液相色谱平行试验

[b]求助安捷伦液相色谱 ，走梯度打平行样时初始压力跟结束压力吻合，但中间一段压力变动很大，严重影响峰的保留时间，请问大家有遇到过这种情况的吗？怎么处理的？谢谢大家![/b]

同一个标样与试样分别在同一天内进液相色谱（1100），每次进样2针，试样的响应值上午与下午平行，标样的响应值上午与下午差2%，请问是什么原因？

请问各位大神，做高效液相色谱实验中需要配制溶液，溶液的配制过程中有哪些操作的关键步骤？

[color=#444444]液相色谱检测，每组两个平行，平行之间峰面积差别很小，但是检测出来的含量比实际的所说的含量低一半的样子。检测时没有问题。后来进样10ul和5ul峰面积差别也较小。是不是进样器的被堵了。该怎么办（一台很久没用，最近才开始用的）[/color]

请教一下，使用高效液相色谱对于试验环境有什么要求？是否有什么法规或者标准、通则中有提到。

一、液相色谱发展史色谱分析法是分析化学中获得光泛应用的一个重要分支。色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（M．S．Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名(经典液相色谱法)。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法、液相色谱法。30~40年代发展了柱分配色谱和纸色谱。50年代发展了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法和薄层色谱法。60年代发展了凝胶色谱法及高效液相色谱法70年代发展了高效毛细管[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法。80年代发展了毛细管电泳和电色谱。90年代出现了光色谱。60年代[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]对高沸点有机物分析局限性发展了液相色谱弥补气谱的不足。高效液相色谱High Performance Liquid Chromatography高压液相色谱High Pressure Liquid Chromatography高速液相色谱High Speed Liquid Chromatography高分离度液相色谱High Resolution Liquid Chromatography现代液相色谱Modern Liquid Chromatography二、液相原理：比尔定律：一束平行单色光经过具有紫外线吸收作用的溶液时，透过溶液的光强度不仅与溶液的浓度有关，而且还与溶液的厚度及溶液本身对光的吸收性能有关：　　A= KCb其中A为消光值，是透射光强I和发射光强I0的比值的对数（反射光强度忽略不计），即A= lg(I0/I)；K为某溶液的消光（吸收）系数，一种有色溶液对于一定波长（单色光）的入射光的K值具有一定数值。若溶液的浓度以mol/l表示，溶液厚度以cm表示，则此时的K值称为摩尔消光系数，它是有色化合物的重要特征之一；C为溶液的浓度；b为光程，即溶液的厚度。该定律只适用于单色光和低浓度的有色溶液。三、液相色谱组成：（一）、主件泵、进样阀、色谱柱、检测器、工作站（记录仪）（二）、附件过滤装置、脱气装置、柱温箱、收集装置等等。（三）、工作程序：液体进入泵-压力传感器-脉动缓冲器-进样阀-色谱柱检测器（四）、泵体组成部分：电机、马达、双柱塞串联泵腔、缓冲器、压力传感器、面贴（五）、检测器组成部分：1、电器部分（变压器、氘灯板、系统电源伴、控制板、显示板、前置板、面贴）2、光学部分（氘灯、灯箱、光学盒、凹面镜、分光镜、小参比、单色器、流通池、前置板）

使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]进行含量监测时，对照和随行对照RSD都很小，对照2回收率平行也符合要求，同时检验的3批样品，每批均是三样双针，第一批的第二针峰面积比正常少3%、第二批的第一针峰面积比正常少5%，重新进原量瓶，峰面积正常，这有可能是什么原因？？

液相色谱仪安捷伦1120，测试数据有一个大峰没有测平行，8%左右大峰，测了三遍，也高浓度增大峰高进了，每次都不一样，当然没有平头。其他峰都平行，就这个位置没有测平行。氘灯显示能量不足，不知道是不是这个原因，压力很稳定。

请教：液相色谱测定原料药杂质如果结果分别在5%、2%、1%、0.5%、0.1%以内平行结果的相对误差分别应在多少以内？如果是不同仪器、不同色谱柱、同样方法相对误差又该是多少呢？

