常温超薄切片系统

请问有哪位同仁知道制备生物、植物样品常温超薄切片及材料方面的冷冻超薄切片内部收费和对外收费是多少呀？想做个参考。多谢！

超薄切片技术是电镜样品的重要制备方法之一，随着科学研究的发展，需对样品的特定部位进行精准超薄切片的领域越来越多，但现有的超薄切片机无法实时原位观测样品的侧切面，导致定位过程繁琐、效率低、精度差。超薄切

向大家请教几个问题，本人刚接触超薄切片，要把一种常温下是脆性固体的材料包埋做超薄切片，现在关于包埋剂的选择有些困难，因为做包埋块有几个问题：1）材料本身很脆，常温下是块状固体，直接切肯定会碎掉，必须要包埋，但是担心粉末状态下与树脂包埋剂混合会混合得不均匀；2）如果液相状态下混合，材料本身需要加热到290~300℃才会液化，这么高温的液体与包埋剂混合，不知道哪种包埋剂会承受；3）也在网上查了一些，像M-Bond 610胶，G1胶貌似都可以，但是关于这两种包埋剂的一些性能和具体适用介绍很少或是不太详细，我本人刚接触这些东西，实在是菜鸟，想请教一下这方面比较熟悉的朋友们，大家能不能给我指点一下，先谢谢了！

各位好，我公司需要研究铝板上的缺陷，需要找到一家可以提供超薄切片的实验室，请帮忙提供信息，特别感激！

做高分子材料的超薄切片,切了一天楞是没切好一片.各位有没有好的经验?

请问一下一般用的超薄切片机有哪些型号，价格大约多少？谢谢！

这次参加催化会议，有位老师提到了对分子筛类材料做TEM观察的时候把样品要先包埋后超薄切片，这样观察时候可以排除活性组分负载于分子筛外表面的情况。我有个问题想向各位版友咨询一下，一般包埋-切片的步骤是否麻烦，需要什么样的原料与设备。包埋时候是不是把我的无机粉末撒到环氧树脂里就成了？树脂固化后只是用切片就可以直接去观察了么？不需要其他减薄手段么？各位对于超薄切片机有没有什么厂家和型号推荐一下啊！多谢了！

电镜产生的电子束穿透能力很弱,必须把样本切成厚度小于200nm以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片。在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本?最常用的制备技术，主要步骤包括包埋聚合?切片、捞片等步骤。

超薄切片机 能切金属吗

用玻璃刀做超薄.水糟,是中镜科仪买的,怎么安装,,不漏水.新手请教用于超薄切片的玻璃刀,如何安装水槽

最近找了些超薄切片的资料，跟大家共享一下吧，有好东西就应该共享的，废话不说了，上资料！

我作的植物样品的超薄切片，在电镜下破损的非常厉害，不知是什么原因，有没有谁有这方面的经验，盼赐教。

单位想购买新的超薄切片机，徕卡UC7目前的报价太贵，RMC公司的POWERTOME X/XL超薄切片机报价相对来说便宜，但没用过，根据他的国内总代所说国内用户有40来家，不知有没有用RMC超薄切片机的朋友常逛本坛，谈谈对此机器的看法？（产品质量，性能稳定性，操作方便性，配件，维修等）

有没有了解超薄切片机的？我现在急需了解，多多帮忙啊，多谢了

[em53] 试样是增韧过后的HDPE 都切快一个月了，还是大不到预期效果 实验室超薄切片机有个不足之处就是没有冷冻台 介绍点经验，怎样切好在没有冷冻台的情况下？

一台Reichert-Jung Ultru E超薄切片机,购于90年,最近几年出现一个问题:冬季当室温较低时,出现"点头"故障,样品臂下降到刀口位置时,无法继续下移,来回晃动,同时伴有"咔咔"声,后来将室温升到25度以上后,切片机有时能恢复正常.不知何故?目前看来该型号切片机属于什么档次?

