数字全息显微镜DHM测量材料动态的3D形貌,亚纳米分辨率,基于菲涅尔衍射的数字全息重建技术 [table=100%][tr][td][img=动态3D细胞监测,690,138]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711241018_01_1546_3.jpg!w690x138.jpg[/img]仅0.001秒即可测出物体三维形貌,并且是亚纳米的分辨率。不同于传统白光干涉仪、共聚焦显微镜、扫描探针轮廓仪等需要扫描的成像方式,DHM仅需0.001秒采集单张全息图即可测出物3D形貌信息,做到了快速动态监测。 和传统全息术不一样的是没有采用干板而是采用CCD记录全息图,全息图中 光强图:提供与传统显微镜一样对比度的图像 相位图:提供量化数值,得以对被测物体进行精确三维测量 该系统为预放大全息显微镜,其中的相位图解析中用到了大量的算法,实时相位解包裹技术 实时形貌测量的案例二:石墨烯薄膜受力形变实时测量[img=薄膜形变实时测量,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711241030_01_1546_3.gif!w384x216.jpg[/img][img=MEMS面内面外运动测量,201,220]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711241030_02_1546_3.gif!w201x220.jpg[/img][/td][/tr][/table]
加州大学洛杉矶分校(UCLA) Ozcan教授称,“医生可以使用这些设备来改善偏远地区的卫生健康问题”。 该便携式设备使用激光而不是镜头识别中水、食物或血液中的病菌。廉价的造价还不到 100美金 (60 英镑)。其生成的图像可以被上载到远程计算机作进一步的分析。科学家们希望该技术将有助于缺乏先进的诊断设备的地区提高医疗健康服务。有关显微镜的发明内容,加利福尼亚大学洛杉矶分校 (ucla)的研究人员已经发表在《Biomedical Optics Express》。微三维技术 该设备有两种操作模式:“传输模式”可以分析水和血液等液体,“反射模式”则可以产生高密度物质表面的全息图像。 “传输模式很好的观测透明的细胞或薄片”,Leicester大学先进显微镜中心Karl Ryder博士解释说。“但是,如果你想看看固体的表面,不能使用传输模式,因为光线不会穿透过去”。在反射模式中,显微镜使用全息技术产生样品的三维图形。“你采用一束激光并使用分束镜分成两束,然后使用这两束激光照亮样品”。“你可以再用数学模型让重组的两束光产生三维图形”。廉价芯片 设计的关键优势是它采用廉价的电子元件而不是昂贵的镜头。Ryder博士说,“在此系统中没有光学器具,使得体积做得很小,而且用来看小样品,你不需要复杂的聚焦”。而且显微镜使用类似iPhone 和Blackberry手机中常见的数码照片感应器。这些仅用到少于15美金的成本。尽管它的价格低,研究者声称该显微镜可以监视难检测的细菌如大肠杆菌的暴发。UCLA教授Ozcan表示,“在水和食物检测低浓度大肠杆菌是十分艰巨的任务,这个显微镜可以提供现场调查的方案”。 该设备可以获得原始数据,但简单的设计意味着需要具有计算能力的外部设备进一步处理。用户可以转发图像数据到他们的手机、笔记本电脑、或上传到互联网服务器。Ozcan教授相信该显微镜可以为发展中国家的医务工作提供不可估量的价值。“只需要简单培训,在缺乏医疗检测设备的偏远地区,医生可以使用这些设备提高医疗健康服务。
数字全息显微镜在的非扫描成像特性在微纳表征等方面有独特优势,在国内越来越热门,2016年北大和清华相继购入反射式数字全息显微镜,用于微纳和电子器件等应用。[img=液体透镜形变,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271422_01_1546_3.gif[/img][img=24.7MHz表面声波,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271422_03_1546_3.gif[/img][b]液体透镜形变 24.7MHz表面声波[/b][img=MEMS麦克风,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271423_01_1546_3.gif[/img][img=MEMS微镜,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271424_01_1546_3.gif[/img][b]MEMS麦克风 MEMS微镜[/b][img=MEMS悬臂梁,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271425_01_1546_3.gif[/img][img=MEMS微执行器,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271425_02_1546_3.gif[/img][b]MEMS悬臂梁 MEMS微执行器[/b][img=超声传感器,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271426_01_1546_3.gif[/img][img=动态形貌,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271426_02_1546_3.gif[/img][b]超声传感器 动态形貌刻蚀[/b][img=,384,192]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271435_01_1546_3.gif[/img][img=,384,244]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271435_02_1546_3.png[/img][b]细胞筛选-HeLa cells treated with Doxorubicin 红细胞3D图[/b][img=,384,200]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709271436_01_1546_3.gif[/img][b]酵母菌干重实时测量[/b]
