交分子组检测。(一般选取4-5周龄的雌鼠作为供体，此时的小鼠卵数较多，状态较好。用pms诱导卵细胞成熟，用hcg超排。)

病毒性肺炎（viral pneumonia，VP）是由病毒入侵呼吸道上皮和肺泡上皮所致的肺间质和实质性急性炎症病变。全年都可发生，冬春季高发。易感人群多为2岁以下婴幼儿、65岁以上老人及孕产妇等。临床常见的VP病原体包括流感性病毒、冠状病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒及鼻病毒等[1-2]。腺病毒肺炎是常见的小儿VP之一[3]，主要表现为局灶或融合性肺坏死性浸润及支气管炎；呼吸道合胞病毒肺炎以肺间质及毛细支气管病变为主[4]，胸片上可见斑点状影，常伴有不同程度的肺气肿；流感病毒肺炎常可侵犯中枢神经系统或循环系统，以肺间质病变为主；甲型流感病毒肺炎较乙型流感病毒肺炎症状更严重，胸部X光片显示片状高密度影，扩散迅速，常有肺间质受累，多伴有胸腔少量积液，病灶吸收后可残留纤维灶[5]；冠状病毒肺炎以发热、干咳、乏力为主，可伴有消化道等症状或无症状[6]；麻疹病毒肺炎多表现为呼吸道卡他、持续发热等，并出现不同程度的疹退后脱屑、特征性皮疹、色素沉着、口腔科氏斑等临床表现[7]；鼻病毒主要感染气道上皮细胞，可引起普通感冒、肺炎、支气管炎和慢性呼吸道等多种疾病，是临床常见的呼吸道感染病原体[8]。然而，VP作为当前临床常见的一种社区获得性肺炎，在西医治疗方面一直缺乏特异性药物。相反，我国传统中医药在治疗VP过程中则拥有悠久的历史和成功经验。从中医角度看，VP属“风温”和“温病”。根据临床资料发现，清肺排毒汤、麻杏石甘汤、化湿解毒方等是临床上最常用于治疗VP的中药汤剂，且疗效显著[9]。其作用机制可能与其调控机体免疫平衡、调控体内微生态、抑制炎症反应、抑制肺纤维化、保护组织及直接抗病毒活性有关。 病证结合动物模型是一种重要的中医药疾病动物模型[10-12]，通过对证候发生发展的机制研究，可很好地展现中医“证”的不同发展阶段特征，体现疾病发展的中医病因病机，已成为中医证候研究动物模型的必然趋势，为中医基础向临床治疗的转变提供了理论依据，有利于中药筛选及方剂作用机制的深入研究，是中医药新药研发的重要途径。目前，病证结合动物模型在建模理念上已逐渐成熟，主要可划分为以下3种：（1）以中医理论为依据，中医病因病机为“证”，西医病因为“病”，构建同时具有“病”“证”2个特征的模型动物，这是一种中西医结合多因素造模理念；（2）在西医病态模式基础上观察中医病证，分别归纳疾病初期的证候发展特征及后期出现的典型中医证候，以此判断该疾病是否属于某种中医证型；（3）运用传统中医病因学方法对模式动物进行干预，通过一般状况观察、客观指标检测、常用方药反证等方法，初步建立动物证候模型，并寻找与之匹配的临床病证来进行验证，即在证候模型基础上探察西医疾病类型[13]。 目前现有的VP动物模型多为西医模型，对中医证候模型的研究还较为薄弱，不能反映中医辨证论治的特色。因此，本文对现阶段中医疾病动物模型及相关VP病证模型的建模方法、证型分类、证候研究和评价指标的研究现状进行了梳理，为建立符合中医辨证论治特点的VP动物模型提供参考。 1 VP病证结合动物模型的相关建模研究 1.1 实验动物选择 在选取实验动物时，要尽可能具有与人的相似性，并对各种治疗因子有较高的敏感性，以便能较好地模拟人类疾病症状。目前报道的VP造模动物包括Balb/c小鼠[14]、昆明小鼠[15]、美国癌症研究所ICR小鼠[16]、豚鼠[17]、叙利亚仓鼠[18]、人类血管紧张素转换酶II小鼠[19]、Wistar大鼠[20]、恒河猴[21]、雪貂[22]、树鼩[23]等。虽然部分动物如恒河猴、雪貂、树鼩的病情与人类极为类似，但造模成本高、技术难度大，尚未得到推广应用。目前临床上最常使用的中医证候造模动物仍为小鼠和大鼠，主要是由于其成本低，并且人们对其生活习性和制作方式也较熟悉。 1.2 证候的造模方法 目前公认的中医证候建模方法主要有3种，分别为西医病因病机法、中医病因病机法和病证结合法[24]。其中，病证结合法因稳定性、可操作性高、相对容易评价，且能够体现中医临床辨病与辨证相结合的特点，被认为是比较理想的造模方法[25-26]。表1归纳了3种造模方法各自的应用现状（文献研究举例）、造模依据、干预方法及优缺点。 1.3 VP中医证候学 中医大师根据中医辨证论治体系对VP的证候进行了论述，常见症状包括：发热、咳嗽、咳痰、精神乏力、鼻塞、头痛、流鼻涕、舌色红、苔黄、苔腻、脉滑、脉浮，这些是VP主要的舌象和脉象，可体现VP的中医证候特点，并且与《中医内科学》《温病学》中的相关描述基本相符。依据《中药新药临床研究指导原则（试行）》（2002年）[37]、《小儿病毒性肺炎中医诊疗指南》（2019）[38]及相关文献[39-40]，VP的中医辨证分型主要包括风寒郁肺、风热郁肺、痰热郁肺、毒热闭肺、阴虚肺热、肺脾气虚、心阳虚衰和邪陷厥阴等，对不同证型的造模方法归纳见表2。 2 VP病证结合动物模型相关评价指标的研究 病证结合动物模型研究近年来得到广泛关注和应用，针对模型建模的系统评价指标是现在研究的主要方向。目前倾向于从2个层面展开研究：（1）将宏观表象和微观指标相结合，建立人与动物四诊转换模式；（2）强调结合有效经典方药进行反证。 2.1 宏观表征评价 中医辨证以望、闻、问、切为主要手段，以患者临床症状、体征为主要依据进行综合评价，而动物模型则需在动物宏观表象上寻找可供量化、判定的依据，如以模型动物体温上升为发热表现，耸毛或蜷卧为恶寒表现[57]。在脾虚为主的湿热证动物模型研究中，周祎青等[58]发现模型组小鼠表现出精神倦怠、不思饮食、反应迟钝、毛发黯淡等脾虚为主的湿热证症状，证实造模成功。此外，在情志研究中，动物的行为变化是重要评估指标。王枭宇等[59]通过评估多种经典的模型，如旷场实验、强迫游泳实验、悬尾实验等，发现行为学指标能够反映实验动物整体变化的特征，特别是能够反映动物心理情感变化。 需要注意的是，目前对动物模型的宏观判断标准多以人的证候为依据，人与动物在某些方面存在明显差异，同时某些主观因素如动物心理和情绪等变化，都会影响宏观表征结果的可靠性。 2.2 微观指标评价 微观指标能更直观、准确地反映动物机体状态，是判断VP病证结合是否成功的重要依据。 2.2.1 一般情况观察 观察动物情绪、活动、体毛、排泄、饮食、呼吸、体质量、肛温及死亡情况等。如将大鼠置于寒冷条件下连续6 d造模，表现出恶风寒、弓背毛松、打喷嚏、流鼻涕、食欲下降、饮水增加、体温升高、体质量下降及血压升高等明显风寒感冒症状。该症状符合中医的风寒表证[41]。 2.2.2 肺脏指数的测定与肺脏损伤程度的判定 吴莎[60]提出用肺指标、肺损伤程度来评价造模疗效，结果证实病毒感染后小鼠肺部炎症反应加剧且肺指数升高。刘珊宏等[61]采用风扇吹风联合体表降温7 d的方法构建风寒犯表的太阳病小鼠动物模型，发现小鼠造模后体质量显著下降，肺指数显著升高，脾指数显著下降。同时肺部出现明显病变，表现为局部有代偿性空泡、局部出血、肺间质增生、血管壁增厚，嗜中性粒细胞浸润等。杨进等[57]给小鼠滴鼻感染仙台病毒构建风热模型，发现感染病毒8 h内小鼠肺部指标无显著变化，8 h后肺内可见轻度病灶，12 h后肺泡壁厚度显著增加，大量单核细胞和淋巴细胞浸润，说明病证已经从表到里，证实仙台病毒在小鼠滴鼻后的4～12 h可视为类表热证阶段。 2.2.3 炎症因子 近年来关于病毒诱发细胞因子释放及对病毒感染的影响研究结果表明肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）是介导炎症反应的重要介质，可促进TNF-α分泌，加剧炎症发生[62-63]。王晓萍[64]采用人工气候箱、高脂饮食、甲型H1N1流感病毒滴鼻法等复制蒿芩清胆汤动物模型，发现病毒感染后TNF-α和IL-6均异常增高，同时死亡率、肺组织病理改变等结果提示模型组气道炎症反应处于持续状态，经蒿芩清胆汤治疗后小鼠肺组织中炎症因子水平显著下降，且可显著降低肺炎的发生，提示蒿芩清胆汤可能通过多靶点调控机体促炎和抑炎平衡；刘珊宏等[61]发现风寒犯表太阳病小鼠模型肺部炎性因子TNF-α、IL-6及IL-1β的表达显著增加；Wan等[65]发现寒冷造模后大鼠血清炎症因子TNF-α、L-1β、IL-6水平显著增加。 