化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。简介化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。 化学发光免疫分析仪器中核心探测器件为光电倍增管(PMT),由单光子检测并传输至放大器,并加高压电流放大,放大器将模拟电流转化为数字电流,数字电流将发光信号由R232数据线传输给电脑并加以计算,得出临床结果。 分类化学发光标记免疫分析法 化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridin ium ester (A E) ,是有效的发光标记物 , 其通过起动发光试剂(N aOH2H2O 2 ) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光(见图1)。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法 ,大分子抗原则采用夹心法 , 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。 发光酶免疫分析法 从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析( chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) ,它们有各自的发光底物。 发光试剂 HRP 标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺(32氨基邻苯二甲酰肼,lum ino l) ,或其衍生物如异鲁米诺(42氨基邻苯二甲酰肼) , 是一类重要的发光试剂。其结构如图4 所示。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,在过氧化物酶及活性氧存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光, 其波长为425nm。 早期用鲁米诺直接标记抗原(或抗体) ,但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响。近来用过氧化物酶标记抗体, 进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物, 在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH2H2O 2) 作用下, 鲁米诺发光, 发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。Kodak Am erliteTM半自动分析系统就是利用这一体系专门设计的。 增强发光酶 增强发光酶免疫分析(enhanced luminescence enzyme immunoassay, ELEIA )在发光系统中加入增强发光剂, 如对2碘苯酚等, 以增强发光信号,并在较长时间内保持稳定, 便于重复测量, 从而提高分析灵敏度和准确性。在全自动分析仪上, 还可通过计算机严密控制, 进行自动操作, 如加试剂,混合, 温育, 洗涤, 加发光试剂, 发光计数, 数据处理, 绘制标准曲线, 直至完成病人血清样品的分析并打印出结果。Am erliteTM发光增强酶免分析系统用荧光素、噻唑等增强剂, 其发光时间可持续长达20m in, 试剂盒有甲状腺功能检测的 促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素, 与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮, 以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。 ALP标记的CLEIA所用底物为环1, 22二氧乙烷衍生物, 这是一类很有前途的发光底物 ,用于化学发光酶免分析底物而设计的分子结构中包含起稳定作用的基团——金刚烷基, 其分子中发光基团为芳香基团和酶作用的基团,在酶及起动发光试剂作用下引起化学发光。最常使用的底物是AM PPD , 中文名为: 32(2’2螺金刚烷) 242甲氧基242(3’2 磷酰氧基) 2苯基21, 22环二氧乙烷)。在碱性磷酸酶(AL P) 作用下,磷酸酯基发生水解而脱去一个磷酸基, 得到一个中等稳定的中间体AM PD (半寿期为2~ 30m in) ,此中间体经分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子, 当其回到基态时产生470nm 的光,可持续几十分钟。AM PPD 为磷酸酯酶的直接化学发光底物,可用来检测碱性磷酸酯酶或酶和抗体、核酸探针及其它配基的结合物。可检测到碱性磷酸酯酶的浓度为10- 15mol/L 。
虽然酶标仪价格低廉、仪器简单、方便操作,但在越来越多的项目检测中,化学发光免疫分析仪逐渐取代酶标仪的使用。 化学发光的优点到底在哪里呢?从原理上说,酶标仪是通过对酶标板中液体的吸光值检测,获得一个OD值后进行定性或半定量的分析,达到检测的目的。化学发光免疫分析仪是化学发光反应(酶促发光或直接发光)产生的光信号通过光电倍增管进行信号转换后等到相应的信号值,用RLU(相对光单位)表示,以达到定量或定性的检测目的,其更加灵敏,线性范围更宽,而且可以做定量检测,可进行全自动操作,而酶标仪无论检测还是线性范围都不如发光仪,且只能做定性检测,但是目前国内酶标仪较为成熟,化学发光尚处于成长期。
化学发光酶标仪与化学免疫分析仪的是什么区别?
化学发光,荧光分析仪器开发
一般化学发光分析仪的价格是多少?[em44]
有个朋友最近想做一些化学发光方面的试验,听说河南农大也生产化学发光分析仪,谁知道到底怎么样?谢谢了!
额。。小弟 准备买一台[url=http://www.instrument.com.cn/zc/fa.asp][color=#0365bf]流动注射分析仪[/color][/url]了现在关于几个问题 我想问下大家 还有些疑惑1.所谓的流动注射化学发光法 还需要在流动注射分析仪上配备另外的检测器吗??比如荧光 原子的 那种,一般流动注射分析仪是带紫外的2.如果不需要 检测器 是不是 基本上大多数注射分析仪 都可以实现 化学发光的实验?3 如果需要专门的检测器 一个检测器贵嘛?大概多少钱另外 我要买的 注射分析仪的 是荷兰的SKALAR 应该算顶尖的品牌了。。。。。谢谢大家啦~~~
仪器介绍 IFFM-E型流动注射化学发光分析仪是国内最早推出的全自动化学发光检测分析系统。仪器集成有高精度双蠕动泵数控宽调速流动注射进样系统,多功能超微弱化学发光检测器及功能强大的化学发光检测与数据采集及化学分析动力学谱图分析软件,可进行静态注射化学发光分析、流动注射化学发光等分析。根据用户需要,所提供的辅助接口还可与各种分光光度计连接,使其成为流动注射分光光度测试仪,软件功能可由用户直接选择强度/吸光度/透光度测量。 主要特点应用领域:* 静态、流动注射化学发光研究* 化学发光在线测试分析 技术参数1.高精度蠕动泵宽范围数字调速系统* 高精度蠕动泵宽范围数字调速系统:调速范围 0—99 转/分。* 可实现多达12路管道进样(6道/泵)。* 16通道自动/手动阀,换向时间≤0.3S2.多功能化学发光检测器。* 多功能化学发光检测系统可进行流动注射/静态注射/毛细管电泳发光等多种化学发光分析,内置高灵敏度端窗式光电倍增管。* 可程控高精度负高压电源和高精度前置放大器。* 负高压范围:-100~-1100V;稳定度优于0.05%。3.高精度数据采集系统,由主计算机控制可进行:* 自动/手动调零* 增益控制: 1×、2×、4×、8×、16×* 滤波器截止频率调整:10~100 Hz* 采样速率设定: 1~100 次/S* 外部信号输入接口,可接收其它仪器的模拟信号,输入范围内0~5V。4.样品测定:Luminol-H2O2-Cr(Ⅲ)体系* 浓度测定范围:1×10E-11~1×10E-5(g/mL)* 检出限:1.5×10E-12g/mL* RSD3%(痕量分析的要求是RSD5% RSD=S/x的平均值)5.REMEX全汉化数据分析系统 [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=184605]高锰酸钾-甲醛流动注射化学发光法测定左羟丙哌嗪.pdf[/url]
全自动化学发光免疫分析仪的原理以及了临床应用。全自动化学发光免疫分析仪采用光电比色原理来测量体液中某种特定化学成分的仪器。是用于检测肿瘤标志物、贫血、甲状腺、孕筛查等项目,是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术,目前应用的自动化分析仪是分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、保温、比色、结果计算、书写报告和清理等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成,大大提高了工作效率及准确性。