咨询高分子样品的超薄切片问题？高分子的样品，类似白色塑料，样品倒是很硬的，设定是70nm，可是切片出来的基本是金黄色，片有时也会出现颤痕，不知道什么原因？有谁知道，非常感谢！

求教各位，我在做生物样品的超薄切片时，切面已经调整好，所有步骤均按标准进行，但切70纳米薄切片时，无法切出连续的切片，一直都是切两三刀空切后，突然切出来一片较厚的切片。根本无法挑出满意的薄切片。在各个方面都做了改善，所用玻璃刀也是新制的，但仍然无效？跪求解决办法？

请问大家，我是想看纳米线的截面，所以想做超薄切片，现在有两个问题麻烦大家：1）能否先将纳米线放到乙醇中分散，然后再滴到树脂中进行固化呀？2）做完切片后，能不能直接把滴到微栅上的树脂片拿去做透射？在200KV下，树脂会分解吗，绝缘性的树脂对透射电镜会有损伤吗？

在网上找到的，感觉挺有用的，大家分享．[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=19068]超薄切片[/url]

【网络讲座】：超薄切片技术在材料科学研究中的应用 - 应用实例及实验技巧 【讲座时间】：2016-12-16 14:00【主讲人】：谢佩松，徕卡仪器有限公司，超薄切片技术应用专家 11年超薄切片实践经验，先后4次前往徕卡纳米技术部总部参与学习培训；并多次作为上机指导老师参与国内徕卡超薄切片workshop活动；在材料科学领域，不论是有机高分子材料，还是无机固体材料等都积累有丰富的超薄切片经验。【会议简介】超薄切片技术是一种常见的透射电镜制样技术，在材料科学领域有着非常广泛的应用，尤其适合有机高分子材料和无机粉体材料，可以非常简单方便的获得纳米级切片，供透射电镜观察；对金属材料和其它无机材料也有一定的应用。另外，因为这一技术也可以非常方便的获得样品的截面信息，因此在扫描电镜和原子力显微镜制样方面也有一定的应用。 本次讲座，会展示各种不同类型样品的实验结果，并就各种类型样品制样技巧加以详细阐述，让听众得以充分了解这一技术的应用范围，同时，也能够学习到相应样品的制样技巧。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件：只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名参会：http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/2231 4、报名及参会咨询：QQ群—290101720，扫码入群“电镜”http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191701_669647_2507958_3.gif

请教:超薄切片，没有自动脱水机，如何脱水。没有自动脱水机，没有装标本的支架，用什么东西，装标本，如何脱水？

最近在超薄切片过程中总是遇到这样的问题：修块后样品在正式开始切片时，样品总是非常容易就将钻石刀凹槽中的水吸到其表面，完全无法切片。以前并没有遇到过类似的情况，起初以为是水表面张力过大，尝试兑了一定量酒精，无效；再推测用的水不够纯净，造成一定影响，换了超纯水尝试，依然无果；最后拿出以前已经成功切片的样品进行尝试，结果也非常容易就在表面吸上了水。怀疑是钻石刀有什么异样，然而光镜下看一如以往，唯一奇怪的在于最近每次凹槽中盛的水，倒出来的颜色是蓝色的，似乎表面有褪色，并且看到有过去切的树脂片沾在凹槽表面（不是钻石刀头处）。目前把钻石刀泡在超纯水中加一滴洗洁精泡着。有木有遇到类似问题的大虾给点解决办法，也希望能交流下钻石刀日常维护的经验吧。。

我在兰州，由于没有很好的超薄切片机，所以想请教哪里可以较好的做高分子材料的超薄切片及其透射电镜？做过的同仁帮帮忙了！最好提供做实验的联系电话及其价格！

我们购买了一台徕卡的超薄切片机，现在准备买试剂。其中染色液，柠檬酸铅，还有醋酸铀，是在哪儿买？还有怎么配？据说那些东西都有很大的毒性，而且对配制要求很高，不能接触二氧化碳什么的？拜托各位专家给点意见，我现在连在哪儿买都不知道的说……唉！今年刚入职……万分感谢！

