台式滚瓶培养装置

对于微生物培养，大家常用的是恒温培养箱、霉菌培养箱、震荡培养箱、恒温水浴箱、发酵罐等，满足了日常工作需要；当然，这都是针对好氧菌而言。 而对于厌氧菌和兼性好氧菌，则需要考虑选用合适的厌氧、微好氧/低氧培养装置（如厌氧培养盒/袋、厌氧罐以及专业的厌氧培养箱、厌氧工作站、微好氧/低氧培养箱、厌氧发酵罐/反应池等）。 常规的动物细胞培养，一般选用CO2培养箱、滚瓶培养装置、悬浮培养装置、生物反应器/细胞培养罐等。为更接近或模拟体内微环境，三气培养箱（即CO2培养箱加配O2传感器）逐渐为人们所熟知！当然，更专业的Biospherix 系列O2/CO2控制器加培养盒、H35微好氧/低氧细胞培养箱、X vivo 一体化细胞工作站等三气培养装置也给大家提供了更多的选择！

厌氧培养箱简介该培养箱是一种可在无氧环境下进行细菌培养及操作的专用装置，可培养最难生长的厌氧生物，又能避免往厌氧生物在大气中操作时接触氧而死亡的危险性。　　结构特点：　　该产品由恒温培养室、厌氧操作室、取样室、气路及电路控制系统、箱架、瓶架、熔蜡消毒器等部分组成。设备具有以下主要　　特点：　　※ 使用科学先进手段达到高精度、恒温的厌氧环境，便于操作者在厌氧环境中进行操作和对厌氧菌培养。　　※ 温控采用微电脑智能控温仪，能准确直观地反映箱内实际温度，加上有效的限温保护装置，安全可靠。　　※ 箱内装有紫外线杀菌灯，气体经过滤后进入箱内，可有效地避免细菌污染。　　※ 气路装置，可任意调节流量，能任意输入各种所需气体。　　※ 操作室均由不锈钢板制成，其前窗采用厚透明耐冲击特种玻璃板制成，操作使用专用手套可靠舒适、灵活，使用方便。　　※ 操作室内备有特殊接种棒灭菌器，并附设有试管架、熔蜡消毒装置，还装有除氧催化器。　　技术指标　　取样室形成厌氧状态时间 12小时　　培养室使用温控范围 室温 +3～50℃　　培养室温度波动 ±0.3℃　　培养室温度均匀性 ±1℃　　电源/功率 220，50Hz/600W　　净重/毛重（Kg） 240/320　　培养室内尺寸（cm） 25×19×29 操作室尺寸（cm） 90×65×65　　外形尺寸（cm） 132×75×140　　包装箱尺寸（cm） 145×94×158

[b][font=宋体]细胞培养实验室组建的基本要求[/font]:[/b]1[font=宋体]、细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。[/font]2[font=宋体]、细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。[/font]3[font=宋体]、细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，为[/font]10[font=宋体]万级洁净环境的洁净室。而洗刷消毒工作设在洁净室外，避免物品污染洁净室内环境。细胞洁净室需要一个空调系统并对外界保持一定的正压。[/font]4[font=宋体]、解剖实验室主要用于对器官组织的分离，需要有无菌操作台、解剖显微镜、各种手术器材等。[/font] [align=center][url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/shiyanshilixinji/2018-10-12/301.html][img=实验室离心机]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012chanpinzhongxin/luodishigaosulengdonglixinji/2019-05-14/4b60dacaa256bcc4fe665e2eb3536c0a.jpg[/img][/url][/align][align=center][b]智能台式高速冷冻实验室离心机 3H24RI[/b][/align][font=宋体]组织细胞培养室除一般实验室的普通常规设备外，尚有一些特殊需要的设备。基本可分为两大类：[/font][font=宋体]第一类为常用的基本设备；[/font][font=宋体]第二类为较高级的特殊设备。[/font][b]1. [font=宋体]细胞培养实验室常用的基本仪器设备[/font]1.[font=宋体]显微镜：[/font][/b][font=宋体]倒置显微镜——是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。[/font][b]2.[font=宋体]培养箱：[/font][/b][font=宋体]体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，大多数情况下，最适温度是[/font]37[font=宋体]℃，温差变化一般不应超过±[/font]0.5[font=宋体]℃，细胞在温度升高[/font]2[font=宋体]℃[/font] [font=宋体]时，持续数小时即不能耐受，[/font]40[font=宋体]℃以上将很快死亡。因此需要有能控制温度的培养箱，如具有较高灵敏度的恒温培养箱及[/font]CO2[font=宋体]培养箱。[/font][b]3.[font=宋体]干燥箱：[/font][/b][font=宋体]用于细胞培养箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。[/font][b]4.[font=宋体]水纯化装置：[/font][/b][font=宋体]细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸馏水：即使是用于玻璃器皿的冲洗，也应使用二次以上蒸馏水。[/font][b]5.[font=宋体]冰箱：[/font][/b][font=宋体]细胞培养室必须配备。[/font]a[font=宋体]、普通冰箱或冷藏柜——储存培养液、生理盐水等培养用的物品及短期保存组织标本。[/font]b[font=宋体]、低温冰箱（[/font]-20[font=宋体]℃）——用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清等。[/font][b]6.[font=宋体]细胞冷冻储存器：[/font][/b][font=宋体]储存器常用的是液氮容器。根据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小，取放使用方便及液氮挥发量（经济）三种因素。[/font][b]7.[/b][font=宋体][url=http://www.hexiyiqi.com/][b]离心机[/b][/url][b]：[/b]进行细胞培养时，常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用[url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/shiyanshilixinji/]实验室离心机[/url]。一般可常规配置[/font]4000rpm[font=宋体]的国产台式离心机，例如细胞沉降，使用[url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/]低速离心机[/url]即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。[/font][align=center][url=http://www.hexiyiqi.com/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/2012-10-17/69.html][img=低速离心机]http://www.hexiyiqi.com/d/file/hexi2012chanpinzhongxin/taishigaosulengdonglixinji/2012-10-17/0e080cd46b2ee061b55caabaaee8cbf2.jpg[/img][/url][/align][align=center][b]台式低速离心机TD5A[/b][/align][b]8.[font=宋体]天平：[/font][/b][font=宋体]常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。[/font][b]9.[font=宋体]消毒器：[/font][/b][font=宋体]一般为高压蒸汽灭菌锅，直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。[/font][b]10.[font=宋体]滤器：[/font][/b][font=宋体]目前细胞培养工作中采用的培养用液，包括人工合成培养液、血清、消化用胰酶等常含有维生素、蛋白、多肽、生长因子等物质，这些物质在高温或射线照射下易发生变性或失去功能，因而上述液体多采用滤过消毒以除去细菌。目前常使用的滤器有玻璃滤器和微孔滤器，各种滤器有其使用原理和特点。[/font][b][font=宋体]常用的培养器皿：[/font][font=宋体]培养用器皿[/font][/b][font=宋体]是[/font][font=宋体]供细胞接种、生长等用的器皿，可由透明度好、无毒的中性硬质玻璃或无毒而透明光滑的特制塑料制成。[/font][font=宋体]细胞培养中需要的各种耗材[/font],[font=宋体]各类细胞培养板，细胞培养瓶，平皿移液管等。[/font][b][font=宋体]培养瓶[/font][/b][font=宋体]：由玻璃或塑料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞，胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容量（[/font]ml[font=宋体]）表示，如[/font]250ml[font=宋体]、[/font]100ml[font=宋体]、[/font]25ml[font=宋体]等；进口培养瓶则多以底面积（[/font]cm2[font=宋体]）表示。[/font][b][font=宋体]培养皿：[/font][/b][font=宋体]由玻璃或塑料制成，供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有[/font] 10cm[font=宋体]、[/font]9cm[font=宋体]、[/font]6cm[font=宋体]、[/font]3.5cm[font=宋体]等。[/font][font=宋体]多孔培养板：为塑料制品。可供细胞克隆及细胞毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂，可同时测试大量样本，易于进行无菌操作。培养板分为各种规格，常用的规格有：[/font]96[font=宋体]孔、[/font]24[font=宋体]孔、[/font]12[font=宋体]孔、[/font]6[font=宋体]孔、[/font]4[font=宋体]孔等。[/font][b][font=宋体]培养操作有关的器皿[/font][font=宋体]贮液瓶：[/font][/b][font=宋体]常见的为蓝盖瓶，主要用于存放或配制各种培养用液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分为各种不同规格，如[/font]1000ml[font=宋体]、[/font]500ml[font=宋体]、[/font]250ml[font=宋体]、[/font] 100ml[font=宋体]、[/font]50ml[font=宋体]、[/font]5ml[font=宋体]等。[/font][b][font=宋体]吸管：[/font][/b][font=宋体]主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体，常用的有[/font]1ml[font=宋体]、[/font]2ml[font=宋体]、[/font]5ml[font=宋体]、[/font]10ml[font=宋体]等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管，除可以作吸取、转移液体外，弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。[/font][b][font=宋体]加样器（[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]）[/font][/b][font=宋体]：分为微量[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]电动[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。用于吸取、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小，吸量准确、方便。可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性良好。[/font][b][font=宋体]其他用品：[/font][/b][font=宋体]尚有收集细胞用的离心管，放置试剂或临时插置吸管用的试管，装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器，用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽，套于吸管顶部的橡胶吸头，封闭各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安瓿或冻存管、不同规格的注射器、烧杯和量筒以及漏斗，超净工作台使用的酒精灯，供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。[/font][b][font=宋体]器械[/font][/b][font=宋体]主要用于解剖、取材、剪切组织及操作时持取物件。常用的有：手术刀或解剖刀、手术剪或解剖剪（弯剪及直剪），用于解剖动物、分离及切剪组织，制备原代培养的材料；眼科虹膜小剪（弯剪或直剪），用于将组织材料剪成小块；血管钳及组织镊、眼科镊（弯、直），用于持取无菌物品（如小盖玻片）夹持组织等；口腔科探针或代用品，用以放置原代培养之组织小块。[/font][b]2[font=宋体]、细胞培养实验室特殊设备[/font][/b][font=宋体]细胞培养实验室除了应配备上述的常用基本设备以外，如有条件，可添置一些特殊或先进的设备仪器，以便更有效、更精确、更深入地进行实验室工作。例如：[/font][font=宋体]（[/font]1[font=宋体]）酶联免疫检测仪——可用于进行免疫学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。[/font][font=宋体]（[/font]2[font=宋体]）[/font] [font=宋体]超低温冰箱（[/font]-80[font=宋体]℃）——便于储存某些试剂及标本。[/font][font=宋体]（[/font]3[font=宋体]）旋转培养器——用于某些特殊细胞或需要收获大量细胞的培养。[/font][font=宋体]（[/font]4[font=宋体]）[/font] [font=宋体]荧光显微镜——进行荧光染色样本的观察。[/font][font=宋体]（[/font]5[font=宋体]）[/font] [font=宋体]流式细胞仪——可更精确及快速检测细胞。[/font][font=宋体]（[/font]6[font=宋体]）用于检测细胞培养条件的各种仪器，例如专门为快速分析细胞培养基中主要或关键营养成分、代谢产物及气体含量设计的多功能细胞培养分析仪、手提式[/font]CO2[font=宋体]浓度测定仪等。[/font][b][font=宋体]其余仪器[/font][/b][font=宋体]对于细胞实验还可能需要振荡器及磁力搅拌器用于混匀液体；还有一些沾满细胞的难清洗的不锈钢类或玻璃类器皿，则需要超声波清洗机的帮助；如果涉及免疫实验，肯定需要冰浴，碎冰的需求量大的话，则需要购买制冰机；另外破碎细胞可能会需要超声波细胞破碎仪；[/font]

