快速纯化色谱系统

有谁用过快速制备、快速纯化系统，可否讲讲它的好处以及它的应用领域。谢谢！

[size=5]最近学校买了台天津博纳艾杰尔agela CHEETAHTM系列中压快速纯化制备系统，以前没用过此类制备色谱，请问哪问有CHEETAHTM使用说明啊？请多多指教！[/size]

快速色谱法(Flash chromatography)是制备液相色谱中法中的一种，通常用于有机化合物的分离。快速色谱法具有操作容易、价格便宜、分析快速的优点，在纯化有机化合物应用方面，几乎没有其它技术可以和快速色谱法相媲美。快速色谱法已成为通过纯化进行正相分离的通用方法。快速色谱法是一项典型的低压技术，科学家们正在使用真空或泵技术在中压条件下加速快速色谱的分离过程。色谱柱内填充粒径为40~60 mm的硅胶吸附剂。低粘度的流动相需选用较小的粒径。传统的快速色谱则需要科学家们根据测试需要填充色谱柱，因而许多色谱柱变成了一次性的预制快速柱。　　快速色谱经常用于规模放大从薄层色谱分离后的正相化学物质。。快速色谱的需求主要来自制药业(51%)、生物技术(25%)和学术机构(8%)，这三个行业占据了快速色谱84%的市场份额。在制药业，快速色谱应用广泛，包括少量化合物、多肽的纯化以及天然产物的纯化。　　快速色谱的总体市场行情处于持续上升趋势，特别是在生命科学领域。有机化合物及多肽的合成方面的应用持续拉动快速色谱系统市场的增长。事实上，快速色谱系统有望在接下来的5年中实现两位数增长。

[b]摘要[/b]羧酸类化合物尤其是苯甲酸类化合物是许多活性药物成分（Active Pharmaceutical Ingredients, API）的关键中间体，例如解热镇痛药物阿司匹林等，具有广泛的应用价值。使用传统硅胶作为固定相的色谱柱来分离纯化这类化合物是一大难题。SepaFlashC18反相柱结合快速液相制备色谱系统SepaBean machine具有良好的分离性能。本文利用SepaFlashC18反相柱分离并纯化了两种强极性的苯甲酸类化合物(结构式如图 1所示)，结果表明混合物样品得到了很好的分离，为此类具有一定极性与亲水能力的化合物的快速分离纯化提供了一种经济实用的解决方案。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/ef626cec836f4fb3b96d55bd7021d780.png[/img][/align][align=center][b]图1. 两种苯甲酸类化合物[/b][/align][b]实验部分[/b]上述两种苯甲酸类化合物的混合物样品在普通硅胶柱上的分离效果较差，无法满足广大化学工作者对分离提纯的要求。常州三泰科技公司的SepaFlash Bonded Series C18 反相柱采用超纯无定型硅胶基质的填料 (参见表1)，其特性能够满足对这类化合物进行分离纯化的要求。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/66929ca91fd4442bb491686bb06b3c3b.png[/img][/align][align=center][b]图2. 快速液相制备色谱系统SepaBeanTM machine[/b][/align][align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/f35b1f1075094b88975ab7e5a8635aa4.jpg[/img][/align]本文利用SepaFlashC18反相柱结合快速液相制备色谱系统SepaBeanTM machine（参见图2），对两种苯甲酸类化合物的混合物样品进行了快速分离纯化，实验参数参见表2。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/21d61f4e6cfa46ed8895e19874f4ec06_th.png[/img][/align][b]结果与讨论[/b]在规格为25 g的SepaFlashC18反相柱上对苯甲酸类化合物样品的分离图谱如图3所示。整个分离制备过程大约用时 0.5 h，仅消耗溶剂约500 ml，只需采用常规的梯度洗脱方法，样品最终获得了理想的保留时间及令人满意的分离效果。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/f66dee01c21c4f0780ebd6342ce73817_th.jpg[/img][/align][align=center][b]图3: 苯甲酸类化合物样品的快速分离制备图谱[/b][/align][b]关于SepaFlash Bonded Series C18反相柱系列产品[/b]SepaFlash Bonded Series C18反相柱系列产品具有多种规格（参见表3及图4）。另外，对于大多数强极性化合物，在一般反相色谱柱上不保留或者保留很弱，可以考虑更换为HILIC分离模式。[align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/9b9a70a87b504762a367e68e8cfbc061_th.png[/img][/align][align=center][img]http://img.mp.itc.cn/upload/20170505/041c85ad3ea54c3f936680544875cb3d_th.png[/img][/align][align=center][b]图4. SepaFlash Bonded SeriesC18反相柱[/b][/align][b]关于SepaBean™ machine快速液相制备色谱系统[/b]SepaBean™ machine一款快速液相制备色谱系统，拥有国家专利保护。除了常规的分离纯化功能外，还具备强大的学习能力和数据共享功能，为科研工作者挑战更多更复杂的分离纯化难题助力。