二氧化硅基质微粒（粒径100um），表层为有机聚合物层（厚度20nm），想观察其核壳结构和表层有机层的厚度，请问高手这种复合材料的超薄切片如何做？？感激不尽！

[align=center][font='times new roman'][size=20px]获得一张完美超薄切片的“八要素”[/size][/font][/align][align=center]吴佳楠，魏 潜[/align][align=center][font='楷体']（中国农业科学院作物科学研究所，重大平台中心，北京100081）[/font][/align][align=left][font='times new roman']摘要：[/font][font='times new roman']组织细胞经过取材、固定、清洗、脱水、渗透、包埋和聚合、切片、染色[/font][font='times new roman']等一系列[/font][font='times new roman']的技术流程被制备成超薄切片后才能在透射电子显微镜下观察其超微形态结构。由于前期制样的环节多且复杂，每一个环节出现一些微小失误，经过叠加都会被放大，在进行超微结构观察时就会出现褶皱、空洞、裂纹、污染等“人工假象”。要去除这些“人工假象”，就需要在每个环节按照规定的要求仔细的操作，并时刻观察样品的状态，挑选符合要求的样品进入下一环节。这八个环节规定的要求[/font][font='times new roman']包含着[/font][font='times new roman']制备组织细胞超薄切片的关键点，也是获得完美电镜照片的关键点，这些关键点可以统称为“八要素”。[/font][/align][font='times new roman']关键词[/font][font='times new roman']：[/font][font='times new roman']透射电子显微镜；细胞结构；制样；切片；污染；[/font][align=left][font='楷体']中图分类号：Q-336；Q246；Q942.4[/font][/align][align=center][font='times new roman'][size=20px]The "eight Elements" to get a perfect picture of ultrastructure[/size][/font][/align][align=center][font='times new roman']WU Jianan[/font][font='times new roman'][sup][size=13px] [/size][/sup][/font][font='times new roman'],WEI QIAN[/font][/align][align=center][font='times new roman']([/font][font='times new roman']Major Platform Center, Institute of Crop Sciences, [/font][font='times new roman']Chinese [/font][font='times new roman']Academy of Agricultural Sciences,Beijing[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']100081, China[/font][font='times new roman'] )[/font][/align][font='times new roman']Abstract[/font][font='times new roman']：[/font][font='times new roman']Tissue cells were prepared into ultrathin sections by sampling, fixation, cleaning, dehydration, infiltration, embedding [/font][font='times new roman']as well as[/font][font='times new roman'] polymerization, slicing, staining and other technical processes before[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']ultrathin sections could be observed under transmission electron microscope. Due to the [/font][font='times new roman']number[/font][font='times new roman'] and complex[/font][font='times new roman']ity of the[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']processes[/font][font='times new roman'] of sample preparation in early stage[/font][font='times new roman']s[/font][font='times new roman'], small mistakes in each [/font][font='times new roman']process[/font][font='times new roman'] will be magnified after superposition, [/font][font='times new roman']which may lead to[/font][font='times new roman'] "artificial illusion" such as folds, voids, cracks and pollution [/font][font='times new roman']during[/font][font='times new roman'] observ[/font][font='times new roman']ation[/font][font='times new roman']. To remove these "artificial illusion", it is necessary to operate carefully in accordance with the requirements of each [/font][font='times new roman']process[/font][font='times new roman'], and observe the [/font][font='times new roman']status[/font][font='times new roman'] of[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']sample[/font][font='times new roman']s[/font][font='times new roman'] at all times, and select sample[/font][font='times new roman']s[/font][font='times new roman'] that meet the requirements to enter the next [/font][font='times new roman']process[/font][font='times new roman']. The requirements specified in these eight steps are the key points for preparing ultrathin sections of tissue cells and obtaining perfect electron microscope pictures. These key points can be collectively referred to as the "eight elements".