作者： 陈文庆 王建超 刘华杰 高飞 张韧 （北京清大天一科技有限公司 102200 ） （《中国兽药杂志》 2010.44 （ 10 ）： 37-41 ）【摘要】 采用反应器全悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒与微载体悬浮培养Vero细胞生产狂犬病毒分别与相应的转瓶培养工艺生产案例对比分析，比较悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的生产效益。分析显示，与转瓶培养工艺相比，反应器悬浮培养工艺获得的细胞密度、病毒效价、产品的产量和质量明显提高，生产时的能耗和劳动力需求明显降低。结果表明悬浮培养工艺的生产效益明显高于转瓶培养工艺，适宜于国内生物制品工业化生产的升级换代。【关键词 】 细胞培养；生物反应器；悬浮培养；微载体细胞悬浮培养技术是指细胞在生物反应器中自由悬浮于培养液内生长增殖的一种培养方法。根据细胞是否贴壁，又分为全悬浮细胞培养和贴壁细胞微载体培养。国际上该项技术发展较快，已趋向成熟，是疫苗、抗体等生物制品生产的普遍生产工艺模式。与转瓶培养技术相比，该工艺具有操作简单、产率高、容易放大等优点，本文结合口蹄疫病毒和狂犬病毒的生产，分别对细胞悬浮培养工艺与转瓶培养工艺的经济效益等进行了分析和分析。1. 全悬浮培养口蹄疫病毒与转瓶培养案例对比高效、安全的病毒性疫苗是防止口蹄疫情发生的最有效方法。BHK21细胞是繁殖FMDV的理想宿主，早在1962年Capstick PB等就实现FMDV的悬浮培养。1965年Telling, R.C.等实现在不锈钢发酵罐中悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗。目前国外（Intervet公司、Merial公司）普遍已经采用2000~5000L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫苗。本文就本公司自主研发的650L生物反应器和无血清培养基进行悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗与转瓶培养工艺进行比较和分析。1.1主要材料细胞株：BHK21贴壁细胞株（中国兽医药品监察所）毒 株：FMDV-O型（某兽用疫苗企业）培养基：低血清MEM培养基(产品代号MD611)、BHK21细胞无血清培养基（北京清大天一科技有限公司）血 清：特级新生牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）仪 器：5 L反应器（德国贝朗），120L和650LCLAVORUS ® 生物反应器（北京清大天一科技有限公司）1.2实验方法1.2.1转瓶培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒将复苏的BHK21细胞在T75培养瓶中使用低血清培养基（含5％牛血清）培养，连续传代扩增接种15L转瓶，37 ℃培养48小时，传代比例为1:8-1:10，按常规方法接种病毒及维持液，细胞病变90%左右收获病毒液。1.2.2反应器全悬浮无血清培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒（1）贴壁细胞悬浮驯化培养：用BHK21细胞无血清培养基在恒温摇床或者方瓶中无血清驯化贴壁BHK21细胞，可采用直接驯化或者逐级降低血清驯化等方法，每代观察细胞数量和细胞活率，直至BHK21细胞在无血清培养基中的生长增殖速率正常，细胞活率达95%以上，并可连续稳定传代，说明细胞已适应无血清悬浮培养。（2）反应器用种子细胞扩增：采用反应器罐倒罐逐级放大技术，细胞从摇瓶→5 L反应器→120 L反应器→650 L反应器进行逐级放大培养。细胞培养方式为批培养，控制反应器各参数在正常范围：温度37.0 ℃、pH7.2~7.4、溶氧（DO）20~70%、搅拌转速50~150 r/min。（3）反应器培养口蹄疫病毒：待650 L反应器中细胞达到一定密度，提高培养pH至7.5左右，按一定比例直接接种口蹄疫病毒进行病毒维持培养，控制温度、pH、DO、搅拌转速等参数在合适范围，在线无菌间隔取样判断细胞病变情况并检测病毒毒价（LD50,TCID50），确定收获的最佳时间。1.3 细胞培养结果对比分别对低血清培养基15 L转瓶培养的贴壁BHK21细胞进行观察和细胞计数，反应器全悬浮培养的BHK21细胞取样进行数量和活率检测。培养条件和结果对比见表1。表1 转瓶培养和反应器全悬浮培养BHK21细胞对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442105_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442106_small.jpg http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442107_small.jpg 图1 转瓶BHK21细胞低血清培养48 hr，100X 图2 反应器全悬浮无血清培养48 hr，100X 结果显示，转瓶培养的BHK21细胞，培养48小时显微镜观察成致密单层，见图1，96小时细胞开始出现脱落死亡；反应器无血清全悬浮培养BHK21细胞48小时的细胞显微镜观察状态如图2，生长至96小时细胞密度可达5.4x106 cells/ml，活率维持在94%左右。从细胞数量比较，650L反应器培养一批的细胞数量相当于500～700个15 L转瓶培养的细胞总量。1.4 病毒培养效果对比两种不同培养工艺，细胞在满足活力要求的基础上，以同等条件分别接种FMDV病毒，取样测定病毒毒价，结果见表2。 表2 转瓶和反应器全悬浮培养BHK21细胞病毒毒价对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442112_small.jpg结果表明，无血清悬浮培养的口蹄疫病毒毒价（TCID50和LD50）检测不低于转瓶培养工艺。根据反应器低血清悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫完整病毒粒子（146S）检测较转瓶高10倍左右的情况，应用无血清悬浮培养工艺，杂蛋白含量更少，口蹄疫完整病毒粒子和口蹄疫疫苗质量均提高。1.5 反应器和转瓶经济效益估算对比依据培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒工艺过程要求，从细胞密度、病毒毒价、产品效力、资源环境、劳动力等方面进行简单对比，借以一窥二者的经济效益差别（见表3）。 表3 反应器无血清悬浮培养与转瓶培养BHK21细胞经济效益对比http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/10/A1380442114_small.jpg*按照反应器无血清悬浮培养一条生产线（5L-120L-650L）、转瓶体积15 L进行对比按照目前培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒质量要求，对悬浮无血清培养工艺的产能进行预估，一条5L-120L-650L的反应器生产线年生产病毒量约为2.1亿毫升，生产疫苗量约为4.2亿毫升。2. 人狂犬病毒微载体培养与转瓶培养的对比我国是受狂犬病危害最为严重的国家之一，近年报告狂犬病死亡人数均在2400人/年以上，一直位居我国各类传染病报告死亡数的前三位，根据有关国家成功控制狂犬病的经验，世界卫生组织提出倡议，到2020年消除人狂犬病。我国距此倡议目标还有大量工作要做，国内也对人用和兽用狂犬病疫苗的生产做了大量研究工作。下面就120L反应器微载体培养Vero细胞生产狂犬病毒效果与转瓶培养工艺和培养效果比较分析。2.1主要材料细胞株：Vero细胞株毒 株：aG株（细胞株和毒株均来自某人用疫苗企业）培养基：低血清199培养基（产品代号MD504）、 Vero细胞反应器培养用培养基（产品代号MD505）, 均来自北京清大天一科技有限公司仪 器：5 L反应器（德国贝朗）、120LCLAVORUS ® 生物反应器（北京清大天一科技有限公司）血 清：特级新生牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）微载体：Cytodex 1 （美国GE