YY_T_1155-2009_全自动发光免疫分析仪.pdf
我有个客户需要采购生物发光细菌毒性分析仪,哪位大虾有呀?给我推荐下,谢谢![em09504]
现在想做一款化学发光免疫分析仪,谁知道有价格实惠性能优良,电路简单的光电倍增管可以推荐一下
化学发光放大技术同样利用抗原一抗体反应原理,将酶或其他非放射性标记物标记于抗原或抗体,然后与已知抗原或抗体反应,标记的酶使反应底物进行发光,经光电倍增管测量后可得到被测样本的每秒钟发光计数CPS,再根据内置的标准曲线将CPS转换为样本的浓度值"由于这项技术的应用,使抗原一抗体的反应时间缩短,特异性程度和灵敏度得到提高,同时辅以单克隆技术的应用,使整个反应的全自动化实现成为可能,并一改过去依赖于手工加样,再交由仪器测量的半自动化技术的局面,也是近十年来免疫检验技术的一个飞跃。 化学发光免疫分析系统由以下子系统构成:反应杯传送系统,测试包被珠装载系统,样本装载系统,条码读取系统,试剂装载系统,加样系统,温育系统,离心清洗系统,发光计数测量系统,计算机控制系统组成。1.微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA) 下面以双抗体夹心法为例介绍微粒子捕捉酶免疫分析技术:已包被了抗体的塑料微珠试剂中,加入待测标本后,经温育,再加入碱性磷酸酶标记的抗体!形成抗体一抗原一酶标记抗体复合物"然后将其转移到玻璃纤维柱上,用缓冲液洗涤,没有结合的抗原!酶标抗体被洗掉,结合抗原抗体的塑料微珠则被保留在纤维柱滤膜的上方"这时再加入底物,4一甲基伞型酣磷酸盐,酶标抗体上的碱性磷酸酶将4一甲基型酣磷酸盐分解,脱磷酸后形成甲基伞型酣,在365nm激发光的照射下,发出448nm的荧光,经过荧光读数仪的记录、放大,计算出所测物质的含量"。2.荧光偏振免疫分析技术(FPIA) 这是一种均相荧光免疫分析法,主要用于测定小分子量物质,如药物浓度测定"原理是:标记在小分子抗原上的荧光素经485nm的激发偏振光照射后,吸收光能,越入激发状态,激发状态的荧光素不稳定,很快以发出光子的形式释放能量而还原"发射出的光子经过偏振仪形成525~55Onm的偏振光,这一偏振光的强度与荧光素受激发时分子转动的速度呈反比,游离的荧光素标记抗原,分子小,转动速度快,激发后发射的光子散向四面八方,因此通向偏振仪的光信号很弱,而与抗体大分子结合的荧光素标记抗原,因分子大,分子的转动慢,激发后产生的荧光比较集中,因此偏振光信号比未结合时强得多",在测定过程中待测抗原小分子!荧光标记抗原小分子和特异性抗体大分子同时加入到一反应杯中,经过温育,待测抗原和荧光标记抗原竞争性地与抗体结合,待测抗原越少,与抗体竞争结合的量越少,而荧光标记抗原与抗体结合量就越多,当激发光照射时,荧光偏振的程度与荧光标记物分子转动的速度成反比,而荧光标记的小分子抗原与大分子抗体结合后,其分子的转动速度减慢,因此荧光偏振信号强"结果是待测抗原的浓度低,可以通过计算获得其含量。3.利用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合此方法以叮咤酶为发光的标记物,固相载体为极细小的磁性颗粒"其测定原理与放射免疫和酶联免疫中的双抗体夹心法和竞争结合法相似。4.采用酶联免疫技术!生物素亲和素技术和增强化学发光技术此方法是用辣根过氧化物酶(日RP)标记抗原或抗体!以子弹头型塑料小孔管为固相载体,鲁米诺为化学发光剂,并加入化学发光增强剂,可使化学发光强度增强,时间延长而且稳定。 在链霉亲和素包被的子弹头型塑料小孔管中,加入生物素标记的特异性抗体和待测标本,经过37e温育,链霉亲和素与生物素结合,特异性抗体与标本中的抗原结合,形成链霉亲和素一生物素一抗体一抗原复合物,经过洗涤,将多余的标本和生物素标记抗体除去,加入辣根过氧化物酶标记抗体,经37e温育,形成链霉亲和素一生物素一抗体一抗原一酶标抗体复合物,并固定在小孔管壁上,加入氧化剂日202,增强化学发光剂和鲁米诺,这时结合在固相载体上的辣根过氧化物酶在强氧化剂的作用下将增强化学发光剂亚铁原吟琳激活,接着它催化并激活鲁米诺发光,这种化学发光强渡比单独鲁米诺发光强,持续时间长,而且稳定,易于测定。鲁米诺发光强度经光量子记录系统记录,经计算从标准曲线上得出待测抗原含量。
[b][font=inherit]项目概况[/font][/b]化学发光免疫分析仪配套试剂耗材(三次)招标项目的潜在投标人应在全国公共资源交易平台(陕西省西安市)网站〖首页〉电子交易平台〉陕西政府采购交易系统〉企业端获取招标文件,并于 2023年01月05日 09时30分 (北京时间)前递交投标文件。[b][font=inherit]一、项目基本情况[/font][/b]项目编号:SZ2022-GP-XC-164H3项目名称:化学发光免疫分析仪配套试剂耗材(三次)采购方式:公开招标预算金额:3,712,590.00元采购需求:合同包1(化学发光免疫分析仪配套试剂耗材):合同包预算金额:3,712,590.00元合同包最高限价:3,712,590.00元[table=100%][tr][td]品目号[/td][td]品目名称[/td][td]采购标的[/td][td]数量(单位)[/td][td]技术规格、参数及要求[/td][td]品目预算(元)[/td][td]最高限价(元)[/td][/tr][tr][td]1-1[/td][td]生物试剂盒[/td][td]化学发光免疫分析仪配套试剂耗材(进口)[/td][td]1(批)[/td][td]详见采购文件[/td][td]3,712,590.00[/td][td]3,712,590.00[/td][/tr][/table]本合同包不接受联合体投标合同履行期限:1年
[b][font=inherit]项目概况[/font][/b]化学发光免疫分析仪配套试剂耗材(二次)招标项目的潜在投标人应在全国公共资源交易平台(陕西省西安市)网站〖首页〉电子交易平台〉陕西政府采购交易系统〉企业端获取招标文件,并于 2022年12月08日 09时30分 (北京时间)前递交投标文件。[b][font=inherit]一、项目基本情况[/font][/b]项目编号:SZ2022-GP-XC-1642项目名称:化学发光免疫分析仪配套试剂耗材(二次)采购方式:公开招标预算金额:3,712,590.00元采购需求:合同包1(化学发光免疫分析仪配套试剂耗材):合同包预算金额:3,712,590.00元合同包最高限价:3,712,590.00元[table=100%][tr][td]品目号[/td][td]品目名称[/td][td]采购标的[/td][td]数量(单位)[/td][td]技术规格、参数及要求[/td][td]品目预算(元)[/td][td]最高限价(元)[/td][/tr][tr][td]1-1[/td][td]生物试剂盒[/td][td]化学发光免疫分析仪配套试剂耗材(进口)[/td][td]1(批)[/td][td]详见采购文件[/td][td]3,712,590.00[/td][td]3,712,590.00[/td][/tr][/table]本合同包不接受联合体投标合同履行期限:1年
[b][font=inherit]项目概况[/font][/b]化学发光免疫分析仪配套试剂耗材招标项目的潜在投标人应在全国公共资源交易平台(陕西省西安市)网站〖首页〉电子交易平台〉陕西政府采购交易系统〉企业端〗获取招标文件,并于 2022年11月08日 09时30分 (北京时间)前递交投标文件。[b][font=inherit]一、项目基本情况[/font][/b]项目编号:SZ2022-GP-XC-164H项目名称:化学发光免疫分析仪配套试剂耗材采购方式:公开招标预算金额:3,712,590.00元采购需求:合同包1(化学发光免疫分析仪配套试剂耗材):合同包预算金额:3,712,590.00元合同包最高限价:3,712,590.00元[table=100%][tr][td]品目号[/td][td]品目名称[/td][td]采购标的[/td][td]数量(单位)[/td][td]技术规格、参数及要求[/td][td]品目预算(元)[/td][td]最高限价(元)[/td][/tr][tr][td]1-1[/td][td]生物试剂盒[/td][td]化学发光免疫分析仪配套试剂耗材(进口)[/td][td]1(批)[/td][td]详见采购文件[/td][td]3,712,590.00[/td][td]3,712,590.00[/td][/tr][/table]本合同包不接受联合体投标合同履行期限:1年
