有谁用过快速制备、快速纯化系统,可否讲讲它的好处以及它的应用领域。谢谢!
公司(上海********有限公司)现有waters 质谱/UV 引导的自动纯化系统一套。该系统具备:沃特世AutoPurification系统可以同时与UV,RI,ELSD,PDA,MS等多种检测器并联,从而一针进样可以同时得到多种检测信号,获得更多更完整的信息。并可以其中任何一个或多个信号触发收集。大大提高分离纯化通量和纯度。这套系统设计可以用单一指令来切换最多5根色谱柱(3根分析柱,2根制备柱)。 结合沃特世最佳柱床优化设计的OBD制备柱,可以对复杂的中药进行高效分离,并获得最佳的柱寿命。系统优势■ 是目前市面上唯一一款能够实现从粗品分析到馏分收MS/ UV 引导的自动纯化制备系统(AutoPurification system)在TCM中的应用集再到馏分纯度再分析的全自动化过程的纯化系统,具有独立的分析及制备进样阀及管路,可实现完全自动化的复杂物质的分析方法开发,制备方法开发,馏分纯度分析的功能■ 该纯化系统的二元高压梯度溶剂泵,具有专利的11条梯度曲线功能(梯度曲线:11条包括1条线性,2条阶梯,4条凹线,4条凸线), 对于复杂化合物的分离,如中药等具有快速,高效分离的特点。且该泵具有完整的,自动的,可编程控制的泵密封冲洗程序,有效提高泵的使用性能■ 该系统标准配置分析方法到制备方法开发的计算器,可以实现从分析到制备的无忧放大,保证复杂化合物的制备效率■ 具备完全独立的纯化软件系统,能自动对色谱峰形进行切割、区分,同时可采用分子量及紫外光谱纯度,保留时间或模拟信号等设定多种触发模式进行收集设置http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109251936_319223_1929184_3.jpg
公司(上海************有限公司)沃特世AutoPurification 系统主要用于复杂基质中各种目标化合物的分析及制备。可以根据多种触发模式进行合成药,环境毒素,中药、天然产物、多肽等复杂基质组分的分离及纯化。众所周知中药成分复杂,采用传统分离制备方法,面临着上样量、分离度、回收率、分析到制备的无忧放大,高通量等多方面的挑战。沃特世AutoPurification系统可以同时与UV,RI,ELSD,PDA,MS等多种检测器并联,从而一针进样可以同时得到多种检测信号,获得更多更完整的信息。并可以其中任何一个或多个信号触发收集。大大提高分离纯化通量和纯度。这套系统设计可以用单一指令来切换最多5根色谱柱(3根分析柱,2根制备柱)。 结合沃特世最佳柱床优化设计的OBD制备柱,可以对复杂的中药进行高效分离,并获得最佳的柱寿命。系统优势■ 是目前市面上唯一一款能够实现从粗品分析到馏分收MS/ UV 引导的自动纯化制备系统(AutoPurification system)在TCM中的应用集再到馏分纯度再分析的全自动化过程的纯化系统,具有独立的分析及制备进样阀及管路,可实现完全自动化的复杂物质的分析方法开发,制备方法开发,馏分纯度分析的功能■ 该纯化系统的二元高压梯度溶剂泵,具有专利的11条梯度曲线功能(梯度曲线:11条包括1条线性,2条阶梯,4条凹线,4条凸线), 对于复杂化合物的分离,如中药等具有快速,高效分离的特点。且该泵具有完整的,自动的,可编程控制的泵密封冲洗程序,有效提高泵的使用性能■ 该系统标准配置分析方法到制备方法开发的计算器,可以实现从分析到制备的无忧放大,保证复杂化合物的制备效率■ 具备完全独立的纯化软件系统,能自动对色谱峰形进行切割、区分,同时可采用分子量及紫外光谱纯度,保留时间或模拟信号等设定多种触发模式进行收集设置http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/09/201109251941_319224_1929184_3.jpg
全自动层析分离纯化系统和制备液相是一样的吗?有什么区别?