2.2.4 免疫功能 呼吸道病毒感染及其发病机制与机体的免疫状态密切相关[66]。白细胞分化抗原4阳性（cluster of differentiation 4+，CD4+）/CD8+、辅助性T细胞1（T helper cell 1，Th1）/Th2是人体内重要的免疫细胞[67]，而在动物模型中存在细胞免疫水平显著降低、免疫失衡现象。CD4+/CD8+ T细胞失衡反映了病毒感染导致的机体免疫损伤，Th1/Th2（γ干扰素/IL-4）失衡反映了内、外环境因素和病毒感染综合因素共同作用下的机体应激状态。从微观上看，CD4+/CD8+的值倒置，Th1/Th2细胞因子偏向Th1，使细胞免疫成为优势而导致肺脏损伤，加重疾病，会对证候的发展方向产生影响。通过湿热环境＋流感病毒构建流感病毒湿热证模型，采用蒿芩清胆汤能逆转湿热环境和病毒感染综合作用引起的CD4+/CD8+的值下降。蒿芩清胆汤治疗6 d后湿热证模型大鼠外周血γ干扰素/IL-4水平显著高于对照组，表明蒿芩清胆汤具有调节大鼠T淋巴细胞亚群、Th1/Th2平衡、提高抗病毒能力的作用[68]。综上，蒿芩清胆汤抗病毒免疫损伤的机制可能是通过上调细胞免疫功能，使CD4+/CD8+和Th1/Th2重新平衡从而减轻应激状态[69]。 2.2.5 水液代谢 水通道蛋白（aquaporins，AQPs）是一种能特异性转运水分的蛋白。是人体对水液代谢调节的关键因素[70]。迄今共发现13种AQPs蛋白，其中主要体现在肺部的以AQP1、AQP5为主。肺脏中AQP1表达下降可引起气道上皮细胞分泌增多，促进黏蛋白5ac在肺脏中的表达，从而导致气道炎症的加重，而炎性介质分泌增多，纤毛和杯状细胞比率失衡、肺部水分代谢失衡等进一步加重炎症性水肿[71]。AQP5在肺组织水代谢稳态中发挥重要作用，AQP5功能失调是导致肺损伤的重要原因[72-74]。AQP1、AQP5的表达在造模后免疫组化数值和光密度均有明显提高。如在采用环境＋膳食＋诱发因素＋生物感染因素复制湿热证病毒肺炎动物模型中，模型组大鼠AQP1、AQP5免疫组化数值较对照组显著增高，光密度增加。与模型组对比，甘露消毒丹组AQP1蛋白表达显著降低，说明甘露消毒丹治疗湿热证型病毒性肺炎的作用途径之一是通过影响炎性相关的AQP1，加快肺泡内液体的清除、减轻肺组织的水肿程度，抑制湿热证病毒性肺炎模型的炎性反应来实现的[75]。 2.2.6 血脂代谢 VP发病的内因与患者的饮食习惯密切相关，嗜食肥甘厚味，酿生痰浊从而造成了脾胃的运化功能失调，临床上血脂异常通常与其饮食密切相关，因此，湿邪与血脂异常间的关系亦受到广泛关注。有研究采用环境＋膳食（喂饲高脂肪食物）＋诱发因素＋生物感染性因素的方法建立湿热证病毒肺炎动物模型，发现模型小鼠血清中的总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇显著增高，高密度脂蛋白胆固醇显著下降，且存在脂代谢异常，证实了饮食失调是引起内湿的重要因素[69,76]。 2.2.7 Toll样受体（Toll-like receptor，TLR）介导的信号通路 TLR家族在细胞表面或细胞内表达，以模式识别形式与多种病原分子结合激活固有免疫应答，是连接天然免疫与获得性免疫的桥梁，在抵御病原体感染方面具有关键作用[77-82]。 潘沅[69]采用环境＋高脂膳食＋生物感染性因素的方法复制湿热证动物模型，研究发现，TLR2可以促进下游核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）的过度活化，导致大量炎症因子和细胞因子的产生，造成机体自身免疫损伤。而ig蒿芩清胆汤后，小鼠腹腔巨噬细胞中的TLR2受体及其下游NF-κB分子的表达显著降低，表明蒿芩清胆汤可能通过干预TLR2/NF-κB信号转导通路调控细胞因子的产生，从而减少机体自身炎症因子造成的免疫损伤。 2.3经典方药反向验证 中药配伍要遵循“方从法出、法随证立”的原则，所选用的药和方药应与所用的证候密切相关。即在方剂学理论体系下，所选药物或方剂与其主治的证要有较强的相关性。这样可以判断证候是否复制成功。当前，VP病证结合动物模型反证方剂主要集中在中医经典名方和经验方，有麻杏石膏汤、参附龙牡救逆汤、宣白承气汤、三仁汤、蒿芩清胆汤、甘露消毒丹、茵陈蒿汤和龙胆泻肝汤等加减方剂。这些反证方剂在治疗的原则上包含了疏风解表、清热解毒、清化痰热、宣肺开闭、补气养阴、清肺扶正等配伍特点。用一些代表方剂对动物模型进行干预后，动物的临床症状和各项客观指标均得到了显著的改善。汤朝晖等[43]以清热化湿（蒿芩清胆汤）、辛凉透表（银翘散）、益气固表（玉屏风散）为代表的3个治法对风热型流感VP小鼠模型进行干预，均取得较好疗效，提示造模成功。 3 结语与展望 病证结合动物模型是联系中医基础研究与临床应用的重要纽带。中医药基础理论是中华民族几千年同疾病抗争的结晶，在防疫治疫方面积累了丰富的经验[83]，近年来，病毒性新发呼吸道传染病全球频发，而中医药在治疗VP等疫情防控中发挥了显著优势和关键作用，VP病证结合动物模型也开始受到越来越多的研究和探索，近年来发展较快。但另一方面，尽管VP动物模型研究在证候模型建模方法等方面已有很多创新，但仍然存在一些难点问题需要和重点关注。 首先，目前VP证候模型的造模方法还很不完善。如风寒郁肺[41]、肺脾气虚模型[52-53]中常使用病因建模，但却在造模时未与病毒相结合，如何使用病毒来复制风寒郁肺、肺脾气虚模型可能是未来的研究方向；目前诸如痰热郁肺模型在细菌性肺炎中有较成熟的造模方法，心阳虚衰模型则多用于冠心病[55]、心衰[84]等，而尚未有关于痰热郁肺模型[45]、毒热闭肺模型、心阳虚模型、邪陷厥阴模型在VP中的造模方法和应用报道，如何借鉴其他病证构建VP病证结合模型也是后续需要重点关注的难题；VP阴虚肺热模型[39]目前还常用单因素造模方式，而单因素的改变难以复制理想的病证结合模型，存在齐同性差的弊端；在西医造模基础上施加中医证候干预因素的造模方法，亦无法很好地反映病证间的因果关系，无法准确识别疾病主证类型，未来基于证候建模的疾病诱发因子的引入有望成为解决这一难题的重要思路。 其次，实验动物的选择和模型评估技术也是目前制约VP病证结合模型研究的主要难点。目前常用的大鼠、小鼠在某些结构、功能、代谢和疾病表征方面尚不能很好地模拟人类病证特点，同时模型评估指标尚无统一规范，且因动物和人类疾病的差异性，很多动物模型无法直接应用于人类证候表征，而微观指标由于存在“一证多方”及多个证候叠加等现象，均给评估带来了巨大困难。 中医证候研究是一个复杂的过程，建立病证结合动物模型要以中医药理论为指导，与现代医学的理论方法相结合，融合多学科知识，从基因组、蛋白质组学、代谢组学、生物信息学等多层次进行深入研究[85-86]。虽然VP病证结合动物模型尚处于不断探索阶段，但随着新知识、新技术的不断融入和创新，相信不久的将来能够得到迅速发展和完善，更好地反映中医“证”的本质，为推动中医药现代化与国际化做出重要贡献。

传统给药途径（口服、注射）的挑战日益增大，而局部给药制剂因安全、快速、有效、持续等特点，近几年得到了蓬勃的发展。然而，相关效应室中的浓度难以获得、临床的体内行为不易预测等特点，也制约了局部给药制剂的发展。FDA推荐采用建模与模拟工具加速研发，基于PBPK模型的局部给药系统将为眼鼻肺给药带来新的应用和促进。根据最近的报告，2012年全球眼科用药市场销售额为160亿美金，预计到2018年将达到216亿美金。全球眼科用药显著增长源于眼科疾病快速增加，例如糖尿病导致的视网膜病变、黄斑变性。所以眼科用药市场预计在2013-2018年每年将以5.2%的速率升涨。2014年9月FDA在“开发建模与模拟在眼部给药剂型设计的应用能力项目”上资助Simulations Plus公司每年20万美金；该项目预期为三年；这意味着PBPK模型将辅助FDA在眼部吸收领域法规科学及政策的更好发展。详情可点击下载附件资料

