多糖纯化制备系统

在本应用案例中，样品为极性很强的某合成低聚糖类分子，在普通C18反相柱上保留很弱，此外，其紫外吸收非常弱，不适合利用UV检测器对其进行检测。针对样品的具体性质，三泰科技的应用工程师利用SepaFlash HILIC ARG柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean machine并与外接ELSD检测器联用，成功对样品进行了纯化制备，获得了满足制备需求的目标产物，为极性很强的低聚糖类样品的纯化制备提供了一种可行的方案。

本研究探讨使用SepaBean machine快速液相制备色谱系统检测技术对糖类化合物进行制备纯化，结合UV检测器和ELSD检测器（蒸发光散射检测器）共同检测。选取葡萄糖、果糖、乳糖三种样品，由于样品为极性很强的糖类分子，在普通C18反相柱上保留很弱，针对样品的具体性质，应用工程师利用Sepa Flash氨基柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean machine并与ELSD检测器联用，成功对样品进行了纯化，为极性很强的糖类化合物的制备纯化提供了一种可行的方案。

制备LC广泛应用于制药、食品和化工等领域，用于从混合物中纯化目标化合物、寻找天然产品中的活性成分，以及对杂质或未知化合物进行结构分析等。在应用文章“01-00650-JP”中，介绍了一种分析/制备转换LC-MS系统，其制备纯化工作流程如图1所示。该系统包括：在分析模式下的分离条件研究、规模放大、馏分纯度/回收率确认等。具体来说，使用分析方法开发软件Lab Solutions MD进行分析方法的高效的分离条件优化，确保目标化合物（氢化皮质酮）及其附近共洗脱的峰之间有充分的分离。然后，进行负载量研究，规模放大，使用UV信号作为触发信号进行制备。本文为您介绍通过使用比UV更具定性能力的MS触发收集信号，可最大限度地排除杂质的混入，提高氢化皮质酮纯度的制备案例。

本文中待纯化的样品来自某制药公司，为氨基多环糖类物质，结构类似于氨基糖苷类抗生素，其极性很大，易溶于水，其分子结构式示意图参见图1，粗品纯度约为88%（HPLC分析结果）。对于此类大极性化合物的分离纯化，根据我们之前的制备纯化经验，样品分子在普通C18分离柱上的保留很弱，因此，考虑采用C18AQ柱对其进行分离纯化。

分析级制备纯化 行业特点：大多数单次制备纯化量较少，可采用分析级纯化方案 半制备级纯化平台 适合大制备量核苷酸纯化，单次制备量可达200~2000 OD QC质检 HTCS核酸质谱检测系统（基于LTQ系列质谱） DEL-核酸质谱检测系统（基于LTQ质谱） 基因扩增 Realtime PCR----荧光定量PCR仪 核酸药物高端研究 Thermo LTQ-Orbitrap XL高分辨质谱系统

糖类化合物是由碳、氢、氧三元素组成的有机物。从化学结构上看，糖类是多羟基醛酮以及它们的多聚体，在化学式的表现上类似于“碳”与“水”的聚合，故又称碳水化合物，根据其结构不同，可分为单糖、双糖和多糖。糖类化合物具有众多的用途，涵盖了食品、医药、能源、工业等多个领域。它们不仅在食品工业中用于调味和增加口感，还在医药领域用于药物生产和治疗疾病，同时也是能源和工业生产中的重要原料。糖类化合物的广泛应用为人类的生活带来了便利，也推动了相关产业的发展。近年来糖类化合物的研究有两个方向： ①化学家致力于糖类化合物的人工合成，这主要是为社会发展作长远打算，使人类食物将有可能逐步摆脱对农业的依赖。②研究糖类化合物与生命的关系，因为在生命体内糖与蛋白质、核酸常不可分离。糖类化合物分离纯化检测由于缺乏发色基团，导致其无紫外吸收或紫外吸收很弱，常规快速液相制备色谱系统通常只配备紫外 (UV) 检测器，不能检测缺乏发色基团的目标化合物。而蒸发光散射检测器（Evaporative Light-scattering Detector）是通用型检测器，可以检测挥发性低于流动相的化合物，特别是没有紫外吸收的有机物质。本案例主要探讨使用SepaBean machine快速液相制备色谱系统搭配ELSD检测器（蒸发光散射检测器）对糖类化合物进行制备纯化，为糖类化合物的制备纯化提供了一种可行的方案。