溶剂纯化系统http://www.zhonghuida.com/imageRepository/367772f9-d0a6-4513-ad18-97358b20c4ff.png产品特点 新型醇和胺类溶剂干燥柱及过滤设计 各种配置和尺寸 取代传统热蒸馏除水方法 完全避免蒸汽间交叉污染 可隔绝空气提取超干燥和无氧溶剂 可同时接收所有溶剂 顶部空出通风位置 可集成手套箱 带可移动支架及阻燃柜 标准 5 加仑溶剂储存罐采用惯用的防泄漏螺 旋盖子和 Swagelok 快速拆卸阀，便于操作和溶剂续装。系统通过一个可伸缩夹子接地，防止静电危害，保证安全操作环境。系统纯化柱处理容量为 800L，柱子可以再生或者更换。可选择台式、可移动式和固定式几种型号。http://www.zhonghuida.com/imageRepository/67eb511e-fa32-476d-aea6-601ddeaa72e9.gif 在低氮压力下，溶剂从储液罐中被迫进入分别装有活性铝（activated alumina）及铜（Copper）的纯化圆管进行除氧脱水，并通过过滤器除去微小颗粒。处理后的溶剂会排到已抽真空并被氮洗涤过的玻璃器皿中。 每种溶剂包含两条纯化圆管，不锈钢，经压力测试，可净化800升溶剂（再生程序需要之前）。技术参数材料框架材料：铝 处理方法：阳极化抛光 管件材料：304 不锈钢接头和阀门：Swagelok 不锈钢泄漏率氦质谱仪法未检测到有泄漏分配器不锈钢 24/40-14/20-29/24-Luer Lock 针型阀通风可选排风管气体参数内部气体压力：5 PSI 惰性气体：N2 – Ar 气体连接：只需一个气体供应点，可同时分配给不同溶剂纯化柱参数纯化柱材料：依溶剂不同而不同微粒过滤：纯化柱配备 7micron 不锈钢微粒过滤器净化能力：吸水能力为 5%重量含量 最终水氧含量水平：低PPM 级可净化溶剂芳香和脂肪族碳氢化合物：戊烷，己烷，环己烷，正庚烷，甲苯，苯 醚类：乙醚，四氢呋喃，二甲醚 含氯溶剂：二氯甲烷，氯仿，氯苯 胺类溶剂：三乙胺，吡啶，二异丙基乙基胺 醇：甲醇，乙醇其他通用溶剂：乙腈，DMF，DMSO，丙酮 其他定制溶剂阀门导向阀门：每种溶剂皆有 五通阀门以控制溶剂、气体和真空 安全阀门：歧管在外露铝质框架内，包含真空显示表，调节器及安全阀，避免玻璃器皿过分受压计量阀门：利用 计量阀门来控制输出流量 对比内容 传统蒸馏新型溶剂纯化系统纯化结果（正己烷中的水）20PPM1PPm使用安全性需要加热沸腾，有危险无须加热，密闭安全使用便利性较复杂简便，易掌握纯化所需时间几小时几分钟综合使用成本较高较低

