蛋白质测定仪是根据蛋白质中氮的含量恒定的原理,通过测定样品中氮的含量从而计算蛋白质含量的仪器但是实际中怎么操作呢?
食品中蛋白质测定仪是一种用于快速准确地测量食品中蛋白质含量的设备。以下是关于食品中蛋白质测定仪的一些详细信息: 一、工作原理 食品中蛋白质测定仪的工作原理通常基于蛋白质与某些化学试剂反应产生颜色变化,通过测定颜色的强度来计算蛋白质的含量。常用的化学试剂有比色法、尿素法、低丙酮酸法等。其中,比色法是一种常用的蛋白质测定方法,其原理是利用蛋白质与双糖试剂反应生成紫色化合物,通过比色法测定紫色化合物的吸光度来计算蛋白质的含量。 二、应用领域 1. 食品生产、加工、流通等环节:蛋白质测定仪可以用于检测食品的质量,确保食品符合国家食品安全标准。 2. 食品安全监管:蛋白质测定仪可以用于检测食品中的农药残留、重金属含量等食品安全指标,为食品安全监管提供准确的数据支持。 3. 科学研究:蛋白质是生命活动的基本物质,对生命科学的研究具有重要意义。蛋白质测定仪可以用于研究食品中的蛋白质结构、功能以及与其他物质的相互作用等,为生命科学研究提供重要的数据支持。 4. 教学实验:在高校和科研机构中,蛋白质测定仪可以用于教学实验和研究工作。 三、使用方法 使用蛋白质测定仪进行蛋白质含量的测定通常包括以下步骤: 1. 样品准备:取一定量的食品样品,按照仪器说明书的要求进行前处理,如稀释、过滤等。 2. 试剂添加:向样品中加入适量的化学试剂,使其与蛋白质发生反应。 3. 反应与测定:等待一定时间,使反应充分进行,然后使用蛋白质测定仪测定反应液的颜色强度。 4. 结果计算:根据仪器测定的颜色强度,结合标准曲线或公式,计算出样品中的蛋白质含量。 需要注意的是,不同的蛋白质测定仪可能具有不同的操作方法和要求,因此在使用前需要仔细阅读仪器说明书,并按照说明书的要求进行操作。 四、注意事项 1. 仪器应放置在干燥、通风、无尘的环境中,避免阳光直射和强烈震动。 2. 在使用前应对仪器进行预热和校准,确保仪器的准确性和稳定性。 3. 在操作过程中应注意安全,避免试剂溅出或吸入有害气体。 4. 定期对仪器进行维护和保养,如清洗、更换试剂等,以保证仪器的正常运行和延长使用寿命。
食品中蛋白质测定仪的优点主要取决于其技术类型、精度、使用便捷性等因素。以下是针对食品中蛋白质测定仪的一般性优点分析: 优点: 快速性:蛋白质测定仪能在短时间内完成大量样品的检测,大大提高了检测效率,适用于食品生产线上快速、连续的蛋白质含量测定。 准确性:采用先进的检测技术,如光谱技术、化学分析方法等,能够确保测量结果的准确性和可靠性。 操作简单:仪器操作简单易用,用户只需按照说明书进行操作即可完成检测,降低了操作难度和人工成本。 应用广泛:适用于各类食品中蛋白质含量的检测,如乳制品、肉制品、豆制品等,具有广泛的应用前景。 自动化程度高:部分蛋白质测定仪具有自动化功能,能够自动完成样品的处理、检测和数据分析,提高了工作效率和准确性。
食品中蛋白质含量测定仪的优点主要体现在以下几个方面: 检测速度快:能够在短时间内完成大量样品的检测,大大提高了检测效率,使食品生产厂家能够快速获取检测结果,及时调整生产策略。 操作简单:仪器操作简单易用,用户只需按照说明书进行操作即可完成检测,无需复杂的操作步骤和专业技能,降低了操作难度。 准确度高:采用先进的检测技术,如光谱技术、化学分析方法等,能够确保测量结果的准确性和可靠性,为食品生产厂家提供准确的数据支持。 应用广泛:适用于各类食品中蛋白质含量的检测,如乳制品、肉制品、豆制品等,满足了不同食品生产厂家的检测需求。 安全性高:使用食品中蛋白质含量测定仪可以避免直接接触样品,降低了交叉感染的风险,保障了检测人员的安全。 智能化程度高:一些先进的食品中蛋白质含量测定仪还采用了安卓智能操作系统,具有网线连接、Wi-Fi联网上传、GPRS无线远传等功能,可以快速上传数据,实现远程监控和管理。 稳定性强:仪器具有稳定的工作性能和较长的使用寿命,保证了长期使用的可靠性。 综上所述,食品中蛋白质含量测定仪具有检测速度快、操作简单、准确度高、应用广泛、安全性高、智能化程度高和稳定性强等优点,为食品生产和质量控制提供了有力的支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405151149314403_9648_4214615_3.jpg!w690x690.jpg[/img]
食品中蛋白质含量测定仪是用于快速、准确地测量食品中蛋白质含量的专业仪器。这种仪器基于各种化学或物理方法,如凯氏定氮法、双缩脲法、考马斯亮蓝法(Bradford法)或紫外分光光度法等,来测定食品中蛋白质的含量。 以下是关于食品中蛋白质含量测定仪的一些详细信息: 工作原理 凯氏定氮法:这是一种经典的蛋白质测定方法。样品中的蛋白质在催化剂的作用下与硫酸共热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以换算系数,即可计算出样品的蛋白质含量。 双缩脲法:在碱性溶液中,双缩脲(尿素加热至180℃左右生成的二聚体)与铜离子形成紫色络合物,该络合物的颜色深浅与蛋白质含量成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关,故可用来测定蛋白质含量。 考马斯亮蓝法(Bradford法):考马斯亮蓝G-250染料在酸性溶液中与蛋白质结合后,在595nm处有最大光吸收,其光吸收值与蛋白质含量成正比。因此,可用于蛋白质的定量测定。 紫外分光光度法:蛋白质中常含有酪氨酸、色氨酸等苯环结构,在280nm的紫外波段有较强的吸收峰,其吸光度与蛋白质含量成正比。这种方法操作简单、快速,但灵敏度较低,只适合测定蛋白质含量较高的样品。 应用领域 食品质量检测:蛋白质是食品中的重要营养成分,其含量是评价食品质量的重要指标之一。食品中蛋白质含量测定仪可用于检测各类食品(如肉类、奶类、蛋类、豆类、谷物等)中的蛋白质含量,为食品质量检测提供数据支持。 食品科学研究:在食品科学研究中,蛋白质含量测定仪可用于分析不同食品原料、加工工艺对蛋白质含量的影响,以及蛋白质在食品加工过程中的变化等。 注意事项 在使用蛋白质含量测定仪进行测试之前,需要仔细阅读产品说明书,了解仪器的使用方法、操作步骤及注意事项。 确保样品准备过程符合标准要求,避免样品污染或损坏导致检测结果不准确。 定期对仪器进行维护和校准,确保检测结果的准确性和可靠性。 在使用过程中注意安全防护措施,避免对人体造成伤害或对环境造成污染。 总之,食品中蛋白质含量测定仪是食品检测领域的重要工具之一,能够快速、准确地测定食品中的蛋白质含量,为食品质量控制和科学研究提供有力支持。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405151126410832_3840_4214615_3.jpg!w690x690.jpg[/img]
我想问一下,KDN-04蛋白质测定仪蒸馏时,打开电源后蒸炉自动进水是从自来水管道进的还是从蒸馏水管道进的?主要是我原理没弄清,资料上说是,自动进水后打开自来水管,意思是蒸炉内的水是从蒸馏水管道进的吗?有哪位前辈知道吗?急!谢谢了!
请教各位大家谁有FOSS2300蛋白测定仪 自校准方法?检定校准机器测定蛋白质含量的准确性怎么样,用什么方法做?
公司有部分产品是冻干品,主要成分是蛋白质。想用库伦滴定法测冻干品的水分,用的仪器是卡尔费休水分测定仪。之前是用甲醇溶解的,发现有点溶解不完全,不知道哪位高手有没有类似经历,用的是什么试剂复溶冻干品比较好呢?尽可能不要破坏蛋白质
尊敬的专家先生: “近红外成份测定仪”这类仪器能否测定牧草(例如紫花苜蓿)中的蛋白质、脂肪等成份的含量?谢谢!
[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/11/202311090941436921_4317_5604214_3.png!w690x690.jpg[/img] 特点 1. 快速准确:食品蛋白质检测仪采用先进的测试方法,可以快速准确地检测出各类食品中的蛋白质含量。 2. 操作简便:食品蛋白质检测仪具有友好的操作界面和简单的操作步骤,使得操作更加简便易行。 3. 智能化:食品蛋白质检测仪具有智能化的特点,可以自动识别样品类型并给出相应的测试结果,无需人工干预。 4. 高精度:食品蛋白质检测仪采用高精度的传感器和测试方法,可以获得更加准确的结果。 5. 多功能:食品蛋白质检测仪不仅可以用于检测各类食品中的蛋白质含量,还可以用于检测其他营养成分的含量,如脂肪、糖等。 6. 便携式:食品蛋白质检测仪采用便携式设计,方便携带和移动,可以随时随地使用。 7. 安全可靠:食品蛋白质检测仪采用安全可靠的技术和材料,符合相关标准和法规要求,可以保证测试结果的安全性和可靠性。 总之,食品蛋白质检测仪具有广泛的应用范围和特点,可以快速准确地检测出各类食品中的蛋白质含量,为消费者和生产者提供可靠的参考依据。