我单位要建立一个高效液相色谱实验室，由于没有招标的资金，所以自己设计。请问，建立高效液相色谱实验室应考虑哪些方面的问题？如何解决？[em07]

各位大侠，每次用液相测试样品时，都会出现平行性不好的现象。分析方法都是公司前辈们做过的，所以不是流动相，流速等问题。公司是做植物提取物的含量检测，一般样品溶解时超声二十分钟以上。我今天称5mg左右的样品到50ML容量瓶，但是两次平行还是不行，一个含量72%左右，一个80%左右），主管要求两次相差值在1%内。跪求各位指点，不然我就会被开除了。。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gif之前我发现有称样量过多，导致物质含量变低的现象，但是我控制称样量后，所测的样品还是不能测到它的含量。是不是每次都要摇匀的很匀啊？

[color=#444444]我做液相色谱的分离度实验。药典要求将样品酸化2小时后，加碱回调ph，这样能得到主峰的水解产物并且RRT=0.9。但是最后得出的结果并没有这个峰。并且，其他杂质反而变大了，主峰也没有降解的迹象。希望老师能帮忙解答我的难题。[/color]

问题: 请教：液相色谱实验中，流动相对柱子压力有什么影响呢回复: 粘度影响压力，流速相同的情况下

[color=#444444]我要做高效液相色谱的实验，涉及到买标准品，国外很多文章不承认国内的标准品，打算买国外的，请问怎么才能查到我所买公司的标准品被国外文章承认与否？[/color]

液相色谱最大的故障是漏液问题 液相色谱现在在分析实验室应用的很多，对样品分析分析做出了巨大的贡献。当然由于这种仪器的固有特性（高压或超高压），在实验过程中也可能会出现很多故障问题，给实验带来很多麻烦，给操作者带来很多烦恼。 液相色谱在使用中可能会出现很多问题，其中最常见的故障那肯定是漏液问题了。由于系统长期处于高压状态，那很多部件漏液就在所难免了。再就是液相泵是在线输液，在高压状态下动态工作也是漏液的有一大因素。另外液相可能会用到酸碱盐溶液，这些溶液可能会对系统造成污染或堵塞等，这就使得系统的压力更高，造成漏液。 液相色谱溶液漏的地方有泵头处（密封圈或柱塞杆损伤所致），单向阀处，阻尼器处，混合器处，进样阀处，放空阀处，色谱柱处，检测池处，接头处等等。 漏液是液相常见的问题，不够是进口仪器还是国产仪器，只要是液相仪器就都可能会漏液，只是漏液的程度和频率问题。这个问题我们只能是竭力控制或减少缺很难彻底解决，尤其是寿命较长的老仪器，那就更难避免了。 其实漏液、漏气问题在其它分析类产品中也可能会出现，只是可能没有液相这么严重。 液相色谱漏液问题解决办法一般都是换件，比如密封圈、密封垫、柱塞杆，刃环、滤片、接头等。另外清洗、疏通管路、液路也是常见的解决办法。

实验室液相色谱仪检定规程中国药品检验标准操作规范：2000年版下载地址：txd022@126.com 密码：000000（六个零）另外还有一些很实用的液相色谱资料色谱仪器实验室的建设液相色谱柱安装与使用说明谱图异常问题解析HPLC的正确使用和科学保养高效液相色谱仪器故障的诊断与维修.ppt下载地址：http://txd022.vdisk.cn/