中国科技网讯 （记者何屹）据每日科学网站2月20日（北京时间）报道，斯坦福大学的科学家开发出一种系统，可以实时观察活鼠大脑活动情况，对研究诸如阿尔茨海默氏症等神经退行性疾病的新治疗手段具有十分重要的作用。该研究发表在近期出版的《自然·神经科学》杂志上。 研究人员首先利用基因疗法令老鼠神经细胞表达绿色荧光蛋白，该蛋白对钙离子敏感。当神经元受到刺激时，细胞内充满钙离子，荧光蛋白被激活，整个细胞会发出明亮的绿色荧光，就像一朵灿烂的绿色小烟花在黑色背景下绽放。随后，研究人员在老鼠大脑负责空间和情景记忆的海马体上方植入一个微型显微镜，显微镜与相机芯片相连，并可将数字图片传送到电脑，在电脑屏幕上显示老鼠大脑活动的实时视频。 海马体对环境非常敏感，在不同的环境下会有不同的细胞响应。当老鼠在实验环境的某个特定区域挠墙时，刺激特定的神经元闪烁绿色荧光。当小鼠流窜到别的区域时，绿色荧光会从某个神经元褪色，转而刺激新的神经元细胞发光。科学家在掌握了小鼠行为和神经元之间的关联后，仅仅通过小鼠脑部荧光闪烁的混乱图景，就能够清楚地了解老鼠究竟位于何处。 该研究小组发现，小鼠神经元的刺激模式十分稳定，实验间隔时间长达一月之后，仍可保持不变。而观察相同的细胞对于了解脑部疾病非常重要。如果某一个特定的神经元在测试时发生功能障碍，表明正常神经元已经死亡或出现神经退化疾病。研究人员就可以利用某些实验性的治疗试剂进行治疗，然后在相同刺激条件下，确定神经元能否恢复功能。 目前这项技术尚不能应用于人类，但小鼠模型是研究人类神经退行性疾病新疗法的一个重要起点，该系统将成为临床前研究评估的一种非常有用的工具。目前研究人员已经成立了一个公司，生产和销售该设备。 总编辑圈点 一般所说的“读脑仪”，通常指对脑意识进行探测和显现的电子设备，譬如测谎仪就算一种读脑设备。但在本文的研究中，“读脑”是为了找出实验对象的行为和神经元之间的关联，再进行医学药理学的分析。与意识探测相同的是，关乎“脑”研究，人类都还只是接触到皮毛，不过，随着近几年新进展的不断出炉，无论是“倾听大脑的思想”，还是将小鼠模型应用于研究人类神经退行性疾病新疗法，相信只是时间问题。 《科技日报》（2013-02-21 一版）

美国《科学》杂志16日公布了该刊评选的2010年十大科学进展，一种在量子范围内运作的机械装置荣登榜首。　　在这一装置发明前，所有人造物体的移动都遵循经典力学法则。而今年3月，美国加利福尼亚大学圣芭芭拉分校的物理学家安德鲁·克莱兰德、约翰·马丁尼斯等人利用一个0.0002毫米见方、由金属片包裹的石英晶片设计了一种精巧装置，其运动方式只能用量子力学来描述。这项研究成果当月17日发表在英国《自然》杂志上。　　科研人员期望有朝一日能在量子水平上完全控制一种物体的振动，上述成果帮助研究者在这一方向上迈出了关键一步，这种控制人造装置运动的新技术将允许科学家操控那些极小的运动，这与他们现在对电流和光粒子的控制很相似。这种能力可能会导致光量子态控制器、超敏感力探测器等新装置的出现以及最终对量子力学界限的研究。　　其他9项进展包括：　　合成生物学：一个美国研究小组5月20日报告说，他们合成了一个人工基因组，并用它使一个内部被掏空的单细胞细菌“起死回生”。这是首个完全由人造基因指令控制的细胞，它是人造生命研究历程中的关键一步。研究人员预计，定制的合成基因组将来可用于生物燃料、医药制品或化学制品的生产工艺。　　尼安德特人基因组：研究人员对约4万年前生活在克罗地亚的3个女性尼安德特人的骨骼做了基因组测序。这种对DNA降解片段进行测序的新方法，使专家得以首次对现代人基因组和尼安德特人的基因组进行直接比较。　　艾滋病病毒预防：科学界今年在艾滋病病毒预防领域取得重要进展——一种含有抗艾滋病病毒药物泰诺福韦的阴道凝胶可使女性感染该病毒的风险降低39%，另一种药物可使男同性恋者和通过变性手术告别“男儿身”者感染艾滋病病毒的风险减少43.8%。　　外显子测序与疾病基因：通过只对某一基因组中的外显子基因序列进行测序，研究人员发现至少导致12种疾病的基因突变。　　分子动力学模拟：研究人员用超级计算机跟踪观察一个正在折叠的蛋白质中的原子运动，这种跟踪观察的持续时间能比过去任何一种方法延长至少100倍。　　量子模拟器：量子模拟器能帮助研究人员较快速地解答凝聚态物理学中的某些理论问题，并可能有助于最终揭开物质超导性等领域的谜团。　　下一代基因组学：更快更廉价的测序技术使人们能够对远古和现代的DNA进行大规模研究。　　核糖核酸的重新编程：重新编程细胞，也就是把细胞的发育时钟“往回拨”，使它们的“表现”如同胚胎中的非特异性“干细胞”，是研究疾病和发育的一种重要途径。今年，研究人员找到了一种用合成核糖核酸来完成这一研究的新技术。与以往的方法相比，采用这种新技术的“回拨”速度要快两倍，效率要高100倍，在治疗应用方面可能更为安全。　　大鼠的回归：小鼠是科学研究中的最主要实验动物，但研究人员其实更希望使用大鼠。大鼠实验操作起来相对更容易，大鼠在解剖学上与人类更相似，但现有的准确关闭特定基因的研究技术对小鼠适用，却对大鼠无效。为解决这一矛盾，科研人员在今年开展了一系列研究，其结果有助于关闭大鼠的某些特定基因，从而有望让大鼠大批进入实验室。　　上述十大进展榜单将刊登在17日出版的新一期《科学》杂志上。

本文用3H标记的方法研究加替沙星在小鼠体内的吸收、分布和排泄。小鼠静脉注射3H-加替沙星三个剂量：4mg/Kg、8mg/Kg、16mg/kg，用液体闪烁谱仪测定不同时间血药浓度，建立血药浓度-时间关系。结果显示：静脉注射3H-加替沙星在小鼠体内代谢符合二房室开放模型，分布相半衰期T1/2α分别为0.16h，0.15h和0.19h；消除相半衰期T1/2β分别为55.55h，45.75h，和52.11h；表观分布容积V分别为0.77L·Kg-1，0.62L·Kg-1和0.95L·Kg-1；曲线下面积 AUC分别为74.08?g·h·L-1，89.28?g·h·L-1和211.88?g·h·L-1。3H-加替沙星在小鼠体内分布很广，没有发现特异性组织积累。

[b][size=15px][color=#595959]健脾调肝饮（JPTGY）[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]具有[b]疏肝、理气、健脾、化痰[/b]的功效，长期临床实践发现其可[b]有效治疗肥胖[/b]。前期研究发现，JPTGY对肥胖患者的减肥效果令人满意，显著降低了患者的总胆固醇和甘油三酯水平，没有任何副作用。然而，由于中药制剂具有多途径和多靶点的特点，JPTGY治疗肥胖症的[b]机制尚不充分[/b]。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]该研究旨在采用[b]高脂饮食（HFD）诱导的肥胖小鼠[/b]模型来评估[b]健脾调肝饮（JPTGY）的作用与肠道微生物群和粪便代谢变化之间的关系[/b]。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]通过HFD诱导C57BL/6小鼠建立肥胖动物模型。采用[b]脂质代谢的血清生化指标[/b]评价JPTGY在肥胖小鼠中的药效学。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]通过16s rDNA基因序列结合基于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]）的[b]非靶向粪便代谢组学技术[/b]，对对照组、HFD组和JPTGY暴露肥胖组的[b]粪便样本中的细菌群落和代谢产物[/b]进行了研究。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]JPTGY显著降低总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白（HDL-C）。[/color][/size] [b][size=15px][color=#595959]JPTGY可以上调粪便微生物群的丰度和多样性[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]，其特征是蛋白质细菌门较高。一致地，在属水平上，补充JPTGY诱导毛螺菌科NK4A136组、大肠杆菌、Turicibacter、梭状芽胞杆菌1和拟杆菌的富集，它们与14种关键的粪便代谢产物密切相关，对JPTGY治疗有反应。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]代谢组学进一步分析表明，JPTGY对肥胖的治疗作用涉及亚油酸（LA）代谢途径、α-亚麻酸（ALA）代谢途径，甘油磷脂代谢途径、花生四烯酸（AA）代谢途径和嘧啶代谢途径，这暗示了JPTGY治疗肥胖的潜在机制。[/color][/size][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font][size=15px][color=#595959][/color][/size][color=#3573b9]结论[/color][b][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][font=mp-quote, -apple-system-font, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][color=#595959][/color][/size][/font] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]肥胖表型与肠道菌群和粪便代谢的联系揭示了JPTGY治疗高脂血症和肥胖的潜在因果关系[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size]