[size=5]最近学校买了台天津博纳艾杰尔agela CHEETAHTM系列中压快速纯化制备系统,以前没用过此类制备色谱,请问哪问有CHEETAHTM使用说明啊?请多多指教![/size]
[font=宋体]链接:[/font]https://bbs.instrument.com.cn/topic/2112837问题描述:[font=宋体]膜分离系统应用澄清纯化技术-超[/font][font='Times New Roman','serif']/[/font][font=宋体]微滤膜系统及优点?[/font]解答:[font=宋体][color=black][back=white]澄清纯化分离所采用的膜主要是超[/back][/color][/font][color=black][back=white]/[/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]微滤膜,由于其所能截留的物质直径大小分布范围广,被广泛应用于固液分离、大小分子物质的分离、脱除色素、产品提纯、油水分离等工艺过程中。超[/back][/color][/font][color=black][back=white]/[/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]微滤膜分离可取代传统工艺中的自然沉降、板框过滤、真空转鼓、离心机分离、溶媒萃取、树脂提纯、活性炭脱色等工艺过程。澄清纯化技术可采用的膜分离组件主要有:陶瓷膜、平板膜、不锈钢膜、中空纤维膜、卷式膜、管式膜。[/back][/color][/font][font=宋体][color=black][back=white]采用膜分离澄清纯化的优点:[/back][/color][/font][color=black][back=white]a) [/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]可得到绝对的真溶液,产品稳定性好。[/back][/color][/font][color=black][back=white]b) [/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]过滤分离收率高。[/back][/color][/font][color=black][back=white]c) [/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]分离效果好,产品质量高,运行成本低。[/back][/color][/font][color=black][back=white]d) [/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]缩短生产周期,降低生产成本。[/back][/color][/font][color=black][back=white]e) [/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]过程无需添加化学药品、溶媒溶剂,不带入二次污染物质。[/back][/color][/font][color=black][back=white]f) [/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]操作简便,占地面积小,劳动力成本低。[/back][/color][/font][color=black][back=white]g) [/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]可拓展性好,容易实现工业化扩产需求。[/back][/color][/font][color=black][back=white]h) [/back][/color][font=宋体][color=black][back=white]设备可自动运行,稳定性好,维护方便。[/back][/color][/font]以上内容来自仪器信息网《样品前处理实战宝典》
[font=宋体]蛋白质纯化系统是一种用于从混合物中纯化目标蛋白的设备和方法。它结合了多种技术和步骤,可以有效地分离和纯化蛋白质,提供高纯度和高活性的目标蛋白。蛋白质纯化系统是实现蛋白质纯化的关键装置,它结合了各种分离、富集和纯化方法,帮助科研工作者实现蛋白质的高纯度提取。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白质纯化系统的基本原理[/b][/font][font=宋体]蛋白质纯化系统主要依据蛋白质的特性利用不同的物理化学方法进行分离和纯化。下面将介绍几种常见的蛋白质纯化系统的基本原理。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析[/b][/url][/font][/font][font=宋体]亲和层析是一种基于蛋白质的特异性与配体的亲和性相互作用来实现分离和纯化的方法。在亲和层析过程中,蛋白质溶液通过填充有配体的柱子,与配体结合形成复合物,而非特异性结合的其他组分被洗脱。最后,通过改变条件来破坏蛋白质与配体的结合,从而使得目标蛋白质得以纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②凝胶过滤层析[/font][font=宋体]凝胶过滤层析是一种基于蛋白质大小差异来进行分离的方法。在凝胶过滤层析中,待纯化的蛋白质溶液通过一系列的凝胶层析柱,大分子的蛋白质不能进入凝胶颗粒的内部,而小分子的蛋白质则可以进入凝胶颗粒内部。通过调整凝胶的孔径,可以实现对目标蛋白质的选择性分离和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析[/b][/url][/font][/font][font=宋体][font=宋体]离子交换层析是一种基于蛋白质与固定在柱子上的离子交换基的电荷相互作用来实现分离和纯化的方法。在离子交换层析中,蛋白质溶液通过带有离子交换基的柱子,与柱子上的离子交换基之间发生相互作用。通过改变溶液的离子浓度和[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值,可以实现对蛋白质的选择性吸附和洗脱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④逆流层析[/font][font=宋体]逆流层析是一种基于分子质量和电荷差异来实现蛋白质分离和纯化的方法。在逆流层析中,蛋白质溶液通过填充有逆流层析介质的柱子,溶液在反向流动的情况下通过层析柱。由于不同蛋白质之间的分子质量和电荷差异,它们在逆流层析介质中的移动速度不同,从而实现对蛋白质的分离和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白质纯化系统的应用[/b][/font][font=宋体]蛋白质纯化系统在生物医药领域有着广泛的应用,下面将介绍几个常见的应用场景。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①药物研发[/font][font=宋体]蛋白质纯化系统在药物研发中起到了非常重要的作用。通过蛋白质纯化系统,科研人员可以从复杂的生物样品中高效纯化出目标蛋白质,为药物研发提供了可靠的原料和工具。蛋白质纯化系统不仅可以提高药物研发的效率,还可以确保药物的纯度和质量,从而提高药物的疗效和安全性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②生物学研究[/font][font=宋体]在生物学研究中,蛋白质纯化系统被广泛应用于蛋白质相互作用研究、蛋白质结构解析和功能分析等方面。通过蛋白质纯化系统,科研人员可以从不同的细胞和组织中提取目标蛋白质,进一步研究它们之间的相互关系和作用机制。蛋白质纯化系统还可以用于蛋白质结构解析,帮助科学家揭示蛋白质的三维结构以及其功能。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③临床诊断[/font][font=宋体]蛋白质纯化系统在临床诊断中也起到了重要的作用。通过蛋白质纯化系统,医生可以从患者的生物样本中纯化出特定的蛋白质标志物,用于疾病早期诊断、病情监测和治疗评估等方面。蛋白质纯化系统在临床诊断中的应用可以帮助医生及早发现疾病,提高诊断的准确性和效率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质纯化系统是实现蛋白质纯化的重要装置,它结合了多种分离、富集和纯化方法,帮助科研人员高效地提取目标蛋白质。蛋白质纯化系统的应用广泛,不仅在药物研发、生物学研究和临床诊断等领域发挥重要作用,还为科学家揭开蛋白质的结构和功能提供了有力的支持。通过不断的技术创新和优化,蛋白质纯化系统将更好地满足科研和临床的需求,推动生物医药领域的发展。[/font][font=Calibri] [/font]
分离纯化:有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(Mixed culture)。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞,那么这个菌落称为纯培养(Pure culture)。在进行菌种鉴定时,所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化.