[color=#444444]现在有两个方法:[/color][color=#444444]GB/T 5413.1-1997,[/color][color=#444444]主要用于婴儿配方食品和乳制品中蛋白质的测定;[/color][color=#444444] GB5009.5-2003,[/color][color=#444444]主要用于食品中蛋白质的测定。都用凯氏定氮法,但是最后计算公式有差异。[/color][color=#444444]5413:蛋白质含量=[u] (V-V0)* C(H+)*2* 0.014 *F [/u] * 100[/color][color=#444444] m* 25/1005009:蛋白质含量=[u] (V1-V2)* C* 0.014 *F [/u] * 100[/color][color=#444444] m* 10/100[/color][color=#444444]折算下来,5413 乘的系数是 8,而5009乘的系数为10。搞不懂了?为啥会这样?[/color][color=#444444][/color][color=#444444]究竟用两种方法测出的奶粉的蛋白质,会不会有很大差异呢?[/color]
[font=宋体][font=宋体]蛋白质浓度测定的各种方法及原理是生物化学和分子生物学实验中的重要环节。蛋白质浓度的准确测定对于研究生物分子相互作用、蛋白质功能和动力学、以及生物样品的分析和鉴定等方面都具有重要的意义。本文将介绍几种常用的蛋白质浓度测定方法及其原理,包括紫外吸收法、微量凯氏定氮法、双缩尿法、[/font][font=Calibri]Lowry [/font][font=宋体]法和考马斯亮蓝法等。通过对这些方法的比较和分析,可以更好地了解它们的优缺点,以便根据实际实验需求选择合适的方法来测定蛋白质浓度。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]①紫外吸收法[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]检测原理:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共扼双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在[/font][font=Calibri]280nm[/font][font=宋体]处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。此外,蛋白质溶液在[/font][font=Calibri]238nm[/font][font=宋体]的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下,蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系,进行蛋白质含量的测定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]方法特点:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点:简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后仍能回收使用。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点:测定蛋白质含量的准确度较差,干扰物质多。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]干扰物:含有嘌呤、嘧啶、核酸等吸收紫外光的物质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检出限:[/font][font=Calibri]50~100ug[/font][font=宋体]蛋白含量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]适用范围:适于用测定与标准蛋白质氨基酸组成相似的蛋白质。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②微量凯氏定氮法[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]凯氏定氮法被国内外视为蛋白质含量的标准检验方法,可作为衡量其他蛋白质含量检测方法准确性的标准。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]实验原理:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]样品与浓硫酸共热,含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]方法特点:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点:通用性强,测定费用低,易实现,仪器简单且测定结果的重复性和重现性好。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点:实验耗时长、灵敏度低。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检出限:[/font][font=Calibri]0.2~1mg[/font][font=宋体]蛋白含量。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]适用范围:凯氏定氮法测的是总蛋白的量,一些非蛋白氮无法检测出。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]③双缩尿法[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]实验原理:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]双缩尿([/font][font=Calibri]NH3CONHCONH3[/font][font=宋体])是两个分子经[/font][font=Calibri]180[/font][font=宋体]℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱溶液中,双缩尿与[/font][font=Calibri]CuSO4[/font][font=宋体]形成紫色络合物,称为双缩尿反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽链,或能过一个中间碳原子相连的肽键,这类化合物都有双缩尿反应。紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,与蛋白质分子量及氨基酸成分无关。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]方法特点:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点:适合检测总蛋白质的含量,操作简单、测量速度快。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点:标准物质必须使用代表性很强的样品,需使用其他参考方法测出标准物质中的蛋白质总含量,故测定工作费力费时。不宜测定样品种类多、彼此差异大的样品。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检出限:测定蛋白质含量测定范围为[/font][font=Calibri]1-20mg[/font][font=宋体]蛋白质。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]干扰物:硫酸铵、[/font][font=Calibri]Tris[/font][font=宋体]缓冲液和某些氨基酸等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]适用范围:常用于需要快速,但并不需要十分精确的蛋白质测定。