制备型高效液相色谱系统的应用领域制备型高效液相色谱系统主要应用在植化、合成、制药、生物及生化等领域的产品的提取及纯化工作中。在不同的工作领域中，组份的提取和纯化量的差异是很大的。在生物技术领域中，酶的分离是微克级；在植化和合成化学领域中，为了鉴别未知成份并进行结构测定，需要得到一至若干毫克的纯品；在药品和医药学测试中，需要克级的标准品和对照品；在当今的工业级提纯中，制药成份往往需要千克级的提取。制备型高效液相的应用领域可以归纳在下表中。 成份量:所在领域 微克: 生物技术领域的酶的分离、生物学和生化学测试 毫克: 结构描述和特征鉴定，包括：生产中的副产品、生物矩阵的新陈代谢产物、天然产物 克级: 对照品（分析标准）毒物学分析所需组份：高纯品中的主要成份、副产品的分离提取 千克级:工业规模生产，活性成份，药物 制备方法的发展和扩大规模的计算　　在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1:100000。进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1:100）。 在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。而在制备液相中，最大的区别就是超量进样。其结果，超量进样的方法和分析方法的放大将在下章内介绍。 吸附变化线　　分析液相的目的是给一种组份定性、定量。重要的色谱参数有溶解度、峰宽和峰的对称性。如果进样量越来越多，峰高和峰面积会增加，但峰的对称性和容量因子保持不变。如下图。 　 在分析液相中，最佳的峰形应是一条高斯曲线。峰的标准背离 бV 描述了其对称性和与高斯曲线的相似性。容量因子是与一种不保留物质的保留时间t0相关的保留时间。　 如果将超过一定量的样品注射进色谱柱，吸附变化线就会成非线性。这意味着峰形会变的不再对称，表现为严重的拖尾和容量因子的缩小。如下图。在制备液相中，这种效果称作浓缩超量进样。在一些情况中，根据进样量的增加，容量因子也相应变大，并造成很强的前峰。既然吸附变化线取决于组份的多少，那么液相色谱柱的载样能力就必须根据不同的制备液相实验来决定。 色谱柱载样和超量载样　　大样品量的纯化有两种可行的方法：分析系统的放大或色谱柱超量载样。分析系统的放大意味着使用直径更大的制备柱、更高的流速和根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变。峰形仍会保持尖锐而对称。这种方法需要大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品，因此这种方法是不经济的。 因此色谱柱超量载样，暨在相同的分析条件下超量进样通常是一种很好的选择。使用色谱柱超量载样的方法，在分析柱上甚至可以进行毫克级的分离。但更大 量的样品分离就需要整个系统的放大。色谱柱超量载样可以通过两钟方法进行— 浓缩法和体积超载法。　在浓缩法中，样品的浓度会提高，但进样体积保持不变。容量因子k’降低，同时峰形从高斯曲线变为矩形。如下图。浓缩法超量载样只有在样品组份在流动相中具有良好的溶解性的条件下才有可能采用。 　　如果样品组份的溶解性很差，浓缩法超量载样不能使用。同时更多的样品体积注射到色谱柱中，这种技术称作体积法超量载样。超过一定的进样体积，峰高不变，但峰变宽并且呈矩形。在制备液相中浓缩法超量载样比体积法超量载样更受欢迎，因为可被分离的样品量更高。既然组份的溶解性通常是一个限制因素，所以两钟超量载样技术通常被结合起来使用。两种技术的概览浓缩法超量载样 　 体积法超量载样 取决于组份在流动相中的溶解性 　 取决于进样体积 吸附变化线的制备部分 　 吸附变化线的分析部分 生产效率决定于选择性 　 生产效率决定于制备柱直径 受固定相粒度大小的影响不大 　 需要小颗粒填料 方法的放大　浓缩法超量载样和体积法超量载样都会导致组份溶解性的降低。既然组份的分离需要一定的溶解性，那么在放大分析方法的时候，优化溶解性、特别是选择性就是一项很重要的工作。 　　因为选择性和超量载样潜力是相互依靠的，选择性的提高会提高一次运行中所分离的样品量，因此从分析方法到制备方法的放大和方法的优化需要三个步骤。 1. 优化分析方法的选择性。2. 在分析柱上进行超量载样。3. 放大到制备柱 制备型高效液相色谱的目的　　判断制备型高效液相色谱使用的结果有三个重要参数：产品的纯度、产量和生产效率。三个参数之间是相对独立的，因此很难同时使用这三个参数来优化制备型高效液相色谱方法。见图形6。 色谱图1显示在制备型高效液相色谱的使用中有很高的生产效率，但是两种组份的分离效果却是很差的。这种方法很可能得到两种组份的高纯品，但是产量和收率却是很低的。　 在色谱图2中峰有很好的分离，因此这种方法可以得到两种组份的高纯品和高产量，但是生产效率却很低。　 色谱图3中的情况是三个参数综合后得到的最优化的结果。峰在基线上被完全分开，这使得产品纯度、产量和生产效率都达到最高。　 在实际应用中，每个参数的重要性都是不同的。如为了进行活性或药物测试，某种组份必须被完全单独提取，那么组份的纯度是最重要的参数，产量和生产效率是其次的。如果某种合成中间体必须被纯化，并且需要有足够的量为下一步合成作准备，那么纯度就不是最重要的了。而生产效率在这种情况下就是个首先需要解决的问题，因为其直接关系到完成整个合成工作的进程和速度。同时产量也是很重要的，因为高价值组份的损失需要控制在最少的范围内。