SN/T 2131.2-2010 进出口贝类腹泻性贝类毒素检验方法 第2部分：小鼠生物法本标准代替SN 0294-1993SN/T 2131的本部分规定了贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的小鼠生物测定方法。本部分适用于贝类及其制品中腹泻性贝类毒素的检验。注：全文见资料中心。

15版《中国药典》四部通则0111中【递送速率和递送总量】检测项目用的测定装置哪里有卖的，谁用过？麻烦给推荐一下，谢谢。

[b][size=15px][color=#595959]慢性阻塞性肺疾病(COPD)[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]是一种以[b]肺部炎症和气道重塑[/b]为特征的主要全球健康问题。[b]抗炎治疗[/b]是COPD治疗的基本策略，尽管糖皮质激素是COPD治疗中最常用的抗炎疗法，但其减缓肺功能衰退的效果有限。很大一部分患者对糖皮质激素的反应性较差，此外，长期使用糖皮质激素的不良反应较多，如肺炎、[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]骨质疏[/color][/size][size=15px][color=#595959]松[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]、肌肉萎缩和[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]高血糖[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。因此，追求替代抗炎治疗在临床实践领域具有重要意义。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]在中国，[b]中药[/b]已被广泛用作COPD患者接受标准治疗的补充疗法，目的是提高患者的[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]生活质量[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]，减少不良反应。[b]加味补肾益气方(MBYF)[/b]是临床上治疗[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]哮喘[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]、COPD、特发性肺纤维化、[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]肺癌[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]等肺部炎性疾病的专用中药，包括淫羊藿20g，黄芪30g，熟地15g，黄芩30g，赤芍30g。研究表明，MBYF的成分对哮喘模型气道炎症和重塑具有显著的抑制作用。因此，认为MBYF可以减轻COPD患者的肺部炎症和气道重塑。[/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size] [align=center][size=16px][color=#3573b9][size=15px]探讨MBYF对吸烟（CS）所致COPD大鼠模型的治疗作用，并探讨其作用机制。[/size][/color][/size][/align][align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]通过24周的CS暴露建立COPD大鼠模型，第9周开始给药MBYF。通过肺功能、组织学分析、炎症细胞计数和分子分析评估MBYF对气道重塑、肺部炎症、中性粒细胞趋化性和IL-17信号通路的影响。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959]MBYF治疗有效地延缓了气道重塑，肺功能参数得到改善。组织学检查和支气管肺泡灌洗液分析显示，MBYF通过减少炎症细胞浸润来减轻CS诱导的肺部炎症。药理网络分析提示MBYF可能通过[b]IL-17信号通路[/b]调节炎症反应。[b]RNA测序和分子实验表明[/b]，MBYF通过下调CXCL1/CXCL5/CXCL8-CXCR2轴抑制[b]中性粒细胞趋化[/b]，抑制IL-17A、IL17F及其下游细胞因子，包括IL6、TNFα、IL1β和COX2。此外，MBYF抑制IL-17信号通路中NF-κB和MAPKs的激活。[/color][/size] [align=center][size=16px][color=#3573b9]结论[/color][/size][/align] [b][size=15px][color=#595959][/color][/size][size=15px][color=#595959][/color][/size][/b][size=15px][color=#595959][b]MBYF有可能作为COPD的辅助或替代治疗，通过抑制中性粒细胞趋化性和IL-17信号通路，有效减轻CS诱导的肺部炎症和气道重塑。[/b][/color][/size]

[size=15px][color=#595959]严重的[b]铜绿假单胞菌肺炎[/b]会引起[b]细胞因子风暴[/b]、过度的[b]促炎细胞因子释放[/b]、广泛的损伤和致命结局。强烈的炎症反应虽然是清除铜绿假单胞菌所必需的，但需要迅速减少以限制组织损伤。因此，开发新的辅助药物以降低[b]多重耐药铜绿假单胞菌肺炎[/b]的严重程[/color][/size][size=15px][color=#595959]度的[b]非抗生素治疗方法[/b]是[/color][/size][size=15px][color=#595959]一种可持续和有效的对抗多重耐药细菌的策略。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]中医是众所周知的肺炎治疗选择，中药可调节铜绿假单胞菌肺炎感染的宿主[/color][/size][size=15px][color=#595959]免疫[/color][/size][size=15px][color=#595959]，如清肺消炎丸、疏风解毒胶囊、芪归银方等。[b]麻杏石甘汤[/b]([b]MXSG[/b])是一种有效治疗[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]呼吸道感染[/color][/size][size=15px][color=#595959]和细菌性肺炎[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]的中药。然而，MXSG治疗[b]急性铜绿假单胞菌肺炎[/b]的机制尚不清楚。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]该研究旨在观察MXSG对急性铜绿假单胞菌肺炎的治疗作用并探讨其可能的机制。