摘要: 本文扼要介绍了电子显微镜的现状与展望。透射电子显微镜方面主要有:高分辨电子显微学及原子像的观察,像差校正电子显微镜,原子尺度电子全息学,表面的高分辨电子显微正面成像,超高压电子显微镜,中等电压电镜,120kV,100kV分析电镜,场发射枪扫描透射电镜及能量选择电镜等,透射电镜将又一次面临新的重大突破;扫描电子显微镜方面主要有:分析扫描电镜和X射线能谱仪、X射线波谱仪和电子探针仪、场发射枪扫描电镜和低压扫描电镜、超大试样室扫描电镜、环境扫描电镜、扫描电声显微镜、测长/缺陷检测扫描电镜、晶体学取向成像扫描电子显微术和计算机控制扫描电镜等。扫描电镜的分辨本领可望达到0.2—0.3nm并观察到原子像。 关键词 透射电子显微镜 扫描电子显微镜 仪器制造与发展 中图法分类号 TN16 O766.1 Q336 电子显微镜(简称电镜,EM)经过五十多年的发展已成为现代科学技术中不可缺少的重要工具。我国的电子显微学也有了长足的进展[1]。电子显微镜的创制者鲁斯卡(E.Ruska)教授因而获得了1986年诺贝尔奖的物理奖[2]。 电子与物质相互作用会产生透射电子,弹性散射电子,能量损失电子,二次电子,背反射电子,吸收电子,X射线,俄歇电子,阴极发光和电动力等等。电子显微镜就是利用这些信息来对试样进行形貌观察、成分分析和结构测定的。电子显微镜有很多类型,主要有透射电子显微镜(简称透射电镜,TEM)和扫描电子显微镜(简称扫描电镜,SEM)两大类。扫描透射电子显微镜(简称扫描透射电镜,STEM)则兼有两者的性能。为了进一步表征仪器的特点,有以加速电压区分的,如:超高压(1MV)和中等电压(200—500kV)透射电镜、低电压(~1kV)扫描电镜;有以电子枪类型区分的,如场发射枪电镜;有以用途区分的,如高分辨电镜,分析电镜、能量选择电镜、生物电镜、环境电镜、原位电镜、测长CD-扫描电镜;有以激发的信息命名的,如电子探针X射线微区分析仪(简称电子探针,EPMA)等。 半个多世纪以来电子显微学的奋斗目标主要是力求观察更微小的物体结构、更细小的实体、甚至单个原子,并获得有关试样的更多的信息,如标征非晶和微晶,成分分布,晶粒形状和尺寸,晶体的相、晶体的取向、晶界和晶体缺陷等特征,以便对材料的显微结构进行综合分析及标征研究[3]。近来,电子显微镜(电子显微学),包括扫描隧道显微镜等,又有了长足的发展。本文仅讨论使用广泛的透射电镜和扫描电镜,并就上列几个方面作一简要介绍。部分透射电镜和扫描电镜的主要性能可参阅文献[1]。 透射电子显微镜 1、高分辨电子显微学及原子像的观察 材料的宏观性能往往与其本身的成分、结构以及晶体缺陷中原子的位置等密切相关。观察试样中单个原子像是科学界长期追求的目标。一个原子的直径约为1千万分之2—3mm。因此,要分辨出每个原子的位置需要0.1nm左右的分辨本领,并把它放大约1千万倍。70年代初形成的高分辨电子显微学(HREM)是在原子尺度上直接观察分析物质微观结构的学科。计算机图像处理的引入使其进一步向超高分辨率和定量化方向发展,同时也开辟了一些崭新的应用领域。例如,英国医学研究委员会分子生物实验室的A.Klug博士等发展了一套重构物体三维结构的高分辨图像处理技术,为分子生物学开拓了一个崭新的领域。因而获得了1982年诺贝尔奖的化学奖,以表彰他在发展晶体电子显微学及核酸—蛋白质复合体的晶体学结构方面的卓越贡献[4]。 用HREM使单个原子成像的一个严重困难是信号/噪声比太小。电子经过试样后,对成像有贡献的弹性散射电子(不损失能量、只改变运动方向)所占的百分比太低,而非弹性散射电子(既损失能量又改变运动方向)不相干,对成像无贡献且形成亮的背底(亮场),因而非周期结构试样中的单个原子像的反差极小。在档去了未散射的直透电子的暗场像中,由于提高了反差,才能观察到其中的重原子,例如铀和钍—BTCA中的铀(Z=92)和钍(Z=90)原子[5]。对于晶体试样,原子阵列会加强成像信息。采用超高压电子显微镜和中等加速电压的高亮度、高相干度的场发射电子枪透射电镜在特定的离焦条件(Scherzer欠焦)下拍摄的薄晶体高分辨像可以获得直接与晶体原子结构相对应的结构像。再用图像处理技术,例如电子晶体学处理方法,已能从一张200kV的JEM-2010F场发射电镜(点分辨本领0.194nm)拍摄的分辨率约0.2nm的照片上获取超高分辨率结构信息,成功地测定出分辨率约0.1nm的晶体结构[6]。 2.像差校正电子显微镜 电子显微镜的分辨本领由于受到电子透镜球差的限制,人们力图像光学透镜那样来减少或消除球差。但是,早在1936年Scherzer就指出,对于常用的无空间电荷且不随时间变化的旋转对称电子透镜,球差恒为正值。在40年代由于兼顾电子物镜的衍射和球差,电子显微镜的理论分辨本领约为0.5nm。校正电子透镜的主要像差是人们长期追求的目标。经过50多年的努力,1990年Rose提出用六极校正器校正透镜像差得到无像差电子光学系统的方法。最近在CM200ST场发射枪200kV透射电镜上增加了这种六极校正器,研制成世界上第一台像差校正电子显微镜。电镜的高度仅提高了24cm,而并不影响其它性能。分辨本领由0.24nm提高到0.14nm[7]。在这台像差校正电子显微镜上球差系数减少至0.05mm(50μm)时拍摄到了GaAs〈110〉取向的哑铃状结构像,点间距为0.14nm[8]。 3、原子尺度电子全息学 Gabor在1948年当时难以校正电子透镜球差的情况下提出了电子全息的基本原理和方法。论证了如果用电子束制作全息图,记录电子波的振幅和位相,然后用光波进行重现,只要光线光学的像差精确地与电子光学的像差相匹配,就能得到无像差的、分辨率更高的像。由于那时没有相干性很好的电子源,电子全息术的发展相当缓慢。后来,这种光波全息思想应用到激光领域,获得了极大的成功。Gabor也因此而获得了诺贝尔物理奖。随着Mollenstedt静电双棱镜的发明以及点状灯丝,特别是场发射电子枪的发展,电子全息的理论和实验研究也有了很大的进展,在电磁场测量和高分辨电子显微像的重构等方面取得了丰硕的成果[9]。Lichte等用电子全息术在CM30 FEG/ST型电子显微镜(球差系数Cs=1.2mm)上以1k×1k的慢扫描CCD相机,获得了0.13nm的分辨本领。目前,使用刚刚安装好的CM30 FEG/UT型电子显微镜(球差系数Cs=0.65mm)和2k×2k的CCD相机,已达到0.1nm的信息极限分辨本领[10,11]。
我处有一台奥地利REICHERT的金相显微镜,型号应该是Nr。 261640。30多年的机器,想做数字化改造。高手指点一下,是否有改造价值。谁可以干这个活。
数字显微镜的发展状况?
请问湖南长沙谁有数字显微镜
纤维成分定性用的显微镜每个镜头都有数字,分别为10, 20, 40,这些数字代表是多少倍?