[/font][font='times new roman']Keywords：[/font][font='times new roman']Transmission electron microscope Cell structure Sample preparation. Slice Pollution [/font][font='times new roman']超薄切片是[/font][font='times new roman']透射电子显微镜[/font][font='times new roman']观察[/font][font='times new roman']生物体组织细胞超微结构的[/font][font='times new roman']主要载体[/font][font='times new roman']。超薄切片[/font][font='times new roman']的制备需要经过一系列的技术操作，包括[/font][font='times new roman']组织目标位置[/font][font='times new roman']的[/font][font='times new roman']取材固定[/font][font='times new roman']、[/font][font='times new roman']清洗、脱水、渗透、包埋和聚合、切片和染色等。[/font][font='times new roman']超薄切片的质量影响着组织超微结构，这取决于每一个环节需要按照技术要求操作，而这些技术要求中涉及到一些关键点，这些关键点可以称为[/font][font='times new roman']制备一张完美的超薄切片的[/font][font='times new roman']八个[/font][font='times new roman']关键要素，简称“八要素”。[/font][font='times new roman'][size=18px]1完美超薄切片的“八要素”[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.1取材要精准[/size][/font][font='times new roman']取材是进行超薄切片制备的第一步，也是关键的一步。取材位置的准确与否，关系到超薄切片中是否包含需要观察的组织；在确定取材位置的前提下，样品块的大小在一定程度上影响着超薄切片的质量。所以在进行取材之前，需要查阅相关文献，确定实验目的，从整体把握所需观察的组织细胞位于植株的相对位置[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][1][/size][/sup][/font][font='times new roman']。对于有特殊观察位置的[/font][font='times new roman']组织[/font][font='times new roman']要将观察位置限定在取材范围的中心部分，再向四周扩充部分组织，用以保护观察位置，防止取材时的人为损伤。由于固定液渗透速率的限制，样品块的大小要控制在1mm[/font][font='times new roman'][sup][size=13px]3[/size][/sup][/font][font='times new roman']以内，对于无法将组织的各个层面控制在1mm[/font][font='times new roman'][sup][size=13px]2[/size][/sup][/font][font='times new roman']以内，至少要保证有一组相对位置的组织面积为1mm[/font][font='times new roman'][sup][size=13px]2[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。比如横截面较大的植物茎秆，保证茎秆的取样高度在1mm以内，根据横截面的大小进行2-[/font][font='times new roman']4[/font][font='times new roman']等分，最终得到高度为1mm的扇形茎秆组织，尽可能的保存相对较多的维管组织，便于在光镜定位时有可选择性。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405052537_1192_3446098_3.jpeg[/img][align=center][font='times new roman']图1 茎秆取材方式[/font][/align][font='times new roman']同一处理中的不同植株有不同的生长状态，在组织结构上也有明显的差异，不同植株在取材时产生的偏差会对实验结果带来不利的影响[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。所以在进行取材时，对照组和处理组的取材要结合植株的具体生长状态决定，要做到具有相对参考性。为了提高结果的可靠性，需要在严格控制的条件下通过重复试验进行验证，包括同一处理不同植株和同一处理不同批次的重复试验[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman'][size=16px]1.2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]固定要及时[/size][/font][font='times new roman']细胞是生物体进行生物化学作用的主要场所，富含大量的酶。当组织离开生物体后，其细胞会因为酶的作用发生降解，细胞内的各种细胞器也会随之发生变化。所以在取材的时候要尽快的进行固定，固定液可以与组织细胞内的蛋白质、脂质、糖原等生物大分子发生交联反应，在分子水平上保持细胞的生活状态，防止细胞超微结构的损伤[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][3][/size][/sup][/font][font='times new roman']。同时，固定液与生物大分子产生稳定的交联结构，可以有效的防止细胞结构在清洗和脱水过程中的丢失。固定液的渗透存在一定的阻力，通过抽真空的方式加速固定液的渗透，同时也可以将植物组织中的空气抽出，获得良好的固定效果。