[~75164~][~75165~][~75166~]新出的快速制备色谱仪，对化学合成产物，天然产物的提纯很有帮助，用它来作正相，反相分离都很方便，比高压制备快多了。

[color=#333333]该文建立了大孔树脂-高速逆流色谱分离中药材地黄中有效成分毛蕊花糖苷的方法。考察了4种大孔树脂对地黄粗提物中毛蕊花糖苷的静态吸附与解吸情况,其中D101大孔树脂对目标成分的吸附率与解吸率最理想,实验结果表明体积分数为10%的乙醇洗脱得到的毛蕊花糖苷含量最高,目标成分含量从4.9%提高到32.6%。最后,部分纯化的样品(165 mg)采用高速逆流色谱进一步纯化,两相溶剂系统由乙酸乙酯-正丁醇-水(1∶4∶5,v/v/v)组成,分离得到45 mg纯度为96%的毛蕊花糖苷。 [/color]

[font=宋体]蛋白质纯化系统是一种用于从混合物中纯化目标蛋白的设备和方法。它结合了多种技术和步骤，可以有效地分离和纯化蛋白质，提供高纯度和高活性的目标蛋白。蛋白质纯化系统是实现蛋白质纯化的关键装置，它结合了各种分离、富集和纯化方法，帮助科研工作者实现蛋白质的高纯度提取。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白质纯化系统的基本原理[/b][/font][font=宋体]蛋白质纯化系统主要依据蛋白质的特性利用不同的物理化学方法进行分离和纯化。下面将介绍几种常见的蛋白质纯化系统的基本原理。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-ac][b]亲和层析[/b][/url][/font][/font][font=宋体]亲和层析是一种基于蛋白质的特异性与配体的亲和性相互作用来实现分离和纯化的方法。在亲和层析过程中，蛋白质溶液通过填充有配体的柱子，与配体结合形成复合物，而非特异性结合的其他组分被洗脱。最后，通过改变条件来破坏蛋白质与配体的结合，从而使得目标蛋白质得以纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②凝胶过滤层析[/font][font=宋体]凝胶过滤层析是一种基于蛋白质大小差异来进行分离的方法。在凝胶过滤层析中，待纯化的蛋白质溶液通过一系列的凝胶层析柱，大分子的蛋白质不能进入凝胶颗粒的内部，而小分子的蛋白质则可以进入凝胶颗粒内部。通过调整凝胶的孔径，可以实现对目标蛋白质的选择性分离和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-purification-by-iec][b]离子交换层析[/b][/url][/font][/font][font=宋体][font=宋体]离子交换层析是一种基于蛋白质与固定在柱子上的离子交换基的电荷相互作用来实现分离和纯化的方法。在离子交换层析中，蛋白质溶液通过带有离子交换基的柱子，与柱子上的离子交换基之间发生相互作用。通过改变溶液的离子浓度和[/font][font=Calibri]pH[/font][font=宋体]值，可以实现对蛋白质的选择性吸附和洗脱。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]④逆流层析[/font][font=宋体]逆流层析是一种基于分子质量和电荷差异来实现蛋白质分离和纯化的方法。在逆流层析中，蛋白质溶液通过填充有逆流层析介质的柱子，溶液在反向流动的情况下通过层析柱。由于不同蛋白质之间的分子质量和电荷差异，它们在逆流层析介质中的移动速度不同，从而实现对蛋白质的分离和纯化。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]蛋白质纯化系统的应用[/b][/font][font=宋体]蛋白质纯化系统在生物医药领域有着广泛的应用，下面将介绍几个常见的应用场景。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①药物研发[/font][font=宋体]蛋白质纯化系统在药物研发中起到了非常重要的作用。通过蛋白质纯化系统，科研人员可以从复杂的生物样品中高效纯化出目标蛋白质，为药物研发提供了可靠的原料和工具。蛋白质纯化系统不仅可以提高药物研发的效率，还可以确保药物的纯度和质量，从而提高药物的疗效和安全性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②生物学研究[/font][font=宋体]在生物学研究中，蛋白质纯化系统被广泛应用于蛋白质相互作用研究、蛋白质结构解析和功能分析等方面。通过蛋白质纯化系统，科研人员可以从不同的细胞和组织中提取目标蛋白质，进一步研究它们之间的相互关系和作用机制。蛋白质纯化系统还可以用于蛋白质结构解析，帮助科学家揭示蛋白质的三维结构以及其功能。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③临床诊断[/font][font=宋体]蛋白质纯化系统在临床诊断中也起到了重要的作用。通过蛋白质纯化系统，医生可以从患者的生物样本中纯化出特定的蛋白质标志物，用于疾病早期诊断、病情监测和治疗评估等方面。蛋白质纯化系统在临床诊断中的应用可以帮助医生及早发现疾病，提高诊断的准确性和效率。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质纯化系统是实现蛋白质纯化的重要装置，它结合了多种分离、富集和纯化方法，帮助科研人员高效地提取目标蛋白质。蛋白质纯化系统的应用广泛，不仅在药物研发、生物学研究和临床诊断等领域发挥重要作用，还为科学家揭开蛋白质的结构和功能提供了有力的支持。通过不断的技术创新和优化，蛋白质纯化系统将更好地满足科研和临床的需求，推动生物医药领域的发展。[/font][font=Calibri] [/font]

液相色谱经历了几十年的快速发展，色谱系统从20世纪60年代后期出现新型柱填料、高压输液泵和高灵敏度检测器到现在高效液相色谱。可谓是发生了巨大变化。色谱系统更是从经典的高效液相色谱发展到了超高效液相色谱、快速液相色谱。我原来问Waters的工程师：液相色谱到超高效液相色谱后还会推出什么样的色谱系统？他说差不多已经到顶了。[color=#DC143C][B]我们的液相色谱系统还能走多远，出现超高效液相色谱系统后还能研究出更好的色谱系统吗？[/B][/color]

AKTA蛋白纯化系统是当前重组蛋白表达与纯化服务中经常用到的一组设备，自动化程度很高。AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍AKTA蛋白纯化系统的一般操作。