化学发光免疫分析放射免疫分析法有很高的灵敏度,但存在着放射性防护和同位素污染等问题。近年来,许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现。其中,在化学发光反应及抗原-抗体特异性识别基础上建立起来的一种新的非放射免疫分析技术--化学发光免疫分析法,由于这种方法具有灵敏度高,特异性强,精密度好,线性范围宽,仪器设备简单,试剂价格低廉,方法稳定、快速等优点,已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测。 化学发光免疫分析包括三大类型:即标记化学发光物质的化学发光免疫分析;标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。下面以偶合放大化学发光酶联免疫分析法检测人血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为例。 (一) 原理 尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H2O2反应体系产生化学发光,但由于该体系的检测灵敏度不够高,不能满足酶联免疫测定的要求。因此,为了提高体系的检测灵敏度,可将HRP催化H2O2氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H2O2的化学发光反应相偶合,建立偶合放大化学发光酶联免疫分析法。这里,酶的活性是基于下列发光反应进行检测的: HRP luminol+H2O2───→产物+hν 产 物 ↑ Eosin+H2O2 ──────┘ HRP 二) 操作步骤 1. 包被抗体 在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚,再加入300μl用0.05M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体,同时设空白对照,置4℃过夜。 2. 洗涤 用抽滤针头吸干管内液体,加入Tris-HCl-Tween20洗涤3次,每次加2ml,放置3~5min,用抽滤针头吸干管内液体。 3. 加待检血清和阳性标准品 用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300μl。同时设阴性对照;空白对照管只加抗体稀释液。置37℃孵育2h。 4. 洗涤 同2。 5. 加酶标抗体 用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体,每管加入300μl,空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37℃孵育2h。 6. 洗涤 同2。 7. 化学发光测定 给每管加入300μl底物溶液,置37℃保温20min。犎;后将小试放入LKB-1250 lumimeter中,并置于测量位置,加入300μl 5.0×10-4M luminol。记录仪记录化学发光强度。 8. 同时用ELISA方法进行对照,结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。 结果判定(1) 定性 按下列公式判别阴、阳性: L样品-L空白 ┌≥2.1 为阳性 S/N = ──────── = 商│ L阴性对照-L空白 └<2.1 为阴性 (2) 定量 以不同稀释度的HBsAg阳性标准品的化学发光强度为纵坐标,不同稀释倍数为横坐标,作出剂量反应曲线(标准曲线),犜r待测样品中HBsAg的含量就可由测量的化学发光强度换算得到。
化学发光免疫分析仪是极微弱光探测应用的典型设备,光子计数探头是化学发光免疫分析仪产品中主要的探测器类型。本文列举了一些化学发光免疫分析仪中与探测器相关的常见问题,并以滨松光子计数探测器为例进行了详细解析。[b][color=#cc0000]PMT在使用中有什么需要注意的安全问题?[/color][/b]1. 高压问题光子计数探头内部有1000V左右的高压,滨松公司已经做了良好的屏蔽,所以在正常使用情况下,不会有高压电击的问题,不建议可以进行探头拆解,如果拆解使用谨防高压损伤。2. 曝光损坏问题光子计数探头核心是光电倍增管,光电倍增管受到强光照射以后,会发生光敏效应,造成光子计数探头一段时间内的暗计数上升,一般在不通电的情况下,这种暗计数上升是可恢复的,需要在暗环境下静置一段时间,为加快这种恢复,可以加电在环境下静置。但是如果是带电见强光的话,可能会对PMT造成不可恢复的损坏。带电见强光是造成光子计数探头损坏的主要原因,对于这种损失我们也叫曝光损坏。3. 光窗挤压问题光子计数探头的光窗就是PMT的窗口,都是属于玻璃易碎产品,不允许大力挤压,其中有部分光子计数探头的光窗和外壳基本上在一个平面上,安装过程中要特别注意避免对光窗的挤压。[b][color=#cc0000]都说PMT对光很敏感,有可能被强光打坏,那么如何判断什么样的光对于PMT是会造成损伤的“强光”?[/color][/b]1. 对于没有通电的PMT,如果被夏天中午的太阳直射,就会造成永久损伤——所以说,只要环境光显著地弱于夏天中午的太阳直射(如日常的室内环境),是不会对没有通电的PMT造成永久损伤的。2. 对于已经通电的PMT,如果被满月的月光直射,就能使其输出饱和——所以说,强于满月月光直射的环境光对于已经通电的PMT是需要避免的。 需要强调的是,以上提到的都是会对PMT造成损伤的光强;为了在使用中得到高信噪比,PMT需要非常严格的避光,具体要求可以参考以下“测试中发现背景高/信噪比不好,从PMT的角度,有可能有哪些原因?”的问题解析。[b][color=#cc0000]测试中发现背景高/信噪比不好,从PMT的角度,有可能有哪些原因?[/color][/b]1. 漏光影响暗计数是光子计数探头的主要参数,影响暗计数因素主要有温度、漏光等因素,大部分在应用中遇到的暗计数高、本底高的问题,都是由于漏光引起的,PMT是非常灵敏的探测器,对于单光子信号就有非常好的响应,我们通常会收到客户的说法,例如:“在晚上我把灯关掉,还是暗计数很高呀;”“我没有拆开给你们提供的窗口纸呀;”“光窗我是用黑胶带贴上的”。类似这样的避光是远远不够的,远远没有达到光子计数探头要求的工作环境,光子计数探头要求的绝对暗室,不允许有任何的光线透过,所以在光子计数探头使用过程中完全避光应该是最基本的要求。如果仅仅是评价暗计数测试时候建议用黑布进行多层的包裹,并且上电稳定半小时以后进行暗计数评价。2. 温度对暗计数的影响另外一个影响暗计数的因素就是温度,工作温度升高热电子发射加剧,暗计数上升,温度降低,暗计数下降,对于化学发光免疫分析中使用的光子计数探头,一般情况温度下降到10℃以下,暗计数就变化很小了。下图为滨松H10682典型的暗计数和温度的关系图请参考。[align=center][img=,364,403]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808211113230530_6115_2194_3.png!w364x403.jpg[/img][/align]3. 暗计数对化学发光免疫分析仪的影响暗计数特性和仪器的检测下限有关系,常温下(25℃)光子计数探头的暗计数都在150cps以内,而化学发光试剂发光要远强于这个数值,所以在常规的试剂体系和设备中暗计数都不会对测试造成太大影响。全自动化学发光设备中由于有温浴系统,温度一般会高于25℃,暗计数会有所上升,对于大部分的设备中都影响不大,不过在设备设计过程中要充分考虑到充分散热,尽量使得光子计数探头安装到远离热源的地方,并且做好通风散热。[b][color=#cc0000]滨松的光子计数探头的输出线性如何?如果我的化学发光仪需要更大的线性范围有没有什么方案?[/color][/b]动态范围是化学发光免疫分析仪的关注的一个重要参数,也是光子计数探头的重要参数。1. 光子计数探头线性光子计数探头的动态范围受到光电倍增管、放大电路等因素的影响,考虑到成本、功耗,一般情况下滨松的光子计数探头设计最大输出线性为5Mcps或者6Mcps,这样的线性范围完全可以满足化学发光免疫分析仪的使用。下图是滨松H10682典型是线性曲线。[align=center][img=,416,319]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808211119139310_5058_2194_3.png!w416x319.jpg[/img][/align][align=center]H10682线性输出曲线[/align][align=left]2. 线性校正 [/align][align=left]一般情况下光子计数探头最大线性输出5-6Mcps就可以满足客户的使用,但是有个别客户提出在特殊的试剂下,需要更高的线性输出上限,一般情况下遇到这种情况下有两种处理方法:[/align][align=left]1)对试剂进行稀释,稀释以后进行测试,可以有效的降低光产额;[/align][align=left]2)对光子计数探头的输出进行线性校正,就像我们上面提到的滨松CH326配合CH297-011,在输出线性校正前,最大输出线性为6Mcps如果使用滨松CH297-011内嵌的线性校正功能最大线性输出可以达到20M,当然H10682配合CH297-011也可以实现这个功能。