（1）培养室应有内、外两间，内室是培养室，外室是缓冲室。房间容积不宜大，以利于空气灭菌，内室面积在3.2×4.4＝14m2左右，外室面积在3.2×1.8＝6m2左右，高以2.5m左右为宜，都应有天花板。（2）分隔内室与外室的墙壁上部应设带空气过滤装置的通风口。（3）为满足微生物对温度的需要，需安装恒温恒湿机。（4）内外室都应在室中央安装紫外线灯，以供灭菌用。

无菌操作技术不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，在许多生物技术中也被广泛应用，例如转基因技术、单克隆抗体技术等。 无菌室，微生物实验室内专辟的一个小房间，室外设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭，无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢、便于清洗，室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。工作台的台面应该处于水平状态，无菌室和缓冲间都装有紫外线灯（距离工作台面1米），工作人员进入无菌室应穿戴灭过菌的服装、帽子。 超净台，主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃，通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台（正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去；正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种、细胞株等）。 微生物的培养 在微生物的培养过程中，要保持培养物纯净性；培养微生物的要领，是为所需要的微生物提供良好的生存环境，同时阻止或抑制其他微生物的生长。 （一）培养基1.认识培养基的基本组成成分，从生物体构成的基本元素这一角度理解培养基中为什么都需要具备这些基本成分。2.培养基的用途和种类：液体和固体两大类。3.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方；尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。4.培养基是否合格（无菌试验）：培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长（液体不变浑浊），说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）无菌技术 1. 无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。日常的生活环境中，每时每刻每处都存在着微生物，任何一个不经意的动作都可能将某种微生物引入到培养物中。在具备无菌环境和获得无菌材料后，还要始终保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术：彻底灭菌和防止污染是无菌技术的两个方面。此外，要有效避免操作者自身被微生物感染，还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去（生物安全）。无菌操作非常重要，无论是倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 2. 消毒与灭菌的概念（1）培养细菌用的培养基与培养皿（需要灭菌）（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（需要灭菌）（3）实验操作者的双手（需要消毒）（4）接种环、针、涂布棒：灼烧灭菌（外焰）。 3.倒平板（1）灭菌后，培养基冷却到55 [font='宋

（1）容器：配制和分装培养基的烧瓶、平皿或试管等器材应为中性，无酸、碱抑制物残留，平皿底部要平，以免琼脂厚薄不一，影响药敏试验结果。（2）成分来源：各种成分来源可靠，不含对目的菌生长有抑制的物质。特殊要求的培养基，如葡萄糖氧化发酵试验（O／F 试验），除加入葡萄糖外，不能含有其他糖类，指示剂不能用乙醇溶液，避免O／F试验的假阳性。培养基配制用水应是蒸馏水。（3）pH值调整：根据培养基的不同要求调整pH 值，控制在要求范围的±0.2之内。应当注意，培养基在高压灭菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矫正时应比实际需要p H值高0.1～0.2。（4）灭菌：根据培养基所含成分及配制数量的不同，选择不同的灭菌方式，既要达到灭菌效果，又不破坏培养基成分。一般对稳定的培养基，如MH琼脂、营养琼脂可用高压灭菌，即121℃15min ；而含糖的培养基则以108℃灭菌为好，以防止糖类破坏。不耐高热的物质如血清、牛乳等，可采用间隙灭菌法灭菌。（5）分装：根据使用的目的和要求决定分装量。分装培养基所用的平皿、试管要求清洁，不残留酸碱；制备平板培养基时，操作台要水平，以避免琼脂平板厚薄不一，同时确保无菌操作。

1.配制溶液　　向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。　　配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。　　2.调节pH值　　用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。　　3.过滤　　用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。　　4.分装　　已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。　　分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。　　装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。　　5.加棉塞　　分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。　　6.制作斜面培养基和平板培养基　　培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。　　(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。　　(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。

在生活中大家都很少去见过或是接触过食品生物实验室的设备，更不清楚那些设备在我们大家生活中是否出现，甚至有些朋友根本不知道这些实验室是怎么样的，更不是说它在我们生活中是否存在，或是它就像对于某些人来说就是一个神话，不清楚它的模样，不了解它的存在意义，也许听说过它的名字，也话在某家实验室见过，但对它了解也不是很多。 对于这些在我们生活中很少出现的实验设备，不了解它也是正常的，尤其是在这个繁忙的社会里，很多人跟我一样很少去关注或是关心与自己没多大的东西，也许这样说也是很正确，可能是太忙没有多余的时间去理会这些与我们日常无关的东西，但是对于这种现象的确是社会压力所造成，也是大家对社会的不了解…..无菌室和超净工作台：是实验室的核心部分，主要为样品提供保护，保证实验结果的准确和人员的安全。2.无菌室：无菌室通过空气的净化和空间的消毒为微生物实验提供一个相对无菌的工作环境。无室的主要组成设备的空气自净器，传递窗，紫外线灯等。严格的无菌室可能还装备风彬室等。A超净工作台：超净工作台作为代替无菌室的一种设备，使用简单方便，为实验的开展提供一个相对无菌的操作台。超净工作台湾队根据风向分为水平式和垂直式。B培养箱：主要用于实验室微生物的培养，为微生物的生长提供一个适宜的环境。a普通培养箱：一般控制的温度范围为：室温+5～65度，又分为电热恒温培养箱和隔水式恒温培养箱。b生化培养箱：一般控制的温度范围为：5～50度。c恒温恒湿箱：一般控制的温度范围为：5～50度，控制的湿度范围为：50～90%。可作为霉菌培养箱。(四)厌氧培养箱：适用于厌氧微生物的培养。C干燥箱,1.灭菌器,2.天平：一般要求具备精度达到万分之一的分析天平。3，显微镜主要用于微生物和微小物品结构，形态等的观察。4，分光光度计在QS中用于生产方便面，茶饮料，肉制品，乳制品，棉白糖的企业。5，酸度计在QS中用于生产果蔬罐头，白沙糖，饮用水类的企业。九，电导率仪和浊度仪在QS中用于生产饮用水的企业。6，折光仪在QS中用于生产果蔬罐头，饮料类的企业。7，恒温水温浴锅在QS中用于生产方便面，速冻面米食品企业。8，定氮装置　在QS中用于生产乳制品，含蛋白质饮料的企业。9，杂质度过滤机　在QS中用于生产乳品企业。恒温恒湿培养箱具有精确的温度和湿度控制系统，它为产业研究、生物技术测试提供所需要的各种环境模拟条件。由深华仪器设备研发队伍和销售部门，售后部门重于实验分析检测用仪器的研究、开发，并经营代理销售该领域的仪器设备、试剂和仪器设备的对外维修服务。恒温恒湿培养箱可广泛用于药物/纺织/食品加工等无菌试验，稳定性检查以及工业产品的原料性能，产品包装寿命等测试。特点： 1、微电脑温度湿度控制器，控温、控湿精确可靠，具有超温、传感器故障报警功能。采用进口品牌压缩机和循环风机，强制对流空气循环，效率高，能耗低，噪声低, 温度分布均匀，使用寿命长。 2、采用镜面不锈钢内胆，易清洁，箱内搁板间距可调。 3、高精度、大容量湿度发生器，确保湿度控制稳定，精度高，波动小。 4、设有独立限温报警系统，超过限制温度即自动中断，保证实验安全进行。 5、霉菌培养箱设有独立紫外灭菌灯。 6、箱体双层门结构、大视角观察窗，箱内装有照明灯，便于观察箱内培养物。 7、选配RS-485接口，能记录温、湿度参数的变化。 　该设备显示为双屏高亮度数码管显示，显示值准确直观，性能优越；工作室内设有照明装置，大视角保温真空钢化玻璃，便于观察；工作室内搁架用户可根据自己的要求任意调节高度及搁架多少；独立超温保护装置及工作状态提示，使用更安全、更可靠；加湿系统采用先进的超声波加湿。