[/color][/size] [size=15px][color=#595959]采用[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]-质谱法[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]分析其化学成分[/color][/size][size=15px][color=#595959]。[/color][/size][size=15px][color=#595959]以最小抑菌浓度(MIC)评价其体外抑菌效果。[/color][/size][size=15px][color=#595959]将45只雄性BALB/c小鼠分为对照组、模型组、左氧氟沙星组、MXSG-L组(7.7 g/kg/d)、MXSG-H组(15.4 g/kg/d)。[/color][/size][size=15px][color=#595959]采用小鼠鼻内滴注铜绿假单胞菌建立急性铜绿假单胞菌肺炎模型。[/color][/size][size=15px][color=#595959]左氧氟沙星、MXSG口服灌胃，每日1次。[/color][/size][size=15px][color=#595959]治疗3 d后进行肺指数测定、显微CT、动脉血气[/color][/size][size=15px][color=#595959]分析、细菌负荷测定、HE染色。[/color][/size][size=15px][color=#595959]利用[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]网[/color][/size][size=15px][color=#595959]络药理学分析和转录组测序[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]预测[/color][/size][size=15px][color=#595959]MXSG治疗细菌性肺炎的潜在机制。[/color][/size][size=15px][color=#595959]免疫荧光、western blot、RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测相关基因的表达。[/color][/size] [align=center] [/align] [size=15px][color=#595959]铜绿假单胞菌体外MIC 500 mg/mL。[/color][/size][size=15px][color=#595959]在治疗急性铜绿假单胞菌肺炎模型中，MXSG显著改善了体重减轻、肺脏指数和肺部病变。[/color][/size][size=15px][color=#595959]MXSG处理也显著降低了细菌负荷，改善了氧饱和度。[/color][/size][size=15px][color=#595959]转录组、免疫荧光、Western blot和RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]分析显示，MXSG[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]通过[/color][/size][size=15px][color=#595959]IL-17信号通路[/color][/size][size=15px][color=#595959]和[/color][/size][size=15px][color=#595959]HIF-1α/IL-6/STAT3信号通路[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]治疗急性铜绿假单胞菌肺炎。 [/color][/size] [size=15px][color=#595959]该研究[/color][/size][b][size=15px][color=#595959]证实了MXS[/color][/size][size=15px][color=#595959]G治疗急性铜绿假单胞菌肺炎的疗效及作用机制，为其临床应用提供了科学依据[/color][/size][/b][size=15px][color=#595959]。[/color][/size]

脑卒中是全球致伤致残致死3大原因之一，据全球疾病负担统计2019年全世界有1 220万人发病[1]，我国有394万人首发[2]；另一统计称2020年我国有340万人首发并有约220万人留下残疾[3-4]。缺血性脑卒中（ischemic stroke，IS）约占卒中类型的85%[4-5]。IS预后结局差，复发率高而且极有可能造成后遗症如偏瘫、后肢痉挛、震颤等。其病理机制也十分复杂，涉及细胞过度自噬、离子失衡与谷氨酸过度释放、氧化应激与自由基、炎症爆发和神经细胞凋亡[5-7]等。 目前治疗IS的主要方法为重组组织型纤溶酶原激活剂（recombinant tissue-type plasminogen activator，rt-PA）静脉溶栓、手术取栓和神经保护。手术风险高，rt-PA治疗时间窗短，且有出血风险，符合治疗条件的病人不到10%[8]，而神经保护的药物在临床上的效果不如动物实验那么有效，目前急需开发更安全可靠的治疗IS的用药。在长期的医学实践中，银杏叶提取物在治疗脑卒中和心肌梗死方面疗效显著[9]。其中，银杏内酯作为天然的血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）受体拮抗剂，因其具有抗炎、抗氧化、抗凋亡和神经保护的作用[10-12]而越来越受到关注。 银杏二萜内酯葡胺注射液（Diterpene Ginkgolides Meglumine Injection，DGMI）以银杏叶提取物为原料，主要组成为银杏内酯A（ginkgolide A，GA，35%）、银杏内酯B（GB，60%）、银杏内酯C（GC，2%）、银杏内酯K（GK，2%），含总银杏内酯5 mg/mL[13]，银杏二萜内酯成分达98%以上[14]。临床显示，DGMI可有效改善IS发病90 d时患者的神经缺损评分，同时改善患者认知和行动能力，并且在中老年患者中疗效优于银杏叶提取物注射液（金纳多）[15-18]，Zhao等[15]认为DGMI与rt-PA联用治疗急性卒中效果更佳。最新一项临床研究发现，单独使用DGMI对急性缺血性脑卒中治疗有效[19]。也有多项体内外实验证明DGMI具有改善脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI）的作用，主要与PAF受体[20]、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）- 蛋白激酶B（protein kinase B，PKB）、核因子-红细胞2相关因子2（nuclear factor-erythroid 2 related factor 2，Nrf2）[13]等通路有关。 黑质为重要的运动和感知调节中枢，是脑内合成多巴胺的主要核团，与背侧基底核、底丘脑构成基底运动环路[21]，可能通过多巴胺能神经与IS引发的震颤等运动障碍相关。为明确DGMI在黑质脑区抗CIRI的作用通路，本研究通过建立小鼠大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型，模拟急性IS时脑内局灶性缺血缺氧的状态，利用转录组测序对小鼠脑样本进行测序，并结合生信分析鉴定DGMI在黑质脑区抗脑缺血损伤的作用通路及功能效应，为深入探索其作用机制提供思路。 1 材料 1.1 动物 SPF级雄性C57BL/6小鼠，6～8周龄，体质量18～22 g，购自南京市江宁区青龙山动物养殖场公司，生产质量合格证SCXK（浙）2019-0002。动物于江苏康缘药业有限公司动物房普通清洁级环境中适应性饲养1周，温度（24±2）℃、12 h光昼交替，自由进食饮水。动物实验经江苏康缘药业有限公司动物委员会批准（批号2023110101）。 