下图是线性校正前后滨松H10682的最大输出:[/align][align=center][img=,420,319]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808211114478710_507_2194_3.png!w420x319.jpg[/img][/align][align=center]线性校正前后滨松H10682的最大输出特性曲线特性曲线[/align][align=left]另外我们也提供线性输出校正公式供用户参考,参考公式如下:[/align][align=center][img=,521,257]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808211120378522_8346_2194_3.jpg!w521x257.jpg[/img][/align][align=center]N:真实计数(cps,count per second) M:测量计数(cps,count per second) t:脉冲分布率(s)[/align][align=left][/align][align=left][b][color=#cc0000]化学发光仪中PMT的安装有什么讲究?[/color][/b][/align][align=left]1. 距离 [/align][align=left]安装距离是一个用户问的比较多的问题,安装距离主要会影响PMT的探测率,例如图5所示同样面积的探测器距离点光源越远,如果不加其他光学系统的情况下,探测效率越低,而在化学发光免疫分析仪中,一般情况是直接探测,不加其他的光学系统,所以我们建议是靠近样品池,这样会保证比较好的光耦合效果。如果是安装空间有限制,可以考虑使用光纤,但是使用光纤会带来耦合效率的降低,不是特别推荐。[/align][align=center][img=,546,533]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808211122145829_9433_2194_3.jpg!w546x533.jpg[/img][/align][align=center]安装距离对探测效率影响示意图[/align][align=left]2. 探测窗口大小 [/align][align=left]在全自动化学发光免疫分析仪中,大部分采用直径为1cm左右的圆形的试管,也有其他的异形的试管,当然还有使用微孔板的反应器。在化学发光免疫分析仪中使用的典型产品滨松H10682光窗尺寸为φ8,CH326光窗尺寸为φ25,一般情况下,建议用户使用PMT80%的有效面积,这样在光子计数中的能够保证比较好的稳定性和一致性,φ8mm接近试管尺寸,建议使用光窗小于φ8mm,这样可以避免由于试管和PMT的对齐问题,造成的台间差。如果使用φ25mm的产品,就不用考虑对齐问题,也可以保证探测率。 [/align][align=left]3. 窗材 [/align][align=left]一般在应用反应皿(试管)和光子计数探头窗口之间不需要加任何的隔离窗口材料,但是有些用户考虑到隔离、污染、腐蚀等因素,希望在窗口和光子计数探头进行隔离,如果有这种需求,我们建议使用石英玻璃作为窗材,并且要求窗口和光子计数探头窗口之间保持3mm以上的距离。 [/align][align=left]4. 光子计数探头接地 [/align][align=left]光子计数探头要安装到一个暗室系统中,大部分用户会用金属材质进行暗室系统的设计,利用探头提供的固定位进行探头固定。一般情况下,在化学发光分析仪设计中整个机架都要进行接地处理,暗室也和大地相连。由于探头的外壳和内部电路地相连,下如果探头外壳再和大地相连的话,可能会带来干扰,所以在探头安装时候,我们建议探头外壳不要和大地连接,采用绝缘连接,或者暗盒系统采用聚四氟乙烯的外壳。[/align][align=left][/align][align=left][b][color=#cc0000]从探测器的角度,如何校正同一型号化学发光仪的台间差?[/color][/b][/align][align=left]台间差是设备品控的重要指标,设备台间差和设备的各个部件的台间差是相关的,光子计数探头作为化学发光免疫分析仪的重要部件,它的输出差异也会对设备的台间差造成影响,怎么去减小或者消除这种差异是用户经常遇到的问题。 [/align][align=left]1. 软件校正 [/align][align=left]光子计数探头是目前来说测试极微弱光能力最强的探测器,是目前化学发光免疫分析中唯一的探测器选择,正常工作环境下探头灵敏度完全可以满足设备探测器下限信噪比的需求,对于同一个探测器,输出的结果能够反应被探测光的强度和变化,一般情况下这种变化是线性的,所以说对于一个探测器来说只要满足探测信噪比,满足输出线性,输出不受采集设备的现在,输出的绝对值大小就变的没有意义了。 在这个前提下,我们建议用户用标准试剂对每台设备进行一致性标定,在光子计数探头的输出基础上进行系数的校正,在线性范围内只需要一个系数校正即可,如果是在非线性区,需要根据实际输出情况进行校正。[/align][align=center][img=,600,386]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808211126257756_6569_2194_3.jpg!w690x444.jpg[/img][/align][align=center]标准试剂校正 [/align][align=left]2. 光子计数探头出厂控制 [/align][align=left]虽然我们上面介绍了光子计数探头的只要满足信噪比情况下,台间差可以通过软件进行修正,不过也有用户希望在探头上做挑选控制,北京滨松根据用户要求,出厂前对光子计数探头例如滨松CH326进行灵敏度挑选,在内部测试条件下,可以将灵敏度离散型控制在±10%以内。[/align][align=left][/align][align=left][b][color=#cc0000]在实际使用中,PMT探头有寿命问题么?其灵敏度还会受什么因素影响?[/color][/b][/align][align=left]1. 寿命问题 [/align][align=left]光电倍增管的寿命只与输出的总电荷数有关,我们定义光子计数探头灵敏度下降50%的时间为光子计数探头的寿命。光子计数法是光电倍增管用于极微弱光探测的一种方法,相比于常规的模拟法应用,一般情况下光子计数探头平均输出电流要小很多,所以说光子计数法寿命非常长,可以达到几十万小时,在正常的工作状态下化学发光免疫分析仪设备,不需要太多考虑光子计数探头的寿命问题。 [/align][align=left]2. 温度对灵敏度影响 [/align][align=left]光电倍增的灵敏度受温度的影响,在可见光波段温度升高,光电倍增管灵敏度下降,光子计数探头也继承了光电倍增管的特性,下图所示 滨松H11123温度灵敏度变化曲线,可以看到每升高10℃灵敏度会下降2-3%。[/align][align=center][img=,690,344]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808211130122400_5469_2194_3.jpg!w690x344.jpg[/img][/align][align=center]光电倍增管灵敏度随工作温度变化曲线[/align][align=left][color=#cc0000][/color][/align][align=left][b][color=#cc0000]在化学发光仪的设计中,如何减小电磁干扰对光子计数探头的影响?[/color][/b][/align][align=left]EMC特性是医疗设备必须考虑的问题,不仅仅是安全的问题,更重要的EMC对于设备稳定性的影响。滨松光子计数探头充分考虑到EMC特性的,虽然目前还没有针对光电倍增管或者光子计数探头的EMC标准,不过滨松在光子计数探头的设计和开发过程中有严格的内控指标和测试。对于光子计数探头的EMC特性主要体现下电磁干扰对光子计数探头输出稳定上的影响。 [/align][align=left]1. 磁场对光子计数探头输出的影响 [/align][align=left]光电倍增管有空间电子运动,所以在磁场作用下,电子轨迹会发生改变,影响光电倍增管的输出特性,并且不同方向的磁场影响的大小也是不同的,同样光子计数探头输出也会收到磁场影响,下图是滨松H10682输出受磁场影响的典型曲线。