为了更好地维护组培中心培养室的生产科研，特制定该规程：一． 常规防治规程1、严格按照日常防污措施设计施行，主要包括如下要点：（1）操作人员应注意定时进行84灭菌和酒精喷雾处理。（2）操作人员应注意除尘，切忌尘土飞扬，例如：地面、培养架、空调、灯管。（3）接种人员操作时，应注意减少污染，特别是瓶内污染，减少污染源。2、来访人员时应注意，在大量人员离失后，应进行防治污染及时处理，对大量人员所经过的地段进行灭菌消毒处理。3、操作人员应该将“无菌”概念时刻灌输到自己的脑海中，时刻注意防治污染。二． 污染情况监控与预测 对组培中心各房间，尤其是组培室都应进行污染情况监控与预测，并将数据记录备案，以供待查！1、监控方法。1．1检验手段：每周一次，对每个培养室按统计学原理取点，进行平板检测，统计菌落数，并区分污染级别，根据级别分别发出预警通报（低、中、高）1．2处理方法：（1）对于低级别预警：可采用常规消毒灭菌手段处理。（2）对于中等级别预警：除采用常规手段外，可根据污染种类进行加强灭菌：如进行熏蒸处理。（3）对于高等级别预警：应采用如下措施，先将培养室中的瓶苗移至一清洁的培养室中（该培养室应预先进行常规消毒和紫外线消毒3-5天。必要时进行熏蒸），然后对已污染的培养室进行彻底消毒（所有器具都应用酒精擦洗）。具体手段有：熏蒸（紫外线照射一周）、除尘及相关常规手段，如有窗帘，需洗净方可使用。2、其他要求： 对于移入洁净室的瓶苗，每一瓶苗都应进行酒精表面消毒。 对接种人员，除加强“灭菌”概念外，还应对每一接种完毕的瓶苗进行表面消毒方可入室。生物技术教研室

准备做发酵腐乳，以前有买一支低温毛霉菌种，但不知如何做三角瓶培养，培养基有麸皮，还要加什么，多少的量，培养的温度，培养时三角瓶口密封吗

关键词（必填项目）：胚胎干细胞培养目的（必填项目）：正确规范胚胎干细胞培养背景知识（选填项目）：无。原理（选填项目）：无主体内容：目录一、细胞二、一般培养-保持胚胎干细胞处于未分化状态培养基细胞复苏冻存细胞明胶包被细胞传代三、体外分化培养基包被有多聚鸟氨酸/纤维结合蛋白的培养板（使用或不使用盖玻片）体外分化方法四、移植细胞的准备细胞多能性胚胎干细胞产生于小鼠胚泡1．表达绿色荧光蛋白（EGFP）的B5-ES细胞。由Dr. Nagy的实验室制备。2．D3-ATCC; CRL-1934. 我们得到时大约传了17代。3．J1-由Dr. Jaenish的实验室友情提供。我们得到时大约传了7－9代。4．J1rtTA-rtTA表达J1细胞，由Dr. Jaenish的实验室友情提供。5．表达黄色荧光蛋白的YC5-ES细胞，由Dr. Nagy的实验室提供。一般培养--维持ES细胞处于未分化状态ES细胞培养用含有ESGRO（白血病抑制因子）的高糖培养基来阻止细胞的分化。为细胞提供包被有0.1％明胶的平板作为粘附细胞的基质。建议每2－3天从达到80％－90％融合的平板按1：8的比率传代细胞一次，细胞传代以后，在将细胞接种在0.1％明胶包被的培养皿之前，通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时，使分化细胞粘附，从而将分化和未分化细胞分开。将细胞全程置于37℃，5％CO2，100％湿度条件下培养。培养基ES:配制一20×不含DMEM，HS，ESGRO的溶液（该溶液也能用于EB培养基--见下文）。分装在50ml FALCON管中，（稀释为2×，每管42ml），贮存在-20℃。通过将21ml该溶液，HS和ESGRO加入450mlDMEM中制备培养基，0.2μm滤膜过滤。贮存于4℃。 注：一瓶DMEM是500ml。贮存液 DMEM(高糖) [/s

一、应用范围及主要特点：　　智能恒温培养摇床(振荡器) 。广泛应用于对温度、振荡频率、振幅有较高要求的细菌培养、发酵、杂交和生物化学反应及发酵、细胞组织研究等。在医学、生物学、分子学、制药、食品、环保等研究应用领域有着广泛而重要的作用。　　小外型大空间、有效工作容积大;环保半导件体制冷、静音绿色、寿命长;一人一台省空间，叠加使用更灵活;摇床滑道设计，更有效利用箱内空间　　1、首创尖端USB数据下载处理系统，方便快捷的追溯实验过程，优选实验方法，优化实验条件，存储量大，可自动将实验数据以图表和图形表示出来。无需外接打印机和内置打印机，免去了打印机长期运行时需不断换纸。而打印机也无法将打印出的数据变成直观的便于分析的图形。　　2、U盘一插，瞬间完成数据下载，鼠标轻点，瞬间完成实验数据的列表、回放、成图等多种功能，极方便、快捷地追溯实验过程，完成实验报告，筛选实验条件，优化实验方法。　　3、 积分负反馈控制技术，保证了转速，温度的精确性，可靠性。　　4、独特驱动系统，使机器运转平滑、稳定、耐久、可靠。　　5、智能化声光报警环境扫描微处理控制器。据有开盖自停保护，自诊断、安全报警功能。　　6、大屏幕背景光液晶显示屏，中文字幕人机对话提示功能，同时显示实测值、设定值和机器运行状态　　7、运行参数可记忆、保护。电源意外断电，来电后自动按原设定程序恢复运行。　　8、运行参数加密码锁，避免人为误操作。有光照和紫外消毒功能。　　9、独特的电机过热、温度失控自动断电保护装置。　　10、最大定时为999小时，液晶屏显示设定时间和剩余时间。　　11、独特慢启动设计，防止了骤然启动造成的摇瓶液体外溅，有效保证了定量实验的准确性。　　12、电子封闭可调式封闭循环加热。静音风扇设计和强制对流方式，确保了良好的恒温效果。　　13、流线型、超大视窗设计，ABS箱体，镜面不锈钢内衬和腔体组件，倾斜式人性化控制面板。

1 实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响.细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁,空气清新,干燥和无烟尘.细胞培养室的设计原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培养于一室,而洗刷消毒在另一室. 2 常用设施及设备 (1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式,直流式和外流式三大类. (2)无菌操作间:一般由更衣间,缓冲间和操作间三部分组成.操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱,离心机,倒置显微镜等.缓冲间可放置电冰箱,冷藏器及消毒好的无菌物品等. (3)操作间:普通培养箱,离心机,水浴锅,定时钟,普通天平及日常分析处理物(4)洗刷消毒间:烤箱,消毒锅,蒸馏水处理器及酸缸等. (5)分析间:显微镜,计算机及打印机等. 3 培养器皿 常用细胞培养器皿有培养瓶,培养板,培养皿等.常准备量是使用量的三倍.器皿应选择透明度好,无毒,利于细胞粘附和生长的材料,常用一次性聚苯乙烯材料制品或中性硬度玻璃制品.常用的器皿有下面几种. (1)液体储存瓶:用于储存各种配制好的培养液,血清等液体,常用规格有500ml,250ml, 100ml等几种. (2)培养瓶:根据培养细胞种类要求不同培养瓶的形态各异,用于细胞传代培养的细胞要求瓶壁厚簿均匀,便于细胞贴壁生长和观察,瓶口要大小一致,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml,100ml,50ml,25ml,10ml等几种. (3)培养皿:用于开放式培养及其它用途.分直径30mm,60mm,120mm等几种. (4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管.其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体.常用1ml和10ml两种.短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种. (5)离心管:离心管是细胞培养中使用最广泛的器皿,根据用途不同形态各样,常用于细胞培养的离心管有大腹式尖底离心管和普通尖底离心管两类.前者分别为50ml,30ml,15ml;后者则多为10ml和5ml. (6)其它:如三角烧瓶,烧杯,量筒,漏斗,注射器等.4 细胞培养温度 维持培养细胞旺盛生长,必须有恒定而适宜的温度.不同种类的细胞对培养温度要求也不同.人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃,偏离这一温度范围,细胞的正常代谢会受到影响,甚至死亡.培养细胞对低温的耐受力较对高温强,温度上升不超过39℃时,细胞代谢与温度成正比;人体细胞在39-40℃1小时,即能受到一定损伤,但仍有可能恢复;在40-41℃1小时,细胞会普遍受到损伤,仅小半数有可能恢复;41-42℃1小时,细胞受到严重损伤,大部分细胞死亡,个别细胞仍有恢复可能;当温度在43℃以上1小时,细胞全部死亡.相反,温度不低于0℃时,对细胞代谢虽有影响,但并无伤害作用;把细胞放入25-35℃时,细胞仍能生存和生长,但速度减慢;放在4℃数小时后,再回到37℃培养,细胞仍能继续生长.细胞代谢随温度降低而减慢.当温度降至冰点以下时,细胞可因胞质结冰受损而死亡.但是,如果向培养液中加入一定量的冷冻保护剂(二甲亚砜或甘油),可在深低温下如-80℃或-196℃(液氮)长期保存. 5 合适的气体环境 气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一,所需气体主要有氧气和二氧化碳.氧气参与三羧酸循环,产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分.开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中.二氧化碳既是细胞代谢产物,也是细胞生长繁殖所需成分,它在细胞培养中的主要作用在于维持培养基的pH值.大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4,偏离这一范围对细胞培养将产生有害的影响.但细胞耐酸性比耐碱性大一些,在偏酸环境中更利于细胞生长.但有一些细胞也喜欢偏碱环境中生长,如成纤维细胞最适合pH是7.4-7.6.每种细胞都有其最适pH值.