我们的液相是福立Fl2200每天都要配标样，配一个标样，不平行就不知道配的高不高，低不低，配两个怎么确定平行，不平行的话怎么确定那个是正确的呢？

[color=#00008B][B]该帖为楼主自己整理，帖中所有楼主撰写的内容未经授权不得转载，否则属侵权违法行为！[/B][/color]看到很多版友发帖求助讨论准确性的问题，我特意整理了一个关于定量分析误差问题的帖子，希望对大家有所帮助。高效液相色谱定量分析过程可分为样品的前处理、标准品的配制、进样、色谱分离、检测及数据处理等七个步骤。[B]一 误差的主要来源[/B]随着现在市场销售仪器自动化程度的提高，进样、色谱分离、检测及数据处理等实验环节对实验结果产生的误差越来越小，尤其在高效液相色谱定量分析中，实验结果的误差可能主要来源于样品的前处理及标准品的配制。[B]1、样品的前处理 [/B]样品的萃取率是样品前处理时存在的主要问题。当固-液萃取（含柱分离的前处理方法），液-液萃取时，存在萃取率不高且不稳定的问题。尤其在除去蛋白质时，存在变性蛋白质会吸附一些被测组分，导致萃取率降低的情况。通常，萃取率是通过在式样中添加被测成分在萃取的方法评价的。也就是说，被测成分的增加量和液相色谱中的峰面增大成比例关系，通过这种方法可以确定溶液中被测成分的变化趋势。 如果存在萃取率不稳定的问题，就有必要改变萃取的方法，要预先添加内标，然后萃取。这种情况采用的内标，必须与被测物质的化学结构类似，萃取的萃取率才可能相近。如果回收率不但接近100%而且较为稳定，可以证明这种前处理方法较为可靠。在分析中如果能充分考虑以上误差产生的各种原因，才有可能得到精确的分析结果。 [B]2、标准品的配制[/B]本帖中讨论的问题带有普遍性，影响高效液相色谱分析结果准确性的因素较多，仅在标准溶液的配置过程中，可以分为标准物质的称量，溶液的配制和溶液的储存三个环节。 作为标准溶液使用的标准物质其纯度要求很高，应避免使用纯度不符合要求的试剂，作为标准溶液使用的标准物质具有不可替代性，现在市场有销售的HPLC专用的溶剂及各种标准试剂可供实验选择；其次选择与样品浓度要求相适应的天平，应该尽可能使用高精度的天平，这样才能把由于天平使用带来的称量操作误差降至最低。[B]二 消除误差的方法[/B] 要提高分析结果的准确度，必须考虑在分析过程中可能产生的各种误差，采取有效措施，将这些误差减到最小。[B]1、选择合适的分析方法[/B] 各种分析方法的准确度是不同的。化学分析法对高含量组分的测定能获得准确和较满意的结果，相对误差一般在千分之几。而对低含量组分的测定，化学分析法就达不到这个要求。仪器分析法虽然误差较大，但是由于灵敏度高，可以测出低含量组分。在选择分析方法时，一定要根据组分含量及对准确度的要求，在可能条件下选最佳分析方法。[B]2、增加平行测定的次数[/B] 如前所述增加测定次数可以减少随机误差。在一般分析工作中，测定次数为2—4次。如果没有意外误差发生，基本上可以得到比较准确的分析结果。[B]3、消除测定中的系统误差[/B] 消除测定中系统误差可采取以下措施：其一是做空白实验，即在不加试样的情况下，按试样分析规程在同样操作条件下进行的分析。所得结果的数值称为空白值。然后从试样结果中扣除空白值就得到比较可靠的分析结果。其二是注意仪器校正，具有准确体积的和质量的仪器，如滴定管、移液管、容量瓶和分析天平，都应进行校正，以消除仪器不准所引起的系统误差。因为这些测量数据都是参加分析结果计算的。其三是作对照试验，对照试验就是用同样的分析方法在同样的条件下，用标样代替试样进行的平行测定。将对照试验的测定结果与标样的已知含量相比，其比值称为校正系数。 校正系数=标准试样组分的标准含量/标准试样测定的含量 被测试样的组分含量=测得含量×校正系数 综上所述，在分析过程中检查有无系统误差存在，作对照试验是最有效的办法。通过对照试验可以校正测试结果，消除系统误差。[B]4、样品定量分析过程中的误差[/B]样品处理要尽量减少操作者的技术问题带来的误差，样品的稀释次数、稀释工具都是误差的祸根，应尽量减少稀释次数，稀释工具用高准确度的。样品中的干扰组分会直接影响分析的准确度，而且有些组分会损坏柱子。纯化样品的过程尽量少用蒸发至干的步骤（在色谱分析中这一步又是不可少的），正确操作固相柱萃取、纯化小柱使用的步骤，注意提高每一步的回收率，使用内标法也是一个能准确定量的方法。 在手动进样中进样体积至少是样品定量环管体积的3倍，色谱分离程序要使色谱峰的分离度大于1.5，控制流动相、流量、温度等的平稳。流动相的污染都会抬高基线或减少信噪比，分辨率下降，试验条件的变化，如柱退化、不好的流动相等都能引起保留时间变化，引起一个峰或更多的峰不能被鉴别。正确设定仪器参数，选用合理的数据处理参数，用峰面积计算结果比峰高更精确。[B]三 结论 [/B]以上的分析的是我们能尽量控制的误差，还有一些不是操作者所能控制的误差，如被测定组分易分解、组分的含量高低、介质效应等。我们把能控制的误差减小到最低，那你的结果准确度将更高。