http://www.instrument.com.cn/show/Breviary.asp?FileName=C121538%2Ejpg&iwidth=200&iHeight=200 博纳艾杰尔科技 的 CHEETAH 中压快速纯化制备色谱（CHEETAH MP 200）(CHEETAH MP200)已参加“国产好仪器”活动并通过初审。自上市以来，这款产品已经被多家单位采用，如果您使用过此仪器设备或者对其有所了解，欢迎一起聊聊它各方面的情况。您还可以通过投票抽奖、参与调研等方式参与活动，并获得手机电子充值卡。【点击参与活动】 仪器简介： 适用行业：CHEETAH® MP 100/200快速纯化制备系统主要应用在植物化学、有机合成、药物化学、精细化工、生物工程及生命科学等领域的产品的提取、检测及纯化工作中。 详细介绍：CHEETAH® 系列快速纯化色谱，采用工业一体化设计，实时在线监控，大大缩短了分离时间。仪器操作简单实用，只需几个按键便可实现样品分离，提升产品价值。 1. 12.1 超大触摸屏控制，操作更加方便 2. 即时“峰- 管位置对应，方便实验过程中的实时处理 3. 防腐蚀台面设计，适用于多种溶剂 4. 方便可拆卸式设计，维护性强 5. 二元梯度，最多可进行四元切换，最大压力200psi，最大流速200mL/min 6. 检测器采用独特的光路和液路设计，降低噪音，有效避免气泡对检测的干扰。 7. 简单实用的柱支架设计。适用于多种规格Flash 柱和玻璃柱。更可选配豪华进样器， 支持固体和液体进样。 技术参数： CHEETAH® MP 200 订货号 FS-9200 FS-9204 FS-9200T FS-9204T FS-9200S FS-9204S 溶剂输送泵 二元梯度 四元梯度 二元梯度 四元梯度 二元梯度 四元梯度 流速：1-200mL/min；最大压力：200psi 检测器 波长：200-400nm可调 吸光度范围：≤2AU 波长精度±0.5nm 波长：200-400nm可调 吸光度范围：≤5AU 波长精度±1nm 波长：200-800nm可调 吸光度范围：≤5AU 波长精度±1nm 双波长紫外检测器 收集容器 内置单独二维馏分收集器调节软件，标配收集试管架：F1-13mm、F2-15mm、F3-18mm、F4-25mm和 F5-100mL；可调整软件界面适应各种容器的馏分收集（包括1升大容量瓶）。 扩展性 可以和第二种检测器通讯和收集（蒸发光、示差）。 上样方式 支持液体/固体上样 收集方式 体积/时间、UV/RI/ELSD阈值、UV/RI/ELSD斜率、全收集、手动收集、窗口（time/uv）自由组合 实时控制 运行中可修改梯度、流速，并可更改收集方式。 安全性 实时压力报警/漏液报警。 创新与改进 1. 双波长：一个波长的检测用于目标物的收集，同时使用另外....【了解更多此仪器设备的信息】

想从动物心脏中纯化一种蛋白，用没有做过亲和色谱提取的？谢谢

Agilent 1200系列快速高分离液相色谱系统培训文档安捷伦1200系列快速高分离 LC 系统，与常规 HPLC 相比，在没有牺牲分辨率、精密度和灵敏度的前提下，分析速度提高20倍，高分辨率提高60%。安捷伦1200系列快速高分离液相系统可提供最快分析速度、最高分辨率，同时最大限度地保持系统低压力而设计的。因此，它保留了常规 HPLC 仪器和方法的耐用性和工作原理。这种独特的设计使1200 RRLC成为了一种通用的液相分析流速范围适合的柱尺寸从1 到4.6-mm ID, 10 到 300-mm 柱长，粒度1.5到 10 µ m。 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=67227]安捷伦1200系列快速高分离系统[/url]

高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析过程中可以纯化溶剂么？还是这是两个过程，我听师姐说就是分析过程中就会有纯化过程，有点懵