对于不易固定或者长时间漂浮在固定液面上的组织，可以通过在固定液中滴加Trion X-100、Tween-20的方式提高固定效果。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405048943_7757_3446098_3.jpeg[/img][align=center][font='times new roman']图2 [/font][font='times new roman']固定良好与固定不良的叶绿体（bar：2um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：[/font][font='times new roman']固定良好[/font][font='times new roman']的叶绿体；2：[/font][font='times new roman']固定不良的叶绿体[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.3清洗要彻底[/size][/font][font='times new roman']组织细胞经过醛类固定液固定后，需使用相同的缓冲液充分漂洗，才能进行后固定。残留的醛类固定液会与后固定使用的四氧化锇反应产生沉淀；经四氧化锇后固定的组织细胞在脱水之前也需要使用形同的缓冲液充分清洗，洗去未参与反应的四氧化锇，这些残余的四氧化锇会被脱水使用的乙醇还原，产生不溶性的二氧化锇沉淀[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。这些沉淀的形态，在电镜下可见为细小的颗粒状，主要积附在细胞结构的脂膜、基质等部位，是一种“人工假象”，影响组织细胞超微结构的观察。[/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405057967_8886_3446098_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman']图3 [/font][font='times new roman']清洗彻底与不彻底的叶绿体（bar：2um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：[/font][font='times new roman']清洗不彻底造成的黑色颗粒污染“锇黑”[/font][font='times new roman']；2：清洗干净无黑色颗粒污染[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.4脱水要充分[/size][/font][font='times new roman']生物样品需要脱水的因素有以下几点：[/font][font='宋体']①[/font][font='times new roman']生物组织含水量较高，直接用于电镜观察会污染镜筒[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']；[/font][font='宋体']②[/font][font='times new roman']电镜的真空环境会抽提组织中的水分造成细胞结构塌陷；[/font][font='宋体']③[/font][font='times new roman']渗透所需的树脂不溶于水，需要使用有机试剂将组织内[/font][font='times new roman']外[/font][font='times new roman']的水分置换[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][4][/size][/sup][/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']需要注意的是，不同的组织所需的脱水时间是不一样的。对于有细胞壁和液泡的植物组织，其脱水时间就要比动物组织相应的延长，以此来保证脱水的充分，因为残余的水分会造成细胞结构肿胀，出现空腔[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][2][/size][/sup][/font][font='times new roman']。同时残留的水分也会影响树脂的渗透，导致局部结构破碎。因此，脱水时间要根据样品的特性进行适当调整。但是，过分的脱水会导致细胞结构丢失，这也是一种人为假象。[/font][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405052448_6233_3446098_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman']图4 脱水[/font][font='times new roman']问题（bar：2um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：脱水[/font][font='times new roman']不充分产生空腔（[/font][font='times new roman']红色箭头指向部分[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']；[/font][/align][align=center][font='times new roman']2：脱水充分的叶绿体没有空腔[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.5渗透要均一[/size][/font][font='times new roman']生物组织较为柔软，需要以树脂作为[/font][font='times new roman']载体[/font][font='times new roman']，为超薄切片提供应力支撑，同时也保证生物切片能够耐受电子束的轰击。植物组织细胞存在一些较难渗透的结构，如细胞壁、淀粉粒、脂质体等，渗透不良会造成这些结构与周围组织硬度不均一，在切片的时候产生褶皱、颤痕、裂纹[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][5][/size][/sup][/font][font='times new roman']，甚至部分组织细胞会在在切片的时候碎片化，影响超微结构的观察。