本人是新手,以前从未做过分离纯化。现在感觉很困难·····我是这样设计的,先用跑板的方法分离,刮下斑点后溶解制成样品液。下一步纯化的话该选用什么方法呢?我的预期目标是纯化成单一组分,主要想除去的是其中的蛋白质和盐分,烦请各位专业人士多提意见啊,谢谢~~
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=71345]优化反相HPLC纯化样品的回收率[/url]优化反相HPLC纯化样品的回收率在新药开发领域,研究人员面对成百上千的化合成化合物的纯化问题。本文着重讨论了如何在保持理想的纯度及回收率的情况下,快速进行HPLC纯化。并应用吉尔森分析/制备兼容HPLC系统达到样品的快速分离纯化
柱色谱分离纯化酶的一般操作程序
分离纯化酶时,采用硫酸铵分级沉降时,离心机转速高达12000rps/min沉淀也不易沉降,而且耗时较长,请问如何分离好?沉降速度如何提高?
蛋白质分离纯化鉴定包括蛋白质样品的基本处理注意事项,蛋白质分离纯化方法的基本原理和选择,纯化后蛋白质浓度及蛋白质基本性质的研究方法。 [URL=http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081009/1522386/]http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081009/1522386/[/URL]
[b]摘要[/b]羧酸类化合物尤其是苯甲酸类化合物是许多活性药物成分(Active Pharmaceutical Ingredients, API)的关键中间体,例如解热镇痛药物阿司匹林等,具有广泛的应用价值。使用传统硅胶作为固定相的色谱柱来分离纯化这类化合物是一大难题。SepaFlashC18反相柱结合快速液相制备色谱系统SepaBean machine具有良好的分离性能。本文利用SepaFlashC18反相柱分离并纯化了两种强极性的苯甲酸类化合物(结构式如图 1所示),结果表明混合物样品得到了很好的分离,为此类具有一定极性与亲水能力的化合物的快速分离纯化提供了一种经济实用的解决方案。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/ef626cec836f4fb3b96d55bd7021d780.png[/img][/align][align=center][b]图1. 两种苯甲酸类化合物[/b][/align][b]实验部分[/b]上述两种苯甲酸类化合物的混合物样品在普通硅胶柱上的分离效果较差,无法满足广大化学工作者对分离提纯的要求。常州三泰科技公司的SepaFlash Bonded Series C18 反相柱采用超纯无定型硅胶基质的填料 (参见表1),其特性能够满足对这类化合物进行分离纯化的要求。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/66929ca91fd4442bb491686bb06b3c3b.png[/img][/align][align=center][b]图2. 快速液相制备色谱系统SepaBeanTM machine[/b][/align][align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/f35b1f1075094b88975ab7e5a8635aa4.jpg[/img][/align]本文利用SepaFlashC18反相柱结合快速液相制备色谱系统SepaBeanTM machine(参见图2),对两种苯甲酸类化合物的混合物样品进行了快速分离纯化,实验参数参见表2。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/21d61f4e6cfa46ed8895e19874f4ec06_th.png[/img][/align][b]结果与讨论[/b]在规格为25 g的SepaFlashC18反相柱上对苯甲酸类化合物样品的分离图谱如图3所示。整个分离制备过程大约用时 0.5 h,仅消耗溶剂约500 ml,只需采用常规的梯度洗脱方法,样品最终获得了理想的保留时间及令人满意的分离效果。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/f66dee01c21c4f0780ebd6342ce73817_th.jpg[/img][/align][align=center][b]图3: 苯甲酸类化合物样品的快速分离制备图谱[/b][/align][b]关于SepaFlash Bonded Series C18反相柱系列产品[/b]SepaFlash Bonded Series C18反相柱系列产品具有多种规格(参见表3及图4)。另外,对于大多数强极性化合物,在一般反相色谱柱上不保留或者保留很弱,可以考虑更换为HILIC分离模式。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/9b9a70a87b504762a367e68e8cfbc061_th.png[/img][/align][align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/041c85ad3ea54c3f936680544875cb3d_th.png[/img][/align][align=center][b]图4. SepaFlash Bonded SeriesC18反相柱[/b][/align][b]关于SepaBean™ machine快速液相制备色谱系统[/b]SepaBean™ machine一款快速液相制备色谱系统,拥有国家专利保护。除了常规的分离纯化功能外,还具备强大的学习能力和数据共享功能,为科研工作者挑战更多更复杂的分离纯化难题助力。
各位好!我做实验要对紫杉醇发酵液进行分离纯化,请问用树脂怎样进行除杂?