[color=#c2877e][size=3][color=#5c585a] 2011年3月1日，赛默飞世尔今天宣布，公司已经签署了一项协议，收购BD(碧迪)公司聚苯乙烯滚瓶生产线。BD(碧迪)公司是开发、制造和销售医疗设备、仪器及试剂的全球性公司。该交易预计将在2011年第二季度完成。　滚瓶是赛默飞世尔细胞培养平台产品之一，其他产品还包括Hyclone一次性使用的生物反应器和孔培养板细胞工厂系统，而这些系统是疫苗、单克隆抗体、重组蛋白和细胞疗法生产的关键。　赛默飞世尔最近宣布在上海建立一个新的制造工厂。上海新工厂以及此次收购表明了赛默飞世尔承诺于投资创新产品平台，并成为同行业中最全面生化产品供应商的决心。　“我们很高兴地宣布这项补充我们实验室产品线的收购，”赛默飞世而副总裁兼总经理Verner Andersen说，“我们将确保我们为客户提供的滚瓶是在已验证的工艺下生产出来的。此项收购使得赛默飞世而可以提供细胞培养的全系列产品。”[/color][color=#0021b0]讨论：收购以后是增加了市场竞争还是减小了市场的竞争呢？竞争大了，对客户有好处，竞争小了，形成垄断！[/color][color=#79c101]赛默飞世尔科技展台[/color][url=http://www.instrument.com.cn/netshow/SH100650/][color=#79c101]http://www.instrument.com.cn/netshow/SH100650/[/color][/url][/size][/color]

隔水式培养箱适合生物学.化学.医学.农业科学.制药.食品.卫生.环境保护等大专科研单位，对各种细菌进行培养育种.发酵等实验。 　　隔水式培养箱 结构特点： 　　a) 立式箱体结构，内胆不锈钢制造。 　　b) 温度采用数字显示，直观清楚，含超温报警保护装置。 　　c) 门上设有方型观察窗。便于查看工作室内的样品。 　　d) 溢流装置，防止水位过高。（内部还有水位报警装置） 　　e) 绝缘性能良好，加热安全。 　　f) 保温性能强 　　隔水式培养箱 技术指标： 　　a) 加热功率。400W 温度波动≦0.5℃ 温度均匀性≦±1℃ 　　b) 工作电压。220V±10V。50HZ 　　c) 温度范围。RT+5-60℃ 　　d) 工作室尺寸350×350×410mm

培养基的制备方法 以下为常规方法，如配方中有特殊规定或要求，以配方为第一依据。1.根据配方，计算各种营养成分用量。一般药品可用普通药物天平称量，用量少的药品，可按比例配成高浓度溶液，再按所需量用移液管吸取。称好的药品放入玻璃烧杯或搪瓷杯中。2.在另一容器中将所需量的水(一般可用自来水，有特殊要求时需用蒸馏水)加热，取全量的1/3左右倒入放药品的容器中，用玻璃棒搅拌，待药品全溶后，再将其余热水全部倒入。3.若配制固体培养基，则称取1.5～2％的琼脂放入已溶化的营养液中，继续加热至琼脂全部溶解。加热中随时搅拌，防止溢出或糊底。烧糊的培养基营养物质破坏，并产生有毒物质，不宜再用。4.待溶化的培养基稍冷却后，按配方要求调整pH值。先取10毫升培养基装入试管中，用pH试纸测其自然pH，再用1％NaOH(或1％HCl)调至所需pH，根据用量计算，换用10％NaOH(或10％HCl)调整所配全量培养基的pH。加碱(或酸)溶液时，应边滴加边搅拌，至应加量将近用完时，再次测试，最后调至要求的pH值。5.配好的培养基，根据需要趁热分装至试管或锥形瓶中。分装需用漏斗，以免琼脂粘在管口或瓶口上。装瓶量一般为瓶容量的1/3～1/2；装试管一般为试管高度的1/5～1/4，以免灭菌时培养基上溢，粘湿棉塞。6.用预先制好的棉塞塞住管口或瓶口。棉塞既有利于通气，又有滤菌作用，故松紧、大小应适当，以免使用时影响操作(如图)。最后用牛皮纸或报纸包住棉塞，扎紧在瓶颈或试管上方，以免灭菌时水蒸汽沾湿棉塞或脱落。7.灭菌后取出的固体培养基，根据需要可将试管立即斜放，冷凝后即成斜面培养基，用于菌种扩大培养及保藏；锥形瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中，冷凝后即制成平板培养基，可用于菌种的分离、鉴定等。液体培养基冷却后可直接根据需要接入菌种

注意事项： 1.配制溶液时必须用新鲜的蒸馏水。2.安装蔡式滤器时通常使用孔径 0.45 微米 和 0.22 微米滤膜各一张，放置位置为 0.45 的位于 0.22 微米的滤膜上方，并且要特别注意滤膜光面朝上。 3.配制 RPMI1640 培养基时因为还要加入小牛血清，而小牛血清略偏酸性，为了保证培养液 PH 值最终为 7.2 ，可在配制时调 PH 至 7.4 。 细胞培养的一般过程 一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。R 理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置 4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。由组织并分离分散细胞的方法可参阅有关文献。 三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的 PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和 CO2浓度也要定时检查。一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。四、冻存及复苏为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度?－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入 37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。

沙氏琼脂培养基（SDA）用途：用于医药工业洁净室（区）沉降菌的测试（GB/T 16294—2010）用法：取上述成分除琼脂，混合，微热溶解，调节ph值使灭菌后为5.6 ±0.2，假如琼脂，加热融化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿（￠90mm3 ）中。加盖后在室温放至凝固。平皿培养及保存：制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃保存，一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。采用适宜方法在平皿上做好培养基的名称、制备日期记录的标记。

常用设备 准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、 PH 计（测量培养用液 PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（ -80℃ ）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、 CO2 孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、 4℃ 冰箱（放置 serum 和培养用液）。无菌操作基本技术 无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用 3‰ 来苏尔或者新洁尔灭或者 0.5 ％过氧乙酸擦拭。2.CO2 孵箱（培养箱）灭菌：先用 3‰ 新洁尔灭擦拭，然后用 75 ％酒精擦拭或者 0.5 ％过氧乙酸，再用紫外灯照射。3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各 20-30 分钟 。4.实验后灭菌：用 75 ％酒精（ 3‰ 新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。 5.定期检测下列项目：钢瓶之CO 压力；CO2培养箱之CO２浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)；无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。6.水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。 2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75 ％酒精棉球擦净双手。 无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、 PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用 75 ％酒精擦拭瓶子的外表面 2.靠近酒精灯火焰操作。 3.器皿使用前必须过火灭菌 4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。 2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入 5 ％稀盐酸中 12 小时以除去脏物、铅、砷等物。 3.刷洗、烘干： 12 小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。 4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g ：浓硫酸 200ml ：蒸馏水 1000ml ）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗 15 次，最后蒸馏水冲洗 3-5 次和用双蒸水过 3 次。 5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向 15 磅 时，维持 20-30 分钟。 7.高压消毒后烘干