[/font][font='times new roman']通过以下几个方面可以有效的增加渗透的效果：[/font][font='宋体']①[/font][font='times new roman']在树脂的选择方面，植物组织可以选择黏度低、渗透速率较快的Spurr树脂，配置比例参照坚硬配方；[/font][font='宋体']②[/font][font='times new roman']配置、保存树脂和渗透[/font][font='times new roman']、包埋[/font][font='times new roman']所需的容器最好提前一天在[/font][font='times new roman']烘箱中[/font][font='times new roman']72[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']烘烤过夜，去除吸附在表面的水分；[/font][font='宋体']③[/font][font='times new roman']Spurr树脂配制需将四个组份按比例混合，使用磁力搅拌器充分搅拌均匀，保证每一滴树脂的成分均一；配制好的树脂若当天不使用，需放在4[/font][font='宋体']℃[/font][font='times new roman']冰箱中低温保存，室温[/font][font='times new roman']下[/font][font='times new roman']树脂[/font][font='times new roman']会[/font][font='times new roman']缓慢聚合、黏度增加；[/font][font='宋体']④[/font][font='times new roman']树脂渗透采用抽真空的方式辅助进行，利用外力增加渗透效果，同时在真空皿中铺一层吸水硅胶，防止树脂渗透的时候吸潮；[/font][font='宋体']⑤[/font][font='times new roman']根据植物组织种类调整树脂渗透的时间和次数，对于坚硬或者致密的组织，树脂渗透的次数要增加，时间要延长；[/font][font='宋体']⑥[/font][font='times new roman']每次更换树脂的时候，要尽可能的吸走组织表面附带的多余树脂，可以采用将组织从待更换的树脂中挑出，放入新树脂中的方法，减少老旧树脂的残留。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405060340_3508_3446098_3.jpeg[/img][align=center][font='times new roman']图5 [/font][font='times new roman']渗透问题对比（bar：5um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：[/font][font='times new roman']渗透均一[/font][font='times new roman']的茎秆组织；2：[/font][font='times new roman']渗透不均[/font][font='times new roman']一的茎秆组织有[/font][font='times new roman']裂纹（[/font][font='times new roman']红色箭头指向部分[/font][font='times new roman']）[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]包埋要定向[/size][/font][font='times new roman']植物组织生长具有明显的方向性，要根据观察部位相对于组织整体的位置确定包埋的方向。在包埋聚合时，组织在包埋板中的位置会发生偏移，需要定时进行调整，一般在聚合开始前的4-6小时，树脂[/font][font='times new roman']会呈现由粘稠到稀薄的变化过程[/font][font='times new roman']，可以利用牙签深入树脂中调整组织位置；当超过6小时之后，树脂的粘稠度会直线上升，调整组织位置会受到较大的阻力，组织容易受损。对于方向偏移的组织，切片呈现的细胞形态及排列会发生变化，甚至形变，这对于观察细胞生长发育变化和组织半薄定位产生较大的影响。所以，在包埋的时候一定要控制好样本的方向性，防止它在聚合的过程中发生位置偏移。[/font][align=center][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img][/align][align=center][font='times new roman']图6 水稻根[/font][font='times new roman']尖中柱细胞（红色方框标注部分）[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.7[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]切片要平整[/size][/font][font='times new roman']切片是呈现细胞形态关键环节，厚度一致、平整连续的切片是一个组织前处理良好的标准之一。若在切片上出现刀痕、颤痕、褶皱、切片破损现象，可以在一定程度上反应组织的渗透、树脂块的硬度、切片刀、切片环境等问题。[/font][font='宋体']①[/font][font='times new roman']刀痕（异物损伤）：刀痕是垂直于刀口并纵贯切片的划痕[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][6][/size][/sup][/font][font='times new roman']，会破坏细胞结构，一般是由于组织块中有硬质颗粒，损伤刀口后在切片上留下痕迹；或者组织块破碎掉下来的粉末，粘在刀口上，反过来损伤切片[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][7][/size][/sup][/font][font='times new roman']。这[/font][font='times new roman']些都是[/font][font='times new roman']因为树脂渗透不良[/font][font='times new roman']造成的，[/font][font='times new roman']可以修掉硬质颗粒和破碎的组织、清洗掉粘在刀口上的颗粒后再切片。[/font][font='宋体']②[/font][font='times new roman']颤痕（[/font][font='times new roman']震动[/font][font='times new roman']损伤）：颤痕是平行于刀口而横贯切片的、平行排列、切片厚度周期性变化的一组波纹。主要是因为树脂软硬程度不同（内部）和样品头松动、环境波动（外部）两种因素造成的。内部因素的产生在于树脂渗透不良、树脂配制时混合不均匀、树脂比例不合适[/font][font='times new roman']、较软[/font][font='times new roman']（spurr树脂可以增加736的比例）、聚合不彻底等，可以通过将树脂块进一步修整缩小切面、在烘箱中高温烘烤树脂块、增加刀角、降低切片速度等进行调整[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][7][/size][/sup][/font][font='times new roman']；对于外部因素，则需要考虑切片机的震动、切片环境的稳定程度（是否有风）、样品头的松紧、树脂块的长短等，逐项排除、确定问题、进行调整。[/font][font='宋体']③[/font][font='times new roman']褶皱（挤压损伤）：褶皱有两种形态，一种是在切片中形成的，渗透不良、质地较软的组织，在切片时受到刀刃的挤压形成褶皱，电镜下观察为波纹状；另一种是在捞片过程中形成的，在于捞片时槽液的颤动和有膜载网亲水性不均一，使得切片贴合载网的过程中受到干扰，从而形成不规则的长线状褶皱[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][8][/size][/sup][/font][font='times new roman']。