常用分离纯化技术研究开发 1) 高效液相色谱填料和色谱柱2) 手性色谱固定相的制备与应用3) 手性药物及其中间体的拆分与转化4) 生物磁分离技术和产品5) 高通量分离纯化技术与装置6) 蛋白质组分析技术与产品7) 高效毛细管电泳分离分析技术 1) 高效液相色谱填料和色谱柱高效液相色谱法(HPLC)是六十年代末发展起来的化学分离分析方法。在这一方法中,微米级的多孔颗粒被用作固定相,而有机溶剂或水溶液被用作流动相。 样品溶液在高压泵的驱动下,流过装填固定相的色谱柱。 在流动过程中,化合物在流动相与固定相之间多次分配,由于分配系数的差异,化合物在固定相中的滞留时间有所不同,因此可利用HPLC来实现对混合物的分离。色谱柱是HPLC的核心部件,由不锈钢空管和填充其中的固定相组成。为了分离不同类型的化合物,一台HPLC通常需要配备若干不同类型的色谱柱。色谱柱又是实验室消耗品,因为它的使用寿命是一定的。样品污染,流动相侵蚀和柱结构变化等问题可能造成色谱柱的损坏。 因此,需要根据使用情况定期更换色谱柱。HPLC中使用的色谱柱种类繁多。 根据色谱填料表面功能团的特性,色谱柱可分成正相柱,反相柱,手性柱,离子交换柱,亲和柱等。而根据色谱柱的几何尺寸,色谱柱又可分成毛细管柱,微型柱,分析柱,半制备柱,制备柱等。使用反相柱的HPLC是目前所有色谱方法中应用最广泛的一种,在食品分析,药物分析,环境分析,药品质量控制,临床医疗诊断,天然产物活性成分鉴定和环境毒物监测等方面都有着广泛的应用。而制备型HPLC更是当前分离纯化手性药物,抗癌药物如紫杉醇,合成核酸,合成多肽,重组蛋白等生物分子的不可或缺的工具。近年来,制药工业尤其是生物制药工业在我国迅速发展,国家对药品质量管理的要求不断提高,这些因素决定了未来几年我国的高效液相色谱产品市场将进入一个高速扩张期。我国的液相色谱分离纯化产品的市场容量当在亿元人民币以上,而目前这一市场主要为安捷伦等外国公司所垄断。我们开展了以球型多孔硅胶为基质的HPLC色谱填料的合成研究,开发了具有自主知识产权的硅胶生产工艺路线,并对硅胶的硅烷化反应进行了系统研究,建立起制备反相液相色谱固定相的优化条件,由我们开发的技术所生产的球型多孔硅胶具有粒径分布均匀,孔径分布范围窄,比表面积可控,表面官能团浓度高和机械强度高等特点,完全能满足现代液相色谱的要求。在此基础上,我们又研究了高效液相色谱柱制备技术,优化了高压装柱法中匀浆液、顶替液的组成,所生产的色谱柱达到或超过了国外同类产品的性价比。欢迎国内企业来人来电洽谈合作,与名校携手,共同打造色谱产品的中国品牌。file:///C:\Users\我是发~1\AppData\Local\Temp\ksohtml\wps_clip_image-11116.png峰号 样品拖尾因子塔板数/米1 丙酮1.26678722对氯硝基苯1.08698843甲苯1.02717284萘1.0068072 *TOP*2) 手性色谱固定相的制备与应用手性在近十年来成为现代制药工业的主要关注点,这主要归因于人们日益增强的认识:外消旋体药物中的一对手性体可能具有不同的药理活性、药代动力学和药效学效应。一个异构体也许能产生所希望的治疗活性,而另一个则可能是无效的,甚至是有害的。最
请问那个公司,或者实验室能够对手性化合物2—甲基丁酸乙酯进行分离纯化?R/S构型各需要1毫升。拜托拜托????
