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分子生物学(基因工程)的实验中,经常要做细胞质粒DNA的提取和检测工作,以便获得运载基因的载体DNA;或用于实行电泳检测分析,了解样品是否含有质粒DNA(包括重组质粒DNA),判断其分子量大小,区别不同质粒等等。因此质粒DNA的提取是基因工程实验中最常用的手段之一。质粒是一种染色体外的稳定遗传银子,大小从1kb到200kb不等,大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子,并以超螺旋形式存在于宿主的细胞质中。它是细菌内的共生型遗传因子,主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,质粒具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的分离是利用质粒DNA和染色体DNA在变性与复性中的差异来达到的目的。当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时,蛋白质与DNA发生变性,由于染色体DNA与质粒DNA拓扑构型不同,染色体DNA双螺旋结构解开,而共价闭合质粒DNA的氢键虽被断裂,但两条互补链彼此相互盘绕仍会紧密地结合在仪器。当加入中和液后,溶液pH恢复至中性,在高盐浓度的情况下,染色体DNA之间交联形成不溶性网状结构并与蛋白质SDS复合物等形成沉淀;不同的是质粒DNA复性迅速而准确,保持可溶状态而留在上清中。这样,通过离心可沉淀大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA及蛋白质。除去沉淀后上清中的质粒可用酚氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。前面提取质粒DNA的方法就是实验室常用的碱裂解法,该法的操作过程如下:首先讲含有质粒的细菌接种到培养基,经过大约12小时的恒温摇陪后弃去上清液,加入中和液后用漩涡混匀器将溶液充分混匀,然后加入碱液进行沉淀,这就是变性与复性,最后的操作就是实验室常用的沉淀的分离、纯化。分离、纯化DNA首先取上清液,加入分离液后采用漩涡混匀器混匀溶液,离心取上清液,加入无水乙醇后混匀,离心后弃上清液,干燥DNA即可。这个实验中常用到漩涡混匀器进行溶液混匀,意大利VELP公司推出多种型号的漩涡混匀器可满足每一个实验室的需要和安全标准。特别是红外漩涡混匀器,这是VELP公司的专利,该漩涡混匀器一旦检测到试管即自动开始震动混匀,不需要施加任何外力,震动速度可调,时间可设,漩涡混匀器稳定性高,非常适合细胞质粒提取实验。
抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)又称抗核酸抗原抗体,是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取的核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称,能与所有动物的细胞核发生反应,主要存在于血清中,也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。抗核抗体识别是各种细胞核组分(细胞核生化成分),可特征地出现于许多疾病中。ANA鉴别诊断对于一些特定疾病的确认十分必要,而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。为了确保检测结果的准确性,对此相关部门对抗核抗体谱(IgG)检测制定了标准操作规程。在规程中,对于样品的要求写到,患者样本用样本缓冲液1:101稀释,如可取15μl血清用1.5ml样本缓冲液稀释并用漩涡混匀器进行充分混匀,不可用加样器混匀。选择一款稳定、高效的漩涡混匀器备显重要。化验室样品处理量大,选择一款快捷、省力的漩涡混匀器十分必要。意大利VELP推出了创新性红外感应漩涡混匀器,红外传感是VELP创新性的专利产品。VELP红外感应漩涡混匀器,一旦检测到试管,VELP漩涡混匀器自动开始震动,不需要施加任何外力,而且相比于传统的接触模式,VELP红外传感漩涡混匀器能确保在震动减少过程的急剧变化。VELP漩涡混匀器确保了样品的稳定性。VELP漩涡混匀器最大转速可以达到3000rpm,VELP漩涡混匀器可以满足大部分实验室的需求。VELP漩涡混匀器在实验中解放您的双手,让实验更快捷、更准确!
腊肠,俗称香肠,是一个非常古老的食物生产和肉食保存技术,是指以肉类为原料,经切,绞成丁,配以辅料,灌入动物肠衣经发酵、成熟干制成肉制品,是我国肉类制品中品种对多的一大类产品,主要产地有广东、广西、四川、湖南及上海等。腊肠为广东、香港和澳门及南方地区常见食品,通常制作程序已经简化成装置、压缩、脱水及晒干。由于其具有持久鲜艳的颜色特性,于是有商贩在加工腊肠时使用罗丹明B改善腊肠的品相。罗丹明B,俗称花粉红,是一种碱性荧光染料,作为荧光试剂已被广泛用于食品、环保、矿业和钢铁等领域,是荧光分析方法上的常用分析试剂,对于它的光谱机理已有相关研究。而有关研究表明,罗丹明B会引致老鼠皮下组织生肉瘤,半数致死量(大鼠,经口)500mg/kg,美国曾对该物质进行研究,显示其具有致癌性,1993年起欧美等国家和地区就已明令禁止用于食品加工中。目前,对于腊肠中罗丹明B测定的文献报道有液相色谱-荧光检测法和液相谱串联质谱/质谱仪法,下面简要介绍一下如何检测腊肠中的罗丹明B。称取样品2.0g(精确至0.1mg)于50mL离心管中,准确加入25mL乙酸乙酯-环己烷(1:1,V/V),于漩涡混匀器上混合提取2min,再超声提取15min后于4000r/min离心5min,上清液过0.22μm微孔滤膜后作待净化液。取10mL待净化液于GPC样品管中,用GPC进行净化,收集11~21min洗脱液,于40℃条件下旋转蒸发至干,残渣用0.1mL甲醇溶解后,过0.22μm微孔滤膜,用HPLC-MS/MS测定,外标峰面积法定量。从实验操作中得知,每个实验需要进行漩涡混匀提取的时间是2min,如果每个实验都按这个时间进行操作的话,一天实验下来,手臂一定是酸痛的,尚且不计算实验室还需要进行的其他实验。意大利VELP推出了红外感应漩涡混匀器,一旦检测到试管,VELP漩涡混匀器自动开始震动,VELP漩涡混匀器不需要施加任何外力,而且相比于传统的接触模式,红外传感漩涡混匀器能确保在震动减少过程的急剧变化。此款漩涡混匀器能调节并显示转速,可以设置并显示操作时间,VELP漩涡混匀器最大转速可以达到3000rpm,VELP漩涡混匀器可以满足大部分实验室的需求。在实验中解放您的双手,让实验更快捷、准确,VELP漩涡混匀器是您明智的选择!