1.2 药品与试剂 DGMI（商品名为尤赛金，国药准字z20120024，批号220703）由江苏康缘药业有限公司提供；银杏叶提取物761（Ginkgo biloba extract-761，EGb-761，商品名为金纳多，3.5 mg/mL，国药准字HC20181022，批号P6001）由台湾济生医药生技股份有限公司提供；1800AA型小鼠硅胶线栓购自广州佳灵生物有限公司；舒泰50（货号BN8G4VA）购自法国维克公司；2,3,5-氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride，TTC，批号BCCJ6488）购自美国Sigma公司；RNA提取试剂盒（批号AM90890A）购自日本Takara公司；Qubit RNA BR Assay kit（批号2506001）、Qubit 1X dsDNA HS assay kit（批号2483579）购自美国Invitrogen公司；Illumina Poly(A) Capture（批号20733163）、Illumina RNA Prep Ligation（批号20723247）、IDT for Illumina RNA Index Anchors（批号20717954）、IDT for Illumina DNA/RNA UD Indexes（批号20739487）、NextSeqTM 2000 P3 300循环试剂盒（批号20751014）购自美国Illumina公司；RNA Screen Tape（批号02020849-192）、RNA Screen Tape缓冲液（批号0006698095）、D1000 Screen Tape（批号0202853-39）、D1000试剂（批号0006739609）购自美国Agilent公司。 1.3 仪器 DOM-1001型显微镜、RFLSI ZW型激光散斑血流成像系统（深圳市瑞沃德生命科技有限公司）；PY-SM5（LCD）型LCD高精度智能温控器（余姚市品益电器有限公司）；NanoDrop分光光度计（美国Thermo Fisher Scientific公司）；4150型TapeStation自动化电泳系统（美国Agilent公司）；Qubit 4.0型核酸定量仪（美国Invitrogen公司）；NextSeqTM 2000型测序仪（美国Illumina公司）。 2 方法 2.1 动物分组、造模及给药 小鼠适应性饲养5 d后，随机分为假手术组、模型组、DGMI（25 mg/kg）组及EGb-761（100 mg/kg）组，为确保各组术后存活10只小鼠，假手术组设置10只，模型组设置16只，EGb-761组和DGMI组设置14只。 小鼠ip舒泰50麻醉后，参照LONGA法[22]复制MCAO模型。用线栓阻塞小鼠大脑中动脉血流，缺血1 h时，拔出线栓恢复血流，进行再灌注，并结扎颈外动脉剪口。假手术组小鼠进行颈动脉暴露处理，但不插入栓线。手术过程室温控制在（26±1）℃，术后使用加热垫等设备维持小鼠体温保持37 ℃。线栓进入后，将小鼠俯卧位固定，纵向剪开头皮，充分暴露颅骨，置于激光散斑血流成像系统下进行血流检测，确保造模成功。采用RFLSI Analysis v2.0.29.26606软件分析数据，在缺血侧及对侧一致位置添加相同的区域，得到脑血流量统计结果。对造模小鼠进行筛选，排除造模不成功、大出血、蛛网膜出血及过早死亡的小鼠，最终纳入统计的共有40只小鼠，每组分别10只。 基于本课题组预实验结果，DGMI对小鼠MCAO模型术后24 h脑梗死面积改善程度的最佳剂量为25 mg/kg。因此，本研究采用25 mg/kg剂量开展DGMI的药效评价。DGMI组术后30 min ip药物（DGMI以生理盐水将稀释成2.5 mg/mL的溶液），EGb-761组术前1 h ip药物，假手术组和模型组ip等体积生理盐水。 2.2 神经功能评分与脑组织TTC染色 小鼠再灌注24 h后进行改良版神经功能缺损评分（modified neurological severity score，mNSS）[23]。评分后取血，迅速取脑组织，?20 ℃冰箱中冷冻15 min，随后将冷冻后的脑组织切成厚度为2 mm的冠状切片共6片，使用2% TTC染液于37 ℃恒温水浴锅中避光染色10 min，用4%多聚甲醛溶液对脑片进行固定，24 h后拍照。使用Image-Pro Plus 6.0软件计算脑梗死面积。 脑梗死面积＝白色缺血面积/总面积 2.3 脑黑质RNA提取和转录组测序 取小鼠脑黑质，每组4个样本，经高速冷冻研磨机粉碎成匀浆后，按照RNA提取试剂盒说明书提取RNA。经过RNA质量控制后，筛选3个符合条件的样品，按照Illumina文库制备体系，完成文库的构建稀释与上机测序。 2.4 转录组数据分析 2.4.1 转录组数据处理与质量分析 利用Trimmomatic[24]软件对测序数据进行滤过，获取高质量的数据信息，直接从基因组网站下载参考基因组和基因模型注释文件，使用HISAT2[25]和String Tie[26]软件将clean reads与参照基因组进行比对和拼接。 2.4.2 降维分析与模型评价 将各组数据进行降维分析，主要分为主成分分析和tSNE降维分析，比较各组离散程度。 2.4.3 差异表达基因（differentially expressed genes，DEGs）筛选 采用DESeq[27]软件包对各组细胞的基因表达量进行差异分析，模型组DEGs以模型组vs假手术组筛选，给药组DEGs以给药组vs模型组筛选，筛选标准为|log2差异倍数（fold change，FC）|≥2且Padjust≤0.05。 2.4.4 基因集富集分析（gene set enrichment analysis，GSEA） GSEA通路富集分析不局限于某些目标基因集，而是从所有基因的表达丰度出发，分析在不同的通路中的基因的整体表达影响，理论上更容易囊括细微但协调性的变化对生物通路的影响。参照徐小波等[28]研究，计算药物干预后表达趋势逆转的通路数与模型组特征通路总数的比值（响应值），并评价药物抗脑缺血再损伤的能力。 2.4.5 基因本体（gene ontology，GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析 运用R语言limma[29]软件包对差异基因进行GO功能和KEGG通路富集分析，并用R语言将相关信息可视化。GO功能包括生物学过程（biological process，BP）、细胞组分（cellular component，CC）和分子功能（molecular function，MF）。使用超几何检验进行富集分析。FDR校正的P≤0.05被认为显著富集。 2.5 qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证关键基因表达 按照试剂盒说明书提取脑黑质中总RNA并合成cDNA，进行qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]分析。采用2?ΔΔCt法计算相关关键基因表达。溶质载体家族6成员A3（solute carrier family 18 member A3，Slc6a3）、钙调蛋白样4（calmodulin like 4，Calml4）、G蛋白亚基γ14（G protein subunit gamma 14，Gng14）、C-C基序趋化因子2（C-C motif chemokine ligand 2，Ccl2）、色氨酸羟化酶2（tryptophan hydroxylase 2，Tph2）、C-X-C趋化因子1（C-X-C motif chemokine ligand 1，Cxcl1）、β-actin引物序列见表1。 图片 2.6 统计学分析 实验结果使用Graghpad prism 9.0软件进行统计分析。两组间比较采用独立样本t检验，组间多重比较采用单因素方差分析（One way ANOVA）和Dunnett-t检验，数据以表示。 3 结果 3.1 脑血流成像结果 通过脑血流仪监测小鼠脑皮质血流量变化，如图1和表2所示，发现插入线栓缺血时，与假手术组比较，各组小鼠手术缺血侧脑皮质血流量均显著降低（P＜0.001），表明缺血造模成功，建立的小鼠MCAO脑缺血再灌注模型稳定可靠。 