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]④[/font][font=Calibri]Lowry [/font][font=宋体]法[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]Lowry [/font][font=宋体]法是双缩脲法的发展,结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应,是最灵敏的蛋白质测定方法之一,在生物化学领域得到广泛的应用,目前分为基本法和改良简易法,改良简易法可获得与基本法相近的结果。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]基本法实验原理:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]显色原理与双缩尿法相同,但加入了[/font][font=Calibri]Folin-[/font][font=宋体]酚酞试剂,以增加显色量,从而提高检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是:①在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。②[/font][font=Calibri]Folin[/font][font=宋体]一酚试剂中的磷钼酸盐一磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深兰色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正比。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特点:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]优点:灵敏度高。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点:耗费时间长,操作时间需精准控制,标准曲线绘制麻烦,专一性较差,干扰物质比较多。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检出限:可检测的最低蛋白质量达[/font][font=Calibri]5ug[/font][font=宋体]。通常测定范围是[/font][font=Calibri]20~250ug[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]干扰物:酚类、柠檬酸、硫酸铵、[/font][font=Calibri]Tris[/font][font=宋体]缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]适用范围:除蛋白含量测定,也可用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]⑤考马斯亮蓝法[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]实验原理:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]考马斯亮蓝[/font][font=Calibri]G-250[/font][font=宋体]染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置([/font][font=Calibri]max[/font][font=宋体]),由[/font][font=Calibri]465mm[/font][font=宋体]变为[/font][font=Calibri]595nm[/font][font=宋体],溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。经研究认为,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。在[/font][font=Calibri]595mm[/font][font=宋体]下测定的吸光度值[/font][font=Calibri]A595[/font][font=宋体],与蛋白质浓度成正比。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]方法特点:[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]优点:灵敏度比[/font][font=Calibri]Lowry[/font][font=宋体]高约[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]倍,高效率、检测过程简便、只需要一种试剂,抗干扰能力强。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]缺点:测定误差大,不适用于不同蛋白的检测。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]检出限:其最低蛋白质检测量可达[/font][font=Calibri]1ug[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]干扰物:干扰物质少,但去污剂、[/font][font=Calibri]TritonX-100[/font][font=宋体]、十二烷基硫酸钠、[/font][font=Calibri]0.1N[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]NaOH[/font][font=宋体]会干扰实验测定。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白质含量测定方法选择[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质含量测定时,考虑以下因素后选定适用的检测方法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①实验对测定所要求的灵敏度和精确度;[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②蛋白质的性质;[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③溶液中存在的干扰物质;[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④测定所要花费的时间。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供多种类型的[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]蛋白资源[/b][/url],不仅有重组蛋白服务还有各种大咖讲座,详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/font][font=Calibri] [/font]
关于固体蛋白质的测定,本人是参考GB 5009.5-2010食品安全国家标准:食品中蛋白质的测定,该标准介绍了三种方法用于检测食品中的蛋白质,分别是凯氏定氮、分光光度和燃烧法。 简单分析了三种方法,主要是依据现有设备和操作繁简程度,决定采用分光光度法(为防止他人误会,简单说一下该方法的原理:食品中的蛋白质在催化加热条件下被分解,分解产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵,在pH 4.8 的乙酸钠-乙酸缓冲溶液中与乙酰丙酮和甲醛反应生成黄色的3,5-二乙酰-2,6-二甲基-1,4-二氢化吡啶化合物。在波长400 nm 下测定吸光度值,与标准系列比较定量,结果乘以换算系数,即为蛋白质含量。) 我困惑于国标方法其后提供的公式:详细见附件 求助如下:1)公式中的C和C0测定的氮是氨氮还是总氮?2)V1,V2,V3和V4描述的很啰嗦,可否指点一下对应标准中的何处? 再此谢谢各位!
请教 现在有关蛋白质的相关测定有那些知识和技术????就我所知的,目前蛋白质的测定主要是蛋白质总量的测定(凯氏定氮),那没有有测定分析食品中蛋白质种类的方法或技术呢???邀请大家来讨论!!!