数字全息显微镜DHM测量材料动态的3D形貌,亚纳米分辨率,基于菲涅尔衍射的数字全息重建技术 [table=100%][tr][td][img=动态3D细胞监测,690,138]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711241018_01_1546_3.jpg!w690x138.jpg[/img]仅0.001秒即可测出物体三维形貌,并且是亚纳米的分辨率。不同于传统白光干涉仪、共聚焦显微镜、扫描探针轮廓仪等需要扫描的成像方式,DHM仅需0.001秒采集单张全息图即可测出物3D形貌信息,做到了快速动态监测。 和传统全息术不一样的是没有采用干板而是采用CCD记录全息图,全息图中 光强图:提供与传统显微镜一样对比度的图像 相位图:提供量化数值,得以对被测物体进行精确三维测量 该系统为预放大全息显微镜,其中的相位图解析中用到了大量的算法,实时相位解包裹技术 实时形貌测量的案例二:石墨烯薄膜受力形变实时测量[img=石墨烯薄膜受力形变,384,216]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711241017_02_1546_3.gif!w384x216.jpg[/img][img=MEMS跟踪测量,690,389]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/11/201711241017_03_1546_3.gif!w690x389.jpg[/img][/td][/tr][/table]
数码目镜数码目镜也称为显微相机,可以使现有的普通光学显微镜立刻升级为数码显微镜显微相机,是专门为普通光学显微镜图像数字化而开发设计的。她具有安装简便,通用性强、使用成本低廉、功能齐全、简单易用等特点。安装只需要2个步骤:1、取下原有的显微镜目镜,2、插入电子目镜替换原有目镜。即可通过USB线缆将显微镜下的图像传输至电脑进行实时显示,并可以随时抓怕冻结图像、录像、测量长度、角度、弧度、矩形面积及周长、不规则图形面积及周长、细胞计数、色彩分割、伪彩色还原、虚拟3D、图像边缘识别、傅立叶变换、光点测量及部分PS图像处理功能。可满足大多数专业应用。非常适合教师教学和装备数字化实验室、医学研究、工业生产(PCB线路版检查,IC质量控制)、医疗(病理切片观察)、食品(微生物菌落观察、计数)、科研、教育(教学、演示、学术交流)、公安(印章验证、弹头检测)等领域...... DCM系列显微相机从普教级到科学级有十几个型号,可以按照不同的要求,选择合适的配置。显微相机的光学接口为国际标准目镜尺寸,适用于任何目镜筒内径为23.2mm、30.0mm或者30.5mm的各类生物显微镜、体视显微镜、金相显微镜、荧光显微镜、偏光显微镜、熔点仪、硬度计等光学设备。另有C-Mount接口的专用型号,可配在标准的C接口上使用。显微相机的光学部分全部采用高透光率优质光学玻璃制成,比树脂镜头产品性能有极大的提高。组装车间装备有千级无尘,超高压静电除尘设备,并采用新型防尘结构,确保每件产品的优质效果。jacobxu7001@163.com[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/11/200911201009_185541_1734324_3.jpg[/img]
实验室有台浩视的KH-7700数码显微镜,用的OL-700Ⅱ物镜,http://www.hirox.com.cn/products/mount_lens/mx_lens/mx-10c.htmlhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/03/201503191832_538894_1626032_3.jpg现在做的实验需要知道目镜的数值孔径大小,但是查了网上都没得,问了国内的厂家也说不知道有哪位高手能帮忙查到该物镜的数值孔径大小吗,或者其他的方式算出数字孔径,谢谢
数字立体显微镜拍照时总出现光环,去不掉,怎么回事?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/03/201503091357_537681_2806843_3.jpghttp://simg.instrument.com.cn/bbs/revision/images/icon_bbs_close.jpg
显微镜具有很广泛的用途,因此分为不同的类型并具有特殊的附件。生物显微镜常用在实验室、高校、医院,用于生物样品的研究和诊断。工业显微镜工业显微镜主要用于装配工作或质量监控。用于检测材料和工厂成品。体视显微镜体视显微镜是工作或学习中典型的放大工具,常用于样品的镜下手工操作或工具操作(如解剖)。倍数通常比较低,有些体视显微镜可放大到几百倍。电子检查设备体视显微镜常用于检测制造或成品的印刷电路板的缺陷。一个“斜查看器”(oblique viewer) 可添加到体视显微镜中,这样能够围绕一个组件检测它与印刷电路板的连接情况。测量显微镜这种显微镜具有数字读出功能。提供X、Y、Z轴可靠、精确、可重复的测量。金相显微镜金相显微镜用于科研和工厂。用于观察金属磨面、平面或其他物件表面。偏光显微镜偏光显微镜在科研、工业和学术领域有广泛的应用。利用偏振光,科研工作者能够发现不同有机物或无机物的结构、含量和化学组成。石棉显微镜Meiji有特殊的石棉显微镜,为世界各地的公司和政府机构提供矿物质和纤维的观察、鉴定工具。视频显微镜视频显微镜用于机器视觉,测量和生产小尺寸元件、需要高分辨率的领域。
早在公元前一世纪,人们就已发现通过球形透明物体去观察微小物体时,可以使其放大成像。后来逐渐对球形玻璃表面能使物体放大成像的规律有了认识。 1590年,荷兰和意大利的眼镜制造者已经造出类似显微镜的放大仪器。1610年前后,意大利的伽利略和德国的开普勒在研究望远镜的同时,改变物镜和目镜之间的距离,得出合理的显微镜光路结构,当时的光学工匠遂纷纷从事显微镜的制造、推广和改进。 17世纪中叶,英国的胡克和荷兰的列文胡克,都对显微镜的发展作出了卓越的贡献。1665年前后,胡克在显微镜中加入粗动和微动调焦机构、照明系统和承载标本片的工作台。这些部件经过不断改进,成为现代显微镜的基本组成部分。 1673~1677年期间,列文胡克制成单组元放大镜式的高倍显微镜,其中九台保存至今。胡克和列文胡克利用自制的显微镜,在动、植物机体微观结构的研究方面取得了杰出成就。 19世纪,高质量消色差浸液物镜的出现,使显微镜观察微细结构的能力大为提高。1827年阿米奇第一个采用了浸液物镜。19世纪70年代,德国人阿贝奠定了显微镜成像的古典理论基础。这些都促进了显微镜制造和显微观察技术的迅速发展,并为19世纪后半叶包括科赫、巴斯德等在内的生物学家和医学家发现细菌和微生物提供了有力的工具。 在显微镜本身结构发展的同时,显微观察技术也在不断创新:1850年出现了偏光显微术;1893年出现了干涉显微术;1935年荷兰物理学家泽尔尼克创造了相衬显微术,他为此在1953年获得了诺贝尔物理学奖。 古典的光学显微镜只是光学元件和精密机械元件的组合,它以人眼作为接收器来观察放大的像。后来在显微镜中加入了摄影装置,以感光胶片作为可以记录和存储的接收器。现代又普遍采用光电元件、电视摄像管和电荷耦合器等作为显微镜的接收器,配以微型电子计算机后构成完整的图像信息采集和处理系统。 目前全世界最主要的显微镜厂家主要有:奥林巴斯、蔡司、徕卡、尼康。国内厂家主要有:江南、麦克奥迪等。