实验目的:研究化合物合成反应监测及分离纯化一般步骤。一、监测合成反应TLC-MS检测,确定是否有合成产物:1、将待测样品通过硅胶板爬板分开。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212000_562106_2307604_3.png(其实板爬的不歪,只是照片上有点歪,截完图就成这样了。)2、利用TLC-MS仪器快速检测TLC板的两个点,确定目标物。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212002_562107_2307604_3.png点1质谱检测图谱:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212106_562110_2307604_3.png点2质谱检测图谱:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212111_562115_2307604_3.png结论:经TLC-MS检测,合成反应有效,点2中含有分子量432的目标物,点1为原料。二:液相分析由于目标物极性较小,液相分析色谱柱选用C18色谱柱保留太强,因此选用保留稍弱的C8色谱柱。色谱条件如下:色谱柱: C8 5 μm 100 Å 4.6*250 mm流动相:A:水 B:乙醇流速:1.0 mL/min检测器:ELSD,65℃梯度:TimeB%0752510035100原样分析图谱:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212115_562117_2307604_3.png27.448min峰为目标峰三、分离纯化:经测试:硅胶柱纯化条件不能把目标物前21-26 min杂质分离除去,C8柱纯化条件不能将26.1 min和27.9 min杂质分离除去。因此最终方案选用C18色谱柱,以甲醇和二氯甲烷为流动相,达到了很好的分离效果。纯化条件如下: 色谱柱:C18 10 μm 100 Å 30*250 mm 流动相:A:甲醇 B:二氯甲烷 流速:35 mL/min 紫外波长:210 nm(红色信号线) ELSD:65℃(浅蓝色信号线) 梯度:TimeB%053035 进样量:300 mg(10mL甲醇溶解) 分流: 流动相进紫外检测器与蒸发光散射检测器的分流比为34.5:0.5 制备图谱如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212116_562118_2307604_3.png馏分收集:收集10.3-11.7 min和21.3-23.4 min馏分四、纯度检测(条件为液相分析条件):1、 10.3-11.7 min馏分:取200 uL馏分,氮吹干,加200 uL甲醇溶解,进样10 uL检测,检测结果如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212117_562119_2307604_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212118_562120_2307604_3.png2、 21.3-23.4 min馏分:取200 uL馏分,氮吹干,加100 uL甲醇溶解,进样10 uL检测,检测结果如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212119_562121_2307604_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508212119_562122_2307604_3.png结论:1、合成反应可以利用TLC-MS设备快速监测合成反应成功与否。2、根据待分离样品的极性和硅胶板上的保留,选择合适的填料和流动相,摸索纯化条件。五、总结:1、合成反应可以利用TLC-MS设备快速监测合成反应成功与否。2、根据待分离样品的极性和硅胶板上的保留,选择合适的填料和流动相,摸索纯化条件。六、实验心得:1、利用TLC-MS检测仪,直接检测TLC板上的样品点,不需要将硅胶板上的点刮下来再处理后扫质谱。2、部分极性较小的样品可以用C18色谱柱,配二氯甲烷等弱极性试剂作为流动相进行分析或纯化。3、对于紫外吸收弱的样品,可并联蒸发光散射检测器,由于ELSD为分析型检测器,在大流速制备情况下,需要调节分流比,ELSD的分流速不能高于0.5 mL/min,以防检测器过载。4、制备条件下,由于并联检测器分流比差别大,且检测过程耗时不同,两个检测器在图谱中出现信号的时间就会有差异。这时需要提前判断两个信号的相对延迟时间,通常以流速大的紫外信号作为收集信号。5、紫外下吸收很弱的样品,放大到制备,加大上样量后,紫外下也会有吸收,也可作为制备收集的信号。6、当制备馏分溶剂为弱极性溶剂时,而检测条件的流动相为较强极性流动相,或存在溶剂不互溶问题,需要将制备馏分浓缩干,再用接近检测条件流动相极性的溶剂溶解,进行分析,避免溶剂效应。
本人想购买一台做大分子分离纯化的设备,要求是要分离效果好,也不知道什么仪器合适,想请大家给给意见,谢谢
[color=red]Vip用户 yuji760823 在 分离/纯化/萃取版 被 禁止发帖 5 天,被封原因:广告。系统将会在 2010-5-29 自动解封,如有什么意见,请在投诉建议版投诉,特此通告!! --------仪器论坛管理员[/color]
蛋白质分离纯化鉴定包括蛋白质样品的基本处理注意事项,蛋白质分离纯化方法的基本原理和选择,纯化后蛋白质浓度及蛋白质基本性质的研究方法。非常适合刚接触蛋白质研究的版友。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=111671]蛋白质的分离与纯化[/url]
各位好!我做实验要对紫杉醇发酵液进行分离纯化,请问用树脂怎样进行除杂?