目前蛋白质分子量测定有多种方法。最常用的应该是SDS--PAGE,分子筛了或者称为凝胶过滤,更为精确的是蛋白质质谱分析。欢迎大家对这些方法的有缺点进行讨论。
目的]掌握双缩脲法测定蛋白质浓度的原理和标准曲线的绘制。[align=center]原理][/align][align=center]双缩脲(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物,称为双缩脲[/align][align=center]反应,蛋白质分子中含有许多肽键(-CONH-)在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。在一定范围内,其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。因此,可以利用比色法测定蛋白质浓度。[/align][align=center]双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小,但灵敏度较差,而且特异性不高。除-CONH-有此反应外,-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。[/align][align=center]操作][/align][align=center](一) 绘制标准曲线[/align][align=center](二) 未知样品蛋白质浓度的测定 [/align][align=center] 1.取12支试管[/align][align=center]6支分别加入0,0.4,0.8,1.2,1.6,2.0毫升的标准[/align][align=center] 6支分别加入1毫升不同稀释浓度的待测液(两两相同)。[/align][align=center] 2.分别加水补足到2毫升。[/align][align=center] 3.分别加入4毫升双缩脲试剂在室温/37℃下放置30分钟。[/align][align=center][
蛋白质与多肽蛋白质粉 人类的营养物质有许多种类,最为重要的为蛋白质,碳水化合物和脂肪,其它则是微量营养物质,如维生素、电解质和微量元素等。虽然每一种营养物质对人体来说都是不可或缺的,但绝大多数的营养学家都会有充分的理由认为,真正最重要的营养物质是蛋白质。一、蛋白质是构成人体的基本物质。 蛋白质是由氨基酸通过肽链相连而构成的,它是人体包括骨骼、肌肉、皮肤和脑的重要物质基础,同时氨基酸也是生成核酸的基本物质。我们知道,核酸既形成遗传密码,也是体内储存能量的基本物质。因而从根本上说,人体是由蛋白质组成的。构成人体蛋白质的生理功能概括有如下三个方面:1)人体组织的主要构成成份:如肌肉、骨骼、血液、皮肤、神经、肝、心等等。2)具有特殊生理功能:可以这样说,人类的一切生理活动都与蛋白质有关。如酶蛋白能催化机体的一切化学反应,包括蛋白质、脂肪、碳水化合物的消化等;载脂蛋白运送脂肪;血红蛋白运送氧;激素蛋白调节代谢与生理活动包括情感;血浆白蛋白调节渗透压、运输金属离子、胆红素和抗生素等。3)供给机体能量:成年人每日约需要更新400g蛋白质,每克蛋白质彻底分解能释放出约4 Kcal的热量。4)为机体提供氮原料:人体内所必需的嘧啶、嘌呤、肌酸、胆碱、肾上腺素、肉碱、牛磺酸等,都是以多肽、氨基酸为原料的。表1. 世界粮食组织(FAD)和世界卫生组织(WHO)根据中国人的体质和膳食结构推荐的中国人蛋白质的摄入量(RNLs)。年 龄蛋白质RNL(g/d) 初生—6个月 1.5-3 1岁 35 3岁 45 5岁 55 7岁 60 9岁 65 10-16岁 75-85 成年女性 65 成年男性 75 妊娠 +15 乳母 +20 根据统计资料:由于贫困、工作紧张、精神压力、减肥节食、以及肠胃疾病、癌症、贫血、肾病、各种结核病、肝硬化、腹水、烧伤、失血等,以及老龄人均不同程度地存在着蛋白质的摄入不足。 上世纪80年代以来,我国营养学家对7个省18个贫困地区,1万名学龄前儿童进行了为期4年的连续调查,发现营养不良现象非常严重,其中蛋白质的摄入量不足WHO规定的60%。近年社会医学工作调查,在发达地区由于生活节奏加快,精神压力异常增加,以及办公室白领阶层的减肥节食,也导致蛋白质摄入不足,代谢异常的人群增加。二、蛋白质缺乏的体征和临床症状 单纯的蛋白质营养不良又叫加西长病,这或许是来源于非洲的单词,单纯的能量不足时叫消瘦;临床上通常把这两种现象叫单纯性蛋白质能量营养不良症或PEM。单纯的PEM症在临床上较少见到,但在慢性消耗性疾病患者中则常见,尤其是在癌症患者和艾滋病的患者中几乎占到90%以上。 现代都市和贫困地区存在着相当数量的蛋白质营养不良族群,他们的临床表现主要是能量损失或不足,如体力不支、睡眠不安、怕冷、怕热、性冷淡、无法进行正常的体力劳动和运动,其次为肌肉组织萎缩、皮肤松驰;腿部、脸部易水肿、脂肪肝、无名皮疹、伤口愈合不良、记忆力下降、视力减弱等。再者免疫力低下易感冒、感染。在做血检时通常会发现这些族群的血浆蛋白处于正常值的下限,其中白蛋白、转铁蛋白、甲状腺素结合前体蛋白和视轴蛋白(retinol-binding protein)均处于低水平时,患者易于感染各种疾病并且出现早衰症状,如果是儿童则感染后死亡率增加30%-40%,对于这类人群WHO的专家最好的建议就是迅速补充优质(或全价)的蛋白质。三、优质蛋白质和劣质蛋白质的区别。 要弄清楚何为优质蛋白质?何为劣质蛋白质?我们要引入什么是必需氨基酸的概念。