生物显微镜和工具显微镜又称工具制造用显微镜,是一种工具制造时所用高精度的二次元坐标测量仪。生物显微镜工具显微镜是利用光学原理将工件成像经物镜投射至目镜,即借着光线将工件放大成虚像,再利用装物台与目镜网线(eyepiece reticle)等辅助,以作为尺寸、角度和形状等测量工作,可作为检验非金属光泽的工件表面。生物显微镜工具显微镜仪器在立柱上装有一显微镜,放大倍率从10倍至100倍间等数种倍率,工具显微镜的测量系统光源( 灯炮 ) 通电后,光线依次经过二个透镜滤热镜 ( 片)、镜径薄膜、透镜、反射镜、装物台、物镜、反射镜、目镜等,工件与物镜间的距离,随着放大倍率和工件厚薄,可利用对焦旋钮调至理想位置。1、 生物显微镜工具显微镜将人眼瞄准,采集元素的个别点坐标,改为CCD摄像机自动采集元素图像,采集信息量增大,减少人工干预,操作效率提高。 2、生物显微镜工具显微镜软件数据处理结果除以数据表示外,增加了图形信息窗,处理的点、线、图、弧等元素展现在屏幕上,形象直观,条理清晰,避免出错,并且可以输出到AUTOCAD形成工程图。3、引进先进的英国RENISHAW钢带反射光栅系统代替原有的玻璃光栅系统,该系统信号优良,安装间隙大,外形小巧,发热量小,安装调试简单,抗污染,抗腐蚀能力强,耐震性好等众多优点,大大提高了系统的可靠性,是当今国际最先进的光栅系统之一。4、 生物显微镜和工具显微镜生物显微镜工具显微镜除X、Y坐标数字显示外,将测高坐标和分度头角度坐标也改成数显,实现了四坐标全数显化,这一改进对凸轮轴测量十分有益。5、用半导体激光器作为指向器,红色光点打在工件表面,用于快速确定测量部位,避免了因CCD视场面积小带来的找象困难,解决了目前图像系统的通病。引用:www.bsdgx.com
Leica拥有160年显微镜生产历史,以高质量光学系统而闻名。Leica一贯注重产品研发和最新技术应用,其产品质量一直走在显微镜技术前列。Leica显微镜拥有多项专利和世界首创技术。作为显微系统领域的开拓者和先驱,Leica光学系统赢得多项荣誉。一、LEICA显微镜的应用领域作为显微系统的高端产品,Leica一直牢牢占据高校、研究所、科研机构、大型企业、跨国公司等市场,服务于钢铁、冶金、机械、航空航天、汽车、轮船、、仪器仪表、电力、地质、石油、石化、陶瓷、医院、生命科学等领域。二、LEICA立体显微镜有如下5大特点:1.双目镜筒中的左右两光束不是平行,而是具有一定的夹角——体视角(一般为12度---15度),因此成像具有三维立体感;2.像是直立的,便于操作和解剖,这是由于在目镜下方的棱镜把像倒转过来的缘故;3.虽然放大率不如常规显微镜,但其工作距离很长4.焦深大,便于观察被检物体的全层。5.视场直径大。三、LEICA显微镜的机械维护使用防尘罩是保证显微镜处于良好机械和物理状态的最重要的因素。显微镜的外壳如有污迹,能用乙醇或肥皂水来清洁(无用其他有机溶剂来清洁),但切勿让这些清洗液渗入显微镜内部,造成显微镜内部电子部件的短路或烧毁。保持显微镜使用场地的干燥,尽管每台徕卡系列显微镜均采用了特殊的防霉处理工艺,但当显微镜长期工作在湿度较大的环境中,还是容易增加霉变的几率,因此如显微镜不得不工作在这些湿度较大的环境中,建议使用除湿机。四、使用LEICA显微镜的建议采取下列措施,或许能更好的延长您的显微镜使用时间并使之保持良好的工作状态。(1)每次关闭显微镜电源前,请将显微镜灯光调至最暗。(2)关闭显微镜电源后,请等灯箱完全冷却后(约15分钟后),再罩上显微镜防尘罩。(3)开启显微镜电源后,若暂时不使用,可以将显微镜灯光调至最暗,而无需频繁开关显微镜电源。显微镜工作一年后,宜每年至少做一次专业的维护保养。本文转自:***
显微镜的放大倍数??希望高人指点一下,显微镜的放大倍数是什么?
在这个问题上,我觉得应该多说一点,因为好多人都没有仔细想过这个问题,尽管十分简单.对于显微镜的放大倍数来讲,最多的定义是:像的尺寸/物的尺寸在SEM中则同样可以这样定义:M=L/l(放大倍数=图片的显示宽度/电子束在样品上的扫描宽度)[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/02/200602051056_13530_1678923_3.jpg[/img]对于其检测方法比较麻烦,现节选一段JJG(教委)010-1996标准:分析型扫描电子显微镜放大倍数误差的测定1 在扫描电镜标称的放大倍数范围内选取常用的5档放大倍数.2 将测定放大倍数的标样安装在样品台上,使其表面垂直于电子光学系统的轴线,并调整到仪器说明书规定的工作距离位置上,将标样上标记线的像移至显像管的中心,聚焦后照相记录.3 用比长仪测量标记线像的间距L(微米),连续测量3次,取算术平均值(微米).4 按公式计算放大倍数M: M=L/l 式中l--标样上标记线的间距.5 按公式计算放大倍数的示值误差P: P=(N-M)/M 式中N--被检扫描电镜放大倍数的标称值其他检测项目还有放大倍数的重复性(在不同加速电压和束斑下) 图像中心与四角边缘处倍率误差测定等等.说明: 标准样品与校正:美国国家标准局(现称国家标准和技术研究院)提供的检定扫描电镜放大倍数的标准样品的最小刻度为一微米,由于视场有限,用这种标样检定5万倍以上的放大倍数有困难,所以,检定5万倍以上的放大倍数需要使用比对性标样.比对性标样可以从具有精细结构的样品中选取,例如:相邻的两条刻线间距小于一微米的物理光栅.将选定的比对性标样和测定扫描电镜放大倍数的标样一起固定在扫描电镜的样品台上.首先将比对性标样调整到标准工作距离的位置上,然后把比对性标样上选定的间距小于一微米的两条标记线平移到显像管荧光屏的中心位置上,将扫描电镜调整到最佳工作状态,细心聚焦后拍摄标记线的照片.用比长仪在照片上测量出比对性标样标记线的放大间距和检定扫描电镜放大倍数标样标记线的放大间距.计算出比对性标样标记线的标定间距,重复10次如果误差不大于百分之三,则表明该样品可以作为比对性标样检定扫描电镜放大倍数.对于现代的SEM来讲,正规的验收标准里面是有放大倍数这一项的,所使用的样品是不同间距的刻线,比如说1/19mm(校低倍用)或是1/2160mm(校高倍用)的标准样品,说一台SEM的放大倍数是不是准确只有通过这些标准样品的校验才能下结论,现代的SEM本身也有利用标样进行自我校准的功能,应该使用标准样品定期校准才能保证其放大倍数是准的,并不是口头说几句就可以弄清的.校验过程本身也是通过标尺量才行,从没有看放大倍数数字的经历.现代的SEM如果软件编得合理的话应该是改变工作距离和图像显示区域大小会引起放大倍数的数字发生变化的(当然有的设备可以做到这点,有的设备目前还无法做到这点),但是图像存好以后则只能是数字的大小发生变化而已,就好象你的照片上显示50000倍,但是你把照片扫描后用更大的纸打印出来以后会发现你得到了一个更大的数字"50000X",正因为如此,电镜行业普遍有一个解决办法,那就是标尺(scale bar),因为尽管数字的数值不会改变而造成原始的图片在离开原来的显示环境以后就没有意义,但是标尺会随着该图片的变大和变小而改变,所以真正需要注意的应该是标尺而不应该是那个放大倍数的数字,不管数字是多少,放大倍数都应该是M=L/l(放大倍数=图片的显示宽度/电子束在样品上的扫描宽度)才对,只有在特定的图片大小(即特定的显示环境)下,放大倍数才能和数字是一致的.离开原始的图片显示环境以后,那个数值应该说是毫无意义的了.