在全自动化学发光免疫分析仪中有大量的电磁阀和蠕动泵,这些器件在工作的时候都会产生磁场,这种磁场是光子计数探头干扰磁场的主要来源。滨松的在设计光子计数探头时候已经做了部分的磁屏蔽措施,如果用户在另外增加磁屏蔽处理起到的作用也有限,所以我们建议客户不再进行额外的屏蔽处理。距离降低磁场影响非常有效的手段,我们建议用户要尽量把探测器原理磁场干扰源,一般要求在10cm以上。[/align][align=center][img=,690,482]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808211132565670_8776_2194_3.jpg!w690x482.jpg[/img][/align][align=center]H10682受磁场影响输出曲线[/align][align=left]2. 信号干扰 [/align][align=left]磁场会对输出信号造成影响,但是在化学反光免疫仪设计中并不是最棘手的问题,信号输出不稳定、波动、跳点才是最难处理的,并且一般在遇到类似问题的时候很难找到问题所在。对于信号干扰的问题,我们建议用于在设备设计之初就要进行考虑。一般要注意以下几个方面: [/align][align=left]a) 电源选择,我们建议用户选择正规的有EMC认证的电源给光子计数探头进行供电; [/align][align=left]b) 运动控制、探测电路、线路隔离; [/align][align=left]c) 光子计数探头外壳与机壳隔离; [/align][align=left]d) 信号输出线排布不横穿、横跨电磁干扰源; [/align][align=left]e) 做好整体机壳的屏蔽、接地,防止周围大功率用电器干扰。[/align][align=left][/align][align=left][b][color=#cc0000]滨松有没有针对探测器评价用的稳定光源产品?[/color][/b][/align][align=left]用户一直希望有一个稳定的光源产品能够用于探测器的评价以及设备的标定,基于需求滨松开发了稳定光源产品,一个是试管状、一个是试剂卡状,型号分别为L11416和L11494,图9是产品的基本信息,具体的产品技术信息可以参考滨松的产品样本。[/align][align=left]在这里想说明,稳定光源产品仅仅是一个能够实现稳定输出的光源,由于内部使用LED作为发光器件,所以光谱是一种窄线光谱,与化学发光试剂发光的光谱不是完全相同,所以一般不用于设备一致性的标定。我们定位这个产品主要是评价探测器的输出稳定性、评价设备的输出稳定性,用户可以根据自身的需求,进行产品的选择购买。[/align][align=left][/align][align=center][img=,690,499]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808211137111824_6299_2194_3.png!w690x499.jpg[/img][/align]
Elecsys 2010 电化学发光全自动免疫分析仪产于Roche公司(罗氏公司),Roche公司是世界上最大的检验产品提供商之一。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203300841_358158_1699466_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203300841_358157_1699466_3.jpgElecsys 2010全自动电化学发光免疫分析仪是应用先进的电化学发光(ECL)技术的全自动台式分析仪。电化学发光(ECL)技术己应用于甲状腺,激素,心肌损伤和肿瘤标志、传染病、贫血、骨代谢等广泛的测定项目。Elecsys 2010仪器全自动数据处理的特点是使用了二维条形码技术,避免了手工操作,保证数据输入的准确。 Elecsys 2010的临床应用: 广泛应用于甲状腺、激素、心肌损伤和肿瘤标志、传染病、贫血、骨代谢等的测定项目。目前我院已开展项目: 甲状腺功能:游离甲状腺素(F T4),游离三碘甲状腺原氨酸(FT3),促甲状腺素(TSH),抗甲状腺球蛋白抗体(Anti-TG),抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO) 性激素类:绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-HCG),雌二醇(E2),促黄体生成激素(LH),促卵泡激素(FSH),泌乳素(PRL),孕酮(PROG),睾酮(TesTo) 肿瘤标记:甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),乳腺癌相关抗原(CA153),卵巢癌相关抗原(CA125),胰腺癌相关抗原(CA199) 肝炎病毒类: 乙肝表面抗原(HBsAg),乙肝表面抗体(Anti-HBs),乙肝核心抗体(Anti-HBc),乙肝e抗体(Anti-HBe),乙肝e抗原(HBeAg) 糖尿病检测:胰岛素(Ins),C-肽(CP) 化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度、检测范围宽、分析方法简便快速、标记物稳定性好、无污染、结果稳定、误差小、安全性好等优点更免除了使用放射性物质。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者,是免疫分析重要的发展方向。化学发光免疫分析的优点: 1.灵敏度高:这是CLIA关键的优越性,其灵敏度可达1E-16mol/L(RIA为1E-12mol/L)。又如化学发光底物(如AMPPD)可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5E5倍。 2.宽的线性动力学范围:发光强度在4~6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度(OD值)为2.0的范围相比,优势明显。虽然RIA也有较宽的线性动力学范围,但放射性限制了其应用。 3.光信号持续时间长:辉光型(glow type)的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。 4.分析方法简便快速:绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂(或复合试剂)的一步模式。 5.结果稳定、误差小:样品系直接自己发光,不需要任何光源照射,免除了各种可能因素(光源稳定性、光散射、光波选择器等)给分析带来的影响,使分析结果灵敏稳定可靠。 6.安全性好及使用期长:在上述优点前提下,更免除了使用放射性物质。到目前为止,还未发现CLIA的危害性。
安捷伦[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]1260 蒸发光散射检测器,流动相:乙腈-水(32:68),雾化器和漂移管温度应该设置多少?第一次使用蒸发光检测器,我们实验室里也没有人使用过,请问下各位老师应该怎么调试?
之前版面做了个检测器配置调查,投票得到了积极响应,而且最多的检测器有上百票,数据也体现了一定的真实性你们实验室高效液相色谱仪配置了何种检测器?http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111124/3665675/不同的检测器,检测项目不一样,应用领域也不一样,我们配置仪器,都是根据自己所需来定。先来看看这次的投票结果吧,如下图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/06/201306301645_448473_1608710_3.jpg图例分析:1、紫外检测器还是液相色谱的主导,因为它可以检测大部分液相色谱可以检测的化合物。VWD和DAD两项的投票基本一致,只是现在检测器在可变波长与二极管阵列的价格上有很大出入,VWD相对价格便宜,所以仪器配置的比例还是更高。2、示差检测器已经商品化很多年,再加上其独特的检测领域,特别是GPC分析仪器上的配置,所以它还占有很大比例。3、异军突起的我想应该是蒸发光散射检测器(ELSD)了,它的出现没有多少年,而它的配置居然占到了12%。目前虽然ELSD的很多检测方法没有标准化,但是中国药典在一部已经有很多采用了ELSD检测,而中药的分析,也是药品分析中的重要组成,很多药品企业应该都会考虑它吧。4、荧光检测器由于其灵敏度高,而且在液相领域应用也很广,检测机构一般都会配置。5、而目前有几个检测器,比如电化学检测器、电喷雾检测器等,这些都具有专一行,通用性差,所以基本都是专用液相配置的多。大家有自己的想法,欢迎补充!!!