营养生理学家、生化学家发现构成人体蛋白质的氨基酸共有21种,而这些氨基酸中其中有4种是可以由体内含碳和含氮底物自己合成的,被称为非必需氨基酸,还有10个必需的氨基酸,是人类机体无法制造需要从饮食中摄取的,另有7个是介于这两者之间的被称为条件必需氨基酸。表2. 必需、条件必需和非必需氨基酸 必需氨基酸条件必需氨基酸 非必需氨基酸 亮氨酸牛黄酸 丙氨酸 异亮氨酸酪氨酸 谷氨酸 缬氨酸甘氨酸 天冬氨酸 赖氨酸丝氨酸 天冬酰胺 苯丙氨酸(酪氨酸)脯氨酸 蛋氨酸(半胱氨酸)谷氨酰酸 苏氨酸 胱氨酸 色氨酸 组氨酸 精氨酸 虽然蛋白质广泛存在于许多动物性和植物性食物中,但是必需氨基酸的构成异差很大,WHO把“蛋白质其组成恰好符合人体需要”的蛋白质称为理想蛋白质,在自然界这种理想的蛋白质普遍认为是鸡蛋蛋白,因此就把鸡蛋蛋白作为衡量蛋白质优劣的参照蛋白,科学家把它作为一把尺子来衡量各种蛋白质,并制定出标准,以4种必需氨基酸为最低限来决定其优劣,即色氨酸、苏氨酸、赖氨酸或者蛋氨酸(半胱氨酸)。 通过比较科学发现,肉、鱼、蛋、牛奶、乳酪含有优质蛋白,大豆、花生、豌豆也含有较多的高质量蛋白。进一步研究发现它们都不够完美,因而要求大家对优质的动物性蛋白和植物性蛋白进行了科学搭配才是最完美的全价蛋白质(complete protein)。表3. 部分高质量蛋白
有个问题一直想不通,请各位帮帮我啊!就是在连续几天测定胁迫下SOD酶的比活力后,发现比活性一直平稳,但后来急剧上升之后下降。但是下降时测得的蛋白质含量与上升时差不多。 为什么酶的比活性下降了(或者说),但是蛋白质含量还是如此高?SOD比活性上升了,是因为酶量增加了还是酶结构的变化?还是说,SOD比活性降低,只是酶的活性部分被抑制,其酶的蛋白质性质未发生改变? 向各位高手求救![em0715]
1 方法1.1 实验分组分为2 组:对照组和实验组。两组在测定样本蛋白质含量的过程中,采用不同的消化方法,之后的蒸馏、滴定、计算方法,则完全相同。推荐使用仪器:蛋白质测定仪,半自动定氮仪。1.1.1 对照组:操作严格按照国标规定〔1〕进行。其采用的消化方法为小火碳化消化法:取样品稀释液110 mL 与消化剂及硫酸一起加入定氮瓶内,于瓶口放一漏斗,将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上加热消化,消化过程要求小火(400 ℃) 碳化3 h 左右。1.1.2 实验组:采用的消化方法是高温消化法:将样品稀释液110 mL 与消化剂一起加入定氮瓶内保持1 000 ℃的高温持续加热,其过程要求保持定氮瓶内液体沸腾,但所产生的蛋白质气泡不溢出瓶口,同时产生的蒸馏水气体在瓶壁遇冷回流,可以将瓶内壁上的蛋白质带回瓶底进行消化,整个消化过程大约1 h。1.2 蛋白质含量检测1.2.1 两组方法的稳定性、准确性比较: 分别对50 g/ L蛋白校准液(上海申索) 及15 份人血白蛋白样品(蛋白含量未知) 进行两种方法的蛋白质含量检测,前者重复15 次。1.2.2 实验组蛋白回收率检测(见表1) :任取2 种含蛋白的样品A、B(蛋白含量未知) ,每种样品分别取3 份各916 mL ,加入50 g/ L 的蛋白标准液0μL 、100μL 、400μL 和分别对应400μL 、300μL 、0μL 的生理盐水,执行4 次重复试验,进行2 种方法的蛋白质含量检测。最后计算回收率。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012032149_264269_1641058_3.jpg1.3 统计学分析数据以
实验原理本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,因此,蛋白质具有吸收紫外光的性质,其最大吸收峰位于280 nm附近(不同的蛋白质吸收波长略有差别)。在最大吸收波长处,吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯-比耳定律。仪器与试剂紫外-可见分光光度计,比色管,吸量管标准蛋白质溶液:5.00 mg.mL-1溶液,0.9% NaCl溶液,待测蛋白质溶液实验步骤1. 标准曲线的制作 : 用吸量管分别吸取1.0 、1.5、 2.0 、2.5 、3.0 mL 5.00 mg.mL-1标准蛋白质溶液于5只10 mL 比色管中,用0.9% NaCl溶液稀释至刻度,摇匀。用1 cm石英比色皿,以0.9%NaCl溶液为参比,在280 nm处分别测定各标准溶液的吸光度A280,记录所得读数。2. 样品测定: 取待测蛋白质溶液3 mL,按上述方法测定280 nm处的吸光度。平行测定三份。数据处理1. 以蛋白质浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。2. 根据样品溶液的吸光度,从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。注意事项和问题1. 紫外吸收法与Folin-酚比色法测定蛋白质含量相比,有何缺点及优点?2. 若样品中含有核酸类杂质,应如何校正?[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2008/04/200804041741_83891_1604910_3.jpg[/img]
用MALDI-TOF测定蛋白质的分子量时,假设一种蛋白质的准确分子量为50KDa,那么用MALDI-TOF测得的结果在50KDa上下浮动多少范围算是比较准确的?谢谢各位专家的回答!