最近有做7种苯系物的能力验证，结果是不满意。现在要复测归纳原因是我们的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]手动进样，进样准确度不高。突然想到旁边的液相色谱仪是有自动进样器的，至少进样体积上会准确很多。而且曾经看过论坛里也有大神拿液相色谱仪做水中的苯。只是那位大神只单独测了一个苯，而没有尝试着去分离[b]苯、甲苯、乙苯、二甲苯、苯乙烯[/b]，一共7种苯系物就想问一下，有没有哪位大神试验过拿液相色谱测定7种苯系物的？这7种苯系物在C18柱子上的出峰顺序怎么样？还有就是分析条件了，检测器、色谱柱、流动相感激不尽。

请介绍一下色谱平行性试验的意义以及平行性试验中回收率的计算方法和计算回收率的意义。正在做毕业论文，急用！请大家们集思广益，快点帮帮忙！

食品检测领域，C18的液相色谱柱。您所在的实验室都有哪个品牌的C18液相色谱柱呢？150和250的各占多大比例？哪个品牌的性价比比较高？

高效液相色谱实验室操作规范[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=95086]高效液相色谱实验室操作规范[/url]

[color=#444444]我做液相色谱试验，用100%甲醇封住子为什么峰的波动较大，[/color]

高效液相色谱仪对实验室的要求1、环境：干燥、清洁、防潮、防尘，建议配置空调；2、电源：电压稳定，配有地线，至少5个插孔以上的多功能插座需2个，建议配置UPS电源(1000W以上)；3、实验台：按一般实验室要求；4、试剂：甲醇、乙腈等为色谱纯或HPLC级，其他试剂为分析纯，水为蒸馏水或双蒸水，最好为超纯水；5、人员：掌握基本化学分析知识，熟悉电脑操作；6、药品：至少拥有一个2000版药典要求的用高效液相色谱仪测定的供试品或对照品，并能按照药典要求配置出相应的溶液及流动相。

大家的实验室液相是色谱是怎样接地啊？最近实验室在建新的实验室，请问液相色谱是怎样接地的？我们现在是一台waters2410 2487液相 一台戴安[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]dx500 。

液相色谱的教程，从液相色谱的理论，到仪器各个组成部分的使用维护及实验共二十一章。[~177515~][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=177525]20091023181634.rar[/url]

一 概 述实验室液相色谱仪(以下简称仪器)是由输液系统、进样器、色谱柱、检测器和数据记录处理装置等几部分组成的分析仪器。图1是典型的液相色谱仪组成方框图。它利用样品中各组份在色谱柱中固定相和流动相间分配系数或吸附系数的差异，将各组份分离后进行检测，并根据各组份的保留时间和响应值进行定性、定量分析。

请问哪里销售的可以用作液相色谱试验的对照品的？我需要购置一批对照品