有谁知道反相色谱在合成肽分析、纯化中是如何应用的？谢谢

谁有关于纯化水系统验证方案和报告,设备为1吨/小时,

纯化气对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的影响大不

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凝胶过滤色谱摘要：本文主要讲解了凝胶过滤色谱法（分子筛）在蛋白纯化实验中的应用，包括纯化原理、实验方案设计、技术操作以及相关案例介绍和问题分析。基本原理凝胶过滤色谱蛋白纯化法，又称为空间排阻色谱，分子筛等。其原理是应用蛋白质分子量或分子形状的差异来分离。当样品从色谱柱的顶端向下运动时，大的蛋白质分子不能进入凝胶颗粒从而被迅速洗脱；而较小的蛋白质分子能够进入凝胶颗粒中，且进入凝胶的蛋白在凝胶中保留时间也不同，分子量越大，流出时间就越早，最终分离分子大小不同的蛋白质。http://www.detaibio.com/assets/image/topics/gel-filtration-chromatography-theory.jpg通常，多数凝胶基质是化学交联的聚合物分子制备的，交联程度决定凝胶颗粒的孔径。常用的色谱基质有：葡聚糖凝胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）、聚丙烯酰氨凝胶（Bio-Gel P）等。高度交联的基质可用来分离蛋白质和其他分子量更小的分子，或是除去低分子量缓冲液成分和盐，而较大孔径的凝胶可用于蛋白质分子之间的分离。选用合适孔径的凝胶很大程度取决于目标蛋白的分子量和杂蛋白的分子量。实验方案设计凝胶介质的选择凝胶介质的选择主要是根据待分离的蛋白和杂蛋白的分子量选择具有相应分离范围的凝胶，同时还需要考虑到分辨率和稳定性的因素。比如，如果是要将目的蛋白和小分子物质分开，可以根据他们分配系数的差异，选用Sephadex G-25和 G-50；对于小肽和低分子量物质的脱盐，则可以选用Sephadex G-10、G-15以及Bio-Gel P-2或P-4；如果是分子量相近的蛋白质，一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶。具体凝胶过滤色谱介质应用如下：常用凝胶过滤色谱介质的分离范围凝胶介质蛋白质的分离范围/103凝胶介质蛋白质的分离范围/103Sephadex G25Sephadex G50Sephadex G100Sephadex G200Sepharose 6BSepharose 4B1~51.5~304~1505~60010~400060~20000Sepharose 2BBio-Gel P-4Bio-Gel P-10Bio-Gel P-60Bio-Gel P-150Bio-Gel P-30070~400000.5~45~1730~7050~150100~400凝胶介质的预处理凝胶在使用前应用水充分溶胀（胶：水=1：10），自然溶胀的耗时较长，可采用加热的方法使溶胀加速，即在沸水浴中将凝胶升温至沸，1~2h即可达到溶胀。在烧杯中将干燥凝胶加水或缓冲液，搅拌，静置，倾去上层混悬液，除去上清液中的凝胶碎块，重复数次，直到上清澄清为止。色谱柱的选择色谱柱的体积和高径比与色谱分离效果密切相关，凝胶柱床的体积、柱长和柱的直径以及柱比的选择必须根据样品的数量，性质和分离目的进行确定。