制备LC广泛应用于制药、食品和化工等领域，用于从混合物中纯化目标化合物、寻找天然产品中的活性成分，以及对杂质或未知化合物进行结构分析等。确立与其他组分或杂质组分分离的条件对高纯度回收目标化合物尤其重要，但在制备LC条件下，所使用的样品数量以及流动相消耗量较多，因此，因此分离条件的优化通常在分析规模上进行，以最大限度地降低这些消耗。在优化过程中，在优化过程中，需要调整各种 HPLC 条件（包括梯度曲线），以找到最佳分离条件，对于创建每个分析方法编辑而言都是一个耗时的过程。另外，在完成分析尺度的条件研究后，需要规模放大和制备目标化合物，而随后的纯度/回收率确认中，需要将制备的馏分从馏分收集器转移到自动进样器，这也是一项费时费力的工作。本文为您介绍使用NexeraPrep系列的分析制备LC-MS系统，完成分析尺度的分离条件研究、扩大分馏规模、纯度/回收率确认等一系列制备纯化工作流程（图1）的案例。

食品、饮料、个人护理用品和精油中所含芳香成分多为小分子的挥发性化合物。这些芳香成分是一些差向异构的手性化合物。正如在药品中不同的手性化合物之间具有不同的药理作用一样，芳香成分中不同手性异构体的香气不同，其存在比例也会影响香气的质量和强度。因此，对香料原料的开发而言，掌握异构体之间的特性差异非常重要，在开发过程中需要进行异构体的分离和分馏纯化。在过去，诸如芳香成分的挥发性化合物一般通过气相色谱法（GC）进行分离和制备。虽然GC具有较高的分辨率，但每次分析的样品负载量小，分析时间也较长。使用超临界流体色谱法(SFC)进行制备纯化时，与液相色谱法（LC）相比分析和负载同等量的样品能够更快速完成。此外，在SFC中用作洗脱液的液化二氧化碳会在常温常压下气化，分馏后的组分中仅含少量有机溶剂。因此，可以轻松浓缩目标组分。本文介绍了NexeraUC分析型制备系统对薰衣草精油中芳香成分芳樟醇进行制备纯化的示例。

有机发光半导体材料是一组用于制造OLED显示屏的化合物，主要由可产生荧光的多环芳烃构成。有机发光半导体材料的合成和杂质的结构表征是开发新的、高性能产品必不可少的，而多数情况下需要高纯度化合物，因此需要纯化目标组分。本文中，我们介绍了使用超临界流体色谱Nexera UC分析系统进行小容量制备以及Nexera UC Prep用于大量制备。

利用循环制备对硅胶色谱柱不能分离化合物的纯化。对于有机合成，利用循环方便简洁的拿到高纯中间体以及最终产物。

低聚半乳糖是一种具有天然属性的功能性低聚糖，有助于双歧杆菌等有益菌的增殖，具有调节肠道功能的作用。低聚半乳糖具有很好的耐热性和耐酸性，在加工和储存过程中也不易被破坏和降解，具有广泛的应用领域，目前，低聚半乳糖已被广泛应用于食品行业中。为了更好的在分子水平上分析低聚半乳糖，有必要进行低聚半乳糖的分离纯化制备。

从哈恣木酶发酵液分离鉴定出Alamethicin F50等各种天然产物，利用Biotage液相色谱，对各类产物进行了纯化制备。耐士科技作为Biotage中国区总代理，以最优质的服务提供Biotage全系产品。Biotage Isolera 系列是世界上最智能的快速纯化系统，它拥有自己独创的智能参数设置，共有3个系统，多种配置可选。可以让化学家们轻松地完成对从mg级到150g以上样品 的更好的分离。创新的TLC-to-gradient专利技术可以根据薄层层析色谱的数据自动产生适合样品的溶剂洗脱梯度，并建议适合该样品量的色谱柱。

化橘红多糖的分离纯化及其组成的气相色谱分析摘要目的: 从化橘红中提取分离多糖, 并对其化学组成进行研究。方法: 化橘红经醚提醇提后的药渣用热水提取,乙醇沉淀, Sevag 试剂脱蛋白, CTAB (溴化十六烷基三甲胺) 络合法分离纯化 用气相色谱法对其组成进行研究。结果: 分离得到的水溶性多糖经Sephadex G2200 凝胶柱层析, 硫酸2酚法证实为单一多糖, 紫外光谱显示不含蛋白和核酸类物质。化橘红多糖是由D2木糖,D2葡萄糖,D2半乳糖,L 2阿拉伯糖,D2甘露糖和一个未知物(待定) 组成。结论: 化橘红多糖为杂多糖, 气相色谱法是该多糖组成分析的简便易行的方法。