增加渗透时间和次数、提高渗透效果、调整树脂的比例；使用捞片环捞片、增加载网的亲水性可以在一定程度上减少褶皱的形成。[/font][font='宋体']④[/font][font='times new roman']切片破损（[/font][font='times new roman']缺失损伤[/font][font='times new roman']）：切片空洞和切片碎沫化都是切片破损。固定时真空不足、换液接触空气、树脂渗透不充分是形成切片空洞的主要因素[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][9][/size][/sup][/font][font='times new roman']，电镜下可见部分组织缺失，被圆形空腔取代且无树脂填充；脱水不充分、树脂吸潮或者渗透不充分则会导致切片呈现碎沫化，或者切片漂浮在水面上片刻后[/font][font='times new roman']化[/font][font='times new roman']开，主要在于组织中残留水分。解决上述问题的关键在于减少空气的干扰、防止水分渗入、保持环境干燥、脱水渗透要充分。[/font][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405062147_3733_3446098_3.jpeg[/img][align=center][font='times new roman']图7 [/font][font='times new roman']切片问题（红色箭头指向部分）（bar：10um）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：[/font][font='times new roman']切片刀痕（异物损伤）[/font][font='times new roman']；2：[/font][font='times new roman']颤痕（[/font][font='times new roman']震动[/font][font='times new roman']损伤）[/font][font='times new roman']；[/font][/align][align=center][font='times new roman']3：[/font][font='times new roman']褶皱（挤压损伤）[/font][font='times new roman']；4：[/font][font='times new roman']空洞（[/font][font='times new roman']缺失损伤[/font][font='times new roman']）[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]1.8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]染色要干净[/size][/font][font='times new roman']生物组织的主要成分为C、H、O、N，对高能电子束的散射能力较弱，在电镜下成像的衬度较差[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][10][/size][/sup][/font][font='times new roman']，细胞结构信息不清晰。由于重金属染液对细胞结构有特异性的结合能力，经染色后的组织切片对电子束的散射能力因结合重金属的多少而不同，在电镜下呈现出结构清晰的电镜图片[/font][font='times new roman'][sup][size=13px][11][/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=13px][12][/size][/sup][/font][font='times new roman']。[/font][font='times new roman']然而，在实际的染色过程中，由于环境和pH的影响，染液成分会在切片上形成沉淀，沉淀对电子束的散射能力较强，在电镜下呈现出黑色颗粒，对组织细胞超微结构的观察产生影响。不同染液的沉淀形态和形成的因素不同（表1），但从整体上控制染液的pH、保证环境温湿度在合理的范围内，保证染色在密闭的环境下进行，可以大大减少染液沉淀的形成。[/font][align=center][font='times new roman']表1 染液沉淀形态与形成因素[/font][/align][table][tr][td][align=center][font='times new roman']染液种类[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']沉淀形态[/font][/align][/td][td=2,1][align=center][font='times new roman']形成因素[/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,5][align=center][font='times new roman']柠檬酸铅[/font][/align][/td][td=1,5][align=center][font='times new roman']不规则块状（图7a）[/font][/align][/td][td=1,2][align=center][font='times new roman']CO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']污染[/font][/align][/td][td][align=center][font='times new roman']配染液的水未除CO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][/align][/td][/tr][tr][td][align=center][font='times new roman']染色时CO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']污染[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']染液pH降低（吸收CO[/font][font='times new roman'][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font][font='times new roman']）[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']染色环境潮湿[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']未冲洗干净，染液残留[/font][/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center][font='times