技术原理:微生物个体微小,用肉眼直接观察不到,必须借助显微镜才能观察到他的个体形态和细胞结构。在蛋白质结构等所需对物质的微观结构进行观察的研究中也都会用到各种显微镜。现有的各种显微镜基本上都是由物镜和目镜组成,目镜的焦距很短,目镜的焦距很长,目镜的作用是得到物体放大的实像,目镜的作用是将物镜放大的实像作为物体,进一步放大成虚像。显微镜将物体放大的总倍数是物镜放大倍数乘以目镜放大的倍数。这样虽然目镜和物镜放大的倍数有限,但是显微镜总放大倍数 就非常可观。 仪器结构和分类:普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。早期的显微物镜仅由少数几块透镜组成,难于消除物像的像差和色差。近代的显微物镜已由一套精密磨制的透镜组成,已能较好地消除像差和色差,并能将物体放大1500~2000倍。普通光学显微镜的构造可分为两大部分:即机械装置和光学系统。这两部分很好地配合,才能充分发挥显微镜的作用。1.显微镜的机械装置 显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋和微动螺旋等部件。(1)镜座:镜座是显微镜的基本支架,由底座和镜臂两部分组成。在其上部连接有载物台和镜筒,是用于安装光学放大系统部件的基础。 (2)镜筒:镜筒上接接目镜,下接转换器。形成接目镜与接物镜(装在转换器下)间的暗室。从镜筒的上缘到物镜转换器螺旋口之间的距离称为机械筒长。因为物镜的放大率是 对一定的镜筒长度而言的。镜筒长度的变化,不仅放大倍率随之变化,而且成像质量也受到影响。因此,使用显微镜时,不能任意改变镜筒长度。国际上将显微镜的 标准筒长定为160mm,此数字标在物镜的外壳上。(3)物镜转换器:物镜转换器上可安装3~4个物镜,一般是3个物镜(低倍、高倍、油镜),Nikon显微镜装有4个物镜。转动转换器,可以按需要 将其中的任何一个接物镜和镜筒接通,与镜筒上面的目镜构成一个放大系统。 (4)载物台:载物台中央有一孔,为光线通路。在台上装有弹簧标本夹和推动器。 (5)推动器:是移动标本的机械装置,由一横一纵两个推进齿轴和齿条构成。研究显微镜的纵横架杆上刻有刻度标尺,构成精密的平面坐标系。如需要重复观察已检查标本的某一 物像时,可在第一次检查时记下纵横标尺的数值,下次按数值移动推动器,就可以找到原来标本的位置。 (6)粗调螺旋:粗调螺旋用于粗放调节物镜和标本的距离,老式显微镜粗调螺旋向前扭,镜头下降接近标本。新近出产的显微镜(如Nikon显微镜)镜检时,右手向前扭动使载 物台上升,让标本接近物镜,反之则下降,标本远离物镜。(7)微调螺旋:用粗调螺旋只能粗放地调节焦距,难于观察到清晰的物像,因而需要用微调螺旋做进一步调节。微调螺旋每转一圈镜筒仅移动0.1 mm(100μm)。新近出产的研究显微镜的粗调螺旋和微调螺旋是共轴的。2.显微镜的光学系统显微镜的光学系统由反光镜,聚光器,物镜,目镜等组成,光学系统使标本物像放大,形成倒立的放大物像。
金相显微镜电子目镜是一种针对金相显微镜成像专门研制而成的光学电子仪器。该系列金相显微镜电子目镜作为一款新型光电装置,传输接口为USB2.0高速接口,金相显微镜电子目镜采用1/2″CMOS大面阵图像传感器及大口径光学镜头,使获取的图像具有极高的清晰度;单幅照相影像更佳。分辨率可达130-300万像素,并可以方便地应用于任何标准生物显微镜、体视显微镜及望远镜中。从而给观察、教学、科研、临床、家庭带来了极大的快捷和便利。 金相显微镜电子目镜是一种针对普通光学显微镜通用目镜筒而开发的一种能替代人眼观察视野,将镜下图像真实反映在电子图像显示及输出设备上的光电设备,从而实现了图像时时共享,资料数字化、电子存档化。 金相显微镜电子目镜采用高分辨率图像传感器、光学部分由国家光学重点实验室设计,性能优异、体积小巧,更适合教师教学和装备数字化实验室。 主要功能特点 1、安装简单,即插即用,计算机端采用USB2.0接口插拔方便。 2、操作简单。操作软件兼容性强,界面简洁。可自由调整曝光帧速率、对比度、亮度、锐度及影像尺寸等。拍摄软件有着优异的人机界面,使用者可轻易在计算机上进行摄像、摄影操作。 3、共享性强,可随时对图像进行编辑、处理、保存、传输数据等。金相显微镜电子目镜可配合投影机组成一个电子多媒体教学、演示系统,提高设备利用率、共享性,促进相互交流。
生物显微镜的主要构造普通生物显微镜的构造主要分为三部分:机械部分、照明部分和光学部分。1.机械部分(1)镜座:是显微镜的底座,用以支持整个镜体。(2)镜柱:是镜座上面直立的部分,用以连接镜座和镜臂。(3)镜臂:一端连于镜柱,一端连于镜筒,是取放显微镜时手握部位。(4)镜筒:连在镜臂的前上方,镜筒上端装有目镜,下端装有物镜转换器。(5)物镜转换器(旋转器):接于棱镜壳的下方,可自由转动,盘上有3-4个圆孔,是安装物镜部位,转动转换器,可以调换不同倍数的物镜,当听到碰叩声时,方可进行观察,此时物镜光轴恰好对准通光孔中心,光路接通。(6)镜台(载物台):在镜筒下方,形状有方、圆两种,用以放置玻片标本,中央有一通光孔,我们所用的生物显微镜其镜台上装有玻片标本推进器(推片器),推进器左侧有弹簧夹,用以夹持玻片标本,镜台下有推进器调节轮,可使玻片标本作左右、前后方向的移动。(7)调节器:是装在镜柱上的大小两种螺旋,调节时使镜台作上下方向的移动。①粗调节器(粗螺旋):大螺旋称粗调节器,移动时可使镜台作快速和较大辐度的升降,所以能迅速调节物镜和标本之间的距离使物象呈现于视野中,通常在使用低倍镜时,先用粗调节器迅速找到物象。②细调节器(细螺旋):小螺旋称细调节器,移动时可使镜台缓慢地升降,多在运用高倍镜时使用,从而得到更清晰的物象,并借以观察标本的不同层次和不同深度的结构。2.照明部分装在镜台下方,包括反光镜,集光器。(1)反光镜:装在镜座上面,可向任意方向转动,它有平、凹两面,其作用是将光源光线反射到聚光器上,再经通光孔照明标本,凹面镜聚光作用强,适于光线较弱的时候使用,平面镜聚光作用弱,适于光线较强时使用。(2)集光器(聚光器)位于镜台下方的集光器架上,由聚光镜和光圈组成,其作用是把光线集中到所要观察的标本上。①聚光镜:由一片或数片透镜组成,起汇聚光线的作用,加强对标本的照明,并使光线射入物镜内,镜柱旁有一调节螺旋,转动它可升降聚光器,以调节视野中光亮度的强弱。②光圈(虹彩光圈):在聚光镜下方,由十几张金属薄片组成,其外侧伸出一柄,推动它可调节其开孔的大小,以调节光量。3.光学部分(1)目镜:装在镜筒的上端,通常备有2-3个,上面刻有5×、10×或15×符号以表示其放大倍数,一般装的是10×的目镜。