组别分离时，大多采用2~30cm长的色谱柱，柱床体积为样品溶液体积的5倍以上，柱比一般在5~10之间；而分级分离一般需要100cm左右的色谱柱，并要求柱床体积大于样品体积25倍以上，柱比在20~100之间。凝胶柱的填装凝胶色谱柱与其它色谱方法不同，溶质分子与固定相之间没有力的作用，样品组分的分离完全依赖于他们各自的流速差异。装住时关住柱子下口，在柱内加入约1/3柱床体积的水或缓冲液，然后沿着柱子一侧将缓冲液中的凝胶搅拌均匀，缓慢并连续的一次性注入柱内。待凝胶沉积约5厘米左右时，打开柱子下口，控制流速在1ml/min。样品的处理与上样根据样品的类型和纯化分析，需要选择合适的缓冲液，为了达到良好的分析效果，上样量必须保持在较小的体积，一般为柱床体积的1%~5%，蛋白质样品上样前应进行浓缩，使样品浓度不大于4%（样品浓度与分配系数无关），但需要注意的是，较大分子量的物质，溶液粘度会随浓度增加而增大，使分子运动受限，影响流速。上样前，样品要经滤膜过滤或离心，除去可能堵塞色谱柱的杂质。洗脱与收集凝胶过滤色谱的缓冲液用单一缓冲液或含盐缓冲液作为洗脱液即可，主要考虑俩个方面的原因：蛋白的溶解性和稳定性。所用的缓冲液要保证蛋白质样品在其中不会变性或沉淀，PH应选在样品较稳定、溶解性良好的范围之内，同时缓冲液中要含有一定的盐（NaCL），对蛋白质起稳定和保护作用。洗脱过程中始终保持一定的操作压，流速不可过高，保持在0.5~3.0mL/min即可。案列介绍AKTA凝胶过滤色谱分离蛋白质材料色谱介质：Sephacryl S-200，蛋白质分离范围（5~250）×103 色谱柱：XK16/60预装柱色谱设备：AKTA Explorer混合样品：含单克隆抗体，分子量180000；牛血清白蛋白（68000），溶菌酶（14000）NaOH 0.5 mol/LNaCl 200 mmol/LPB 20 mmol/LPH7.0 缓冲液方法凝胶除菌处理超纯水冲洗柱子后，用0.5mol/L NaOH正向冲洗柱，流速3mL/min，冲洗3柱体积平衡NaOH处理完毕后，用超纯水冲洗2柱体积，接着用含200mmol/L NaCl和20mmol/L PB的7.0PH缓冲液冲洗5~10倍柱体积上样平衡完毕后，选择样品泵进行上样，上样流速3mL/min，上样体积为1mL洗脱上样结束后，用平衡缓冲液进行洗脱清洗与保存纯化结束后，用0.5mol/L NaOH反向冲洗2柱体积，冲洗时间30~60min，冲洗结束后，用超纯水正向冲洗5柱体积，再用20%乙醇冲洗3柱体积，然后拆下柱子，俩端封死，低温保存。问题分析和解决方案色谱分离前如何净化样品在色谱分离前，对样品进行离心和过滤，离心能除去大部分块状物，如果离心后样品仍不清澈，可用滤膜过滤。由醋酸纤维薄膜或PVDF材料制成的滤膜能够非特异性的结合少量蛋白。溶液交换不彻底严格控制上样体积，上样体积不超过柱体积30%。若样品溶液体积较多，可以分多次上样，注意每次上样时间间隔，可根据电导色谱峰确定下一次上样时间。分辨率不高1)提高装柱质量，使色谱柱装填匀实； 2)提高柱床高度； 3)控制上样体积，最大上样体积不超过柱床体积5%； 4)控制样品黏度与洗脱溶液黏度保持一致； 5)根据样品特点选择合适的洗脱溶液，调节洗脱溶液的离子强度或亲水性； 6)选择合适的凝胶柱（如何选择请参照上文）色谱峰对称性差1)提高装柱质量，装柱匀实——若柱装的太松，容易引起拖尾，装的太紧，会引起前沿；2)柱较脏，再生色谱柱肩峰出现的原因及解决方法1)柱床松动，重新装柱或反向冲洗柱2)柱筛板堵塞，超声清洗筛板3)柱干裂，重新装柱