一、实验目的1. 了解凝胶层析的原理及其应用。2. 通过测定蛋白质分子量的训练,初步掌握凝胶层析技术。二、实验原理凝胶层析又称排阻层析,凝胶过滤,渗透层析或分子筛层析等。它广泛地应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等,而测定蛋白质的分子量也是它的重要应用之一。凝胶是一种具有立体网状结构且呈多孔的不溶性珠状颗粒物质。用它来分离物质,主要是根据多孔凝胶对不同半径的蛋白质分子(近于球形)具有不同的排阻效应实现的。亦即它是根据分子大小这一物理性质进行分离纯化的。分离原理参见“理论部分的凝胶层析一节”。对于某种型号的凝胶,一些大分子不能进入凝胶颗粒内部而完全被排阻在外,只能沿着颗粒间的缝隙流出柱外;而一些小分子不被排阻,可自由扩散,渗透进入凝胶内部的筛孔,尔后又被流出的洗脱液带走。分子越小,进入凝胶内部越深,所走的路程越多,故小分子最后流出柱外,而大分子先从柱中流出。一些中等大小的分子介于大分子与小分子之间,只能进入一部分凝胶较大的孔隙,亦即部分排阻,因此这些分子从柱中流出的顺序也介于大、小分子之间。这样样品经过凝胶层析后,分子便按照从大到小的顺序依次流出,达到分离的目的。凝胶层析分离原理示意动画。对于任何一种被分离的化合物在凝胶层析柱中被排阻的范围均在0~100%之间,其被排阻的程度可以用有效分配系数Kav(分离化合物在内水和外水体积中的比例关系)表示,Kav值的大小和凝胶柱床的总体积(Vt)、外水体积(V0)以及分离物本身的洗脱体积(Ve)有关:Kav = (Ve-V0)/(Vt-V0) ----------- (1)在限定的层析条件下,Vt和V0都是恒定值,而Ve是随着分离物分子量的变化而改变。分子量大,Ve值小,Kav值也小。反之,分子量小Ve值大,Kav值大。有关凝胶层析柱中凝胶自身(基质)体积(Vg)、外水体积(V0)、内水体积(Vi)及柱床总体积(Vt)的参见示意图。凝胶层析柱中的几种层析峰。有效分配系数Kav是判断分离效果的一个重要参数,同时也是测定蛋白质分子量的一个依据。在相同层析条件下,被分离物质Kav值差异越大,分离效果越好。反之,分离效果差或根本不能分开。在实际的实验中,我们可以实测出Vt、V0及Ve的值,从而计算出Kav的大小。对于某一特定型号的凝胶,在一定的分子量范围内,Kav与logMw (Mw表示物质的分子量) 成线性关系:Kav =-b logMw + C --------- (2)其中 b,C为常数。同样可以得到:Ve =-b'logMw + C' --------- (3)其中 b', C'为常数。即 Ve 与 logMw 也成线性关系。我们可以通过在一凝胶柱上分离多种已知分子量的蛋白质后,并根据上述的线性关系绘出标准曲线,然后用同一凝胶柱测出其它未知蛋白的分子量。三、器材与试剂(一)器材1. 玻璃层析柱((20mm×60cm)2. 恒流泵(或下口恒压贮液瓶)3. 自动部分收集器4. 紫外分光光度计5. 100ml试剂瓶6. 1000ml量筒7. 250ml烧杯8. 50ml、100ml烧杯9. 10ml(或5ml)刻度试管(二)试剂1. 标准蛋白(1)牛血清白蛋白:Mw=67,000(上海生化所)(2)鸡卵清清蛋白:Mw=45,000(美国SIGMA公司)(3)胰凝乳蛋白酶原A:Mw=24,000(美国SIGMA公司)(4)溶菌酶:Mw =14,3002. 未知蛋白质样品:由实验室准备3. 0.025M KCl-0.1M HAC(乙酸)(洗脱液1000ml)4. 蓝色葡聚糖-2000
各位老师好: 有没有测定红糖中蛋白质测定的?我们测定了一个样含量2.3,比正常的红糖高,请有经验的老师给指点一下谢谢! 急!
[align=center][font=宋体]蛋白质浓度测定方法大全[/font][/align][align=left][font=宋体]蛋白质的定量分析是生物化学和其它生命学科最常涉及的分析内容,是临床上诊断疾病及检查康复情况的重要指标,也是许多生物制品,药物、食品质量检测的重要指标。在生化实验中,对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析,则是经常进行的一项非常重要的工作。[/font][/align][align=left][font=宋体]蛋白质是一种十分重要的生物大分子:它的种类很多,结构不均一,分子量又相差很大,功能各异,这样就给建立一个理想而又通用的蛋白质定量分析的方法带来了许多具体的困难。目前测定蛋白质含量的方法有很多种,下面列出根据蛋白质不同性质建立的一些蛋白质测定方法:[/font][/align][align=left][font=宋体]物理性质:紫外分光光度法。[/font][font=宋体]化学性质:凯氏定氮法、双缩脲法、[/font]Lowry[font=宋体]法,[/font]BCA[font=宋体]法,胶体金法。[/font][font=宋体]染色性质:考马氏亮蓝染色法、银染法。[/font][font=宋体]其他性质:荧光法。[/font][/align][align=left][font=宋体]蛋白质测定的方法很多,但每种方法都有其特点和局限性,因而需要在了解各种方法的基础上根据不同情况选用恰当的方法,以满足不同的要求。例如凯氏定氮法结果最精确,但操作复杂,用于大批量样品的测试则不太合格;双缩脲法操作简单,线性关系好,但灵敏度差,样品需要量大,测量范围窄,因此在科研上的应用受到限制;而酚试剂法弥补了它的缺点,因而在科研中被广泛采用,但是它的干扰因素多;考马氏亮兰染色法因其灵敏而又简便开始重新受到关注;[/font]BCA[font=宋体]法又以其试剂稳定,抗干扰能力较强,结果稳定,灵敏度高而受到欢迎;胶体金法具有较高的灵敏度,可达到毫微克水平,用于微量蛋白的测定。[/font][/align][align=left][font=宋体]一、常用的测定蛋白质含量方法的比较[/font][/align][img]http://file3.foodmate.net/attachment/forum/202306/07/192040qevvp3337wwevprw.png.thumb.jpg[/img][align=left][font=宋体]下面介绍[/font]Folin[font=宋体]—酚试剂法,考马氏亮蓝[/font]G[font=宋体]—[/font]250[font=宋体]染色法,紫外分光光度法、胶体金法等几种最常用使用的方法。[/font][/align][align=left][font=宋体]二、、[/font] Folin[font=宋体]-酚试剂法(又名[/font]Lowry[font=宋体])法[/font]1[font=宋体]、、实验原理[/font][/align][align=left][font=宋体]这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即[/font]Folin[font=宋体]—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。[/font]Folin[font=宋体]—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深兰色(钼兰和钨兰的混合物)。在一定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正比。在生物化学领域得到广泛的应用。[/font][/align][align=left][font=宋体]此法可检测的最低蛋白质量达[/font]5mg[font=宋体]。