具体的方法随各中草药的性质不同而异,以后将通过实例加以叙述,此处只作一般原则性的讨论。 (一)溶剂分离法:一般是将上述总提取物,选用三、四种不同极性的溶剂,由低极性到高极性分步进行提取分离。水浸膏或乙醇浸膏常常为胶伏物,难以均匀分散在低极性溶剂中,故不能提取完全,可拌人适量惰性填充剂,如硅藻土或纤维粉等,然后低温或自然干燥,粉碎后,再以选用溶剂依次提取,使总提取物中各组成成分,依其在不同极性溶剂中溶解度的差异而得到分离。例如粉防己乙醇浸膏,碱化后可利用乙醚溶出脂溶性生物碱,再以冷苯处理溶出粉防己碱,与其结构类似的防己诺林碱比前者少一甲基而有一酚羟基,不溶于冷苯而得以分离。利用中草药化学成分,在不同极性溶剂中的溶解度进行分离纯化,是最常用的方法。 广而言之,自中草药提取溶液中加入另一种溶剂,析出其中某种或某些成分,或析出其杂质,也是一种溶剂分离的方法。中草药的水提液中常含有树胶、粘液质、蛋白质、糊化淀粉等,可以加入一定量的乙醇,使这些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出,而达到与其它成分分离的目的。例如自中草药提取液中除去这些杂质,或自白及水提取液中获得白及胶,可采用加乙醇沉淀法;自新鲜括楼根汁中制取天花粉素,可滴人丙酮使分次沉淀析出。目前,提取多糖及多肽类化合物,多采用水溶解、浓缩、加乙醇或丙酮析出的办法。 此外,也可利用其某些成分能在酸或碱中溶解,又在加碱或加酸变更溶液的pH后,成不溶物而析出以达到分离。例如内酯类化合物不溶于水,但遇碱开环生成羧酸盐溶于水,再加酸酸化,又重新形成内酯环从溶液中析出,从而与其它杂质分离;生物碱一般不溶于水,遇酸生成生物碱盐而溶于水,再加碱碱化,又重新生成游离生物碱。这些化合物可以利用与水不相混溶的有机溶剂进行萃取分离。一般中草药总提取物用酸水、碱水先后处理,可以分为三部分:溶于酸水的为碱性成分(如生物碱),溶于碱水的为酸性成分(如有机酸),酸、碱均不溶的为中性成分(如甾醇)。还可利用不同酸、碱度进一步分离,如酸性化台物可以分为强酸性、弱酸性和酷热酚性三种,它们分别溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠,借此可进行分离。有些总生物碱,如长春花生物碱、石蒜生物碱,可利用不同rH值进行分离。但有些特殊情况,如酚性生物碱紫董定碱(corydine)在氢氧化钠溶液中仍能为乙醚抽出,蝙蝠葛碱(dauricins)在乙醚溶液中能为氢氧化钠溶液抽出,而溶于氯仿溶液中则不能被氢氧化钠溶液抽出;有些生物碱的盐类,如四氢掌叶防己碱盐酸盐在水溶液中仍能为氯仿抽出。这些性质均有助于各化合物的分离纯化。 (二)两相溶剂萃取法: 1.萃取法:两相溶剂提取又简称萃取法,是利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。萃取时如果各成分在两相溶剂中分配系数相差越大,则分离效率越高、如果在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质,一般多用亲脂性有机溶剂,如苯、氯仿或乙醚进行两相萃取,如果有效成分是偏于亲水性的物质,在亲脂性溶剂中难溶解,就需要改用弱亲脂性的溶剂,例如乙酸乙酯、丁醇等。还可以在氯仿、乙醚中加入适量乙醇或甲醇以增大其亲水性。提取黄酮类成分时,多用乙酸乙脂和水的两相萃取。提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。不过,一般有机溶剂亲水性越大,与水作两相萃取的效果就越不好,因为能使较多的亲水性杂质伴随而出,对有效成分进一步精制影响很大。 两相溶剂萃取在操作中还要注意以下几点: 1)先用小试管猛烈振摇约1分钟,观察萃取后二液层分层现象。如果容易产生乳化,大量提取时要避免猛烈振摇,可延长萃取时间。如碰到乳化现象,可将乳化层分出,再用新溶剂萃取;或将乳化层抽滤,或将乳化层稍稍加热;或较长时间放置并不时旋转,令其自然分层。乳化现象较严重时,可以采用二相溶剂逆流连续萃取装置。 2) 水提取液的浓度最好在比重1.1~1.2之间,过稀则溶剂用量太大,影响操作。 3) 溶剂与水溶液应保持一定量的比例,第一次提取时,溶剂要多一些,一般为水提取液的1/3,以后的用量可以少一些,一般1/4-1/6。 4)一般萃取3~4次即可。但亲水性较大的成分不易转入有机溶剂层时,须增加萃取次数,或改变萃取溶剂。 萃取法所用设备,如为小量萃取,可在分液漏斗中进行;如系中量萃取,可在较大的适当的下口瓶中进行。在工业生产中大量萃取,多在密闭萃取罐内进行,用搅拌机搅拌一定时间,使二液充分混合,再放置令其分层;有时将两相溶液喷雾混含,以增大萃取接触,提高萃取效率,也可采用二相溶剂逆流连续萃取装置。 2.逆流连续萃取法:是一种连续的两相溶剂萃取法。其装置可具有一根、数根或更多的萃取管。管内用小瓷圈或小的不锈钢丝圈填充,以增加两相溶剂萃取时的接触面。例如用氯仿从川楝树皮的水浸液中萃取川楝素。将氯仿盛于萃取管内,而比重小于氯仿的水提取浓缩液贮于高位容器内,开启活塞,则水浸液在高位压力下流入萃取管,遇瓷圈撞击而分散成细粒,使与氯仿接触面增大,萃取就比较完全。