(2)物镜:装在镜筒下端的旋转器上,一般有3-4个物镜,其中最短的刻有“10×”符号的为低倍镜,较长的刻有“40×”符号的为高倍镜,最长的刻有“100×”符号的为油镜,此外,在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线,以示区别。在物镜上,还有镜口率(N.A.)的标志,它反应该镜头分辨力的大小,其数字越大,表示分辨率越高,各物镜的镜口率如下表:物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm)10× 0.25 5.4040× 0.65 0.39100× 1.30 0.11表中的工作距离是指生物显微镜处于工作状态(物象调节清楚)时物镜的下表面与盖玻片(盖玻片的厚度一般为0.17mm)上表面之间的距离,物镜的放大倍数愈大,它的工作距离愈小。显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积,如物镜为10×,目镜为10×,其放大倍数就为10×10=100。
金相显微镜电子目镜是一种针对普通光学显微镜通用目镜筒而开发的一种能替代人眼观察视野,将镜下图像真实反映在电子图像显示及输出设备上的光电设备,从而实现了图像时时共享,资料数字化、电子存档化。金相显微镜电子目镜是一种针对金相显微镜成像专门研制而成的光学电子仪器。该系列金相显微镜电子目镜作为一款新型光电装置,传输接口为USB2.0高速接口,金相显微镜电子目镜采用1/2″CMOS大面阵图像传感器及大口径光学镜头,使获取的图像具有极高的清晰度;单幅照相影像更佳。分辨率可达130-300万像素,并可以方便地应用于任何标准生物显微镜、体视显微镜及望远镜中。从而给观察、教学、科研、临床、家庭带来了极大的快捷和便利。金相显微镜电子目镜采用高分辨率图像传感器、光学部分由国家光学重点实验室设计,性能优异、体积小巧,更适合教师教学和装备数字化实验室。
问题: 想请教大家一个弱弱的问题:我将做一些有关细胞骨架蛋白表达情况的实验,拟采用免疫荧光技术。但是我不知道荧光显微镜和激光共聚焦显微镜在显示蛋白表达上有什么差别呢?是不是后者的观察结果会更清晰一些呢?目前我们实验室还没有激光共聚焦显微镜,那么能否在荧光显微镜下观察拍照,对结果是否有很大的影响呢? 1. 其实激光共聚焦显微镜就像CT一样,如果只是了解蛋白表达情况没有太大差别,当然其观察结果会更清楚。 2. 激光共聚焦显微镜就像细胞CT,把细胞的一个个层面都扫了一下,结果非常清晰,比荧光显微镜要清楚。荧光显微镜拍下来,细胞层叠比较多,看得不是太清楚。但是如果只是看细胞骨架蛋白表达情况,对结果没有有很大的影响。 源一:激光共聚焦显微镜原理:它是采用激光作为光源,在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置,并利用计算机对所观察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。主要系统包括激光光源、自动显微镜、扫描模块(包括共聚焦光路通道和针孔、扫描镜、检测器)、数字信号处理器、计算机以及图象输出设备(显示器、彩色打印机)等。通过激光扫描共聚焦显微镜,可以对观察样品进行断层扫描和成像。因此,可以无损伤的观察和分析细胞的三维空间结构。 同时,通过激光扫描共聚焦显微镜也是活细胞的动态观察、多重免疫荧光标记和离子荧光标记观察的有力工具.精确地对光谱的本质进行分析,区分发射光谱高度重叠的不同标记的信号。 最重要的是,对于多色的荧光染色,它能彻底消除了荧光串色的影响,同时最大限度的减少了样品荧光信号的损失。这些都是一般光镜所不能达到的。
显微镜包括两组透镜——物镜和目镜。显微镜的的放大倍数主要通过物镜来保证,物镜的最高放大倍数可达100倍,目镜的放大倍数可达25倍。物镜的放大倍数可由下式得出:M物=L/F1式中:L——显微镜的光学筒长度(即物镜后焦点与目镜前焦点的距离);F1——物镜焦距。而A′B′再经目镜放大后的放大倍数则可由以下公式计算:M目=D/F2式中:D——人眼明视距离(250mm); F2——目镜焦距。显微镜的总放大倍数应为物镜与目镜放大倍数的乘积,即:M总=M物×M目=250L/F1*F2在使用中如选用另一台显微镜的物镜时,其机械镜筒长度必须相同,这时倍数才有效。否则,显微镜的放大倍数应予以修正,应为:M=M物×M目×C式中:C——为修正系数。修正系数可用物镜测微尺和目镜测微尺度量出来。放大倍数用符号“×”表示,例如物镜的放大倍数为25×,目镜的放大倍数为10×,则显微镜的放大倍数为25×10=250×。放大倍数均分别标注在物镜与目镜的镜筒上。在使用显微镜观察物体时,应根据其组织的粗细情况,选择适当的放大倍数。以细节部分观察得清晰为准,盲目追求过高的放大倍数,会带来许多缺陷。因为放大倍数与透镜的焦距有关,放大倍数越大,焦距必须越小,同时所看到物体的区域也越小。
国产显微镜使用说明书
一、偏光显微镜的特点偏光显微是鉴定物质细微结构光学性质的一种显微镜。凡具有双折射性的物质,在偏光显微镜下就能分辨的清楚,当然这些物质也可用染色法来进行观察,但有些则不可能,而必须利用偏光显微镜。偏光显微镜的特点,就是将普通光改变为偏振光进行镜检的方法,以鉴别某一物质是单折射性(各向同性)或双折射性(各向异性)。双折射性是晶体的基本特征。因此,偏光显微镜被广泛地应用在矿物、化学等领域。在生物学中,很多结构也具有双折射性,这就需要利用偏光显微镜加以区分。在植物学方面,如鉴别纤维、染色体、纺锤丝、淀粉粒、细胞壁以及细胞质与组织中是否含有晶体等。在植物病理上,病菌的入侵,常引起组织内化学性质的改变,可以偏光显微术进行鉴别。在人体及动物学方面,常利用偏光显微术来鉴别骨骷、牙齿、胆固醇、神经纤维、肿瘤细胞、横纹肌和毛发等。二、偏光镜检术的要求(一)光轴与载物台通光中心必须在一直线上,否则旋转物台时,被检物体就偏离视场中心,甚至移到视场之外,而影响镜检。(二)起偏镜和检偏镜均标有振动方向的符号,当处于正交状态时,习惯上通常使起偏镜的振动方向与目镜内十字线的横线一致,而检偏镜的振动方向与十字线的给纵线一致。(三)制片不宜过薄,否则微弱的双折射性就易消失。同时应先以新鲜状态进行观察(不然常由于固定、染色等步骤的处理,而使双折射性加强或消失),然后再对照进行观察。