通常测定范围是[/font]20~250mg[font=宋体]。[/font][/align][align=left]2.[font=宋体]、优缺点[/font][/align][align=left][font=宋体]优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多;[/font][/align][align=left][font=宋体]缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多。[/font][/align][align=left]3[font=宋体]、试剂与器材[/font][/align][align=left]3[font=宋体]、[/font]1.[font=宋体]试剂[/font][/align][align=left][font=宋体]([/font]1[font=宋体])试剂甲:([/font]A[font=宋体])[/font]10[font=宋体]克[/font]Na2CO3[font=宋体],[/font]2[font=宋体]克[/font]NaOH[font=宋体]和[/font]0.25[font=宋体]克酒石酸钾钠([/font]KNaC4H4O6[font=宋体][/font]4H2O[font=宋体]),溶解于[/font]500[font=宋体]毫升蒸馏水中。([/font]B[font=宋体])[/font]0.5[font=宋体]克硫酸铜([/font]CuSO4[font=宋体][/font]5H2O[font=宋体])溶解于[/font]100[font=宋体]毫升蒸馏水中,每次使用前,将[/font]50[font=宋体]份([/font]A[font=宋体])与[/font]1[font=宋体]份([/font]B[font=宋体])混合,即为试剂甲。[/font][/align][align=left][font=宋体]([/font]2[font=宋体])试剂乙:在[/font]2[font=宋体]升磨口回流瓶中,加入[/font]100[font=宋体]克钨酸钠,[/font]25[font=宋体]克钼酸钠及[/font]700[font=宋体]毫升蒸馏水,再加[/font]50[font=宋体]毫升[/font]85%[font=宋体]磷酸,[/font]100[font=宋体]毫升浓盐酸,充分混合,接上回流管,以小火回流[/font]10[font=宋体]小时,回流结束时,加入[/font]150[font=宋体]克硫酸锂,[/font]50[font=宋体]毫升蒸馏水及数滴液体溴,开口继续沸腾[/font]15[font=宋体]分钟,以便驱除过量的溴。冷却后溶液呈黄色(如仍呈绿色,须再重复滴加液体溴的步骤)。稀释至[/font]1[font=宋体]升,过滤,滤液置于棕色试剂瓶中保存。使用时用标准[/font]NaOH[font=宋体]滴定,酚酞作指示剂,然后适当稀释,约加水[/font]1[font=宋体]倍,使最终的酸浓度为[/font]1N[font=宋体]左右。[/font][/align][align=left][font=宋体]([/font]3[font=宋体])标准蛋白质溶液[/font]:[font=宋体]精确称取结晶牛血清清蛋白或球蛋白,溶于蒸馏水,浓度为[/font]250 mg/ml[font=宋体]左右。牛血清清蛋白溶于水若混浊,可改用[/font]0.9 % NaCl[font=宋体]溶液。[/font][/align][align=left]3[font=宋体]、[/font]2.[font=宋体]器材[/font][/align][align=left][font=宋体]([/font]1[font=宋体])可见光分光光度计;[/font][/align][align=left][font=宋体]([/font]2[font=宋体])旋涡混合器;[/font][/align][align=left][font=宋体]([/font]3[font=宋体])秒表;[/font][/align][align=left][font=宋体]([/font]4[font=宋体])试管[/font]16[font=宋体]支。[/font][/align][align=left]4[font=宋体]、操作方法[/font][/align][align=left]4[font=宋体]、[/font]1.[font=宋体]标准曲线的测定:取[/font]16[font=宋体]支大试管,[/font]1[font=宋体]支作空白,[/font]3[font=宋体]支留作未知样品,其余试管分成两组,分别加入[/font]0[font=宋体],[/font]0.1[font=宋体],[/font]0.2[font=宋体],[/font]0.4[font=宋体],[/font]0.6[font=宋体],[/font]0.8[font=宋体],[/font]1.0[font=宋体]毫升标准蛋白质溶液(浓度为[/font]250mg/ml[font=宋体])。用水补足到[/font]1.0[font=宋体]毫升,然后每支试管加入[/font]5[font=宋体]毫升试剂甲,在旋涡混合器上迅速混合,于室温([/font]20[font=宋体]~[/font]25[font=宋体]℃)放置[/font]10[font=宋体]分钟。[/font][/align][align=left][font=宋体]再逐管加入[/font]0.5[font=宋体]毫升试剂乙([/font]Folin[font=宋体]—酚试剂),同样立即混匀。这一步混合速度要快,否则会使显色程度减弱。然后在室温下放置[/font]30[font=宋体]分钟,以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照,于[/font]700nm[font=宋体]处测定各管中溶液的吸光度值。以蛋白质的量为横座标,吸光度值为纵座标,绘制出标准曲线。注意:因[/font]Lowry[font=宋体]反应的显色随时间不断加深,因此各项操作必须精确控制时间,即第[/font]1[font=宋体]支试管加入[/font]5[font=宋体]毫升试剂甲后,开始计时,[/font]1[font=宋体]分钟后,第[/font]2[font=宋体]支试管加入[/font]5[font=宋体]毫升试剂甲,[/font]2[font=宋体]分钟后加第[/font]3[font=宋体]支试管,余此类推。全部试管加完试剂甲后若已超过[/font]10[font=宋体]分钟,则第[/font]1[font=宋体]支试管可立即加入[/font]0.5[font=宋体]毫升试剂乙,[/font]1[font=宋体]分钟后第[/font]2[font=宋体]支试管加入[/font]0.5[font=宋体]毫升试剂乙,[/font]2[font=宋体]分钟后加第[/font]3[font=宋体]支试管,余此类推。[/font][/align][align=left][font=宋体]待最后一支试管加完试剂后,再放置[/font]30[font=宋体]分钟,然后开始测定光吸收。每分钟测一个样品。进行多试管操作时,为了防止出错,必须在实验记录本上预先画好下面的表格。表中是每个试管要加入的量(毫升),并按由左至右,由上至下的顺序,逐管加入。最下面两排是计算出的每管中蛋白质的量(微克)和测得的吸光度值。