目的　研究分离纯化朝鲜白头翁中三萜皂苷的新方法。方法　利用溶剂提取法、柱色谱法及循环制备HPLC 进行分离纯化。结果　从朝鲜白头翁中分离得到4个化合物, 分别鉴定为: 3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)[ β-D-glucopyranosyl (1→4) ] -α-L-arabinopyranosyl hederagenin 28-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4)- β-D-glucopy-ranosyl(1→6)- β-D-glucopyranoside (Ⅰ)、cernuosides A (Ⅱ)、cernuosides B (Ⅲ)、oleanolic acid 28-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→4) - β-D-glucopyranosyl (1→6) - β-D-glucopyranoside (Ⅳ)。结论　化合物Ⅳ为首次从该属植物中分离得到, 此外循环制备HPLC可作为天然产物、合成医药研究的有效手段。

因为合成化学家已经知道了药物或高通量合成化合物的分子量，所以质谱引导的馏分收集的制备型液相色谱是经常选择的纯化方法。质谱引导的收集馏分的一个重要部件是分流器，它对所收集馏分的纯度有很大影响。本应用报告讨论了分流器的设计和流速分流器的正确配置。

这是一个用Agilent 1100系列纯化系统AS和PS对红三叶中刺芒柄花素和其它植物性雌激素进行分析型和制备型分离的例子。分析型放大方法可用于在Agilent 1100系列纯化系统AS上分离复杂植物粗提物中的化合物。在这个方法的基础上，进行了按色谱峰收集馏分的制备型分离。• 为了获得更多的植物雌激素物质，使用了Agilent 1100系列纯化系统的馏分合并功能• 通过对馏分的再分析测定了所得化合物的纯度• 根据分析结果将方法放大• 为了在一次运行中得到更大量的目标化合物，在Agilent 1100系列纯化系统PS上用两种不同的色谱柱重复了纯化方法制备规模的结果与在分析型系统上得到的结果相当。

在本文中，三泰科技的研发人员利用快速液相制备色谱系统SepaBean machine配合SepaFlash C18反相分离柱对红豆杉植物提取物进行了分离纯化，获得了满足制备需求的目标产品，可用于后续的进一步科学研究中，为此类天然产物的快速制备纯化提供了经济高效的解决方案。

在本应用案例中，样品为合成反应获得的苯并冠醚衍生物，该样品体系复杂，包含多种不同极性的组分，利用常规二元溶剂梯度进行纯化时很难获得良好的分离度。针对样品的具体性质，三泰科技的应用工程师利用四元溶剂系统SepaBean machine T配合SepaFlash 正相硅胶柱，通过不同极性溶剂的在线切换，成功对样品进行了制备纯化，获得了满足制备需求的目标产物，为此类组分极性差异很大的复杂样品体系的分离纯化提供了一种可行的方案。

在样品纯化过程中你是否遇到过五花八门的难点，这个问题对于做制备纯化的小孙来说有太多值得吐槽的地方，如样品极性太小正相模式不保留、样品极性太大硅胶固定相洗脱不下来、样品溶解度太差纯化过程析出或拖尾严重及洗脱不下来等情况。在分离纯化的过程中，难免会碰到溶解性比较差的物质，这类物质有时会对分离纯化造成一些负面的影响，如由于拖尾而影响分离度，甚至是直接析出导致管路堵塞，或者少量试剂不能完全溶解至澄清，而样品纯化之前一定要有解决溶解度的办法，否则带着问题上样纯化效果一定不会很理想。解决样品溶解度的问题没有固定答案，具体样品需要具体分析，本文主要和大家分享小孙在纯化过程中如何处理溶解度较差的样品。

蛋白质的产率和纯度是衡量纯化是否成功的重要指标。除有效的色谱分离外，配置良好、可靠的仪器也能影响纯化的成功。制备型反相(RP)液相色谱由于具有高分离能力，经常被用做多肽和小分子亲水蛋白纯化流程的最后一步。虽然大家都知道反相液相色谱所用的溶剂条件会使蛋白结构变性，但也能通过调节适当的条件再使其复性，特别是小分子蛋白。Agilent 1100系列纯化系统是设计良好、合适的反相色谱的系统。

人脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒人脂多糖结合蛋白(LBP)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人脂多糖结合蛋白(LBP)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人脂多糖结合蛋白(LBP)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人脂多糖结合蛋白(LBP)抗原、生物素化的人脂多糖结合蛋白(LBP)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人脂多糖结合蛋白(LBP)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