骨髓间充质干细胞总结 2003年8月，为给大家提供一个网上交流干细胞研究经验的平台，我们干细胞版设立了骨髓间充质干细胞培养讨论区，经过近三个月的讨论学习，我们既学习丰富了自己的知识体系，也对间充质干细胞尤其是分离培养方面有了更为详实的认识，为了大家阅读的方便，我们决定把本版中的相关内容，同时参考部分书目和文献，做一总结。一、骨髓间充质干细胞的分离 目前常用的分离MSC的方法有全骨髓法和密度梯度离心法，全骨髓法即根据干细胞贴壁特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化MSC的目的。密度梯度离心法即根据骨髓中细胞成分比重的不同，提取单核细胞进行贴壁培养。随着对MSC表面抗原认识的深入，有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化，但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题，加之耗费较大和技术的难度，在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。1. 直接培养法（全骨髓培养法） 1987年，Friedenstein等发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个核细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞，而且这些细胞扩增20－30代后仍能保持其多向分化潜能，这类细胞即为骨髓间充质干细胞（BMSC），其工作对今后MSC的研究具有重要意义，不仅证实了骨髓MSC的存在，而且创建了一种体外分离和培养MSC的简便可行的方法，得到了广泛的应用。culture-spirit采用直接贴壁法，24-36小时首次换液，换液时用PBS洗两次，7-10天传第一代，以后2-3天传代。培养基采用Hyclone的DMEM/F-12（1：1），血清是天津TBD的FBS（顶级），得到了较好的培养结果。布兰卡根据自己培养大鼠MSC的经验，详细介绍了实验步骤：（1）接种后60-80分钟,换液去除悬浮细胞（2）原代培养24 h,48 h各换液一次（3）观察细胞情况，在原代培养7天左右时，如观察到成片的典型形态的细胞，在瓶底用Marker笔标记，0.25%胰酶消化，镜下观察控制，约5-10分钟（室温太低时应放置到孵箱中），加入全培养基终止消化，瓶体朝上，吸管轻轻吹打4-8分钟，尤其是标记部位。不要用力吹打，以免把贴壁较牢的成纤维细胞，上皮样细胞吹打下来。（4）传代到新瓶中，加入少量培养基，孵箱静置20-30分钟后，MSC大多牢固贴壁。瓶底朝上，轻轻吹打，丢弃悬浮以及贴壁不牢的细胞（大多是上皮样细胞），加入全培养基开始传代培养，如观察仍有较多杂细胞，可重复上述步骤。（5）经上述处理后，原代的那瓶细胞仍有一些MSC生长，可继续按原代培养，如观察到MSC的克隆，仍可按上述步骤纯化处理。（6）原代或传代的细胞如观察的少量成片的杂细胞，可直接镜下瓶底标记后，超净台里用长吸管尖端机械刮除，吸出去掉。菊花与刀用的是全骨髓培养法，直接用含10%的FBS培养基冲洗大鼠的股骨和胫骨，为了避免冲起许多气泡应缓慢冲，冲的次数不应太多。冲洗后不用离心直接接种在培养瓶里，48 h~72 h后首次换液，一般7~10天可传代。天之饺子介绍的小鼠MSC的分离方法：取6 w小鼠的股骨和胫骨，直接用含培养基冲出骨髓，一定要尽量把干垢端的骨髓冲干净。冲洗后不离心直接接种在培养瓶里，24－48 h后去悬浮，再接下来的每3－4天换液一次，直到需要传代。2. 密度梯度离心法 裴雪涛等用比重为1.073 g/ml的percoll分离（400 g×20 min）人骨髓MSCs，取界面处细胞层，离心后洗涤以2×105/cm2的密度接种，72 h后更换培养液，弃掉未贴壁细胞，以后每3 d换液一次。细胞长到80％汇合时1：1传代。菊花与刀利用PERCOLL密度1.073分离大鼠MSC 时，用2400 rpm×20 mins后可见中间有一层约1～2 mm厚的白色层，仔细用吸管吸取这一层再用PBS离心2遍即可加培养基和胎牛血清培养即rMSCs。周进明等利用密度为1.082的percoll分离小鼠MSCs，500g×30min离心后，取中间的单个核细胞层，PBS洗两次，接种于IMDM培养基，1 d后换液，去掉非贴壁细胞，以后每3-4天换液。jetter用过FICOLL,FERCOLL,上海二分厂的淋巴细胞分离液分离MSC细胞效果都不错，当然所获细胞群的纯度不一，Percoll最纯，而上海二分厂的淋巴细胞分离液所获细胞群的传代能力优秀（35 PASSAGE）。本版的部分园友认为MSC贴壁培养得到的细胞不均一，但是多能分化能力和增殖力好，percoll分离得到的细胞较为均一，多能分化性和增殖力不如贴壁培养的，尤其是增殖力相差很远，有人添加bFGF或/和表皮生长因子发现可以增强增殖能力。二、骨髓间充质干细胞的培养 天之饺子认为，间质干细胞的培养一定要用塑料培养瓶，不能用玻璃的。因为象间质干这类的基质细胞不易贴玻璃，而且现在买的进口好品牌的培养瓶都涂有一层促细胞贴壁的物质，多数园友培养时都添加10－15％胎牛血清。分离培养结果的差异可能是由于各个研究小组标本来源、采用的分离方法不同从而所获得的细胞不同，或者用来检测的细胞代数不同，或者培养过程中用的胎牛血清不同，导致MSCs获得或失去这些表面标记物的表达。三、骨髓间充质干细胞的特性 体外培养的MSC体积小，成梭形，核浆比大。不表达分化相关的细胞标志，如I、II、III型胶原、碱性磷酸酶或Osteopontin；也不表达SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124、CD166和多种表面蛋白，这群细胞特性稳定，扩增一代和两代后的细胞同质性分别达到95％和98％。MSC联系传代培养和冷冻保存后仍能具有多向分化潜能，而且保持正常的核型核端粒酶活性，但不易自发分化，在体外特定的诱导条件下，MSC可以分化为骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉、神经等多种细胞。四、其他相关内容 Jiang将从成人以及成年大鼠和小鼠骨髓分离的间充质干细胞（CD45－TER119－）命名为多潜能成年祖细胞，他们证明，MAPC高表达端粒酶，而且随着细胞的扩增，端粒的长度不变，单个MAPC来源的细胞群不仅能在体外向3个胚层的细胞分化，而且能在体内能够向各种组织细胞分化，相比较而言，形态与MSC相似的体外培养的皮肤成纤维细胞则不具有类似的分化潜能。参考文献 生理学报2003.55（2）：153－159 人骨髓间充质干细胞在成年大鼠脑内的迁移及分化中华放射医学与防护杂志.2002,22(3).-167-169 培养小鼠骨髓间充质干细胞及其移植后在体内的定位分布Exp Biol Med Vol. 226:507 520, 2001 Mesenchymal Stem CellsNATURE |VOL 418 | 4 JULY 2002 Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow干细胞生物学 裴雪涛 主编

[url=http://www.f-lab.cn/microscope-incubators/stagetop.html][b]载物台CO2培养箱[/b][/url]是直接安装到[b]显微镜载物台[/b]上的[b]二氧化碳培养箱[/b],它具有更小的结构，与[b]笼式显微镜培养箱[/b]相比安装更为方便 ，是[b]活细胞培养[/b]实验的理想[b]培养腔体[/b]。[img=载物台CO2培养箱]http://www.f-lab.cn/Upload/H301_.jpg[/img][b]载物台二氧化碳培养箱特点[/b]是进行活细胞长期观察（Time-Lapse）试验的活细胞工作室，它能够为显微镜观测提供温度、湿度和CO2浓度可控的环境，为细胞提供合适的生长环境。适合所有的XY载物台和压电载物台，适合所有的正置和倒置显微镜，具有载玻片式的盖子更为方便操作样品。[img=载物台CO2培养箱]http://www.f-lab.cn/Upload/H302.JPG[/img][b]载物台CO2培养箱参数[/b]温度范围：室温-50摄氏度温度精度：+/-0.1摄氏度气体混合分辨率：1%气泵气压：0.3atm湿度效率：90%ca[img=载物台CO2培养箱]http://www.f-lab.cn/Upload/H303.JPG[/img][b]载物台CO2培养箱[/b]能够加热或冷却样品在10℃~50℃之间。可执行热能循环。水环境腔室通过适配器可安装35mm培养皿、60mm培养皿、 6-12-24-48-96多孔板和细胞培养玻片。培养板允许一起插入4个35mm培养皿，或一起插入2个35mm培养皿和一个细胞培养玻片，可在相同实 验条件下、同时观察4个不同的样本。载物台CO2培养箱：[url]http://www.f-lab.cn/microscope-incubators/stagetop.html[/url]

一、目的要求 通过对分离真菌用的马丁氏（Martin）培养基配制，掌握对选择培养基的配制方法，并明确选择的原理。 二、基本原理 马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4•7H2O、孟加拉红（玫瑰红，Rose Bengal）和链霉素等组成。其中葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，KH2PO4和MgSO4•7H2O作为无机盐，为微生物提供钾、磷和镁离子。而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的。 马丁氏培养基配方如下： KH2PO4 1g MgSO4•7H2O 0．5g 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 琼脂 15—20g 水 1000ml pH 自然 此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3．3ml。临用时每100ml培养基中加1%链霉素液0．3ml。 三、器材 KH2PO4，MgSO4•7H2O，蛋白胨，葡萄糖，琼脂，孟加拉红，链霉素； 试管，三角烧瓶，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅等。 四、操作步骤 1．称量和溶化 按培养基配方，准确称取各成分，并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后，补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液，在1000ml培养液中加入1%的孟加拉红溶液3．3ml，混匀后，加入琼脂加热溶化（方法同实验十九）。 2．分装、加塞、包扎、灭菌，无菌检查与实验十九相同。 3．链霉素的加入 由于链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液，在100ml培养基中加1%链霉素液0．3ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