[/font][/align][align=left]4[font=宋体]、[/font]2.[font=宋体]样品的测定:取[/font]1[font=宋体]毫升样品溶液(其中约含蛋白质[/font]20~250[font=宋体]微克),按上述方法进行操作,取[/font]1[font=宋体]毫升蒸馏水代替样品作为空白对照。通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起,同时进行。即在标准曲线测定的各试管后面,再增加[/font]3[font=宋体]个试管。如上表中的[/font]8[font=宋体]、[/font]9[font=宋体]、[/font]10[font=宋体]试管。根据所测样品的吸光度值,在标准曲线上查出相应的蛋白质量,从而计算出样品溶液的蛋白质浓度。注意,由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸,显色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度(相对于标准蛋白质)。[/font][/align][align=left][/align][align=left]5[font=宋体]、注意事项[/font][/align][align=left][font=宋体]([/font]1[font=宋体])对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰[/font]Lowry[font=宋体]反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、[/font]Tris[font=宋体]缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素([/font]0.5%[font=宋体]),硫酸钠([/font]1%[font=宋体]),硝酸钠([/font]1%[font=宋体]),三氯乙酸([/font]0.5%[font=宋体]),乙醇([/font]5%[font=宋体]),乙醚([/font]5%[font=宋体]),丙酮([/font]0.5%[font=宋体])等溶液对显色无影响,但这些物质浓度高时,必须作校正曲线。[/font][/align][align=left][font=宋体]([/font]2[font=宋体]含硫酸铵的溶液,只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液,即可显色测定。若样品酸度较高,显色后会色浅,则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度[/font]1~2[font=宋体]倍。进行测定时,加[/font]Folin[font=宋体]—酚试剂时要特别小心,因为该试剂仅在酸性[/font]pH[font=宋体]条件下稳定,但上述还原反应只在[/font]pH=10[font=宋体]的情况下发生,故当[/font]Folin[font=宋体]一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏之前,还原反应即能发生。此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。[/font][/align][align=left][font=宋体]三、考马斯亮蓝法[/font]1[font=宋体]、实验原理[/font][/align][align=left][font=宋体]考马斯亮蓝[/font] (Coomassie Brilliant Blue) [font=宋体]法测定蛋白质浓度,是利用蛋白质―染料结合的原理,定量测定微量蛋白浓度快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。目前,这一方法是也灵敏度最高的蛋白质测定法之一。[/font][/align][align=left][font=宋体]考马斯亮蓝[/font] G-250 [font=宋体]染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰[/font] (lmax) [font=宋体]的位置,由[/font] 465 nm [font=宋体]变为[/font] 595 nm[font=宋体],溶液的颜色也由棕黑色变为蓝色。通过测定[/font] 595 nm [font=宋体]处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸[/font] ([font=宋体]特别是精氨酸[/font]) [font=宋体]和芳香族氨基酸残基相结合。[/font][/align][font=宋体][/font]
有谁能提供一些油中蛋白质的测定方法。
[size=4][center]Bradford法[/center][/size][B]具体操作步骤:(一)实验原理 [/B]双缩脲法(Biuret法)和Folin—酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为,染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。 在595nm下测定的吸光度值A595,与蛋白质浓度成正比。
蛋白质含量的测定[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=54096]蛋白质含量的测定[/url]
蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高,比紫外吸收法灵敏10~20倍,比Biuret法灵敏100倍以上。定氮法虽然比较复杂,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。 值得注意的是,这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质,因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定,有可能得出四种不同的结果。每种测定法都不是完美无缺的,都有其优缺点。在选择方法时应考虑:①实验对测定所要求的灵敏度和精确度;②蛋白质的性质;③溶液中存在的干扰物质;④测定所要花费的时间。考马斯亮蓝法(Bradford法),由于其突出的优点,正得到越来越广泛的应用。
蛋白质化学与蛋白质组学夏其昌 曾嵘 等编著2004年4月出版ISBN 7-03-012401-4/Q.133116开,平装,580页定价: 75.00元 本书系统论述了蛋白质化学基础理论和实验技巧,也反映了蛋白质组学研究的最新成果。内容包括:蛋白质的表征,蛋白质的组成分析和序列测定,与此相关的实验方法,包括各种色谱、电泳、质谱技术等,以及应用在蛋白质表征研究和基因工程产品的质检方面的实际范例。在蛋白质组学领域介绍了基本概念、样品制备、双向凝胶电泳的图像分析和定量分析、质谱等常规方法,并介绍了国际上最新的多维技术在研究中的应用;同时充分体现了生物信息学在蛋白质组研究中的重要性。 本书可作为生物学、医学、化学专业大学生,研究生和教学人员的参考书,也是从事生物化学、分子生物学、医学等领域中分离分析工作人员的参考书。
本人初来乍到,老板让查下蛋白质酶解的资料,什么方法?条件?试剂?哪位大虾知道?能否简单介绍一下?着急呀