如果一种中草药的水浸液需要用比水轻的苯、乙酸乙酯等进行萃取,则需将水提浓缩液装在萃取管内,而苯、乙酸乙酯贮于高位容器内。萃取是否完全,可取样品用薄层层析、纸层析及显色反应或沉淀反应进行检查。 3.逆流分配法(CounterCurrentDistribution,CCD):逆流分配法又称逆流分溶法、逆流分布法或反流分布法。逆流分配法与两相溶剂逆流萃取法原理一致,但加样量一定,并不断在一定容量的两相溶剂中,经多次移位萃取分配而达到混合物的分离。本法所采用的逆流分布仪是由若干乃至数百只管子组成。若无此仪器,小量萃取时可用分液漏斗代替。预先选择对混合物分离效果较好,即分配系数差异大的两种不相混溶的溶剂。并参考分配层析的行为分析推断和选用溶剂系统,通过试验测知要经多少次的萃取移位而达到真正的分离。逆流分配法对于分离具有非常相似性质的混合物,往往可以取得良好的效果。但操作时间长,萃取管易因机械振荡而损坏,消耗溶剂亦多,应用上常受到一定限制。 4.液滴逆流分配法:液滴逆流分配法又称液滴逆流层析法。为近年来在逆流分配法基础上改进的两相溶剂萃取法。。对溶剂系统的选择基本同逆流分配法,但要求能在短时间内分离成两相,并可生成有效的液滴。由于移动相形成液滴,在细的分配萃取管中与固定相有效地接触、摩擦不断形成新的表面,促进溶质在两相溶剂中的分配,故其分离效果往往比逆流分配法好。且不会产生乳化现象,用氮气压驱动移动相,被分离物质不会因遇大气中氧气而氧化。本法必须选用能生成液滴的溶剂系统,且对高分子化合物的分离效果较差,处理样品量小(1克以下),并要有一定设备。应用液滴逆流分配法曾有效地分离多种微量成分如柴胡皂甙原小檗碱型季铵碱等。液滴逆流分配法的装置,近年来虽不断在改进,但装置和操作较繁。目前,对适用于逆流分配法进行分离的成分,可采用两相溶剂逆流连续萃取装置或分配柱层析法进行。
[color=#231815]双水相萃取技术在分离、纯化中的应用[/color][color=#231815][color=#333333]双水相技术是一种新型的液-液萃取技术,由于其条件温和、易操作等特点,目前已广泛应用于物质的分离、纯化。本文综述了双水相形成原理、工艺流程和特点、体系类别、影响双水相分配的因素及其在分离纯化中的应用,并针对其未来发展趋势进行了展望。[/color][/color]
溶剂纯化系统http://www.zhonghuida.com/imageRepository/367772f9-d0a6-4513-ad18-97358b20c4ff.png产品特点 新型醇和胺类溶剂干燥柱及过滤设计 各种配置和尺寸 取代传统热蒸馏除水方法 完全避免蒸汽间交叉污染 可隔绝空气提取超干燥和无氧溶剂 可同时接收所有溶剂 顶部空出通风位置 可集成手套箱 带可移动支架及阻燃柜 标准 5 加仑溶剂储存罐采用惯用的防泄漏螺 旋盖子和 Swagelok 快速拆卸阀,便于操作和溶剂续装。系统通过一个可伸缩夹子接地,防止静电危害,保证安全操作环境。系统纯化柱处理容量为 800L,柱子可以再生或者更换。可选择台式、可移动式和固定式几种型号。http://www.zhonghuida.com/imageRepository/67eb511e-fa32-476d-aea6-601ddeaa72e9.gif 在低氮压力下,溶剂从储液罐中被迫进入分别装有活性铝(activated alumina)及铜(Copper)的纯化圆管进行除氧脱水,并通过过滤器除去微小颗粒。处理后的溶剂会排到已抽真空并被氮洗涤过的玻璃器皿中。 每种溶剂包含两条纯化圆管,不锈钢,经压力测试,可净化800升溶剂(再生程序需要之前)。技术参数材料框架材料:铝 处理方法:阳极化抛光 管件材料:304 不锈钢接头和阀门:Swagelok 不锈钢泄漏率氦质谱仪法未检测到有泄漏分配器不锈钢 24/40-14/20-29/24-Luer Lock 针型阀通风可选排风管气体参数内部气体压力:5 PSI 惰性气体:N2 – Ar 气体连接:只需一个气体供应点,可同时分配给不同溶剂纯化柱参数纯化柱材料:依溶剂不同而不同微粒过滤:纯化柱配备 7micron 不锈钢微粒过滤器净化能力:吸水能力为 5%重量含量 最终水氧含量水平:低PPM 级可净化溶剂芳香和脂肪族碳氢化合物:戊烷,己烷,环己烷,正庚烷,甲苯,苯 醚类:乙醚,四氢呋喃,二甲醚 含氯溶剂:二氯甲烷,氯仿,氯苯 胺类溶剂:三乙胺,吡啶,二异丙基乙基胺 醇:甲醇,乙醇其他通用溶剂:乙腈,DMF,DMSO,丙酮 其他定制溶剂阀门导向阀门:每种溶剂皆有 五通阀门以控制溶剂、气体和真空 安全阀门:歧管在外露铝质框架内,包含真空显示表,调节器及安全阀,避免玻璃器皿过分受压计量阀门:利用 计量阀门来控制输出流量 对比内容 传统蒸馏新型溶剂纯化系统纯化结果(正己烷中的水)20PPM1PPm使用安全性需要加热沸腾,有危险无须加热,密闭安全使用便利性较复杂简便,易掌握纯化所需时间几小时几分钟综合使用成本较高较低
本文旨在介绍蛋白表达试验中分离纯化的处理策略,注意事项以及纯化方法等,并附有纯化案例介绍。
分离纯化谷物β-葡聚糖一般用什么阴离子交换色谱柱和凝胶过滤色谱柱哇