相差显微镜 •1940年荷兰学者F.Zernik巧妙地应用光的衍射和干涉原理提高标本细节的折光率的差异,创造了相差显微镜(phase contrast microscope)。从此非常简便而有效地观察体外培养细胞的生长过程,记录细胞分裂周期中的染色体的移动。近年来细胞学家和生物学家所拍摄的生活细胞生长、分裂过程的非常出色的记录影片,都是利用相差显微镜的优秀性能完成的。因此相差显微镜、倒置相差显微镜已成为细胞学、细菌学、寄生虫学、免疫学和海洋生物学的实验室必备仪器。 •相差显微镜是用于观察组织培养中活细胞形态结构的。活细胞无色透明,一般显微镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。 •相差显微镜的特点是将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用,转换为光密度差异(明暗差),使镜下结构反差明显,影像清楚。 相差显微镜的优点http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161815_278026_2961690_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161816_278027_2961690_3.jpg 相差显微镜成像光路http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161817_278028_2961690_3.jpg 相差显微镜的部件 •相差显微镜的关键性部件为位相板(phase plate)、环状光阑(anular diaphragm)和中心调节望远目镜(centring telescope)。 环状光阑 •环状光阑是在玻璃片上喷涂金属薄膜借以挡光,只留下环形透光窄缝的光阑。它能使来自反光镜的直射光只能从环状部分通过,形成一个空心圆筒状的光柱,经聚光器并照射到标本以后,就产生两部分光,一部分是直射光,另一部分是经过标本后产生的衍射光,这两部分光经物镜内相板的作用而改变了光的相位和振幅。 •在相差聚光器下面装有一个转盘,盘上镶有宽狭不同的环状光阑,在不同光阑边上刻有10×、 20×,40×等字样,这表示当用不同放大倍数的物镜时,必须配合相应的环状光阑。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102161819_278029_2961690_3.jpg 相板 •相板安装在物镜的后焦平面上,带有相板的物镜称为相差物镜(蔡司厂用红色“PH”表示)。 •相板上有一灰色的环状圈,称为共轭面。面上涂有吸光物质,直射光从这部分通过,并吸收了约80%的直射光,以降低它的透光度。在共轭面的内,外侧部分称为补偿面,面上涂有减速速物质,使衍射光的相们发生改变,因此这两者相结合就能分别改变直射光和衍射光的振幅和相位。 相板分类 •A型位相板 凡是共轭面即环形相板上涂有吸收层的相板均为A型。A型相板又分为二型: •(1)A十型位相板:这是在共扼面上既涂吸收层又涂有电解质的相板。这种相板能吸收其共轭面的60一90%直射光,而透过其20一40%。市场出售的位相板型号分类时,都以数字表示其透射率和推迟位相的数据(图10-12,表10—1)。 •(2)A一型位相板是共扼面上涂有吸收层。同时在补偿面上涂有电解质。 •B型位相板凡是在补偿面上涂有吸收层而在共轭面上有电解质的位相板,均属此类。 •(1)B十型位相板是在补偿面上涂有吸收层共轭面上有电解质的相板。 •(2)B一型位相板是在补偿面上涂有吸收层加电解质的相板。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281441_279896_2961690_3.jpg 对焦望远目镜 对焦望远目镜(centring telescope)又叫合轴望远镜或校正望远目镜。这是一种场透镜和接目透镜之间的距离可变的目镜。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281443_279897_2961690_3.jpg 相差显微镜的成像原理 •从波动光学的角度可把物体细节即生物标本的细节,看成是成像光束的障碍物。它可以改变相干光束的振幅、位相和光强分布。 •从变换光学的频谱转换角度,可把物体细节看成是不同空间信息的集合物。它可改变光信息的空间频谱。 •在显微镜下标本细节的光密物质、光疏物质和无结构的介质的折射率不同,因此相干光束通过光密物质(t)时,必然产生衍射,使光程延长,推迟位相(图10—21P)。这时衍射光(P)和直射光(S)之间的位相出现d/λ差异。但是标本的吸收程度近似,所以振幅未变即光强末变。这种直射光和衍射光到达像平面重叠成像时,其合成波的振幅与通过无结构介质的直射光的振幅几乎近似,即其光强相似。这就是未染标本在普通显微镜下反差很小的基本原因(图10—22)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281447_279898_2961690_3.jpg 暗相差 •在被检物的折射率大于介质的情况下,透过共轭面的直射光被吸收80%后亮度变暗,衍射光在通过被检物后其相位己推迟1/4波长,再在位相板的补偿面的电解质又推迟了1/4波长。由于这两束光的相位不同(差1/2波长),其合成波的振幅为两者之差,所以光线就更加暗。 •与此同时,通过无结构介质的衍射光的光程只被补偿面的电介质推迟l/4波长。这就造成通过光密物质的光强远比通过无结构介质(背景)的光强减衰得多。相差显微镜下标本细节的反差加大丁。光密结构比背景暗得多了。这种反差叫暗反差也叫正反差。 明相差 •如果相板的共轭面上涂的是减速物质,推迟直射光1/4波长,而补偿面涂的是吸光物质,结果就是直射光与衍射光的相位相同(衍射光通过物体时相位推迟了1/4波长),其合成波的振幅为两者之和,结果物体是明亮的而背景是暗的,这称为明相差或负相差。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281450_279899_2961690_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/02/201102281450_279900_2961690_3.jpg 相差显微镜实验方法和步骤 •安放相差装置取下原有聚光器和物镜,分别安上相差聚光器和相差物镜,并将转盘转到“0”标记的位置。用10×相差物镜调光。 •调节光源。 •合轴调节取下原有目镜,换上合轴调整望远镜。上下移动望远镜筒,至能看清物镜中的相板环为止。 •放回目镜取下合轴调整望远镜,放回目镜即可进行观察。更换不同放大倍数的相差物镜时,每次都要按上述方法重新调节。