new roman']醋酸双氧铀[/font][/align][/td][td=1,3][align=center][font='times new roman']细长针尖状（图7b）[/font][/align][/td][td=2,1][align=center][font='times new roman']长时间存放，见光分解，pH4[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']染色时染液干燥[/font][/align][/td][/tr][tr][td=2,1][align=center][font='times new roman']未冲洗干净，染液残留[/font][/align][/td][/tr][/table][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209191405056257_5413_3446098_3.jpeg[/img][/align][align=center][font='times new roman']图7 [/font][font='times new roman']染色污染（红色箭头指向部分）[/font][/align][align=center][font='times new roman']1：铅[/font][font='times new roman']污染[/font][font='times new roman']；2：:铀[/font][font='times new roman']污染[/font][/align][font='times new roman'][size=18px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=18px] [/size][/font][font='times new roman'][size=18px]结论[/size][/font][font='times new roman']生物组织需经过取样、固定、清洗、脱水、渗透、包埋、切片和染色等八个主要步骤获得的超薄切片，主要应用于超微结构的观察，是形态学研究中的基础部分，可以认为是后续“进阶”实验的基石。超微结构的真实完整是实验结果可信度的来源，一张高质量的超薄切片便是来源的依据。一张超薄切片的诞生经历的过程复杂，关键点众多，需按照每一阶段规定的要求，仔细操作、认真完成，才能在透射电子显微镜下呈现真实完美的细胞超微结构。[/font][font='times new roman'][size=18px]参考文献：[/size][/font][1] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]周晨明，朱艳，孟丽，等.透射电镜样品取材和固定应注意的若干问题[J].医学理论与实践，2020,33(14):2416[/color][/size][/font][2] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]丁明孝，梁凤霞，洪健，等.生命科学中的电子显微镜技术[M].1.北京：高等教育出版社，2021，11.[/color][/size][/font][3] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]周卫东, 韦存虚, 陈义芳,等. 不同固定方法对水稻胚乳细胞超微结构的影响[J]. 扬州大学学报：农业与生命科学版, 2005, 26(3):48-51.[/color][/size][/font][4] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]董渭祥, 高小彦. 植物超薄切片制备技术[J]. 植物生理学通讯, 1982(5)：32-35.[/color][/size][/font][5] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]黄静, 彭彬. 常规透射电镜生物样品制样条件的摸索总结[J]. 川北医学院学报, 2021,35(1):119-121.[/color][/size][/font][6] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]吕广艳, 高船舟, 曲淑贤,等. 透射电镜超薄切片污染产生的原因及对策[J]. 医学信息(上旬刊), 2006, 19(12):2195-2196.[/color][/size][/font][7] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]肖欣, 周正平. 生物样品透射电镜超薄切片质量问题探讨[J]. 贵州医药, 2015, 39(12):1103-1104.[/color][/size][/font][8] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]金立强, 张东生. 超薄切片皱褶的形成特点和消除方法[J]. 南京医科大学学报：自然科学版, 2007, 27(2):207-208.[/color][/size][/font][9] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]马莉, 张欠欠, 王逢会. 电镜超薄切片常见问题初探[J]. 现代妇女：理论前沿, 2014(12):224.[/color][/size][/font][10] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]黄远洁, 莫肖敏, 孟春梅,等. 3种常规透射电子显微镜超薄切片染色方法的对比分析[J]. 广西医科大学学报, 2015, 32(6):912-913.[/color][/size][/font][11] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]何晓华, 刘斌, 郭付振. 生物样品超薄切片染色方法的改进[J]. 教育教学论坛, 2019(47):74-75.[/color][/size][/font][12] [font='times new roman'][size=14px][color=#000000]祁荣, 郭丽. 透射电子显微镜超薄切片批量染色方法的建立[J]. 中国医药科学, 2022, 12(9):32-34.[/color][/size][/font]

最近好多版友对超薄切片感兴趣，在尚丰科技报导上看到一篇文章，转过来给大家看看。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=19616]超薄切片在材料科学电镜制样上的应用[/url]

大家好！我今天使用Leica UCT 超薄切片机时，不小心将刀架移动台移出了三角形的区域，已经超过了三角形的最大边。机子往前进和往后退都报警，现在不知道哪位朋友以前遇到过这种情况，并且是怎么解决这个问题的？我刚才问Leica的工程师，他们说上门服务要收至少3千块钱，我怕被领导批评，很担心。要是有哪位朋友知道，可以告诉我怎么处理,，谢谢大家了，请多多关注！

请问生物样品超薄切片后没有染色应该如何保存？另外染色后应该如何保存？可以存放多久没有变化？