本文中的样品为有机光电材料的合成粗品，由某OLED新材料研发公司提供。关于SepaBean machine配合SepaFlash系列分离柱在有机光电材料的快速纯化制备方面的应用，可参阅我们之前发表的另一篇应用案例《SepaBean machine快速制备色谱系统在有机光电材料领域的应用》。

在本应用案例中，样品为极性很强的谷氨酰胺类衍生物，不易溶于正己烷、乙酸乙酯等常用正相流动相，而其在普通C18反相柱上几乎没有保留。针对样品的具体性质，三泰科技的应用工程师利用亲水性的SepaFlash® C18AQ柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine，成功对样品进行了纯化制备，获得了满足制备需求的目标产物，为极性很强的谷氨酰胺类样品的分离纯化提供了一种可行的方案。

人脂多糖/内毒素(LPS)检测试剂盒人脂多糖/内毒素(LPS)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人脂多糖/内毒素(LPS)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人脂多糖/内毒素(LPS)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人脂多糖/内毒素(LPS)抗原、生物素化的人脂多糖/内毒素(LPS)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人脂多糖/内毒素(LPS)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度

制备色谱是一种用于从混合物中分离目标化合物的技术，是很多研究领域和生产过程必不可少的分离和纯化手段。与传统的纯化方法（如蒸馏、萃取、重结晶等）比较，制备色谱是一种更有效的分离方法，因此被广泛应用在样品和产品的提取和纯化上。相较于分析型高效液相色谱关注于分离效率和分离效果等因素外，制备型高效液相色谱同时需要考虑目标产物的产率和纯度的，因此合理的目标馏分收集方式和手段也是制备型高效液相色谱重要的单元组成和重要参数。

硒作为人体必需的微量元素之一，有多种免疫与生物学功能，尤其是预防心血管病、抗肿瘤、抗病毒性疾病以及抗衰老等作用。因此，含硒药物和添加剂等材料成为当今许多科研人员的研究热点。在医药、饲料和食品添加剂等方面，与无机硒化合物相比，有机硒化合物生物活性强、毒性低、吸收率高、污染小，利用有潜力的生物活性成分和无机硒制备具有抑制肿瘤等作用的有机硒化合物具有很大的研究意义。我们选择一种硒化多糖类样品，采用微波消解的方法进行前处理，该方法速度快、空白低、污染小，有利于后续检测设备对硒元素的快速有效测定。

硒作为人体必需的微量元素之一，有多种免疫与生物学功能，尤其是预防心血管病、抗肿瘤、抗病毒性疾病以及抗衰老等作用。因此，含硒药物和添加剂等材料成为当今许多科研人员的研究热点。在医药、饲料和食品添加剂等方面，与无机硒化合物相比，有机硒化合物生物活性强、毒性低、吸收率高、污染小，利用有潜力的生物活性成分和无机硒制备具有抑制肿瘤等作用的有机硒化合物具有很大的研究意义。我们选择一种硒化多糖类样品，采用微波消解的方法进行前处理，该方法速度快、空白低、污染小，有利于后续检测设备对硒元素的快速有效测定。

脂质体（liposome）是一种人工膜，是由卵磷脂和神经酰胺等制得的脂质体(空心)，具有的双分子层结构与皮肤细胞膜结构相同。脂质体具有靶向性和淋巴定向性、缓释作用、降低药物毒性以及提高稳定性等特点，使脂质体具有广泛的应用。主要应用于转基因、药物递送，还可用作将染料递送至纺织品、杀虫剂至植物、酶和营养补充剂至食物以及化妆品至皮肤的载体等，具有广阔的应用领域。本案例中主要以来自某生物医药公司的脂质体样品为例，对其分离纯化方法进行简单的介绍。

在本应用案例中，样品来自某新药研发公司的合成实验室，为合成过程中得到的一对非对映异构体。常规的正相分离无法达到纯化目的，反相高压制备则由于其上样量限制和成本问题也不适合。因此，三泰科技的应用工程师尝试利用快速制备液相色谱仪SepaBean machine T配合SepaFlash C18反相分离柱对样品进行分离纯化，成功获得了满足纯度要求的目标产物，为此类非对映异构体的快速制备纯化提供了经济高效的解决方案。

药物的立体异构体组成是目前药物开发中的一个关键问题。药品申报需要纯的药物异构体，在筛选阶段需评价两种异构体在疗效、毒性或药代动力学方面的差异。因为，实际上在早期开发中进行相关实验只需要有少量的有效药物，所以制备高效液相色谱是从消旋体中分离纯异构体的适当工具。在本应用报告中报道了克级呼吸系统候选药物外消旋体的分离。分离在Agilent 1100 纯化系统上进行。