[b][font=inherit]项目概况[/font][/b]受福建省龙岩市第三医院委托,龙岩市公物采购招标代理有限公司对[350800]LYCG[GK]2023001、福建省龙岩市第三医院全自动化学发光免疫分析仪试剂货物类采购项目组织公开招标,现欢迎国内合格的供应商前来参加。福建省龙岩市第三医院全自动化学发光免疫分析仪试剂货物类采购项目的潜在投标人应在福建省政府采购网(zfcg.czt.fujian.gov.cn)免费申请账号在福建省政府采购网上公开信息系统按项目获取采购文件,并于2023年02月06日 08时30分00秒(北京时间)前递交投标文件。[b][font=inherit]一、项目基本情况[/font][/b]项目编号:[350800]LYCG[GK]2023001项目名称:福建省龙岩市第三医院全自动化学发光免疫分析仪试剂货物类采购项目采购方式:公开招标预算金额:1,900,000.00元采购包1(诊断用生物试剂盒):采购包预算金额:1,900,000.00元采购包最高限价: 1,900,000.00元投标保证金: 19,000.00元采购需求:(包括但不限于标的的名称、数量、简要技术需求或服务要求等)[table=100%][tr][td]品目号[/td][td]品目编码及品目名称[/td][td]采购标的[/td][td]数量(单位)[/td][td]允许进口[/td][td]简要需求或要求[/td][td]品目预算(元)[/td][td]中小企业划分标准所属行业[/td][/tr][tr][td]1-1[/td][td]A02329900-其他医疗设备[/td][td]诊断用生物试剂盒[/td][td]2(年)[/td][td]否[/td][td]诊断用生物试剂盒[/td][td]1,900,000.00[/td][td]工业[/td][/tr][/table]本采购包不接受联合体投标合同履行期限:2年
1%),反应非常快,90%的发光在1~10s内完成。例如Пилипчук等用9,10-二甲基吖啶甲基硫酸盐测定一硫酸盐、过二硫酸盐等。1.3过氧草酸盐类(peroxalate) 60年代开始报道了一类新的发光体系,即含草酸基团的衍生物,其典型化合物有双草酸酯(DNPO)、双草酸酯(TCPO)。Kwakman等对液相色谱过氧草酸酯化学发光检测作了评述。和田光弘对1,1′-草酰二咪唑作为发光剂在PO-CL中的应用作了评述。Jonsson等研究了杂环化合物在PO-CL中的催化作用。最近Barnett等设计合成了草酰双三氟甲基磺酰基亚胺基-双苯基-4-4′-二磺酸及2,2′-草酰双三氟甲基磺酰基亚胺基-双乙苯基-4″-4″′-二磺酸两种新的草酰胺用于水溶性过氧草酸酯发光体系;它们具有较强的反应活性,几乎没有背景发光,具有较好的水溶性;采用罗丹明B对其分析性能进行了评价,其检出限可达1×10-7~5×10-7mol/L。他们对该化合物的非磺酸化物也进行了研究,其检出限可达9×10-8~5×10-7mol/L。1.4 1,2-二氧杂环丁烷类 1,2-二氧杂环丁烷类的化学发光也研究得比较多,这类化合物经单分子转变后生成两个含羰基的产物,产物之一可生成激发态。由于许多化学发光和生物发光的中间体都可能生成这种过渡态而早已受到人们的注意。Kamtekar等利用碱性磷酸酶(ALP)催化1,2-二氧杂环丁烷的磷酸盐衍生物的水解产生化学发光来测定Zn(Ⅱ)、Be(Ⅱ)、Bi(Ⅲ)。1.5钌(II)的联吡啶(bipy)及邻菲咯啉(phen)配合物 Ru(bipy)32+是一种被广泛研究的化合物,其化学发光及电致化学发光应用逐渐增多;Ru(phen)32+也可用作化学发光试剂。何治柯等用Ru(bipy)32+及Ru(phen)32+化学发光法在酸性介质中测定草酸、酒石酸及5种羟基酸等。其化学发光反应机理也已有报道。1.6其它发光试剂 除了上述几类主要的化学发光试剂外,还有芳基咪唑类如洛粉碱、多元酚类如连苯三酚,在H2O2存在下产生发光。四-(N-烷基氨基)-乙烯类化合物也会产生化学发光,常见的有四-(N-二甲基氨基)-乙烯,它在潮湿空气中爆炸,产生明亮的化学发光。此外还有七叶灵、硅氧烯、对氯苯基溴化镁、反式-1-(2′-甲氧基乙烯基)芘、联苯酰基过氧化物、金刚烷1,2-二氧杂环丁烷以及氢过氧化二甲基吲哚等,文献均有介绍。最近Ma等研究了杯芳烃(calixarene)衍生物的光谱特性,合成了3种衍生物,对-(2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮-5-偶氮)杯芳烃,n=4,6或8。其特点是水溶性好,象鲁米诺一样,在催化剂存在下,与氧化剂反应发光,可用于测定H2O2。
化学发光反应参与的免疫测定分为以下几种类型: (一)化学发光酶免疫测定 化学发光酶免疫测定(CLEIA)是采用化学发光剂作为酶反应底物的酶标记免疫测定。经过酶和发光两级放大,具有很高的灵敏度。以过氧化物酶为标记酶、以鲁米诺为发光底物、并加入发光增强剂以提高敏感度和发光稳定性。应用的标记酶也可以为碱性磷酸酶,发光底物为dioxetane磷酸酯,固相载体为磁性微粒贵州学|习网搜集整理。 (二)化学发光免疫测定 化学发光免疫测定(CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。吖啶酯是较为理想的发光底物,在碱性环境中即可被过氧化氢氧化而发光。 用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件: 1.能参与化学发光反应。 2.与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂。 3.偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。 4.应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。 鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。 (三)微粒子化学发光免疫分析 该免疫分析技术有两种方法:一是小分子抗原物质的测定采用竞争法;二是大分子的抗原物质测定采用双抗体夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒极微小,其直径仅1.0%26mu;m,这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量,使反应速度加快,也使清洗和分离更简便。其反应基本过程:(1)竞争反应:用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与抗体结合成复合物;二是测定抗原与抗体的结合形式。(2)双抗体夹心法:标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体-测定抗原-发光抗体的复合物。 (四)电化学发光免疫测定 电化学发光免疫测定(ECLI)是一种在电极表面由电化学引发的特异性发光反应,包括电化学和化学发光两个部分。分析中应用的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺(NHS)酯,可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合,制成标记的抗体或抗原。ECLL的测定模式与ELISA相似。其基本原理是发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂,将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌,随即释放光子而恢复为基态的发光底物。这一过程在电极表面周而复始地进行,不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。