[color=#231815]生物活性蛋白质分离纯化技术研究进展[/color][color=#231815][color=#333333]生物体是天然活性蛋白质的宝库,近年来,越来越多具有生物活性的蛋白质被发现和研究,在生物制药、营养食品等方面具有广阔的应用前景。然而,分离纯化的技术与策略将影响天然蛋白的活性与功能,以及相关的经济效益。基于目前研究现状,对生物活性蛋白质的分离纯化技术进行了综述。 [/color][/color]
高效液相色谱法对金黄色葡萄球菌肠毒素B的快速分离纯化与检测 以金黄色葡萄球菌肠毒素为代表的一类蛋白质可以导致人类及其他灵长类动物的呕吐和腹泻,本实验开发了一种两步高效液相色谱法快速纯化金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的方法,首先将无菌的滤液通过反相色谱柱进行吸附,通过一个梯度洗脱的溶剂系统获得SEB,首先采用含有醋酸铵的乙腈水溶液洗脱,然后再用三氟乙酸(TFA)水溶液洗脱,以除去其他杂质。随后用含有TFA的乙腈水溶液将吸附的SEB洗脱下来。样品再经过阳离子交换色谱柱进行纯化。本方法可以得到初始滤液中40%-50%的SEB,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳分离免疫印迹法分析表明,经HPLC纯化的SBE免疫性质和生化性质同标准的SEB相似。 金黄色葡萄球菌肠毒素为金黄色葡萄球菌的某些菌株产生的一类蛋白质,能引起人类及其他灵长类动物的食物中毒反应,症状以呕吐和腹泻为主。根据血清特异性抗体反应将他们分为几类:金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA),SEB,SEC,SED,SEE等9个型。除了能引起食物中毒,还有超抗原作用,能够提高内毒素休克的风险。SEA,SEB,SEC这三种毒素的理化性质(包括分子大小,碱基序列,基本结构)已经被广泛研究。金黄色葡萄球菌肠毒素具有相似的结构,具有单个多肽链和一个二硫键。 文献中金黄色葡萄球菌肠毒素的纯化一般是阳离子交换色谱与凝胶色谱交替使用的多步骤过程。这些步骤主要用于色谱或电泳中纯毒素单个蛋白质分析,对于金黄色葡萄球菌肠毒素分子模式的了解对于我们了解其在发病中的作用非常重要。这些结构与功能的研究也为我们更加简单和快速的纯化和分析毒素提供了参考。材料和方法:金黄色葡萄球菌株S6的培养粗滤液作为SEB的初始来源,菌株S6是SEB的高产菌株。菌株在1L的培养液(包含有1%的蛋白胨,0.5%的酵母提取物,0.5%的NaCI)中培养,并于37℃条件下摇床培养24小时。通过离心(6000转/min,30min)获得除菌后的培养液,然后经过0.45um滤膜过滤得到滤液。色谱条件:分析性高效液相:安捷伦液相1200,菲罗门液相色谱柱4.6﹡150﹡5u,流速:0.8ml/min,进样量1ml,http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409301407_516501_2206222_3.png制备型高效液相:大连依利特,色谱柱SinoChrom ODS-AP ,10μm20*250mm;流速:20ml/min;制备型阳离子色谱柱为TSK-GELG3000SWXL5μm,7.8×300m流动相A:0.01 M醋酸铵pH值=5.5;;流动相B为乙腈;流动相C为0.1%三氟乙酸(TFA);流动相D为乙腈含有0.1%TFA。试剂均为色谱纯。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409301408_516502_2206222_3.png制备色谱图如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409301409_516503_2206222_3.jpg制备第二步:制备型阳离子色谱柱为TSK-GELG3000SWXL5μm,7.8×300mhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409301410_516505_2206222_3.png制备色谱图如下:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/09/201409301409_516504_2206222_3.jpg纯化后的样品于12%聚丙烯酰胺-SDS凝胶中进行电泳,电泳后进行染色或蛋白质印迹分析结果与讨论:本试验探索出一条高效液相色谱法对金黄色葡萄球菌肠毒素B的分离纯化方法,效果明显。
[color=#333333]该文建立了大孔树脂-高速逆流色谱分离中药材地黄中有效成分毛蕊花糖苷的方法。考察了4种大孔树脂对地黄粗提物中毛蕊花糖苷的静态吸附与解吸情况,其中D101大孔树脂对目标成分的吸附率与解吸率最理想,实验结果表明体积分数为10%的乙醇洗脱得到的毛蕊花糖苷含量最高,目标成分含量从4.9%提高到32.6%。最后,部分纯化的样品(165 mg)采用高速逆流色谱进一步纯化,两相溶剂系统由乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶4∶5,v/v/v)组成,分离得到45 mg纯度为96%的毛蕊花糖苷。 [/color]