培养箱是培养微生物的主要设备，可用于细菌、细胞的培养繁殖。其原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境，如控制一定的温度、湿度、气体等。目前使用的培养箱主要分为三种：直接电热式培养箱、生化培养箱和二氧化碳培养箱。 　　(一)电热式和隔水式培养箱 　　电热式和隔水式培养箱的外壳通常用石棉板或铁皮喷漆制成，隔水式培养箱内层为紫铜皮制的贮水夹层，电热式培养箱的夹层是用石棉或玻璃棉等绝热材料制成，以增强保温效果，培养箱顶部设有温度计，用温度控制器自动控制，使箱内温度恒定。隔水式培养箱采用电热管加热水的方式加温，电热式培养箱采用的是用电热丝直接加热，利用空气对流，使箱内温度均匀。 　　在培养箱内的正面侧面，有指示灯和温度调节旋扭，当电源接通后，红色指示灯亮，按照所需要温度转动旋扭至所需刻度，待温度达到后，红色指示灯螅灭，表示箱内已达到所需温度，此后箱内温度可靠温度控制器自动控制。 　　培养箱使用与维修保养： 　　(1)箱内的培养物不宜放置过挤，以便于热空气对流，无论放入或取出物品应随手关门，以免温度波动。 　　(2)电热式培养箱应在箱内放一个盛水的容器，以保持一定的湿度。 　　(3)隔水式培养箱应注意先加水再通电，同时应经常检查水位，及时添加水。 　　(4)电热式培养箱在使用时应将风顶适当旋开，以利于调节箱内的温度。 　　(二)生化培养箱 　　这种培养箱同时装有电热丝加热和压缩机制冷。因此可适应范围很大，一年四季均可保持在恒定温度，因而逐渐普及。 　　该培养箱使用与维修保养类似电热式培养箱.由于安装有压缩机，因此也要遵守冰箱保养的注意事项，如保持电压稳定，不要过度倾斜，及时清扫散热器上的灰尘等。 　　(三)二氧化碳培养箱 　　二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上加以改进，主要是能加入CO2，以满足培养微生物所需的环境。主要用于组织培养和一些特殊微生物的培养。 　　1.CO2培养箱的安装与调试CO2培养箱的正面有操作盘，盘上设有电源开关，温度调节器(手动式和液晶显示盘)，CO2注入开关，CO2调节旋扭，湿度调节旋扭，温度显示盘，CO2显示盘和湿度显示盘，二氧化碳样品孔(用于抽取箱内的样品，以检测箱内的CO2是否达到显示盘上所显示的含量)和报警装置(超温报警灯)。 　　(1)培养箱应放置于位置比较平稳，并远离热源的地方，以防止温度波动和微生物的污染。 　　(2)在接通电源前，应按照使用说明书，在培养箱内加入一定的蒸馏水(所加入的水最好加入一定量的消毒剂，详见说明书)，以免烧坏机器。 　　(3)当水加到一定量后，报警灯亮，即停止加水，打开电源开关，即开始加温，将温度控制器调到所需温度。 　　(4)当温度达到所需温度时，则自动停止加热，超过所需温度时，超温报警灯亮，并发出报警声。 　　(5)培养箱所用的CO2可以用液态CO2或气体，无论用哪种CO2给供的管子不能太变曲，以保证气体的畅通。一般选用CO2钢瓶，接上压力控制表即可。 　　(6)CO2含量的调零在箱内温度和湿度稳定后(一般须三天)，旋动CO2调节旋扭，使显示盘的数字调到0.00，过5分钟后如需要再重复调整，直到显示盘上的读数稳定为止。打开CO2注入开关(注入灯亮)，将CO2设定值调到所需浓度，使浓度达到设定值浓度后(注入灯熄灭)，并至少维持10分钟。此后则由CO2控制器自动调节箱内的CO2含量。 　　(7)CO2培养箱湿度的调整先将湿度调节旋扭按下，再将湿度调节旋扭转动至所需培养湿度，此后由湿度调节器自动调整湿度。 　　2.培养箱使用注意事项 　　(1)培养箱应由专人负责管理，操作盘上的任何开关和调节旋扭一旦固定后，不要随意扭动，以免影响箱内温度，CO2、湿度的波动，同时降低机器的灵敏度。 　　(2)所加入的水必须是蒸馏水或无离子水，防止矿物质储积在水箱内产生腐蚀作用。每年必须换一次水。经常检查箱内水是否够。 　　(3)箱内应定期用消毒液擦洗消毒，搁板可取出清洗消毒，防止其它微生物污染，导致实验失败。 　　(4)定期检查超温安全装置，以防超温。方法为按进监测报警按扭，转动固定螺丝，直到超温报警装置响，然后关闭超温安全灯。 　　(5)如长期不使用二氧化碳时，应将CO2开关关闭，防止CO2调节器失灵。 　　(6)所使用的CO2必须的纯净的，否则降低CO2传感器的灵敏度和污染CO2过滤装置。 　　(7)在无湿度控制的培养箱内，为保持箱内CO2的稳定，要在箱内底层放入一个盛水的容器。

培养箱是培养微生物的主要设备，可用于细菌、细胞的培养繁殖。其原理是应用人工的方法在培养箱内造成微生物和细胞、细菌生长繁殖的人工环境，如控制一定的温度、湿度、气体等。目前使用的培养箱主要分为三种：直接电热式培养箱、生化培养箱和二氧化碳培养箱。 　　(一)电热式和隔水式培养箱 　　电热式和隔水式培养箱的外壳通常用石棉板或铁皮喷漆制成，隔水式培养箱内层为紫铜皮制的贮水夹层，电热式培养箱的夹层是用石棉或玻璃棉等绝热材料制成，以增强保温效果，培养箱顶部设有温度计，用温度控制器自动控制，使箱内温度恒定。隔水式培养箱采用电热管加热水的方式加温，电热式培养箱采用的是用电热丝直接加热，利用空气对流，使箱内温度均匀。 　　在培养箱内的正面侧面，有指示灯和温度调节旋扭，当电源接通后，红色指示灯亮，按照所需要温度转动旋扭至所需刻度，待温度达到后，红色指示灯螅灭，表示箱内已达到所需温度，此后箱内温度可靠温度控制器自动控制。 　　培养箱使用与维修保养： 　　(1)箱内的培养物不宜放置过挤，以便于热空气对流，无论放入或取出物品应随手关门，以免温度波动。 　　(2)电热式培养箱应在箱内放一个盛水的容器，以保持一定的湿度。 　　(3)隔水式培养箱应注意先加水再通电，同时应经常检查水位，及时添加水。 　　(4)电热式培养箱在使用时应将风顶适当旋开，以利于调节箱内的温度。 　　(二)生化培养箱 　　这种培养箱同时装有电热丝加热和压缩机制冷。因此可适应范围很大，一年四季均可保持在恒定温度，因而逐渐普及。 　　该培养箱使用与维修保养类似电热式培养箱.由于安装有压缩机，因此也要遵守冰箱保养的注意事项，如保持电压稳定，不要过度倾斜，及时清扫散热器上的灰尘等。 　　(三)二氧化碳培养箱 　　二氧化碳培养箱是在普通培养的基础上加以改进，主要是能加入CO2，以满足培养微生物所需的环境。主要用于组织培养和一些特殊微生物的培养。 　　1.CO2培养箱的安装与调试CO2培养箱的正面有操作盘，盘上设有电源开关，温度调节器(手动式和液晶显示盘)，CO2注入开关，CO2调节旋扭，湿度调节旋扭，温度显示盘，CO2显示盘和湿度显示盘，二氧化碳样品孔(用于抽取箱内的样品，以检测箱内的CO2是否达到显示盘上所显示的含量)和报警装置(超温报警灯)。 　　(1)培养箱应放置于位置比较平稳，并远离热源的地方，以防止温度波动和微生物的污染。 　　(2)在接通电源前，应按照使用说明书，在培养箱内加入一定的蒸馏水(所加入的水最好加入一定量的消毒剂，详见说明书)，以免烧坏机器。 　　(3)当水加到一定量后，报警灯亮，即停止加水，打开电源开关，即开始加温，将温度控制器调到所需温度。 　　(4)当温度达到所需温度时，则自动停止加热，超过所需温度时，超温报警灯亮，并发出报警声。 　　(5)培养箱所用的CO2可以用液态CO2或气体，无论用哪种CO2给供的管子不能太变曲，以保证气体的畅通。一般选用CO2钢瓶，接上压力控制表即可。 　　(6)CO2含量的调零在箱内温度和湿度稳定后(一般须三天)，旋动CO2调节旋扭，使显示盘的数字调到0.00，过5分钟后如需要再重复调整，直到显示盘上的读数稳定为止。打开CO2注入开关(注入灯亮)，将CO2设定值调到所需浓度，使浓度达到设定值浓度后(注入灯熄灭)，并至少维持10分钟。此后则由CO2控制器自动调节箱内的CO2含量。 　　(7)CO2培养箱湿度的调整先将湿度调节旋扭按下，再将湿度调节旋扭转动至所需培养湿度，此后由湿度调节器自动调整湿度。 　　2.培养箱使用注意事项 　　(1)培养箱应由专人负责管理，操作盘上的任何开关和调节旋扭一旦固定后，不要随意扭动，以免影响箱内温度，CO2、湿度的波动，同时降低机器的灵敏度。 　　(2)所加入的水必须是蒸馏水或无离子水，防止矿物质储积在水箱内产生腐蚀作用。每年必须换一次水。经常检查箱内水是否够。 　　(3)箱内应定期用消毒液擦洗消毒，搁板可取出清洗消毒，防止其它微生物污染，导致实验失败。 　　(4)定期检查超温安全装置，以防超温。方法为按进监测报警按扭，转动固定螺丝，直到超温报警装置响，然后关闭超温安全灯。 　　(5)如长期不使用二氧化碳时，应将CO2开关关闭，防止CO2调节器失灵。 　　(6)所使用的CO2必须的纯净的，否则降低CO2传感器的灵敏度和污染CO2过滤装置。 　　(7)在无湿度控制的培养箱内，为保持箱内CO2的稳定，要在箱内底层放入一个盛水的容器。