请问有用过美国高麦氩色谱（GM100)的吗？其中有一个载气（氩气）的纯化器。有换过的吗？原装的太贵了将近3万，请问是否有可替代的厂家或者设备？Parameter is not valid.

[size=16px][color=#ff0000][b][url=https://www.instrument.com.cn/job/position-88645.html]立即投递该职位[/url][/b][/color][/size][b]职位名称：[/b]蛋白纯化仪器产品经理-太原市[b]职位描述/要求：[/b]主要工作内容1、开发大分子生产研发客户，寻找蛋白核酸制备纯化需求；2、根据客户的计划与资金，为客户提供配置解决方案；3、维护客户关系；4、进行市场分析与预测，为公司提供策略建议；主要要求1、生命科学与制药相关专业本科以上学历；2、熟悉生物制药企业客户3、具有良好的沟通技能4、本行业三年以上经验5、强大的市场开拓能力6、熟悉蛋白纯化仪器与相关市场；7、具有良好的工作习惯主要待遇1、具有良好的薪酬待遇2、具有良好的上升空间[b]公司介绍：[/b] 上海闪谱生物科技有限公司公司简介： 上海闪谱生物科技有限公司成立于上海漕河泾高科技区的中国科学院上海生物工程中心，专注于样品纯化仪器的研发、生产与销售。主要产品有全自动GPC凝胶净化系统、全自动固相萃取仪、全自动制备色谱系统三大系列产品。 上海闪谱生物科技有限公司是一家技术型公司，拥有中国科学院大连化物所、中国科学院上海生物工程中心的专业技术人员为主体的科技队伍，具有大量技...[url=https://www.instrument.com.cn/job/position-88645.html]查看全部[/url][align=center][img=,178,176]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108160948175602_3528_5026484_3.png!w178x176.jpg[/img][/align][align=center]扫描二维码，关注[b][color=#ff0000]“仪职派”[/color][/b]公众号[/align][align=center][b]即可获取高薪职位[/b][/align]

纯化水系统用臭氧消毒时，其消毒周期有规定吗