化学发光分析及其临床应用居军 甘肃省人民医院(兰州730000) 内容提要:化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射强度确定物质含量的一种痕量分析方法,可与电化学分析、免疫分析、固定化试剂技术、传感器技术等分析技术联用,具有灵敏度高、线性范围宽、不需要外来光源、分析速度快、仪器设备相对简单、便宜等优点。常用的化学发光技术有电化学发光、化学发光免疫分析、微粒子化学发光等。化学发光分析在临床实验室中主要应用于激素、肿瘤标志物、传染病监测、血药浓度检测等。关键词:化学发光 临床激素 肿瘤标志物 传染病 近年来,化学发光分析技术发展很快,特别是化学发光免疫分析技术,在临床医学应用中发挥着越来越重要的作用。1化学发光 化学发光分析是根据化学反应产生的光辐射的强度确定物质含量的一种痕量分析方法。一些物质在进行化学反应时,吸收化学反应过程中所产生的化学能,使分子处于激发态,当其回到基态时以光子的形式释放能量。反应必须提供足够的化学能,通常只有焓变在170—300KJ/mol之间的放能反应才能产生可见光范围内的化学发光现象。化学发光分析具有灵敏度高、线性范围宽、不需要外来光源、分析速度快、仪器设备相对简单、便宜等优点。化学发光分析灵敏度可达到10-18mol/L,而通常酶联免疫技术的分析灵敏度只能达到l0-13mol/L,新型的微珠包被酶放大免疫技术的分析灵敏度可达到10-14mol/L,荧光免疫及采用沉降法的普通放免技术分析灵敏度可达到10-ls mol/L,固相放免技术分析灵敏度可达到10-16 mol/L。化学发光反应体系有鲁米诺、光泽精、过氧草酸盐(或酯)一荧光物质-H202、Ru(bipy),2+/Ru(Phen),2+等电致发光、Ce(IV)、高锰酸钾一还原性有机物等。化学发光分析测定的物质可以分为3类:第1类物质是化学发光反应中的反应物;第2类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂;第3类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。化学发光分析测定物质的方式可分为直接法和间接法。化学发光分析反应类型可分为酶促反应和非酶促反应两类。此外化学发光分析法可以与其他分析技术联用,如流动注射分析、电化学分析、免疫分析、固定化试剂技术、传感器技术等分析技术相结合。2常用的化学发光技术 电化学发光是通过对电极施加一定的电压进行电化学反应而发光,通过测量化学发光光谱和强度来测定物质含量的一种痕量分析方法。它将电分析化学手段和化学发光方法相结合,具有独特的优点,如重现性和灵敏度进一步提高,在多种组份同时存在时,可施加不同波形、不同电压的信号进行选择性测量等,是潜在的分析手段之一。 化学发光免疫分析是以标记发光剂为示踪物信号建立起来的一种非放射标记免疫分析法,具有灵敏度高、线性范围宽、仪器设备简单、操作方便、分析速度快和容易实现自动化等优点。鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶是目前化学发光免疫分析中使用最多的标记物。 微粒子化学发光是化学发光免疫分析的特殊形式,是以化学发光剂为底物的酶免疫技术,同时应用了磁性微珠做固相载体,增加了吸附面积,使抗原抗体最大限度的结合。以3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰).苯基.1,2一二氧环乙烷(AMPPD)为发光底物在碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)的作用下,迅速去磷酸酶,生成不稳定的中介体AMPPD-,进而产生激发态产物,当其跃迁回到基态时产生光子。微粒子化学发光技术所需标本量极少,孵育时间大大缩减,同时因其选择性吸附抗原,从而提高了特异性、灵敏性,使测定结果准确、可靠,并减少污染。 化学发光生物传感器是通过非创伤或非损伤性的办法,连续、实时、动态地检测生物体内的某一种或几种物质浓度的技术。该技术以化学发光作为换能器,不但继承了化学发光高灵敏度的优点,而且大大提高了化学发光的选择性。按照所固定化的生物组分的种类,可以将化学发光生物传感器分为酶传感器、免疫传感器、组织传感器、核酸传感器及微生物传感器等。特别是化学发光免疫传感器是将具有分子识别作用的抗原或抗体以适当的方式固定化而制成,它结合了化学发光高灵敏度和抗原抗体特异性结合的高度专一性以及无污染等特点,是替代放射免疫分析的重要分析工具,已日益受到重视。 化学发光核酸探针已用于检查病毒、细菌和原虫的DNA。以鲁米诺增强化学发光检测体系的核酸探针主要有两种形式,一种是用生物素标记探针,杂交后经过分离,再以过氧化物酶标记的亲和素与生物素结合,加入鲁米诺和增强剂后测发光。另一种是以过氧化物酶直接标记探针,用增强的鲁米诺检测发光。核酸探针亦可用吖啶酯或AP来标记,吖啶类发光体系发出的是瞬时光,而AP以AMPPD作为发光底物,其发光体系具有发光持续稳定的特点,发光时间可长达几天,既可用发光仪也能用简单的感光胶片检测。另外,AP-AMPPD发光体系具有非常高的灵敏度,无论是固相还是液相检测,对标记物碱性磷酸酶的检测限可达10-21(1000 AP分子),是目前最灵敏的核酸测定方法之一,已用于检测B19微小病毒DNA、人乳头瘤病毒DNA(HPV).巨细胞病毒DNA(CMV),并在DNA测序中有很好的应用。3化学发光分析在临床实验室中的应用 激素是由内分泌腺或内分泌细胞分泌的高效生物活性物质,在体内作为信使传递信息,对机体生理过程起调节作用,通过调节各种组织细胞的代谢活动来影响人体的生理活动。通过调节蛋白质、糖和脂肪等三大营养物质和水、盐等代谢,为生命活动供给能量,维持代谢的动态平衡,促进细胞的增殖与分化,影响细胞的衰老,确保各组织、各器官的正常生长、发育以及细胞的更新与衰老。影响中枢神经系统和植物性神经系统的发育及其活动,是生命中的重要物质。激素在血液中的浓度很低,一般蛋白质激素的浓度为10-10~10-12mol/L,其他激素在l0-6~10-9mol/L。目前临床上用化学发光可测定大部分激素,如E2、E3、T3、T4、fl'4、TSH、HCG、p-HCG、甲状腺球蛋白(TG)、抗甲状腺球蛋白(ATG)、甲状腺结合球蛋白(TBG)、抗甲状腺过氧化物酶(ATPO)等。 肿瘤标志物是癌细胞生长过程中产生的一种或几种正常情况下没有的或含量很低的“特异性”物质,或是宿主细胞因癌细胞入侵而过量产生的正常细胞组分。肿瘤标志物存在于组织、细胞、血液或体液中,肿瘤标志物的检测对肿瘤高危人群的筛选、肿瘤的诊断和鉴别诊断、肿瘤分期、肿瘤定位、肿瘤治疗等都具有一定的意义。尤其在肿瘤治疗过程中,肿瘤标志物浓度的升高和降低与疾病的预后密切相关,肿瘤标志物测定对恶性肿瘤的预后具有监测价值。同时应当注意,现今所知的肿瘤标志物中,绝大多数不但存在于恶性肿瘤中,而且也存在于良性肿瘤、胚胎组织,甚至正常组织中。因此,这些肿瘤标志物并非恶性肿瘤的特异性产物,但在恶性肿瘤患者中明显增多。因此肿瘤标志物也称为肿瘤相关抗原。肿瘤标志物的检测仅仅是配合临床医生对肿瘤诊断、治疗、监测的辅助手段。检测出的结果要根据其它临床检测结果综合判断。肿瘤标志物的检测方法历经了血球凝集法,电泳法、放免法、荧光免疫法,酶联免疫吸附法,微粒子法等,特别是电化学发光法、化学发光法新技术逐渐地应用到全自动免疫分析系统中,使肿瘤标志物的检测更敏感、更准确。目前常用的肿瘤标志物有:甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖原125(CA-125)、糖原153(CA-153)、糖原199(CA-199)、糖原724(CA-724)、糖原211(CA-211)、糖原242(CA-242)、铁蛋白(Fer)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、前列腺特异性抗原(PSA)、组织多肽抗原(TPA)等。 传染病的疗效监测,特别是病毒性肝炎的防治,已列为我国重大传染病专项课题。用化学发光分析技术对病毒标志物进行定量检测,与ELISA方法相比,大大提高了检测灵敏度,是临床治疗的重要依据。已成为临床应用的常规手段。 血药浓度检测是合理、安全用药,评估药效的重要手段,而化学发光分析的优点恰好满足药物分析对分析方法提出的要求,使得它在药物分析领域也有较为广泛的应用。利用该技术可对抗菌素、中枢神经系统药物、循环系统药物、维生素、代谢产物及生命相关物质进行分析,对临床药理和药物治疗的研究都起到重要的推动作用。
本人最近想对化学发光分析仪的准确性、重复性和稳定性进行检定,但又没有现行的检定方法可参照,请问各位通用的检定方法如何检测?