图片图片 3.2 DGMI对MCAO模型小鼠的药效评价 3.2.1 DGMI对MCAO模型小鼠mNSS的影响 脑缺血再灌注后24 h，各组小鼠mNSS结果见图2，假手术组为0分，无神经功能损伤；与假手术组比较，模型组小鼠mNSS显著升高（P＜0.001），神经功能损伤严重；与模型组比较，各给药组mNSS显著降低（P＜0.01、0.001）。表明MCAO造模可导致小鼠神经功能受到损伤，引起小鼠行为学发生变化；EGb-761和DGMI可显著改善小鼠缺血再灌注造成的神经功能损伤。 图片 3.2.2 DGMI对MCAO模型小鼠脑梗死面积的影响 如图3所示，TTC染色后，假手术组脑切片呈均匀的红色，模型组脑切片缺血侧有明显的白色梗死部位；与模型组比较，各给药组小鼠脑梗死面积 显著减小（P＜0.001）。表明DGMI和EGb-761可显著改善小鼠脑梗死面积，对小鼠脑梗死有一定治疗作用。 图片 3.3 转录组测序分析 3.3.1 转录组测序数据质量分析 在建立的测序文库中，超过Q30的比例在94%以上，对测序数据中reads进行滤过后，数据质量控制结果显示，与参考基因组的序列比对率在70%以上，表明测序结果较好。 3.3.2 降维分析与模型评价 经主成分分析发现，假手术组和模型组明显分离（图4-A）。对各组进行tSNE降维分析，发现DGMI组与模型组明显分离（图4-B）。 图片 3.3.3 DEGs分析 如图5-A～C所示，与假手术组比较，模型组共筛选得到88个差异表达基因（differentially expressed genes，DEGs），其中78个基因上调，10个基因下调。与模型组比较，DGMI组有21个基因上调，108个基因下调；EGb-761组有92个基因上调，84个基因下调。分别对模型组和DGMI、EGb-761组的DEGs取交集，如图5-D所示，DGMI组与模型组共有32个差异基因重合，EGb-761组与模型组共有31个差异基因重合，三者共有10个DEGs重合。 图片 图6中展示了EGb-761组、DGMI组和模型组DEGs重叠部分的热图，共53个DEGs。可以发现，这部分DEGs在给药后有不同程度的逆转。此外，在Lv等[30]通过131个小鼠和39个大鼠样本MCAO模型筛选出的15个共同DEGs中，模型组DEGs中有活化转录因子3（activating transcription factor 3，Atf3）、组织基质金属蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinases 1，Timp1）、分化抗原14（cluster of differentiation 14，Cd14）、半乳糖结合凝集素3（lectin, galactoside-binding, soluble 3，Lgals3）、血红素加氧酶（heme oxygenase 1，Hmox1）、Ccl2、上皮膜蛋白1（epithelial membrane protein 1，Emp1）、热休克蛋白家族B成员1（heat shock protein family B member 1，Hspb1）、血小板反应蛋白基序1型去整合素和金属蛋白酶（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1，Adamts1）、波形蛋白（vimentin protein，Vim）共10个基因重合（66.7%）。Lv等[30]发现的与人类卒中易感基因联系最强的基因Adamts1、锌指蛋白（zinc finger protein 36，Zfp36）、核因子κB抑制剂zeta（nuclear factor kappa B inhibitor zeta，Nfkbiz）、Ccl2和Hmox1中，本研究模型组中也有3个重合。 图片 3.3.4 GSEA结果 如图7所示，GSEA结果显示，与假手术组比较，模型组表达相反的通路有35条，定义这些通路为模型组的特征通路；DGMI与模型组趋势相反的通路有7条，如帕金森症、色氨酸代谢、嘧啶代谢等通路，响应值为20%左右。 图片 3.3.5 DEGs的GO功能富集分析 为明确小鼠MCAO造模及药物干预后所涉及的生物学功能变化，对模型组和DGMI组小鼠脑组织DEGs进行GO功能富集分析，见图8。结果显示，模型组主要富集在细胞对白细胞介素-1和γ干扰素的反应、趋化因子互作和免疫细胞的浸润等BP，细胞外空间、细胞外区域等CC，趋化因子受体结合等MF。DGMI干预后，主要富集在分泌颗粒、神经肽激素信号通路等BP，细胞外空间与区域，多巴胺能神经突触等CC，S100蛋白结合、激素与神经肽激素等MF。 图片 3.3.6 DEGs的KEGG通路富集分析 为明确DGMI对MCAO模型小鼠KEGG通路的影响，基于获得的DEGs进行KEGG通路富集分析，见图9。结果显示，模型组前15条KEGG通路主要与炎症、凋亡和免疫反应相关，富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）信号通路、白细胞介素-17（interleukin-17，IL-17）信号通路、趋化因子信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路等。DGMI组KEGG通路主要富集在神经活性配体-受体作用、多巴胺能神经突触等。 图片 进一步分析发现，模型组KEGG通路中出现频率较高（≥3）的关键差异基因为Ccl12、Ccl2、Cxcl1等，见表3。DGMI组KEGG通路中出现频率较高（≥3）的关键差异基因是Gng14、Slc6a3、Calml4等，见表4。 图片 Ccl12、Ccl2与免疫细胞趋化浸润脑区有关，Gng14编码的蛋白质参与G蛋白偶联受体通路，而Slc6a3、Calml4与多巴胺在脑内的转运分泌密切相关，提示DGMI治疗IS可能与多巴胺能信号通路密切相关。 3.4 qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证关键基因表达 对模型组和DGMI组部分关键基因表达进行qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]验证，如图10所示，与对照组比较，模型组小鼠脑组织Slc6a3、Tph2基因表达水平显著降低（P＜0.001），Calml4、Ccl2、Gng14、Cxcl1基因表达显著升高（P＜0.05、0.01、0.001）；与模型组比较，DGMI组小鼠脑组织Slc6a3、Tph2基因表达显著升高（P＜0.01、0.001），Calml4、Ccl2、Gng14、Cxcl1基因表达显著降低（P＜0.05、0.01、0.001）。6个基因表达量的qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测结果均与转录组测序结果一致；值得注意的是，Calml4和Gng14 2个基因通过qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]和转录组测序方法获得的表达量在3个受试样本间差异较大，这可能是由于2种检测方法对基因的检测区域不同产生的，因此说明qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测对RNA-seq结果验证的必要性。总之，综合qRT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]与转录组测序结果，DGMI可能通过影响炎症和多巴胺相关通路改善IS。 图片 4 讨论 目前，银杏叶提取物作为天然药物产物，已被证明具有抗炎、抗氧化等多种药理作用，可以有效治疗IS。DGMI是国内常用的银杏叶提取物制剂之一，目前虽然在临床前和临床研究上都获得一定成果，但是其治疗IS的作用机制尚缺乏深入的探索。在DGMI作用机制探索的初期首先面对3方面主要的问题。第一，缺乏机制研究方向的指导。面对此问题，在组学水平，例如采用转录组测序方法，获得与疾病进程和发展相关，以及药物治疗途径相关的必要信息，将对后续针对性及更深入的研究提供方向指导。第二，对于IS，临床实验样本的获取比较困难，使得目前相关研究集中在细胞和动物实验，目前关于DGMI在动物IS实验上的转录组测序还没有相关研究内容发表以作参考。第三，由于大脑功能的实行分区域进行，且十分复杂，采用全脑均质化样本进行检测难以对获得的结果进行解析，取特定的脑区进行研究可以更精准地反映疾病和药物对脑特定的功能结构造成的变化影响。 