我们平该如何操作使用台式循环水真空泵呢?操作台式循环水真空泵的步骤是什么呢?下面就为大家带了台式循环水真空泵的操作使用方法。　　台式循环水真空泵使用方法　　1、准备工作。将台式循环水真空泵平放于工作台上，使用时，打开水箱上盖注入清洁的凉水(亦可经由放水软管加水)，当水面即将升至水箱后面的溢水嘴下高度时停止加水，重复开机可不再加水。每星期至少更换一次水，如水质污染严重，使用率高，则须缩短更换水的时间，保持水箱中的水质清洁。　　2、抽真空作业。将需要抽真空的设备的抽气套管紧密套接于本机抽气嘴上，检查循环水开关应关闭，接通电源，打开电源开关，即可开始抽真空作业，通过与抽气嘴对应的真空表可观察真空度。　　3、当真空泵需长时间连续作业时，水箱内的水温将会升高，影响真空度，此时，可将放水软管与水源(自来水)接通，溢水嘴作排水出口，适当控制自来水流量，即可保持水箱内水温不升，使真空度稳定。　　4、当需要为反应装置提供冷却循环水时，在第3条操作的基础上，将需要冷却的装置进水、出水管分别接到机器上，转动循环水开关至ON位置，即可实现循环冷却水供应。

3.相对湿度控制：培养箱内相对湿度的控制是非常重要的，维持足够的湿度水平才能保证不会由于过度干燥而导致培养失败。大型的二氧化碳培养箱是用蒸汽发生器或喷雾器来控制相对湿度水平的，而大多数中、小型培养箱则是通过湿度控制面板（humidity pans）的蒸发作用产生湿气的（其产生的相对湿度水平可达95-98％）。一些培养箱有一个能在加热的控制面板上保持水份的湿度蓄水池（humidity reservoir），这样可以增强蒸发作用，此蓄水池能增加相对湿度水平达97-98％。但是，这个系统也更复杂，由于复杂结构的增加一些难以预料的问题也会在使用过程中出现。 4.微处理控制系统：每一个使用者都希望所用的仪器能够方便好用，微处理控制系统和其它各种功能附件（如高温自动调节和警报装置、CO2警报装置、密码保护设置、自动校准系统等等）的运用，就使得二氧化碳培养箱的操作和控制都非常的简便。微处理控制系统是维持培养箱内温度、湿度和CO2 浓度稳态的操作系统。例如PIC微处理器控制系统，它能严格控制气体的浓度并将其损耗降至极低水平，以保证培养环境恒定不变，且能保证长期培养过程中箱内温度精确，并有LED 显示，可设置、校正温度和CO2浓度。不同的微处理系统虽然名字不相同，但是其原理与控制效果则无甚区别，选购时不必太在意它们名字上的区别，关键是要自己觉得使用起来方便，容易操作，而且要能够达到所需的控制精度。此外，我想一个报警系统也是不可少的吧，它能让你及时知道培养箱出现的情况，并做出反应，从而最大限度地降低了损失，保证实验的连续性。有些培养箱有声/光报警装置，温度变化达±0.5℃，或CO2 浓度变化达±5%时，即会自动报警；有些具有CO2浓度异常报警显示功能。这些装置都是为了方便使用者，以减少繁琐枯燥的实验过程而设计的。5.污染物的控制：污染是导致细胞培养失败的一个主要因素，因而，二氧化碳培养箱的制造商们设计了多种不同的装置去减少和防止污染的发生，其主要途径都是尽量减少微生物可以生长的区域和表面，并结合自动排除污染装置来有效防止污染的产生。例如，鉴于CO2培养箱在使用过程中有时会伴有霉菌生长，为确保培养箱免受污染且保证仪器箱体内的生物清洁性，有些公司开发设计了带有紫外清洁功能的增强型CO2培养箱；还有公司设计的特有铜外壳HEPA滤器能过滤培养箱内空气，可过滤除去99.97%的0.3um以上的颗粒，并能有效杀死过滤时被挡在滤器内的微生物颗粒；此外，自动杀菌装置能使箱内温度达到90℃从而杀死污染微生物，当它与HEPA系统结合使用就能够极大的减少污染。这些装置对于细胞培养来说是必不可少，但选择何种清洁装置呢？当然功能越多越好的最适用，但是价格也会随之上升。如果经费有限，只能选择一个价格较便宜的，这时就应该配合使用一些消毒剂和除菌剂，经常进行消毒灭菌，也能达到贵仪器的效果，只是比较麻烦一点而已。总之，无论选择何种装置，都要时刻注意保持培养箱的清洁，经常清理箱体，这样才能增加仪器的使用寿命，并使实验顺利进行，保证结果的可靠性。6.其它因素：每一类型的二氧化碳培养箱温度、湿度和CO2 浓度的控制范围和控制精确度、均一度都有所不同。此时，购买仪器之前就要对自己实验室的要求有一定的了解：控制范围是多大呢？控制精度要求非常准确，还是可以有一定的浮动范围呢？因为有时太高的精度也好像没有太大的意义。只有对自己所需的产品有全面的了解才能选到自己的最佳“伙伴”。生物通龙虎榜为您提供了一些公司二氧化碳培养箱的具体参数，从中您可以得到一个具体的比较和分析，说不定里面会有您心仪的仪器呢。培养箱的容积也是一个不可忽略的因素，买小了不够用，大了又浪费又占地方。二氧化碳培养箱的可选容积非常广，包括小型（700升），而且每种类型又有不同的容积可选。此时，就需要您在选购前对所需培养箱容积的范围有一个比较准确的了解，并在此基础上多预留一点空间，以保证不时之需。此外，有些二氧化碳培养箱还具有许多特别的功能，如有Thermogard 风扇管理系统，从而实现了风量的智能化调节；有单通道循环系统，以确保培养箱内部温度的均一性，同时也降低了污染；LCD（液晶）显示系统，硅树脂温度传感器测量温度等等。这些各种各样的附件装置的选择都是为了方便选购者的选择和使用。从技术角度来选择二氧化碳培养箱由于动物细胞培养液一般使用碳酸盐pH缓冲系统，要求培养环境中维持一定浓度的CO2，所以动物细胞的培养一般需要CO2培养箱。 　　CO2培养箱采用两种不同的CO2维持系统。一种方式是通过使用空气泵，将CO2和空气按一定比例混合后吹入培养箱。另一种方式是通过一个自动的CO2检测控制系统，在检测到CO2浓度低于要求浓度时打开CO2气阀充入CO2。由于前一种方法耗费CO2而且不容易精确控制CO2浓度，先进的CO2培养箱都采用自动监控系统来维持CO2的浓度。　　配有自动CO2检测控制系统的培养箱需要根据生产厂家的说明，定期做CO2浓度的测试和矫正。 　　CO2培养箱的隔热采用水套式和气套式两种类型。水套式需要用户在安装培养箱时培养箱壁的空间内灌入大量蒸馏水。由于水的比热容很高，水套式的优点是有助于均匀散热和避免形成冷区，以及在断电后能够比较好的减缓培养箱内温度的降低。　　目前大多数实验室都使用进口的细胞培养箱。虽然进口的产品质量上比较有保障，但价格很贵，而且售后服务不是很方便。　　CO2培养箱一般配一个水盘，用以维持很高的湿度。水盘内的水要定期添加，水盘也要定期清洗以避免微生物的生长。 　　为了减少微生物的污染，有一些CO2培养箱提供灭菌功能。有的可以加热到比较高的温度来灭菌，有的则通过让空气循环通过一个紫外线腔体的办法来灭菌，这样就灭菌时就不需要中断细胞的培养。