[size=4]化学发光法的灵敏度很高,超过一般的检测方法。其不足支出在于选择性较差,因此常与分离工具结合(HPLC, CE),能发挥很好的作用,但是联用技术的兼容性问题有很多需要考虑的地方,限制了该方法在实际中的应用。以下内容是拷自我以前的论文,主要讨论HPLC-CL联用技术需要注意的地方,供参考。要获得好的分离和灵敏的检测,往往需要综合考虑各方面的因素:(1)流动相的选择应与化学发光检侧系统相兼容,选择的溶剂既不应增加背景,也不应熄灭化学发光信号;此外,还要考虑发光试剂在其中的溶解度,以避免生成沉淀。(2)缓冲溶液及其pH值的选择。由于pH值对化学发光反应的发光强度ICL和寿命影响很大,选择合适的pH值十分重要,加缓冲溶液使流动相和反应试液均得到缓冲的方法,可控制一定的pH值;为适应不同的pH值范围,应选用合适的化学发光试剂。(3)选择适宜的流速,以保证分离完全并能检测到强的发光信号。(4)发光试剂浓度的选择应有利于提高信噪比(S/N)。一般,浓度大时可获得较大的发光强度,但浓度大,有时会形成沉淀,且增加干扰(背景噪声)。(5)所用试剂应纯化,以减小化学发光的背景。(6)输液泵的脉动会引起试液浓度的局部变化,提高背景噪声,故要保证尽可能均匀、恒定、无脉动流速输液。使用注射泵,但其容量有限,实际上多用往复泵,后接阻尼器以减小脉动。(7)化学发光检测器的设计应能检测到最大的ICL,死体积要小,且价格便宜、仪器简单、易于操作,分析速度快。为此,应使用短的混合反应管和高效光收集装置(如高质量光电倍增管及光子计数器的使用),并使流动池F尽量靠近光电倍增管。目前,微孔柱HPLC的应用日益广泛。在微孔柱的HPLC-CL分析中,流动相的流速相对于化学发光试剂的加入速度低很多,使流动相对反应池中最终的化学发光反应的影响很小,从而可使化学发光检测和HPLC分离有可能在各自的最佳条件下进行。这一点对梯度洗脱过程中的化学发光检测尤为重要。在使用化学发光检测时,可以选用反应速度快的发光体系,使柱后流出的分析物在没有明显扩散之前就完成了化学发光反应,避免了大体积池对色谱峰的展宽。微孔柱HPLC与快速灵敏的化学发光反应结合,为分离检测提供了一个完美的统一。为简化反应系统,可将反应试剂固定在固相担体上,装入短柱内,样品液流过短柱时发生反应。如将TCPO固体和固定化荧光试剂填装在短柱中,并与化学发光流动检测池相联,当流动相带着样品流过固相化学发光反应器及流动池时,即可测得化学发光信号。这种液固反应体系的优点是简单、稳定、不需附加输液泵等装置;缺点是柱寿命有限。将这种固相化学发光反应器与高效、高选择性的固定化酶反应器或光化学反应器相结合,特别适合于生化物质的测定。[/size]
AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤很简单的,比较适合初学者。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=113913]AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤[/url]
刚学习化学发光,请专家指点化学发光检测仪采用液相(态)检测方法比化学发光固相(态)检测(成像系统)灵敏多少个数量级? 3~5个?对于化学发光检测,是不是PMT单光子检测做的工作,化学发光成像系统一定不可以做? 例如?
化学发光 (ChemiLuminescence ,简称为 CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类,它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理,利用仪器对体系化学发光强度的检测,而确定待测物含量的一种痕量分析方法。化学发光与其它发光分析的本质区别是体系产生发光 ( 光辐射 ) 所吸收的能量来源不同。体系产生化学发光,必须具有一个产生可检信号的光辐射反应和一个可一次提供导致发光现象足够能量的单独反应步骤的化学反应。依据供能反应的特点,可将化学发光分析法分为: 1 )普通化学发光分析法 ( 供能反应为一般化学反应 ) ; 2 )生物化学发光分析法 ( 供能反应为生物化学反应;简称 BCL) ; 3 )电致化学发光分析法 ( 供能反应为电化学反应,简称 ECL) 等。根据测定方法该法又可分为: 1 )直接测定 CL 分析法; 2 )偶合反应 CL 分析法 ( 通过反应的偶合,测定体系中某一组份; 3) 时间分辨 CL 分析法 ( 即利用多组份对同一化学发光反应影响的时间差实现多组份测定 ) ; 4 )固相、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]、掖相 CL 。分析法; 5 )酵联免疫 CL 分析法等。 在整个的检测系统中其关键的部分为 PMT ,其直接影响到仪器的检测性能,其最高检测极限为 10 - 22 mol/L 。不同型号的仪器其检测技术不一样,但基本原理都是利用待测组份与体系的化学发光强度呈线性定量关系,而化学发光强度随体系反应进行的速度增强或衰弱。记录仪记录峰形,以峰高定量,也可以峰面积定量。因化学发光多为闪烁式发光 (1—2s 左右 ) ,故进样与记录时差短,分析速度快。第二部分、化学发光常用的化学试剂及其原理 化学发光是某种物质分子吸收化学能而产生的光辐射。任何一个化学发光反应都包括两个关键步骤,即化学激发和发光。因此,一个化学反应要成为发光反应,必须满足两个条件:第一:反应必须提供足够的能量( 170 ~ 300KJ / mol ) ,第二,这些化学能必须能被某种物质分子吸收而产生电子激发态,并且有足够的荧光量子产率。到目前为止,所研究的化学发光反应大多为氧化还原反应,且多为液相化学发光反应。 化学发光反应的发光效率是指发光剂在反应中的发光分于数与参加反应的分子数之比。对于一般化学发光反应,值约为 10 - 6 ,较典型的发光剂,如鲁米诺,发光效率可达 0 . 01 ,发光效率大于 0 。 01 的发光反应极少见。现将几种发光效率较高的常用的发光剂及其发光机理归纳如下。 1. 鲁米诺及其衍生物 鲁米诺的衍生物主要有异鲁米诺、 4— 氨基已基 —N 一乙基异鲁诺及 AHEI 和 ABEI 等。鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化,发生化学发光反应,辐射出最大发射波长为 425nm 的化学发光。 在通常情况下鲁米诺与过氧化氢的化学发光反应相当缓慢,但当有某些催化剂存在时反应非常迅速。最常用催化剂是金属离子,在很大浓度范围内,金属离子浓度与发光强度成正比,从而可进行某些金属离子的化学发光分析,利用这一反应可以分析那些含有金属离子的有机化合物,达到很高的灵敏度。其次是利用有机化合物对鲁米诺化学发光反应的抑制作用,测定对化学发光反应具有猝灭作用的有机化合物。其三是通过偶合反应间接测定无机或有机化合物。其四是将鲁米诺的衍生物如异鲁米诺 (ABEI) 标记到羧酸和氨类化合物上,经过高效液相色谱 (HPLC) 或液相色谱 (LC) 分离后,再在碱性条件下与过氧化氢-铁氰化钾反应进行化学发光检测。也可以采用其它分离方法,如将新合成的化学发光试剂异硫氰酸异鲁米诺标记到酵母 RNA 后,通过离心和透析分离,然后进行化学发光检测。此外应用的还有 N 2(B2 羧基丙酰基 ) 异鲁米诺,并对其性能进行了研究。 2 .光泽精 光泽精以硝酸盐的形式存在,在碱性介质中,过氧化氢将其氧化成四元环过氧化物中间体,而后裂解生成激发态的吡啶酮而发光。利用光泽精与还原剂作用,可用于测定临床医学上一些重要的还原性物质,如抗坏血酸、肌酸酐、谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、乳糖、葡萄糖。 3 .洛粉碱 洛粉是文献上记载最早的化学发光试剂,但却迟迟未得到应用,直到 1979 年 Marino 等人将它应用于 Co 的测定后才得到重视。此试剂已被用于多种元素的分析测定。 4 .过氧化草酸酯类 草酸盐类化学发光反应大都生成过氧草酰 (Peroxalate) 中间体,因此这类反应亦称过氧草酰类化学发光反应。过氧草酸盐类化学发光分析应用的推广还有赖于新的荧光衍生试剂的开发。 5 . 吖啶酯类 McCap r 等合成了一系列吖啶酯类化合物,对该类试剂的化学发光机理研究表明,发光效率与试剂中的可解离酸性基团的 pKa 有密切关系, pKa 一般应小于 11 。吖啶酯类化合物是一类很有前途的非放射性核酸探针标记物,用作 DNA 的发光探针,发光量子产率高,稳定性好,标记物对杂交反应的动力学和杂交体的稳定性无影响,可以直接在碱性介质中进行化学发光反应。 以上五种化学发光剂化学发光量子产率高,水溶液稳定,能被多种氧化剂直接氧化而发光,也可被众多的金属高于催化发光反应而发光,许多无机、有机和生化组分也能增强或抑制其发光,因此应用十分广泛。目前报道的有邻菲咯啉,碱基水杨酸、罗明丹 —B 、没食子酸、香豆素、皮素,茜素紫、苏木色精,培花青,三苯甲烷类染料,丙酮、乙醇、羟胺等。这些试剂商品化程度高,价廉,使用方便,但化学发光量子产率较低,因此,研究增敏试剂来提高它们的化学发光量子产率是非常关键的。