4.1 多巴胺能神经、黑质与卒中炎症 CCL2基因编码的单核细胞趋化蛋白，可以吸引单核和淋巴细胞。CCL2/CCR2趋化因子信号通路在卒中急性期中呈现促炎作用[31]，临床试验和动物实验都证明CCL2基因高表达是IS的危险因素，而且在临床上CCL2可作为多种卒中亚型急性期的标志物[32-33]。CCL2因子可由小胶质细胞促炎亚型分泌，CCL2还可能与其他趋化因子共同作用，在急性期介导CD8+ T细胞在脑中的活化和浸润[34]。不过在急性期后的慢性期，CCL2可能有利于促进血管生成和卒中恢复[35]。卒中后活化的星型胶质细胞等分泌的CXCL-1是中性粒细胞趋化因子，可以募集中性粒细胞浸润脑区。中性粒细胞会通过胞外诱捕网等方式进一步加剧卒中[36-38]。 DGMI组和模型组黑质脑区DEGs的KEGG以及GO结果显示，DGMI治疗IS可能和多巴胺能神经相关，尤其是多巴胺的转运和代谢。溶质载体蛋白（solute carrier，Slc）是一类跨膜转运蛋白，Slc18a2基因调控的囊泡单胺转运蛋白2（Vesicular monoamine transporter 2，VMAT2）依赖于质子浓度，介导多巴胺在突触前神经元中从胞质溶胶进入囊泡储存[39-41]，囊泡经突触小泡循环将多巴胺运至突触前膜附近，释放多巴胺进入突触间隙，多巴胺结合突触后膜的受体后失活，而Slc6a3调控的多巴胺转运蛋白1（dopamine transporter1，DAT1）位于突触前末梢周围，依赖于Na+/Cl?从突触间隙再摄取多巴胺至突触前末梢[42]。包括多巴胺、乙酰胆碱在内的多种神经递质的受体为G蛋白偶联受体，小鼠Gng14编码的蛋白为G蛋白γ亚基，与人类GNG14同源，Gng14可能通过调节G蛋白亚基发挥作用，而Calml4是钙调蛋白，通过与钙离子结合作用于钙离子信号通路对下游信号产生影响。TPH2是5-羟色胺（5-hydroxytryptamine，5-HT）合成的关键酶，同时也会影响多巴胺的浓度，涉及其转运与代谢[43]。 多巴胺能神经元控制着脑内的奖赏系统、成瘾性以及运动功能[44]，还能调控疼痛和神经炎症[45-46]。黑质-纹状体通路是主要的多巴胺能通路之一

2012年08月23日 07:50 环球科学杂志微博 http://i2.sinaimg.cn/IT/cr/2012/0823/3567985218.jpg光的力量 一种新型“牵引光线”提案将会驾驭光能。　　牵引光线是科幻作品中的重要角色，现在它却越来越接近现实。今年初春发表的一篇文章中，物理学家设计了一种可以用光拉动物体的装置。　　一般情况下，光线只能推动物体，尽管力量很微弱。在光学操控的领域中，光学镊子可以应用这种推力移动微观物体，小至原子大至细菌。同样的，光线牵引的能力也可以提高光学操控的准度和广度。飞行器工程师们也已经设计出各种宇宙飞行帆，用以捕捉光所产生的力。　　新设计的牵引光线将被更多地应用在生物或医药中，而不是用来拖动宇宙飞船。“如果你想将一件物品拉向自己，你必须减小物体面向你的方向上的压强，”以色列技术工程学院的物理学家莫迪凯·塞格夫说道。他在4月份《光学快递》(Optics Express)刊登的文章中描述了他的研究小组的设想。“需要创造出一点真空以减小压强，”他补充道。问题是在对环境非常敏感的医药操作中，比如肺部手术，绝对不能改变压强或充入任何新气体。“那么，光线将成为抽吸的装置，”他说，“这样压力不会有任何改变而只有光存在。”　　早期对于“牵引光线”的研究通常集中在创建新的引力场来拖曳物体、加热空气从而产生压力差，或是向物体引入电量或是磁性，这样它们就可以沿着入射激光逆向移动。　　最新的提案利用了一种被称之为负辐射压的现象。俄国物理学家维克托·维斯拉格在1967年发表的文章中讨论了具有负折射率的材料，并首先建立了负辐射压的理论模型。折射率的数值描述了光线在通过玻璃透镜或其他介质时被弯曲的程度。而这篇文章发表后，大家并不相信物质会出现负折射率。但在过去的几十年里，几组研究人员都证实了负折射率可以出现在一种被称作超常介质的特殊人造材料中。这一发现也导致了半隐形斗篷和无变形现象的“超级”透镜的发明。　　负辐射压的原理依赖于光波的两个特性：它的群速度和相速度。一束光波由一组组小波构成；群速度矢量是波群整体的移动速率与方向，相速度矢量代表某个构成光波的小波上的一点的相位改变速率与方向。光波的电磁能沿着群速度的方向辐射传播，而波对粒子产生的影响则是顺着相速度的方向。如果这两种速度的传播方向有相反的分量时，就可以产生负辐射压。　　但大部分超常介质是固体，并且扩大粒子之间的间隙会消除负辐射压。这些对通过负辐射压移动粒子的设想产生了阻碍。不仅如此，所有现有的超常介质都包含金属，它们会吸收电磁能，从而使作用在粒子上的牵引效应几乎为零。

[url=http://www.f-lab.cn/stereotaxis/srp-6m-ht2.html][b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2[/b][/url]是用于核磁共振环境的[b]小鼠立体定位仪器[/b],它采用兼容MRI的材料制造，是[b]小鼠核磁共振[/b]和显微操作实验的理想选择。[b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2[/b]头部固定器组件是由100％塑料制成，AP框架棒和基板都由金属制成,保证了稳定和精确的立体定位记录，头部固定组件能够从基板拆卸下来，使得MRI可以扫描固定在相应位置的动物，核磁共振扫描之后，相应位置固定着动物的头部固定组件，能够轻易地放回在基板的原有位置，[b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2[/b]能够用于多种多样的应用，只需更换头部固定组件用于小鼠，结合该设备可以注入标记或造影剂，用于MRI扫描，头部固定组件可以进行立体定位，记录对准动物的MRI扫描点。[img=小鼠MRI立体定位器]http://www.f-lab.cn/Upload/srp-6m-ht2_.jpg[/img][b]小鼠MRI立体定位器SRP-6M-HT2特色[/b]自从NARISHIGE的立体定位操作器根据此标准制作后，AP框架具有18.7mm的方形形状。如提供的 SM-15 立体定位显微操作器。需要带显微操作器的版本请访问SRP-6M。SRP-5M-HT2 和 SRP-6M-HT2 之间的差别在于AP框架杆的数目。 SRP-5装配有一个AP框架杆，而SRP-6装配有两个AP框架杆。用于大鼠的版本分别是SRP-5R-HT2 和 SRP-6R-HT2（SRP-5R 和 SRP-6R不带显微操作器）小鼠MRI立体定位器：[url]http://www.f-lab.cn/stereotaxis/srp-6m-ht2.html[/url]

哈佛育出能“闻”出光线的小鼠 为气味和感受间关系的研究开辟新途径 据美国物理学家组织网10月18日（北京时间）报道，哈佛大学神经生物学家培养出一种能“闻”出光线的小鼠，为研究人员更好地理解嗅觉功能的神经机制提供了一种新工具。本周的《自然·神经科学》杂志详述了这项研究，这为未来研究气味和感受之间的关系以及其他感知系统的神经机制开辟了新方向。 要分析大脑的嗅觉感知是如何辨别气味的，最好的方法是研究大脑的活动方式。但气味种类繁多，化学成分非常复杂，变化微细让人难以捉摸，因此追寻这些由嗅觉刺激形成的大脑模式非常困难。 如果让鼻子作为视网膜那会怎么样呢？哈佛大学分子与细胞生物学教授温卡泰斯·默西和冷泉港实验室的同事利用遗传光学技术，把一种光敏蛋白质跟小鼠的嗅觉输入系统结合，培育了一批转基因小鼠，它们的所有嗅觉感受神经元都能表达视网膜素转导通道2（channelrhodopsin-2）蛋白质，这些转基因小鼠的嗅觉路径因此变成由光来激活，代替气味来研究大脑神经细胞如何区别不同气味。 嗅觉信息会在大脑中形成不同的三维空间组织形态，由于光输入很容易被控制，研究人员因此能设计一系列试验，利用光选择性地刺激鼻子里的特定感觉神经，研究大脑中嗅球的激活模式。 默西说，因为用外来光照代替气味在大脑中形成的空间组织只是一种临时性结构，新研究也存在一定的局限，并不能完全解释气味感受能力。研究还显示，在气味被感受的过程中，“嗅闻”的时机起着很大作用。