1.荧光显微镜 (fluorescence microscope)是用来观察标本中的自发荧光物质或以荧光素染色或标记的细胞和结构。荧光显微镜是以高压汞灯产生的短波紫外线为光源,并配有激发、阻断、吸热和吸收紫外线等滤片系统,标本中的荧光物质在紫外线激发下产生各种颜色的荧光,借以研究该荧光物质在细胞和组织内的分布。组织中的自发性荧光物质如神经细胞和心肌细胞等内的脂褐素呈棕黄色荧光,肝贮脂细胞和视网膜色素上皮细胞内的维生素A呈绿色荧光,某些神经内分泌细胞和神经纤维内的单胺类物质(儿茶酚胺、5-羟色胺、组胺等)在甲醛作用下呈不同颜色的荧光,组织内含有的奎宁、四环素等药物也呈现一定的荧光。细胞内的某些成分可与荧光素结合而显荧光,如溴化乙锭与吖啶橙可与DNA综合,进行细胞内DNA含量测定。荧光显微镜更广泛用于免疫细胞化学研究,即以异硫氰酸或罗丹明等荧光素标记抗体(一抗或二抗),用该标记抗体直接或间接地与细胞内的相应抗原结合,以检测该抗原的存在与分布。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112151345_338335_2023037_3.jpg2.相差显微镜 (phase contrast microscope)是用于观察组织培养中活细胞形态结构的。活细胞无色透明,一般光镜下不易分辨细胞轮廓及其结构。相差显微镜的特点是将活细胞不同厚度及细胞内各种结构对光产生的不同折射作用,转换为光密度差异(明暗差),使镜下结构反差明显,影像清楚。组织培养研究常用的是倒置相差显微镜(inverted phase contrast microscope),它的光源和聚光器在载物台的上方,物镜在载物台的下方,便于观察贴附在培养器皿底壁上的活细胞。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112151345_338338_2023037_3.jpg3.暗视野显微镜 (dark-field microscope)主要用于观察因反差或分辨力不足的微小颗粒。此种显微镜主要是有一个暗视野集光器,使光线不直接进入物境,故呈暗视野。而标本内的小颗粒产生的衍射光或散射光进入物镜,暗视野中的颗粒呈明亮小点,如同在暗室可见一束光线中的微小尘粒一般。普通通光镜最大分辨率为0.2μm,暗视野显微镜则可分辨0.004~0.2μm的微粒,适用于观察细胞内线粒体运动及标本中细菌等微粒的运动等。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112151350_338342_2023037_3.jpg4.共集激光扫描显微镜 (confocal laser scanning microscope,CLSM)是近10年研制成的高光敏度、高分辨率的新型仪器。它以激光为光源,光束经聚焦后落在样品(组织厚片或细胞)不同深度的微小一点,并作移动扫描,通过电信号彩色显像,经过微机图像分析系统进行二维和三维分析处理。CLSM可对细胞进行三维结构图像分析,细胞内各种荧光标记物的微量分析,细胞内Ca2+、pH值等的动态分析测定,细胞的受体移动、膜电位变化、酶活性和物质转运的测定,并以激光对细胞及其染色体进行切割、分离、筛选和克隆。因此,CLSM是一种高技术产品,可对细胞的多种功能进行全自动、高效、快速的微量定性和定量测定。其他如偏光显微镜用于研究组织晶体物质及纤维等的光学性质,紫外光显微镜用于研究细胞内核酸的分布与定量等。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/12/201112151350_338343_2023037_3.jpg
对于我们这些刚刚入行的检测人员来说,操作水平提高得动手练,数据处理就得多动脑子总结,所以今天分享一个常常困扰我们的问题—显微镜的倍数,到底总放大倍数是怎么计算的,所得到的拍摄的照片又是放大了多少倍。===============================================================总放大倍数有两种概念,一种是光学放大倍数,一种是数码放大倍数(只有连接成像设备时才会涉及到数码放大倍数)。 1.光学放大倍数。是指我们从显微镜目镜中观测到物体被放大后的倍数。光学放大倍数的计算方式比较简单,即物镜倍数*目镜倍数。例如:体视显微镜的放大倍数计算,连续变倍体视显微镜的物镜通常是0.7-4.5倍,那在10倍目镜的情况下,这台显微镜的总放大倍数为7-45倍;生物显微镜、金相显微镜的计算则更为简单,一般的物镜配置是4倍、10倍、40倍、100倍,目镜常规配置是10倍,另外还有16倍、20倍等,只要将目镜和物镜的倍数分别相乘就可得到总放大倍数。 2.数码放大倍数。数码放大是指外接设备后,显示到图像上的放大倍数,目前市场上较多的是用三目显微镜,通过CCD设备连接至电脑、监视器或者电视机上进行成像观察,以减轻眼睛的疲劳,同时也便于与他人分享。但是显示到图像上的物体到底是放大了多少倍呢?现向大家推荐两种计算数码放大的方法。 (1)直接对图像进行测量。将测微尺放到显微镜下,然后拿直尺直接测量显示器上测微尺的长度,将显示器上一格的测量结果 /测微尺每格的实际长度(一般在测微尺上都会直接标有每格的长度)=物体被放大的倍数。物体被放大的倍数/当前物镜的倍数=数码放大倍数。通常情况下,会在图像中加比例尺来表示改物体被放大的倍数。 注:如果没有测微尺,可以用直尺代替,同时在计算时可以多测量几格,以减少误差。 (2)通过公式计算实际的放大倍数。 数码放大倍数=物镜倍数**适配器的放大倍数,如果系统放大倍数,还需要乘以系统放大倍数。 注: 1:物镜倍数指的是您现在使用的显微镜的物镜镜头的倍数,如20倍; 2:适配器的放大倍数:指的显微镜与成像设备连接部分的放大倍数,通常为1倍,也有0.35、0.5、0.63倍的; 3:25.4*屏幕尺寸(英寸):这里是把屏幕尺寸换算成毫米计算,1英寸=25.4mm; 4:CCD对角线的长度:指的是CCD的芯片尺寸,常有的是1/3英寸、1/2英寸、2/3英寸的,相对应的长度分别为6mm;8mm;11mm,这个是行业内统一规范的。
各路英豪,谁知道显微镜的放大倍数的具体算法,请指教!利用摄像头拍摄照片的大小和实际的倍数关系。能举例说明更好!